Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο καρκίνος του προστάτη είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου μεταξύ των ηλικιωμένους άνδρες στις ΗΠΑ, και ανοσοθεραπεία έχει αποδειχθεί ότι είναι μια πολλά υποσχόμενη στρατηγική για τη θεραπεία ασθενών με μεταστατικό ευνουχισμό ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη. Οι προσπάθειες για τον εντοπισμό ειδικών αντιγόνων όγκου μυθιστόρημα του προστάτη θα διευκολύνει την ανάπτυξη αποτελεσματικών εμβολίων κατά του καρκίνου κατά του καρκίνου του προστάτη. συζευγμένο υποδοχέα προστάτη-ειδική πρωτεΐνη G (PSGR) είναι ένα νέο αντιγόνο το οποίο έχει δειχθεί ότι είναι ειδικώς υπερ-εκφράζεται στους ανθρώπινους ιστούς καρκίνου του προστάτη. Σε αυτή τη μελέτη, περιγράφουμε την ταυτοποίηση των PSGR πεπτίδιο προερχόμενο επιτόπια που αναγνωρίζονται από CD8

+ Τ κυττάρων σε ένα HLA-A2 εξαρτώμενο τρόπο.

Μεθοδολογία /Principal Εκτίμηση

Είκοσι μία PSGR πεπτίδια προερχόμενα προβλέφθηκαν από προσέγγιση ανοσο-πληροφορικής με βάση το μοτίβο δέσμευσης HLA-A2. Αυτά τα πεπτίδια εξετάσθηκαν για την ικανότητά τους να επάγουν το πεπτίδιο-ειδικές αποκρίσεις Τ κυττάρων σε μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) που λαμβάνονται από είτε HLA-A2

+ υγιείς δότες ή HLA-A2 ασθενείς

+ καρκίνο του προστάτη. Η αναγνώριση των HLA-A2 θετική και PSGR εκφράζουν LNCaP κύτταρα ελέγχθηκε επίσης. Μεταξύ των 21 PSGR προερχόμενα πεπτίδια, τρία πεπτίδια, PSGR3, PSGR4 και PSGR14 επάγεται συχνά πεπτιδίου-ειδικές αποκρίσεις Τ κυττάρων σε PBMCs από δύο υγιείς δότες και ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Σημαντικά, αυτές οι πεπτιδο-ειδικών Τ κυττάρων αναγνωρίζονται και σκότωσε LNCaP κύτταρα καρκίνου του προστάτη σε ένα HLA τάξης Ι-περιορισμένο τρόπο.

Συμπεράσματα /σημαντικότητα

Έχουμε προσδιορίσει τρία νέα HLA-Α2-περιορισμένο PSGR προερχόμενο πεπτίδια που αναγνωρίζονται από CD8

+ Τ κύτταρα, τα οποία, με τη σειρά του, αναγνωρίζει HLA-A2

+ και PSGR

+ καρκινικά κύτταρα. Τα πεπτίδια που προέρχονται από PSGR προσδιορίζονται μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως διαγνωστικοί δείκτες, καθώς το ανοσοποιητικό στόχους για την ανάπτυξη αντικαρκινικών εμβολίων

Παράθεση:. Matsueda S, Wang Μ, Weng J, Li Υ, Yin Β, Ζου J, et al. (2012) Ταυτοποίηση του ειδικού προστατικού G-πρωτεΐνη υποδοχέα όπως αντιγόνο όγκου που αναγνωρίζεται από τα CD8

+ Τ κυττάρων για ανοσοθεραπεία καρκίνου. PLoS ONE 7 (9): e45756. doi: 10.1371 /journal.pone.0045756

Επιμέλεια: Mohammad O. Hoque, Johns Hopkins University, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: May 11, 2012? Αποδεκτές: 24 Αυγούστου 2012? Δημοσιεύθηκε: 20 Σεπτεμβρίου 2012 |

Copyright: © Matsueda et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο ήταν εν μέρει χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας και Cancer Research Institute, και το The Methodist Hospital Research Institute. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη έχει γίνει η πιο κοινή μορφή καρκίνου μεταξύ των ανδρών στις ΗΠΑ και είναι η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις αμερικανικές άνδρες [1]. Το πρότυπο της φροντίδας για τους περισσότερους ασθενείς με καρκίνο του προστάτη είναι η χειρουργική επέμβαση ή /και ακτινοθεραπεία. Ωστόσο, την υποτροπή της νόσου μετά από χειρουργική επέμβαση ή ακτινοβολία εξακολουθεί να λαμβάνει χώρα σε έως και 30% των ασθενών. Αν και η θεραπεία στέρησης ανδρογόνου είναι μια αποτελεσματική θεραπεία έναντι υποτροπιάζουσας νόσου, οι περισσότεροι από αυτούς τους ασθενείς τελικά αναπτύσσουν ανδρογόνα πυρίμαχα καρκίνο του προστάτη, η οποία δεν είναι ευαίσθητη στην παραδοσιακή θεραπεία. Ως εκ τούτου, πιο αποτελεσματική και λιγότερο τοξική θεραπεία χρειάζονται επειγόντως. Η ανοσοθεραπεία έχει αποδειχθεί ότι είναι μια πολλά υποσχόμενη προσέγγιση για τη θεραπεία του καρκίνου του προστάτη, ιδιαίτερα για τους ασθενείς με μεταστατικό ευνουχισμό ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη [2] – [4]. Αξιοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος για την εξάλειψη κακοήθων κυττάρων είναι μια πολλά υποσχόμενη προσέγγιση για την θεραπεία του καρκίνου, αλλά μέχρι πρόσφατα έχει συναντήθηκε με μόνο σποραδικές κλινική επιτυχία [4] – [6]. Πρόσφατες Τροφίμων και Φαρμάκων (FDA) εγκρίσεις των ανοσοθεραπείας που βασίζεται σε εμβόλιο /φαρμάκου sipuleucel-Τ

