Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογηθεί η δραστικότητα των εκλεκτικών αναστολέων της πυρηνικής εξαγωγής (ΣΙΝΕ) ενώσεις που αναστέλλουν τη λειτουργία της πρωτεΐνης πυρηνικής εξαγωγής Exportin 1 (XPO1 /CRM1) έναντι των σκύλων κυτταρικές σειρές όγκων και να εκτελέσει μια κλινική δοκιμή φάσης Ι των KPT-335 σε σκύλους με αυθόρμητο καρκίνο να παρέχει μια προκαταρκτική εκτίμηση της βιολογικής δραστηριότητας και την ανεκτικότητα.

Μέθοδοι και Ευρήματα

Canine καρκινικές κυτταρικές σειρές που προέρχονται από μη-Hodgkin λέμφωμα (NHL), όγκων των μαστοκυττάρων, μελανώματος και οστεοσαρκώματος επέδειξαν αναστολή της ανάπτυξης και της απόπτωσης σε απόκριση προς νανομοριακές συγκεντρώσεις του ΣΙΝΕ ενώσεων? κύτταρα NHL ήταν ιδιαίτερα ευαίσθητη με IC

50 συγκεντρώσεις που κυμαίνονται 2-42 nM. Μια κλινική δοκιμή Φάσης Ι των KPT-335 πραγματοποιήθηκε σε 17 σκύλους με NHL (αφελείς ή υποτροπιάζει), μαστοκυττάρων όγκου ή οστεοσαρκώματος. Η μέγιστη ανεκτή δόση ήταν 1,75 mg /kg χορηγείται από το στόμα δύο φορές /εβδομάδα (Δευτέρα /Πέμπτη) αν και βιολογική δράση παρατηρήθηκε σε 1 mg /kg. Κλινικό όφελος (CB), συμπεριλαμβανομένων μερική ανταπόκριση στη θεραπεία (PR, n = 2) και σταθερή νόσο (SD, n = 7) παρατηρήθηκε σε 9/14 σκύλους με NHL με διάμεσο χρόνο έως την εξέλιξη της νόσου (TTP) ανταποκρίθηκαν των 66 ημερών (κυμαίνεται 35-256 ημέρες). Μια μελέτη επέκτασης δόσης διεξήχθη σε 6 σκύλους με NHL δεδομένου 1,5 mg /kg KPT-335 Δευτέρα /Τετάρτη /Παρασκευή? CB παρατηρήθηκε σε 4/6 σκύλους με διάμεσο TTP για ανταποκρίθηκαν 83 ημέρες (εύρος 35-354 ημέρες). Τοξικότητες ήταν κυρίως γαστρεντερικές αποτελείται από ανορεξία, απώλεια βάρους, εμετός και διάρροια και ήταν διαχειρίσιμο με υποστηρικτική φροντίδα, τη διαφοροποίηση της δόσης και χορήγηση χαμηλής δόσης πρεδνιζόνης? ηπατοτοξικότητα, ανορεξία και απώλεια βάρους ήταν η περιοριστική της δόσης τοξικότητες.

Συμπεράσματα

Αυτή η μελέτη παρέχει στοιχεία που αποδεικνύουν ότι η νέα βιοδιαθέσιμο από το στόμα αναστολέα XPO1 KPT-335 είναι ασφαλές και εκθέματα δραστηριότητα σε σχετικό, αυθόρμητη μεγάλες ζωικό μοντέλο καρκίνου. Τα δεδομένα από τη μελέτη αυτή παρέχει σημαντικές νέες πληροφορίες που θέτει τις βάσεις για την αξιολόγηση των ενώσεων ΣΙΝΕ στον ανθρώπινο καρκίνο

Παράθεση:. London CA, Bernabe LF, Barnard S, Kisseberth WC, Borgatti Α, Henson M, et al. (2014) προκλινική αξιολόγηση του μυθιστορήματος, βιοδιαθέσιμο από το στόμα εκλεκτικός αναστολέας της πυρηνικής εξαγωγής (ΣΙΝΕ) KPT-335 στην Αυθόρμητη Καρκίνο Canine: Αποτελέσματα εγώ Μελέτη Φάσης. PLoS ONE 9 (2): e87585. doi: 10.1371 /journal.pone.0087585

Επιμέλεια: Kristy L. Richards, Πανεπιστήμιο της Βόρειας Καρολίνας στο Chapel Hill, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 10 Ιούνη του 2013? Αποδεκτές: 28 Δεκέμβρη του 2013? Δημοσιεύθηκε: τέταρτης Φεβρουαρίου 2014

Copyright: © 2014 Λονδίνο et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι χρηματοδότες (Karyopharm Therapeutics) βοήθησε στο σχεδιασμό της μελέτης και επιμελήθηκε το χειρόγραφο μετά την παρασκευή του. Karyopharm Therapeutics είχε κανένα ρόλο στη συλλογή δεδομένων, την ανάλυση των δεδομένων ή την πραγματική προετοιμασία του ίδιου του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Έχω διαβάσει την πολιτική του περιοδικού και έχουν τα ακόλουθα συγκρούσεις. J S-Μ, DM, MK, και SS είναι όλοι οι εργαζόμενοι της Karyopharm Therapeutics. Η κλινική δοκιμή έργο χρηματοδοτήθηκε από Karyopharm θεραπευτική. CAL έχει λάβει αμοιβές από Karyopharm Therapeutics. Αυτό δεν αλλάζει προσήλωση μας σε όλα τα PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Η ανταλλαγή των πρωτεϊνών μεταξύ του πυρήνα και το κυτταρόπλασμα είναι μια καλά οργανωμένη διαδικασία που περιλαμβάνει αρκετές πρωτεΐνες που είναι υπεύθυνες για τις μετακινήσεις φορτίων μέσα και έξω από τον πυρήνα. Υπάρχουν επτά γνωστά πρωτεΐνες πυρηνικής εξαγωγής (Exportin 1-7) που μεταφέρουν μακρομόρια από τον πυρήνα στο κυτταρόπλασμα [1], [2], [3]. Exportin 1 (XPO1, που ονομάζεται επίσης χρωμόσωμα πρωτεΐνη Περιφέρεια Συντήρηση 1 [CRM1]) είναι μέλος του karyopherin β οικογένειας των υποδοχέων μεταφοράς που συνδέει ένα πολύ διαφορετικό σύνολο των περίπου 220 πρωτεΐνες στόχους μέσω υδρόφοβων πλούσιες σε λευκίνη σήμα πυρηνικής εξαγωγής (NES) παρούσα στο φορτίο [4]. Αλληλεπίδραση του NES-σκηνοθεσία πρωτεΐνη φορτίου με το μικρό Ran ΘΤΡάση μόριο οδηγεί στην κυτταροπλασματική μεταφορά μέσω ενός πολύπλοκου πυρηνικού πόρου [5]. XPO1 είναι ο μοναδικός πυρηνικός εξαγωγέας των πολλών σημαντικών ρυθμιστικών πρωτεϊνών καταστολής όγκου και την ανάπτυξη (κουταλιές και GRPs, συμπεριλαμβανομένων ρ53, ρ75, Rb, ρ21, ρ27, STAT3, FOXO και ΙκΒ μεταξύ άλλων) [6], [7]. Η έκφραση του XPO1 είναι γνωστό ότι ρυθμίζεται προς τα πάνω σε μια ποικιλία τόσο αιματολογικές κακοήθειες και συμπαγείς όγκους και αυτό συσχετίζεται με μία φτωχή πρόγνωση [1], [2], [3], υποδεικνύοντας ότι οι μεταβολές στην πυρηνική-κυτταροπλασματική διακίνησης με αποτέλεσμα παρεκκλίνουσα εντοπισμό του κλειδί πρωτεΐνες μπορεί να συμβάλει στην ογκογένεση και δυνητικά αντίσταση στη θεραπεία.

