Αφηρημένο

PFTK1, επίσης γνωστή ως PFTAIRE1, CDK14, είναι ένα νέο μέλος της Οάο2 σχετίζονται πρωτεϊνικών κινασών σερίνης /θρεονίνης. Πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι PFTK1 εκφράζεται έντονα σε αρκετές κακοήθεις όγκους όπως ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, καρκίνο του οισοφάγου, καρκίνο του μαστού, και εμπλέκονται στη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου, οι όγκοι πολλαπλασιασμός, μετανάστευση, και εισβολή που επηρεάζουν περισσότερο την πρόγνωση όγκων. Ωστόσο, η έκφραση και η φυσιολογική σημασία του PFTK1 σε γαστρικό καρκίνο παραμένουν ασαφείς. Σε αυτή τη μελέτη, αναλύσαμε την έκφραση και η κλινική σημασία του PFTK1 με στύπωμα Western σε 8 ζεύγη φρέσκο ​​γαστρικό καρκινικούς ιστούς, nontumorous γαστρικού βλεννογόνου ιστούς και ανοσοϊστοχημεία σε 161 εγκλεισμένα σε παραφίνη τομές. έκφραση υψηλού PFTK1 συσχετίστηκε με το βαθμό του όγκου, των λεμφαδένων εισβολή, καθώς και Ki-67. Μέσω Καταμέτρηση κυττάρων Kit (CCK) -8 δοκιμασία, κυτταρομετρία ροής, σχηματισμό αποικίας, την επούλωση των πληγών και Transwell προσδιορισμούς, οι in vitro μελέτες έδειξαν ότι η υπερέκφραση PFTK1 προωθούνται πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή του γαστρικού καρκινικά κύτταρα, ενώ PFTK1 knockdown οδήγησε στα αντίθετα αποτελέσματα. Τα ευρήματά μας για πρώτη φορά υποστήριξε ότι PFTK1 θα μπορούσε να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της γαστρικής πολλαπλασιασμό του καρκίνου, τη μετανάστευση και θα παράσχει μια νέα πολλά υποσχόμενη θεραπευτική στρατηγική κατά του ανθρώπινου γαστρικού καρκίνου

Παράθεση:. Yang L, Zhu J, Huang Η, Yang Q, Cai J, Wang Q, et al. (2015) PFTK1 Προωθεί γαστρικός καρκίνος Εξέλιξη με τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή. PLoS ONE 10 (10): e0140451. doi: 10.1371 /journal.pone.0140451

Επιμέλεια: Keping Xie, Το Πανεπιστήμιο του Τέξας MD Anderson Cancer Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 7 Μαΐου, 2015? Αποδεκτές: 25η Σεπτεμβρίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 21 Οκτώβρη του 2015

Copyright: © 2015 Yang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 81302285, Αρ 81402015)

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

καρκίνο του στομάχου είναι η τέταρτη πιο συχνή κακοήθης όγκος και η δεύτερη κύρια αιτία θνησιμότητας του καρκίνου που σχετίζονται με όλα τα είδη των καρκίνων σε όλο τον κόσμο [1]. Είναι δύσκολο να θεραπεύσει, εκτός εάν βρίσκεται σε πρώιμο στάδιο [2]. Λόγω της έλλειψης εξειδίκευσης, η έγκαιρη διάγνωση ποσοστό είναι χαμηλό και η πλειοψηφία των ασθενών με καρκίνο του στομάχου είναι σε μεσαία-προχωρημένο στάδιο, όταν η διάγνωση. 40% -60% των ασθενών με καρκίνο του στομάχου ελήφθη γαστρικού καρκίνου ριζική λειτουργία θα έχουν συχνά μετεγχειρητική υποτροπή και μετάσταση, αυτά τα χαρακτηριστικά επηρεάζουν σοβαρά την μακροπρόθεσμη επιβίωση σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου [3,4]. Παρά τη μεγάλη πρόοδο της νέας διάγνωση και τη θεραπεία των στρατηγικών του γαστρικού καρκίνου, οι ακριβείς μοριακοί μηχανισμοί του γαστρικού καρκίνου παραμένει ελάχιστα κατανοηθεί. Έτσι, ο προσδιορισμός του μοριακού μηχανισμού κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του καρκίνου του γαστρικού και η μετάσταση μπορούν να παρέχουν στους ασθενείς με νέα διαγνωστικές και θεραπευτικές στρατηγικές.