(

Provenge) και ipilimumab (Yervoy) αντιπροσωπεύουν ορόσημα στον τομέα της ανοσοθεραπείας του καρκίνου [7], [8]. Επιπλέον, μια κλινική μελέτη φάσης ΙΙΙ του πεπτιδίου gp100 για το μελάνωμα που παράγεται επίσης ιδιαίτερα ενθαρρυντικά κλινικά αποτελέσματα [9]. Ωστόσο, τα κλινικά οφέλη που αναφέρθηκαν για αυτούς τους παράγοντες έχουν πέσει πολύ από πλήρεις ανταποκρίσεις και μόνιμη θεραπείες. Στην περίπτωση sipuleucel-T, το όφελος επιβίωσης για τους ασθενείς ήταν μόνο 4,1 μήνες, χωρίς αντικειμενική υποχώρηση του όγκου ή σημαντικές αλλαγές στην ειδικό προστατικό αντιγόνο (PSA) επίπεδα. Μια πρόσφατη μελέτη που χρησιμοποίησε περαιτέρω ζωικά μοντέλα αποκαλύπτει τη σημασία του όγκου-ειδικά αντιγόνα στην πρόκληση ανοσοαποκρίσεων έναντι ενός αναπτυσσόμενου όγκου [10], παρακινώντας περισσότερες προσπάθειες για τον εντοπισμό τέτοιων αντιγόνων για ανοσοθεραπεία καρκίνου. Επιπλέον, δεδομένου ότι ορισμένες μεγάλες αντιγόνα απόρριψης μπορεί να χαθούν ή να τροποποιηθούν λόγω της επιλογής των Τ κυττάρων και τη θανάτωσή τους [11], η καλύτερη στρατηγική είναι να στοχεύσουν πολλαπλά αντιγόνα όγκου που υπάρχουν σε επιμέρους όγκους για ανοσοθεραπεία.

Μέχρι σήμερα, ένας αριθμός ειδικών αντιγόνων όγκου του προστάτη έχουν καλά καθορισμένα, συμπεριλαμβανομένων των PSA [12], [13], prostein [14], [15], του προστάτη αντιγόνο βλαστικών κυττάρων (PSCA) [16], προστατικό αντιγόνο μεμβράνης ειδικό (PSMA ) [17] – [19], η όξινη προστατική φωσφατάση (ΡΑΡ) [20] και το δυναμικό P8 παροδική υποδοχέα (trp-ρ8) [21]. Επιπλέον, επίτοποι ΗΕΑ-τάξης Ι-περιορισμένα προέρχονται από αυτά τα αντιγόνα όγκου έχουν περιγραφεί [22]. Ένα μειονέκτημα των ενιαίου όγκου ανοσοθεραπείας βασισμένο σε αντιγόνο είναι ότι μπορεί να συμβεί το ανοσοποιητικό διαφυγής. Ως εκ τούτου, απαιτείται προσδιορισμός των πρόσθετων του καρκίνου του προστάτη-ειδικά αντιγόνα για την ανάπτυξη πιο αποτελεσματικών και αντιγόνου-ειδικών εμβολίων για ασθενείς με μεταστατικό καρκίνο του προστάτη. συζευγμένο υποδοχέα προστάτη-ειδική πρωτεΐνη G (PSGR) είναι ένα μέλος της G-πρωτεΐνη οσφρητικών οικογένεια υποδοχέων, και εκφράζεται έντονα σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη σε σύγκριση με φυσιολογικά προστατικά κύτταρα [23] – [25], υποδηλώνοντας ότι η PSGR μπορεί να είναι στόχο για την ανάπτυξη νέων ανοσοθεραπευτικών στρατηγικών έναντι του καρκίνου του προστάτη.

σε μια προσπάθεια να καθοριστεί αν PSGR μπορεί να αναγνωριστεί από τα Τ κύτταρα, περιγράφουμε την ταυτοποίηση των επιτόπων Τ κυττάρου PSGR προερχόμενων για αναγνώριση Τ κυττάρου από ένα ανοσο προσέγγιση -bioinformatics. Επελέγησαν και συντέθηκαν Είκοσι ένας πεπτίδια που προβλέφθηκαν να συνδεθούν με το μόριο HLA-A2. Όλα αυτά τα πεπτίδια αξιολογήθηκαν

in vitro

για την ικανότητά τους να διεγείρουν τα Τ κύτταρα σε ΜΚΠΑ από υγιείς εθελοντές και σε ασθενείς με προστάτη βασίζεται στην ιντερφερόνη-γ (ΙΡΝ-γ) απελευθέρωση μετρήθηκε με ELISA ή δοκιμασίες ELISPOT. Τρία πεπτίδια βρέθηκαν να επάγουν IFN-γ απελευθέρωσης σε περιφερικά Τ κύτταρα από υγιή άτομα και σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Σημαντικά, αυτές οι πεπτιδο-ειδικών Τ κυττάρων θα μπορούσε να αναγνωρίσει HLA-A2

+, PSGR εκφράζουν LNCaP κύτταρα σε ένα HLA τάξης Ι-εξαρτώμενο τρόπο.

Υλικά και Μέθοδοι

υγιείς δότες και του καρκίνου του προστάτη ασθενείς

δέκα HLA-A2

+ ασθενείς με καρκίνο του προστάτη και δέκα HLA-A2

+ υγιή άτομα εγγράφηκαν στη μελέτη αυτή μετά λήφθηκε γραπτή συγκατάθεση. Όλα τα πρωτόκολλα έχουν εγκριθεί από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review (IRB) του Baylor College of Medicine πριν από την έναρξη των σπουδών. 20 ml περιφερικού αίματος ελήφθησαν από κάθε άτομο, και μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) απομονώθηκαν με φυγοκέντρηση βαθμίδωσης πυκνότητας με χρήση Lymphoprep (Nycomed Pharma AS? Όσλο, Νορβηγία). Τα προσφάτως απομονωμένα PBMCs κρυοσυντηρήθηκαν για μελλοντική χρήση σε 1 mL κατάψυξη μέσο που περιέχει 90% σουλφοξείδιο FCS και 10% διμεθυλο (DMSO) στους -140 ° C. Η έκφραση των μορίων HLA-A2 επί PBMCs ελήφθησαν από ασθενείς με καρκίνο και σε υγιή άτομα επαληθεύθηκε με κυτταρομετρία ροής με FITC-επισημασμένο HLA-A2 mAb ΒΒ7.2 (BD Pharmingen, San Diego, CA, USA).

