Αφηρημένο

Ιστορικό

Υπήρξαν αντικρουόμενες αναφορές σχετικά με τη λειτουργία των miR-20a σε μια ποικιλία τύπων καρκίνου και εμείς στο παρελθόν βρήκε να απορυθμίζεται σε σποραδικές έναντι οικογενούς θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς . Σε αυτή τη μελέτη, μελετήθηκε η έκφραση του miR-20a σε κανονική, καλοήθεις και κακοήθεις δείγματα του θυρεοειδούς, και την επίδρασή της σε καρκινικά κύτταρα του θυρεοειδούς

in vitro

και

in vivo

.

Μεθοδολογία /Principal Εκτίμηση

Η έκφραση του miR-20a σε φυσιολογικούς, καλοήθεις και κακοήθεις θυρεοειδούς ιστού προσδιορίσθηκε με ποσοτική RT-PCR. τα καρκινικά κύτταρα του θυρεοειδούς επιμολύνθηκαν με miR-20a και την επίδραση επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, σχηματισμός σφαιροειδές όγκου και εισβολή αξιολογήθηκε. γονίδια-στόχοι του miR-20 προσδιορίστηκαν με ανάλυση της έκφρασης του mRNA του γονιδιώματος σε επίπεδο με miR-20a υπερέκφραση σε καρκίνο του θυρεοειδούς κύτταρα και βάση δεδομένων πρόβλεψης στόχου. γονίδια-στόχοι επικυρώθηκαν με ποσοτική PCR και ανοσοστύπωση, και προσδιορισμούς λουσιφεράσης. έκφραση MiR-20a ήταν σημαντικά υψηλότερη σε αναπλαστικό καρκίνο του θυρεοειδούς σε σχέση με διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς, και καλοήθεις και φυσιολογικούς ιστούς θυρεοειδούς. MiR-20α σημαντικά ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων θυρεοειδούς

in vitro

(p & lt? 0,01) και

in vivo

(p & lt? 0.01), ο σχηματισμός σφαιροειδές όγκου (p & lt? 0,05) και της εισβολής (p & lt? 0.05) σε πολλαπλές κυτταρικές σειρές καρκίνου του θυρεοειδούς. Βρήκαμε ότι

LIMK1

ήταν ένας στόχος του miR-20a σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του θυρεοειδούς και την άμεση νοκ ντάουν της LIMK1 ανακεφαλαιώνει την επίδραση του miR-20a στον καρκίνο του θυρεοειδούς κύτταρα.

Συμπεράσματα /Σημασία

για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη που αποδεικνύει ότι το miR-20a παίζει ένα ρόλο ως καταστολέας των όγκων στα καρκινικά κύτταρα του θυρεοειδούς και των στόχων

LIMK1

. Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν την υπερέκφραση του miR-20a σε αναπλαστικό καρκίνο του θυρεοειδούς αντενεργεί εξέλιξης του καρκίνου του θυρεοειδούς και μπορεί να έχει θεραπευτικές δυνατότητες

Παράθεση:. Xiong Υ, Zhang L, Kebebew Ε (2014) MiR-20α απορυθμίζεται σε αναπλαστικό καρκίνο του θυρεοειδούς και Στόχοι

LIMK1

. PLoS ONE 9 (5): e96103. doi: 10.1371 /journal.pone.0096103

Επιμέλεια: Jun Li, η Sun Yat-sen University Medical School, Κίνα

Ελήφθη: 31η Ιανουαρίου του 2014? Αποδεκτές: 3 του Απρίλη 2014? Δημοσιεύθηκε: 23 Μαΐου, 2014

Copyright: © 2014. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας, Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος του θυρεοειδούς είναι η πιο κοινή ενδοκρινική καρκίνου και μία από τις ταχύτερα αναπτυσσόμενες διαγνώσεων καρκίνου στις Ηνωμένες Πολιτείες [1], [2]. καρκίνων του θυρεοειδούς προέρχονται από θυλακιώδη κύτταρα και παραθυλακιώδη κύτταρα [3], [4]. καρκίνων του θυρεοειδούς που προέρχονται από θυλακιώδη κύτταρα αντιπροσωπεύουν πάνω από το 95% όλων των περιπτώσεων καρκίνου του θυρεοειδούς και κατατάσσονται σε τέσσερις μεγάλες ιστολογικές ομάδες (θηλώδους καρκίνου του θυρεοειδούς (PTC), θυλακιώδη καρκίνο του θυρεοειδούς (FTC), καρκίνωμα Hürthle (HCC), και αναπλαστικό καρκίνωμα του θυρεοειδούς (ATC)). Οι Τα microRNAs (miRNAs) έχει αποδειχθεί ότι απορυθμίζεται σε καρκίνους του θυρεοειδούς που προέρχονται από θυλακιώδη κύτταρα [5] – [7]. MiRNAs είναι μικρά, μη κωδικοποιητική RNAs, τα οποία έχουν μήκος περίπου 21 νουκλεοτίδια και ρυθμίζουν την γονιδιακή έκφραση [8], [9]. Γενικά, miRNAs προσδένονται στο 3′-αμετάφραστη περιοχή (3′-UTR) του γονιδίου στόχου, οδηγώντας σε καταπιεσμένη μετάφραση ή αποικοδόμηση του mRNA [9], [10].

