Αφηρημένο

Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία του καρκίνου που σχετίζονται με θανάτους ανθρώπων. Διερεύνηση των μηχανισμών που διέπουν τη μετάσταση του καρκίνου βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν με (CSLCs) θα ανοίξει νέους δρόμους στη διάγνωση και θεραπεία του καρκίνου του πνεύμονα. Εδώ, αποδείξαμε ότι CSLCs προερχόμενο από αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα κύτταρα (LAC) εμφανίζεται ιδιαίτερα επεμβατική και μεταναστευτικών ικανότητες μέσω εκφράζουν υψηλά επίπεδα POU5F1 και ΜΜΡ-2. Βρήκαμε ότι POU5F1 ρυθμίζεται άμεσα ΜΜΡ-2 μεταγραφή μέσω αλληλεπίδρασης με τον υποκινητή της ΜΜΡ-2. POU5F1 knockdown σε LACSLCs μειωμένη ΜΜΡ-2 αφθονία πρωτεΐνη, οδηγώντας σε αναστολή της κυτταρικής εισβολής, τη μετανάστευση και την ογκογένεση δυνατότητες των κυττάρων LAC. Κλινικά, παρεκκλίνοντα υψηλά εκφράσεις POU5F1 και ΜΜΡ-2 συσχετίζονταν αντίστροφα με την επιβίωση των ασθενών LAC, και το διπλό θετικό POU5F1 και ΜΜΡ-2 έδειξε τη χειρότερη πρόγνωση για κακή επιβίωση του ασθενούς. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι POU5F1 μπορεί να συνδεθεί με τον προαγωγό ΜΜΡ-2 για την αποδόμηση της εξωκυττάριας μήτρας που περιβάλλει, και ως εκ τούτου την προώθηση επεμβατική και μεταναστευτικές δυνατότητες του LACSLCs. Επιπλέον, τα δεδομένα μας εμπλέκουν ότι η παθολογική ανίχνευση των διπλών θετικών εκφράσεις για POU5F1 και MMP-2 θα είναι χρήσιμα ως διαγνωστικοί και προγνωστικοί βιοδείκτες στη ΛΑΚ για να προωθήσει τη θεραπεία αντι-μετάσταση

Παράθεση:. Xin Yh, Bian BSJ, Γιανγκ Xj, Cui W, Cui HJ, Cui Yh, et al. (2013) POU5F1 Ενισχύει την εισβολής καρκινικά βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν σε αδενοκαρκίνωμα πνεύμονα με Προς τα πάνω ρύθμιση ΜΜΡ-2 Έκφραση. PLoS ONE 8 (12): e83373. doi: 10.1371 /journal.pone.0083373

Επιμέλεια: Persio Dello Sbarba, Università degli Studi di Firenze, Ιταλία

Ελήφθη: 15 Ιούλ 2013? Δεκτές: 1 Νοέμβρη 2013? Δημοσιεύθηκε: 30 Δεκ 2013

Copyright: © 2013 Xin et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Πρόγραμμα βασικής Έρευνας της Κίνας (973 Προγράμματος, Grant No.2010CB529403), Εθνικό Φυσικών Επιστημών Ιδρύματα της Κίνας (Grant No.81272598) και την Κίνα Ίδρυμα Μεταδιδακτορικός Science (Grant No.2012T50852). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι οι κύριες αιτίες των θανάτων ανθρώπων σε όλο τον κόσμο [1]. Παρά τις μεγάλες προόδους στην πνεύμονα θεραπευτικών του καρκίνου, η μετάσταση και η θεραπεία αποτυχία συχνά να οδηγήσει στην επανεμφάνιση και υψηλή θνησιμότητα. Ένας πιθανός λόγος υποκείμενη θεραπευτική αποτυχία και θανάτους ανθρώπων είναι η παρουσία των υπολειμματικών κακοηθών κυττάρων που δίνουν εν τέλει οδηγεί σε δευτερογενείς όγκους και μεταστάσεις [2].

Μέχρι σήμερα, συσσωρεύοντας αποδείξεις αναδυόμενες ότι ένας μικρός πληθυσμός των κυττάρων διαθέτουν δράση ογκογενή στον καρκίνο του πνεύμονα και ονομάζονται ως » βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν με καρκίνο (CSLCs) » [3], [4]. Η παρουσία μιας μικρής υποπληθυσμό CSLCs θα μπορούσε να εξηγήσει γιατί τόσοι πολλοί καρκίνοι του πνεύμονα επανεμφανιστεί μετά τη θεραπεία με χειρουργική επέμβαση, χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία, ακόμη και όταν τα περισσότερα από τα κακοήθη κύτταρα φαίνεται να σκοτωθεί μετά τη θεραπεία [5], [6]. Ως εκ τούτου, είναι κρίσιμο να αποκαλύψει τα βιολογικά χαρακτηριστικά και μοριακούς μηχανισμούς για την έναρξη και την πρόοδο του CSLCs για την ανάπτυξη νέων θεραπειών. Προηγουμένως, έχουμε δημιουργήσει με επιτυχία ένα

in vitro

σύστημα καλλιέργειας σφαίρα για να απομονώσει και να εμπλουτίσουν «καρκίνο του πνεύμονα αδενοκαρκίνωμα βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν με» (LACSLCs) και αποκάλυψε ότι η ΠΟΥ οικογένεια γονιδίων ομοιοκυτίου μεταγραφικού παράγοντα POU5F1 (επίσης γνωστή ως Oct4) λειτουργεί ως βασικός ρυθμιστής για τη διατήρηση της αυτο-ανανέωσης και καρκινογένεση από LACSLCs [7].