κυτταρικές Γραμμές

Τ2 κυττάρων (ένα HLA-A2

+ ανεπαρκές ΤΑΡ κυτταρική γραμμή) κύτταρα LNCaP, κύτταρα PC3 (μία HLA-A2-αρνητική κυτταρική σειρά καρκίνου του προστάτη), και (ένα HLA-A2 θετικών προστάτη κυτταρική γραμμή καρκινώματος) ήταν όλα αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection (ATCC? Manassas, VA, USA). Όλες οι κυτταρικές γραμμές διατηρήθηκαν σε μέσο RPMI-1640 (Mediatech? Manassas, VA, USA), συμπληρωμένο με 10% FBS, 1% Ε-γλουταμίνη και 1% πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη

Πεπτίδια

Είκοσι ένα PSGR προερχόμενα πεπτίδια (Πίνακας 1) είχαν προβλεφθεί χρησιμοποιώντας BIMAS (https://www-bimas.cit.nih.gov/molbio/hla_bind/), SYFPEITHI (https://www.syfpeithi.de/), και Rankpep (https://bio.dfci.harvard.edu/Tools/rankpep.html) με βάση την μοτίβο δέσμευσης HLA-A2. Επελέγησαν μόνο επίτοπα τα οποία είχαν προβλεφθεί από τουλάχιστον δύο από αυτούς τους αλγορίθμους για περαιτέρω δοκιμές. Τα πεπτίδια συντέθηκαν με μια μέθοδο στερεάς φάσης χρησιμοποιώντας συσκευή σύνθεσης πεπτιδίου (AApptec, Inc .; Louisville, ΚΥ, USA), καθαρίστηκε με χρωματογραφία υγρού υψηλής απόδοσης αντίστροφης φάσης και επικυρωμένες με φασματομετρία μάζας. Τα συντιθέμενα πεπτίδια διαλύθηκαν σε DMSO σε συγκέντρωση 10 mg /mL και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C μέχρι περαιτέρω χρήσης.

Η

In vitro

διέγερση πεπτιδίου-ειδικών Τ κυττάρων σε PBMCs

PBMCs (1 × 10

5 κύτταρα /φρεάτιο) είτε από υγιή άτομα ή ασθενείς με καρκίνο του προστάτη επωάστηκαν με πρότυπες συγκεντρώσεις πεπτιδίου 20 μg /mL ανά πεπτίδιο [26] – [28] σε 96-φρεατίων υ-πυθμένα μικροπλάκες (BD, Franklin Lakes, NJ, USA) σε 200 μΐ μέσου Τ-κυττάρων (TCM), που αποτελείται από RPMI 1640 (Mediatech, Manassas, VA, USA), 10% ανθρώπινο ορό ΑΒ (Valley Biomedical, Winchester, USA), 50 μΜ 2-μερκαπτοαιθανόλη, 100 U /mL της ιντερλευκίνης-2 (IL-2), και διάλυμα μη απαραίτητο αμινοξύ 0,1 mM ΜΕΜ (Invitrogen, Grand Island, ΝΥ, USA). Το ήμισυ του TCM απομακρύνθηκε και αντικαταστάθηκε με φρέσκο ​​TCM που περιείχε πεπτίδια (20 μg /mL) για κάθε 5 ημέρες. Μετά από 14 ημέρες καλλιέργειας, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και εξετάστηκαν για την ικανότητά τους να παράγουν IFN-γ σε απόκριση προς κύτταρα Τ2 (1 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο), τα οποία προ-φορτωμένο με είτε PSGR πεπτίδιο (5 μg /mL) ή ένα πεπτίδιο ελέγχου (ένα άσχετο πεπτίδιο δέσμευσης HLA-A2: NLLTHVESL) ως αρνητικός έλεγχος. Μετά από 18 ώρες επώασης, τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν, και ΙΡΝ-γ απελευθέρωση προσδιορίστηκε με δοκιμασία ELISA.

Πρωτόκολλο Rapid Expansion (REP) για PSGR Πεπτίδιο-ειδικά Τ-κύτταρα

PSGR πεπτιδίου ειδικές Τ κύτταρα επεκτάθηκαν με πρωτόκολλο ταχεία επέκταση (REP) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [29] με ελαφρά τροποποίηση. Εν συντομία, την ημέρα 0, 0,1-0,5 × 10

6 πεπτίδιο PSGR ειδικά Τ κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε μία φιάλη Τ25 με 20 κ.εκ. RPMI-1640 συμπληρωμένο με 10% ανθρώπινο ορό ΑΒ, 50 μΜ 2-μερκαπτοαιθανόλη, και 30 ng /mL ΟΚΤ3 αντίσωμα (Ortho Biotech, Bridgewater, NJ), μαζί με 20 × 10

6 ακτινοβολημένα αλλογενή ΜΚΠΑ και 5 × 10

6 ακτινοβολημένα ιό Epstein Barr (EBV) μετασχηματισμένα Β-κύτταρα, όπως τα κύτταρα τροφοδότη. Οι φιάλες επωάστηκαν σε όρθια θέση στους 37 ° C σε 5% CO

2. IL-2 (300 IU /mL) προστέθηκε την ημέρα 1, και την ημέρα 5, το ήμισυ του υπερκειμένου κυτταρικής καλλιέργειας απομακρύνθηκε και αναπληρώνονται με φρέσκο ​​μέσο που περιέχει 300 IU /ml IL-2. 14 ημέρες μετά την έναρξη της ΣΗΠ, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και κρυοδιατηρήθηκαν για μελλοντικά πειράματα