MiR-20α είναι μέλος του συμπλέγματος miR-17-92 που βρίσκεται στο χρωμόσωμα 13. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι miR-20 μπορεί να λειτουργήσει για να προάγουν ή αναστέλλουν τα χαρακτηριστικά γνωρίσματα της κακοήθους φαινοτύπου των κυττάρων σε με ειδικό τρόπο κυτταρικό τύπο [11] – [13]. Για παράδειγμα, miR-20a υπερέκφραση αναστέλλει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, την εισβολή και μετάσταση όγκου σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού [11], [12]. Από την άλλη πλευρά, καταστέλλει miR-20a

E2F1

έκφραση σε ανθρώπινα Β κυτταρική γραμμή Ρ-493-6, ένας μεταγραφικός παράγοντας που προάγει την πρόοδο της φάσεως G1-S σε κύτταρα θηλαστικών [14]. Το εύρημα αυτό υποδηλώνει ότι η λειτουργία miR-20a μπορεί να είναι διαφορετική ανάλογα με τον τύπο του κυττάρου. Έχουμε διαπιστώσει προηγουμένως miR-20a να ρυθμίζεται προς τα πάνω στην οικογενή PTC σε σύγκριση με σποραδικές περιπτώσεις, που πιστεύεται ότι είναι πιο επιθετική [3], [15]. Takakura et al. [16] διαπίστωσε επίσης ότι miRNAs του συμπλέγματος miR-17-92 (miR-17-3p, -17-5p, -18a, -19a, -20a, -19β, και -92-1) έχουν υπερεκφράζεται σε κύτταρο ATC γραμμές.

στην παρούσα μελέτη, χαρακτηρίζουν την έκφραση του miR-20a σε κανονική, καλοήθεις και κακοήθεις δείγματα του θυρεοειδούς, και μελέτησε την επίδρασή της στον καρκίνο του θυρεοειδούς κυττάρων

in vitro

και

στο vivo

. Πραγματοποιήσαμε επίσης ανάλυση των γονιδίων στόχων miR-20a χρησιμοποιεί ως βάση δεδομένων την πρόβλεψη-στόχο και την έκφραση του γονιδιώματος σε επίπεδο με miR-20a υπερέκφραση, και να επικυρωθούν τα γονίδια-στόχους με δοκιμασία λουσιφεράσης. Τέλος, δείχνουμε ότι LIMK1 ανακεφαλαιώνει τα αποτελέσματα του miR-20a στον καρκίνο του θυρεοειδούς κύτταρα.

Υλικά και Μέθοδοι

δείγματα του Ανθρώπου θυρεοειδούς ιστών και τα πειράματα σε ζώα

δείγματα θυρεοειδούς ιστού ήταν καταψύχθηκαν κατά τη στιγμή της θυρεοειδεκτομή κάτω από ένα πρωτόκολλο που εγκρίθηκε από το Γραφείο Ανθρωπίνων Θέμα Ερευνών στο Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας το Κέντρο Κλινικής, μετά από έγγραφη συγκατάθεση. Όλα τα δείγματα ιστού υποβλήθηκαν σε δευτερεύουσα πρόσθετη επανεξέταση ιστολογία από ενδοκρινείς παθολόγο για να επιβεβαιωθεί η διάγνωση και τον εντοπισμό δειγμάτων με καρκινικά κύτταρα μεγαλύτερη από 80%. δείγματα ιστού ταξινομήθηκαν ως κανονικό, καλοήθεις (πολυοζώδη βρογχοκήλη, θυλακιώδες αδένωμα, αδένωμα κυττάρων Hürthle), διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς [DTC] (κλασικό PTC, θυλακιώδη παραλλαγή της PTC, FTC), και ATC. Η κανονική θυρεοειδούς ιστός ελήφθη από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε θυρεοειδεκτομή για καλοήθη ή κακοήθη ασθένεια από την αντίπλευρη θυρεοειδή λοβό. Σε όλες, 8 ATC, 22 DTC, 24 καλοήθεις, και 11 δείγματα κανονική θυρεοειδικού ιστού αναλύθηκαν.

Η Εθνική Επιτροπή Cancer Institute Animal Care and Use ενέκρινε τα πρωτόκολλα για την φροντίδα των ζώων και το χειρισμό στην παρούσα μελέτη. Κάθε ποντίκι αντιμετωπίζουν σημαντικά ανώμαλα νευρολογικά συμπτώματα, αιμορραγία από κάθε στόμιο, μειωμένη κινητικότητα, γρήγορη απώλεια βάρους, εξουθενωτική διάρροια, τραχύ τρίχωμα, κυρτή στάση του σώματος, δυσκολία στην αναπνοή, λήθαργος, επίμονο κατάκλιση, ίκτερο, αναιμία, αυτο-που προκαλείται από τραύμα, καθίσταται ετοιμοθάνατα ή αλλιώς γίνεται σε θέση να λάβουν τροφή ή νερό, ή με έναν όγκο 2 cm ή μεγαλύτερη σε διάμετρο έχει άμεση ευθανασία από CO

2 θαλάμου.

Οι κυτταρικές σειρές και συνθήκες καλλιέργειας

Ανθρώπινα θυρεοειδούς καρκινικές κυτταρικές σειρές XTC-1 (HCC) (ευγενική προσφορά από τον Dr. Orlo H. Clark (San Francisco, CA)) [17], FTC-133 (FTC) (ευγενική προσφορά από τον Dr Peter Goretzki (Γερμανία)), και TPC-1 (PTC) (ευγενώς από τον Dr. Nabuo Satoh (Ιαπωνία) [18]) διατηρήθηκαν σε ϋΜΕΜ με 4500 mg /L D-γλυκόζη και L-γλουταμίνη, και 110 mg /L πυρουβικό νάτριο, συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS), της θυρεοειδοτρόπου ορμόνης (TSH) (10 mU /ml), πενικιλλίνη (10000 U /ml), στρεπτομυκίνη (10.000 U /mL), Fungizone (250 mg /mL), και ινσουλίνη ( 10 μg /mL) σε ένα πρότυπο υγροποιημένο επωαστή στους 37 ° C σε ένα 5%

2 και 95% O

2 ατμόσφαιρα CO. Ελεύθερα ορού μέσα (DMEM-F12 media), συμπληρωμένο με τέσσερα ορμόνες (ινσουλίνη [10 μg /mL], σωματοστατίνη [10 ng /mL], τρανσφερρίνη [5 μg /mL], και υδροκορτιζόνη [0,36 ng /mL]), χρησιμοποιήθηκε για τις λειτουργικές μελέτες γονιδιωματική. Η ανθρώπινη κυτταρική γραμμή ATC C643 παρασχέθηκε ευγενώς από τον Dr. Rebecca Schweppe, με την άδεια του Δρ N.-E. Heldin (Σουηδία) [18], και διατηρήθηκε σε RPMI (Invitrogen, Carlsbad, CA) που περιέχει 10% FBS. Όλες οι κυτταρικές σειρές επικυρώνονται από μικρή διαδοχική επανάληψη στις 9 Οκτωβρίου, 2013 και η κυτταρική σειρά XTC-1 επίσης επιβεβαιώθηκε να εκφράσουν θυρεοσφαιρίνης και νάτριο συμμεταφορέα ιωδίου όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [17].