Διάφοροι μικρού μορίου αναστολείς XPO1 έχουν αναπτυχθεί και δοκιμαστεί ενάντια σε μια ποικιλία νεοπλασματικών κυττάρων, κυρίως

in vitro

. Αυτές περιλαμβάνουν Leptomycin Β, ratjadone, anguinomycin, goniothalamin, μεταξύ άλλων, που δεσμεύονται ομοιοπολικά με ένα αντιδραστικό κατάλοιπο κυστεΐνης (Cys528) που βρίσκεται στο NES-αύλακα σύνδεσης του XPO1 [1], [2], [3]. Αυτή η σύνδεση λειτουργικώς αδρανοποιεί XPO1 με μη αναστρέψιμο τρόπο και στοχεύει την πρωτεΐνη για αποδόμηση πρωτεασώματος [8], με αποτέλεσμα αποκατάσταση της TSP και GRP κυτταρικό εντοπισμό και λειτουργία. Για παράδειγμα, Leptomycin Β προκαλεί πυρηνική κατακράτηση της πρωτεΐνης σύντηξης BCR-ABL1 και επάγει την απόπτωση όταν συγχορηγείται με imatinib σε κύτταρα CML

in vitro

[9]. Ενώ Leptomycin Β δραστικότητα εκθέματα έναντι διαφόρων κυτταρικών γραμμών καρκίνου

in vitro

και ξενομοσχεύματος ποντικού μοντέλα όγκων, επάγει σημαντική συστηματική τοξικότητα τόσο σε ζώα όσο και σε ανθρώπους με αποτέλεσμα την διακοπή της κλινικής ανάπτυξης [10]. Πιο πρόσφατα, ανάλογα Leptomycin Β έχουν αναπτυχθεί που επιδεικνύουν μεγαλύτερη ισχύ

in vitro

και

in vivo

με σημαντικά μειωμένο προφίλ τοξικότητας σε ποντίκια [11]. Ωστόσο, αυτοί οι παράγοντες απαιτούν ενδοφλέβια χορήγηση, περιορίζοντας τη συχνότητα της χορήγησης του φαρμάκου.

Πρόσφατα, νέα, όμοια με φάρμακο, από του στόματος βιοδιαθέσιμες, μικρού μορίου εκλεκτικός αναστολέας της πυρηνικής εξαγωγής (SINE) ενώσεις οι οποίες ειδικά και μη αντιστρεπτά συνδέεται προς XPO1 στο αντιδραστική θέση Cys 528 υπόλειμμα έχει αναπτυχθεί [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18]. Αυτά είναι αργά αναστρέψιμες με ένα t

1/2 του περίπου 24 ώρες, και να οδηγήσει σε λειτουργική απενεργοποίηση της πρωτεΐνης XPO1. Οι SINE ενώσεις έχουν δειχθεί να επάγουν απόπτωση και τον πολλαπλασιασμό μπλοκ σε αρκετές καρκινικές κυτταρικές σειρές, συμπεριλαμβανομένων αυτών που προέρχονται από κόλον [6], το πάγκρεας [12], και καρκινώματα του μαστού [16], καθώς και χρόνια λεμφοκυτταρική λευχαιμία (CLL) [15], ενώ διαφυλάσσει τα φυσιολογικά κύτταρα [19]. Πρόσθετες μελέτες έχουν δείξει ισχυρή αντικαρκινική δραστικότητα και την καλή ανεκτικότητα του ΣΙΝΕ

in vivo χρησιμοποιώντας ανθρώπινο

ξενομοσχεύματος ποντικού (υποδόρια, ορθοτοπική, ή leukemograft) μοντέλα καρκίνου του παγκρέατος [12], νεφρικό καρκίνο [20], CLL [15 ], λέμφωμα κυττάρων μανδύα (MCL) [18], του πολλαπλού μυελώματος [8] και οξεία μυελογενή λευχαιμία (AML) [17]. Αυτά τα δεδομένα υποστηρίζουν την ιδέα ότι ΣΙΝΕ ενώσεις θα έχουν βιολογική δραστικότητα σε ανθρώπους με καρκίνο.

Αυθόρμητη καρκίνους κυνικός εμφανίζουν πολλές κλινικές και μοριακή ομοιότητες με καρκίνους του ανθρώπου και ως τέτοια, να χρησιμεύσει ως ένα ελκυστικό μοντέλο για προκλινικές μελέτες που αξιολογούν την βιολογική δραστικότητα και τοξικότητα των νέων θεραπευτικών αντι-καρκίνου. Τέτοιες μελέτες έχουν χρησιμοποιηθεί για την επικύρωση της δραστικότητας των αναστολέων πολλαπλών-στόχων κινάσης τυροσίνης υποδοχέα (toceranib) [21], [22], τα νέα χημειοθεραπευτικά μέσα (GS-9219) [23], και διάφορες άλλες αναστολείς μικρού μορίου (ibrutinib, STA -1474) [24], [25]. Ως εκ τούτου, ο σκοπός αυτής της εργασίας ήταν να εξετάσει τις επιδράσεις των ενώσεων στην ΣΙΝΕ κυνικός αυθόρμητη καρκίνοι. Συγκεκριμένα, η δράση τους για πρώτη φορά αξιολογήθηκε

in vitro

εναντίον σκύλου καρκινικών κυτταρικών σειρών, με ιδιαίτερη έμφαση στην αιμοποιητικών όγκων, μετά την οποία μια μελέτη Φάσης Ι του μυθιστορήματος ΣΙΝΕ KPT-335 διεξήχθη σε σκύλους με μεταστατικό οστεοσάρκωμα, κατάρτι κυττάρου όγκου και μη-Hodgkin λέμφωμα (NHL). Οι μελέτες αυτές έθεσαν τις βάσεις για την τρέχουσα αξιολόγηση φάσης Ι του ΣΙΝΕ ένωσης KPT-330 σε ανθρώπους με καρκίνο και για μια δυνητικά πιλοτική μελέτη της KPT-335 για σκύλους με πρόσφατα διαγνωσμένη ή υποτροπιάζον NHL.