ELISA Δοκιμασία

απελευθέρωσης κυτοκίνης μετρήθηκε με επικάλυψη πλακών 96 φρεατίων ELISA (Thermo Fisher Scientific?. Rochester, ΝΥ , USA) με 1 μg /mL αντι-ανθρώπινης ΙΡΝ-γ (Pierce Biotechnology? Rockford, IL, USA) για όλη τη νύχτα στους 4 ° C. Η πλάκα πλύθηκε έξι φορές με PBS που περιέχει 0.05% Tween-20 (διάλυμα έκπλυσης) για να απομακρυνθεί το μη δεσμευμένο αντίσωμα επικάλυψης, και δεσμεύτηκαν με 1% BSA /PBS σε θερμοκρασία δωματίου για 2 ώρες. Στη συνέχεια, 50 υπερκείμενο μι προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο και επωάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα και στη συνέχεια 50 μL του 0,5 μg /mL βιοτινυλιωμένης αντι-ανθρώπινης ΙΡΝ-γ (Pierce Biotechnology? Rockford, IL, USA) προστέθηκε και οι πλάκες επωάστηκαν για επιπλέον 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά την επώαση, οι πλάκες πλύθηκαν και επωάστηκαν για 30 λεπτά με Poly-HRP-Στρεπταβιδίνης (Thermo Fisher Scientific? Rochester, ΝΥ, USA) αραιωμένο σε PBS 1:5000 /1% BSA. Οι πλάκες πλύθηκαν και 100 μL διαλύματος υποστρώματος ΤΜΒ (Sigma-Aldrich Οο .; St. Louis, ΜΟ, USA) προστέθηκε ανά φρεάτιο. Η χρωματομετρική αντίδραση διεκόπη χρησιμοποιώντας 2Ν H

2SO4 και οι πλάκες αναγνώστηκαν στα 450 nm χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη πλάκας ELISA.

ΙΡΝ-γ ELISPOT Δοκιμασία

Η δοκιμασία ELISPOT ΙΡΝ-γ εκτελέστηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27] για την ποσοτικοποίηση του πεπτιδίου-ειδικών κυτταροτοξικών Τ-λεμφοκυττάρων (CTLs) μετά

in vitro

επέκτασης. Εν συντομία, τρυβλία 96 φρεατίων ELISPOT (Millipore? Bedford, ΜΑ, USA) επικαλύφθηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με 7,5 μg /mL αντι-ανθρώπινης ΙΡΝ-γ (Pierce Biotechnology? Rockford, IL, USA). Οι δίσκοι πλύθηκαν έξι φορές με αποστειρωμένο PBS για να απομακρυνθεί το μη δεσμευμένο αντίσωμα επικάλυψης. Τ κύτταρα σπάρθηκαν σε 1 × 10

5 κύτταρα ανά φρεάτιο και επωάζονται με τα κύτταρα Τ2 μόνο, Τ2 κύτταρα παλλόμενα με πεπτίδιο PSGR (5 μg /ml) ή ένα άσχετο πεπτίδιο ως αρνητικός έλεγχος. Κύτταρα διεγερμένα με 5 μg /mL αντίσωμα ΟΚΤ3 (Ortho Biotech? Bridgewater, NJ, USA) χρησιμοποιήθηκαν ως θετικός έλεγχος. Μετά από επώαση δειγμάτων για 18 – 20 ώρες στους 37 ° C και 5% CO

2, οι πλάκες πλύθηκαν με διάλυμα πλύσης. 0,75 μg /mL Βιοτινυλιωμένο αντι-ανθρώπινης ΙΡΝ-γ (Pierce Biotechnology? Rockford, IL, USA) προστέθηκε και οι πλάκες επωάστηκαν για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά την επώαση, οι πλάκες πλύθηκαν με διάλυμα πλύσης και επωάστηκαν περαιτέρω με πολυ-HRP-Στρεπταβιδίνης (Thermo Fisher Scientific? Rochester, ΝΥ, USA) αραιωμένο σε PBS 1:1000 /1% BSA για 1 ώρα. Οι πλάκες πλύθηκαν και 200 ​​μι υποστρώματος 4-χλωρο-1-ναφθόλη (Sigma-Aldrich Οο .; St. Louis, ΜΟ, USA) προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο. Τέλος, οι πλάκες πλύθηκαν κάτω από τρεχούμενο νερό της βρύσης και ξηραίνεται σε θερμοκρασία δωματίου. IFN-γ που σχηματίζουν κηλίδες κύτταρα (SFC) μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη ELISPOT (CTL Technologies, Minneapolis, ΜΝ, USA).

RNA Εκχύλιση και RT-PCR

εκχύλιση RNA και ΚΤ- PCR διεξήχθη όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [30]. Εν συντομία, ολικό RNA εκχυλίστηκε από τα καρκινικά κύτταρα του προστάτη με 1 ml αντιδραστηρίου ΤπζοΙ (Invitrogen? Carlsbad, CA, USA). Τρία μικρογραμμάρια του RNA μεταγράφηκε αντίστροφα σε cDNA σε 30 μΐ όγκο και 1 μΐ από κάθε cDNA χρησιμοποιήθηκε σε μετέπειτα αντίδραση PCR με ένα ζεύγος PSGR ειδικών εκκινητών: Εκκινητής 1: 5′-GAAGATCTATGAGTTCCTGCAACTTC-3 ‘, εκκινητής 2: 5’ -CCCAAGCTT TCACTTGCCTCCCACAG-3 ‘. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης: εκκινητής 1: 5’-CATGATGGAGTTGAAGGTAGTTTCG-3 ‘? Primer 2: 5’-CAGACTATGCTGTCCCTGTACGC-3 ‘. Η αντίδραση PCR διεξήχθη υπό τις ακόλουθες συνθήκες: 94 ° C για 2 λεπτά, 94 ° C για 30 s, 56 ° C για 30 s, 72 ° C για 1 min, 20 s, συνολικά 35 κύκλοι, 72 ° C για 10 min, και β-ακτίνη διεξήχθη για 25 κύκλους. Ίσες ποσότητες των προϊόντων της PCR στη συνέχεια φορτώθηκαν και ανιχνεύθηκαν με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα.