Mirna επιμόλυνσης

πρόδρομος Ώριμη miRNA (προ-miR-20a? Applied Biosystems, Foster City, CA) διαμολύνθηκε σε κύτταρα σε συγκέντρωση 25 ηΜ χρησιμοποιώντας Λιποφεκταμίνη RNAiMAX (Invitrogen, Carlsbad, CA), ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Ένα ολιγονουκλεοτίδιο δεν αντιπροσωπεύει καμία γνωστή miRNA (Pre-miR miRNA πρόδρομα μόρια-αρνητικού ελέγχου # 1? Applied Biosystems, Foster City, CA). Χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός μάρτυρας

siRNA επιμόλυνση

LIMK1 siRNA #A (ID s8188), siRNA #B (ID s8189) και siRNA #C (ID s 8190) (Applied Biosystems, Foster City, CA) διαμολύνθηκαν σε κύτταρα σε συγκέντρωση 60 ηΜ χρησιμοποιώντας Λιποφεκταμίνη RNAiMAX (Invitrogen, Carlsbad , CA), ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Silencer Επιλέξτε Αρνητικός μάρτυρας # 1 siRNA (Applied Biosystems) χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος.

απομόνωση RNA και ποσοτική πραγματικού χρόνου RT-PCR

Το ολικό RNA απομονώθηκε από τις κυτταρικές γραμμές χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA). Η δοκιμασία TaqMan miRNA (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση του επιπέδου έκφρασης των miRNAs. Ολικό RNA μεταγράφηκε αντίστροφα με ένα miRNA-ειδικό εκκινητή, ακολουθούμενη από PCR πραγματικού χρόνου με ανιχνευτές TaqMan. U6 χρησιμοποιήθηκε ως ενδογενή έλεγχο. Η σχετική ποσότητα των mRNAs σε

LIM κινάση 1

(

LIMK1

) προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία TaqMan (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) σε ένα σύστημα HT ΑΒΙ 7900, και την ανθρώπινη

GAPDH

χρησιμοποιήθηκε ως ενδογενή έλεγχο. Η μέθοδος ΔΔ Ct χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό των επιπέδων έκφρασης.

Western blot λύματος

ολόκληρων κυττάρων παρασκευάστηκε με ρυθμιστικό RIPA (Thermo Scientific, Rockford, IL). πρωτεϊνικό επίπεδο LIMK1 προσδιορίστηκε με στύπωμα Western χρησιμοποιώντας ένα πολυκλωνικό κουνελιού αντι-LIMK1 αντίσωμα (αραίωση 1:1500? Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, ΜΑ). πρωτεΐνη GAPDH ανιχνεύθηκε με τη χρήση ενός μονοκλωνικού ποντικού (# 0411) αντίσωμα-GAPDH αντι (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA).

Δοκιμασία Πολλαπλασιασμού

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας την CyQUANT Κυττάρων Δοκιμασία Πολλαπλασιασμού (Invitrogen, Carlsbad, CA), σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Η ένταση φθορισμού μετρήθηκε χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη μικροπλακών φθορισμού (Molecular Devices, Sunnyvale, CA), με διέγερση στα 485 nm και εκπομπή ανίχνευση στα 538 nm.

δοκιμασία Invasion

Κινητή εισβολή μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το BD BIOCOAT Matrigel εισβολής Επιμελητηρίου (BD Biosciences, Bedford, ΜΑ), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Κυττάρων μέσο καλλιέργειας με 10% FBS χρησιμοποιήθηκε ως χημειοελκτικό στο κάτω φρεάτιο του θαλάμου Boyden. Μετά επανυδάτωση της βασικής μεμβράνης, θυρεοειδούς καρκινικά κύτταρα σπάρθηκαν στο άνω διαμέρισμα του θαλάμου σε μέσο ελεύθερο ορού (4 × 10

4 κύτταρα ανά φρεάτιο). Μετά από επώαση στους 37 ° C σε 5% CO

2 για 22 ώρες, τα μη εισβάλλοντα κύτταρα απομακρύνθηκαν από την άνω επιφάνεια, και τα κύτταρα που είχαν εισβάλει τη μεμβράνη στην κάτω επιφάνεια χρώσθηκαν με Diff-Quik Stain Set (Siemens Healthcare Diagnostics, Inc., Newark, DE). Εικόνες ελήφθησαν από την μεμβράνη του κάθε ενθέματος κάτω από ένα μικροσκόπιο (50 Χ μεγεθύνσεις) με ψηφιακή φωτογραφική μηχανή. Οι εικόνες προβάλλονται σε οθόνη του υπολογιστή και τα κύτταρα σε επιμέρους πεδία κάθε ενθέτου με το χέρι μετρήθηκαν. Το ποσοστό των κυττάρων που εισβάλλουν προσδιορίστηκε με μέτρηση του αριθμού των κυττάρων που εισβάλλουν μέσω του Matrigel μήτρας και της μεμβράνης σε σχέση με τον αριθμό των κυττάρων που μεταναστεύουν μέσω της μεμβράνης των ενθέτων ελέγχου χωρίς την μήτρα Matrigel. Ένας δείκτης εισβολή υπολογίστηκε με βάση την αναλογία του ποσοστού της εισβολής κυττάρων διαιρούμενη με την επί τοις εκατό της εισβολής κυττάρων των κυττάρων ελέγχου.

