Αφηρημένο

Dicer εκφράζεται μη φυσιολογικά σε διάφορους τύπους κακοηθειών. Διασπάται από Dicer, οι μικρές μη κωδικοποιητική microRNAs (miRNAs) που θεωρούνται εν δυνάμει εργαλεία για τη διάγνωση και την πρόγνωση του καρκίνου. Η παρούσα μελέτη διερευνήθηκε η έκφραση των miRNAs σκεφτεί να στοχεύσει Dicer. Η έκφραση της ανθρώπινης 1205 miRNAs και miRNA * s εξετάστηκαν σε τέσσερις ασθενείς με καρκίνο του προστάτη (PCA) με miRNA συστοιχία στην οποία το όριο ορίστηκε ως δύο φορές. Εβδομήντα τρία miRNAs και miRNA * s ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα κάτω ενώ το 10 ήταν πάνω ρυθμισμένα σε ιστούς προστάτη σε σύγκριση με συμφωνημένα ιστολογικά φυσιολογικό αδένες. Από αυτά, miR-29b-1, miR-200A, miR-370 και miR-31, που ήταν το πιο κάτω /επάνω-ρυθμίζονται και στενά ενδεχομένως στοχεύουν στην Dicer 3 ‘UTR, ερευνήθηκαν περαιτέρω. Οι ιστοί των πρωτογενών όγκων και συμφωνημένα κανονική αδένων του προστάτη από 185 ασθενείς με προστάτη συλλέχθηκαν για περαιτέρω έρευνα. επίπεδα Dicer mRNA είχαν αρνητική συσχέτιση με miR-29b-1 (ρs = -0,177, p = 0,017), miR-200A (ρs = -0,489, p & lt? 0.0001) και miR-31 (ρs = -0,314, p & lt? 0,0001) έκφρασης. Σε σύγκριση με το παρακείμενο φυσιολογικό αδένες, προστάτη των ιστών έδειξε σημαντικά χαμηλότερο miR-200a και τα επίπεδα έκφρασης του miR-31. Επιπλέον, το μεταστατικό προστάτη, τα επίπεδα έκφρασης του miR-200a, miR-370 και miR-31 ήταν δραματικά υψηλότερο από ό, τι σε εντοπισμένες ΣΕΣΣ. Επιπλέον, αυξημένα επίπεδα έκφρασης του miR-200α και miR-31 φάνηκε να συνδέεται με τον ευνουχισμό ανθεκτικά PCa. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν δυνατότητες που miR-200a και miR-31 στόχος Dicer και εμπλέκονται στην καρκινογένεση, τη μετανάστευση, και τη συμπεριφορά του ευνουχισμού ανθεκτικά προστάτη, αναφέροντας ότι θα μπορούσαν να είναι πιθανοί βιοδείκτες για τον έλεγχο του προστάτη εξέλιξη.

Παράθεση : Bian X, Shen Υ, Zhang G, Gu C, Cai Υ, Wang C, et al. (2015) Έκφραση του Dicer και Συναφών miRNAs του στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη. PLoS ONE 10 (3): e0120159. doi: 10.1371 /journal.pone.0120159

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Ajay Pratap Singh, Πανεπιστήμιο της Νότιας Αλαμπάμα Mitchell Ινστιτούτο Καρκίνου, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 10 Ιουλίου 2014? Αποδεκτές: τρίτης Φεβρουαρίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 13 Μαρτίου 2015

Copyright: © 2015 Bian et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση: Η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε εν μέρει με επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 81272837) και Advanced Foundation Τεχνολογίας της Σαγκάης (SHDC12013122). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν έχουν κανένα οικονομικό ή τα εμπορικά συμφέροντα που σχετίζονται με αυτή τη μελέτη

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι σήμερα η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται με όλο τον κόσμο, και PCA-ειδική θνησιμότητα αυξάνεται σε πολλές ασιατικές χώρες [1]. Προχωρημένο ή μεταστατικό προστάτη παραμένει ανίατη και ανδρογόνων προσφέρει μόνο προσβεβλημένους ασθενείς με διάμεση ελεύθερη προόδου χρόνο 2 ετών [2].