κυτταροτοξικότητας Δοκιμασία

προερχόμενο PSGR πεπτιδίου-ειδικών Τ κύτταρα ελέγχθηκαν για κυτταροτοξικότητα έναντι τόσο PC3 και LNCaP από γαλακτικής αφυδρογονάσης (LDH ) δοκιμασία (Promega? Madison, WI, USA). Η δοκιμασία διεξήχθη σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. απελευθέρωση LDH υπολογίστηκε με βάση τον ακόλουθο τύπο:

Η κυτταροτοξικότητα (%) = (Πειραματική – τελεστή Αυθόρμητη – Target αυθόρμητη απελευθέρωση LDH) /(Target Μέγιστη – απελευθέρωση Target Αυθόρμητη LDH) × 100.

η αυθόρμητη απελευθέρωση προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το υπερκείμενο των κυττάρων στόχων μόνα ή κύτταρα τελεστές και μόνο, και η μέγιστη απελευθέρωση προσδιορίστηκε με τη χρήση του υπερκειμένου των κυττάρων στόχων επωάζεται με ένα διάλυμα λύσης που περιλαμβάνονται στο κιτ LDH. Για να προσδιοριστεί εάν η αναγνώριση Τ κυττάρων είναι HLA-Ι περιορισμένο, αντι-HLA-Ι, αντι-HLA-ΙΙ, ή αντι-CD19 mAb (όλα από την ATCC, Manassas, VA, USA) προστέθηκαν σε φρεάτια κατά την έναρξη της καλλιέργειας .

Η ενδοκυτταρική ΙΡΝ-γ κυτοκίνης Χρώση

PSGR πεπτίδιο προερχόμενο ειδικά Τ κύτταρα (0,5-1 χ 10

6) καλλιεργήθηκαν με 0.5 × 10

6 Τ2 κύτταρα παλλόμενα με ή χωρίς πεπτίδιο (5 μg /mL) υπό την παρουσία GolgiStop (BD Pharmingen, San Diego, CA, USA) σε μια 48 φρεατίων πλάκα για 4 ώρες στους 37 ° C. Τα κύτταρα βάφτηκαν με αντι-CD8 και αντι-ΙΡΝ-γ και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μία μηχανή FACScalibur.

Στατιστικά

t-test Student χρησιμοποιήθηκε για να αναλύσει ποσοτικές διαφορές μεταξύ των πειραματικών φρεάτια και ελέγχους ELISA και ELISPOT δοκιμασίες. P & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

Πρόκληση PSGR πεπτίδιο που προέρχεται από-ειδικά CTL σε υγιείς δότες

Για να προσδιορίσετε αν πρόδρομοι των Τ κυττάρων PSGR-αντιδραστική είναι παρόντες σε υγιείς. υποκείμενα, λάβαμε PBMCs από 10 HLA-A2

+ υγιείς δότες και διεγείρονται τους

in vitro

με κάθε ένα από τα 21 πεπτίδια PSGR προερχόμενων περιέχουν μοτίβο HLA-A2 δέσμευσης (Πίνακας 1). Μετά από 2 εβδομάδες πεπτιδίου διέγερσης, υπερκείμενα από το πεπτίδιο-διεγερμένα Τ κύτταρα αναλύθηκαν με δοκιμασία ELISA για την ανίχνευση ΙΡΝ-γ απελευθέρωση σε απόκριση σε κύτταρα Τ2 παλλόμενα με ή χωρίς αντίστοιχες πεπτίδια. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, 13 PSGR προερχόμενα πεπτίδια ήταν ικανά να επάγουν πεπτιδίου-ειδικές αποκρίσεις Τ-κυττάρων σε τουλάχιστον ένα από τα 10 υγιή άτομα. Σημαντικά, PSGR3, PSGR4 και PSGR14 θα μπορούσε να επάγει αποκρίσεις Τ κυττάρων σε 7 από τα 10 υγιή άτομα, υποδεικνύοντας ότι αυτά τα 3 πεπτίδια είναι ανοσογόνα και δυνητικά ικανά να επεκτείνει το αντιγόνο-ειδικών Τ κυττάρων σε υγιή άτομα.

Η

Παρουσία PSGR προερχόμενων πεπτιδίων ειδικών CTLs σε προστάτη ασθενείς Cancer

Δεδομένου ότι το πεπτίδιο-ειδικά Τ κύτταρα έναντι PSGR3, PSGR4 και PSGR14 βρέθηκαν σε περισσότερο από το 70% των υγιών ατόμων, εμείς αιτιολογημένη ότι οι πρόδρομοι CTL που αναγνωρίζουν αυτά τα 3 πεπτίδια μπορεί επίσης να είναι υψηλή σε ΜΚΠΑ από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Για να ελεγχθεί η υπόθεση μας, εξετάσαμε κατά πόσο αυτές οι τρεις υποψηφίους πεπτίδιο μπορεί να διεγείρει το πεπτίδιο-ειδικά CTLs από τα PBMCs του HLA-A2 ασθενείς

+ καρκίνο του προστάτη. PBMCs από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη συλλέχθηκαν και διεγείρονται

in vitro

με PSGR3, PSGR4 ή πεπτίδια PSGR14. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, PSGR3, PSGR4 και PSGR14 πράγματι επάγεται πεπτιδίου-ειδικά CTLs από ΜΚΠΑ των ασθενών με καρκίνο του προστάτη.

Η

Αναγνώριση προστάτη καρκινικές κυτταρικές γραμμές από την PSGR πεπτίδιο προερχόμενο-ειδικών Τ κυττάρων

για την απόκτηση ενός μεγάλου αριθμού PSGR πεπτιδίου-ειδικών Τ κυττάρων για περαιτέρω ανάλυση, επεκτείναμε PSGR πεπτιδίου-ειδικών Τ κυττάρων που προσδιορίζονται στους πίνακες 2 και 3. Προκειμένου να προσδιοριστεί μία αποτελεσματική συγκέντρωση του πεπτιδίου για κύτταρα φόρτωση Τ2 για αναγνώριση Τ κυττάρου , εκτελέσαμε πειράματα τιτλοδότησης πεπτιδίου. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α, και για τις 3 πεπτίδια συγκέντρωση πεπτιδίου 5 μg /ml ήταν επαρκείς για να κορέσει τις θέσεις δέσμευσης των μορίων HLA-A2 στα κύτταρα Τ2 για αναγνώριση Τ κυττάρων. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιείται με συνέπεια αυτή τη συγκέντρωση του πεπτιδίου για τα κύτταρα Τ2 προφόρτισης στο ELISA ή /και δοκιμασίες ELISPOT. Τα διεσταλμένα Τ κύτταρα διατηρήθηκαν αντιγόνου ειδικότητα και εκκρίνονται σημαντικές ποσότητες ΙΡΝ-γ μετά από διέγερση με κύτταρα Τ2 παλλόμενα με τα αντίστοιχα πεπτίδια, αλλά όχι με ένα πεπτίδιο ελέγχου (Σχήματα 1Α, Β, C, D). δοκιμασία ELISPOT επιβεβαίωσε περαιτέρω την παρουσία της PSGR πεπτιδίου-ειδικών Τ κυττάρων σε διευρυμένη Τ κύτταρα (Σχήματα 1Ε, F, G)