σφαιροειδές καλλιέργεια

Δύο ημέρες μετά την επιμόλυνση miRNA, FTC-133 κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν, μετρήθηκαν, αιωρούνται εκ νέου σε μέσο καλλιέργειας, και τοποθετήθηκαν σε ένα Ultra Low πλάκα Cluster (Costar, Corning, ΝΥ) σε 3,5 × 10

4 ανά φρεάτιο. Οι πλάκες καλλιεργήθηκαν στους 37 ° C σε 5% CO

2, και το μέσο αλλάχθηκε κάθε 2 έως 3 ημέρες. Μετά από 2 εβδομάδες καλλιέργειας, τα κύτταρα χρωματίστηκαν με κρυσταλλικό ιώδες και φωτογραφήθηκαν κάτω από ένα μικροσκόπιο. Η συνολική έκταση που καταλαμβάνεται από σφαιροειδή μέσα σε μια εικόνα μετρήθηκε με περικυκλώνει την περίμετρο κάθε σφαιροειδές, σημειώνοντας ολόκληρη την περιοχή, καθώς και τον υπολογισμό των αριθμών pixel χρησιμοποιώντας το λογισμικό ImageJ (Maryland, USA).

μελέτες όγκων ξενομοσχεύματος

FTC-133 κύτταρα επιμολυσμένα με miR-20a ή miR-NC εμβολιάσθηκαν υποδορίως (10

5 βιώσιμα κύτταρα) στην αριστερή και τη δεξιά πλευρά των αθυμικών γυμνών ποντικών. Οι όγκοι μετρήθηκαν δύο φορές την εβδομάδα με παχύμετρο, και οι όγκοι υπολογίστηκαν ως μήκος Χ πλάτος Χ ύψος. Δείγματα αυτοψίας όγκου φωτογραφήθηκαν για να τεκμηριωθεί το ακαθάριστο μορφολογία, και στη συνέχεια ζυγίστηκαν δείγματα.

δοκιμασία Μετανάστευση

μετανάστευση καρκινικών κυττάρων του θυρεοειδούς αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία γρατσουνιά-τραύματος. 150.000 κύτταρα επιμολύνθηκαν με miRNAs (25 ηΜ) ή siRNAs (60 ηΜ) και επιστρώθηκαν σε πλάκες έξι φρεατίων και αφέθηκαν να προσκολληθούν και να αναπτυχθούν για 44 ώρες (miRNAs) ή 72 ώρες (siRNAs). Στη συνέχεια, τρεις κάθετες τραύματα έγιναν με ένα στείρο ρύγχος πιπέτας 10 μΙ και μία οριζόντια γραμμή έγινε στις τρεις γραμμές, έτσι ώστε τα κύτταρα θα μπορούσε να παρατηρηθεί στο ίδιο σημείο. Τα κύτταρα επιθεωρήθηκαν κάθε 12 ώρες και μετρήσεις που λαμβάνονται μέχρι 24 ώρες.

array mRNA έκφραση του γονιδιώματος-ευρεία

κύτταρα FTC-133 ήταν επιμολυσμένα με miR-20a και miR-NC. Τρεις ημέρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα συλλέχθηκαν. Ολικό RNA εξήχθη από κύτταρα χρησιμοποιώντας ΤπζοΙ (Invitrogen, USA). ποιότητα RNA διασφαλίστηκε χρησιμοποιώντας την Agilent RNA 6000 Νανο kit και το Bioanalyzer 2100. Εκατόν πενήντα νανογραμμάρια ολικού RNA χρησιμοποιήθηκε για τη δημιουργία του cDNA αντίστροφη μεταγραφή, τη σύνθεση, την ενίσχυση, τον κατακερματισμό, και τερματικό επισήμανσης με τη GeneChip WT Sense Target επισήμανση και τον έλεγχο αντιδραστήρια (Affymetrix, Santa Clara, CA). Περίπου 25 ng /μΙ cDNA υβριδοποιήθηκε στο Affymetrix Human Gene 1,0 ST Array GeneChip. Οι συστοιχίες πλύθηκαν και χρωματίζονται χρησιμοποιώντας το πρωτόκολλο ρευστών διαδικασία FS450_0007 σε ένα ρευστών Σταθμός Affymetrix 450. Οι εντάσεις καθετήρα σαρώθηκαν με σαρωτή GeneChip 3000. Τα ανεπεξέργαστα δεδομένα ομαλοποιήθηκε και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Partek Γονιδιωματική Σουίτα (Partek, Inc., St. Louis , ΜΟ). ανάλυση διακύμανσης χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστούν τα σύνολα ανιχνευτή που ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των δύο ομάδων. Ο κατάλογος γονίδιο διηθείται με πολλαπλή μεταβολή αποκοπής του 1,5, με αποτέλεσμα την παραγωγή σημαντικής διαφορικής έκφρασης σε p ≤ 0,05 και 1,5 φορές ή περισσότερες διαφορές.

Οι προβλέψεις των μικρο-RNA στόχους

TargetScan 5.1 (https://targetscan.org/) χρησιμοποιήθηκε για τον εντοπισμό πιθανών στόχων για τη ρύθμιση miR-20a σε θυρεοειδικού ιστού.