Υλικά και Μέθοδοι

Τα δείγματα πρωτογενούς όγκου και Cell Culture

κρυοσυντηρημένα καρκινικά κύτταρα που λαμβάνονται από δείγματα βιοψίας στείρα λεμφαδένων από τα σκυλιά με διάχυτο από μεγάλα Β κύτταρα λέμφωμα (DLBCL) καλλιεργήθηκαν με 100 ng /mL του megaCD40L (Enzo Life Science, Plymouth Meeting, ΡΑ) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26], [27]. Το κύτταρο λευχαιμίας ανθρώπινων Τ-κυτταρική γραμμή, Jurkat, ήταν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA) και καλλιεργήθηκαν σε μέσο RPMI1640 (Gibco /BRL, Grand Island, ΝΥ) που περιέχει 10% ορό εμβρύου βοός (FBS? Atlas Biologicals, Fort Collins, CO), 2-μερκαπτοαιθανόλη (Gibco /BRL), HEPES, L-γλουταμίνη, πυροσταφυλικό νάτριο (Mediatech Inc., Manassas, VA), μη απαραίτητα αμινοξέα (Sigma Aldrich, St. Louis, ΜΟ) και Primocin (Invivogen, San Diego, CA). Ο κυνικός DLBCL CLBL1 κυτταρική γραμμή που λαμβάνεται από τον Δρ Μπάρμπαρα Rütgen (Πανεπιστήμιο της Βιέννης, Αυστρία) [28], [29] και ανθρώπινες κυτταρικές σειρές DLBCL OCI-Ly3 [30], [31] και OCI-Ly10 [32] που λαμβάνεται από Ο Δρ Anne Novak (Mayo Clinic Κέντρο Καρκίνου, Rochester, ΜΝ) καλλιεργήθηκαν σε μέσο Iscove πλήρες τροποποιημένο Dulbecco (ΙΜϋΜ) που περιέχει 20% FBS, L-γλουταμίνη, και Primocin. Όλα τα κύτταρα διατηρήθηκαν στους 37 ° C σε

2 ατμόσφαιρα υγροποιημένη 5% CO. Οι ακόλουθες πρόσθετες κυτταρικές σειρές σκύλου όγκου χρησιμοποιήθηκαν για να αξιολογηθεί απόκριση ΣΙΝΕ ενώσεις: C2, γραμμή κατάρτι κυττάρου όγκου από τον Dr. George Caughey, UCSF, San Francisco, CA [33]? OSA16, οστεοσαρκώματος κυτταρική γραμμή, που παρέχονται από το Δρ Jaime Μοδιάνο, UM, Minneapolis, MN [34]? και 323.610 – 3, κακοήθη κυτταρική γραμμή μελανώματος, που παρέχονται από το Δρ Michael Kent, UCD, Davis, CA [35]. Όλες οι κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν σε πλήρες μέσο RPMI που περιέχει 10% FBS, αντιβιοτικό /αντιμυκητιακό, HEPES, πυροσταφυλικό νάτριο, μη απαραίτητα αμινοξέα και Glutamax (συμπληρώματα μέσων από Gibco).

Βιωσιμότητα και Δοκιμασίες Πολλαπλασιασμού

η βιωσιμότητα των κυττάρων για γραμμές λεμφοειδούς προσδιορίστηκε με την MTS (3- (4, 5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -5- (3-καρβοξυμεθοξυφαινυλ) -2- (4-σουλφοφαινυλ) -2Η-τετραζόλιο) δοκιμασία χρησιμοποιώντας CellTiter 96 ® AQ

ueous One Λύση Δοκιμασία Πολλαπλασιασμού Κυττάρου Kit (Promega, Madison, WI). Εν συντομία, για λεμφοειδείς κυτταρικές σειρές, 5 × 10

4 κύτταρα (ή 1 × 10

5 πρωτογενών κυττάρων DLBCL) καλλιεργήθηκαν σε 100 μΐ πλήρους μέσου σε πλάκες 96 φρεατίων σε παρουσία SINE ενώσεων. Μετά από 72 ώρες, 20 μι διαλύματος MTS προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο και τα κύτταρα επωάστηκαν για άλλες 4 ώρες πριν από την μέτρηση της απορρόφησης στα 490 nm χρησιμοποιώντας ένα Wallac Victor 1420 Multilabel Counter (Perkin Elmer, Waltham, ΜΑ). Το IC

50 ημιτονοειδών υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας Prism 6 λογισμικού (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA).

Για τα μη λεμφοειδείς κυτταρικές σειρές, 96 φρεατίων εμβολιάστηκαν εις τριπλούν σε 90 μL με 2500 κύτταρα /φρεάτιο OSA16, 5000 κύτταρα /φρεάτιο C2, και 2500 κύτταρα /φρεάτιο 323.610 έως 3. Seeded πλάκες καλλιεργήθηκαν επί μία νύκτα έπειτα υποβλήθηκε σε επεξεργασία την επόμενη ημέρα με 10 μL KPT-214 σε C10 μέσο σε συγκεντρώσεις 0,0001, 0,01, 0,1, 1,0, και 10 μΜ. Οι πλάκες συλλέχθηκαν σε 92 ώρες, φυγοκεντρήθηκαν στις 1.300 rpm, και το υπερκείμενο απομακρύνθηκε με αναστροφή πιάτα σε απορροφητικό χαρτί. Οι πλάκες στη συνέχεια σφραγίστηκαν και τοποθετήθηκαν αμέσως στους -80 ° C για τουλάχιστον 12 ώρες. Οι πλάκες στη συνέχεια ξεπάγωσαν και Δοκιμασία Πολλαπλασιασμού CyQUANT ®Cell (Life Technologies) εκτελέσθηκε ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Εν συντομία, 200 μL του αραιωμένου εργασίας CyQUANT διάλυμα προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο και να προστατεύεται από το φως. Ο φθορισμός ο μετρήθηκε χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη μικροπλακών SpectraMax Μ2 στα 480 nm διέγερση και 520 nm εκπομπή. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως ποσοστό του ελέγχου, ή σχεδιάζονται για τον υπολογισμό IC

50 τιμές σε 92 ώρες.