POU5F1 απαιτείται για τη διατήρηση της αυτο-ανανέωση των κυττάρων των εμβρυϊκών βλαστικών (ES), και συμβάλλει στην βλαστική ικανότητα, ογκογένεση και η μετάσταση CSLCs [8] – [10]. Έχει αναφερθεί πρόσφατα ότι POU5F1 προάγει εισβολή και μετάσταση ορισμένων συμπαγών όγκων μέσω της ενισχυμένης αποδόμησης των γύρω εξωκυτταρικής μήτρας, γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτός ο παράγοντας μεταγραφής μπορεί να είναι χρήσιμη ως δυνητικό θεραπευτικό στόχο έναντι του καρκίνου και μία νέα όγκου βιολογικών και προγνωστικός δείκτης [11], [12]. Ωστόσο, οι μηχανισμοί της ανώμαλης έκφρασης POU5F1 στον καρκίνο του πνεύμονα υποκείμενες εισβολή και τη μετάσταση παραμένουν ασαφείς.

Στην παρούσα μελέτη, αποδείξαμε ότι η έκφραση POU5F1 συσχετίστηκε με την εισβολή και τη μετανάστευση των LACSLCs και διερεύνησε τις υποκείμενες μοριακών μηχανισμών. Η κλινική σημασία των POU5F1 και μεταλλοπρωτεϊνάσης 2 (ΜΜΡ-2) εκφράσεις στους ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα (ΛΑΚ) ερευνήθηκε επίσης.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Αυτή η μελέτη ήταν αυστηρά διενεργείται σύμφωνα με τις συστάσεις στον οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των ζώων Εργαστηρίου εγκρίθηκε από την Επιτροπή Θεσμικών Ζωικά Φροντίδα και Χρήση του τρίτου Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Ανθρώπινα δείγματα πρωτογενούς ΛΑΚ συλλέχθηκαν με τη συγκατάθεση του ασθενούς. Κάθε συμμετέχων στη μελέτη αυτή είχε ενημερωθεί με γραπτή συγκατάθεση. Ανθρώπινα δείγματα πρωτογενούς ΛΑΚ συνελέγησαν και το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιατρικής Δεοντολογίας της ΝΔ Νοσοκομείο της Τρίτης Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Ζωικά πειραματικά πρωτόκολλα εκτελέσθηκαν σύμφωνα με το Εθνικό Ινστιτούτο Επιστημών Υγείας και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Θεσμικών ζώων Φροντίδα και Χρήση του τρίτου Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο.

Κυτταρική καλλιέργεια

Ανθρώπινο μη μικροκυτταρικό-κυττάρων καρκίνος του πνεύμονα (NSCLC) κυτταρική γραμμή Α549 αγοράστηκε από την American Type Culture Collection (ATCC) (Rockville, MD) και καλλιεργήθηκαν σε μέσο ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS), 100 U /ml πενικιλλίνη και 100 U /ml στρεπτομυκίνη (Gibco, USA) σε υγροποιημένο επωαστή 37 ° C με

2 ατμόσφαιρα 5% CO. καλλιέργεια σφαίρα όγκου πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [4], [13] – [15]

λεντοϊών shRNA, siRNA κατασκευή και διαμόλυνση

λεντοϊών κατασκευάσματα και οι εκκινητές που στοχεύουν ανθρώπινες αλληλουχίες μικρή φουρκέτα Pou5f1. σχεδιάστηκαν και παρασκευάστηκαν με SunBio Ιατρική Βιοτεχνολογία (Σαγκάη, Κίνα). Οι φορείς έκφρασης φακοϊό shRNA παρασκευάστηκαν με παροδική διαμόλυνση των κατασκευασμάτων λεντοϊού σε κύτταρα 293Τ να παράγουν ιούς. Το προκύπτον λεντοϊού POU5F1-shRNA και του ελέγχου-shRNA χρησιμοποιήθηκαν για να μολύνουν κύτταρα Α549. Ένας έλεγχος-shRNA σχεδιάστηκε από μετάλλαξη των αντινοηματικών νουκλεοτιδίων στην αλληλουχία POU5F1 shRNA. Τα κατασκευάσματα πλασμιδίου που φέρει μια αλληλουχία siRNA που στοχεύει ΜΜΡ-2 σχεδιάστηκαν και κατασκευάστηκαν όπως περιγράφεται προηγουμένως [16]. Οι επιμολύνσεις πραγματοποιήθηκαν με Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

In vitro

επούλωση των πληγών δοκιμασία

κύτταρα Συρρέουσες τραυματίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα 200- ρύγχος πιπέτας μι σε πλάκες καλλιέργειας των έξι φρεατίων και επωάστηκαν σε DMEM με 5% ή 10% εμβρυϊκού βόειου ορού σε παρουσία ή απουσία μιτομυκίνης C (10 μg /mL). Το πλάτος τραύμα φωτογραφήθηκε σε 0h, 16 ώρες και 24 ώρες μετά το μηδέν κάτω από ένα μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης. Οι αποστάσεις μετανάστευση μετρήθηκαν και προσδιορίστηκαν ποσοτικά όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12]. Το λογισμικό της εικόνας με τη βοήθεια υπολογιστή χρησιμοποιήθηκε για τον ποσοτικό προσδιορισμό της μετανάστευσης των κυττάρων σε σχέση με τη συνοριακή γραμμή πλέγματος.

In vitro

εισβολή δοκιμασία

Η επεμβατική ικανότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε σε 24 -Καλά σχήμα χρησιμοποιώντας TRANSWELL® ένθετα με μέγεθος πόρου 8 μm, επικαλυμμένα με Matrigel® (BD Biosciences, USA) όπως περιγράφεται προηγουμένως [17]. σφαίρες όγκου τρυψινοποιήθηκαν, επαναιωρήθηκαν σε μέσο ϋΜΕΜ άνευ ορού και τοποθετήθηκαν στους άνω θαλάμους των ένθετων TRANSWELL® (5 × 10

4 /φρεάτιο), και μέσο DMEM που περιείχε 10% FBS προστέθηκε στους κάτω θαλάμους. Τα κύτταρα αφέθηκαν να εισβάλλουν μέσω της μεμβράνης για 24 ώρες και στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεϋδη σε PBS. Οι μη επεμβατικές κύτταρα στις άνω θάλαμοι σκουπίζεται με ένα βαμβάκι και επεμβατικές κύτταρα χρωματίστηκαν με κρυσταλλικό ιώδες διάλυμα. Οι αριθμοί των κυττάρων που είχαν εισβάλει στην κάτω επιφάνεια των ενθεμάτων μετρήθηκαν υπό μικροσκόπιο φωτός.

