Αφηρημένο

Ιστορικό

Μαρκαδόροι που μπορεί να διακρίνει μεταξύ ανώδυνων και επιθετικών όγκων του προστάτη απαιτείται. Μελετήσαμε γονίδιο μεθυλίωσης σε μη νεοπλασματικό ιστό δίπλα του όγκου του προστάτη (NTAT) σε συνδυασμό με τη θνησιμότητα του καρκίνου του προστάτη.

Μέθοδοι

Από δύο ομάδες των διαδοχικών ασθενών με καρκίνο του προστάτη διαγιγνώσκονται σε μία παθολογία πτέρυγα στο Τορίνο, Ιταλία, επιλέξαμε 157 ασθενείς με διαθέσιμα NTAT και τους ακολούθησαν για περισσότερα από 14 χρόνια. Έχουμε λάβει DNA από NTAT σε ιστούς όγκων του προστάτη εγκλεισμένο σε παραφίνη και μεταχειρισμένων ανιχνευτή PCR πραγματικού χρόνου για την ανάλυση μεθυλίωσης της S-τρανσφεράσης γλουταθειόνης (GSTP1) και υποκινητές γονιδίων αδενωματώδη πολυποδίαση coli (APC).

Αποτελέσματα

Ο επιπολασμός της APC και GSTP1 μεθυλίωσης στο NTAT ήταν μεταξύ 40 και 45%. Συνδέθηκε με μεθυλίωση σε ιστό όγκου του προστάτη για τα ίδια δύο γονίδια, καθώς και με μια υψηλή βαθμολογία Gleason. Η αναλογία κινδύνου (HR) της θνησιμότητας από καρκίνο του προστάτη ήταν 2,38 (95% διάστημα εμπιστοσύνης: 1,23 – 4,61) για APC μεθυλίωση, και 2,92 (1,49 – 5,74) για GSTP1 μεθυλίωση σε NTAT. Θα αλλάξει σε 1,91 (1,03 – 3,56) και 1,60 (0,80 – 3,19) μετά την προσαρμογή για το σκορ Gleason και μεθυλίωση στον ιστό του όγκου του προστάτη. Σύγκριση των 2 έναντι 0 μεθυλιώνονται γονίδια σε NTAT αποκάλυψε HR 4,30 (2,00 – 9,22), το οποίο μειώθηκε σε 2,40 (01.15 – 05.01) μετά τη ρύθμιση. Τα αποτελέσματα ήταν ισχυρότερη στα 5 πρώτα χρόνια της παρακολούθησης (adjusted HR: 3,29, 95% CI: 1,27 – 8,52).

Συμπεράσματα

Οι αλλαγές στην γονιδιακή μεθυλίωση είναι ένα πρώιμο συμβάν στον προστάτη καρκινογένεση και μπορεί να παίζει ένα ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου. Γονίδιο μεθυλίωσης σε NTAT είναι ένα δυνατό προγνωστικό δείκτη για να αξιολογηθεί σε κλινικές μελέτες

Παράθεση:. Richiardi L, Fiano V, Grasso C, D Zugna, Delsedime L, Gillio-Tos A, et al. (2013) Μεθυλίωση της APC και GSTP1 σε μη νεοπλασματικά ιστό δίπλα στο προστάτη του όγκου και της θνησιμότητας από καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 8 (7): e68162. doi: 10.1371 /journal.pone.0068162

Επιμέλεια: Jindan Yu, του Πανεπιστημίου Northwestern, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 26 Νοεμ 2012? Αποδεκτές: 29η Μάη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 9 Ιουλίου 2013

Copyright: © 2013 Richiardi et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη υποστηρίχθηκε εν μέρει από την Ένωση ιταλική Έρευνας για τον Καρκίνο (AIRC), και την περιφέρεια του Πιεμόντε. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, στη συλλογή, ανάλυση και ερμηνεία των δεδομένων, στο γράψιμο του χειρογράφου, και στην απόφαση να υποβάλει το χειρόγραφο προς δημοσίευση

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δήλωσε ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη είναι η πιο κοινή όγκων στους άνδρες σε πολλούς πληθυσμούς, με αργό συχνότητα 120-130 ανά 10

5 στην Ευρώπη και οι Ηνωμένες Πολιτείες [1]. Περισσότερο από το 65% των καρκίνων του προστάτη διαγιγνώσκονται μετά από 70 ετών, και οι περισσότεροι από αυτούς τους ασθενείς θα πεθάνουν ανταγωνιστικών εκδηλώσεων. Η συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του προστάτη έχει αυξηθεί δραματικά μετά την εισαγωγή του αντιγόνου (PSA) ειδικού προστατικού στο τέλος της δεκαετίας του 1980 [1]. Ευκαιριακές PSA προσυμπτωματικό έλεγχο για τον καρκίνο του προστάτη είναι ευρέως διαδεδομένη, αν και η ικανότητά του να μειώσει τη θνησιμότητα εξακολουθεί να συζητείται. Τα συμπεράσματα της πρόσφατης αναθεώρησης από την Task Force των ΗΠΑ Προληπτικής Υπηρεσιών δεν υποστηρίζει PSA προσυμπτωματικό έλεγχο και τα οφέλη που κρίθηκαν ότι δεν υπερτερούν των επιβλαβών συνεπειών [2].