PFTK1 (επίσης γνωστή ως PFTAIRE1, CDK14) είναι ένα νέο μέλος της Cdc2 σχετίζονται σερίνης /θρεονίνης κινάσες πρωτεΐνης που αναγνωρίστηκε για πρώτη φορά στο νευρικό σύστημα του ποντικιού και είναι ένας κρίσιμος ρυθμιστής των κυκλινών και του κυτταρικού κύκλου [5,6]. Λίγες μελέτες έχουν διεξαχθεί για να χαρακτηρίσει φυσιολογική λειτουργία του ή βιολογική σημασία. Έχει αναφερθεί ότι PFTK1 εκφράζεται έντονα σε εγκέφαλο, πάγκρεας, νεφρό, και των ωοθηκών. CDKs προσδένονται σε ειδικές κουτί κυκλίνης για να σχηματιστεί λειτουργική συμπλέγματα πρωτεϊνικής κινάσης και ρυθμίζονται εν μέρει από υποκυτταρική εντόπιση της [7]. Για παράδειγμα, η κυκλίνη Υ, μία νέα κυκλίνη συνδέεται με τη μεμβράνη, αλληλεπιδρά με PFTK1 ενισχύει την ενεργότητα κινάσης PFTK1 και στρατολογεί PFTK1 στη μεμβράνη του πλάσματος [8]. PFTK1 αλληλεπιδρά με Κυκλίνη Β2 συν-εντοπισμό στον πυρήνα σε ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [9]. Η θεμελιώδης λειτουργία του PFTK1 αναφέρεται ως εξαρτώμενη από κυκλίνη κινάση (ΟϋΚ) που ρυθμίζει την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου και του κυτταρικού πολλαπλασιασμού από ειδικά αλληλεπίδραση με τα μέλη των πρωτεϊνών κυκλίνης, όπως κυκλίνη D3 (CCND3), κυκλίνη Y (CCNY) και σχηματίζει ένα τριμερές σύμπλοκο με ο αναστολέας ρ21 του κυτταρικού κύκλου, έτσι φωσφορυλιώνει το ογκοκατασταλτικό Rb για G1 /S μετάβαση [10]. Knockout κυκλίνης Υ σε κυτταρικές σειρές γλοιώματος κάνει τον κύκλο του κυττάρου αποκλείστηκε σε περίοδο S [11]. Η κυκλίνη Y αλληλεπιδρά με PFTK1 προσαρμόσει Μ φάση της μίτωσης [12]. Αυτά τα ευρήματα μαζί εμπλέκουν ότι PFTK1 μπορεί να λειτουργήσει ως προαγωγός όγκου μέσω ρύθμισης του κυτταρικού κύκλου. Εν τω μεταξύ, αρκετές μελέτες καταδεικνύουν ότι PFTK1 έχει και άλλες σημαντικές λειτουργίες. PFTK1 ρυθμίζει τη διαφοροποίηση των ολιγοδενδροκυττάρων μέσω PI3K /AKT οδό [13]. Πρόσφατα PFTK1 προσδίδει κινητικότητα των κυττάρων HCC μέσω αδρανοποιεί τον κινητικό λειτουργία καταστολή πρόσδεσης ακτίνης της TAGLN2 μέσω φωσφορυλίωσης [14]. PFTK1 μεσολάβηση φωσφορυλίωση δίνει τη δυνατότητα σύνδεσης των CAD σε F-ακτίνη νημάτων, με αποτέλεσμα την ενίσχυση του πολυμερισμού των ινών στρες ακτίνης, προάγοντας έτσι τη μετανάστευση κυττάρων και εισβολή σε κύτταρα HCC [15,16]. Η υπερέκφραση του PFTK1 μπορεί να τους αναθέσει κινητικό φαινότυπο σε κακοήθη ηπατοκύτταρα [9]. Σε συμφωνία με τα μοριακά ευρήματα, CCNY και /ή PFTK1 μόνη της μπορεί να ενεργοποιήσει noncanonical σηματοδότηση Wnt να ενισχύσει την κυτταρική κινητικότητα σε κύτταρα HCC [17]. Όλες αυτές οι μελέτες υποδηλώνουν ότι PFTK1 μπορεί να εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την κινητικότητα, ωστόσο, την έκφραση και τη σημασία της PFTK1 στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα εξακολουθούν να είναι ασαφής.

Στη μελέτη μας, έχουμε ως στόχο να προβούν σε λεπτομερή ανάλυση των έκφραση PFTK1 και την πρόγνωση της ρόλο στο γαστρικό καρκινικά κύτταρα. Εξετάσαμε την έκφραση της PFTK1 και τη σύνδεσή του με τα κλινικά χαρακτηριστικά και Ki-67 με κηλίδα Western και ανοσοϊστοχημεία (IHC). Η μελέτη μας έδειξε ότι PFTK1 ενισχυμένο πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και τη διεισδυτικότητα του γαστρικού καρκίνου κυττάρων με CCK-8, κυτταρομετρία ροής αναλύσεις, αναλύσεις σχηματισμού αποικιών, Transwell δοκιμασία, επηρέασε την έκφραση των σχετικών πρωτεϊνών. Αυτά τα ευρήματα πρώτον αναφέρθηκαν σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα και μπορεί να παρέχει μία νέα εικόνα αναπτυσσόμενες πειραματικές θεραπείες σε γαστρικό καρκίνο.

Υλικά και Μέθοδοι

Δείγματα ιστών

Εκατόν εξήντα όνη δείγματα γαστρικού καρκίνου ιστού και συμφωνημένα παρακείμενους ιστούς noncancer επιλέχθηκαν από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση μεταξύ 2007 και 2013 στο Τμήμα Παθολογίας, όγκων Νοσοκομείο Nantong. Αυτοί οι ιστοί αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C αμέσως μετά τη χειρουργική αφαίρεση. Για ιστολογική εξέταση, όλα τα δείγματα γαστρικού ιστού σταθεροποιήθηκαν σε 10% ρυθμισμένη φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη για τεμαχισμό. Εκτομή δείγματα κατατάσσονται ανάλογα με την έβδομη έκδοση της ταξινόμησης ΤΝΜ για τον Καρκίνο του γαστρικού [1] .Όλα τα κλινικοπαθολογοανατομικές πληροφορίες περιλαμβάνονται η ηλικία, το φύλο, το βάθος διείσδυσης, το καθεστώς της διαφοροποίησης, των λεμφαδένων εισβολή, νεύρο εισβολή και το στάδιο TNM. Η έγκριση αφαιρείται ιστών για ερευνητικούς σκοπούς λήφθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Ναντόνγκ Όγκων Νοσοκομείο. Υπογραφή ενημερωμένη συγκατάθεση λήφθηκε επίσης από κάθε ασθενή. Τα βασικά κλινικά και παθολογικά μεταβλητές συνοψίζονται στον Πίνακα 1.

Η

Western ανάλυση κηλίδος

δοκιμασία κηλίδος Western χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση ορισμένες πρωτεΐνες [18-20]. Πρώτον, οι γαστρικά ιστοί και τα κύτταρα Caner έσπασαν σε ρυθμιστικό λύσης (1 Μ Tris-HCl ρΗ 7,5, 1% Triton Χ-100, 10% θειικό νάτριο (SDS), 1% ΝΡ-40, 0.5 Μ EDTA, 0,5% νάτριο δεοξυχολικό, 10 μg /mL απροτινίνη, 1 mM PMSF, 10 μg /mL λευπεπτίνη) και κατόπιν φυγοκεντρήθηκε στις 10.000 χ g για 30 λεπτά για να συλλεχθεί το υπερκείμενο. Το υπερκείμενο αραιώνεται σε 2 χ SDS ρυθμιστικού διαλύματος φόρτωσης και βράζεται. Μία ισοδύναμη ποσότητα πρωτεϊνών από κάθε δείγμα υποβλήθηκαν σε ηλεκτροφόρηση κατά 10% δωδεκυλικού νατρίου ηλεκτροφόρηση πηκτής θειικού-πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE) και μετά μεταφέρθηκαν σε μια φθοριούχο πολυβινυλιδένιο (PVDF) (Millipore, Bedford, ΜΑ). Μετά από αυτό, οι μεμβράνες αποκλείστηκαν για περίπου 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με τα πρωτογενή αντισώματα. Μετά από πλύση με ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού (PBS) που περιέχει 0,1% Tween 20 τρεις φορές, κάθε φορά για 5 λεπτά, οι μεμβράνες στη συνέχεια επωάστηκαν με υπεροξειδάση αρμορακίας-συνδεδεμένο IgG ως δευτερεύον αντίσωμα για άλλες 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Οι μεμβράνες στη συνέχεια να αναπτυχθούν με τη χρήση των συστημάτων ανίχνευσης ECL (τεχνολογία απεικόνισης, Ontario, Canada). Τα αντισώματα που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη περιλαμβάνονται: αντι-PFTK1 (1: 500, Santa Cruz Biotechnology), αντί-Κυκλίνη Ε (1: 500, Santa Cruz Biotechnology), αντι-ΡΟΝΑ (1: 1000, Santa Cruz Biotechnology), αντι- GAPDH (1: 1000, Sigma), αντι-β-κατενίνης (1: 1000, Santa Cruz Biotechnology), αντι-Dvl1 (1: 600, Santa Cruz Biotechnology), αντι-Dvl2 (1: 600, Santa Cruz Biotechnology), αντι-Naked1 (1: 500, Cell Signaling), αντι-ΜΜΡ2 (1: 500, Santa Cruz Biotechnology).

ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις

εν συντομία, τομές ιστών αποκηρώθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν μέσω βαθμολογούνται αιθανόλες. Στη συνέχεια, οι τομές αποσβέστηκε σε 3% μεθανολικό υπεροξείδιο για περίπου 10 λεπτά για να εμποδίσει την ενδογενή δραστηριότητα υπεροξειδάσης. Με υψηλή πίεση και θερμοκρασία σε ένα αυτόκλειστο, η ανοσοαντιδραστικότητα του ενισχύθηκε σε 0.1 Μ ρυθμιστικό κιτρικού για 3 λεπτά. Οι τομές ιστού επωάσθηκαν με τον αντι-PFTK1 (1: 100, Santa Cruz Biotechnology) και αντι-Ki-67 (1: 400, Santa Cruz Biotechnology) για 120 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, μετά από πλύση σε ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο (PBS), οι ιστοί επωάστηκαν με υπεροξειδάση αρμορακίας-συζευγμένο αντι-ποντικού Ig πολυμερές ως ένα δεύτερο αντίσωμα (kit Envision, Dako) για 20 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Τέλος, πλάκες με αιματοξυλίνη, αφυδατωμένα, και τοποθετημένα σε ρητίνη mount. Για τον ποσοτικό προσδιορισμό PFTK1 και η έκφραση πρωτεΐνης Ki-67, τόσο η έκταση της ανοσοδραστικότητας και την ένταση αξιολογήθηκαν και βαθμολογήθηκαν. Πέντε πεδία υψηλής ισχύος επιλέχθηκαν τυχαία για κάθε τμήμα και τουλάχιστον 300 κύτταρα μετρήθηκαν ανά τομέα. Για τη στατιστική ανάλυση των PFTK1, κάθε διαφάνεια αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα βαθμολόγησης ημιποσοτική τόσο για την ένταση του λεκέ και το ποσοστό των θετικών κακοήθη κύτταρα. Τα κύτταρα βαθμολογήθηκαν ως ακολούθως: 1 (κύτταρα ≤25% του όγκου που κηλιδώνονται), 2 (26% κυττάρων του όγκου -50% Coomassie), 3 (51% κυττάρων του όγκου -75% χρώση), 4 (76% -100% των κυττάρων του όγκου χρωματιστός). Για την αξιολόγηση πυκνότητα: 1 ασθενή χρώση? 2 μέτρια χρώση? 3 ισχυρή χρώση. Τότε θα πολλαπλασιάσει τις δύο βαθμολογίες και ταξινομούνται σε δύο ομάδες: χαμηλή έκφραση και υψηλή έκφραση. Όσο για τη στατιστική ανάλυση των Ki-67, & lt? 50 κύτταρα% του όγκου που κηλιδώνονται τόσο χαμηλές έκφρασης και ≥50% κυττάρων του όγκου που κηλιδώνονται τόσο υψηλή έκφραση. Για να αποφευχθούν τεχνικά σφάλματα, χρώση επαναλήφθηκε τρεις φορές και ελήφθησαν παρόμοια αποτελέσματα.

Κυτταροκαλλιέργειες και παροδική επιμόλυνση

MGC803 και HGC27 ήταν γαστρικού κυτταρικές γραμμές, οι οποίες αγοράστηκαν από τη βιβλιοθήκη κύτταρο της κινεζικής Ακαδημίας Επιστημών. Τόσο καλλιεργήθηκαν σε RPMI-1640 (GIBCO-BRL, Grand Island, ΝΥ, USA). SGC7901 και GES1 ήταν ένα άλλο γαστρικό κυτταρικές σειρές, οι οποίες ευγενώς από το Τμήμα Παθολογίας Ερευνών του Πανεπιστημίου Ναντόνγκ. SGC7901 και GES1 καλλιεργήθηκαν σε μέσο DMEM (GIBCO-BRL, Grand Island, ΝΥ, USA). Όλο το μέσον έγιναν με 10% ορό εμβρύου μόσχου (GIBCO-BRL, Grand Island, ΝΥ, USA) συμπληρωμένο με 2 mM L-γλουταμίνη, 100 U /ml πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη μίγμα (GIBCO-BRL, Grand Island, ΝΥ, USA ), στους 37 ° C και 5% CO

2. PFTK1 μικρό παρεμβαλλόμενο RNA (siRNA) σχεδιάστηκαν και συντέθηκαν με τη Σαγκάη Genechem (Κίνα). Το siRNA που στοχεύει PFTK1 αλληλουχίες ήταν ως εξής: 5′-GTTCATTCTTTACCACATT-3 ‘, 5′-AGGTTGCATCTTTGTTGAA-3′, 5’-AAAGAGTCACCTAAAGTTA-3 ‘, 5′-ACCCATACAGGAAATCCAA-3’. Το πλασμίδιο Σημαία-PFTK1 αγοράστηκε από τη Σαγκάη Genechem (Κίνα). Lipofectamine 2000 αντιδραστήριο επιμόλυνσης (Life Technologies) χρησιμοποιήθηκε για την επιμόλυνση τα κύτταρα σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής

Πρώτον, όλες οι κυτταρικές σειρές γαστρικού σταθεροποιήθηκαν σε 70% αιθανόλη όλη τη νύκτα στους -20 ° ΝΤΟ. δευτερόλεπτα, μετά πλύθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού-φωσφορικού και PBS, τα κύτταρα επωάστηκαν με 1 mg /ml RNaseA για 30 λεπτά στους 37 ° C. Στη συνέχεια, τα κύτταρα χρωματίστηκαν με 50 μg /ml ιωδιούχου προπιδίου σε Αλατόνερο Ρυθμισμένο με Φωσφορικό (PBS) -Triton για άλλα 20 λεπτά στους 4 ° C. Τέλος, τα κύτταρα αναλύθηκαν με τη χρήση ενός ροής Becton Dickinson FACScan κυτταρόμετρο BD (San Jose, CA) και CellQuest προγράμματα ανάλυσης απόκτησης. Το πείραμα διεξήχθη τρεις φορές.