Ογκογονικότητα ανάλυση

in vivo

Η

Για ξενομοσχεύματα ποντικών, προσκολλημένα Α549 μονοστιβάδα κύτταρα και σφαίρες όγκου διαχωρίστηκαν για να ληφθούν εναιωρήματα μονού κυττάρου. Ένας ίσος αριθμός κυττάρων (5 × 10

5) αραιώθηκαν σε μέσο DMEM ελεύθερο ορού και ενίεται υποδορίως σε τέσσερις εβδομάδων αρσενικούς γυμνούς ποντικούς (

n = 5

καθένα, Κέντρο πειραματοζώων , Τρίτη Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο, Κίνα). Οι ποντικοί παρακολουθήθηκαν κάθε εβδομάδα για την εμφάνιση των υποδόριων όγκων. Στο τέλος του 7 εβδομάδων, όλα τα ποντίκια θυσιάστηκαν και εμφυτευτεί όγκου απομακρύνθηκαν και μετρήθηκαν. Ο όγκος του όγκου (TV) υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: Τηλεόραση (mm

3) =

δ

2 ×

D

/2, όπου d και D αντιπροσωπεύουν το συντομότερο και η μεγαλύτερη διαμέτρων, αντίστοιχα. Επιπλέον, οι ιστοί του όγκου μονιμοποιήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα φορμαλίνης και στη συνέχεια πραγματοποιείται με την ιστολογία του όγκου και ανοσοϊστοχημική ανάλυση.

ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR (qRT-PCR)

Ολικό RNA εξήχθη από κύτταρα καρκίνου χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, USA). qRT-PCR εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας κιτ SYBR PrimeScript RT-PCR (Takara, Japan) επί ενός Rotor-Gene 6000 σε πραγματικό χρόνο γενετική αναλυτή (Corbett Life Science, USA). Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για την PCR ενίσχυση των εσωτερικών θραυσμάτων της ΜΜΡ-2 είναι οι εξής: 5′-CCACTGCCTTCGATACAC-3 ‘(νοηματικό)? 5’-GAGCCACTCTCTGGAATCTTAAA-3 ‘(αντι-νόημα). αφυδρογονάση αφυδρογονάση 3-φωσφορικής (GAPDH) ενισχύθηκε ως εσωτερικό έλεγχο. Κάθε δείγμα δοκιμάστηκε τουλάχιστον εις τριπλούν.

Western ανάλυση κηλίδος

Τα κυτταρολύματα των κυττάρων μονοστοιβάδας Α549 και σφαίρες όγκου παρασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό RIPA με αναστολείς πρωτεάσης και να ποσοτικοποιηθούν με χρήση του προσδιορισμού πρωτεΐνης BCA (Pierce, Rockford, IL). Δείγματα πρωτεΐνης (20 μg) φορτώθηκαν σε ένα 10% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF (Millipore, USA). Τα ανοσοσύμπλοκα που σχηματίζονται με επώαση του μονοκλωνικού ποντικού ΜΜΡ αντίσωμα (1:400? Abcam, USA), αντίσωμα κουνελιού πολυκλωνικό POU5F1 (1:500? BD Biosciences, USA) και κουνελιού πολυκλωνικό αντίσωμα ακτίνης (1:5000? Abcam, USA) σε 4 ° C όλη τη νύκτα, που ακολουθείται από επώαση με συζευγμένο με υπεροξειδάση δευτερογενή αντισώματα χρένο να ποντικού ή IgG κουνελιού (1:5000? Invitrogen, USA). Ανοσοδραστικών πρωτεϊνών οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας SuperSignal West Femto Trial Kit (Pierce, Rockford, IL) με ένα ενισχυμένο σύστημα ανίχνευσης χημειοφωταύγειας.

χρωματίνης ανοσοκαταβύθιση (μάρκας)

δοκιμασία ChIP διεξήχθη με ένα τσιπ-IT κιτ σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. συνθήκες διάτμησης Υπερήχων κατέληξε σε σχετικά ένστολοι θραύσμα DNA στο μέγεθος του ~ 300 bp. Οι υπόλοιπες διαδικασίες ολοκληρώθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [7]. Γενωμικό DNA εκχυλίστηκε από τα ιζήματα και ενισχύθηκαν με qRT-PCR. Τα ζεύγη εκκινητών που χρησιμοποιούνται για την PCR για να ενισχύσουν την περιοχή ΜΜΡ-2 προαγωγό που περιέχει στοιχείο πρόσδεσης POU5F1 ήταν:. 5′- CATGACAACAGGCTTTGGATTAG-3 ‘(νοηματικό) και 5′-AACAAACTCTTAGGCAACGAACC -3’ (αντι-νόημα)

Ανοσοϊστοχημεία (IHC)