Ο υψηλός επιπολασμός της νωχελικός καρκίνου του προστάτη και τη χρήση ευκαιριακών PSA προσυμπτωματικού ελέγχου για τον καρκίνο του προστάτη μπορεί να οδηγήσει σε υπερβολική θεραπεία. Δεν υπάρχει προς το παρόν καμία συναίνεση σχετικά με το αν ριζική προστατεκτομή ή την ενεργή παρακολούθηση θα πρέπει να προσφέρεται ως η θεραπεία εκλογής, ιδιαίτερα όταν πρόκειται για ασθενείς με καρκίνο του προστάτη χαμηλού κινδύνου [3], [4]. Επομένως, είναι αναγκαίο για την καλύτερη κατανόηση των καθοριστικών παραγόντων της εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη, και να προσδιορίσει προγνωστικοί δείκτες για επιθετικό καρκίνο του προστάτη που μπορεί να ανιχνευθεί κατά τη στιγμή της πρώτης διαγνωστική βιοψία. Ένας αριθμός ομάδων, συμπεριλαμβανομένων δική μας, έχουν διερευνήσει επιγενετικές μεταβολές στον ιστό του όγκου του προστάτη σε μια προσπάθεια να εντοπίσει πιθανές προγνωστικοί δείκτες [5] – [8]. Συγκεκριμένα, αρκετές μελέτες έχουν αξιολογήσει την παρουσία του CpG νησίδα (συστάδες των δινουκλεοτιδίων μιας κυτοσίνης και γουανοσίνη) μεθυλίωση στον προαγωγέα κάποιων συγκεκριμένων γονιδίων σε συνδυασμό με βιοχημική επανεμφάνιση ή θνησιμότητας από καρκίνο του προστάτη. Σε προηγούμενη μελέτη μας, διαπιστώσαμε ότι η APC (αδενωματώδη πολυποδίαση coli) μεθυλίωση σε ιστό όγκου του προστάτη συσχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο κατά 50% της θνησιμότητας από καρκίνο του προστάτη. Μερικές μελέτες υποστηρίζουν αυτό το εύρημα [9] – [12], και άλλοι βρήκαν ένα προγνωστικό ρόλο για μεθυλίωση σε άλλα γονίδια [13], [14]. Η μεθυλίωση του GSTP1 (S-τρανσφεράσης γλουταθειόνης) υποκινητής είναι ο πιο εκτεταμένα ερευνηθεί επιγενετικές αλλαγή στον καρκίνο του προστάτη. Μπορεί να βρεθεί σε περισσότερο από το 80% των καρκίνων του προστάτη, με χαμηλότερο επιπολασμό σε καλοήθη ιστό [15]? αυτό συνδέεται στενά με Gleason σκοράρει προγνωστική ρόλο ανεξάρτητο της βαθμολογίας Gleason είναι ασαφές [5].

Στην εργασία αυτή διερευνάται αν οι αλλαγές μεθυλίωσης στο μη νεοπλασματικό ιστό δίπλα του όγκου του προστάτη (NTAT) που σχετίζεται με πρόγνωση καρκίνου του προστάτη. όγκων του προστάτη είναι συχνά πολυεστιακή, και μια σειρά από μελέτες που παρατηρήθηκαν πεδίου cancerisation (δηλαδή αλλοιώσεις σε φυσιολογικό ιστό γειτονικά προς τον όγκο) στον καρκίνο του προστάτη. Μελέτες που συγκρίνουν NTAT με καλοήθη ιστό προστάτη και /ή ιστό καρκίνου που έχουν αναγνωριστεί αλλαγές στην γονιδιακή έκφραση [16] – [20], το περιεχόμενο των τελομερών του DNA [21], το μιτοχονδριακό DNA [22], και την επικράτηση της μεθυλίωσης σε ορισμένες γονίδια, συμπεριλαμβανομένων των APC [23 ], GSTP1 [24], [25] και RARβ2 [23], [24]. Οι μηχανισμοί που διέπουν αυτές τις αλλαγές δεν έχουν ακόμη κατανοηθεί πλήρως (είτε επεκταθεί επιπτώσεις των καρκινογόνων ουσιών, πλευρική επέκταση του όγκου, ή επιρροή του όγκου στον παρακείμενο ιστό), αλλά το πεδίο cancerisation πιθανόν έχει κλινική σημασία. Ωστόσο, μερικές από τις προηγούμενες μελέτες για το θέμα αυτό περιλαμβάνει παρακολούθηση για τη θνησιμότητα, παρεμποδίζοντας έτσι την αξιολόγηση της προγνωστικής σημασίας των αλλαγών στην NTAT. Αυτή η μελέτη επικεντρώνεται στη μεθυλίωση του GSTP1 και APC σε μη νεοπλαστικό ιστό. Στοχεύει στην αξιολόγηση του κατά πόσον αυτές οι μοριακές αλλαγές είναι πιθανοί υποψήφιοι ως προγνωστικοί δείκτες κατά την αξιολόγηση της σύνδεσής τους με τη θνησιμότητα από καρκίνο του προστάτη.