Προσδιορισμός απόπτωσης

Jurkat κύτταρα και τα πρωτογενή κύτταρα σκύλου DLBCL καλλιεργήθηκαν για 24 ώρες στο παρουσία 100 ηΜ KPT-335 ή διμεθυλοσουλφοξειδίου (DMSO). Τα κύτταρα χρωματίστηκαν με αννεξίνη V (eBiosciences, San Diego, CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η κυτταρομετρία ροής πραγματοποιήθηκε με τη χρήση μιας ροής BD LSRII κυτταρομετρίας (Immunocytometry Συστήματα BD, San Jose, CA) και τα αποτελέσματα αναλύθηκαν με τη χρήση του λογισμικού FlowJo (Tree Star, Ashland, OR).

Ανοσοαποτύπωσης

κρυοσυντηρημένα πρωτογενή DLBCL σκύλου και CLBL1 κύτταρα λύθηκαν σε ρυθμιστικό RIPA που περιέχει 150 mM NaCl, 50 mM Tris, ρΗ 7.4, 0.1% δωδεκυλοθειικό νάτριο (SDS), 1,0% Triton Χ-100, 1.0% δεοξυχολικό νάτριο, 5 mM EDTA, 1 mM διθειοθρεϊτόλη, και ένα κοκτέιλ αναστολέα πρωτεϊνάσης (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ). Το αδιάλυτο υλικό απομακρύνθηκε με φυγοκέντρηση, και οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης των κυτταρικών λυμάτων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το BioRad Protein Assay kit (BioRad, Hercules, CA). Πρωτεΐνες (100 μg) διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα SDS-πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE) και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης (BioRad, Hercules, CA). χρώση αντισωμάτων πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το i.d. SNAP σύστημα (EMD Millipore, Billerica, ΜΑ) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, μεμβράνη μπλοκαρίστηκε από 50% LI-COR ρυθμιστικό αποκλεισμού (LI-COR, Lincoln, ΝΕ) και χρωματίστηκαν με αντίσωμα αντι XPO1 κουνελιού (1:66 αραίωση, Santa Cruz, Santa Cruz, CA) και αντίσωμα αντι-ακτίνης ποντικού (1:1666 αραίωση, Sigma-Aldrich), που ακολουθείται από αντίσωμα αντι-κουνελιού γαϊδάρου δευτερογενή συζευγμένο με IRDye800 και αντίσωμα αντι-ποντικού συζευγμένο με IRDye680 (1:3,333 αραίωση, LI-COR). Η ανίχνευση έγινε με το Infrared System Imaging Οδύσσεια (LI-COR).

KPT-335 Διατύπωση

KPT-335 παρασκευάστηκε όπως κάψουλες ζελατίνης γεμίζουν με τις δυνάμεις που κυμαίνονται από 2,5 mg έως 20 mg δραστικό φαρμακευτικό συστατικό (ΑΡΙ). Το API αλέστηκε υγρό με Lutrol F68 NF (BASF) και νερό σε ένα Microfluidics μικρο-ρευστοποιητή, σε συνδυασμό με Plasdone Κ29 /30 (ISP Technologies), και λυοφιλοποιήθηκε. Λυοφιλοποιημένες σκόνες περιείχε 70-75% API. Οι κάψουλες ατομικά χέρι γεμάτο με λυοφιλοποιημένη σκόνη στην επιθυμητή ισχύ δοσολογίας. Όλα τα έκδοχα ήταν κατάλληλες ποιότητες για χρήση σε φαρμακευτικά προϊόντα.

φαρμακοκινητική ανάλυση σε υγιείς σκύλους

KPT-335 χορηγήθηκε ως εφάπαξ από του στόματος δόση σε σύνθεση κάψουλας σε 6 αρσενικούς σκύλους beagle σε περίπου 1,5 mg /kg μετά από ένα γεύμα. Σειριακά δείγματα αίματος συλλέχθηκαν από κάθε σκύλο πριν τη δοσολόγηση και στις 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 18, 24 και 48 ώρες μετά τη δόση και τοποθετήθηκαν σε σωληνάρια που περιείχαν K

2EDTA. Τα δείγματα αίματος φυλάχτηκαν σε υγρό πάγο έως ότου επεξεργασία σε πλάσμα με φυγοκέντρηση σε 3500 rpm για 10 λεπτά στους 5 ° C. Τα δείγματα πλάσματος αποθηκεύτηκαν σε -80 ° C μέχρι την ανάλυση κατά Agilux Laboratories (Worcester, ΜΑ). Τα δείγματα πλάσματος αναλύθηκαν για τη συγκέντρωση του μητρικού φαρμάκου χρησιμοποιώντας παρασκευή δείγματος με καθίζηση πρωτεΐνης και στη συνέχεια ανάλυση με LC-MS /MS χρησιμοποιώντας προπανολόλης ως το εσωτερικό πρότυπο. Η μέθοδος αυτή πληροί τις προϋποθέσεις για τη χρήση (μια και μόνη παρτίδα για την αξιολόγηση των επιδόσεων της μεθόδου: ακρίβεια και την ακρίβεια? Γραμμικότητα της αραίωσης? Και ειδικότητα της μήτρας) πριν από την έναρξη της ανάλυσης του δείγματος. κριτήρια αποδοχής για τα πρότυπα βαθμονόμησης και τα δείγματα ελέγχου ποιότητας ήταν εντός ± 30% της ονομαστικής συγκέντρωσης. Μεμονωμένες τιμές παραμέτρων φαρμακοκινητικής ζώο προήλθαν από το φαρμακοκινητικό πρόγραμμα ανάλυσης Phoenix WinNonlin έκδοση 6.3 (Pharsight Corporation), χρησιμοποιώντας το μη διαμερισματικό μοντέλο 200 με ομοιόμορφη στάθμιση. Οι φαρμακοκινητικές παράμετροι μιας δόσης αξιολογούνται περιλαμβάνουν: C

max (μέγιστη συγκέντρωση παρατηρήθηκε)? Τ

max (χρόνος παρατηρούμενης μέγιστης συγκέντρωσης)? AUC

0 → ∞ (περιοχή κάτω από την καμπύλη συγκέντρωσης-χρόνου από χρόνο μηδέν έως το άπειρο παρέκταση)? AUC

0 → τελευταία (περιοχή κάτω από την καμπύλη συγκέντρωσης-χρόνου από χρόνο μηδέν έως το χρόνο της τελευταίας ποσοτικοποιήσιμης συγκέντρωσης)? και t

1/2 (χρόνος ημίσειας ζωής). Περιγραφικά στατιστικά στοιχεία (μέση τιμή, τυπική απόκλιση, και το τυπικό σφάλμα του μέσου) υπολογίστηκαν από τα μη στρογγυλεμένα αριθμούς σε Excel (Microsoft) υπολογιστικών φύλλων. Αποτελέσματα συγκέντρωσης, μέσα, και υπολογίζονται οι παράμετροι έχουν αναφερθεί σε 3 σημαντικά ψηφία.