Ανοσοϊστοχημική χρώση των ιστών και των καρκινικών ξενομοσχευμάτων διεξήχθη επί των δειγμάτων χρησιμοποιώντας μέθοδο στρεπταβιδίνης-βιοτίνης υπεροξειδάσης (SABC). Εν συντομία, ξενομόσχευμα δείγματα μονιμοποιήθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη στους 4 ° C για 72 ώρες και ενσωματωμένα σε παραφίνη. Οι τομές παραφίνης επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα σε 4 ° C όλη τη νύκτα. Οι πλάκες στη συνέχεια αντιδρά με /IgG κουνελιού βιοτινυλιωμένο κατσίκας αντι-ποντικού και αβιδίνη-βιοτίνη σύμπλοκο (ABC) (Beyotime, Κίνα). Για την απεικόνιση του συμπλόκου αντισώματος-αντιγόνου, με χρωμογόνα αντίδραση διεξήχθη με διαμινοβενζιδίνη (DAB) και τα πλακίδια εξετάσθηκαν υπό μικροσκόπιο φωτός. Για τον ποσοτικό προσδιορισμό, το λογισμικό ΙΡΡ (image-Pro Plus 6.0) χρησιμοποιήθηκε για να αναλυθεί η οπτική πυκνότητα των εικόνων μέσα σε 5 τυχαία πεδία στα 400 × μεγέθυνση. Η μέση οπτική πυκνότητα (AOD), δηλαδή IOD /περιοχή, υπολογίσθηκε.

Επιμόλυνση και αναφοράς λουσιφεράσης δοκιμασία

Κατασκευή και παροδική επιμόλυνση των πυγολαμπίδας πλασμιδίου αναφοράς λουσιφεράσης πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [18] . Η ακολουθία του κατασκευάσματος υποκινητή pGL3-ΜΜΡ-2 επιβεβαιώθηκε (SunBio Ιατρική Βιοτεχνολογία, Κίνα). Το shRNA-Control και shRNA-Pou5f1 μολυσμένα LACSLCs Α549 σπάρθηκαν σε πλάκες 24 φρεατίων (1 χ 10

5 σε κάθε φρεάτιο). Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα συν-επιμολύνθηκαν με pGL3-ΜΜΡ-2 προαγωγό και διάνυσμα Renilla (PRL-ΤΚ: Promega, USA). Τα κυτταρολύματα συλλέχθηκαν σε 48 ώρες μετά την επιμόλυνση και η σχετική δραστικότητα του ενζύμου ανταποκριτή λουσιφεράσης μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το Dual-Luciferase® σύστημα προσδιορισμού ανταποκριτή (Promega, USA). δραστικότητα λουσιφεράσης Firefly κανονικοποιήθηκε σε δραστικότητα λουσιφεράσης Renilla για κάθε δείγμα.

Tissue μικροσυστοιχία (TMA) ανάλυση

Ένα σύνολο 55 ασθενών με πρωτοπαθή LAC που έλαβαν χειρουργική εκτομή συμπεριλήφθηκαν. τάξεων των όγκων καθορίζονται σύμφωνα με τα κριτήρια της Παγκόσμιας Οργάνωσης Υγείας. Η κατάσταση των όγκων-Node-Μετάσταση (pTNM) όλων των LACs αξιολογήθηκε σύμφωνα με τα κριτήρια του έκτη έκδοση της ταξινόμησης ΤΝΜ της Διεθνούς Ένωσης κατά του Καρκίνου [19]. Οι κλινικο-παθολογική χαρακτηριστικά των ασθενών συνοψίζονται στον πίνακα 1. Η ΤΜΑ δομήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [20].

Η

Στατιστική ανάλυση

Όλα τα πειράματα εκτελέστηκαν τουλάχιστον τρεις φορές εις τριπλούν. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως μέση τιμή ± SEM. Διεξήχθη στατιστική ανάλυση χρησιμοποιώντας λογισμικό SPSS13.0. Στατιστικά σημαντική διαφορά αξιολογήθηκε με μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) που ακολουθείται από πολλαπλές συγκρίσεις μέση από το τεστ Student-Newman-Κεούλ του. Στατιστική διαφορά θεωρείται σημαντική εάν

P

-τιμή ήταν μικρότερη από 0,05.

Αποτελέσματα εμφανιστεί

LACSLCs άκρως μεταναστευτικών και επεμβατικές δυνατότητες

Στη μελέτη μας, έχουμε δημιουργήσει ένα σταθερό σύστημα καλλιέργειας σφαίρα για την απομόνωση και τον εμπλουτισμό LACSLCs να διαφωτίσει βιολογικές συμπεριφορές τους. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1, τα κύτταρα Α549 που καλλιεργήθηκαν SFM με EGF και bFGF δημιουργούνται μη προσκολλημένα, πολυκύτταρων σφαίρα LACSLCs (Σχήμα 1Α), και αυτά σφαίρα LACSLCs εμφανίζεται ιδιαίτερα επεμβατική και μεταναστευτικών ικανότητες

in vitro

(Εικόνα 1Β και Γ) και

in vivo

(Εικόνα 1D). Τα αποτελέσματα του

vitro

δοκιμασία επούλωση της πληγής σε απέδειξε ότι σφαίρα LACSLCs μετανάστευσαν στην γδαρμένο περιοχή πιο γρήγορα από ό, τι τα κύτταρα Α549 μονοστοιβάδα. Επιπλέον, τα αποτελέσματα από μια

in vitro

δοκιμασία εισβολής Matrigel έδειξε ότι LACSLCs Α549 εμφανίζεται υψηλότερη επεμβατική ικανότητα από κύτταρα Α549 μονοστοιβάδα (137,5 ± 17,7 έναντι 49,7 ± 9,2 εισβάλλοντας κύτταρα /πεδίο). Επιπλέον, LACSLCs Α549 παρουσίασαν υψηλότερο ογκογενετικότητας

in vivo

που οδήγησε σε μεγαλύτερες μοσχευμάτων όγκων με αυξημένη δραστηριότητα εισβολή (Σχήμα 1D). Συνολικά, τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι LACSLCs είναι άκρως μεταναστευτικών και επεμβατική

in vitro

και

in vivo

.