Ασθενείς και Μέθοδοι

Πληθυσμός μελέτης

Η μελέτη είναι ένθετα σε δύο ομάδες των συνολικά 459 διαδοχικούς ασθενείς με καρκίνο του προστάτη που υποβλήθηκαν σε βιοψία, ριζική προστατεκτομή ή διουρηθρική εκτομή του προστάτη (TURP) μεταξύ του 1982 και του 1988, ή μεταξύ των ετών 1993 και 1996, σε παθολογία πτέρυγα του San Giovanni Battista Νοσοκομείο, Τορίνο , Ιταλία. Οι λεπτομέρειες αυτών των δύο ομάδες έχουν δημοσιευθεί προηγουμένως [5]. Έχουμε λάβει DNA από αποθηκευμένα ιστούς όγκων του προστάτη έχει εμπεδωθεί με παραφίνη για όλους τους 459 ασθενείς. DNA στη συνέχεια αναλύθηκε για την APC, GSTP1 και RUNX3 (Runt σχετίζονται παράγοντα μεταγραφής 3) γονίδιο μεθυλίωση χρησιμοποιώντας τροποποίηση όξινου θειώδους και μεθυλίωσης-ειδική PCR [5]. Πληροφορίες σχετικά με την ηλικία, την πηγή της ποιότητας ιστού του όγκου του προστάτη, διαμονής και του όγκου ήταν διαθέσιμο από τις εκθέσεις παθολογίας. Όλα τα πρωτότυπα διαγνωστικά διαφάνειες που αντιστοιχούν στα κατοικίδια ζώα που χρησιμοποιούνται για τις μοριακές αναλύσεις εντοπίστηκαν και επανεκτιμάται από έναν ενιαίο uropathologist (LD), για να εκχωρήσετε ένα ενιαίο Gleason σκοράρει σύμφωνα με τις ισχύουσες κατευθυντήριες γραμμές. Εμείς δεν έχουμε πληροφορίες σχετικά με τα επίπεδα του PSA ή άλλα κλινικά χαρακτηριστικά. Αρχικά, οι δύο ομάδες ακολούθησαν μέχρι το 2007 [5], αλλά, για την παρούσα μελέτη, επεκτείναμε την παρακολούθηση μέχρι τις 8 Αυγούστου 2010. Χρησιμοποιήσαμε πληροφορίες από πιστοποιητικά θανάτου για να χαρακτηρίσει την αιτία του θανάτου είτε ως καρκίνο του προστάτη, ή άλλες αιτίες.

Διαγνωστικό διαφάνειες από τους ασθενείς σε δύο ομάδες αναλύθηκαν για τον εντοπισμό NTAT. Αποκλείσαμε

a-priori

ασθενείς από τη δεκαετία του 1980 των οποίων οι διαγνωστικές διαφάνειες περιλαμβάνονται κυρίως νεοπλασματικών ιστών και συσχετίστηκαν με σημαντικά τεχνικά προβλήματα στην απομόνωση NTAT χωρίς μόλυνση από τον ιστό του όγκου του προστάτη. Όλες οι άλλες πηγές ιστών, δηλαδή TURPs (n = 11) και ρίζα προστατεκτομές (n = 23) από τη δεκαετία του 1980, και βιοψίες (n = 164), TURPs (n = 45) και ρίζα προστατεκτομές (n = 34) από τη δεκαετία του 1990, συμπεριλήφθηκαν στην παρούσα αξιολόγηση. Η uropathologist εντοπιστεί και επισημανθεί μια περιοχή του NTAT σε κάθε διαγνωστικό διαφάνεια. Περιοχές της προστατικής ενδοεπιθηλιακής νεοπλασίας αποκλείστηκαν. Αν περισσότερες από μία περιοχή του NTAT ήταν παρών, ο παθολόγος επέλεξε το πλέον απομακρυσμένο από τον όγκο. Αν υπήρχε περισσότερες από μία περιοχή που πληρούσαν αυτό το κριτήριο, η μεγαλύτερη περιοχή επιλέχθηκε. Τα επιλεγμένα τμήματα του NTAT είχε τουλάχιστον 1,5 mm από απόσταση από τα καρκινικά κύτταρα, σύμφωνα με τις προηγούμενες μελέτες σχετικά με επιγενετικό επίδρασης πεδίου στον καρκίνο του προστάτη [23]. Αυτή η ελάχιστη απόσταση διατηρήθηκε και όταν το υλικό ιστού ήταν σχετικά φτωχή (δηλαδή σε βιοψίες)? Αλλιώς ο ασθενής αποκλείσθηκε από τη μελέτη. Για διαφάνειες συμπεριλαμβανομένων φυσικώς διαχωρισμένων θραυσμάτων ιστού (97 ασθενείς), αμφότερα NTAT και καρκινικού ιστού, ο in vivo απόσταση μεταξύ των θραυσμάτων ήταν άγνωστη, αν και το πιθανότερο ήταν μεγαλύτερο από 1,5 mm. Για μερικούς ασθενείς, μερικές από τις διαφάνειες που περιλαμβάνονται NTAT μόνο? Αυτές οι πλάκες που περιλαμβάνονται στη μελέτη.

