Αφηρημένο

Ιστορικό

Οι βιοδείκτες να διαδραματίσει κρίσιμο ρόλο στην έγκαιρη ανίχνευση, διάγνωση και παρακολούθηση των θεραπευτικών αποτελεσμάτων και υποτροπή του καρκίνου. Προηγούμενη έρευνα βιοδείκτη για τον καρκίνο των ωοθηκών (OC), έχει ως επί το πλείστον επικεντρώθηκε στην ανακάλυψη και την επικύρωση των διαγνωστικών βιοδεικτών. Ο πρωταρχικός σκοπός της μελέτης αυτής είναι να εντοπίσει βιοδείκτες ορού για πρόγνωση και θεραπευτική έκβαση του καρκίνου των ωοθηκών.

Πειραματικός Σχεδιασμός

Σαράντα πρωτεΐνες ορού αναλύθηκαν σε 70 δείγματα ορού από υγιείς μάρτυρες (HC) και 101 δείγματα ορού από OC ασθενείς ορώδες σε τρεις διαφορετικές φάσεις της νόσου: μετά τη διάγνωση (PD), διαγραφή (RM) και στην επανάληψη (RC). Η χρησιμότητα των πρωτεϊνών του ορού ως βιοδείκτες OC αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας μια ποικιλία μεθόδων, συμπεριλαμβανομένων στατιστική ανάλυση επιβίωσης.

Αποτελέσματα

Δέκα πρωτεΐνες ορού (PDGF-ΑΒ /ΒΒ, ΡϋΟΡ-ΑΑ, CRP, sFas , CA125, SAA, sTNFRII, sIL-6R, IGFBP6 και MDC) έχει) τιμές ατομικά καλή περιοχής κάτω από την καμπύλη (AUC (AUC = 0,69 έως 0,86) και πάνω από 10 συνδυασμοί των τριών δεικτών έχουν εξαιρετική τιμές AUC (0,91 -0.93) στο διακριτικό ενεργό δείγματα καρκίνου (PD & amp? RC) από την HC. Τα μέσα επίπεδα της πρωτεΐνης ορού για τα δείγματα RM είναι συνήθως ενδιάμεσο μεταξύ HC και OC ασθενείς με ενεργό καρκίνο (PD & amp? RC). Το πιο σημαντικό, πέντε πρωτεΐνες (sICAM1, RANTES, sgp130, sTNFR-II και sVCAM1) μετράται σε ύφεση μπορεί να ταξινομούν, μεμονωμένα και σε συνδυασμό, ορώδες OC ασθενείς σε δύο υποσύνολα με σημαντικά διαφορετική συνολική επιβίωση (καλύτερη HR = 17, p & lt? 10

-3).

Συμπέρασμα

Εμείς εντόπισε πέντε πρωτεΐνες ορού η οποία, όταν μετράται σε ύφεση, δεν μπορεί να προβλέψει με ακρίβεια τη συνολική επιβίωση των ασθενών ορώδες OC, γεγονός που υποδηλώνει ότι μπορεί να είναι χρήσιμη για την παρακολούθηση τα θεραπευτικά αποτελέσματα για τον καρκίνο των ωοθηκών

Παράθεση:. Wang J, Sharma A, Ghamande Α.Ε., ο Μπους S, D Ferris, Zhi W, et al. (2013) του ορού πρωτεΐνης Προφίλ σε ύφεση μπορούν με ακρίβεια Αξιολόγηση θεραπευτικά αποτελέσματα και επιβίωσης για υδαρής καρκίνου των ωοθηκών. PLoS ONE 8 (11): e78393. doi: 10.1371 /journal.pone.0078393

Επιμέλεια: Rakesh Κ Srivastava, Το Πανεπιστήμιο του Κάνσας Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: May 19, 2013? Αποδεκτές: 11 του Σεπτέμβρη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 11 Νοεμβρίου 2013