δοκιμασίες σχηματισμού αποικίας

MGC803 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε πλάκες καλλιέργειας των έξι φρεατίων (Corning Inc, Corning ΝΥ) σε πυκνότητα 200 κύτταρα /φρεάτιο μετά επιμόλυνση PFTK1 #siRNA και Σημαία-PFTK1 σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Μετά από δύο εβδομάδες, οι αποικίες των κυττάρων (≥50 κύτταρα /αποικία) μετρήθηκαν με χρώση με 0,5% κρυσταλλικό ιώδες.

δοκιμασίες πολλαπλασιασμού των κυττάρων

MGC803 κύτταρα τα οποία περιλαμβάνονται κανονικά, επιμόλυνση PFTK1 # siRNA και Flag-PFTK1 σπάρθηκαν πάνω σε πλάκες συμπλέγματος κυτταρικής καλλιέργειας 96 φρεατίων (Corning Inc, Corning ΝΥ) σε πυκνότητα 2 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο σε 100 μΙ καλλιέργεια και αναπτύχθηκαν όλη τη νύκτα. Σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, τα κύτταρα μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας εμπορικό CCK-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan). CCK-8 αντιδραστήρια προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο για 2 ώρες επώαση στους 37 ° C. Η απορρόφηση διαβάστηκε σε μήκος κύματος 450 nm σε αναγνώστη αυτοματοποιημένο πλάκας. Τα πειράματα πρέπει να επαναλάβει τουλάχιστον τρεις φορές.

επούλωση πληγών

δοκιμασία

MGC803 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε πλάκες καλλιέργειας των έξι φρεατίων (Corning Inc, Corning ΝΥ) σε πυκνότητα 5 χ 10

5 κύτταρα /φρεάτιο και αναπτύσσονται μέχρι συρροής επί μία νύκτα. Μετά από επιμολυσμένα 48 ώρες, τα κύτταρα επωάστηκαν με μέσο χωρίς ορό. Μια γραμμή ήταν γδαρμένο μέσα στο στρώμα Conflent κύτταρο χρησιμοποιώντας το άκρο fie ενός άκρου 10 ml σιφώνιο (χρόνος 0) και τα κύτταρα πλύθηκαν με PBS. Εικόνες μεταναστεύοντα κύτταρα ελήφθησαν διαδοχικά μετά από 24 ώρες, 48 ώρες κατά το κλείσιμο των τραυματιών περιοχής.

Trans-φρεατίων δοκιμασία μετανάστευσης

δοκιμασία μετανάστευσης κυττάρων διεξήχθη χρησιμοποιώντας Transwell θάλαμο (8,0 lm μέγεθος πόρου ? Costar, Cambridge, NY, USA). Περίπου 1 χ 10

5 κύτταρα /ml σπάρθηκαν στα ανώτερα θαλάμους σε μέσο, ​​και ΚΡΜΙ-1640 προστέθηκαν στους θαλάμους πυθμένα. Μετά από 24 ώρες, τα κορυφαία κύτταρα τα οποία δεν είχαν μεταναστεύσει απομακρύνθηκαν και οι κάτω κύτταρα τα οποία μετανάστευσαν μονιμοποιήθηκαν με παραφορμαλδεϋδη και βάφτηκαν με κρυσταλλικό ιώδες. Ο αριθμός των κυττάρων που μεταναστεύουν σε 5 τομείς μετρήθηκε κάτω από 200 × μεγέθυνση, και τα μέσα για κάθε θάλαμο προσδιορίστηκαν. Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές

Trans-φρεατίων

δοκιμασία εισβολής

δοκιμασία μετανάστευσης κυττάρων διεξήχθη χρησιμοποιώντας Transwell θάλαμο (8,0 lm μέγεθος πόρων? Costar, Cambridge, ΝΥ, USA).. BD MatrigelTM Υπόγειο Membrane Matrix προστέθηκε στον ανώτερο θάλαμο για 1 ώρα στους 37 ° C. Στη συνέχεια, 500 μΐ μέσου που περιέχει χημειοτακτικός παράγοντας τοποθετήθηκε στον κάτω θάλαμο. Περίπου 1 χ 10

5 κύτταρα /ml σπάρθηκαν σε άνω θαλάμους στους 37 ° C για 24 h.Cells στη συνέχεια μονιμοποιήθηκαν με παραφορμαλδεΰδη και χρωματίστηκαν με κρυσταλλικό ιώδες. Όλα τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές.

Η στατιστική ανάλυση

Όλα στατιστική ανάλυση διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας τα στατιστικά στοιχεία SPSS 19 πακέτο λογισμικού. Η PFTK1, Ki-67 έκφρασης και τα κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το χ

2 τεστ. Συνολικά καμπύλες επιβίωσης υπολογίστηκαν με τη μέθοδο Kaplan-Meier και ελέγχθηκαν με τη δοκιμασία log-rank. Η πολυπαραγοντική ανάλυση αναλύθηκε με αναλογικού κινδύνου του Cox μοντέλο, η αναλογία κινδύνου και το διάστημα της εμπιστοσύνης 95% καταγράφηκαν για κάθε δείκτη. Οι τιμές εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± SE, και