Πολλοί γενετικοί παράγοντες, όπως πολυμορφισμών και επιγενετικών αλλαγών θεωρείται ότι συμβάλλουν στην καρκινογένεση και την εξέλιξη της του αδενοκαρκινώματος του προστάτη. Επιπλέον, διάφορες μελέτες έχουν ερευνήσει το ρόλο των microRNAs (miRNA) στην έναρξη και την πρόοδο των ανθρώπινων καρκίνων, που οδηγεί στη διερεύνηση των νέων μηχανισμών για την ανάπτυξη του όγκου [3]. Στο μυθιστόρημα οδό σύνθεσης, οι πρόδρομοι καιρό miRNAs μεταγράφονται από την RNA πολυμεράση ΙΙ και στη συνέχεια μεταποιούνται σε ώριμη miRNAs από τη διαδοχική δράση των Dicer και Drosha ενδονουκλεάσες. Argo2, ένα μέλος της οικογένειας των πρωτεϊνών Argonaute, δεσμεύει το miRNA και σχηματίζει ένα σύμπλοκο σίγηση του RNA επαγόμενη μέσω συμπληρωματικής αντιστοίχιση με τη θέση στόχο για την 3′-αμετάφραστη περιοχή (UTR) του mRNA στόχου για να προκαλέσει είτε μεταγραφική καταστολή ή την αποικοδόμηση του mRNA [4, 5]. Απώλεια της βιοσύνθεσης miRNA, όπως φαίνεται στο Dicer knockouts, θεωρείται θανατηφόρος. Πρόσφατα, ένας Dicer ανεξάρτητη miRNA μονοπάτι βιογένεση έχει αποκαλυφθεί, επιδεικνύοντας μία νέα ρόλος του πριν πρωτεΐνης σε γονιδιακή σίγηση [6]. Επιπλέον, ορισμένες ώριμη miRNAs μπορεί αντιστρόφως ρυθμίζει την έκφραση Dicer συνδυάζοντας με τον Dicer 3’UTR [7].

Αρκετές μελέτες έχουν καταδείξει τις προγνωστικές αξίες εκφράζονται ανώμαλα Dicer σε ωοθηκών, του μαστού, του παχέος εντέρου, και καρκίνους της ουροδόχου κύστης [ ,,,0],8-11]. Dicer έχει προηγουμένως δειχθεί ότι είναι προς τα πάνω ρυθμισμένα σε PCa, αν και μια χαμηλότερη έκφραση του Dicer συνέβαλαν σε βραχύτερη επανάληψη φορά [12]. Τα αυξημένα επίπεδα Dicer σε προστάτη συσχετίζεται με το κλινικό στάδιο, την κατάσταση των λεμφαδένων, και το σκορ Gleason. up-ρύθμιση του μπορεί επίσης να εξηγήσει την παγκόσμια αύξηση της έκφρασης miRNAs που παρατηρείται σε προστάτη [12, 13]. Σε μια

PTEN

null μοντέλο ποντικού για την PCA, η πλήρης κατάλυση της δραστηριότητας Dicer σταμάτησε σημαντικά την ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου, καταδεικνύοντας ότι miRNAs έχουν κρίσιμο ρόλο στη διατήρηση των καρκινικών κυττάρων γυμναστικής [14].

Για να να κατανοήσουν καλύτερα τη σχέση μεταξύ των miRNAs και Dicer στην ανάπτυξη και την πρόοδο του προστάτη, ολοκληρωμένη ανάλυση της έκφρασης των miRNAs είναι απαραίτητα. Ως εκ τούτου, η παρούσα μελέτη διερεύνησε διαφορικά εκφρασμένων miRNAs που έχουν τη δυνατότητα να στραφούν προς την Dicer 3 ‘UTR, με στόχο την εξέταση της σχέσης μεταξύ miRNAs και Dicer στη συνεχή ανάπτυξη του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

ασθενής ομάδα

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας της Fudan Πανεπιστήμιο της Σαγκάης Κέντρο Καρκίνου και ένα εγκεκριμένο και υπογεγραμμένο συμβούλιο επιθεώρησης έντυπο συγκατάθεσης ελήφθη για κάθε συμμετέχοντα. Οι ιστοί των πρωτογενών όγκων και συμφωνημένα κανονική αδένων του προστάτη συλλέχθηκαν από 185 ασθενείς με προστάτη στο Πανεπιστήμιο Fudan της Σαγκάης Κέντρο Καρκίνου μεταξύ του 2007 και του 2011. Από αυτούς, 144 ασθενείς υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομή, ενώ 41 χορηγήθηκαν διουρηθρική εκτομή του προστάτη. έχουν κλινικά χαρακτηριστικά όπως η ηλικία, παθολογικές στάδιο, το σκορ Gleason, ανδρογόνο-εξαρτώμενη κατάσταση, και αρχικά επίπεδα (PSA) αντιγόνο ειδικού προστατικού έχουν αναφέρει και σε προηγούμενες εργασίες μας [15].

