Αφηρημένο

Ιστορικό

Το ποσοστό επιβίωσης καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC) ασθενείς που φέρουν άγριου τύπου KRAS αυξάνεται σημαντικά με το συνδυασμό αντι-EGFR μονοκλωνικό αντίσωμα (mAb) με την κλασική χημειοθεραπεία. Ωστόσο, υπάρχουν αντικρουόμενα στοιχεία τόσο του άγριου τύπου KRAS και μεταλλαγμένου KRAS ομάδες, οι οποίες αμφισβητούν έντονα CRC αντι-EGFR θεραπείας. Εδώ πραγματοποιήσαμε μια μετα-ανάλυση σε μια προσπάθεια να παρέχουν πιο αξιόπιστες πληροφορίες σχετικά με αντι-EGFR θεραπείας σε ασθενείς με CRC.

Μέθοδοι

Ψάξαμε πλήρεις εκθέσεις των τυχαιοποιημένες κλινικές μελέτες με τη χρήση Medline, την αμερικανική Εταιρείας Κλινικής Ογκολογίας (ASCO), και της Ευρωπαϊκής Εταιρείας για την Ιατρική Ογκολογία (ESMO). Δύο ερευνητές προβληθεί ανεξάρτητα την δημοσιευμένη βιβλιογραφία, σύμφωνα με αποκλεισμούς και αποκλειστικές μας κριτήρια και τα σχετικά δεδομένα εξήχθησαν. Χρησιμοποιήσαμε κριτική Διευθυντής 5.2 λογισμικό για την ανάλυση των δεδομένων.

Αποτελέσματα

Η προσθήκη του αντι-EGFR mAb με το πρότυπο χημειοθεραπεία βελτίωσε σημαντικά τόσο την επιβίωση χωρίς εξέλιξη (PFS) και η διάμεση συνολική επιβίωση (MOS ) στην ομάδα φυσιολογικού KRAS? αναλογίες κινδύνου (HR) για την PFS και MOS ήταν 0,70 [95% διάστημα εμπιστοσύνης (CI), 0,58 – 0,84] και 0,83 [95% CI, 0,75 – 0,91], αντίστοιχα. Στην υπο-ανάλυση της ομάδας KRAS άγριου τύπου, όταν οι προσδιορισμοί που βασίζονται σε PCR χρησιμοποιείται, PFS και MOS κυρίως την αύξηση: οι HRs ήταν 0,74 [95% CI, 0,62 – 0,88] και 0,87 [95% CI, 0,78 – 0,96] , αντίστοιχα. Στις υπο-αναλύσεις ομάδα μεταλλαγμένου KRAS, ούτε που βασίζεται στην PCR δοκιμασίες ούτε άμεση αλληλούχιση ενισχύσει PFS ή MOS.

Συμπέρασμα

Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η PCR-based δοκιμασίες με υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα επιτρέψει ακριβή προσδιορισμό των ασθενών με άγριου τύπου KRAS και ως εκ τούτου την αύξηση της PFS και MOS. Επιπλέον, τέτοιες δοκιμασίες απελευθερώσει τους ασθενείς με μεταλλαγμένο KRAS από περιττές παρενέργειες του φαρμάκου, και να τους δώσει την ευκαιρία να λάβουν την κατάλληλη θεραπεία. Έτσι, για τη θέσπιση ακριβές πρότυπο δοκιμής αναφοράς θα βελτιστοποιήσει σημαντικά CRC-στοχευμένες θεραπείες

Παράθεση:. Shan L, Λι Μ, Ma J, Zhang Η (2014) που βασίζεται στην PCR Αναλύσεις έναντι άμεση αλληλούχιση για την αξιολόγηση της επίδρασης της KRAS Κατάσταση στην αντι-EGFR Θεραπεία απόκρισης σε καρκίνο του παχέος εντέρου ασθενείς: μια συστηματική ανασκόπηση και μετα-ανάλυση. PLoS ONE 9 (9): e107926. doi: 10.1371 /journal.pone.0107926

Επιμέλεια: Domenico Κόπολα, H. Lee Moffitt Cancer Center & amp? Research Institute, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 7 του Απρίλη, 2014? Αποδεκτές: 21 του Αυγούστου 2014? Δημοσιεύθηκε: 26η Σεπτεμβρίου, 2014