Κλινική δοκιμή Επιλεξιμότητα

Αυτή η κλινική μελέτη εγκρίθηκε από το Ohio State University (OSU) Κτηνιατρικά Medical Center (VMC) Κλινική συμβουλευτική Επιτροπή Ερευνών και το OSU IACUC? έγκριση IACUC ελήφθη επίσης στο Πανεπιστήμιο της Μινεσότα και το Τέξας Α & amp? Πανεπιστημίου Μ. Γραπτή συγκατάθεση από τον ιδιοκτήτη του κάθε σκύλου αποκτήθηκε πριν από την εισαγωγή στη μελέτη. KPT-335 χορηγήθηκε σε σκύλους με μεταστατικό οστεοσάρκωμα, κατάρτι κυττάρων του όγκου ή NHL που είχαν αποτύχει συμβατική θεραπεία ή για τα οποία δεν υπήρχαν εναλλακτικές θεραπευτικές επιλογές, ή για τα οποία η συμβατική θεραπεία δεν ήταν επιθυμητή από τον ιδιοκτήτη. Για να είναι επιλέξιμες για τη μελέτη, κάθε σκύλος πρέπει να έχει σίγουρα διαγνωστεί με κυτταρολογική ή ιστοπαθολογική εξέταση και είχε συναντήσει όλα τα κριτήρια ένταξης και κανένα από τα κριτήρια αποκλεισμού. Πρόσθετα κριτήρια επιλεξιμότητας περιλαμβάνονται: & gt? 1 έτους κατά την έναρξη της μελέτης? επαρκή λειτουργία των οργάνων? τουλάχιστον 2 εβδομάδες από προηγούμενη χημειοθεραπεία ή ακτινοβολία με πλήρη ανάρρωση από την οξεία τοξικότητα αυτών των θεραπειών (3 εβδομάδες για μία χειρουργική διαδικασία)? τουλάχιστον 1 εβδομάδα από προηγούμενη θεραπεία με οποιοδήποτε άλλο δοκιμαζόμενο φάρμακο? και δεν υπάρχουν στοιχεία εγκεφαλικών μεταστάσεων ή οποιαδήποτε σοβαρή συστημική διαταραχή δεν συμβιβάζεται με τη μελέτη, κατά την κρίση του ερευνητή.

Μελέτη

Αυτή η μελέτη ήταν μια Φάσης Ι δόση κλιμακώνεται, ανοικτή αξιολόγηση ετικέτα του την ασφάλεια και την βιολογική δραστηριότητα του KPT-335 σε πελάτη που ανήκει σκύλους με αυθόρμητη κακοήθειες. Αξιολόγηση των κλινικών τοξικοτήτων και ανταπόκρισης του όγκου εκτελέστηκε σε κάθε επίσκεψη. Οι σκύλοι αξιολογήθηκαν για αιματολογικές και βιοχημικές τοξικότητες κάθε 7 ημέρες με τη ρουτίνα bloodwork. Η αρχική δόση του 1 mg /kg από το στόμα δύο φορές την εβδομάδα (Δευτέρα /Πέμπτη ή την Τρίτη /Παρασκευή) βασίστηκε σε προηγούμενα δεδομένα από συνήθεις εργαστηριακές σκύλους (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα) και η κλιμάκωση της δόσης ορίστηκε σε προσαυξήσεις 0.25 mg /kg σε ομάδες των 3 μέχρι τοξικότητα περιορισμό της δόσης (DLT) αναγνωρίστηκε. Η DLT θεωρήθηκε κάθε βαθμού 3 ή 4 αιματολογικής ή μη αιματολογικής τοξικότητας με βάση τα καθιερωμένα κριτήρια VCOG-CTCAE [36]. Επιπλέον, τυχόν χρόνιων μη-βαθμού 3 ή 4 τοξικότητες θεωρείται ότι περιορίζουν σημαντικά την ποιότητα της ζωής (δηλαδή, λήθαργος, ανορεξία) ήταν χαρακτηριστεί ως ΔΛΤΣ. πρόοδο ή σημεία και τα συμπτώματα σίγουρα σχετίζονται με τη νόσο της νόσου δεν θεωρήθηκαν ανεπιθύμητες ενέργειες (ΑΕ). Η μέγιστη ανεκτή δόση (MTD) θεωρήθηκε ως μία δόση μικρότερη από εκείνη κατά την οποία συνέβη DLT.

Τοξικότητα Εκτίμηση

Κάθε ασθενής υποβλήθηκε σε μια βάση πλήρες ιστορικό, φυσική εξέταση και εργαστηριακές πριν από τη δόση αξιολόγηση που περιλάμβανε μια πλήρη γενική αίματος (CBC), το προφίλ των βιοχημικών δεικτών, παραμέτρων πήξης (PT /PTT) και ανάλυση ούρων. Οι ασθενείς αξιολογήθηκαν για δυσμενή συμβάντα τις ημέρες 7, 14, 21, και 28, και κάθε 2 εβδομάδες στη συνέχεια κατά τον οποίο χρόνο επαναλήφθηκαν όλες οι αξιολογήσεις εργαστήριο. Διατάξεις που αφορούν ελάχιστες απαιτήσεις αιματολογικών να συνεχίσει δοσολογίας περιλήφθηκαν στο πρωτόκολλο: αιματοκρίτης & gt? 25%, ουδετερόφιλα & gt? 1500 /L, αιμοπετάλια & gt? 100.000 /L. Επιπλέον, ηπατικών τρανσαμινασών πρέπει να είναι & lt?. 4X ανώτερο φυσιολογικό όριο με μια κανονική ολική χολερυθρίνη και της κρεατινίνης ορού να συνεχίσουν τη θεραπεία KPT-335

Η ταυτόχρονη Φάρμακα

Για την αντιμετώπιση των ναρκωτικών που σχετίζονται με γαστρεντερικές τοξικότητες, υποστηρικτική φροντίδα χορηγήθηκε όπως απαιτείται σε σκύλους που συμμετείχαν σε αυτή τη μελέτη. Αυτό συνήθως αποτελούνταν από φαμοτιδίνη, ομεπραζόλη, μετρονιδαζόλη, λοπεραμίδη, μετοκλοπραμίδη, ονδανσετρόνη, ή /και μαροπιτάντης. Αντιισταμινικά χορηγήθηκαν σε σκύλους με μαστοκυττάρων όγκους, καθώς οι εν λόγω όγκοι είναι γνωστό ότι απελευθερώνουν ισταμίνη. Άλλες υποστηρικτική φροντίδα χορηγείται σε σκύλους αποτελούνταν από πρεδνιζόνη και μη στεροειδή αντιφλεγμονώδη φάρμακα για τη θεραπεία που σχετίζονται με όγκους φλεγμονή, ανορεξία, και για τον έλεγχο του πόνου.