Στο τέλος αυτής της διαδικασίας, NTAT ταυτοποιήθηκε σε 157 ασθενείς, οι οποίοι συμπεριλήφθηκαν στην παρούσα μελέτη. Η διαδικασία επιλογής από τους αρχικούς 459 ασθενείς ενεργήσει διαφορετικά, ανάλογα με την πηγή του ιστού του όγκου και στην κοόρτη (1980 ή 1990 πληθυσμιακές ομάδες). Συγκεκριμένα, επιλέξαμε 91% των αρχικών ασθενών που υποβλήθηκαν σε TURP ή ριζική προστατεκτομή σε καμία από τις δύο ομάδες, το 33% των ατόμων που υποβλήθηκαν σε βιοψία στην κοόρτη του 1990 και, με σταθερό a-priori κριτήριά μας, κανένας από αυτούς οι οποίοι υποβλήθηκαν σε βιοψία του 1980 ομάδα. Αυτή η επιλογή, που είναι στη γραμμή βάσης (δηλαδή πριν από την επέλευση του αποτελέσματος), είναι απίθανο να έχουν εισαγάγει μεροληψία στις συνειρμική εκτιμήσεις ([26]).

Τέσσερις-πέντε (10 μm πάχος) διαδοχικές τομές κόπηκαν από το εγκλεισμένο σε παραφίνη ιστό των 157 επιλεγμένα διαγνωστικά διαφάνειες. Οι φέτες επικαλύπτεται ακριβώς με τις διαφάνειες στις οποίες η uropathologist υπογράμμισε την επιλεγμένη περιοχή NTAT. Είχαν χειροκίνητα ανατομή, αφαιρώντας το τμήμα NTAT με διαθέσιμο λεπτή λεπίδα, η οποία άλλαξε μεταξύ κάθε υποκείμενο. Το DNA στη συνέχεια εκχυλίζεται με επιτυχία για όλα τα άτομα της μελέτης

Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ηθικής του San Giovanni Battista Νοσοκομείο -. ΚΟΤ /CRF /Μαρία Αδελαΐδα Νοσοκομείο του Τορίνο (Prot Ν 0021727, 19 Μαρτίου 2007. ). Ανώνυμα δεδομένα σχετικά με το γονίδιο μεθυλίωσης είναι διαθέσιμες κατόπιν αιτήματος σε ειδικευμένους ερευνητές με σκοπό την ακαδημαϊκή, μη εμπορική έρευνα.

Μοριακής Αναλύσεις

Η εμπορική QIAamp ® DNA FFPE Kit ιστών (Qiagen, Hilden, Γερμανία) χρησιμοποιήθηκε για την εκχύλιση και τον καθαρισμό του γονιδιωματικού DNA. Η επάρκεια του DNA ελέγχθηκε με τη χρήση της PCR ενίσχυση του γονιδίου β-σφαιρίνης housekeeping [27].

Οι γονιδιωματικές δείγματα DNA, συμπεριλαμβανομένων των θετικών μαρτύρων για μεθυλιωμένο και μη μεθυλιωμένη κατάσταση, υπέστη τροποποίηση όξινου θειώδους χρησιμοποιώντας Epitect Bisulfite Kit (Qiagen , Hilden, Γερμανία).