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 αφοσίωση δημόσιο τομέα

Χρηματοδότηση:. Το έργο αυτό εν μέρει υποστηρίζεται από μια επιχορήγηση από την Γεωργία Συνασπισμό του Καρκίνου στο DF και JXS. JXS υποστηρίχθηκε από τη Γεωργία Research Alliance ως επιφανής μελετητής. JW υποστηρίχθηκε από τους βασικούς Jiangsu Ιατρική Εικόνα (RC2011091) και Jiangsu κυβέρνηση Υποτροφιών και του σχεδίου «333». Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών (OC) είναι η πέμπτη αιτία θανάτου από καρκίνο μεταξύ γυναίκας στις Ηνωμένες Πολιτείες, που αντιπροσωπεύουν περίπου το 3% του συνόλου των νέων ασθενών με καρκίνο [1]. Η Αμερικανική Αντικαρκινική Εταιρεία εκτιμά ότι το 2013, περίπου 22.240 νέες περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών θα πρέπει να διαγνωστεί και 14.030 γυναίκες θα πεθάνουν από καρκίνο των ωοθηκών στις Ηνωμένες Πολιτείες. Σε όλο τον κόσμο, αυτή η ασθένεια είναι η έκτη πιο κοινή μορφή καρκίνου στις γυναίκες, προκαλώντας 140.200 θανάτους το 2010 [2]. Δυστυχώς, οι περισσότεροι ασθενείς (-70%) διαγνώστηκαν με προχωρημένα στάδια της νόσου με κακή πρόγνωση. Αν και προόδους στην χημειοθεραπεία και βελτιωμένη κατανόηση των γενετικών παραγόντων κινδύνου και μοριακή παθογένεση έχουν προσφέρει νέες δυνατότητες θεραπείας, τα ποσοστά επιβίωσης 5 ετών με τη βέλτιστη χειρουργική επέμβαση debulking και ενδο-περιτοναϊκή χημειοθεραπεία είναι κοντά στο 50%. Ωστόσο, τα ποσοστά μακροπρόθεσμης επιβίωσης (& gt? 10 έτη) σε ασθενείς με διάγνωση σε πρώιμο στάδιο (στάδιο Ι ή ΙΙ) είναι 80-95% [3]. Η έλλειψη επιτυχημένες στρατηγικές θεραπείας οδήγησε στην ανάγκη για νέες προσεγγίσεις που επιδιώκουν να ανιχνεύσει αυτή την ασθένεια σε πρώιμο στάδιο και την αποτελεσματική θεραπεία της ασθένειας αυτής σε προχωρημένο στάδιο. Πρόσφατα, υπήρξε ένα κύμα ενδιαφέροντος για την εξερεύνηση του γονιδιώματος και πρωτεώματος για βιοδείκτες που μπορούν να βοηθήσουν στην έγκαιρη ανίχνευση, διάγνωση και παρακολούθηση της θεραπευτικής έκβασης και της επανάληψης.

έρευνας Προηγούμενη βιοδεικτών έχει επικεντρώθηκε κυρίως στην ανακάλυψη και την επικύρωση διαγνωστικών βιοδεικτών, ιδιαίτερα εκείνων που μπορούν να ανιχνεύσουν OC σε πρώιμο στάδιο. Η γλυκοπρωτεΐνη CA125 είναι το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο βιοδείκτη για τον καρκίνο των ωοθηκών. Είναι αυξημένη σε περίπου 80% των ασθενών με προχωρημένο καρκίνο? Ωστόσο, παρά την υψηλή ευαισθησία του, στερείται ειδικότητας και, ως εκ τούτου, έχει περιορισμένη θετική προγνωστική αξία (PPV) για τη διαλογή του πληθυσμού, ειδικά για τον καρκίνο πρώιμο στάδιο. Εκτεταμένη έρευνα για την καλύτερη βιοδείκτες έχει διεξαχθεί κατά τα τελευταία λίγα χρόνια και έχει οδηγήσει στην ανακάλυψη ενός μεγάλου αριθμού δυνητικών νέων OC βιοδείκτες συμπεριλαμβανομένου του πρόσφατα εγκεκριμένη από την FDA ανθρώπινης επιδιδυμίδα πρωτεΐνη 4 (HE4) [4], [5]. Αυτά τα νέα βιοδείκτες, μεμονωμένα, δεν έχουν καλύτερες επιδόσεις από CA125 αλλά βιοδεικτών πάνελ με ή χωρίς CA125 γενικά καλύτερες επιδόσεις από CA125 ή άλλο άτομο βιοδεικτών [6] – [10]. Παρά το γεγονός ότι οι διαθέσιμες σήμερα βιοδείκτες δεν έχουν ακόμα επαρκή PPV κατάλληλο για τον πληθυσμό εξέταση [11], διαγνωστικών βιοδείκτης είναι ένα πολύ ενεργό και ταχέως αναπτυσσόμενο τομέα της έρευνας στον καρκίνο των ωοθηκών [12].

Οι βιοδείκτες που επιτρέπουν την ακριβή εκτίμηση της θεραπευτικό αποτέλεσμα μπορεί να βελτιώσει σημαντικά την περίθαλψη των ασθενών. Μετά την αρχική κυτταρομειωτική χειρουργική επέμβαση και χημειοθεραπεία συνδυασμού, η πλειοψηφία των ασθενών OC πιστεύεται να επιτευχθεί μια πλήρης κλινική ύφεση [13]. Στο στάδιο της ύφεσης, CA125 είναι συνήθως παρακολουθείται κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης και χρησιμοποιείται ευρέως ως βιοδείκτη για ύφεση. Αν και CA125 είναι σαφώς μειωμένος και επέστρεψαν στα επίπεδα που παρατηρήθηκαν στους μάρτυρες, CA125 δεν μπορεί να ανιχνεύσει υπολειμματικά καρκινικά κύτταρα. Μετά τη θεραπεία, οι ασθενείς μπορεί να έχουν εντελώς διαγραφεί ή ο αριθμός και το μέγεθος των καρκινικών κυττάρων γίνεται πολύ μικρό, έτσι ώστε το απομένον όγκος δεν μπορεί να ανιχνευθεί με αντιγόνα όγκων όπως CA125. Ωστόσο, καθώς τα καρκινικά κύτταρα εξακολουθούν να υπάρχουν στο εσωτερικό αυτών των ασθενών σε υποκλινική κατάσταση, το ανοσοποιητικό σύστημα των ασθενών μπορεί να ανταποκρίνεται στα κύτταρα του όγκου. Ως εκ τούτου, φλεγμονώδη μόρια μπορεί να είναι ανώμαλη σε ασθενείς με υποκλινική φαινοτύπους [14] – [16]. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε προφίλ πάνω από 40 πρωτεΐνες του ορού, συμπεριλαμβανομένων ανοσοποιητικό δείκτες σε ορούς από ασθενείς OC για να αναπτυχθούν βιοδείκτες που μπορεί να είναι χρήσιμη για την αξιολόγηση των θεραπευτικών αποτελεσμάτων.