εκχύλιση RNA και miRNA μικροσυστοιχιών

Ολικό RNA εκχυλίστηκε από κατεψυγμένου ιστού φυλάσσεται στους -80 ° C χρησιμοποιώντας το συνολικό κιτ εκχύλισης RNA (Ambion Inc., Austin, ΤΧ) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η συγκέντρωση RNA και ακεραιότητα μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας το NanoDrop Φασματοφωτόμετρο (ND-1000, Nanodrop Technologies, Wilmington, DE) και ηλεκτροφόρηση, αντίστοιχα. Ίσες ποσότητες (300 ng) του RNA από κάθε ασθενή και έλεγχο συνενώθηκαν και εμφανίζονται ως δύο ομάδες (πρωτογενούς όγκου και της αντίστοιχης κανονικής αδένων του προστάτη). προφίλ υπογραφή miRNA δημιουργήθηκαν από τις ανωτέρω δύο ομάδες. συστοιχίες Agilent microRNA (v16.0, 8 × 60K, Agilent Technologies, Santa Clara, CA), που περιέχει 1.205 ανιχνευτές σύλληψης, χρησιμοποιήθηκαν για την ποσοτικοποίηση γονιδιώματος σε επίπεδο έκφρασης miRNAs σε τέσσερα ζεύγη του πρωτογενούς όγκου και συμφωνημένα κανονική αδένων του προστάτη. Το έργο μικροσυστοιχιών εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας μια σειρά Agilent microRNA που σαρώθηκε από ένα Agilent Scanner G2505B (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) και τα απέκτησε εικόνες συστοιχία αναλύθηκαν από Agilent λογισμικού Feature Extraction (έκδοση 10.7.3.1? Agilent Technologies, Santa Clara , CA). Αντί να χρησιμοποιεί μια παγκόσμια μέση μέθοδο, κανονικοποίηση και η επακόλουθη επεξεργασία των δεδομένων έγιναν με τη χρήση του v11.5.1 πακέτο GeneSpring GX λογισμικού (Agilent Technologies, Santa Clara, CA), στην οποία το όριο ορίστηκε ως δύο φορές. Υπολογιστική miRNA αλγορίθμων πρόβλεψης στόχο TargetScan (https://www.targetscan.org) και DIANA-μΤ (https://diana.imis.athena-innovation.gr/) χρησιμοποιήθηκαν για να διερευνηθεί η σειρά των miRNAs δυνητικά απευθύνεται σε Dicer.

η αντίστροφη μεταγραφή-PCR και πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR

το συνολικό RNA (2 μg) μεταγράφηκε αντίστροφα χρησιμοποιώντας το RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit (Thermo Scientific, Lafayette, CA) σύμφωνα με το τις οδηγίες του κατασκευαστή χωρίς αναστολέα RNase σε ένα τελικό όγκο 20 μΐ στους 25 ° C για 10 λεπτά, στη συνέχεια 37 ° C για 60 λεπτά, που ακολουθείται από 70 ° C για 5 λεπτά. Για την ανάλυση miRNA, το microRNA Reverse Transcription Kit (Haoqinbio Inc., Σαγκάη, Κίνα) με εξειδικευμένους εκκινητές χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή στους 25 ° C για 5 λεπτά, στη συνέχεια 42 ° C για 45 λεπτά, που ακολουθείται από 85 ° C για 5 λεπτά.

πραγματικού χρόνου ποσοτική (ιζ) PCR διεξήχθη χρησιμοποιώντας το σύστημα PRISM 7900 ΑΒΙ (Applied Biosystems, Foster City, CA). TaqMan διερευνητές και εκκινητές (Roche, Βασιλεία, Ελβετία) χρησιμοποιήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ολικό RNA (2 μα) μετατράπηκε σε cDNA, σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή, και PCR πραγματοποιήθηκε σε ένα συνολικό όγκο αντίδρασης 10 μΐ, συμπεριλαμβανομένων των 5 μΐ TaqMan Πρόμιγμα Εχ Taq (2 χ), ανιχνευτή 0,5 μλ και εκκινητή προμίγμα (20 × ), 1 μΐ πρότυπο cDNA, και 3.5 μΐ διπλά αποσταγμένου νερού. Οι συνθήκες αντίδρασης περιελάμβανε ένα αρχικό στάδιο αποδιάταξης στους 95 ° C για 10 λεπτά που ακολουθείται από 40 κύκλους των 95 ° C για 10 s και 60 ° C για 60 s. Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν. Για εξομάλυνση, β-ακτίνη και U6 χρησιμοποιήθηκαν για Dicer και miRNAs, αντίστοιχα. Η μέση της κάθε τριπλούν χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό των σχετικών συγκεντρώσεων (Dicer ΔCt = Ct σημαίνει Dicer-Ct σημαίνει β-ακτίνης? MiRNAsΔCt = Ct σημαίνει miRNAs-Ct σημαίνει U6). Έκφραση φορές αλλαγές υπολογίστηκαν με τη χρήση 2 μεθόδους

-ΔΔCt.