Μετά την τροποποίηση όξινου θειώδους, μια PCR δοκιμασία με ειδικούς ανιχνευτές για τον προσδιορισμό της κατάστασης μεθυλίωσης των APC και υποστηρικτές GSTP1 χρησιμοποιήθηκε. Αυτή η δοκιμασία επιτρέπει την ανίχνευση των μεθυλιώνονται κυτοσίνη με υψηλή ευαισθησία (1 μεθυλιωμένο κυτοσίνη από 10.000 μη μεθυλιωμένες κυτοσίνες [28]). Κάθε αντίδραση PCR περιείχε: 1 ρυθμιστικό × PCR, 5.5 μΜ MgCI2, 200 μΜ dNTPs, 600 ηΜ των δύο εκκινητών, 200 ηΜ και 80 ηΜ ειδικό ανιχνευτή για την μεθυλίωση της APC και προαγωγοί GSTP1, αντίστοιχα, 5 U Taq, 2 μΐ τροποποιημένου DNA με όξινο θειώδες νάτριο και απεσταγμένο H

2O για να ληφθεί ένα τελικό όγκο 25 μΙ. Η αντίδραση διεξήχθη σε θερμοκυκλοποιητή (iCycler, BioRad, CA, USA) με τις ακόλουθες συνθήκες PCR: 1,30 λεπτά στους 95 ° C, 15 δευτερόλεπτα στους 95 ° C, 1 λεπτό σε μία θερμοκρασία ανόπτησης εκκινητή-ειδική (60 ° C ) για 50 κύκλους, και 10 λεπτά στους 72 ° C. Η καθολική μεθυλιωμένο DNA CpGenome (Intergen Co., Oxford, UK) χρησιμοποιήθηκε ως θετικός μάρτυρας. Οι αρνητικοί έλεγχοι περιλήφθηκαν σε όλες τις αντιδράσεις.

εκκινητές και ανιχνευτές επιλέχθηκαν με βάση τις δημοσιευμένες αλληλουχίες (Πίνακας 1) [29], [30]. Ανιχνευτές στοχευμένες τέσσερις νησίδες CpG σε κάθε γονίδιο.

Η

Οι πληροφορίες σχετικά με την APC, GSTP1 και RUNX3 μεθυλίωση στον ιστό του όγκου του προστάτη ήταν ήδη διαθέσιμα από προηγούμενη μελέτη μας [5]. Ωστόσο, στις προηγούμενες αναλύσεις χρησιμοποιήσαμε μεθυλίωσης-ειδική PCR αντί του ανιχνευτή PCR πραγματικού χρόνου. Δεδομένου ότι η τελευταία μέθοδος έχει μεγαλύτερη ευαισθησία, θα επανεξεταστούν όλα τα δείγματα καρκινικού ιστού του προστάτη στην οποία APC ή GSTP1 ήταν μη μεθυλιωμένα, για να κάνουν τα αποτελέσματα από τον ιστό του όγκου του προστάτη και NTAT πιο συγκρίσιμα. Μεθυλίωση σε RUNX3 δεν είχε επανεκτιμηθεί γιατί αναλύει το NTAT συμμετέχουν μόνο APC και GSTP1 και την πιθανή πρόσθετη σύγχυση επίδραση του RUNX3 μεθυλίωσης στον ιστό του όγκου αναμένεται να είναι περιορισμένη. Συνέπεια, η μεθυλίωση του ιστού του όγκου σε RUNX3 δεν έχει εξεταστεί περαιτέρω στο παρόν έγγραφο.

Στατιστικές Αναλύσεις

Χρησιμοποιώντας πολυπαραγοντική λογιστική παλινδρόμηση, εκτιμήσαμε τις αναλογίες πιθανότητες επικράτησης της APC ή GSTP1 μεθυλίωσης στο NTAT για την επιλεγμένη χαρακτηριστικά (σκορ Gleason, μεθυλίωση σε ιστό όγκου του προστάτη).

Η επίδραση της μεθυλίωσης NTAT σε κάθε ένα από τα δύο γονίδια σε αθροιστική θνησιμότητα από καρκίνο του προστάτη ερευνήθηκε λαμβάνοντας υπόψη ανταγωνιστικούς κινδύνους, και οι διαφορές στην θνησιμότητα αξιολογήθηκαν με δοκιμή του του Gray [31]. Χρησιμοποιήσαμε Cox μοντέλα αναλογικών παλινδρόμησης κινδύνου για να εκτιμηθεί η αναλογία κινδύνου (HR) της θνησιμότητας από καρκίνο του προστάτη σε σχέση με μεθυλίωση σε NTAT. Επακόλουθα διάρκεια χρησιμοποιήθηκε ως ο χρόνος κλίμακα και την ηλικία κατά τη διάγνωση εισήχθη ως συνεχή μεταβλητή. Και οι δύο γραφικές ελέγχων και επίσημες δοκιμές, με βάση Schoenfeld κατάλοιπα (p & gt? 0,14), έδειξε ότι η ανάλογη υπόθεση κίνδυνο τηρήθηκε. APC και GSTP1 μεθυλίωση σε NTAT αναλύθηκαν σε διαχωριζόμενα μοντέλα, όπως επίσης και σε ένα μοντέλο διερεύνησης του αριθμού των μεθυλιωμένων γονιδίων, από 0 έως 2. Όλα τα μοντέλα διεξήχθησαν δύο δεν προσαρμογή και την προσαρμογή για Gleason στείλει και παρουσία GSTP1 ή APC . μεθυλίωσης στον ιστό του όγκου του προστάτη