Ασθενείς και Μέθοδοι

Ανθρώπινα Θέματα και ορού δείγματα

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας της Γεωργίας Regents του Πανεπιστημίου και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε θέμα ή νόμιμα εξουσιοδοτημένο αντιπρόσωπό τους. Όλες οι συναινέσεις έχουν υποβληθεί σωστά σε αρχεία και επίσης αποθηκεύονται σε βάση δεδομένων. Διαδικασία έγκρισης χρησιμοποιήθηκε στη μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας της Γεωργίας Regents του Πανεπιστημίου. Τα άτομα που χρησιμοποιούνται στην παρούσα μελέτη περιελάμβανε 75 ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών και 70 υγιείς γυναίκες ως έλεγχος. Όλοι οι ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών σε αυτή τη μελέτη ήταν από μια ακαδημαϊκή πρακτική γυναικολογική ογκολογία στη Γεωργία, ΗΠΑ. Η εξέλιξη της νόσου ορίστηκε είτε από τα επίπεδα CA125 ≥2 × αξία ναδίρ σε δύο ξεχωριστές περιπτώσεις (κριτήρια GCIG), ή από την αύξηση των μετρήσιμων αλλοιώσεων όπως ανά κριτήρια RECIST [17]. συνθήκες ασθενούς οργανώθηκαν σύμφωνα με τα κριτήρια της Διεθνούς Ομοσπονδίας Γυναικολογίας και Μαιευτικής (FIGO). Τα χαρακτηριστικά κατανομής ηλικίας και του όγκου του πληθυσμού των ασθενών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Μόνο υψηλής ποιότητας (ορώδες) καρκίνοι συμπεριλήφθηκαν να έχουν ομοιογενή δείγματα και καρκίνους χαμηλής ποιότητας (βλεννώδες και σαφής κυττάρων) έπεσαν από αυτή τη μελέτη. Ένα σύνολο 101 δειγμάτων ορού από 75 ασθενείς ελήφθησαν σε 3 διαφορετικά στάδια της εξέλιξης της νόσου:. Μετα-διάγνωση (PD, n = 25), υποτροπιάζουσα (RC, n = 43) και ύφεση (RM, n = 33)

Luminex αναλύσεις

τα κιτ Luminex ελήφθησαν από την Millipore (Billerica, ΜΑ, USA) και οι δοκιμασίες διεξήχθησαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή για να καθορίσουν τα επίπεδα των 40 μορίων στον ορό. Σωστά αραιωμένα δείγματα ορού επωάστηκαν με τα μικροσφαιρίδια συζευγμένα με αντίσωμα και στη συνέχεια με βιοτινυλιωμένο αντίσωμα ανίχνευσης πριν από την προσθήκη στρεπταβιδίνης-φυκοερυθρίνης. Οι κατέλαβε χάντρα-συγκροτήματα μετρήθηκαν με FLEXMAP 3D σύστημα (Luminex Corporation, Austin, TX, USA).

Στατιστικές Αναλύσεις

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση της γλώσσας R και το περιβάλλον για στατιστικούς υπολογισμούς (R έκδοση 2.12.1? R Ίδρυμα για στατιστικούς υπολογισμούς? www.r-project.org). Χρησιμοποιήσαμε δύο μονά μοντέλα πρωτεϊνών και πολυ-δείκτης για την ταξινόμηση των υποθέσεων και των ελέγχων. επελέγησαν μόνο 4 με 8 καλύτερες επιδόσεις πρωτεϊνών για μοντέλα πολλαπλών δείκτη και γραμμική διακριτής ανάλυσης διεξήχθη χρησιμοποιώντας συνδυασμούς των 3 πρωτεϊνών. Η απόδοση του κάθε μοντέλου αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας την άδεια-one-out μέθοδο cross επικύρωσης. Η περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) του δέκτη-λειτουργίας-χαρακτηριστικό (ROC) καμπύλη υπολογίστηκε για να εκτελέσει τη σύγκριση διαφορετικών μοντέλων. Χρησιμοποιήσαμε αναλογικών κινδύνων κατά Cox μοντέλα για την αξιολόγηση του αντίκτυπου των επιπέδων της πρωτεΐνης ορού στην επιβίωση. Η συνολική επιβίωση υπολογίστηκε ως χρόνος από τη διάγνωση ημερομηνία του θανάτου του ασθενούς. Οι ασθενείς που είναι ζωντανοί χωρίς ενδείξεις της νόσου περικόπηκαν κατά την ημερομηνία της τελευταίας επίσκεψης παρακολούθησης. Μονοπαραγοντική αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση των οικοπέδων Kaplan-Meier, και η στατιστική σημαντικότητα μεταξύ των καμπυλών επιβίωσης αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το τεστ log rank. Για να αξιολογηθεί η συνδυασμένη επίδραση των διαφορετικών πρωτεϊνών στην επιβίωση, πολυπαραγοντική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση πρωτεϊνών που έχουν σημαντική επίδραση στην μονοπαραγοντική ανάλυση.