Copyright: © 2014 Shan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. Η χρηματοδότηση αυτή παρέχεται από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Grant Νο 30901727, 81372496). HZ έλαβε τις χρηματοδοτήσεις. URL για 81372496: https://isisn.nsfc.gov.cn/egrantindex/funcindex/prjsearch-list. URL για 30901727: https://isisn.nsfc.gov.cn/egrantindex/funcindex/prjsearch-list. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Δεν συγγραφείς δηλωθεί οποιεσδήποτε πιθανές συγκρούσεις συμφερόντων

Εισαγωγή

Κατά τη διάρκεια των δύο τελευταίων δεκαετιών, σημαντική πρόοδος όσον αφορά τη μοριακή βιολογία του καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC) έχει εξαιρετικά αυξηθεί οι βιολογικές θεραπευτικές επιλογές [1]. Ένα βασικό επίτευγμα ήταν η ανακάλυψη των δύο μονοκλωνικά αντισώματα (mAb) που στοχεύουν τον υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR): χιμαιρική ανοσοσφαιρίνη G1 mAb (cetuximab) και πλήρως ανθρωποποιημένου mAb G2 ανοσοσφαιρίνης (panitumumab). Αυτά τα αντισώματα έχουν βρεθεί να είναι πολύ αποτελεσματικές σε συνδυασμό με πρότυπη χημειοθεραπεία ή ως μεμονωμένα θεραπευτικά μέσα για χημειοθεραπεία ανθεκτικά μεταστατικό CRC (mCRC) [2], [3]. Το 2004, οι Ηνωμένες Πολιτείες Τροφίμων και Φαρμάκων (FDA) ενέκρινε το cetuximab ως η πρώτη αναστολή του EGFR για τη θεραπεία του mCRC, την οποία ακολούθησε η έγκριση του panitumumab το 2006 mAb [4], [5]. Δυστυχώς, σχεδόν το ένα τρίτο των ασθενών mCRC δεν επωφελούνται από αυτή τη στοχευμένη θεραπεία, αλλά και την εμπειρία επακόλουθες παρενέργειες [6], [7]. Έτσι, είναι σημαντικό να εντοπιστούν οι ασθενείς που είναι πιο πιθανό να ανταποκριθούν στην επίτευξη εξατομικευμένη θεραπεία. KRAS πρωτεΐνη είναι ένα βασικό μόριο σηματοδότησης μεταξύ εξωκυτταρικών συνδετήρων EGFR και σηματοδότηση στα κύτταρα. Εκτεταμένες αναδρομικές μελέτες και μελέτες φάσης ΙΙΙ, αποκαλύπτεται ότι KRAS γονιδίου ενεργοποίηση μεταλλάξεις είναι ο βασικός αρνητικός παράγοντας πρόβλεψης της mCRC αντι-EGFR θεραπείας [8] – [10]. Με βάση αυτά τα ευρήματα, η FDA άλλαξε τις κατευθυντήριες γραμμές για να συστήσω αυτό το cetuximab και panitumumab να χορηγείται μόνο σε ασθενείς CRC με άγριου τύπου KRAS [11]. Ωστόσο, οι ερευνητές συνεχίζουν την αναφορά αντικρουόμενα γεγονότα τόσο στο KRAS άγριου τύπου και των μεταλλαγμένων ομάδες: για παράδειγμα, ασθενείς που φέρουν άγριου τύπου KRAS δεν ανταποκρίνονται, ενώ εκείνα που μεταφέρουν μεταλλαγμένο KRAS έκανε [12] – [15]. Τέτοια αντιφατικά στοιχεία αμφισβητούν έντονα τη θεραπεία mCRC. Ανεξάρτητα από την σποραδικά αναφερθεί συμβολή άλλων παραλλαγών γονιδίου, όπως BRAF μεταλλάξεων, οι μεταλλάξεις PIK3CA, και η απώλεια της έκφρασης ΡΤΕΝ [16] – [19], η ακρίβεια των μεθόδων προσδιορισμού του γονότυπου θα μπορούσαν να εξηγήσουν αυτό το φαινόμενο. Για παράδειγμα, μία πειραματική μελέτη υποστηρίζει αυτή την υπόθεση, δείχνοντας ιδιαίτερα ευαίσθητες μεθόδους για την ανίχνευση KRAS μεταλλάξεις εντοπίστηκαν 13 επιπλέον ασθενείς mCRC ανθεκτικά σε αντι-EGFR mAb σε σύγκριση με την άμεση αλληλούχιση [20].