λουσιφεράσης δημοσιογράφος δοκιμασία

Το ζευγάρι 1223 βάσεων 3 ‘ -UTR της ανθρώπινης

LIMK1

κλωνοποιήθηκε σε ένα άδειο φορέα αναφοράς λουσιφεράσης pEZX-MT01 (GeneCopoeia, Rockville, MD), δημιουργώντας ένα άγριου τύπου

LIMK1

UTR κατασκεύασμα λουσιφεράσης (pEZX-LIMK1 -UTR). Για τον προσδιορισμό διπλής λουσιφεράσης, τα κύτταρα FTC-133 καλλιεργήθηκαν εις τριπλούν σε πλάκες 12 φρεατίων και συν-επιμολύνθηκαν με 0.25 μ§ του κατασκευάσματος ανταποκριτή και 15 pmol του miR-20a ή miR-NC χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Στις 24 ώρες, τα κύτταρα λύθηκαν και αναλύθηκαν για τόσο πυγολαμπίδας και λουσιφεράσης Renilla χρησιμοποιούν Luc-Pair miR Λουσιφεράσης Assay Kit (GeneCopoeia, Rockville, MD) σε αναγνώστη μικροπλακός SpectraMax M5e (Molecular Device, Sunnyvale, CA), σύμφωνα με τους κατασκευαστές «οδηγίες.

η ανάλυση των δεδομένων

Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα του μέσου όρου. Για να προσδιοριστεί η στατιστική σημαντικότητα, χρησιμοποιήθηκαν ανάλυση διακύμανσης και δοκιμασία t, ανάλογα με την περίπτωση. Μία τιμή ρ μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

MiR-20α υπερεκφράζεται στον αναπλαστικό καρκίνο του θυρεοειδούς (ATC)

Βρήκαμε το επίπεδο έκφρασης του miR -20a ήταν σημαντικά υψηλότερη σε σχέση με το ATC DTC, καλοήθεις και φυσιολογικούς ιστούς θυρεοειδούς (Εικ. 1). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο επίπεδο έκφρασης miR-20a με

BRAF

κατάσταση μετάλλαξης (p = 0.62) ή την έκταση της νόσου (p = 0.70 για το μέγεθος του όγκου? ρ = 0,12 για μετάσταση λεμφαδένα) σε DTC ή PTC .

άξονας Υ αντιπροσωπεύει σχετικό επίπεδο έκφρασης του miR-20a κανονικοποιημένη σε U6 (2

-ΔΔCt αξία). Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ολικό RNA από 65 ανθρώπινους ιστούς (8 ενεργοποιημένα Τ-λεμφοκύτταρα, 22 DTC, 24 καλοήθεις, και 11 κανονικό). Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν το τυπικό σφάλμα της μέσης τιμής (* υποδηλώνει ρ & lt? 0,05).

Η

MiR-20α ρυθμίζει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του θυρεοειδούς, ο σχηματισμός σφαιροειδές, και εισβολή

υπερεκφράζεται miR-20a σε τέσσερις κυτταρικές σειρές καρκίνου του θυρεοειδούς (TPC-1, XTC-1, FTC-133, και C643) χρησιμοποιώντας miR-NC ως αρνητικός έλεγχος για να προσδιοριστεί η επίδρασή της επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων. MiR-20α υπερέκφραση ανέστειλε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων κατά 24% σε TPC-1 κύτταρα σε 144 ώρες (ρ & lt? 0.001), 34% σε XTC-1 κύτταρα σε 144 ώρες (ρ & lt? 0.001), 22% σε FTC-133 κύτταρα σε 144 ώρα (ρ & lt? 0.001), και 22% σε κύτταρα C643 κατά 216 ώρες (Σχ 2Α-D.). Έχουμε αξιολόγησε την επίδραση των miR-20a στην ανάπτυξη του όγκου

in vivo

. Βρήκαμε ότι ξενομοσχεύματα όγκου που προέρχεται από FTC-133 κύτταρα επιμολυσμένα με miR-20a ήταν σημαντικά μικρότερες από ξενομοσχεύματα όγκου από την ομάδα miR-NC (ρ & lt? 0,01) (Εικ. 2Ε), και τα βάρη των όγκων που προέρχονται από FTC-133 κύτταρα μορφομετατραπέντα με miR-20a ήταν επίσης σημαντικά μικρότερη από τα βάρη του όγκου στην ομάδα miR-NC (ρ & lt? 0,05). (Εικ. 2F)

(Α-Δ). καρκίνο του θυρεοειδούς τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, σύμφωνα με miR-20a υπερέκφραση. Ο άξονας Υ αντιπροσωπεύει τον αριθμό των κυττάρων. (Ε-ΣΤ) του καρκίνου του θυρεοειδούς

in vivo

ανάπτυξης,

ex vivo

συγκομιδές όγκου και βάρους. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν το τυπικό σφάλμα της μέσης τιμής (* υποδηλώνει ρ & lt? 0,05? ** υποδεικνύει ρ & lt? 0,01)

Η

Επίσης μελετήσαμε την επίδραση του miR-20a στο σχηματισμό σφαιροειδές καρκινικών κυττάρων του καρκίνου του θυρεοειδούς.. Η κυτταρική σειρά FTC-133 σχηματίζει σφαιροειδή, όταν καλλιεργούνται σε φιάλη εξαιρετικά χαμηλή προσκολλημένη πολιτισμό και με την επιμόλυνση miR-20a, ο αριθμός και το μέγεθος των σφαιριδίων μειώθηκαν σημαντικά (Εικ. 3).

(Α) Εκπρόσωπος εικόνα των σφαιριδίων σε καλλιέργεια με miR-20a υπερέκφραση. (Β) Ποσοτικοποίηση των σφαιροειδές διαφορά με miR-20a υπερέκφραση. Η συνολική έκταση που καταλαμβάνεται από τα σφαιροειδή εντός μίας εικόνας μετρήθηκε με την περικύκλωση της περιμέτρου κάθε σφαιροειδούς, σηματοδοτώντας το σύνολο της περιοχής, και τον υπολογισμό των αριθμών pixel με λογισμικό ImageJ (Maryland, USA). Ο άξονας Υ αντιπροσωπεύει το μέγεθος και τον αριθμό των σφαιροειδών. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν SEM (* υποδηλώνει ρ & lt? 0,05)

Η

MiR-20α υπερέκφραση ανέστειλε σημαντικά την κυτταρική διείσδυση κατά 85% σε TPC-1 κύτταρα (ρ & lt? 0,01)., 67% σε κύτταρα XTC-1 (ρ & lt? 0.001), 61% σε FTC-133 κύτταρα (ρ & lt? 0.001), και 87% σε κύτταρα C643 (ρ & lt? 0,01) (Εικ. 4). Καμία σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε μεταξύ των κυττάρων που επιμολύνθηκαν με miR-20a και miR-NC στη δοκιμασία επούλωση της πληγής χρησιμοποιώντας κύτταρα TPC-1 και τα κύτταρα FTC-133.