Η αναγνώριση των κυττάρων Τ2 προ-φορτωμένο με τιτλοποιείται συγκεντρώσεις πεπτιδίων (0-20 μg /ml) με διευρυμένη PSGR πεπτίδιο-ειδικών Τ κυττάρων ελέγχθηκε με ELISA προσδιορισμό (Α). Τα διεσταλμένα PSGR3 Τ κύτταρα (Β και Ε), PSGR4 Τ κύτταρα (C και F) και PSGR14 Τ κύτταρα (D και G) ήταν αντίστοιχα συν-επωάστηκαν με κύτταρα Τ2 (1 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο) μόνο σε πλήρες μέσο (CM), ή με Τ2 κύτταρα προ-φορτωμένο με είτε ένα αντίστοιχο πεπτίδιο (5 μg /ml) ή ένα πεπτίδιο ελέγχου ως αρνητικός έλεγχος. Τα κύτταρα επωάστηκαν για 18 -24 ώρες, η έκκριση IFN-γ στο υπερκείμενο προσδιορίστηκε με ανάλυση ELISA (Β, Γ και Δ). IFN-γ κύτταρα που σχηματίζουν κηλίδες (SFC) μετρήθηκαν με δοκιμασία ELISPOT (Ε, F και G). Τα δεδομένα χαράσσονται ως μέσο ± SD. Τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01, ***

P

& lt? 0,001 έναντι του ελέγχου (Τ2 κύτταρα μόνα τους ή Τ2 κύτταρα πάλλονται με ένα πεπτίδιο ελέγχου).

η

για να καθοριστεί εάν PSGR πεπτίδιο προερχόμενο-ειδικά Τ κύτταρα ήταν σε θέση να αναγνωρίσει και να σκοτώσει HLA-A2

+, PSGR εκφράζουν καρκινικά κύτταρα προστάτη, χρησιμοποιήσαμε ένα HLA- A2 αρνητική κυτταρική σειρά PC3 και ένας θετικός LNCaP καρκίνου του προστάτη κυτταρική γραμμή HLA-A2. Η έκφραση PSGR σε αυτές τις δύο κυτταρικές σειρές εξετάστηκε με RT-PCR. Συνεπής με μια προηγούμενη αναφορά [31], PSGR ήταν εντόνως εκφρασμένο σε LNCaP, αλλά όχι σε PC3, DU145 ή ένα φυσιολογικό κύτταρο προστάτη γραμμή PNT1A (Εικόνα 2 Α). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Β, PSGR3-, PSGR4-, ή PSGR14-ειδικών Τ κυττάρων από υγιείς δότες και ασθενείς μπορούσαν να αναγνωρίσουν και να σκοτώσει HLA-A2 θετικά, PSGR εκφράζουν LNCaP, αλλά όχι το HLA-A2 κύτταρα αρνητικά PC3. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι PSGR-ειδικά Τ κύτταρα αναγνωρίζουν επίτοπους Τ κυττάρου που είναι ενδογενώς επεξεργασία και παρουσιάζονται από τα καρκινικά κύτταρα του προστάτη.

Η έκφραση του mRNA PSGR σε διαφορετικές κυτταρικές σειρές προσδιορίστηκε με RT-PCR (Α). PSGR πεπτίδιο προερχόμενο-ειδικά Τ κύτταρα ελέγχθηκαν για κυτταροτοξικότητα έναντι τόσο PC3 και LNCaP με τον προσδιορισμό LDH (Β). Τα δεδομένα από το Β απεικονίζονται ως μέσοι ± SD. Τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. *

P

& lt? 0,05, έναντι του ελέγχου

Η

τα Τ κύτταρα αναγνωρίζουν PSGR πεπτίδια που προέρχονται από το ένα HLA-Ι περιορισμένο τρόπο

Για να ελέγξετε αν οι αντιδράσεις που προκαλούνται. με PSGR πεπτίδια προερχόμενα εξαρτώνται από CD8

+ Τ κύτταρα, εμείς συν-καλλιεργημένα PSGR-πεπτίδιο προερχόμενο-ειδικών Τ κυττάρων με κύτταρα Τ2 παλλόμενα με ή χωρίς τις αντίστοιχες πεπτίδια παρουσία GolgiStop για 4 ώρες. Χρώση για μόρια CD8 και ενδοκυτταρικό ΙΡΝ-γ διενεργήθηκε εν συνεχεία. Μόνο CD8

+ Τ κύτταρα βρέθηκαν να παράγουν ΙΡΝ-γ σε απόκριση προς κύτταρα Τ2 παλλόμενα με αντίστοιχα πεπτίδια (Σχήμα 3Α), ενώ CD4

+ Τ κύτταρα δεν παράγουν ΙΡΝ-γ (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

PSGR πεπτίδιο προερχόμενο-ειδικά Τ κύτταρα συν-καλλιεργήθηκαν με κύτταρα Τ2 παλλόμενα με ή χωρίς ένα δεδομένο πεπτίδιο με την παρουσία GolgiStop σε ένα δίσκο των 48 φρεατίων για 4 ώρες στους 37 ° C. Τα κύτταρα βάφτηκαν με αντι-CD8 και αντι-ΙΡΝ-γ, στη συνέχεια αναλύθηκαν σε μια μηχανή FACScalibur (Α). PSGR πεπτίδιο προερχόμενο-ειδικά Τ κύτταρα συν-επωάστηκαν με κύτταρα LNCaP μόνα σε μέσο, ​​ή με κύτταρα LNCaP παρουσία είτε αντι-HLA-Ι mAb (W6 /32), HLA-II mAb ή ένα mAb ελέγχου (αντι -CD19 mAb). Μετά από 4 ώρες επώασης, η κυτταροτοξικότητα έναντι LNCaP προσδιορίστηκε με την δοκιμασία LDH (Β). Τα δεδομένα από το Β απεικονίζονται ως μέσοι ± SD. Τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. *