Για να αντιμετωπίσει συστηματικά το ζήτημα αυτό, πραγματοποιήσαμε μια συστηματική ανασκόπηση και μετα-ανάλυση για να εκτιμηθεί η επιβίωση χωρίς εξέλιξη (PFS) και η διάμεση συνολική επιβίωση (MOS) σε ασθενείς των οποίων η κατάσταση KRAS ανιχνεύθηκαν είτε με δοκιμασίες που βασίζονται στην PCR ή άμεση αλληλούχιση. Συγκρίναμε την ικανότητα αυτών των δύο μεθόδων προσδιορισμού του γονότυπου για να αξιολογηθεί η επίδραση της κατάστασης KRAS σε απάντηση CRC θεραπεία αντι-EGFR.

Μέθοδοι

στρατηγική αναζήτησης

Η προθεσμία για τη δίκη δημοσίευση ήταν η 31η Δεκεμβρίου, 2013. οι πλήρεις εκθέσεις των τυχαιοποιημένων κλινικών δοκιμών που ασχολήθηκε με το φαινόμενο της κατάστασης KRAS σε απάντηση CRC αντι-EGFR θεραπεία συγκεντρώθηκαν μέσω Medline (PubMed: www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed), η αμερικανική Εταιρείας Κλινικής Ογκολογίας (ASCO, www.asco.org), και της Ευρωπαϊκής Εταιρείας για την Ιατρική Ογκολογία (ESMO, www.esmo.org). Οι λέξεις-κλειδιά που χρησιμοποιούνται για την αναζήτηση ήταν: CRC, μετάλλαξη KRAS, το cetuximab, panitumumab, χημειοθεραπεία, τυχαιοποιημένη, και αντι-EGFR mAb. Αποκλείσαμε πρώτο διπλό πρωτόκολλα αντίσωμα που αξιολογήθηκαν επίσης αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) αντίσωμα. Στη συνέχεια έψαξε τις δοκιμές στόχου σύμφωνα με την ροή εργασίας φαίνεται στο Σχήμα 1.

Η

ομάδες ασθενών και υποομάδες

Για να αξιολογηθεί η συνολική επίδραση της αντι-EGFR mAb φάρμακα ως προσθήκη στο πρότυπο χημειοθεραπεία, χωρίσαμε σε όλους τους ασθενείς εντάχθηκαν σε δύο ομάδες: την πειραματική ομάδα, αντιμετωπίζονται με ένα συνδυασμό αντι-EGFR mAb και τυπική χημειοθεραπεία? και η ομάδα ελέγχου, αντιμετωπίζεται μόνο με την κλασική χημειοθεραπεία. Στη συνέχεια αναλύεται η επίδραση της κατάστασης KRAS σε απάντηση στην αντι-EGFR θεραπείας με περαιτέρω διαίρεση των ασθενών σε άγριου τύπου KRAS και μεταλλαγμένα ομάδες KRAS. Για την εκτέλεση υπο-αναλύσεις για να συγκριθεί η ικανότητα των διαφόρων μεθόδων προσδιορισμού του γονότυπου για να αξιολογηθεί η επίδραση της κατάστασης KRAS σε απόκριση προς CRC αντί-ΕΟΡΚ θεραπεία, έχουμε διαχωρίζονται ασθενείς με διαφορετικό καθεστώς KRAS σε δύο υποομάδες: η βασιζόμενη σε PCR υποομάδας δοκιμασία και την άμεση αλληλούχιση υποομάδα.