Tumor Response Εκτίμηση

αξιολογήσεων των όγκων ολοκληρώθηκαν πριν από την εισαγωγή στη μελέτη, και ημέρα 7, 14, 21, και 28. για τα σκυλιά που συνεχίστηκε και μετά από 4 εβδομάδες, εκτιμήσεις απόκριση διεξήχθησαν κάθε 2 εβδομάδες μετά, ή κατά το χρόνο των ύποπτων εξέλιξης του όγκου. Οι απαντήσεις αξιολογήθηκαν από τον ερευνητή σύμφωνα με προκαθορισμένα κριτήρια πρωτοκόλλου. Η απάντηση σε σκύλους με καθορισμένες νόσου έγινε με κλινική εξέταση, υπερηχογράφημα, ή θωρακική ακτινογραφία. Πολλές βλάβες δεν ήταν δεκτικά για την ποσοτική ακτινογραφική απεικόνιση, αλλά ακολούθησαν είτε με αύξοντα κλινική εξέταση (επιφανειακές βλάβες? Ψηλαφητή λεμφαδένες) ή με υπερηχογράφημα (κοιλιακό λεμφαδένες). Θώρακα βλάβες αξιολογήθηκαν από θωρακική ακτινογραφία.

Η απάντηση σε σκύλους με μετρήσιμη νόσο κρίθηκε από τον ερευνητή με βάση Κριτηρίων Αξιολόγησης της Ανταπόκρισης για Περιφερική Κομβικό λεμφώματος σε σκύλους (v1.0) [37]. Μια πλήρης απόκριση (CR) ορίστηκε ως η εξαφάνιση όλων των ασθενειών στις δύο μετρήσεις που διαχωρίζονται από μια ελάχιστη περίοδο 3 εβδομάδων. Μια μερική απόκριση (PR) ορίστηκε ως μείωση μεγαλύτερη από 30% στο άθροισμα του μακρύτερου διαμέτρου των βλαβών στόχων τεκμηριώθηκε από δύο εκτιμήσεις χωρίζονται από τουλάχιστον 3 εβδομάδες. Μια αύξηση του & gt? 20% στο μέγεθος όλων των μετρήσιμων περιοχών όγκων όπως μετράται με το άθροισμα της μεγαλύτερης διάμετροι των αλλοιώσεων στόχου λαμβάνεται ως αναφορά το μικρότερο άθροισμα από το την έναρξη της θεραπείας, ή την εμφάνιση οποιασδήποτε νέας βλάβης (ες) θα μπορούσε να χαρακτηρισθεί ως προοδευτική ασθένεια (PD). Σταθερή νόσος (SD) ορίστηκε από την απουσία κριτηρίων για είτε μια απάντηση ή πρόοδο? πρέπει να θεωρείται SD, τα σκυλιά πρέπει να έχουν αποδείξει κανένα στοιχείο του PD στην αξιολόγηση 28 ημερών. Τα σκυλιά που δεν είχαν καμία απόδειξη της εξέλιξης του όγκου και οι οποίοι δεν είχαν βιώσει κάποια μη αποδεκτή τοξικότητα ήταν επιλέξιμες για εκτεταμένη κύκλους θεραπείας. κλιμάκωση της δόσης από δύο φορές ανά χορήγηση εβδομάδα έως τρεις φορές ανά χορήγηση εβδομάδα σε ένα άτομο σκύλο επιτράπηκε αν ο σκύλος είχε την ανοχή της θεραπείας.

Ποιότητα Ζωής Αξιολόγησης

Ένα εργαλείο για την αξιολόγηση της ποιότητας ζωής στις σκυλιά με καρκίνο κατά τη διάρκεια της θεραπείας έχει δημοσιευθεί προηγουμένως [38]. Αυτό χρησιμοποιείται για την αξιολόγηση ιδιοκτήτη αντιλαμβάνονται τις αλλαγές σε σκύλους που υποβάλλονται σε θεραπεία KPT-335 κατά τη διάρκεια των σπουδών, τόσο της κλιμάκωσης της δόσης και την επέκταση της δόσης. Μια συνολική ποιότητα ζωής (ΠΖ) όρος δημιουργήθηκε με βάση τις απαντήσεις στα ερωτήματα σχετικά με την ποιότητα του ερωτηματολογίου ζωής. Τα αποτελέσματα από κάθε ερώτηση αθροίστηκαν με αποτέλεσμα την συνολική ποιότητα της βαθμολογίας ζωής που μπορεί να κυμαίνεται από 23 έως 115. Τάσεις στην ποιότητα ζωής (ΠΖ) κατά τη διάρκεια της μελέτης εξετάστηκαν με τη χρήση γραμμικών μεικτών μοντέλων που περιέχουν σταθερές επιδράσεις του χρόνου και μια αυτοπαλινδρόμησης δομή συσχέτισης για τα τυχαία σφάλματα. δοκιμασίες Wald χρησιμοποιήθηκαν για τη δοκιμή για μια σημαντική αλλαγή στην ποιότητα ζωής με βαθμούς ελευθερίας που υπολογίζονται χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kenward-Roger [39]. Μετρήσεις που λαμβάνονται μετά από 90 μέρες δεν συμπεριλήφθηκαν στην ανάλυση για την μελέτη κλιμάκωσης δόσης και οι μετρήσεις μετά από 70 ημέρες, δεν συμπεριλήφθηκαν στην ανάλυση των δεδομένων διαστολής της δόσης λόγω λίγα σημεία δεδομένων μετά από αυτές τις χρονικές στιγμές.