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

PFTK1 υπερεκφράζεται σε γαστρικό ιστούς όγκων

Έχει αναφερθεί ότι PFTK1 είναι ένα σημαντικό κυκλίνη εξαρτώμενη κινάση η οποία μπορεί να ρυθμίζουν τον κυτταρικό κύκλο, αλλά η έρευνα για καρκίνο του στομάχου δεν έχει μελετηθεί. Δεδομένου ότι η υπερέκφραση του PFTK1 βρέθηκε σε καρκίνο του ήπατος και καρκίνο του οισοφάγου σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς. Έτσι, είναι ενδιαφέρον να ανάλυση η έκφραση της PFTK1 σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς και coorelation της με πυρηνικό αντιγόνο πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων (PCNA). Πρώτον, εξετάσαμε την έκφραση του PFTK1 σε 8 ζεύγη των γαστρικών καρκινικών ιστών και αντίστοιχων nontumorous γαστρικού βλεννογόνου ιστούς τους με κηλίδα Western. Όπως φαίνεται στο σχήμα 1, σε σύγκριση με παρακείμενες φυσιολογικούς ιστούς, ρύθμιση προς τα άνω του PFTK1 ανιχνεύθηκε σε όλους τους ιστούς οκτώ γαστρικής σε συμφωνία με PCNA. Προκειμένου να επιβεβαιώσει την κλινική σημασία των PFTK1 στο γαστρικό εξέλιξης του καρκίνου, ανοσοϊστοχημική (IHC) αναλύσεις χρησιμοποιήθηκε για να παρατηρήσουν την έκφραση της πρωτεΐνης PFTK1 σε 161 γαστρικό καρκινικούς ιστούς. Όπως αναμενόταν, η έκφραση του PFTK1 και βαθμού όγκου σχετίζεται αρνητικά. PFTK1 είχαν σημαντικά υψηλότερη έκφραση σε πτωχά διαφοροποιημένα δείγματα από ό, τι καλά διαφοροποιημένο δείγματα, η οποία ήταν σύμφωνη με Ki-67. PFTK1 εκφράστηκε σε κυτταρική μεμβράνη, ενώ κυτόπλασμα, Ki-67 κυρίως στον πυρήνα. Το αποτέλεσμα φαίνεται στο Σχ 2. Στη συνέχεια μελετήθηκε η συσχέτιση μεταξύ PFTK1 και Ki-67 με συντελεστή συσχέτισης κατά Pearson. Μπορούμε να δούμε στο Σχήμα 3Α ότι PFTK1 συσχετιζόταν θετικά με Ki-67 (γ Pearson ‘s = 0,833,

P

& lt? 0.001)

(A) Το επίπεδο της πρωτεΐνης της PFTK1 ήταν υψηλή σε. οκτώ αντιπροσωπευτικά ζεύγη δειγμάτων γαστρικού καρκινικού ιστού (Τ) σε σχέση με nontumorous γειτονικούς ιστούς (Ν). GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (Β) Το γράφημα ράβδων έδειξε την αναλογία της PFTK1 πρωτεΐνης σε GADPH. Η μέση ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων. (*

P

& lt? 0,05 σε σύγκριση με τον έλεγχο nontumorous γειτονικούς ιστούς).

Η

(Α-Η) τμήματα ιστού εγκλεισμένα σε παραφίνη βάφτηκαν με αντισώματα για PFTK1 και Ki-67 και αντίθετα με αιματοξυλίνη. (Α, Ε) αρνητική χρώση PFTK1, Ki-67 σε παρακείμενες φυσιολογικούς ιστούς (χ 200)? (Β, F) ασθενή χρώση των PFTK1, Ki-67 σε καλά διαφοροποιημένο γαστρικό καρκινικούς ιστούς? (C, G) μέτρια χρώση PFTK1, Ki-67 σε μέτρια διαφοροποιημένο γαστρικό καρκινικούς ιστούς? (D, H) ισχυρή χρώση των PFTK1, Ki-67 σε φτωχά διαφοροποιημένο γαστρικό καρκινικούς ιστούς, ενίσχυση (× 100, × 400).

Η

(Α) Συσχέτιση μεταξύ PFTK1 και Ki-67 έκφρασης γαστρικό καρκίνο tissues.The συσχέτιση μεταξύ PFTK1 και Ki-67 έκφραση αξιολογήθηκε με δοκιμή συσχέτισης Pearson (r = 0.833,

P

& lt? 0.001). ανάλυση επιβίωσης (Β) Kaplan-Meier των 161 ασθενείς με γαστρικό καρκίνο με βάση το επίπεδο έκφρασης PFTK1. Σύμφωνα με τα ποσοστά PFTK1, οι ασθενείς χωρίστηκαν σε υψηλή εκφραστές PFTK1 και χαμηλή εκφραστές PFTK1. Και ο μέσος χρόνος επιβίωσης και η αναλογία κινδύνου ήταν έδειξε. Οι ασθενείς στην ομάδα PFTK1 υψηλής έκφρασης είχαν σημαντικά μικρότερη συνολική επιβίωση (

P

& lt? 0,01).

Η

PFTK1 συνδέεται με ανεπιθύμητα κλινικά χαρακτηριστικά και την κακή επιβίωση των ασθενών όγκου του στομάχου »

κλινική μελέτη σύνδεσης εξερευνήθηκε για την ανάλυση της συσχέτισης των PFTK1 με γαστρικό καρκίνο κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά μεταξύ 161 ιστούς. Τα κλινικοπαθολογοανατομικές στοιχεία που παρατίθενται στον Πίνακα 1. Υψηλή έκφραση PFTK1 σχετιζόταν με το βαθμό του όγκου (

P

= 0,009), το βάθος διείσδυσης (

P

= 0,002), λεμφαδένα εισβολή (

P

= 0.000), καθώς και Ki-67 (

P

= 0.000). Αλλά δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης PFTK1 και άλλες κλινικές μεταβλητές, όπως η ηλικία, το φύλο, νεύρων εισβολή, και το στάδιο TNM.