Η στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση του IBM SPSS έκδοση 20.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Κανονικοποιημένα επίπεδα έκφρασης του Dicer και miRNAs υποβλήθηκε σε μια κανονική δοκιμή διανομής. Οι διαφορές σε συνεχείς μεταβλητές αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας το

t-

δοκιμή. Κατάταξη συντελεστής συσχέτισης ρ του Spearman

s χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η σχέση μεταξύ κανονικοποιημένη επίπεδα Dicer και miRNAs ή το σκορ Gleason. Όλες οι δοκιμασίες ήταν δύο όψεων χρησιμοποιώντας ένα επίπεδο σημαντικότητας 0,05.

Αποτελέσματα

Mirna σειρά και σε πραγματικό χρόνο επικύρωσης qPCR

Εντοπίσαμε 73 miRNAs και miRNA * s που ήταν σημαντικά ρυθμισμένα προς τα κάτω και 10 που είχαν πάνω ρυθμισμένα σε ασθενείς PCa, τα οποία έχουν τη δυνατότητα να χρησιμοποιηθούν για τη διάκριση αδενοκαρκίνωμα του προστάτη από συμφωνημένα κανονικούς αδένες. MiR-29b-1, miR-200A, miR-370 και miR-31were επιλέγονται για περαιτέρω επικύρωση των αποτελεσμάτων των μικροσυστοιχιών χρησιμοποιώντας σε πραγματικό χρόνο qPCR, επειδή δεν ήταν μόνο η πιο κάτω /επάνω-ρυθμίζονται, αλλά επίσης στενά δυνητικά στοχεύουν στην Dicer 3 ‘UTR. Η ανάλυση των δεδομένων έδειξε ότι το miR-29b-1, miR-200A, miR-370 και miR-31 ήταν κάτω-ρυθμίζονται σε δείγματα καρκίνου του προστάτη σε σύγκριση με συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς. Οι σε πραγματικό χρόνο τα αποτελέσματα qPCR ήταν συνεπή με εκείνα των μικροσυστοιχιών (Εικ. 1).

Για τη σύγκριση μεταξύ των στοιχείων πίνακα miRNA και σε πραγματικό χρόνο αποτελέσματα qPCR, miR-29b-1, miR-200A, ΜΙΚ 370 και miR-31determined να εκφράζονται διαφορικά σε αδενοκαρκίνωμα του προστάτη σε σύγκριση με συμφωνημένα ιστολογικά φυσιολογικό αδένες σε τέσσερις ασθενείς με συστοιχία miRNA επικυρώθηκαν με χρήση Real-Time qPCR. Τα μήκη των στηλών στο γράφημα αντιπροσωπεύουν τις log2 μετασχηματισμένη διάμεσος μεταβολές φορές (όγκος /φυσιολογικού) για έκφραση στους τέσσερις ασθενείς για κάθε μία από τις τέσσερις miRNAs επικυρωθεί.

Η

επίπεδα Dicer mRNA σε PCa

Dicer επίπεδα mRNA διέφερε σημαντικά μεταξύ των πρωτογενών ιστών του προστάτη και συμφωνημένα φυσιολογικών ιστών από 185 ασθενείς του προστάτη (Σχ. 2Α). Επιπλέον, σε σύγκριση με ανδρογόνο-εξαρτώμενη PCa, η έκφραση του Dicer ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε ευνουχισμό ανθεκτικά PCa (Εικ. 2Β), και στο μεταστατικό PCa σε σύγκριση με την εντοπισμένη ομάδα (Σχ. 2C). Ωστόσο, δεν υπάρχουν σημαντικές συσχετίσεις παρατηρήθηκαν μεταξύ της έκφρασης Dicer και το συνολικό σκορ Gleason (ρ

s = -0.082, p = 0.267) ή κύρια σκορ Gleason (ρ

s = -0,054, p = 0,468).

Α, Έκφραση Dicer σε αδενοκαρκίνωμα του προστάτη και συμφωνημένα κανονικούς αδένες του, μετά από κανονικοποίηση σε β-ακτίνη? Β, έκφραση του Dicer στην ανδρογόνων που εξαρτώνται και ανδρογόνα ανεξάρτητο προστάτη, διπλώστε τις αλλαγές των επιπέδων Dicer mRNA σε αδενοκαρκίνωμα του προστάτη σε σχέση με συμφωνημένα κανονική αδένες log2 μετατραπεί σε άξονα Υ? C, έκφραση του Dicer στην τοπική και μεταστατικό προστάτη, διπλώστε τις αλλαγές των επιπέδων Dicer mRNA σε αδενοκαρκίνωμα του προστάτη σε σχέση με συμφωνημένα κανονική αδένες log2 κατετάγη στον άξονα Υ.