Δεδομένου ότι οι προγνωστικοί δείκτες που απαιτούνται κυρίως για τα χαμηλά και ενδιάμεσου κινδύνου όγκους, και κατά τη στιγμή της διάγνωσης, πριν αποφασίσει σχετικά με προστατεκτομή, πραγματοποιήσαμε δύο υποομάδες ανάλυσης περιορίζονται σε: i) θέματα μελέτης με σκορ Gleason 7 ή λιγότερο ή ii) άτομα που υποβλήθηκαν σε βιοψία. Εκτιμήσαμε επίσης τη συσχέτιση της μεθυλίωσης σε NTAT με βραχυπρόθεσμη θνησιμότητα από τη διεξαγωγή ξεχωριστών αναλύσεων περιορίζεται στα 5 πρώτα χρόνια της παρακολούθησης.

Αποτελέσματα

Επιλεγμένα χαρακτηριστικά των ατόμων 157 μελέτης είναι αναφέρονται στον πίνακα 2. τα περισσότερα άτομα διαγνώστηκαν τη δεκαετία του 1990, με μια μέση επιβίωση των 6,79 έτη. Από τα 128 άτομα που έχασαν τη ζωή τους κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης, 43 άνθρωποι πέθαναν από καρκίνο του προστάτη. Η πηγή ιστού ήταν ισομερώς κατανεμημένα μεταξύ βιοψία, διουρηθρική προστατεκτομή και ριζική προστατεκτομή. Υπήρχε ένα υψηλό επιπολασμό των δύο APC μεθυλίωσης (82,2%) και GSTP1 μεθυλίωση (84,1%) στον ιστό του όγκου του προστάτη.

Η

Η μεθυλίωση του επιπολασμού σε NTAT ήταν 43,9% για την APC και 42% για GSTP1. Όπως συνοψίζεται στον Πίνακα 3, το πρότυπο μεθυλίωσης σε NTAT συσχετίζεται με εκείνη στον ιστό του όγκου του προστάτη: μεθυλίωση σε έναν από τους δύο γονιδίων σε ιστό όγκου του προστάτη συνδέθηκε με μεθυλίωση του ίδιου γονιδίου σε NTAT. σκορ Gleason ήταν επίσης ένας σημαντικός καθοριστικός παράγοντας τόσο APC και GSTP1 μεθυλίωση σε NTAT.

Η

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1 NTAT μεθυλίωση τόσο στην APC (Εικ. 1α) και GSTP1 (Σχ. 1β) συσχετίστηκαν με αυξημένος κίνδυνος μακροπρόθεσμη θνησιμότητα από καρκίνο του προστάτη. Οι αναλογίες κινδύνου για την παρουσία μεθυλίωσης αυξήθηκαν κατά περίπου τρεις πτυχώσεις (Πίνακας 4). Αυτά ήταν εξασθενημένη μετά την προσαρμογή για μεθυλίωση στον ιστό του όγκου του προστάτη, και μετά την προσαρμογή για το σκορ Gleason (HR = 1,91, 95% CI: 1,03 – 3,56 για APC και HR = 1,60, 95% CI: 0,80 – 3,19 για GSTP1). Ανάλυση με βάση τον αριθμό των μεθυλιωμένων γονιδίων σε NTAT αποκάλυψαν μια θετική συσχέτιση με τη θνησιμότητα από καρκίνο του προστάτη (p-τιμή για την τάση = 0.001): το ακατέργαστο HR της θνησιμότητας από καρκίνο του προστάτη για 2 έναντι 0 μεθυλιωμένο γονίδια ήταν 4,30 (95% CI: 2,00 -9,22), η οποία μειώθηκε στο 2,40 (95% CI: 1.15 – 5.1) μετά από προσαρμογή για τις δύο γονιδίων μεθυλίωση στον ιστό του όγκου του προστάτη και σκορ Gleason (Πίνακας 5). Παρόμοια ενώσεις όπου διαπιστώθηκε όταν οι αναλύσεις περιορίστηκαν να μελετήσει θέματα με σκορ Gleason 7 ή λιγότερο. Εμείς δεν βρήκε στοιχεία που τροποποίησης επίδρασης που εισάγονται από την πηγή του ιστού του όγκου (τιμή p = 0,37). Τα αποτελέσματα περιορίζονται σε υποκείμενα που υποβλήθηκαν σε βιοψία αναφέρονται στον Πίνακα 5. Ο Πίνακας 5 επίσης δείχνει τα αποτελέσματα για τις αναλύσεις περιορίζονται στα 5 πρώτα χρόνια της παρακολούθησης. Η σύγκριση των 2 έναντι 0 μεθυλιωμένα γονίδια έδωσε ένα ακατέργαστο HR 5,71 (95% CI: 2,23 – 14,6), και 3,29 (95% CI: 1,27 – 8,52) μετά από προσαρμογή για γονιδιακή μεθυλίωση στον ιστό του όγκου του προστάτη και σκορ Gleason