Αποτελέσματα

Δραστηριότητα του ΣΙΝΕ ενώσεις κατά Canine κύτταρα όγκου em

in vitro

η

Αξιολογήσαμε πρώτα την επίδραση της KPT-185, η οποία είναι μία από τις πιο ισχυρές ενώσεις ΣΙΝΕ αλλά με περιορισμένη στόματος βιοδιαθεσιμότητα και επομένως κατάλληλο μόνο για το

in vitro μελέτες

, σε κύτταρα Jurkat (ανθρώπινη λευχαιμία Τ κυττάρων) και 6 πρωτογενή κυνικός δείγματα DLBCL (5 διακριτούς όγκους με ένα ζευγάρι του ίδιου όγκου). KPT-185 ανέστειλε αποτελεσματικά τη βιωσιμότητα των Jurkat και κύτταρα σκύλου DLBCL (Σχήμα 1Α και Πίνακας 1). Το IC

50 KPT-185 έναντι Jurkat (n = 3) και τα δείγματα DLBCL πρωτογενή κυνικός (n = 6) ήταν 8.7 ± 0.7 ηΜ και 13.3 ± 6.2 ηΜ, αντιστοίχως. KPT185-trans ισομερές (η οποία έχει περίπου 100 φορές μικρότερη δραστικότητα αναστολής XPO1 όπως το cis-ισομερές), έδειξε πολύ μικρότερη τοξικότητα όταν ελέγχθηκε χρησιμοποιώντας κύτταρα Jurkat και ένας από τους βασικούς σκύλου δειγμάτων DLBCL (IC

50 ήταν & gt? 1000 ηΜ και στα δύο κύτταρα όγκου). Στη συνέχεια, αξιολογήθηκε η επίδραση της KPT-335, μια κλινική υποψήφια ένωση με καλή στοματική έκθεσης που χρησιμοποιήθηκε σε αυτή την κλινική δοκιμή, για κυνικός και ανθρώπινα κύτταρα DLBCL. KPT-335 ανέστειλε τη βιωσιμότητα των OCI-Ly3, OCI-Ly10, και CLBL1 στο IC

50 2,1 ± 1,3 ηΜ, 41,8 ± 21,0 ηΜ, και 8.5 ± 4.1 ηΜ, αντιστοίχως (Σχήμα 1 Β και Πίνακας 1). Δείξαμε επίσης KPT-335 απόπτωση που επάγεται σε κύτταρα CLBL1 και πρωτογενή κύτταρα σκύλου DLBCL χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής. Η επεξεργασία των κυττάρων με KPT-335 για 24 ώρες αυξήθηκε αποπτωτικών κυττάρων (αννεξίνης V

+ κύτταρα) σε σύγκριση με κοροϊδεύει επεξεργασμένα κύτταρα (Σχήμα 1 C). Τέλος, επιβεβαιώθηκε η έκφραση του XPO1, το οποίο ανιχνεύθηκε με το εκτιμώμενο μέγεθος XPO1 (~123 kDa), σε κύτταρα σκύλου με τη χρήση της κυτταρικής γραμμής CLBL1, ανθρώπινες κυτταρικές σειρές DLBCL, και πρωτογενή κύτταρα σκύλου DLBCL (Σχήμα 1 D). Στο σύνολό τους, τόσο των ανθρώπων όσο και των σκύλων DLBCL εκφράζουν XPO1 και ενώσεις ΣΙΝΕ δείχνουν ισχυρή δραστικότητα έναντι αυτών των κυττάρων του όγκου, γεγονός που υποδηλώνει μια πιθανή θεραπευτική ωφέλεια για τον άνθρωπο και κυνικός ασθενείς με DLBCL.

(Α) κύτταρα Jurkat και πρωτογενών κύτταρα σκύλου DLBCL (δείγμα # 1-5, # 5, ανεξάρτητα δοκιμάστηκε δύο φορές) καλλιεργήθηκαν σε τρυβλία 96 φρεατίων για 72 ώρες με log διαδοχικές αραιώσεις KPT-185 και η κυτταρική βιωσιμότητα αναλύθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία MTS. Κάθε πείραμα διεξήχθη εις διπλούν φρεάτια και τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές (Β) Ανθρώπινα και κύτταρα σκύλου DLBCL καλλιεργήθηκαν σε πλάκα 96 φρεατίων για 72 ώρες με 3-φορές σειριακές αραιώσεις (0-1000 ηΜ) KPT-335 και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία MTS. Κάθε πείραμα διεξήχθη εις διπλούν φρεάτια και τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές. (C) κύτταρα CLBL1 και κυττάρων DLBCL πρωτογενή σκύλου (δείγμα 1 #) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 100 ηΜ KPT-335 για 24 ώρες και αναλύθηκαν για απόπτωση μέσω κυτταρομετρίας ροής. Τα πειράματα διεξήχθησαν τρεις φορές ανεξάρτητα και τα μέσα αποτελέσματα φαίνονται. (D) Έκφραση XPO1 στον άνθρωπο και κυνικός κυτταρικές σειρές DLBCL. προϊόντα λύσης πρωτεΐνης που παρασκευάζεται από OCI-Ly3, OCI-Ly10, και CLBL1 διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE και υποβλήθηκαν σε ανοσοκηλίδωση για XPO1? β-ακτίνης χρησίμευσε ως μάρτυρας.

Η

Για να υπάρξει μια προκαταρκτική εκτίμηση του δυναμικού δράσης των ανταγωνιστών ΣΙΝΕ XPO1 έναντι των πρόσθετων κυνικός καρκίνων, η γραμμή καρκινικών κυττάρων C2 ιστό, η κυτταρική σειρά OSA16 οστεοσαρκώματος , και η κυτταρική γραμμή μελανώματος 323610-3 χρησιμοποιήθηκαν. Για τις μελέτες αυτές μια προηγούμενη αναλογικό, KPT-214, ήταν διαθέσιμος για τις in vitro πειράματα (Σχήμα 2). Το IC

50 KPT-214 έναντι του C2, OSA16 και 323.610 ήταν 490 nM, 89 nM, και 70 nM, αντίστοιχα. Συνοπτικά, το ημιτονοειδές εμφανίζουν βιολογική δραστικότητα

in vitro

έναντι μιας ευρείας ποικιλίας του σκύλου καρκινικών κυτταρικών σειρών, με τις γραμμές λυμφοειδών είναι το πιο ευαίσθητο στην πολύ χαμηλή νανογραμμομοριακή περιοχή. Αυτά τα δεδομένα υποστήριξαν την μετέπειτα

in vivo

αξιολόγηση των ΣΙΝΕ σε σκύλους με αυθόρμητη καρκίνοι, με ιδιαίτερη έμφαση στα σκυλιά NHL.

κυτταρικές σειρές Canine όγκου C2 (μαστοκυττάρων), OSA16 (οστεοσάρκωμα) και 323.610 – 3 καλλιεργήθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων εις τριπλούν με σειριακές αραιώσεις KPT-214 για 92 ώρες μετά τις οποίες συλλέχθηκαν οι πλάκες, μέσα απομακρύνθηκαν και οι πλάκες καταψύχθηκαν στους -80 ° C. Ανάλυση για αποτελέσματα επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων στη συνέχεια διεξήχθη χρησιμοποιώντας τον προσδιορισμό CyQUANT σύμφωνα με τις προδιαγραφές του κατασκευαστή. Τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές? το IC

50 για κάθε κυτταρική σειρά φαίνεται.