Η

Διαφοροποιημένες έκφραση των miRNAs στην ομάδα επικύρωσης

τα επίπεδα έκφρασης του miR-200α και miR-31 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα κάτω σε ιστούς προστάτη σε σύγκριση με συμφωνημένα κανονικούς αδένες (Εικ. 3Β και 3D), ενώ δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στα επίπεδα έκφρασης του miR-29b -1 ή miR-370 (Εικ. 3Α και 3C).

Η έκφραση του miR-29b-1 (Α), miR-200a (Β), miR-370 (C) και miR-31 (D ) στο αδενοκαρκίνωμα του προστάτη και συμφωνημένα κανονικούς αδένες, μετά από κανονικοποίηση για U6.

η

μετά την log2-μετασχηματισμού των miRNA φορές αλλαγές στο αδενοκαρκίνωμα του προστάτη σε σχέση με συμφωνημένα κανονικούς αδένες, τα σχετικά επίπεδα έκφρασης του miR-200a, miR -370, και miR-31 ήταν υψηλότερη σε μεταστατικό προστάτη σε σύγκριση με εντοπισμένο προστάτη (Εικ. 4).

Η έκφραση του miR-29b-1 (Α), miR-200a (Β), miR-370 ( C) και miR-31 (D) στην τοπική και μεταστατικό προστάτη, διπλώστε τις αλλαγές των επιπέδων miRNAs στο αδενοκαρκίνωμα του προστάτη σε σχέση με συμφωνημένα κανονική αδένες log2 μετατραπεί σε άξονα Υ.

Η

οι ομάδες είχαν επίσης χωρίζεται σε δύο υποομάδες σύμφωνα με ανδρογόνα εξάρτησή τους, με 166 ασθενείς που εξαρτώνται από ανδρογόνα και 19 ευνουχισμός ανθεκτικά. Μετά log2 μετασχηματισμό των φορές αλλαγές στο αδενοκαρκίνωμα του προστάτη έναντι συμφωνημένα κανονικούς αδένες, τα σχετικά επίπεδα έκφρασης του miR-200α και miR-31 ήταν σημαντικά χαμηλότερη στην εξαρτώμενη από ανδρογόνο υποομάδα σε σύγκριση με τον ευνουχισμό ανθεκτικό μία (Εικ. 5).

Η έκφραση του miR-29b-1 (Α), miR-200a (Β), miR-370 (C) και miR-31 (D) σε ανδρογόνων που εξαρτώνται και ο ευνουχισμός ανθεκτικά προστάτη, διπλώστε τις αλλαγές των επιπέδων miRNAs σε προστάτη αδενοκαρκίνωμα έναντι συμφωνημένα κανονική αδένες log2 μετατραπεί σε άξονα Υ.

Η

Dicer mRNA σε σχέση με την έκφραση των miRNAs

μελέτες συσχέτισης μεταξύ Dicer και miR-29b-1, miR-200A, miR -370, και miR-31 έκφρασης σε ΠΑΠ έδειξε ότι η έκφραση του mRNA Dicer ήταν μέτρια και αρνητική συσχέτιση με εκείνη του miR-200a και miR-31 (ρ

s = -0,489, p & lt? 0,0001? ρ

s = -0,314, p & lt? 0,0001, αντίστοιχα). Εκτός αυτού, το επίπεδο του Dicer mRNA βρέθηκε ήπια και αρνητική συσχέτιση με miR-29b-1 (ρs = -0,177, p = 0,017) έκφρασης. Ωστόσο, δεν υπήρξε καμία στατιστική συσχέτιση με την έκφραση του Dicer να miR-31 επίπεδα έκφρασης (ρ

s = -0,057, p = 0,458) (Πίνακας 1).

Η

Συζήτηση

προστάτη είναι μία από τις κύριες αιτίες θανάτου από καρκίνο σχετίζονται και έχουν ποικίλους μηχανισμούς του προστάτη καρκινογένεση και της εξέλιξης έχουν διερευνηθεί. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι miRNAs παίζουν σημαντικό ρόλο στο πρόγραμμα, με την προώθηση της υποβάθμισης του γονιδίου-στόχου. Αν και πολλοί miRNAs γνωστό ότι απορύθμιση σε καρκίνους, δεν είναι σαφές ποια έχουν ένα παθογόνο ρόλο στην ανάπτυξή του. Αλλαγές στην miRNAs έκφραση σε κυτταρικές σειρές καρκίνου ρυθμίζουν άμεσα τις συμπεριφορές τους, όπως πολλαπλασιασμό και την απόπτωση [3], καθώς και επηρεάζοντας την καταστολή του όγκου και τη μετάσταση. Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε τα επίπεδα έκφρασης του miR-29b-1, miR-200A, miR-370 και miR-31 σε συμφωνημένα ιστούς προστάτη από 185 ασθενείς.