(Α) Μορφολογία της σφαίρας-LACSLCs προέρχεται από καρκινικό κύτταρο πνεύμονα Α549 γραμμή. Αντιπροσωπευτικά εικόνες από οπτικό μικροσκόπιο (μονοστοιβάδα κυττάρων 10 ×, LACSLCs 20 ×) εμφανίζεται. (Β) τυλιγμένο δοκιμασία επούλωσης για την κυτταρική μετανάστευση των LACSLCs Α549 και Α549 κύτταρα μονοστιβάδας. Εκπρόσωπος εικόνες της κυτταρικής μετανάστευσης στην τραυματισμένη περιοχή στο 0 και 16 ώρες μετά τον τραυματισμό (

αριστερό πάνελ

) εμφανίζονται. Ποσοτική ανάλυση δείχνει πληγών ικανότητα επιδιόρθωσης των κυττάρων που μεταναστεύουν σε 16 ώρες μετά τον τραυματισμό (

δεξί πάνελ

). (Γ) Σύγκριση των επεκτατικών ικανότητα σε LACSLCs Α549 και κύτταρα μονοστιβάδας ανιχνεύεται με Transwell δοκιμασίας. Εκπρόσωπος εικόνες της εισβολής κυττάρων ορατά με χρώση κρυσταλλικού ιώδους (20 ×) (

αριστερό πάνελ

). Ποσοτική ανάλυση της εισβολής ικανότητα των κυττάρων στις 24 ώρες μετά τον εμβολιασμό (

δεξί πάνελ

). (Δ) Η ιστολογική εικόνες με Η &? Ε χρώση κάτω από μικροσκοπία φωτός. Οι όγκοι που σχηματίζονται από LACSLCs Α549 ήταν ιδιαίτερα επεμβατική και τα καρκινικά κύτταρα εισέβαλαν γειτονικό στρώμα μυών (κόκκινα βέλη? 20 ×). Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν τουλάχιστον εις τριπλούν και τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. Φοιτητής

t

δοκιμή διεξήχθη για να αξιολογήσει τη διαφορά.

Η

POU5F1 και MMP-2 ανωμάλως υψηλά εκφράζονται σε LACSLCs

Για να διαλευκανθεί το υποκείμενο μηχανισμό οι υψηλές μεταναστευτικές και επεμβατικές δυνατότητες του LACSLCs, εξετάσαμε την βλαστικών κυττάρων μεταγραφή παράγοντας POU5F1 και την πρωτεάση του ψευδαργύρου για την αποδόμηση του εξωκυτταρικού πλέγματος ΜΜΡ-2. Ανοσοκηλίδωση (Σχήμα 2Α) και στύπωμα Western (Σχήμα 2Β) αναλύσεις έδειξαν ότι η ΜΜΡ-2 και POU5F1 είχαν παρεκκλίνοντα υψηλά εκφράζονται σε LACSLCs Α549. Επιπλέον, ανοσοϊστοχημική ανάλυση έδειξε ότι το επίπεδο έκφρασης της ΜΜΡ-2 σε ιστούς όγκων που σχηματίζεται από LACSLCs Α549 ήταν υψηλότερη από εκείνη των όγκων που σχηματίζονται από κύτταρα Α549 μονοστοιβάδας (Σχήμα 2C). Συλλογικά, αυτά τα αποτελέσματα προτείνουν ότι οι παρεκκλίνοντα υψηλά εκφράσεις POU5F1 και ΜΜΡ-2 μπορεί να παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της κυτταρικής μεταναστευτικών και επεμβατικές δυνατότητες του LACSLCs.

(Α) Ανοσοκηλίδωση των POU5F1 και ΜΜΡ-2 παρατηρήθηκε με ομοεστιακό μικροσκόπιο σάρωσης. (Β) Έκφραση του παράγοντα μεταγραφής βλαστοκυττάρων POU5F1 ανιχνεύθηκε με κηλίδωση Western. (Γ) Ανοσοϊστοχημική ανάλυση των πρωτεϊνών ΜΜΡ-2 σε ιστούς όγκων που σχηματίζεται από LACSLCs Α549 και κύτταρα μονοστιβάδας. Εκπρόσωπος εικόνες της έκφρασης της ΜΜΡ-2 με χρώση IHC (20 ×) (

αριστερό πάνελ

). Ποσοτική ανάλυση της ΜΜΡ-2 τα επίπεδα πρωτεΐνης σε ιστούς όγκων που σχηματίζεται από LACSLCs Α549 και κύτταρα μονοστιβάδας. Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν τουλάχιστον εις τριπλούν και τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. Φοιτητής

t

δοκιμή διεξήχθη για να αξιολογήσει τη διαφορά.

Η

POU5F1 νοκ ντάουν διαταράσσει τις κυτταρικές εισβολή, τη μετανάστευση και την ογκογένεση δυνατότητες των LACSLCs

Για να επιβεβαιώσετε την ανασταλτική επίδραση της POU5F1 ρύθμιση προς τα κάτω στο κελί εισβολή και τη μετανάστευση, εξετάσαμε αν νοκ ντάουν της POU5F1 θα μπορούσε να μειώσει τις μεταναστευτικές και επεμβατικές δυνατότητες της LACSLCs. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, LACSLCs περιέχουν shRNA-Pou5f1 μετανάστευσαν πολύ πιο αργή από τα κύτταρα ελέγχου (Σχήμα 3Α και Β). LACSLCs Α549 με POU5F1 knockdown είχε σαν αποτέλεσμα σημαντικά μειωμένο αριθμό εισβάλλοντα κύτταρα μέσω του Matrigel στον κάτω θάλαμο σε σύγκριση με shRNA-Control μολυσμένα LACSLCs Α549 (Εικόνα 3C και D). Επιπλέον, οι όγκοι που σχηματίζονται από LACSLCs Α549 με POU5F1 knockdown ήταν πολύ μικρότερες από ό, τι τα κύτταρα ελέγχου (Σχήμα 3Ε), και εμφανίζεται μειωμένη εισβολή στο μυ στρώματα. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι τα υψηλότερα μεταναστευτικών και επεμβατικές δυνατότητες του LACSLCs προκύπτουν από την έκτροπα υψηλή έκφραση του POU5F1. Επιπλέον, βρήκαμε ότι οι ικανότητες των κυττάρων εισβολή και η μετανάστευση ήταν σημαντικά ανέστειλε μετά ΜΜΡ-2 knockdown σε LACSLCs (Σχήμα 3F και G).

