Αφηρημένο

Η κυανογόνους διγλυκοζίτη αμυγδαλίνη, που προέρχεται από Rosaceae πυρήνες, χρησιμοποιείται από πολλούς ασθενείς ως εναλλακτική θεραπεία κατά του καρκίνου. Ωστόσο, αν πράγματι αμυγδαλίνη δρα ως παράγων κατά του όγκου δεν είναι σαφής. ιδιότητες αποκλεισμού των αμυγδαλίνη για τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης κυτταρικές σειρές μετάσταση, ως εκ τούτου, διερευνώνται. Amygdalin (10 mg /ml) εφαρμόσθηκε σε UMUC-3, TCCSup ή RT112 καρκινικών κυττάρων κύστης για 24 ώρες ή για 2 εβδομάδες. Εξετάστηκε όγκου κύτταρο προσκόλληση στο αγγειακό ενδοθήλιο ή σε ακινητοποιημένο κολλαγόνο, καθώς και τη μετανάστευση των κυττάρων του όγκου. Επιδράσεις της θεραπείας από τα ναρκωτικά για ιντεγκρίνης α και β υπότυπους, για ιντεγκρίνη συνδέεται κινάσης (ILK) και το συνολικό και ενεργοποιείται κινάση εστιακής προσκόλλησης (FAK) προσδιορίστηκαν επίσης. Integrin knock-down διεξήχθη για να αξιολογηθεί ιντεγκρίνης επιρροή για τη μετανάστευση και προσκόλληση. A 24 h ή εφαρμογή αμυγδαλίνη 2 εβδομάδα ευδιάκριτα μειωμένης πρόσφυσης των καρκινικών κυττάρων και τη μετανάστευση των UMUC-3 και RT112 κύτταρα. TCCSup προσκόλληση μειώθηκε επίσης, αλλά η μετανάστευση ανυψώθηκε υπό αμυγδαλίνη. Ιντεγκρίνης έκφραση υποτύπου σημαντικά και ειδικά τροποποιηθεί από αμυγδαλίνη, ανάλογα με την κυτταρική γραμμή. ILK ήταν μέτρια, και ενεργοποιημένα ΡΑΚ έντονα, χάνεται σε όλες τις κυτταρικές γραμμές όγκου με την παρουσία αμυγδαλίνη. Γκρεμίζω του β1 ιντεγκρίνης προκάλεσε σημαντική μείωση τόσο προσκόλληση και τη μετανάστευση των UMUC-3 κύτταρα, αλλά μία σημαντική αύξηση στην προσκόλληση TCCSup. Γκρεμίζω των β4 ιντεγκρίνης προκάλεσε σημαντική μείωση στη μετανάστευση των κυττάρων RT112. Δεδομένου ότι οι διαφορετικές ενέργειες των αμυγδαλίνη για τις διάφορες κυτταρικές σειρές αντικατοπτρίστηκε β1 ή β4 γκρεμίσει, είναι αυταπόδεικτο ότι η πρόσφυση επιρροές αμυγδαλίνη και μεταναστευτικές ιδιότητες των καρκινικών κυττάρων κύστης διαμορφώνοντας β1 ή β4 ιντεγκρίνης έκφρασης. Η επαγόμενη αμυγδαλίνη αύξηση TCCSup μεταναστευτική συμπεριφορά δείχνει ότι τα τυχόν οφέλη κατά του όγκου από αμυγδαλίνη (φαίνεται με τις άλλες δύο κυτταρικές γραμμές) μπορεί να εξαρτάται από τον τύπο καρκινικού κυττάρου

Παράθεση:. Makarević J, Rutz J, Juengel Ε , Kaulfuss S, Tsaur Ι, Nelson Κ, et al. (2014) αμυγδαλίνη Επιρροές καρκίνο της ουροδόχου κύστης κυτταρική προσκόλληση και εισβολή

In Vitro

. PLoS ONE 9 (10): e110244. doi: 10.1371 /journal.pone.0110244

Επιμέλεια: Zoran Culig, Innsbruck Medical University, Αυστρία

Ελήφθη: 23, Ιουνίου, 2014? Αποδεκτές: 14 του Σεπτεμβρίου του 2014? Δημοσιεύθηκε: 15 Οκτωβρίου, 2014

Copyright: © 2014 Makarević et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το «Brigitta und Norbert Muth Stiftung» και το «Freunde und der Förderer Goethe-Universität Frankfurt» (χρηματοδότηση που έλαβε από RAB). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η χρήση της συμπληρωματικής και εναλλακτικής ιατρικής (CAM) έχει αυξηθεί σταθερά κατά τις τελευταίες δεκαετίες. CAM περιλαμβάνει τη μη συμβατική θεραπεία, όπως η ομοιοπαθητική, η βιταμίνη θεραπεία, phytomedicine και παραδοσιακή κινεζική ιατρική, ο βελονισμός και η γιόγκα [1]. Η κατανάλωση των φυσικών προϊόντων είναι πιο ευρεία εξάπλωση. Έως και 80% των ασθενών με καρκίνο στις Ηνωμένες Πολιτείες [2], και περισσότερο από το 50% των ασθενών με καρκίνο στην Ευρώπη χρησιμοποιούν CAM μαζί με ή σε αντικατάσταση των συμβατικών θεραπειών [3]. Η δυσαρέσκεια με τη συμβατική θεραπεία και τη μείωση των χημειοθεραπευτικών παρενέργειες είναι τα πιο συχνά δίνεται λόγοι για τη χρήση του CAM [4], [5].