Προηγούμενες μελέτες έχουν ανιχνεύσει αυξημένα επίπεδα Dicer στην πρωτοβάθμια ΣΕΣΣ. Βρήκαμε ότι τα επίπεδα του mRNA Dicer ήταν σημαντικά μειωμένη σε μεταστατικούς και ευνουχισμός ανθεκτικά PCa, οι οποίες σχετίζονται με την κακή πρόγνωση. Σίγαση Dicer θα μπορούσε να συμβάλει στην ενεργοποίηση του

p

-Akt και αυξημένη έκφραση των μορίων κύκλου που σχετίζονται κυττάρων και πρωτεϊνών που εμπλέκονται στην εισβολής καρκινικών κυττάρων. Αντιστρόφως, το knock-down του Dicer αποδείχθηκε επίσης ότι αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την προώθηση της απόπτωσης σε κυτταρικές γραμμές λευχαιμίας [16]. Αυτές οι διαφορές μπορούν να εξηγηθούν από την παρατηρούμενη ετερογένεια και γενετική ποικιλότητα σε διαφορετικούς ιστούς του προστάτη [17].

μελέτης miRNA συσχέτιση μας έδειξε ότι η σχετική έκφραση του miR-200a και miR-31 ήταν μέτρια και αρνητικά που συνδέονται με Dicer τα επίπεδα mRNA σε ΣΕΣΣ. Το αποτέλεσμα αυτό υποδεικνύει μια πιθανότητα άμεση συσχέτιση μεταξύ των miRNAs και Dicer επειδή τα miRNAs αναστέλλουν τη σύνθεση των πρωτεϊνών για τη διατήρηση της σταθερότητας του mRNA στόχου τους [4]. Συγκρίνοντας τα επίπεδα έκφρασης του miR-200α και miR-31 μεταξύ πρωτογενούς όγκου και των παρακείμενων κανονικούς αδένες στην παρούσα μελέτη, παρατηρήσαμε μια σημαντική μείωση της έκφρασης σε πρωτογενείς όγκους, υποδηλώνοντας ότι miR-200Α και miR-31 μπορεί να εμπλέκεται στην καρκινογένεση προστάτη. Προηγούμενες μελέτες απέδειξαν ότι η οικογένεια miR-200 είναι ένα κρίσιμο ρυθμιστής επιθηλιακού να μεσεγχυματικών μετάβαση, και ότι είναι ρυθμισμένα προς τα κάτω και εμφανίζει ιδιότητες καταστολής όγκου σε νεφρική, του προστάτη, του μαστού, της ουροδόχου κύστης, του παγκρέατος, και γαστρικών καρκίνων [3, 18] . Επιπλέον, η οικογένεια miR-200 έχει δειχθεί ότι ρυθμίζουν την οξειδωτική αντίδραση στο στρες, επηρεάζοντας έτσι την ογκογένεση και τηςχημειοευαισθησίας [19]. Βρήκαμε ότι miR-31 επίπεδο έκφρασης ήταν μειωμένη σε ιστούς όγκου σε σύγκριση με κανονικούς αδένες, υποδεικνύοντας ότι miR-31 μπορεί να λειτουργεί ως ένα γονίδιο καταστολής όγκου. Ωστόσο, ο ρόλος του miR-31 παραμένει αμφιλεγόμενη [20-22]. Chan et al. προηγουμένως διαπίστωσε ότι μόνο μία από τις τρεις miR-31 ισομορφές, τα οποία διέφεραν μόνο ελαφρώς σε 5′- ή /και 3′-άκρο αλληλουχίες τους, άμεσα καταστέλλεται έκφραση Dicer τόσο σε mRNA και τα επίπεδα της μεταφράσεως σε MCF-7 κύτταρα καρκίνου του μαστού και του πνεύμονα Α549 τα καρκινικά κύτταρα. Αυτό είχε ως αποτέλεσμα αυξημένη κυτταρική ευαισθησία σε σισπλατίνη, ένα γνωστό χαρακτηριστικό Dicer knockdown [23].

Κατά τη διάρκεια της εξέλιξης της νόσου, miRNAs πιστεύεται ότι είναι προγνωστικοί παράγοντες για μετάσταση. Δείξαμε ότι το miR-200a, miR-31, και τα επίπεδα έκφρασης του miR-370 αυξήθηκαν σε μεταστατικό προστάτη και όχι σε εντοπισμένες μορφές καρκίνου.