(Α) Αντιπροσωπευτικές εικόνες του τραύματος δοκιμασία για την κυτταρική μετανάστευση του shRNA ελέγχου επούλωση ή shRNA-Pou5f1 εισαχθεί LACSLCs Α549. (Β) Ποσοτική ανάλυση του τραύματος ικανότητα επιδιόρθωσης του LACSLCs Α549 που περιέχουν shRNA ελέγχου ή shRNA-Pou5f1 στις 24 ώρες μετά την σπορά. (C) Εκπρόσωπος εικόνες της εισβολής κυττάρων που περιέχουν shRNA ελέγχου ή shRNA-Pou5f1 ορατά με χρώση κρυσταλλικού ιώδους (20 ×). (Δ) Ποσοτική ανάλυση της διεισδυτικής ικανότητας των LACSLCs Α549 που περιέχει shRNA ελέγχου ή shRNA-Pou5f1. (E) Ποσοτική ανάλυση του όγκου ξενομοσχεύματος όγκου που σχηματίζεται από LACSLCs Α549 που περιέχει shRNA-Control ή shRNA-Pou5f1. (F) Ποσοτική ανάλυση του τραύματος ικανότητα επιδιόρθωσης του LACSLCs Α549 περιέχουν siRNA ελέγχου ή siRNA-ΜΜΡ-2 σε 24 ώρες μετά την σπορά. (G) Ποσοτική ανάλυση της διεισδυτικής ικανότητας των LACSLCs Α549 περιέχουν siRNA ελέγχου ή siRNA-ΜΜΡ-2. Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν τουλάχιστον εις τριπλούν και τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. Φοιτητής

t

δοκιμή διεξήχθη για να αξιολογήσει τη διαφορά.

Η

POU5F1 νοκ ντάουν καταστέλλει την έκφραση και τη δραστηριότητα των MMP-2

Από POU5F1 και MMP-2 είναι σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε LACSLCs, θα ήταν ενδιαφέρον να διερευνηθεί η σχέση μεταξύ αυτών των δύο μορίων που εμπλέκονται στην κυτταρική εισβολή και τη μετανάστευση δυνατότητες. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Α και Β, qRT-PCR και ανάλυση κηλίδας Western αποκάλυψε ότι τα επίπεδα του mRNA και της πρωτεΐνης ΜΜΡ-2 σημαντικά μειωμένη σε LACSLCs Α549 που περιέχουν shRNA-Pou5f1. ανάλυση αποκάλυψε ότι ChIP POU5F1 συνδεδεμένο με τον υποκινητή ΜΜΡ-2, γεγονός που υποδηλώνει ότι POU5F1 μπορεί να ευθύνονται για την μεταγραφική ενεργοποίηση του ΜΜΡ-2 (Εικόνα 4C). Επιπλέον, knockdown του POU5F1 μείωσε σημαντικά την δραστικότητα της λουσιφεράσης του ένα κατασκεύασμα ανταποκριτή που περιέχει ΜΜΡ-2 προαγωγό (Σχήμα 4D). Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι POU5F1 σε LACSLCs ρυθμίζει την έκφραση της ΜΜΡ-2 με απευθείας στόχευση MMP-2 μεταγραφή.

(Α) qRT-PCR ανάλυση της έκφρασης mRNA MMP-2 σε LACSLCs Α549 μετά POU5F1 νοκ ντάουν. (Β) POU5F1 knockdown μειώνει την πρωτεΐνη έκφραση της ΜΜΡ-2 σε LACSLCs Α549 ανιχνεύονται με ανάλυση κηλίδος Western. (C) Ανάλυση ChIP του παράγοντα μεταγραφής POU5F1 δέσμευση με ΜΜΡ-2 προαγωγό. (D) δοκιμασία ανταποκριτή λουσιφεράσης αποδεικνύει αδρανοποίηση του υποκινητή ΜΜΡ-2 μετά POU5F1 knockdown σε LACSLCs Α549. Τα κύτταρα επιμολύνθηκαν παροδικά με ένα κατασκεύασμα λουσιφεράσης χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο Lipofectamine 2000. Μετά από επώαση για 24 ώρες, τα κύτταρα συλλέχθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης παθητική, και η λουσιφεράση δραστηριότητες μετρήθηκαν με ένα φωτόμετρο χρησιμοποιώντας το σύστημα δοκιμασίας λουσιφεράσης. Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν τουλάχιστον εις τριπλούν και τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. Φοιτητής

t

δοκιμή διεξήχθη για να αξιολογήσει τη διαφορά.

Η

POU5F1 και MMP-2 συσχετίζονται με την επιβίωση των ασθενών ΛΑΚ

Ο κλινικοπαθολογοανατομικών συσχετίσεις με τις εκφράσεις τόσο POU5F1 και ΜΜΡ2 εξετάστηκαν σε ένα TMA περιέχει 55 δείγματα αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα για τη διαλεύκανση των ενώσεών τους με την επιβίωση των ασθενών ΛΑΚ (Πίνακας 1). Χρησιμοποιώντας τα κριτήρια που περιγράφονται προηγουμένως, υψηλή εκφράσεις POU5F1 (Σχήμα 5Α) και ΜΜΡ-2 (Σχήμα 5Β) παρατηρήθηκαν σε 26 (47,3%) και 39 (70,9%) των δειγμάτων αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα 55, αντίστοιχα. Βρήκαμε ότι η υψηλή έκφραση του POU5F1 συσχετίζεται με αύξουσα παθολογικές κόμβο (PN) στάδιο για αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα (

P

= 0,042).