Αποτελέσματα

Είκοσι πέντε Ορός Πρωτεΐνες αλλοιώνονται με υδαρής OC

τα επίπεδα ορού των 40 πρωτεϊνών στο PD, RC και RM ομάδες συγκρίθηκαν με υγιείς μάρτυρες (HC) με τη χρήση t-test ενός σπουδαστή. Σημαντικές διαφορές βρέθηκαν για 25 πρωτεϊνών σε τουλάχιστον μία από τις τρεις ομάδες σε σύγκριση με την ομάδα HC (Πίνακας 2). Τα οικόπεδα κουτί για δέκα αντιπροσωπευτικά πρωτεϊνών φαίνεται στο Σχήμα 1. Τα δεδομένα για όλες τις 40 πρωτεΐνες που παρέχονται στον Πίνακα S1 στο S1 αρχείου

PD:. Δημοσίευση Διάγνωση, RC: Υποτροπή, RM: ύφεση, HC: υγιείς μάρτυρες . (*) Σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τους υγιείς μάρτυρες.

Η

Πάνελ πρωτεΐνη είναι σαφής η διάκριση ενεργό καρκίνο από Έλεγχοι

Η χρησιμότητα των πρωτεϊνών του ορού ως βιοδείκτες OC που είχε εκτιμηθεί αρχικά χρησιμοποιώντας AUC αξίες. Τα top 10 μόρια που μπορεί να διακρίνει τον καρκίνο (PD + RC) από HC δείχνεται στο Σχήμα 2Α. Οι τρεις καλύτερες επιδόσεις μόρια είναι PDGF-ΑΒ /ΒΒ (AUC = 0,856), CA125 (AUC = 0,847) και PDGF-AA (AUC = 0,828). CRP, IGFBP6 και sIL6R έχουν επίσης εξαιρετική AUC (0.786, 0.728 και 0.728, αντίστοιχα). Είναι γνωστό ότι οι συνδυασμοί των μορίων μπορεί να βελτιώσει σημαντικά την απόδοση του βιοδεικτών. Αναζητήσαμε μοντέλα 3-πρωτεΐνη, χρησιμοποιώντας τις κορυφαίες 8 πρωτεΐνες επιλέγονται με βάση τις τιμές AUC μοναδική πρωτεΐνη (με αποτέλεσμα ένα σύνολο 56 μοντέλα) (Πίνακας S3 σε File S1). Η AUC των μεμονωμένων πρωτεϊνών ήταν στην περιοχή από 0,688 να 0.856 (Εικόνα 2Α). Τα κορυφαία μοντέλα τριών δείκτη δέκα απεικονίζεται στο Σχήμα 2Β. Το καλύτερο μοντέλο (PDGF – ΑΒ /ΒΒ + CA125 + sFas) έχει τιμή AUC των 0.933 και 12 μοντέλα έχουν AUC τιμές μεγαλύτερες από 0,90, σημαντικά καλύτερη από τις δύο καλύτερες ατομικές πρωτεΐνες (AUC = 0,856 για PDGF-ΑΒ /ΒΒ και AUC = 0,847 για CA125). Δεν είναι έκπληξη το γεγονός ότι και οι δέκα κορυφαία μοντέλα περιέχουν PDGF-ΑΒ /ΒΒ ως μία από τις τρεις πρωτεΐνες.

Ενιαία πρωτεΐνες (Α) και τα μοντέλα multi-δείκτη (Β) χρησιμοποιήθηκαν για αναλύσεις η ταξινόμηση. Για τα μοντέλα πολλαπλών δείκτη, γραμμική διακριτής ανάλυσης διεξήχθη χρησιμοποιώντας συνδυασμούς των 3 πρωτεϊνών. Η διαγνωστική απόδοση κάθε μοντέλο αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας την άδεια ένας στους μέθοδο cross επικύρωσης. Η χρησιμότητα των πρωτεϊνών του ορού ως βιοδείκτες του καρκίνου των ωοθηκών αξιολογήθηκε με τη χρήση της περιοχής κάτω από την καμπύλη (AUC) των καμπυλών ROC για τα διάφορα μοντέλα.

Η

Ορός Προφίλ σε ύφεση είναι διαφορετική από τα δύο δραστικά τον καρκίνο και Έλεγχοι

Έντεκα πρωτεΐνες ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ RM και HC (Πίνακας 2), ενώ 2 πρωτεΐνες (CA125 και CRP) έδειξαν σημαντικές διαφορές μεταξύ RM και ενεργό καρκίνο (Σχήμα 1, Πίνακας S2 σε S1 File). Η μέση στάθμη του CA125 σε δείγματα RM είναι σημαντικά μειωμένη και παρόμοια με την τιμή σε HC, ενώ η ομάδα RC έχει την υψηλότερη μέση CA125 (Πίνακας 2 και Πίνακας S2 σε S1 File). Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν περαιτέρω CA125 ως ένα καλό δείκτη για την παρακολούθηση του καρκίνου των ωοθηκών. Τα επίπεδα CRP για ήταν επίσης σημαντικά μειωμένη σε δείγματα RM σε σύγκριση με ενεργό καρκίνο και επέστρεψε σε σχεδόν κανονικά επίπεδα (Πίνακας S2 σε S1 File).