In vitro

, η παροδική επιμόλυνση του miR-200α ήταν προηγουμένως αποδειχθεί ότι μειώνει σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του προστάτη γραμμή, αλλά δεν έχουν καμία επίδραση στην ικανότητα εισβολής [24]. Σε ωοθηκών καρκινικά βλαστικά κύτταρα, η απώλεια της έκφρασης miR-200a ήταν πιστεύεται ότι παίζουν κρίσιμο ρόλο στην E-cadherin καταστολή, ενισχύοντας έτσι τη μετανάστευση και την επεμβατική ικανότητες του /1

+ κύτταρα CD133 [25]. Επιπλέον, miR-200A κάτω ρύθμιση σε μηνιγγιώματα προωθείται η ανάπτυξη του όγκου με μείωση της έκφρασης Ε-καδερίνης και ενεργοποίηση του μονοπατιού Wnt /β-κατενίνης σηματοδοτήσεως [26].

Ομοίως, ένας ρόλος για miR-370 στον πολλαπλασιασμό των ανθρώπινων κυττάρων προστάτη έχει προηγουμένως αποδειχθεί. Η έκτοπη έκφραση του miR-370 προωθείται κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την αύξηση της ανάπτυξης και της αποικίας ικανότητα σχηματισμού ανεξάρτητη από προσκόλληση των DU145 και LNCaP κύτταρα προστάτη [27]. Υψηλότερη έκφραση του miR-370 στο γαστρικό ιστούς του καρκίνου συσχετίστηκε επίσης με πιο προηγμένες κομβικό μετάσταση και ένα υψηλότερο κλινικό στάδιο σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, ενώ οι ασθενείς με πιο προχωρημένο ή επεμβατικές όγκους αποδειχθεί miR-370 επίπεδα έκφρασης υψηλότερα στον ορό.

In vitro

δοκιμασίες έδειξαν ότι εξωγενής έκφραση miR-370 αύξησε την ογκογόνο δυναμικό των κυττάρων γαστρικού καρκινώματος, στοχευμένη προβλεπόμενες θέσεις σε αυξητικού παράγοντα μεταμόρφωσης-β γονίδιο 3’UTR II υποδοχέα και αυξημένη κοιλιακή διαδίδονται μετάσταση σε γυμνά ποντίκια [28]. Στη μελέτη μας, miR-31 ανυψώθηκε σε μεταστατικό ΣΕΣΣ. Αναστολή της miR-31 θα μπορούσε να προωθήσει

in vivo

μετάστασης μέσω της άμεσης ρύθμισης μια κοόρτη prometastatic γονιδίων σε καρκίνους μαστού και ωοθήκης [29, 30]. Αν και miR-31 υπερέκφραση σε έναν αριθμό κυτταρικών σειρών καρκίνου των ωοθηκών με μια δυσλειτουργική ΤΡ53 μονοπάτι ανέστειλε πολλαπλασιασμό και την απόπτωση που επάγεται [30], η υπερέκφραση του στην κυτταρική σειρά καρκίνου του παχέος εντέρου ΗΤ29, που φέρει μια μετάλλαξη ΤΡ53, είχε ως αποτέλεσμα μια ισχυρή αντι-αποπτωτικό αποτέλεσμα . Το αντι-αποπτωτικό αποτέλεσμα του miR-31 υπερ-έκφραση ήταν χαμηλότερη ή απούσα σε κύτταρα με μια λειτουργική οδό ΤΡ53 [31]. Στο σύνολό τους, τόσο η έκφραση και τις λειτουργίες του miR-31 φαίνεται να είναι ειδική για τον καρκίνο και, ενδεχομένως, των κυττάρων πλαίσιο-εξαρτώμενη.