Στατιστικές αναλύσεις

Εμείς εξάγεται αναλογίες κινδύνου (HR) για την PFS και MOS με διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (ΠΙ) από τις εγγεγραμμένοι δοκιμές. Οι PFS και MOS δεδομένα για κάθε δοκιμή που αντιπροσωπεύεται από το αρχείο καταγραφής του ΥΕ και διακύμανση της πειραματικής σύγκριση με την ομάδα ελέγχου και στους δύο ασθενείς με άγριου τύπου και μεταλλαγμένου KRAS, σύμφωνα με μια προηγουμένως περιγραφείσα μέθοδο [21]. Μια HR & lt? 1 δείχνει μια βελτίωση στο PFS ή MOS. Εάν οι δοκιμές που αναφέρονται καταγραφής ΥΕ και διακύμανση, εμείς τους που χρησιμοποιούνται άμεσα. Εάν οι μελέτες δεν παρέχουν αυτές τις αξίες, εξάγαμε τα δεδομένα από τις καμπύλες επιβίωσης, όταν είναι διαθέσιμα, για να εκτιμηθούν οι τιμές του HR καταγραφής και διακύμανση. Όταν οι καμπύλες επιβίωσης για τις ομάδες θεραπείας δεν ήταν διαθέσιμα, άλλα δεδομένα, όπως οι τιμές P δοκιμασία log-rank και ο αριθμός των συμβάντων σε κάθε ομάδα, εξήχθησαν για να επιτρέψει την εκτίμηση της ΥΕ καταγραφής και διακύμανση. Για να αποκτήσετε περίληψη ωρών από την πειραματική ομάδα σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, οι HRs καταγραφής συγκεντρώθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο τυχαίων-αποτελέσματος ή μοντέλο σταθερού αποτελέσματος για συνεχή αποτελέσματα με ΠΙ που σε ποσοστό 95% [22]. Να καθορίσει το κατάλληλο μοντέλο, χρησιμοποιήσαμε κριτική Διευθυντής 5.2 λογισμικό για να αναλύσει την ετερογένεια μεταξύ μελέτης. Όταν το

P

αξία για ετερογένεια ήταν μικρότερη από 0,05, επιλέξαμε ένα μοντέλο τυχαίου αποτελέσματος. Όταν το

P

αξία για ετερογένεια ήταν μεγαλύτερη ή ίση με 0,05, επιλέξαμε ένα μοντέλο σταθερού αποτελέσματος.

Αποτελέσματα

Επιλεγμένα Δοκιμές

προσδιορίζονται δέκα δοκιμές, σύμφωνα με την ροή εργασιών που φαίνεται στο Σχήμα 1 [13], [23] – [31]. Οι δοκιμές αυτές παρατίθενται στον Πίνακα 1. Ένα σύνολο 6699 ασθενών αξιολογήθηκαν σε αυτή την μετα-ανάλυση.

Η

Επιβίωση χωρίς εξέλιξη (PFS)

Τα αποτελέσματα δείχνουν την προσθήκη αντι -EGFR θεραπεία για την κλασική χημειοθεραπεία παρουσιάζονται στο Σχήμα 2. για όλους τους ασθενείς, με ή χωρίς KRAS μεταλλάξεις, προσθήκη αντι-EGFR θεραπεία αξιοσημείωτα βελτιωμένη PFS [HR 0,84, (95% CI, 0,73 – 0,98), P = 0,02], σύμφωνα με σε ένα μοντέλο τυχαίας επίδρασης (τιμή του P για την ετερογένεια & lt? 0,00001). Όταν αξιολόγησε τα δεδομένα που βασίζονται σε κατάσταση KRAS, παρατηρήσαμε μια σημαντική βελτίωση στο PFS σε ασθενείς με καθεστώς άγριου τύπου [HR 0,70 (95% CI, 0,58 – 0,84), P = 0,0001], σύμφωνα με ένα μοντέλο τυχαίου αποτελέσματος ( τιμή του P για την ετερογένεια & lt? 0,00001), αλλά όχι σε ασθενείς με μεταλλαγμένο KRAS [HR 1,06 (95% CI, 0,91 – 1,25), P = 0,44], σύμφωνα με ένα μοντέλο τυχαίου αποτελέσματος (τιμή του P για ετερογένεια = 0,009). Στην υπο-ανάλυση της ομάδας KRAS άγριου τύπου, PFS αυξήθηκε σημαντικά στην υποομάδα που βασίζεται στην PCR δοκιμασία [HR 0,74 (95% CI, 0,62 – 0,88), p = 0,0009], σύμφωνα με ένα μοντέλο τυχαίου αποτελέσματος (τιμή P για την ετερογένεια & lt? 0,0001), αλλά όχι στο άμεσο υποομάδα αλληλουχίας [HR 0,55 (95% CI, 0,29 – 1,05), P = 0,07], σύμφωνα με ένα μοντέλο τυχαίου αποτελέσματος (τιμή του P για ετερογένεια = 0,002). Στις υπο-αναλύσεις ομάδα μεταλλαγμένου KRAS, ούτε που βασίζεται στην PCR δοκιμασία ούτε άμεση αλληλούχιση βελτιωμένη PFS [HR 0,99 (95% CI, 0,78 – 1,27), p = 0,96], σύμφωνα με ένα μοντέλο σταθερής αποτέλεσμα (τιμή του P για ετερογένεια = 0,97) και [HR 1,08 (95% CI, 0,89 – 1,32), p = 0,43], σύμφωνα με ένα μοντέλο τυχαίου αποτελέσματος (τιμή του P για ετερογένεια = 0,0003), αντίστοιχα.