ανάλυση ROC πραγματοποιήθηκε επίσης για την αναγνώριση μεμονωμένων μορίων και μοντέλα 3-πρωτεΐνη ότι μπορούν να διακρίνουν καλύτερα δείγματα RM από ασθενείς με καρκίνο (PD + RC) ή HC. Οι δύο καλύτερες επιδόσεις μόρια που μπορούν να διακρίνουν RM από καρκίνο είναι CA125 (AUC = 0.752) και CRP (AUC = 0,708) (Σχήμα 3Α), ενώ τα καλύτερα μόρια τα οποία μπορούν να διαχωρίσουν RM και HC είναι ΡϋΟΡ-ΑΒ /ΒΒ, ΡϋΟΡ-ΑΑ , sIL6R και λεπτίνη (AUC = 0.815, 0.731, 0.739 και 0.73, αντίστοιχα, Εικόνα 3C). Για τα μοντέλα 3-πρωτεΐνη που χρησιμοποιείται στην κορυφή 8 πρωτεΐνες και δοκιμάζονται συνολικά 56 μοντέλα. συνδυασμός πρωτεΐνης μοντέλα δεν θα μπορούσε να βελτιώσει την AUC να διακρίνει δείγματα RM από ασθενείς με καρκίνο (Σχήμα 3Β). Ωστόσο, για να διακρίνει δείγματα RM από HC, 2 μοντέλα θα μπορούσαν να επιτύχουν μια AUC άνω του 0,86 (Εικόνα 3D) και 16 μοντέλα θα μπορούσε να επιτύχει ένα AUC πάνω από τις καλύτερες επιδόσεις μεμονωμένων μορίων.

Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται για ενιαία πρωτεΐνες (A, C) και multi-δείκτη μοντέλα (Β, D).

Η

Serum Protein Προφίλ στο PD Stage έχει περιορισμένη προγνωστική αξία

Ο αντίκτυπος των επιμέρους επιπέδων της πρωτεΐνης στο επιβίωση εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση Kaplan-Meier των 75 ασθενών με δεδομένα επιβίωσης. Οι ασθενείς που αποδίδονται στις χαμηλές ή υψηλές ομάδες έκφραση με βάση την έκφραση της πρωτεΐνης για κάθε πρωτεΐνη. Όπως τα καλύτερα αποκοπής σημεία δεν ήταν γνωστά, θα αξιολογείται συστηματικά οκτώ σημεία αποκοπής που κυμαίνονται από 30 εκατοστημόριο στο 65ο εκατοστημόριο των τιμών έκφρασης. Αφού τα ασθενείς καταχωρούνται σε μία ή την άλλη ομάδα, δοκιμασία log rank χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό των διαφορών επιβίωση μεταξύ των δύο ομάδων. Επιβίωση αναλύσεις διεξήχθησαν ξεχωριστά για τα δείγματα PD, RC και RM. Χρησιμοποιώντας δείγματα PD, μόνο τέσσερις πρωτεΐνες παρουσίασαν οριακά σημαντικές συσχετίσεις με την επιβίωση (Σχήμα 4). Στη συνέχεια αξιολογήθηκε η προγνωστική αξία των πολυμεταβλητών μοντέλων που περιέχουν 4 πρωτεΐνες. Για το σκοπό αυτό, k-means χρησιμοποιήθηκε για να συγκεντρωθούν τους ασθενείς σε δύο ομάδες με βάση τα επίπεδα πρωτεΐνης και Kaplan-Meier αναλύσεις χρησιμοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό των διαφορών επιβίωση μεταξύ των δύο ομάδων. Δυστυχώς, οι πολυπαραγοντικά μοντέλα δεν βελτίωσε σημαντικά την προγνωστική αξία των πρωτεϊνών του ορού μετρήθηκε κατά το στάδιο της PD.

Η ανάλυση Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκε για τη διερεύνηση της σχέσης των επιμέρους επιπέδων της πρωτεΐνης στη συνολική επιβίωση σε τρεις διαφορετικές φαινοτυπικές ομάδες ( PD, RC, και RM). Α: Τα υποκείμενα αποδόθηκαν στις χαμηλές ή υψηλές ομάδες έκφραση με βάση την έκφραση της πρωτεΐνης για κάθε πρωτεΐνη. Όπως τα καλύτερα αποκοπής σημεία δεν ήταν γνωστά, θα αξιολογείται συστηματικά οκτώ σημεία αποκοπής που κυμαίνονται από 30 εκατοστημόριο στο 65ο εκατοστημόριο των τιμών έκφρασης. Κάθε αστέρι (*) αντιπροσωπεύει μία σημαντική διαφορά στη συνολική επιβίωση των χαμηλής έκφρασης και υψηλές ομάδες έκφρασης. Β: Επιβίωση καμπύλες των δειγμάτων από το στάδιο PD. Μόνο τέσσερις πρωτεΐνες παρουσίασαν οριακά σημαντικές συσχετίσεις με την επιβίωση.