Η

Συζήτηση

Βρήκαμε μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ της παρουσίας της APC και GSTP1 μεθυλίωση σε NTAT και μακροπρόθεσμη θνησιμότητα και η θνησιμότητα 5 ετών από καρκίνο του προστάτη. Η συσχέτιση παρέμεινε μετά την προσαρμογή για Gleason σκοράρει και στις αναλύσεις περιορίζονται να μελετήσει θέματα με σκορ Gleason επτά ή λιγότερο και σε ασθενείς που υποβλήθηκαν σε βιοψία.

Αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν την υπόθεση ότι το DNA υπερμεθυλίωση είναι ένα πρώιμο γεγονός στην καρκινογένεση ότι μπορεί να ανιχνευθεί πριν ο όγκος καθίσταται εμφανής μορφολογικά? υποστηρίζουν επίσης την έννοια του πεδίου cancerisation στον καρκίνο του προστάτη και ο ρόλος του στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη. Το γεγονός ότι το πρότυπο μεθυλίωσης είναι παρόμοια σε NTAT και στον ιστό του όγκου του προστάτη υποδηλώνει ότι οι αλλαγές που βρέθηκαν σε αυτούς τους ιστούς είναι το αποτέλεσμα παρόμοιων μηχανισμών, συμπεριλαμβανομένης μιας πλευρικής επέκτασης ή επιρροή του όγκου ή διάχυτη επιδράσεις των ίδιων καρκινογόνων ουσιών.

Μελετήσαμε μεθυλίωση σε GSTP1 και APC, λόγω της συμμετοχής τους σε κρίσιμους μονοπάτια έλεγχο του κυτταρικού κεντρικό. GSTP1 είναι ένα γονίδιο «επιστάτη», αποτρέποντας γονιδιωματική βλάβη που προκαλείται από καρκινογόνους ή οξειδωτικά. Ελαττώματα στα γονίδια «υπηρεσιακή» (δηλαδή υπερμεθυλίωση) μπορεί να ευνοήσει την ευαισθησία στην ανάπτυξη καρκίνου. Επιπλέον GSTP1 μπορεί να αλληλεπιδράσει με την ανάπτυξη ή επιβίωσης σηματοδότησης δρώντας ως καταστολέας όγκου γονίδιο [32]. Αναλόγως APC είναι μία καλά χαρακτηρισμένη ογκοκατασταλτικό γονίδιο, εντοπίστηκαν αρχικά σε καρκίνο του παχέος εντέρου, που παίζει αναπόσπαστο ρόλο στο μονοπάτι Wnt σηματοδότησης και ενδοκυτταρικής προσκόλλησης. Αλληλεπιδρά με βήτα-κατενίνης, μιας πρωτεΐνης που εμπλέκεται στην κυτταρική προσκόλληση και την κινητικότητα. Κανονισμός της βήτα-κατενίνης εμποδίζει τα γονίδια που διεγείρουν την κυτταρική διαίρεση και κυτταρικής υπερανάπτυξης [33].

Στη μελέτη μας, χρησιμοποιήσαμε τη θνησιμότητα από καρκίνο του προστάτη ως αποτέλεσμα (σε αντίθεση με βιοχημική υποτροπή) και είχαμε μια πολύ μακρά την παρακολούθηση του χρόνου. Συμπεριλάβαμε τα δύο άτομα της μελέτης και σε χαμηλό κίνδυνο καρκίνου του προστάτη, και εκείνοι με περισσότερο επιθετικό καρκίνο του προστάτη. Η πηγή του ιστού του όγκου του προστάτη που περιλαμβάνονται βιοψίες, TURPs και ριζικές προστατεκτομές.