(Α) και (Β) ανάλυση Kaplan-Meier των συσχετισμών των POU5F1 και MMP-2 με κακή συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωσης (DSS) σε 55 ασθενείς ΛΑΚ. (Γ) Η συνδυασμένη έκφραση των POU5F1 και ΜΜΡ-2 υποδεικνύει κακή DSS για τους ασθενείς LAC. Διπλή θετική έκφραση για POU5F1 και ΜΜΡ-2 δείχνει το χειρότερο πρόβλεψη για χαμηλά ποσοστά επιβίωσης του ασθενούς (

P

& lt? 0.001). Gp0: POU5F1 (χαμηλή έκφραση) και ΜΜΡ-2 (χαμηλή έκφραση)? GP1: POU5F1 (υψηλή έκφραση) ή ΜΜΡ-2 (υψηλή έκφραση)? GP2: POU5F1 (υψηλή έκφραση) και ΜΜΡ-2 (υψηλή έκφραση)

Η

Με μονοπαραγοντική ανάλυση, υψηλή εκφράσεις POU5F1 και MMP-2 συσχετίστηκαν με κακή συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωσης (Σ.Α.Τ.) των ασθενών (.

P

= 0.001,

P

= 0.073), αντίστοιχα. Επιπλέον, στρωματοποιημένη ασθενείς σε τρεις υποομάδες σύμφωνα με τις δύο προαναφερθείσες δυσμενείς παράγοντες,

δηλ.,

Gp0, GP1 και GP2. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5C, η διάμεση επιβίωση ήταν η μεγαλύτερη σε Gp0 έναντι του συντομότερου ένα στο GP2 (δηλαδή, 80,09 μήνες για τις Gp0, 66,8 μήνες για τις GP1, και 38,1 μήνες για τις GP2, αντίστοιχα, (

P

& lt?.. 0.001) (Σχήμα 5C) ανάλυση Kaplan-Meier έδειξε μια σημαντική επίδραση των προγνωστικών στάδιο της παραμέτρου του όγκου (

P

= 0,013) σε DSS

Συζήτηση

CSLCs έχουν αναφερθεί προηγουμένως σε διάφορους καρκίνους και αποδείχθηκε ότι παίζουν κρίσιμους ρόλους στην έναρξη του καρκίνου, την ανάπτυξη και την επανάληψη, καθώς και θεραπευτικό του καρκίνου αποτυχίες [21] – [24] μέχρι σήμερα, λίγα είναι γνωστά σχετικά με τις επεμβατικές και μεταναστευτικές φαινοτύπων και των ρυθμιστικών τους. μηχανισμός CSLCs. σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι ο παράγοντας μεταγραφής POU5F1 απαιτήθηκε για LACSLCs εισβολή και τη μετανάστευση, και θα μπορούσε να ενισχύσει την έκφραση της ΜΜΡ-2 με άμεση στόχευση ΜΜΡ-2 προαγωγό να ξεκινήσει μεταγραφή. Επιπλέον, παρεκκλίνοντα υψηλά εκφράσεις τόσο POU5F1 και ΜΜΡ-2 συσχετίζονται με την επιβίωση των ασθενών με LAC.

είναι γνωστό ότι ο παράγοντας μεταγραφής POU τομέα POU5F1 διαδραματίζει κεντρικό ρόλο στη ρύθμιση των χαρακτηριστικών πλειοδυναμίας στις δύο σωματικών βλαστικών κυττάρων και CSLCs [8] , [25]. Πρόσφατα, έχει αναφερθεί ότι POU5F1 επάγει CSLCs ιδιότητες και συμβάλλει στην ογκογένεση και τη μετάσταση σε LAC [9]. Ωστόσο, οι μηχανισμοί που διέπουν τις επεμβατικές και μεταναστευτικές δυνατότητες των CSLCs μένει να διευκρινιστεί. Εδώ, επιβεβαιώσαμε ότι LACSLCs προέρχονται από κύτταρα Α549 διαθέτουν άκρως διεισδυτική και μεταναστευτικών ικανότητες, και αυτά τα κύτταρα εξέφρασαν υψηλά επίπεδα POU5F1 και ΜΜΡ-2. ΜΜΡ-2 και άλλων μελών της οικογένειας μεταλλοπρωτεϊνασών μήτρας είναι γνωστό ότι μεσολαβούν εισβολή κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης και της μετάστασης, και θεωρούνται επίσης ως υποθετικές καρκινικών δεικτών για κλινικές εφαρμογές. [26] – [28]. MMP-2 υποβαθμίζει εξωκυττάριας μήτρας και απελευθερώνει αποθηκευμένο προμεταναστευτικές παράγοντες για να επιτρέπουν την κίνηση των κυττάρων εντός των ιστών [29]. Ωστόσο, οι αναστολείς ΜΜΡ έχουν αποδειχθεί μη ικανοποιητικά σε κλινικές δοκιμές λόγω είτε της έλλειψης επιλεκτικότητας προς MMPs ή εμφάνιση μεγάλων δυσμενών επιπτώσεων [16], [30]. Ο στόχος-ειδική γονιδιακή σίγηση του ΜΜΡ-2 μελέτη έκφρασης επιδεικνύει την αποτελεσματικότητα του siRNA-ΜΜΡ-2 στην αναστολή LACSLCs εισβολή και τη μετανάστευση, γεγονός που υποδηλώνει ότι η ΜΜΡ-2 μπορεί να δρα ως ισχυρός ανοσοενισχυτικό για γονιδιακή-στοχευμένη θεραπεία σε LAC.