Η

διάμεση συνολική επιβίωση (MOS)

για τη συνολική τους ασθενείς, η προσθήκη αντι-EGFR δεν βελτιώνει σημαντικά τις MOS [HR 0,94 (95% CI, 0,83 – 1,05), p = 0,26], σύμφωνα με μια τυχαίου μοντέλο αποτέλεσμα (τιμή του P για ετερογένεια = 0,002). Ωστόσο, παρατηρήσαμε σημαντική βελτίωση όσον αφορά Mos στην ομάδα φυσιολογικού KRAS [HR 0,83 (95% CI, 0,75 – 0,91), P & lt? 0,0001], σύμφωνα με ένα μοντέλο σταθερής αποτέλεσμα (τιμή του P για ετερογένεια = 0,06). Στην υπο-ανάλυση της ομάδας KRAS άγριου τύπου, Mos αυξημένη στην υποομάδα δοκιμασία που βασίζεται στην PCR, [HR 0,87 (95% CI, 0,78 – 0,96), P = 0.004], σύμφωνα με ένα μοντέλο σταθερής αποτέλεσμα (τιμή P για την ετερογένεια = 0,55). Η άμεση υποομάδα αλληλουχίας περιλαμβάνεται μόνο μία δίκη και δεν ισχύει για την μετα-ανάλυση. Στην ομάδα μεταλλαγμένου KRAS, δεν υπήρχε καμία εμφανής βελτίωση στην MOS [HR 1,09 (95% CI, 0,98 – 1,21), P = 0,11], σύμφωνα με ένα μοντέλο σταθερής αποτέλεσμα (τιμή του P για ετερογένεια = 0,49). Στην υπο-ανάλυση της υποομάδας KRAS μεταλλαγμένο τύπου, αναλύσεις PCR-based δεν προφανώς αλλάζουν τα θεραπευτικά για CRC [HR 1,10 (95% CI, 0,99 – 1,23), P = 0.009], σύμφωνα με ένα μοντέλο σταθερής αποτέλεσμα ( τιμή του P για ετερογένεια = 0,42). Στην άμεση υποομάδα αλληλουχίας, η ενιαία δίκη δεν επιτρέπει την μετα-ανάλυση. Αυτά τα δεδομένα δείχνονται στο Σχήμα 3.