Επιπλέον, η ανάλυση Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκε για να αναλύσει τη σχέση μεταξύ της έκφρασης PFTK1 και 161 την επιβίωση των ασθενών. Σύμφωνα με τις καμπύλες επιβίωσης, υψηλή έκφραση PFTK1 προφανώς συσχετίστηκε με κακή συνολική επιβίωση, ενώ η χαμηλή έκφραση του PFTK1 συσχετίστηκε με καλύτερη συνολική επιβίωση. Και η μέση αναλογία χρόνου επιβίωσης και κινδύνου ήταν έδειξε στο Σχήμα 3Β. Επιπλέον, μονοπαραγοντική ανάλυση σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς έδειξαν ότι ο βαθμός του όγκου (

P

= 0.020), το βάθος διείσδυσης (

P

= 0,011), λεμφαδένα εισβολή (

P

= 0.011), το στάδιο TNM (P = 0,031), η έκφραση PFTK1 (

P

= 0,002), και Ki-67 έκφρασης (

P

= 0,013) ήταν προγνωστικοί παράγοντες της συνολικής επιβίωσης (Πίνακας 2 ). Η πολυπαραγοντική ανάλυση χρησιμοποιώντας το μοντέλο αναλογικών κινδύνων του Cox πρότεινε PFTK1 ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό δείκτες της συνολικής επιβίωσης των ασθενών (

P

= 0,048, Πίνακας 3). Συνοψίζοντας, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η έκφραση της PFTK1 συνδέεται σημαντικά με τα κλινικά χαρακτηριστικά και την κακή συνολική επιβίωση.

Η

Η έκφραση της PFTK1 σε μη επιμολυσμένα και επιμολυσμένα γαστρικά καρκινικά κύτταρα

Όπως PFTK1 υπερεκφράζεται σε γαστρικό ιστούς όγκων, στη συνέχεια, αναλύσαμε την έκφραση της PFTK1 σε κυτταρικές σειρές, συμπεριλαμβανομένων MGC803, SGC7901, HGC27, GES1. Από το Σχ 4Α, την έκφραση της PFTK1 σε φυσιολογικό γαστρικό κυτταρική γραμμή GES1 ήταν χαμηλότερη από ό, τι στο γαστρικό κυτταρικές σειρές MGC803, SGC7901, HGC27. Για την περαιτέρω μελέτη της λειτουργίας του PFTK1 σε γαστρικό καρκίνο κύτταρα

in vitro,

MGC803 κύτταρα επιμολύνθηκαν με PFTK1-siRNA και SGC7901 κύτταρα επιμολύνθηκαν με Flag-PFTK1. κηλίδα Western χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί η έκφραση PFTK1. Όταν Flag-PFTK1 επιμολύνθηκε σε SGC7901, PFTK1 είχαν υψηλότερη έκφραση (Εικόνα 4Β). Ενώ PFTK1-siRNA διαμολύνθηκε σε MGC803, PFTK1-siRNA # 4 πέτυχε την υψηλότερη knockdown αποτελεσματικότητας σε σύγκριση με άλλες PFTK1-siRNA (Σχ 4C). Έτσι, επιλέξαμε τη σημαία-PFTK1 και PFTK1-siRNA # 4 για να συνεχίσει τα ακόλουθα πειράματα.

(A) Το επίπεδο της πρωτεΐνης PFTK1 στο SGC7901, MGC803, HGC27, γαστρικό κυτταρικές σειρές GES1. (Β) κύτταρα SGC7901 διαμολύνθηκαν παροδικά με Flag-PFTK1 πλασμίδιο όπως περιγράφεται παραπάνω για 48 ώρες. Ανάλυση κηλίδας Western έκτοπη έκφραση της PFTK1. (Γ) MGC803 κύτταρα επιμολύνθηκαν παροδικά με PFTK1-siRNA # 1, 2, 3, 4 για 48 ώρες. Η ανάλυση στυπώματος Western knockdown έκφραση του PFTK1. Το γράφημα ράβδων έδειξε την αναλογία της PFTK1 πρωτεΐνης σε GADPH. Η μέση ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων. (*

P

& lt? 0,05)

Η

PFTK1 μπορεί να προωθήσει τα κύτταρα μεταναστεύουν και επεμβατική

in vitro

Η

Έχει αναφερθεί PFTK1 υπερέκφραση μπορεί. αυξάνουν φωσφορυλίωση CAD και την ενίσχυση της CAD να συνδέονται προς Ρ-actins, οι οποίες προωθούν ηπατοκυτταρικού καρκινώματος κύτταρα μετανάστευση [16]. Δεδομένου ότι PFTK1 σχετιζόταν με λεμφαδένα εισβολή στο γαστρικό καρκίνο δείγματα, μελετήσαμε κατά πόσο θα μπορούσε να επηρεάσει PFTK1 γαστρικά καρκινικά κύτταρα μετανάστευση και εισβολή. Επούλωση της πληγής δοκιμασίες προσδιορισμού και φρεατίων έδειξαν ότι η μετανάστευση των κυττάρων Σημαία-PFTK1 ήταν αισθητά αυξημένο σε σχέση με τα κύτταρα ελέγχου. Αντιθέτως, η μετανάστευση των PFTK1-siRNA # 4 κύτταρα μειώθηκαν σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (Σχήμα 5Α και 5Β). Περαιτέρω, matrigel προσδιορισμούς εισβολής κατέδειξε επίσης ότι προς τα πάνω ρύθμιση PFTK1 από επιμόλυνση Σημαία-PFTK1 θα μπορούσε να προωθήσει την επεμβατική ικανότητα, και νοκ ντάουν της PFTK1 θα μπορούσε να μετριάσει την επεμβατική ικανότητα των γαστρικών καρκινικών κυττάρων (Σχήμα 5C). Σε γενικές γραμμές, θα μπορούσαμε να καταλήξουμε στο συμπέρασμα ότι PFTK1 προωθούν τη μετανάστευση και την εισβολή των γαστρικών καρκινικών κυττάρων.

(Α) Η μετανάστευση των κυττάρων επιμολυσμένων με Ctrl, σημαία-PFTK1, PFTK1-siRNA # 4was εξετάζονται από δοκιμασίες επούλωση της πληγής . Η πληγή των κυττάρων έγινε ορατή σε 0 ώρες, 24 ώρες, και 48 ώρες. μετανάστευσης (Β) κυττάρων επιμολυσμένα με Ctrl, σημαία-PFTK1, PFTK1-siRNA # 4 εξετάστηκε από δοκιμασίες trans-καλά. (Γ) Το κύτταρο επεμβατική ικανότητα επιμολυνθεί με Ctrl, σημαία-PFTK1, PFTK1-siRNA # 4 εξετάστηκε με θαλάμους καλλιέργειας κυττάρων Matrigel. Το αριστερό μέρος έδειξε MGC803 κύτταρα επιμολυσμένα με Ctrl, σημαία-PFTK1. Το δεξί μέρος έδειξε MGC803 κύτταρα επιμολυσμένα με Ctrl, PFTK1-siRNA # 4. Η μέση ± SD τριών ανεξάρτητων πειραμάτων (*

P

& lt? 0,05). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν υπερέκφραση της PFTK1 μπορεί να ενισχύσει τα κύτταρα μετανάστευση και την εισβολή, ενώ νοκ ντάουν PFTK1 μείωση κύτταρα μετανάστευση και την εισβολή.