Ο επιπολασμός της μεθυλίωσης στο NTAT που βρήκαμε είναι παρόμοια ή μεγαλύτερη με αυτή που ανιχνεύθηκε σε προηγούμενες μελέτες, οι οποίες, όμως, εμφανίζουν σημαντικές αποκλίσεις μεταξύ των σπουδών [23] – [25], [34], [35]. Όλες αυτές οι εκτιμήσεις δεν είναι άμεσα συγκρίσιμα, καθώς οι μελέτες που χρησιμοποιήθηκαν διάφορα πρωτόκολλα για τη δειγματοληψία ιστού και διαφορετικές μοριακές τεχνικές. μοριακές μέθοδοι μας στοχεύουν να μεγιστοποιήσουν την ευαισθησία και ακολουθήσαμε ένα απλό πρωτόκολλο για να ληφθεί φέτες NTAT με μειωμένο κίνδυνο μόλυνσης από τον ιστό όγκου του προστάτη. Αν και δεν μπορούμε να αποκλείσουμε

a-priori

ότι η μόλυνση συνέβη σε ορισμένα δείγματα, η συχνότητά της ήταν πιο περιορισμένη, πράγμα που αποδεικνύεται από το γεγονός ότι η σχέση μεταξύ της μεθυλίωσης στο NTAT και τη θνησιμότητα του καρκίνου του προστάτη παρέμεινε ουσιαστικά αμετάβλητη μετά προσαρμογή για μεθυλίωση σε ιστό όγκου του προστάτη. Αν η παρουσία μεθυλίωσης σε NTAT οφείλεται σε μόλυνση από μεθυλίωση στον ιστό του όγκου του προστάτη, η συσχέτιση μεταξύ μεθυλίωσης στο NTAT και η θνησιμότητα από καρκίνο του προστάτη, θα έχουν μειωθεί σημαντικά μετά την προσαρμογή.

Ο κύριος περιορισμός της μελέτης μας είναι η έλλειψη κλινικών και παθολογικών άλλες πληροφορίες εκτός από το σκορ Gleason. Επιπλέον μελετήσαμε έναν πληθυσμό με, κατά μέσο όρο, υψηλότερη θνησιμότητα από καρκίνο του προστάτη από ό, τι τυπικό σύγχρονο σειρές ασθενών. Οι περιορισμοί αυτοί παρεμποδίζουν τη δυνατότητα εκτίμησης της πραγματικής επιπλέον προγνωστική αξία της μεθυλίωσης σε NTAT σε σύγκριση με το παρόν χρησιμοποιείται νομογράμματα. Η μελέτη μας είναι έτσι σε θέση να προτείνουν ένα πιθανό ρόλο των methytlation σε NTAT στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη, αν και η δυνατότητα για κλινική μετάφραση αυτού του ευρήματος απαιτεί περαιτέρω διερεύνηση σε ένα καλύτερο ορίζεται κλινικό περιβάλλον. Εμείς δεν διέθετε, επίσης, πληροφορίες για την επεξεργασία κατά την εγγραφή, υπονοώντας ότι ομάδα μας περιλαμβάνει μια ετερογενή ομάδα ασθενών, η οποία δυσχεραίνει περαιτέρω την άμεση κλινική μετάφραση των ευρημάτων μας. Ωστόσο, το γεγονός ότι η πηγή του ιστού του όγκου (βιοψία, ριζική προστατεκτομή, διουρηθρική προστατεκτομή) δεν ήταν ένα τροποποιητή αποτέλεσμα υποδεικνύει ότι τα ευρήματά μας την μεθυλίωση σε NTAT δεν εξηγούνται από διαψεύδοντας από ετερογένειας των ασθενών ή /και την αρχική θεραπεία.

το μέγεθος της σύνδεσης μεταξύ μεθυλίωσης σε NTAT και της θνησιμότητας από καρκίνο του προστάτη που βρήκαμε είναι ισχυρότερη από ότι συνήθως βρέθηκαν για μεθυλίωση σε ιστό όγκου του προστάτη [5], [8] – [14]. Αν και επιλέχθηκαν οι δύο γονίδια που μελετήσαμε

a priori

βάσει των ουσιαστικών στοιχείων που δυνητικού ρόλου τους στην καρκινογένεση προστάτη, είναι πιθανό ότι οι πρόσθετες προγνωστικές πληροφορίες θα μπορούσαν να ληφθούν από τη μελέτη ενός μεγαλύτερου αριθμού γονιδίων .

Εν κατακλείδι, τα ευρήματά μας συχνών APC και GSTP1 μεθυλίωση σε NTAT και την ένωσή τους με τη θνησιμότητα από καρκίνο του προστάτη υποστηρίζουν την ιδέα ότι οι αλλαγές στη γονιδιακή μεθυλίωση είναι μια πρώιμη εκδήλωση στην καρκινογένεση του προστάτη και να παίξει ένα ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου . Η δύναμη της σύνδεσης με τη θνησιμότητα από καρκίνο του προστάτη και του γεγονότος ότι η ένωση παραμένει σε ασθενείς με βαθμολογία Gleason κάτω από το 8 υποδηλώνουν ότι το μοτίβο μεθυλίωσης σε NTAT θα μπορούσε να είναι μια πιθανή προγνωστικός δείκτης για καρκίνο του προστάτη που πρόκειται να δοκιμαστεί σε μελλοντικές κλινικές μελέτες.