Η

Πέντε Ορός Πρωτεΐνες σε RM Στάδιο προβλέψει με ακρίβεια θεραπευτικά αποτελέσματα

Πολλαπλές πρωτεΐνες (sICAM1, RANTES, sgp130, sTNFR-II, sVCAM- 1, CA125, ΤΡΟ, ΜΜΡ-2, sIL-1 RII, sCD40L, και ΜΜΡ-1) που μετράται στο στάδιο RM μπορεί να προβλέψει μεμονωμένα συνολική επιβίωση των ασθενών ορώδες OC (Σχήμα 4Α). Μεταξύ αυτών των πρωτεϊνών, πέντε (sICAM1, RANTES, sgp130, sTNFR-II, sVCAM1) θα μπορούσε να διαχωρίσει τους ασθενείς RM σε δύο υποομάδες με διακριτές πρόγνωση και sICAM-1 είχε την καλύτερη προγνωστική αξία (HR = 17.01, ρ = 2 × 10

-4, Εικόνα 5). Αξιολογήσαμε επίσης την προγνωστική αξία όλων των 5 μοντέλα που χρησιμοποιούν 4 από τις 5 πρωτεΐνες και το μοντέλο 5-πρωτεΐνη (Σχήμα 5Α). Όλα τα έξι μοντέλα multi-δείκτη έχουν εξαιρετική προγνωστικό δυναμικό (HR = 5,48 – 13,66). Είναι ενδιαφέρον ότι η heatmap έκφρασης πρωτεΐνης (Σχήμα 5Β) δείχνει σαφώς ότι οι ασθενείς με κακή επιβίωση έχουν υψηλότερα επίπεδα έκφρασης για τις πέντε πρωτεΐνες. Επιπλέον, η εξέταση της κατανομής των άλλων κλινικών παραμέτρων όπως είναι ο βαθμός του όγκου και το στάδιο στις υποομάδες των ασθενών με εξαιρετική έναντι κακή επιβίωση υποδεικνύουν ότι η διαφορά επιβίωση δεν μπορεί να αποδοθεί στους γνωστούς παράγοντες κινδύνου εξετάστηκαν σε αυτή τη μελέτη.

Α: Οι καμπύλες επιβίωσης για τα κορυφαία πέντε μόρια που μπορούν να διακρίνουν την υποομάδα ασθενών με κακή συνολική επιβίωση ασθενών με καλύτερη επιβίωση. Η προγνωστική αξία της πολυμεταβλητής μοντέλων (συνδυασμοί 4 ή 5 πρωτεΐνες) προσδιορίστηκε με ομαδοποίηση τους ασθενείς σε δύο ομάδες με βάση τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης και πάνελ διαφορές επιβίωσης συνέχεια προσδιορίζεται μεταξύ αυτών των δύο σμήνη χρησιμοποιώντας αναλύσεις Kaplan-Meier. Β: Ο θερμικός χάρτης της έκφρασης της πρωτεΐνης στα δείγματα από το στάδιο RM. Οι ασθενείς με κακή επιβίωση έχουν υψηλότερα επίπεδα έκφρασης για τα πέντε πρωτεΐνες.