Η

Συζήτηση

Νέες θεραπείες μοριακού στόχευση έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως στην θεραπεία CRC με τους διακεκριμένους πλεονεκτήματα της υψηλής εξειδίκευσης και χαμηλή τοξικότητα [32]. Τρέχοντα στοιχεία έχει εγκρίνει ότι οι ασθενείς CRC με άγριου τύπου KRAS θα ανταποκριθεί σε αντι-EGFR θεραπείας. Ωστόσο, ορισμένοι ασθενείς με άγριου τύπου KRAS δεν εμφανίζουν την αναμενόμενη ανταπόκριση, ενώ ορισμένοι ασθενείς με μεταλλαγμένο KRAS δεν ανταποκρίνονται καλά. Μια σημαντική εξήγηση για τέτοιες αντιφατικές παρατήρηση μπορεί να συμβαίνει επειδή η ακρίβεια των σημερινών μεθόδων προσδιορισμού του γονότυπου ποικίλλει μεταξύ των διαφόρων εργαστηρίων και διαφορετικές κλινικές δοκιμές. Σε αυτή τη μελέτη, αναλύουμε συστηματικά τις δυνατότητες που βασίζεται στην PCR δοκιμασίες σε σχέση με την άμεση αλληλούχιση για να αξιολογηθεί η επίδραση της κατάστασης KRAS σε απάντηση στην αντι-EGFR θεραπείας.

Όπως ήταν αναμενόμενο, η παρούσα μετα-ανάλυση επιβεβαιώνει τα κλινικά οφέλη όταν αντι-ΕΟΡΚ θεραπεία προστίθεται σε συνήθη χημειοθεραπεία για τη θεραπεία ασθενών που φιλοξενούν mCRC άγριου τύπου KRAS, με μια σημαντική βελτίωση στην PFS. Όταν εκτελούνται υπο-αναλύσεις με βάση τις διαφορετικές μεθόδους καθορισμού γονοτύπου, τόσο PFS και MOS βελτιώνεται όταν χρησιμοποιήθηκαν δοκιμασίες που βασίζονται σε PCR. Σε αυτές τις 10 δοκιμές, οι ερευνητές χρησιμοποίησαν δοκιμασίες που βασίζονται σε PCR, περιλαμβανομένης της PCR σύσφιξης τήξης μέθοδος καμπύλης και αλληλόμορφο-ειδική PCR πραγματικού χρόνου, για την ανίχνευση μεταλλάξεων KRAS. Οι ευαισθησίες των δύο αυτών μεθόδων είναι 0,1% και 0,5% [33], [34], αντίστοιχα. Σε σύγκριση, η ευαισθησία της απευθείας προσδιορισμού σειράς είναι 10-20% [35]. Έτσι, οι μέθοδοι που βασίζονται στην PCR επιτρέπουν την ακριβή ανίχνευση της χαμηλής αφθονίας KRAS μεταλλάξεις, να αυξήσει το ποσοστό ανίχνευσης, αποκλείουν οι περισσότεροι ασθενείς με μεταλλαγμένο KRAS, και ως εκ τούτου τη βελτίωση της PFS και MOS. Έτσι, έχουμε εκτεθεί μια νέα ιδέα σχετικά με την αντίφαση στη θεραπεία mCRC: υπάρχει ένα υποπληθυσμό των ασθενών mCRC που φέρουν μεταλλάξεις KRAS χαμηλού επιπέδου μεταξύ των ασθενών με άγριου τύπου KRAS και εκείνων με άφθονο μεταλλαγμένο KRAS. Λόγω της περιορισμένης ευαισθησίας των μεθόδων ανάλυσης, αυτό υποπληθυσμός ασθενών τυπικά δεν ομαδοποιούνται σωστά, προκαλώντας την θεραπεία για να πάει σε λάθος κατεύθυνση. Αυτό οδηγεί σε μια απρόβλεπτη έκβαση για μεμονωμένους ασθενείς, καθώς επίσης και δραματικά συγχέει τη στρατηγική θεραπείας mCRC. Μια λύση για το θέμα αυτό θα βελτιώσει σημαντικά τη θεραπεία των ασθενών με mCRC.