Σε αντίθεση με την ευρεία χρήση των φυσικών ενώσεων, πληροφορίες σχετικά με τη θεραπευτική τους αποτελεσματικότητα είναι αραιή. Η διαφορά μεταξύ της χρήσης και τα πραγματικά οφέλη είναι ιδιαίτερα εμφανής με την κυανιογόνοι διγλυκοζίτη αμυγδαλίνη (D-μανδελονιτρίλιο-β-gentiobioside), υπάρχουν στα πυρήνες των φρούτων από τα είδη Rosaceae όπως Prunus persica (ροδάκινο), Prunus armeniaca (βερύκοκο) και Prunus amygdalus Amara (πικραμύγδαλο). Amygdalin απομονώθηκε για πρώτη φορά το 1873. Από τη δεκαετία του 1920, αμυγδαλίνη έχει εφαρμοστεί από το στόμα για τη θεραπεία ασθενών με καρκίνο στις Ηνωμένες Πολιτείες. Στη δεκαετία του 1950, μια ενδοφλέβια μορφή αμυγδαλίνη συντέθηκε και κατοχυρωμένη με δίπλωμα ευρεσιτεχνίας, όπως laetrile [6]. Παρά το γεγονός ότι laetrile είναι χημικά διαφορετικό από αμυγδαλίνη, οι όροι χρησιμοποιούνται εναλλακτικά, καθιστώντας ερμηνεία των κλινικών δεδομένων δύσκολη. Η παρούσα έκθεση αναφέρεται αποκλειστικά σε «αμυγδαλίνη».

αμυγδαλίνη ήταν ένα από τα πιο δημοφιλή, μη-συμβατικά, αντικαρκινικές θεραπείες στη δεκαετία του 1970 και από το 1978, 70.000 ασθενείς με καρκίνο των ΗΠΑ είχε χρησιμοποιηθεί αμυγδαλίνη [7]. Παρόλα αυτά, με βάση στοιχεία έρευνας σχετικά με αμυγδαλίνη ήταν και είναι αραιή και το όφελος της αμφιλεγόμενη. Οι υποστηρικτές θεωρούν αμυγδαλίνη μια φυσική θεραπεία του καρκίνου, ενώ αντίπαλοι προειδοποιούν ότι αμυγδαλίνη είναι αναποτελεσματική και ακόμη και τοξικά. Τυχαιοποιημένες κλινικές μελέτες και μελέτες παρακολούθησης έχουν ποτέ διεξαχθεί. Μια κλινική μελέτη χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου πριν από 30 χρόνια δεν έδειξε σημάδια υποχώρησης του όγκου [8], ενώ μια αναδρομική ανάλυση 67 ασθενών όγκου λαμβάνοντας αμυγδαλίνη αναφερόμενη 2 πλήρεις και 4 μερικές ανταποκρίσεις [9]. Αμφιθυμία έχει επίσης αντανακλάται στις εκθέσεις περίπτωση, όπου αμυγδαλίνη ήταν αναποτελεσματική σε πέντε και αποτελεσματική σε τέσσερις περιπτώσεις [6].

Η παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε για να αξιολογήσει κατά πόσον αμυγδαλίνη μεταβάλλει τη μεταστατική εξέλιξη των καρκινικών κυττάρων in vitro από το εισβολή και τη μετάσταση είναι κρίσιμα βήματα στην κακοήθη εξέλιξη του όγκου και η κύρια αιτία της αποτυχίας της θεραπείας. Ως εκ τούτου, παρεμβαίνοντας στην εισβολή των καρκινικών κυττάρων καταρράκτη θα μπορούσε να είναι μια καινοτόμος λύση για την εξουδετέρωση μεταστατικού διάδοση όγκου. Χρησιμοποιεί ένα πάνελ των κυτταρικών γραμμών καρκίνου της ουροδόχου κύστης, η αποτελεσματικότητα του αμυγδαλίνη να εμποδίσει την αλληλεπίδραση όγκο μήτρα και ενδοθηλιακή όγκου αξιολογήθηκε. Επιπλέον, η ικανότητα του αμυγδαλίνη για την πρόληψη της διασποράς κινητικό αξιολογήθηκε. Μια ομάδα των μορίων προσκόλλησης εμπλέκεται στη σύνθετη διαδικασία της διάδοσης των καρκινικών κυττάρων. Δεδομένου ότι οι υποδοχείς προσκόλλησης των ιντεγκρίνης α και β οικογένειας συμμετέχουν ενεργά στην δεσμευτικές και διαενδοθηλιακής διείσδυση των καρκινικών κυττάρων, αυτά ήταν τα αντικείμενα της έρευνας. Η μεμβρανώδης ιντεγκρίνης προφίλ έκφρασης υποδοχέα, όπως επίσης και η ενδοκυτταρική περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη κάθε υπότυπο, συγκρίθηκε σε αμυγδαλίνη κατεργασμένα και μη-κατεργασμένα κύτταρα. γκρεμίζω μελέτες siRNA Πραγματοποιήθηκαν επίσης να διερευνήσει αυτές τις παραμέτρους μεταβληθεί από αμυγδαλίνη, που μπορεί να έχει κλινική σημασία. Τα in vitro δεδομένα που παρουσιάζονται εδώ καταδεικνύουν σημαντική πρόσφυση και αποκλεισμό επιδράσεις των αμυγδαλίνη εισβολής, πιθανώς επάγεται μεταβάλλοντας β1 ή β4 έκφραση ιντεγρίνης.