Η

Συζήτηση

Η συντριπτική πλειοψηφία των μελετών OC βιοδεικτών έχουν επικεντρωθεί στην ανακάλυψη και την επικύρωση των βιοδεικτών για τη διάγνωση ή στις αρχές του ανίχνευση. CA125 είναι το πιο γνωστό βιοδεικτών OC και έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως σε κλινικές, ενώ HE4 εγκρίθηκε πρόσφατα από το FDA ως βιοδείκτη OC. Παρά την κλινική αξία της CA125 και HE4, η χρησιμότητά τους στη διάγνωση OC, ειδικά έγκαιρη ανίχνευση, είναι αρκετά περιορισμένη λόγω ανεπαρκούς ειδικότητα και ευαισθησία. Ένας αριθμός νέων βιοδεικτών OC έχουν ανακαλυφθεί τα τελευταία χρόνια. Ότι η απόδοση αυτών των νέων βιοδεικτών συνήθως δεν φθάνει το επίπεδο των CA125 ή HE4, ο συνδυασμός των πολλαπλών βιοδείκτες μπορεί να βελτιώσει την απόδοση του CA125 [18] – [30]. Παρά τις εξελίξεις αυτές, οι διαθέσιμες σήμερα βιοδείκτες μπορεί να μην έχουν επαρκή PPV κατάλληλο για τον έλεγχο του πληθυσμού. Ως εκ τούτου, η συνεχής προσπάθεια για την εξεύρεση πρόσθετων βιοδείκτες είναι κρίσιμης σημασίας για τη βελτίωση της φροντίδας του ασθενούς. Στην παρούσα μελέτη, συγκρίναμε τα επίπεδα του 40 πρωτεΐνες του ορού του ορού και εντόπισε 25 πρωτεΐνες που τροποποιήθηκαν στην OC σε σύγκριση με HC (Πίνακας 2). πρωτεΐνες CRP και SAA είναι ιδιαίτερα αυξημένη, γεγονός που υποδηλώνει ενεργό φλεγμονή σε ασθενείς με ενεργή ασθένεια (PD και RC), αλλά σε μικρότερο βαθμό κατά το στάδιο της διαγραφής. Φλεγμονή στο OC υποδεικνύεται επίσης από τα αυξημένα επίπεδα των διαλυτών υποδοχέων, όπως sTNFR-II, sFas και sCD40L. Πολλά από αυτά τα μόρια (CRP, SAA, sTNFR-II, IGFBP-2, λεπτίνη, CD40L και sFas) έχουν προηγουμένως αναφερθεί σε OC [22], [31] – [40]. Οι πιο κάτω ρυθμισμένα πρωτεΐνες είναι ΡϋΟΡ-ΑΒ /ΒΒ και PDGF-ΑΑ, δύο σχετικά μόρια τα οποία παίζουν ένα κρίσιμο ρόλο στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την αγγειογένεση. Genomic μελέτες πρότειναν ότι η ενεργοποίηση του μονοπατιού PDGF διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην OC [41]. Ενώ η προ-αγγειογενετική και υπέρ της ανάπτυξης λειτουργία του PDGF θα προέβλεπε υψηλότερα επίπεδα PDGF ορού [42], αυτές οι δύο πρωτεΐνες είναι αναπάντεχα χαμηλότερα σε ασθενείς OC σύγκριση με HC. Σύμφωνα με τα αποτελέσματά μας, PDGF-ΑΑ αναφέρθηκε επίσης να είναι σημαντικά χαμηλότερο σε ορούς ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος [43]. Ωστόσο, η επίπτωση αυτών των παρατηρήσεων παραμένει να διευκρινιστεί.

Η αξία αυτών των πρωτεϊνών του ορού ως βιοδείκτες OC αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας την AUC από τις καμπύλες ROC (Σχήμα 2). PDGF-ΑΒ /ΒΒ, CA125, PDGF-ΑΑ και CRP είχαν τα υψηλότερα τιμές AUC (Σχήμα 2). Η AUC για CA125 ήταν 0.847, το οποίο είναι συγκρίσιμο με πολλές προηγούμενες παρατηρήσεις. Η πολυπαραγοντική ανάλυση πραγματοποιήθηκε επίσης για την αξιολόγηση της χρησιμότητας των συνδυασμών πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας ως βιοδείκτες. Σε πολλές μελέτες, οι ερευνητές προσπαθούν να ανακαλύψουν μοντέλα με την καλύτερη εξειδίκευση και ευαισθησία χρησιμοποιώντας ένα μεγάλο αριθμό δεικτών. Ενώ μοντέλα που χρησιμοποιούν μεγάλο αριθμό πρωτεϊνών μπορούν να εκτελούν καλύτερα στο σύνολο δεδομένων ανακάλυψη, είναι γενικά πιο δύσκολο να επικυρωθεί λόγω της πιθανής υπερπροσαρμογής. Ως εκ τούτου, αξιολογήσαμε μοντέλα που χρησιμοποιούν μικρούς αριθμούς των πρωτεϊνών. Η AUC για 10 μοντέλα με 3 πρωτεΐνες βελτιώθηκε σε 0,907 – 0,933 (Σχήμα 2). Αυτοί οι συνδυασμοί πρωτεΐνης είναι δυνητικά χρήσιμα για τη διάγνωση OC και θα πρέπει να αξιολογηθούν περαιτέρω για την έγκαιρη ανίχνευση του οργανωμένου εγκλήματος σε μελλοντικές μελέτες.

Η αξιολόγηση θεραπευτικό αποτέλεσμα και η πρόγνωση είναι κομβικής σημασίας για τους ασθενείς και τη διαχείριση της νόσου τους. Πολυάριθμες μελέτες έχουν αξιολογήσει και να επιβεβαιώσει την αξία του CA125, που οδηγεί στην υποχρεωτική δοκιμασία του CA125 για τους ασθενείς OC. Αν και ομαλοποίηση του CA125 είναι μια σημαντική ένδειξη για τη διαγραφή, CA125 έχει σοβαρούς περιορισμούς. Πρώτον, μια καλή αναλογία ασθενών OC έχουν φυσιολογική ή σχεδόν φυσιολογικά επίπεδα CA125 πριν από τη χημειοθεραπεία. Δεύτερον, παραμένει αμφιλεγόμενη αν CA125, δοκιμάζεται είτε προεγχειρητικά ή μετεγχειρητικά, έχει σημαντική προγνωστική αξία. Αρκετές μελέτες κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι CA125 δεν έχει προγνωστική αξία [44], [45], ενώ άλλες μελέτες καταλήγουν σε αντίθετα συμπεράσματα [46] – [48]. Η προσεκτική εξέταση αυτών των μελετών δείχνουν ότι η διαμάχη μπορεί να εξηγηθεί από μικρά μεγέθη δειγμάτων ορισμένων μελετών και τη χαμηλή προγνωστική αξία του CA125. Μια πρόσφατη μελέτη με μεγάλο μέγεθος δείγματος έδειξαν σημαντική, αλλά σχετικά χαμηλή προγνωστική αξία για CA125 (HR = 1.5) [49]. Ένας αριθμός μελετών αξιολογήθηκαν επίσης την προγνωστική αξία άλλων βιοδεικτών ή πάνελ βιοδεικτών [50], [51]. Σε γενικές γραμμές, αυτοί οι βιοδείκτες έχουν χαμηλή HR όταν δοκιμάστηκε πριν από τη χημειοθεραπεία. Στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε επίσης την προγνωστική αξία των πρωτεϊνών του ορού που έχουν αλλοιωθεί σημαντικά σε ορώδες δείγματα OC μετά τη διάγνωση. Συνεπής με τα προηγούμενα ευρήματα, ήμασταν σε θέση να εντοπίσουν τις μεμονωμένες πρωτεΐνες ή συνδυασμούς πρωτεϊνών με αξιόλογη τιμή για πρόγνωση όταν δοκιμάζονται μετά τη διάγνωση (Σχήμα 4).