P

& lt?. 0.05, έναντι των μαρτύρων

Η

Για να καθοριστεί αν η αναγνώριση των κυττάρων LNCaP με PSGR-πεπτίδιο που προέρχεται από-ειδικά Τ κύτταρα είναι HLA-Ι περιορισμένη, θα συνεργάζονται καλλιεργημένα κύτταρα LNCaP με PSGR πεπτίδιο προερχόμενο-ειδικά Τ κύτταρα με την παρουσία είτε αντι-HLA-Ι mAb (W6 /32) ή mAbs ελέγχου (HLA-II mAb ή αντι-CD19 mAb). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Β, η κυτταροτοξικότητα αυτών των ειδικών για πεπτίδια Τ κυττάρων ανεστάλη πλήρως με την προσθήκη του αντι-HLA-Ι mAb, αλλά όχι από αντι-HLA-II (HLA-DR) ή mAb ελέγχου (αντι-CD19 ), γεγονός που υποδηλώνει ότι η αναγνώριση των κυττάρων LNCaP με PSGR-πεπτίδιο που προέρχεται από-ειδικά Τ κύτταρα είναι HLA-Ι περιορισμένη.

Συζήτηση

είναι καλά τεκμηριωμένο ότι τα CD8

+ Τ κύτταρα διαδραματίζουν έναν κρίσιμο ρόλο στον έλεγχο της ανάπτυξης και εξέλιξης του όγκου. επίτοπα πεπτιδίων που προέρχονται από αντιγόνα που σχετίζονται με όγκο (ΤΑΑ) μπορούν να αναγνωριστούν ως αντιγόνα από τα Τ κύτταρα στο πλαίσιο των μορίων MHC-I [32], [33]. Ταυτοποίηση των ΤΑΑ και πεπτιδίων τους που αναγνωρίζονται από τα Τ κύτταρα είναι απαραίτητα για την ανάπτυξη αποτελεσματικών εμβολίων κατά του καρκίνου.

Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να προσδιοριστούν δεσμευτικός PSGR προερχόμενο επιτόπια που αναγνωρίζονται από CD8

+ Τ κύτταρα σε PBMCs από υγιή άτομα και ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Τρεις διαφορετικοί αλγόριθμοι πρόβλεψης που βασίζονται σε υπολογιστή, συμπεριλαμβανομένων BIMAS, SYFPEITHI, και Rankpep χρησιμοποιήθηκαν για τη σάρωση της ακολουθίας πρωτεΐνης PSGR για HLA-A2 πεπτίδια που βασίζονται στην μοτίβο δέσμευσης HLA-A2 δέσμευσης. Συμπεριλήφθηκαν μόνο πεπτίδια που προβλέφθηκαν επιτυχώς από τουλάχιστον 2 από 3 των διαφόρων ηλεκτρονικών υπολογιστών που βασίζονται αλγόριθμους πρόβλεψης. Είκοσι ένα 9μερές ή 10mer πεπτίδια επιλέχθηκαν σε αυτή τη μελέτη, σύμφωνα με αυτό το κριτήριο. Όλα αυτά τα πεπτίδια ελέγχθηκαν ως προς την ικανότητά τους να διεγείρουν PBMCs είτε από υγιή άτομα ή ασθενείς με καρκίνο του προστάτη να απελευθερώσει IFN-γ. Από 21 πεπτίδια, τρία πεπτίδια συχνά επάγεται ειδικές αποκρίσεις Τ κυττάρων σε PBMCs ελήφθησαν από είτε υγιή άτομα ή ασθενείς με καρκίνο, και αυτά τα ειδικά για πεπτίδια Τ κυττάρων αναγνωρίζεται επίσης HLA-A2

+ PSGR κύτταρα που εκφράζουν LNCaP, υποδηλώνοντας ότι αυτά τα πεπτίδια είναι φυσικά επεξεργασμένο από τα καρκινικά κύτταρα του προστάτη

PSGR είναι ένας προστάτη γονίδιο ιστοειδική με ομολογία με την πρωτεΐνη G-συζευγμένο οικογένειας γονιδίων λήπτη οσμικού παράγοντα και εκφράζεται ειδικά σε ανθρώπινους ιστούς προστάτη [23] – [25].. Η έκφραση του PSGR είναι σημαντικά υψηλότερη σε ανθρώπινους όγκους του προστάτη ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία και του προστάτη από φυσιολογικούς ιστούς [25]. Περιέργως, αν και PSGR έχει θεωρηθεί ότι είναι μία νέα στόχος για ανοσοθεραπεία καρκίνου του προστάτη, επίτοποι Τ κυττάρων που προέρχονται από PSGR δεν έχουν ταυτοποιηθεί. Αυτό είναι, με τις γνώσεις μας, η πρώτη έκθεση για τον εντοπισμό και χαρακτηρισμό PSGR που προέρχονται από επιτόπια που αναγνωρίζονται από CD8

+ Τ κύτταρα. Η ταυτοποίηση των PSGR προερχόμενων επίτοπα που αναγνωρίζονται από τα Τ κύτταρα επικυρώνει περαιτέρω PSGR ως υποσχόμενο στόχο για την ανάπτυξη εμβολίων καρκίνου.

Πιο ΤΑΑ είναι αυτο-αντιγόνα [34], επομένως, αυτο-ανοχή μπορεί να συμβεί σε ένα επιχειρήσει να προστατεύσει το άτομο από την ανάπτυξη της αυτοανοσίας. Αυτό θεωρείται ότι είναι ένα σημαντικό εμπόδιο στην επαγωγή ΤΑΑ-ειδικών Τ κυττάρων που είναι ικανά εξάλειψης όγκων

in vivo.