Η

Η έκφραση της PFTK1 προάγει τον πολλαπλασιασμό των γαστρικών καρκινικών κυττάρων

Σύμφωνα με τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται παραπάνω, PFTK1 συσχετίστηκε θετικά με το PCNA, Ki-67 έκφρασης και του βαθμού του όγκου, η οποία ήταν δείκτη πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Έχουμε αναλύσει το ρόλο της PFTK1 για τη ρύθμιση της ικανότητα πολλαπλασιασμού. Πρώτον, MGC803 κύτταρα επιμολύνθηκαν με PFTK1-siRNA # 4, Flag-PFTK1 και προσδιορίστηκαν CCK-8 δοκιμασίας. Η υπερέκφραση του PFTK1 αποδειχθεί ότι αυξάνουν την γαστρική κύτταρα ρυθμό ανάπτυξης από τον έλεγχο, ενώ νοκ ντάουν της PFTK1 έδειξε το αντίθετο αποτέλεσμα (Σχήμα 6Α). Συνεπής με την ενίσχυση ρυθμός ανάπτυξης κυττάρου εξής PFTK1 υπερέκφραση, δοκιμασία σχηματισμού αποικίας έδειξε επίσης ότι θα μπορούσε να αυξήσει το σχηματισμό αποικιών. Και knockdown του PFTK1 έδειξε το ίδιο αποτέλεσμα με CCK-8 δοκιμασίας (Σχήμα 6Β). Τέλος, διερευνήσαμε το μηχανισμό πολλαπλασιασμού των PFTK1 με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής, και τα δεδομένα υπέδειξαν ότι γαστρικό καρκίνο κύτταρα βρέθηκαν στη φάση S με την παρουσία έκτοπη PFTK1, λιγότερο γαστρικό καρκίνο κύτταρα βρέθηκαν στη φάση S σε επιμόλυνση με PFTK1- siRNA # 4 (Σχήμα 6C). Για να συνοψίσουμε, τα δεδομένα έδειξαν ότι PFTK1 συμμετείχε στη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου από την επιτάχυνση της μετάβασης G0 /G1-S.

(Α)

In vitro

Καταμέτρηση κυττάρων Kit (CCK) -8 δοκιμασία χρησιμοποιήθηκε να examin ανάπτυξη των κυττάρων από την απορρόφηση στα 450 nm κατά τον προκαθορισμένο χρόνο. (Τα δεδομένα είναι μέσοι όροι ± SD από τρία ανεξάρτητα πειράματα *

P

& lt?. 0.05) ανάλυση (Β) σχηματισμός αποικίας των MGC803 κύτταρα επιμολυσμένα με Ctrl, σημαία-PFTK1, PFTK1-siRNA 4 #. (C) ανάλυση κυτταρικού κύκλου εμφανίζονται επιμολυσμένα με Ctrl, σημαία-PFTK1, PFTK1-siRNA # 4 με κυτταρομετρία ροής. Ο αριθμός των κυττάρων Flag-PFTK1 μειώθηκε σε G0 /G1 φάση και η αντίστοιχη αύξηση παρατηρήθηκε σε φάση S συγκρίνουν με Πίν. Η # 4 τον αριθμό των κυττάρων PFTK1-siRNA ήταν αυξημένη σε G0 /G1 φάση και η αντίστοιχη μείωση παρατηρήθηκε στη φάση S Συγκρίνετε με Ctrl. Το αριστερό μέρος έδειξε MGC803 κύτταρα επιμολυσμένα με Ctrl, σημαία-PFTK1. Το δεξί μέρος έδειξε MGC803 κύτταρα επιμολυσμένα με Ctrl, PFTK1-siRNA # 4. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν υπερέκφραση της PFTK1 μπορεί να αυξήσει τα κύτταρα πολλαπλασιασμού, ενώ νοκ ντάουν PFTK1 μειώσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων.

Η

Το σηματοδοτικό μονοπάτι της PFTK1 στην προώθηση της διάδοσης και της μετανάστευσης

Για να μελετήσει περαιτέρω το μηχανισμό της οποίας PFTK1 ρυθμιζόμενη γαστρική καρκινικά κύτταρα πολλαπλασιασμός, μετανάστευση, εισβολή, αποφασίσαμε να ανιχνευθεί η σχετική πρωτεΐνη αλλάξει με κηλίδα Western όταν PFTK1 υπερεκφράστηκε ή knockdown στο MGC803. Όπως αναφέρθηκε, PFTK1 θα μπορούσαν να ενεργοποιήσουν noncanonical σηματοδότηση Wnt σε ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [17]. Wnt σηματοδότησης είχε σχέση με όγκους πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση. Προς τα πάνω ρύθμιση PFTK1 ενεργοποιηθεί εν μέρει Dvl2, Naked1, ΜΜΡ2 και αυξημένα την έκφραση του ρυθμιστή του κυτταρικού κύκλου κυκλίνης Ε, αλλά δεν άλλαξε Dvl1, β-κατενίνης. Τι περισσότερο, βρήκαμε ότι το νοκ ντάουν της ενδογενούς έκφρασης PFTK1 θα μπορούσε να μειωθεί Dvl2, Naked1, ΜΜΡ2, η έκφραση της κυκλίνης Ε, αλλά δεν άλλαξε Dvl1, β-κατενίνης (Σχήμα 7).

Τα αποτελέσματα της PFTK1 στην έκφραση της κυκλίνης Ε, PCNA, ΜΜΡ2, Wnt που σχετίζονται με οδούς, όπως η β-κατενίνης, Dvl1, Dvl2, Naked1 με κηλίδα western. Η αύξηση της έκφρασης PFTK1 promted την έκφραση της κυκλίνης Ε, PCNA, Dvl2, Naked1, ΜΜΡ2, αλλά δεν είχε αλλάξει την έκφραση του β-κατενίνης, Dvl1. Ενώ χτυπήσει κάτω ενδογενούς έκφρασης PFTK1 έδειξε το αντίθετο αποτέλεσμα.