Σε αντίθεση, ένας αριθμός πρωτεϊνών, όταν δοκιμάστηκαν μετά τη θεραπεία και σε ύφεση, έχουν ατομικά εξαιρετική προγνωστική αξία για τη συνολική επιβίωση των ασθενών με ορώδες OC. Οι πέντε πρωτεΐνες (sICAM1, RANTES, sgp130, sTNFR-II και sVCAM1) έχουν εξαιρετική HR (17.01, 14.09, 12.34, 9.42, και 8.18, αντίστοιχα). Και οι πέντε πιθανοί συνδυασμοί των 4 από τις 5 πρωτεΐνες είχαν εξαιρετικές προγνωστική αξία (HR = 13.66, 9.28, 8.22, 5.48, 5.48). Όταν χρησιμοποιούνται και οι πέντε πρωτεΐνες, η προγνωστική αξία ήταν σημαντική, με HR = 11,87 (p = 0,003). Τα επίπεδα αυτών των πρωτεϊνών είναι σημαντικά υψηλότερη στην υποομάδα ασθενών με κακή συνολική επιβίωση συγκριτικά με τους ασθενείς με καλύτερη επιβίωση. Πράγματι, τα δείγματα RM από ασθενείς με κακή επιβίωση είχαν έκφραση προφίλ δυσδιάκριτες από PD ή δειγμάτων RC, γεγονός που υποδηλώνει ότι η θεραπεία δεν ήταν εντελώς επιτυχείς για αυτούς τους ασθενείς. Για τις γνώσεις μας, αυτές οι πέντε πρωτεΐνες του ορού είναι η πρώτη οθόνη που μπορεί να εκτιμήσει με ακρίβεια τις θεραπευτικές εκβάσεις για τη θεραπεία σε ασθενείς με ορώδες OC? Ωστόσο, το μικρό μέγεθος του δείγματος είναι ο περιορισμός της μελέτης μας. Οι πέντε πρωτεΐνες περιλαμβάνουν δύο διαλυτά μόρια προσκόλλησης (sICAM1 και sVCAM1) και δύο διαλυτοί υποδοχείς κυτοκίνης (sTNFR-II και sgp130) κρίσιμης σημασίας για τη λειτουργία του ανοσοποιητικού. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η φλεγμονή σε απόκριση προς υπολειμματικά καρκινικά κύτταρα είναι εμφανής σε ασθενείς με κακή επιβίωση ακόμη και αν το φορτίο του όγκου μπορεί να είναι πολύ χαμηλή όπως υποδεικνύεται από ένα κανονικό αντιγόνο όγκου όπως CA125. Αν τα αποτελέσματα μας επικυρωθεί σε μακροχρόνιες μελέτες χρησιμοποιώντας ένα μεγαλύτερο μέγεθος δείγματος, αυτές οι βιοδείκτες μπορούν να χρησιμοποιηθούν μαζί με το CA125 ή /και HE4, για να εκτιμηθεί με μεγαλύτερη ακρίβεια το θεραπευτικό αποτέλεσμα για τους ασθενείς OC.

Υποστήριξη Πληροφορίες

αρχείου S1.

Πίνακες S1-S3. Πίνακας S1: Οι μεταβολές στα επίπεδα πρωτεΐνης ορού σε ασθενείς σε σύγκριση με τους υγιείς μάρτυρες. (PD: Δημοσίευση Διάγνωση, HC: υγιείς μάρτυρες, RC: Υποτροπή, RM: Διαγραφή). Πίνακας S2: Μεταβολές στα επίπεδα πρωτεϊνών του ορού σε ασθενείς με ενεργό καρκίνο σε σύγκριση με ύφεση περιπτώσεις. Πίνακας S3: τιμές AUC του 56 Μοντέλα (03 μόρια για κάθε μοντέλο). Η πολυπαραγοντική ανάλυση έγινε για την ταξινόμηση των υγιών και των ασθενών (HC vs PD + RC)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0078393.s001

(DOCX)