Ωστόσο, στη μελέτη μας, αν και PSGR εκφράζεται σε φυσιολογικό ιστό του προστάτη, ανοσολογικής ανοχής έναντι PSGR μπορεί να σπάσει, αφού Τ κυττάρου αποκρίσεις έναντι επιτόπων PSGR προερχόμενα ήταν συχνά ανιχνεύσιμα σε PBMCs από είτε υγιή άτομα ή ασθενείς με καρκίνο του προστάτη.

Ένας τεράστιος αριθμός ανοσοθεραπείας κλινικές δοκιμές βασίζονται σε εμβολιασμούς με προϊόντα λύσης όγκου, ΤΑΑ πρωτεΐνες, ΤΑΑ πεπτίδια και RNA ή DNA που κωδικοποιεί ΤΑΑ έχουν ήδη διεξαχθεί. Ωστόσο, οι περισσότερες από αυτές τις μελέτες δεν έχουν επιτύχει τα επιθυμητά αποτελέσματα. Ένας λόγος είναι ότι η έκφραση αυτών των TAAs είναι ετερογενής ανάμεσα σε όγκους από διαφορετικούς ασθενείς και μπορεί να ποικίλει ακόμη και μεταξύ μεταστάσεις που λαμβάνονται από έναν ασθενή [35], [36], έτσι το ανοσοποιητικό διαφυγής μπορεί να συμβεί όταν η ανοσοθεραπευτική προσέγγιση βασίζεται μόνο σε ένα ΤΑΑ. Για να αποφευχθεί η ανοσολογική διαφυγή, εμβόλιο που βασίζεται σε ανοσοθεραπευτικές στρατηγικές που στοχεύουν διάφορα αντιγόνα όγκου είναι απαραίτητα για την ανάπτυξη των επιτυχών εμβολίων καρκίνου. Έτσι εντοπισμό πρόσθετων προστάτη ειδικών αντιγόνων όγκου, όπως PSGR, για Τ-κυττάρων ανοσοθεραπείας με βάση εξακολουθεί να είναι αναγκαία, παρά ότι ένας αριθμός ειδικών αντιγόνων όγκου του προστάτη συμπεριλαμβανομένων PSA [12], [13], PSCA [16], PSMA [ ,,,0],17] – [19]., PAP [20], Prostein [14], [15] και trp-P8 [21], έχουν εντοπιστεί τα τελευταία χρόνια

Η FDA ενέκρινε πρόσφατα τον καρκίνο εμβόλιο, Sipuleucel-Τ, για τη θεραπεία ασθενών με προχωρημένο καρκίνο του προστάτη με βάση μία μελέτη φάσης III [8]. Sipuleucel-Τ παρασκευάζεται από αυτόλογα PBMCs που περιέχουν κύτταρα που εμφανίζουν αντιγόνο που επωάζονται με μία ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη που αποτελείται από ένα ΡΑΡ συνδέεται με κοκκιοκυττάρων-μακροφάγων παράγοντας διέγερσης αποικιών (GM-CSF). Sipuleucel-T λειτουργεί προφανώς εν μέρει από αυξάνοντας PAP-ειδικών CD8

αποκρίσεις + Τ κυττάρων, περαιτέρω αποδεικνύοντας τη σημασία του όγκου αντιγόνου-ειδικά CD8

+ Τ κυττάρων που προκαλείται από τα εμβόλια καρκίνου. Μέχρι στιγμής, Sipuleucel-Τ είναι η πρώτη κυτταρική ανοσοθεραπευτικός παράγοντας έχουν εγκριθεί από την FDA για να χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία των ασθενών με καρκίνο. Η έγκριση του FDA της Sipuleucel-T ως θεραπευτικό εμβόλιο καρκίνου δεν επικυρώνει μόνο την αποτελεσματικότητα της ανοσοθεραπείας του καρκίνου, αλλά επίσης παρέχει μια ισχυρή ώθηση στο πεδίο της ανοσολογίας του καρκίνου [37]. Ως εκ τούτου, ο προσδιορισμός και η ανάπτυξη των περισσότερων νέων ΤΑΑ συμπεριλαμβανομένων PSGR και το πεπτίδιο παράγωγα αναγνωρίζονται από τα CTL είναι σίγουρα απαραίτητη για να διευκολυνθεί η ανάπτυξη αποτελεσματικών εμβολίων κατά του καρκίνου κατά των καρκίνων του προστάτη, καθώς και άλλους τύπους καρκίνων στο μέλλον.

Επιπλέον, οι επίτοποι που αναγνωρίζονται από CD8

+ Τ κύτταρα μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως διαγνωστικά εργαλεία για την παρακολούθηση του πεπτιδίου-ειδικά CD8

+ Τ κυττάρων σε άτομα κατά τη διάρκεια της ανοσοποίησης, προσδιορίζοντας έτσι τη βέλτιστη χρονικά πλαίσια για την ανοσοποίηση κατά τη διάρκεια της θεραπείας, καθώς και αν μετέπειτα τα εμβόλια χρειάζονται σε άτομα όταν αντικαρκινική ανοσία μειώνεται.

Εν ολίγοις, έχουμε εντοπίσει τρεις νέες PSGR που προέρχονται από επιτόπια CTL. Δεδομένου ότι η έκφραση PSGR είναι ισχυρά πάνω ρυθμισμένα σε ανθρώπινους καρκίνους του προστάτη, PSGR προερχόμενα πεπτίδια μπορούν να χρησιμεύσουν ως διαγνωστικά εργαλεία ή ανοσοθεραπευτική στόχοι αντικαρκινικών εμβολίων μόνη της ή σε συνδυασμό με άλλα επίτοπα που προέρχονται από άλλα προστάτη-ειδικών αντιγόνων.

Ευχαριστίες

θα θέλαμε να ευχαριστήσουμε τους Drs. Adebusola Alagbala Ajibade και Audrea M. Burns για την κριτική ανάγνωση αυτού του χειρογράφου και Hui Ένα για βοήθεια στην προετοιμασία σχήμα.