Σε σύγκριση με την υψηλή εξειδίκευση της άμεσης αλληλουχίας, πρέπει να λάβουμε υπόψη την ιδιαιτερότητα των δοκιμασιών που βασίζεται στην PCR όταν χρησιμοποιούμε τα αποτελέσματα του γονότυπου για την εκτίμηση της αποτελεσματικότητας των αντι- EGFR στοχευμένη θεραπεία. Η δυνητικά υψηλό ψευδώς θετικό ποσοστό σφάλματος των δοκιμασιών που βασίζεται στην PCR μπορεί να αποκλείσει ασθενείς που φέρουν άγριου τύπου KRAS από τη λήψη της σωστής θεραπείας. Εδώ προτείνουμε οι προσδιορισμοί που βασίζονται σε PCR θα ομίλου μερικοί ασθενείς KRAS άγριου τύπου στο μεταλλαγμένο ομάδα, και έτσι λανθασμένα αυξήσει PFS και Mos του μεταλλαγμένου ομάδας. Είναι ενδιαφέρον, δεν παρατηρήσαμε το φαινόμενο αυτό στη μελέτη μας, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι αναλύσεις που βασίζονται σε PCR που χρησιμοποιούνται σε αυτές τις δοκιμές είναι αρκετά συγκεκριμένη για να αποκαλύψει μεταλλαγμένο KRAS. Μία από αυτές τις δοκιμασίες είναι σύσφιξης PCR και η μέθοδος καμπύλη τήξης. Ο σφιγκτήρας που χρησιμοποιείται εδώ είναι πεπτιδικό νουκλεϊκό οξύ (ΡΝΑ), στο οποίο η ραχοκοκαλιά φωσφορικού σακχάρου των φυσικών νουκλεϊνικών οξέων έχει αντικατασταθεί από ένα συνθετικό πεπτίδιο ραχοκοκαλιά και αναγνωρίζει μία ειδικής αλληλουχίας DNA υπακούοντας στο σύστημα σύνδεσης υδρογόνου Watson-Crick [36]. Το ΡΝΑ-DNA ετεροδιπλό επιδεικνύει εξαιρετική θερμική σταθερότητα, ενώ η ενσωμάτωση της κάθε αναντιστοιχία στο duplex θα μειώσει τη θερμική σταθερότητα κατά περισσότερο από 10 ° C? Αυτό επιτρέπει πολύ συγκεκριμένες ανίχνευση μετάλλαξης [33], [36]. ανίχνευση μετάλλαξης με αλληλόμορφο-ειδική PCR πραγματικού χρόνου βασίζεται στην αρχή ότι η επέκταση είναι αποτελεσματική όταν τερματικό βάσης της 3 ‘ενός εκκινητή ταιριάζει στόχου της, ενώ η επέκταση είναι αναποτελεσματική ή ανύπαρκτη όταν το τερματικό βάση είναι ακατάλληλα, και επίσης έδειξε καλή εξειδίκευση σε προηγούμενες εφαρμογές [37], [38]. Το αλληλόμορφο-ειδική PCR πραγματικού χρόνου που χρησιμοποιούνται στην τρέχουσα εγγράφονται κλινικές δοκιμές είναι μία δοκιμασία εμπόριο από DxS Ltd, η οποία περαιτέρω εγγυάται την υψηλή εξειδίκευση [39]. Εν ολίγοις, με ακριβώς την άμεση εξατομικευμένη θεραπεία CRC, σας συνιστούμε όπως πολύ συγκεκριμένες μεθόδους ή με άλλες μεθόδους με υψηλή εξειδίκευση.

Άλλες πτυχές για να αξιολογήσει ένα PCR δοκιμασία που βασίζεται περιλαμβάνουν διακίνηση, τη μόλυνση και την ευκολία. Ο συνδυασμός της ενίσχυσης PCR και PCR πραγματικού χρόνου σε αυτούς τους δύο τύπους μεθόδων που βασίζονται στην PCR, PCR σύσφιξης-ανάλυση καμπύλης τήξης και αλληλόμορφο-ειδική PCR πραγματικού χρόνου, επιτρέπει υψηλής απόδοσης και δοκιμή κλειστού σωλήνα για την ανίχνευση μεταλλάξεων του DNA χωρίς τη χρονοβόρα μέθοδοι μετα-PCR. Επιπλέον, σε πραγματικό χρόνο παρακολούθηση ενίσχυση πρότυπο βελτιωθεί σημαντικά η ερμηνεία των αποτελεσμάτων PCR [40]. Επί του παρόντος, οι δύο μέθοδοι έχουν εφαρμοστεί με επιτυχία για να ψάξετε διαφορετικές μεταλλάξεις του γονιδίου σε διάφορα δείγματα όγκων. Για παράδειγμα, KRAS μεταλλάξεις στη χολή [41], οι μεταλλάξεις του EGFR σε NSCLC [42], BRAF μεταλλάξεων στο CRC [35]. Η DxS παρέχει επίσης επικυρωθεί κιτ βιοδείκτη για EGFR, RAF, BCR-ABL και άλλα γονίδια που δείχνουν ότι υπάρχει σχέση μεταξύ της κατάστασης του ασθενούς μετάλλαξη και την ανταπόκριση των ναρκωτικών [39].