Η

Η φαρμακοκινητική της KPT-335 σε υγιείς σκύλους

Για να αξιολογηθεί η φαρμακοκινητική της KPT-335, έξι υγιείς σκύλους beagle ήταν χορηγήθηκε μια εφάπαξ δόση του φαρμάκου σε 1,5 mg /kg μετά τροφοδοτείται ένα γεύμα. Ελήφθησαν δείγματα αίματος σε χρονική περίοδο 48 ώρας και αναλύθηκαν για το πλάσμα KPT-335 συγκεντρώσεις. Τα αποτελέσματα φαίνονται στον Πίνακα 2. Η μέση Τ

max ήταν περίπου 4 ώρες με C

max περίπου 250 ng /ml, και ένα μέσο AUC 1800 ng /ml.

Η

κλιμάκωση της δόσης μελέτη

δημογραφικά στοιχεία των ασθενών.

τα δημογραφικά στοιχεία των ασθενών και των τύπων όγκων που αναγράφονται στον πίνακα 3. Ένα σύνολο 17 σκύλων ήταν εγγεγραμμένοι στο τμήμα κλιμάκωση δόσης της μελέτης. Η διάμεση ηλικία ήταν 7,5 έτη και το διάμεσο βάρος ήταν 35 κιλά. Η πλειοψηφία των σκύλων που συμμετείχαν είχαν NHL (n = 14), και οι περισσότεροι (n = 12) είχε επίσης λάβει προηγούμενη θεραπεία συμπεριλαμβανομένης της χειρουργικής επέμβασης, η χημειοθεραπεία και /ή πρεδνιζόνη. Πρεδνιζόνη χορηγήθηκε σε 10 σκύλους κατά τη διάρκεια της θεραπείας KPT-335 στο 0,5 mg /kg είτε μία φορά την ημέρα ή κάθε δεύτερη ημέρα? σε 8/10 περιπτώσεις, τα σκυλιά εισήλθαν στην μελέτη μετά την εμπειρία της εξέλιξης της νόσου στο πρόσωπο της θεραπείας πρεδνιζόνη και κατά συνέπεια, το φάρμακο δεν διακόπηκε. Τα υπόλοιπα δύο σκύλοι τοποθετήθηκαν σε πρεδνιζόνη μετά τις πρώτες 28 ημέρες θεραπείας για την αντιμετώπιση της ανορεξίας /ανορεξία σχετίζεται με τη θεραπεία. Αυτές οι σκύλοι έλαβαν πρεδνιζόνη σε 0,5 mg /kg κάθε δεύτερη ημέρα για τη διάρκεια της θεραπείας με KPT-335.

Η

Κλινική τοξικότητες και μέγιστη ανεκτή δόση.

Για όλους τους σκύλους που εγγράφονται στο ο μερίδα κλιμάκωση δόσης της μελέτης, οι πρωτογενείς κλινικές τοξικότητες αποτελούνταν κυρίως βαθμού 1 και 2 γαστρεντερικά συμβάντα συμπεριλαμβανομένων ανορεξία, έμετο και διάρροια, καθώς και λήθαργος (που συνοψίζονται στους πίνακες 4 και 5). Το MTD ιδρύθηκε ως 1,75 mg /kg χορηγούμενη δύο φορές την εβδομάδα (Δευτέρα /Πέμπτη). Και τα τρία σκυλιά στο /kg κοόρτη των 2 mg εμφάνισαν DLT συμπεριλαμβανομένων βαθμού 3 ανορεξία (n = 2), βαθμού 3 έμετος (n = 1), η διάρροια βαθμού 3 (n = 1), βαθμού 3 αύξηση της ALT (n = 2), βαθμού 3 ανύψωση AST (n = 1), και βαθμού 3 ανύψωση ALP (n = 1). Ως εκ τούτου, το προφίλ των ανεπιθύμητων ενεργειών του KPT-335 ήταν περιορισμένη κυρίως στο γαστρεντερικό σωλήνα και κλινικά σημαντική ηπατοτοξικότητα παρατηρήθηκε κυρίως σε δόσεις πάνω από το MTD.

Η

Σε 4 περιπτώσεις, τα σκυλιά που ήταν στο φάρμακο για περισσότερο από 4 εβδομάδες είχαν μια αλλαγή στην αγωγή από δύο φορές την εβδομάδα έως τρεις φορές την εβδομάδα (Δευτέρα /Τετάρτη /Παρασκευή) ως φάρμακο ήταν καλά ανεκτό και οι σκύλοι βιώνουν σταθερή ασθένεια. Αυτό συνέβη σε ένα σκύλο που έλαβαν 1 mg /kg, δύο σκύλους που έλαβαν 1,25 mg /kg, και ενός σκύλου που έλαβαν 1,5 mg /kg. Παρέμειναν σε αυτό αυξημένη συχνότητα δοσολογίας αγωγή για τη διάρκεια της θεραπείας (διάμεση 68,5 ημέρες) χωρίς καμία αύξηση στην κλινική τοξικότητα. Σε 4 περιπτώσεις τροποποιήσεις της δόσης έγιναν για τα σκυλιά που παρουσίασαν ανεπιθύμητες ενέργειες. Δύο από αυτά συνέβη σε σκύλους που έλαβαν το φάρμακο στα 2 mg /kg και έμπειρο βαθμού 3 ανεπιθύμητες ενέργειες? και στις δύο περιπτώσεις, η δόση μειώθηκε σε 1,5 mg /kg δύο φορές την εβδομάδα. Στις άλλες δύο περιπτώσεις, ένας σκύλος μειώθηκε από 1,75 mg /kg έως 1,5 mg /kg, στη συνέχεια, 1,25 mg /kg, από τη συνεχιζόμενη προβλήματα με ανορεξία, και ο άλλος σκύλος μειώθηκε από 1,5 mg /kg έως 1,25 mg /kg, επίσης λόγω ανορεξία. Αυτή η τελευταία ασθενής παρέμεινε σε θεραπεία για 246 ημέρες.

ανταπόκριση στη θεραπεία.

Το διάμεσο TTP για όλους τους σκύλους ήταν 35 ημέρες (εύρος 14-246 ημέρες). Ένα σύνολο 7 σκύλους παρουσίασαν PD κατά τις πρώτες 4 εβδομάδες θεραπείας.