αντίσταση ευνουχισμός είναι ένα συγκεκριμένο στάδιο της προηγμένης προστάτη συνδέεται με την αποτυχία της ορμονικής θεραπείας και μια φτωχή πρόγνωση. Στην ομάδα μας, τα επίπεδα έκφρασης του miR-200α και miR-31 ήταν υψηλότερα σε πρωτογενείς όγκους του ευνουχισμού ανθεκτικών προστάτη σε σύγκριση με ανδρογόνο-εξαρτώμενη PCa, και υψηλότερη σε πρωτογενείς όγκους σε σύγκριση με συζευγμένες κανονικούς αδένες. Αυτό υποδηλώνει μια πιθανότητα ότι η επάνω ρυθμισμένη έκφραση του miR-200α και miR-31 κατά την διάρκεια καρκινογένεση παίζει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη του προστάτη με την προώθηση της κύτταρο στο στάδιο ευνουχισμό. Αρκετές μελέτες έχουν ήδη αποδείξει ότι ανδρογόνων σηματοδότηση υποδοχέας παίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην παθογένεση PCa. Πρόσφατα, miRNAs βρέθηκαν να είναι μεσολαβητές της ανδρογόνου δραστηριότητας στον προστάτη και των μυών, υποδεικνύοντας ότι μπορεί να είναι σημαντική για την ανάπτυξη του προστάτη [32]. Lin et al. Βρέθηκε ότι η έκφραση miR-31 μειώθηκε ως αποτέλεσμα της υπερμεθυλίωσης υποκινητή στην πρωτογενή και μεταστατικό PCa, και ότι ήταν αντιστρόφως ανάλογη με την επιθετικότητα της νόσου. Αποδείχθηκε να στοχεύουν άμεσα τον υποδοχέα ανδρογόνου σε μία θέση μέσα στην περιοχή κωδικοποίησης συνήθως μεταλλαχθεί σε PCa [33]. Έτσι, η αυξητική ρύθμιση του miR-31 μπορεί να είναι ένας λόγος για την αποτυχία της θεραπείας στέρησης ανδρογόνων. Επιπλέον, up-ρυθμίζεται miR-31 θα μπορούσε να καταστείλει ρυθμιστές του κυτταρικού κύκλου και την πρόληψη των παραγόντων κυτταροτοξικότητα επαγωγή απόπτωσης σε κύτταρα προστάτη, καθιστώντας τον ευνουχισμό-ανθεκτικοί στη θεραπεία του προστάτη δύσκολη [33, 34].

Ο ρόλος των αυξημένων επιπέδων Dicer στο αλλαγή από το δημοτικό στο μεταστατικό και ευνουχισμό ανθεκτικά όγκους του προστάτη, καθώς και σε σχέση με τα miRNAs, πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω σε μια μεγαλύτερη ομάδα ασθενών. Η μελέτη μας δεν παρακολουθεί συνεχώς τις αλλαγές αυτές σε κάθε ομάδα, και το μεταστατικό και τα δείγματα ευνουχισμό ανθεκτικά ήταν ανεξάρτητη από τις εντοπισμένες πρωτογενείς ιστούς του καρκίνου, έτσι ώστε τα ευρήματά μας είναι περιορισμένες. Παρ ‘όλα αυτά, πιστεύουμε ότι αυτή η πιλοτική μελέτη ήταν σημαντικό να αποκτήσουν γνώσεις σχετικά με το πώς miRNAs μπορεί να ρυθμίζεται με μεταστατικό και ευνουχισμό ανθεκτικά ασθενείς του προστάτη. Τα miRNAs αναδύεται ως ένα νέο σύνολο των μορίων που μπορεί τελικά να οδηγήσει στο σχηματισμό του καρκίνου, όταν απελευθερωθεί. Επίσης, είναι πιθανό να συνεργαστεί με άλλες κλασικές ογκογονίδια ή /και προς τα κάτω-ρυθμίζουν ογκοκατασταλτικά γονίδια να επηρεάζουν τη συμπεριφορά του όγκου. Αυτές οι μη-κωδικοποίησης τάξεις του RNA μπορεί να χρησιμεύσει ως χρήσιμο βιοδείκτες και μπορεί να βελτιώσει σημαντικά την κλινική διαχείριση από μας επιτρέπει να επιλέξετε περισσότερες κατάλληλες θεραπευτικές επιλογές για τους ασθενείς [35]. Παρά το γεγονός ότι έχουν σημαντικές εξελίξεις στη μεταγραφική ογκολογία έχουν γίνει τα τελευταία χρόνια, θα πρέπει να αντιμετωπιστούν στη διαχείριση ασθενών πολλά θέματα. Επιπλέον, η μείωση της θνησιμότητας στην «εποχή του PSA είναι αμφιλεγόμενο λόγω των προγραμμάτων προσυμπτωματικού ελέγχου PSA που βασίζεται οδηγήσει επίσης σε υπερδιάγνωσης και υπερθεραπεία. Έτσι, τα νέα και ευέλικτο μόρια είναι σε θέση να κατευθύνει τη διαδικασία λήψης αποφάσεων σε όλη την πορεία της νόσου απαιτούνται επειγόντως.

Εν κατακλείδι, τα ευρήματά μας έδειξαν ότι Dicer θα μπορούσε να είναι ένας πιθανός στόχος για miR-200a και ΜΙΚ 31. Επιπλέον, αυτά τα miRNAs θα μπορούσε να περιλαμβάνει στην καρκινογένεση, τη μετανάστευση, και η συμπεριφορά του ευνουχισμού ανθεκτικά PCa, και θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν ως πιθανοί βιοδείκτες στην παρακολούθηση της εξέλιξης της νόσου του προστάτη.