Συμπέρασμα

Σε CRC αντι- επεξεργασία EGFR, που βασίζεται στην PCR δοκιμασίες με υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα καταστεί δυνατή η αποτελεσματική αποκλεισμό των ασθενών με μεταλλαγμένο KRAS, καθώς και τη μείωση των παρενεργειών των φαρμάκων και να αυξήσει την PFS και MOS στους ασθενείς KRAS άγριου τύπου. Ταυτόχρονα, αυτές οι μέθοδοι επιτρέπουν την ακριβή ταυτοποίηση του μεταλλαγμένου KRAS ασθενών έτσι ώστε να μπορούμε πραγματικά στενά η υποομάδα ασθενών με μεταλλάξεις KRAS και να διερευνήσει πιο αποτελεσματικές θεραπευτικές επιλογές για τους ασθενείς αυτούς. Ως εκ τούτου, μια ακριβής πρότυπο δοκιμής αναφοράς απαιτείται επειγόντως για τη βελτιστοποίηση mCRC-στοχευμένη θεραπεία. Αν και οι τρέχουσες μέθοδοι που βασίζονται σε PCR είχαν πολύ καλύτερες επιδόσεις από πριν, ευαισθησία και ειδικότητα τους δεν μπορεί να βελτιωθεί περαιτέρω λόγω της περιορισμένης επίλυση του αναλογικού σήματος και τις αναπόφευκτες μόρια φόντο. Ο περιορισμός αυτός μειώνει σημαντικά την αξία ορισμένων σημαντικών κλινικών δειγμάτων όπως κοπράνων και αίματος, όπου το DNA στόχος αντιπροσωπεύει μόνο ένα μικρό κλάσμα του συνολικού DNA. Για παράδειγμα, που προέρχονται από όγκους DNA στο αίμα των διπλωμάτων ευρεσιτεχνίας με χαμηλότερη όγκους στάδιο είναι 0.01-0.12% [43]. Η μέθοδος που αναπτύσσεται τελευταία ψηφιακή PCR (dPCR) κατέχει το μεγαλύτερο δυναμικό για τη βελτίωση της ακρίβειας ανίχνευσης όσον αφορά τόσο την ευαισθησία και ειδικότητα. Σε dPCR, τα πρότυπα σε ένα δείγμα σε διαμερίσματα σε πολλά λεπτά μεμονωμένες αντιδράσεις, που το καθένα περιέχει το πολύ ένα ενιαίο πρότυπο. Τέτοια διαμερισματοποίηση μειώνει αποτελεσματικά το θόρυβο και αυξάνει την ειδικότητα της ενίσχυσης των προτύπων χαμηλού επιπέδου [44], [45]. Η αναφερόμενη ευαισθησία της dPCR έφθασε 0,0005% [44]. Πιο βολικό από το PCR πραγματικού χρόνου, dPCR δεν απαιτεί τη δημιουργία πρότυπης καμπύλης, και από την άποψη της απόδοσης η έκδοση 96-καλά dPCR έχει αναπτυχθεί [44], [45]. Αυτή η πολλά υποσχόμενη μέθοδος θα μας επιτρέψει να κατανοήσουμε ουσιαστικά ετερογένεια του όγκου και βελτίωση της στοχευμένη θεραπεία του καρκίνου [46], [47]. Συμπερασματικά, η έρευνα αυτή παρέχει ένα πολύ ευρύτερο όραμα για ολόκληρο τον τομέα της θεραπείας του καρκίνου.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Λίστα ελέγχου S1.

PRISMA λίστα ελέγχου

doi:. 10.1371 /journal.pone.0107926.s001

(DOC)