(Α) TPC-1 καρκίνος του θυρεοειδούς κυτταρική γραμμή, (Β) XTC-1 καρκίνος του θυρεοειδούς κυτταρική γραμμή, (Γ) FTC-133 καρκίνο του θυρεοειδούς κυτταρική γραμμή, και (Δ) C643 θυρεοειδούς καρκινικής κυτταρικής γραμμής. Ο άξονας Υ αντιπροσωπεύει τον δείκτη εισβολή των καρκινικών κυττάρων του θυρεοειδούς. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν το τυπικό σφάλμα της μέσης τιμής (* υποδηλώνει ρ & lt? 0,05? ** υποδεικνύει ρ & lt? 0,01? *** υποδεικνύει ρ & lt? 0.001)

Η

MiR-20α ρυθμίζει την έκφραση LIMK1 στον καρκίνο του θυρεοειδούς κύτταρα

Δεδομένου ότι το miR-20a είχαν επίδραση στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και εισβολή

in vitro

και

in vivo

, ήμασταν ενδιαφέρονται για τον προσδιορισμό του γονιδίου (ες) στόχος του ΜΙΚ 20α. Χρησιμοποιήσαμε δύο προσεγγίσεις για τον προσδιορισμό στόχων miR-20a: (1) μια βάση δεδομένων πρόβλεψης στόχο και (2) ανάλυση της έκφρασης του γονιδιώματος σε επίπεδο με miR-20a υπερέκφραση. Βρήκαμε 3635 προβλέψει γονιδίων στόχων για miR-20a χρησιμοποιώντας το λογισμικό TargetScan 5.0. Βρήκαμε 58 γονιδίων με αλλαγμένη έκφραση κατά την υπερέκφραση του miR-20a, χρησιμοποιώντας ανάλυση της έκφρασης του γονιδιώματος-ευρεία. Μεταξύ των 45 γονιδίων των οποίων το επίπεδο έκφρασης κάτω ρυθμισμένα, 37 γονίδια είχαν προβλεφθεί γονιδίων στόχων του miR-20a (Πίνακας 1).

LIMK1

ήταν η πιο μειωτικά γονίδιο από αυτή την ανάλυση και να έχει προηγουμένως αναφερθεί ότι έχει ένα ρόλο στην κύτταρο όγκου εισβολή και τη μετάσταση [19] – [22]. Έτσι, μας ενδιαφέρει να καθοριστεί εάν

LIMK1

ήταν άμεσο στόχο του miR-20a. Βρήκαμε ότι η έκφραση της πρωτεΐνης LIMK1 σε κυτταρικές γραμμές καρκίνου του θυρεοειδούς (C643, XTC-1, FTC-133, και TPC-1) μειώθηκε με miR-20a υπερέκφραση (Εικ. 5Α). Η μείωση της έκφρασης πρωτεΐνης LIMK1 παρατηρήθηκε μέχρι και 14 ημέρες μετά την επιμόλυνση (Εικ. 5Β).

(Α) ανοσοστυπώματα για έκφραση πρωτεΐνης LIMK1 σε C643, XTC-1, FTC-133, και TPC-1 κυτταρικές γραμμές, οι οποίες επιμολύνθηκαν είτε με miR-20a ή miR-NC για 72 ώρες. (Β) ανοσοστυπώματα για ενδογενή LIMK1 και GAPDH στην FTC-133 κύτταρα επιμολυσμένα είτε με miR-20a ή miR-NC για 7 ημέρες, 14 ημέρες και 21 ημέρες.

Η

Για να διαπιστώσετε εάν το αν

LIMK1

ήταν άμεσο στόχο του miR-20a, χρησιμοποιήσαμε ένα λουσιφεράσης φορέα ρεπόρτερ pEZX-MT01 με την 3′-UTR της ανθρώπινης

LIMK1

κλωνοποιηθεί σε αυτό, δημιουργώντας μια

LIMK1

3′-UTR κατασκεύασμα ανταποκριτή λουσιφεράσης (pEZX-LIMK1-UTR). Πραγματοποιήσαμε προσδιορισμοί λουσιφεράσης με την pEZX-LIMK1-UTR (φορέα με 3′-UTR του LIMK1) συν-διαμολύνθηκε στην κυτταρική γραμμή FTC-133 με miR-20a ή miR-NC. Βρήκαμε μειώθηκε σημαντικά δραστικότητα λουσιφεράσης με miR-20a υπερέκφραση σε σύγκριση με αρνητικό μάρτυρα (Σχ. 6Α), προτείνοντας ότι miR-20a ρυθμίζει προς τα κάτω απ ‘ευθείας

LIMK1

έκφρασης. Δεδομένου ότι το miR-20a υπερέκφραση μειωτικά

LIMK1

σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του θυρεοειδούς και το πιο σημαντικό αποτέλεσμα του miR-20a σε καρκινικά κύτταρα του θυρεοειδούς ήταν η αναστολή της κυτταρικής εισβολής, θα διερευνηθεί εάν

LIMK1

έχει μια επίδραση στην κυτταρική εισβολή και τη μετανάστευση. Βρήκαμε ότι knockdown του

LIMK1

οδήγησε σε μειωμένη κυτταρική εισβολή αλλά όχι τη μετανάστευση (Σχ. 6Β και C).