Η

Συζήτηση

Όντας ένα από τα υψηλότερα καρκίνων επίπτωση στον κόσμο, το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών του καρκίνου του στομάχου είναι μικρότερη από 20% -25% στις ΗΠΑ, την Ευρώπη, και την Κίνα, λόγω της εύκολης για υποτροπή και μετάσταση υψηλό ποσοστό σε μετεγχειρητικούς [2]. λοίμωξη από Helicobacter pylori, η αλλαγή του ογκογονιδίου και ογκοκατασταλτικών γονιδίων, η ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου και την ενεργοποίηση της τελομεράσης συνδέονται με καρκίνο του στομάχου [21]. Ανώμαλη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου στην ανάπτυξη του καρκίνου του στομάχου έχει το θέμα της έρευνας τα τελευταία χρόνια. Η ακριβής και αυστηρή ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου εξαρτάται από ορισμένους παράγοντες ελέγχου συμπεριλαμβανομένων των εξαρτώμενων κινασών κυτταρικού κύκλου (CDKs), της πρωτεΐνης του κυτταρικού κύκλου (κυκλίνες), και εξαρτάται από την κινάση αναστολείς του κυτταρικού κύκλου (CKIs). Όλοι οι άνθρωποι είναι εξοικειωμένοι με 11 κλασικά CDKs (CDK1-11), PFTK1 ως εξαρτώμενο νέο κυτταρικό κύκλο κινάση βρίσκεται όχι κατά μήκος και η σύνδεση μεταξύ PFTK1 και καρκίνους δεν είναι πολλά, και σε καρκίνο του στομάχου [22].

PFTK1 αρχικά βρίσκονται στο νευρικό σύστημα αρουραίων [23]. PFTK1 ρυθμίζει τη διαφοροποίηση των ολιγοδενδροκυττάρων μέσω PI3K /AKT οδό [13]. Η πιο πρόσφατη έρευνα ανέφερε ότι PFTK1 υπερεκφράζεται στον ανθρώπινο καρκίνο του οισοφάγου, ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα και συνεργάτες με την ανάπτυξη του όγκου, τη μετανάστευση και την εισβολή [14,24]. Στη μελέτη μας, ερευνήσαμε αν η έκφραση της PFTK1 συμμετείχε σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή. Κατά την πρώτη, αποδείξαμε ότι PFTK1 εξέφραζαν υψηλότερα σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς από ότι σε γειτονικό ιστούς μη όγκου με κηλίδα western ότι, σύμφωνα με τα αποτελέσματα σε άλλους καρκίνους (Σχήμα 1). Στη συνέχεια, ανοσοϊστοχημεία έδειξε υψηλή έκφραση PFTK1 σχετιζόταν με το βαθμό του όγκου, το βάθος διείσδυσης, λεμφαδένων εισβολή, καθώς και Ki-67 σε 161 γαστρικό καρκινικούς ιστούς. Αυτά τα ευρήματα οδήγησαν PFTK1 θα μπορούσε να επηρεάσει γαστρικού καρκίνου πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση. Kaplan-Meier ανάλυση αποκάλυψε ότι PFTK1 προβλέψει κακή συνολική επιβίωση (Σχήμα 3Β). Η πολυπαραγοντική ανάλυση χρησιμοποιώντας το μοντέλο αναλογικών κινδύνων του Cox πρότεινε PFTK1 ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό δείκτες της συνολικής επιβίωσης των ασθενών. Για την περαιτέρω κατανόηση του κανονιστικού επίδραση της PFTK1 σε γαστρικά κύτταρα, MGC803 κύτταρα επιμολυσμένα με PFTK1-siRNA # 4, σημαία-PFTK1

in vitro

(Σχήμα 4). Το Σχήμα 6 έδειξαν PFTK1 θα μπορούσε να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό με CCK-8, δοκιμασίας σχηματισμού αποικίας. Ταυτόχρονα, PFTK1 αύξησε τον μετασχηματισμό φάσης G1-S σύμφωνα με την ροή κυτταρομετρίας, που συμπίπτει με την διαπίστωση της PFTK1 σε ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [10]. Κυκλίνη Ε ήταν ένας από τους σημαντικούς ρυθμιστικούς παράγοντες κατά την διάρκεια μετασχηματισμό φάσης G1-S και της Κυκλίνης Ε πρωτεΐνη θα μπορούσε να ορίσει ως προγνωστικός παράγοντας για ασθενείς με καρκίνο του στομάχου [25]. Είναι ενδιαφέρον, το επίπεδο PFTK1 αυξήθηκε μετά την επιμόλυνση με σημαία-PFTK1 consistented με PCNA, ΜΜΡ2 και κυκλίνης Ε (Σχήμα 7).

Επιπλέον, εξετάσαμε επίσης αν PFTK1 θα μπορούσαν να επηρεάσουν τα κύτταρα μετανάστευση και την ικανότητα εισβολής από την επούλωση των πληγών αναλύσεις προσδιορισμού και φρεατίων. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η υπερέκφραση του PFTK1 θα μπορούσε να ενισχύσει τα κύτταρα μετανάστευση και εισβολή, το οποίο θα μπορούσε να οφείλεται σε αλλαγή της κατάντη των οδών σήματος PFTK1 (Σχήμα 5). Όπως αναφέρεται στο ηπατοκυτταρικό καρκίνο, PFTK1 ή /και CCNY μόνο θα μπορούσε να ενεργοποιήσει μη κανονικά σηματοδότηση Wnt προκαλώντας κύτταρα μετανάστευση και εισβολή [17]. Wnt οδοί περιελάμβανε την κανονική Wnt /σηματοδότηση β-κατενίνης και μη κανονικά σηματοδότηση Wnt τρόπο (Wnt /Ca

2+ και Wnt /PCP). Wnt τρόπος σηματοδότηση έπαιξε σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη καρκίνων και ρυθμιζόμενων πολλαπλασιασμό κυττάρων, μετανάστευση και εισβολή [26]. Στη συνέχεια, βρήκαμε έκφραση των πρωτεϊνών β-κατενίνης, Dvl1, Dvl2, Naked1. Dvl2 και Naked1 ήταν συσχετίζεται θετικά με PFTK1 και τις σχετικές κανονική Wnt /β-κατενίνης πρωτεϊνών β-κατενίνης, Dvl1 δεν είχε αλλάξει (Σχήμα 7).