τα υψηλά επίπεδα έκφρασης των MMPs έχουν παρατηρηθεί στα καρκινικά κύτταρα κύστης που υπερεκφράζουν POU5F1, υποδηλώνοντας ότι η υπερέκφραση του POU5F1 απορυθμίζει γονιδίων των ΜΜΡ [11]. Τα δεδομένα μας δείχνουν ότι και οι δύο POU5F1 και ΜΜΡ-2 μπορεί να συνεισφέρει στην έναρξη του όγκου και εισβολή-μετάσταση φαινότυπο του καρκίνου του πνεύμονα. Εμείς αποκάλυψε ότι η πρωτεϊνική έκφραση των MMP-2 ήταν σημαντικά μειωμένη σε LACSLCs μετά POU5F1 νοκ ντάουν από τη στρατηγική shRNA. Επιπλέον, chip και λουσιφεράση δοκιμασίες έδειξαν για πρώτη φορά ότι η εξάντληση των POU5F1 με shRNA προκαλείται μεταγραφική ρύθμιση προς τα κάτω του ενδογενούς γονιδίου ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-2 προαγωγού-ρεπόρτερ, γεγονός που υποδηλώνει ότι η ΜΜΡ-2 είναι ένας άμεσος μεταγραφικός στόχος του POU5F1 σε LACSLCs . Τα ευρήματά μας υποστηρίζουν την ιδέα ότι η αναγκαία και επαρκή δράση του POU5F1 σε απευθείας ενεργοποίηση έκφραση συγκεκριμένων γονιδίων στόχων για την προώθηση της LACSLCs εισβολή και τη μετανάστευση. Υπάρχει επίσης η δυνατότητα ότι μπορεί να καταστείλει POU5F1 ορισμένα γονίδια, ιδίως σε περιπτώσεις όπου μπορεί να δεσμεύονται συνεργατικά με άλλους μεταγραφικούς παράγοντες με δραστηριότητα καταστολής για την ενίσχυση της κυτταρικής εισβολής και της μετανάστευσης, και αυτό θα μπορούσε να εξηγήσει τη σχέση της με τα σύμπλοκα συν-καταστολέα.

Από η παθογένεση και βιολογική συμπεριφορά των διαφορετικών υποτύπων του καρκίνου του πνεύμονα είναι πολύ διαφορετικές, είναι επείγον να διερευνήσει τις προηγμένες διαγνωστικές μεθόδους και νέα δείκτες πρόγνωση για διαφορετικούς υποτύπους του καρκίνου του πνεύμονα για να βελτιωθεί η αποτελεσματικότητα της θεραπείας του καρκίνου. Τα ευρήματά μας που POU5F1 μπορούν να ρυθμίζουν θετικά την έκφραση της ΜΜΡ-2 για την προώθηση της εισβολής καρκινικών κυττάρων και τη μετανάστευση των LACSLCs έχουν σημαντικές κλινικές επιπτώσεις. Αν και δεν παρατηρήσαμε μια θετική σύνδεση έκφραση μεταξύ POU5F1 και ΜΜΡ-2, η υψηλότερη έκφραση του κάθε μορίου συσχετίστηκε σημαντικά με την κακή πρόγνωση, η οποία είναι συνεπής με προηγούμενες μελέτες που POU5F1 και ΜΜΡ-2 έχουν αναφερθεί να γίνουν ανεξάρτητοι παράγοντες κινδύνου για την κακή πρόγνωση στον καρκίνο του πνεύμονα [14], [31] – [33]. Το πιο σημαντικό, εμείς εδώ καθορίζεται για πρώτη φορά ότι συνδυασμένη υπερέκφραση αυτών των δύο μορίων παρουσίασε τη χειρότερη κακή πρόγνωση των ασθενών LAC, υποδηλώνοντας ότι η έκφραση του POU5F1 και ΜΜΡ-2 παρέχει ένα πλεονέκτημα για τα καρκινικά κύτταρα να διατηρήσουν εισβολή και την ιδιοκτησία της μετανάστευσης στην LAC . Έτσι, η συνδυασμένη παθολογική εξέταση των POU5F1 και MMP-2 από την IHC μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως ένα επιπλέον εργαλείο για τον εντοπισμό εκείνων LACs με υψηλή επίπεδα CSLCs να παρέχει ένα ισχυρό προγνωστικό βιοδείκτη στην κλινική διαχείριση των ασθενών ΛΑΚ.

Συμπερασματικά, η μελέτη μας δείχνει ότι POU5F1 και ΜΜΡ-2 συμβάλλουν στην εισβολή όγκου και η μετανάστευση φαινότυπο LACSLCs, και παρεκκλίνοντα υψηλή έκφραση POU5F1 μπορεί να ενισχύσει την έκφραση της ΜΜΡ-2 με άμεση στόχευση του υποκινητή της ΜΜΡ-2. Επιπλέον, αποκαλύπτουν ότι η συνδυασμένη υπερέκφραση POU5F1 και ΜΜΡ-2 συσχετίζεται με την κακή επιβίωση των ασθενών με LAC. Τα ευρήματά μας υποδεικνύουν ότι POU5F1 απαιτείται για τον έλεγχο των κυττάρων εισβολή και τη μετανάστευση μέσω άμεσης ρύθμισης των ΜΜΡ-2 σε καρκίνο του πνεύμονα, και υποστηρίζουν την ιδέα ότι POU5F1 και ΜΜΡ-2 θα είναι χρήσιμα ως πιθανοί βιοδείκτες της πρόγνωσης και νέους στόχους για τη θεραπεία των πνευμόνων Caner.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Μις Wen-Χουάν Fu και Μις Qing Liu (Ινστιτούτο Παθολογίας και Southwest Κέντρο Καρκίνου, Southwest Νοσοκομείο, Τρίτη Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο, Chongqing, Κίνα) για τεχνική βοήθεια τους.