(Α) Η δραστικότητα λουσιφεράσης του pEZX-LIMK1-UTR στα κύτταρα FTC-133 όταν συν-επιμολυσμένα με miR-20a ή miR-NC. Όλα λουσιφεράση μετρήσεις έγιναν εις τριπλούν και οι αναγνώσεις έγιναν εις 24 ώρες μετά την επιμόλυνση. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν το τυπικό σφάλμα της μέσης τιμής (* υποδηλώνει ρ & lt? 0,05). (Β)

LIMK1

siRNA νοκ ντάουν στην FTC-133 θυρεοειδούς καρκίνου κυτταρική γραμμή. έκφραση LIMK1 mRNA με ποσοτική RT-PCR (άνω πλαίσιο). LIMK1 έκφραση πρωτεΐνης με στύπωμα Western (κάτω πίνακας). Τα δεδομένα που παρατίθενται είναι για 72 ώρες μετά την επιμόλυνση siRNA. (C) Κυτταρική εισβολή με LIMK1 νοκ ντάουν. Επιμόλυνση του

LIMK1

siRNA που ανέστειλαν FTC-133 καρκίνου του θυρεοειδούς κύτταρα εισβολή. Ο άξονας Υ αντιπροσωπεύει τον δείκτη εισβολή των καρκινικών κυττάρων του θυρεοειδούς. Τα δεδομένα που παρατίθενται είναι για 72 ώρες μετά την επιμόλυνση siRNA. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν το τυπικό σφάλμα της μέσης τιμής (* υποδηλώνει ρ & lt? 0,05? ** υποδεικνύει ρ & lt? 0,01). (D) Επιμόλυνση των

LIMK1

siRNAs δεν έχει καμία επίδραση στην μετανάστευση του FTC-133 καρκίνο του θυρεοειδούς κύτταρα. Ο άξονας Υ αντιπροσωπεύει την απόσταση του τραύματος. Τα δεδομένα που παρατίθενται είναι για 72 ώρες μετά την επιμόλυνση siRNA. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν το τυπικό σφάλμα του μέσου όρου.

Η

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε miR-20a ήταν υπερεκφράζεται σε ATC σε σύγκριση με το DTC, καλοήθη και φυσιολογικό θυρεοειδικού ιστού. Έκτοπη υπερέκφραση του miR-20a ανέστειλε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων θυρεοειδούς

in vitro

και

in vivo

, και ανέστειλε σημαντικά το σχηματισμό σφαιροειδές όγκου και εισβολή σε πολλαπλές κυτταρικές σειρές καρκίνου του θυρεοειδούς. Αυτό υποδηλώνει ότι miR-20a έχει μια λειτουργία κατασταλτική του όγκου όταν υπερεκφράζεται στον καρκίνο του θυρεοειδούς. Βρήκαμε επίσης ότι το miR-20a ρυθμίζει

LIMK1

έκφρασης, γεγονός που υποδηλώνει ότι

LIMK1

είναι ένα γονίδιο στόχο που μπορεί να μεσολαβήσει τα κατασταλτικά αποτελέσματα των miR-20a για την ανάπτυξη και την εισβολή του καρκίνου του θυρεοειδούς κυττάρων. Ωστόσο, ένας περιορισμός της μελέτης μας είναι ο μικρός αριθμός των δειγμάτων όγκου ATC αναλύθηκαν αλλά είναι μια σπάνια κακοήθεια.

MiR-20α και miR-17 (που ονομάζεται επίσης miR-17-5p) βρίσκονται μαζί στο miR-17-92 συμπλέγματος, και έχουν την ίδια ακολουθία σπόρων, AAAGUG. Αυτή η αλληλουχία των σπόρων μοιράζεται από τρία άλλα ώριμα ανθρώπινα miRNAs (miR-106a, -106b, και -20b), τα οποία βρίσκονται στο χρωμόσωμα 7 και το χρωμόσωμα Χ στόχους MiR-20α πολλά γονίδια, συμπεριλαμβανομένων των

VEGFA

,

TGFBR2

,

CCND1

,

IL-8

,

MAPK14

,

pCAF

,

RUNX1

,

STAT3

, και

E2F1

[11] – [14], [23] – [26]. Πολλά από αυτά τα γονίδια παίζουν σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, του κυτταρικού κύκλου, απόπτωση, και η κυτταρική μετανάστευση και εισβολή. MiR-20α μπορεί να λειτουργεί είτε ως καταστολέα όγκων ή ογκο-Mir, ανάλογα με το συγκεκριμένο κυτταρικό τύπο και εξωκυτταρικό παράγοντες [11] – [13]. Πράγματι, miR-20a υπερέκφραση έχει παρατηρηθεί ότι αναστέλλει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, την εισβολή και μετάσταση όγκου σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού [11], [12], υποδηλώνοντας έναν ρόλο καταστολέα όγκων για miR-20a συμφωνούν με τα δεδομένα μας σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του θυρεοειδούς και να είναι ρυθμισμένη προς τα πάνω σε ATC (15, 16). Σε αντίθεση, προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι miR-20a μπορεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών [27], και τη μετανάστευση και εισβολή σε ανθρώπινα τραχήλου καρκινικά κύτταρα, τα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών, και τα κύτταρα οστεοσαρκώματος [27] – [29], υποδηλώνοντας ότι λειτουργίες miR-20a ως ογκο-miR

Takakura και συνεργάτες ανέφεραν ότι το σύμπλεγμα miR-17-92 (miR-17-3p, -17-5p, -18a, -19a, -20a,. – 19β και -92 με 1) ήταν υπερεκφράζεται σε κυτταρικές σειρές ATC [16]. Χρησιμοποιώντας ποσοτική RT-PCR, έδειξαν ότι miR-17-3p και miR-17-5p υπερεκφράστηκαν σε τρεις από έξι δείγματα ιστού ATC σύγκριση με το φυσιολογικό δείγματα ιστών. Ανέφεραν ότι η επιμόλυνση των αναστολέων της miR-17-5p κατέστειλε το επίπεδο έκφρασης του miR-17 οικογένεια (MIR-17-5p, miR-20a, και miR-106a και β) σε κύτταρα ARO, με αποτέλεσμα την μείωση της κυτταρικής ανάπτυξης. Ωστόσο, η μελέτη μας για τη λειτουργία του miR-20a στον καρκίνο του θυρεοειδούς ήταν διαφορετική από την μελέτη που διεξήχθη από Takakura και οι συνεργάτες του. Πρώτον, υπερεκφράζεται ειδικά miR-20a να κατανοήσει τις συνέπειές της στην καρκινικών κυττάρων βιολογία τόσο αδιαφοροποίητα και διαφοροποιημένα κυτταρικές σειρές καρκίνου του θυρεοειδούς, και εμείς δεν χρησιμοποιούν αναστολείς των πολλών μελών του συμπλέγματος miR-17-92 με πιθανές επιπτώσεις off-στόχο, το οποίο δεν μπορεί να είναι επιλεκτική μόνο να miR-20a. Δεύτερον, έχουμε παρατηρήσει ότι Takakura et al. χρησιμοποιημένα κύτταρα κατεργασμένα μόνο με το αντιδραστήριο διαμόλυνσης ως αρνητικός έλεγχος αντί να χρησιμοποιούν κωδικοποιημένα ολιγονουκλεοτιδίων και χρησιμοποιήσαμε κωδικοποιημένα ολιγονουκλεοτίδια ως αρνητικός έλεγχος. Επιπροσθέτως, οι κυτταρικές σειρές που χρησιμοποιήσαμε (C643, TPC-1, FTC-133 και XTC-1) ήταν διαφορετικά από τις κυτταρικές σειρές που χρησιμοποιήθηκαν (ARO και FRO) με Takakura και συνεργάτες. Τέλος, οι κυτταρικές σειρές ARO που χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη με Takakura και οι συνεργάτες μπορεί να μην έχουν επικυρωθεί κυτταρικές σειρές καρκίνου του θυρεοειδούς [18].

Βρήκαμε που ρυθμίζει miR-20a

LIMK1

έκφραση στο θυρεοειδή καρκινικές κυτταρικές σειρές.

LIMK1

ρυθμίζεται από τη Rho μονοπατιού σηματοδότησης, και διαμορφώνει τη δυναμική της ακτίνης με τη ρύθμιση της δραστηριότητας των οικογενειακών κοφιλίνη πρωτεΐνες [30], [31]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι

LIMK1

διαδραματίζει κεντρικό και σημαντικό ρόλο στην κύτταρο όγκου εισβολή και τη μετάσταση [19] – [22].

LIMK1

υπερέκφραση αυξάνει την ικανότητα εισβολής των κυττάρων του μαστού και του καρκίνου του προστάτη

in vitro

και

in vivo

, και να χτυπήσει κάτω του

LIMK1

καταστέλλει του μαστού και του προστάτη καρκινικών κυττάρων εισβολής

in vitro

και

in vivo

[19] – [22], [32]. Με βάση τα αποτελέσματα από την έκφραση του γονιδίου του γονιδιώματος-ευρεία και στόχο την πρόβλεψη μας αναλύει, ρωτήσαμε αν miR-20a υπερέκφραση επηρεάζει

LIMK1

έκφρασης σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του θυρεοειδούς. Πράγματι, βρήκαμε ότι

LIMK1

σε όλες καρκίνου του θυρεοειδούς κυτταρικές σειρές (C643, XTC-1, FTC-133, και TPC-1) ανεστάλη με miR-20a υπερέκφραση, γεγονός που υποδηλώνει ότι η κατασταλτική δράση του miR -20a επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και της εισβολής μπορεί να προκαλείται από την επίδρασή της στο

LIMK1

. Πράγματι, η άμεση νοκ ντάουν του

LIMK1

είχε τα ίδια αποτελέσματα στην κυτταρική εισβολή και τη μετανάστευση, όπως παρατηρείται με την υπερέκφραση του miR-20a.

Δεδομένου του όγκου κατασταλτική επίδραση του miR-20a στα καρκινικά κύτταρα του θυρεοειδούς παρατηρήσαμε

in vitro

και

in vivo

, είναι πιθανό ότι η επιτυχής παράδοση των miR-20a μπορεί να οδηγήσει σε καταστολή του όγκου /παλινδρόμηση, ανεξάρτητα από τον τύπο του κυττάρου και ή βασικά επίπεδα miR-20a [ ,,,0],33]. Οι όγκου κατασταλτικά αποτελέσματα του miR-20a θα μπορούσε επίσης να διαμεσολαβείται από άλλα γονίδια από

LIMK1

. Εμείς επικυρωμένη

LIMK1

ως στόχος, επειδή είχε τη χαμηλότερη έκφραση με miR-20a υπερέκφραση αλλά όπως παρατίθενται στον Πίνακα 1 πολλά γονίδια υποψήφιος στόχος μεταβλήθηκε με miR-20a υπερέκφραση και έτσι θα μπορούσε επίσης να μεσολαβήσει όγκου κατασταλτικά αποτελέσματα της.

για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη που χαρακτηρίζουν την επίδραση του miR-20a για φαινότυποι των κυττάρων του καρκίνου του θυρεοειδούς και να δείξει ότι το miR-20a ρυθμίζει

LIMK1

έκφρασης. Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι η υπερέκφραση του miR-20a σε αναπλαστικό καρκίνο του θυρεοειδούς εξουδετερώνει την εξέλιξη του καρκίνου του θυρεοειδούς και μπορεί να έχει θεραπευτικές δυνατότητες [34].

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

συμπληρωματικό πίνακα

doi:. 10.1371 /journal.pone.0096103.s001

(DOC)