Υλικά και Μέθοδοι

Κυτταρική καλλιέργεια

RT112, UMUC-3 (ATCC /LGC Promochem GmbH, Wesel, Γερμανία) και TCCSup (DSMZ, Braunschweig, Γερμανία) κύτταρα καρκινώματος ουροδόχου κύστεως αναπτύχθηκαν και υποκαλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640, 10% ορό εμβρύου μόσχου (FCS), 20 mM ΗΕΡΕδ-ρυθμιστικό , 1% glutamax και 1% πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη (όλα: Gibco /Invitrogen? Karlsruhe, Germany). επιλέχθηκαν υποκουλτούρες από αποσπάσματα 7-24 για πειραματική χρήση. Ανθρώπινα ενδοθηλιακά κύτταρα (HUVEC) απομονώθηκαν από ανθρώπινο ομφάλιο φλέβες και συλλέχθηκαν με ενζυματική επεξεργασία με δισπάση (Gibco /Invitrogen). HUVEC αναπτύχθηκαν σε Μέσο 199 (Μ199? Biozol, Μόναχο, Γερμανία), συμπληρωμένο με 10% FCS, 10% ενωμένο ανθρώπινο ορό, 20 μg /ml ανάπτυξης ενδοθηλιακού κυττάρου παράγοντα (Boehringer, Mannheim, Germany), 0,1% ηπαρίνη, 100 ng /ml γενταμυκίνη και 20 mM HEPES-ρυθμιστικού διαλύματος (ρΗ 7.4). επιλέχθηκαν υποκουλτούρες από περάσματα 2-6 για πειραματική χρήση. HUVEC χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη. Η θεσμική επιτροπή δεοντολογίας του Goethe-Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο, Φρανκφούρτη, Γερμανία, ενέκρινε την έρευνα και παραιτήθηκε από την ανάγκη για συναίνεση, δεδομένου ότι HUVEC χρησιμοποιήθηκαν ανώνυμα για in vitro δοκιμασίες χωρίς σύνδεση με τα δεδομένα των ασθενών.

θεραπεία αμυγδαλίνη

Amygdalin από βερίκοκο (Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Γερμανία) προσφάτως διαλύθηκε σε μέσο καλλιέργειας των κυττάρων του όγκου και στη συνέχεια προστέθηκε σε κύτταρα όγκου σε συγκέντρωση 10 mg /ml είτε 24 ώρες ή για 2 εβδομάδες [10 ] για την αξιολόγηση της οξείας έναντι χρόνιας θεραπείας. Οι μάρτυρες έλαβαν μέσο καλλιέργειας των κυττάρων του όγκου και μόνο. Σε όλα τα πειράματα, υποβλήθηκε σε επεξεργασία κυτταρικές καλλιέργειες όγκου σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα αυτά. Για να αποκλειστεί τοξικές επιδράσεις του αμυγδαλίνη, η βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε με trypan blue (Gibco /Invitrogen).

όγκου κυτταρικής προσκόλλησης

Για την ανάλυση προσκόλλησης των καρκινικών κυττάρων, HUVEC μεταφέρθηκαν σε multiplates 6-φρεατίων ( Sarstedt, Nürnbrecht, Γερμανία) σε πλήρες HUVEC-μέσο. Όταν φθάσει σε συρροή, RT112, UMUC-3 ή TCCSup κύτταρα αποκολλήθηκαν από τις φιάλες καλλιέργειας με Accutase κατεργασία (ΡΑΑ Laboratories, Cölbe, Γερμανία) και 0,5 χ 10

6 κύτταρα προστέθηκαν στη συνέχεια στη μονοστοιβάδα HUVEC για 30, 60 ή 120 min. Στη συνέχεια, τα μη προσκολλημένα κύτταρα όγκου πλένονται καλά χρησιμοποιώντας θερμανθέν (37 ° C) Μέσο 199. Τα υπόλοιπα κύτταρα καθηλώθηκαν με 1% γλουταραλδεΰδη. Τα προσκολλημένα κύτταρα όγκου μετρήθηκαν σε πέντε διαφορετικούς τομείς ενός ορισμένου μεγέθους (5 × 0,25 mm

2) χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης και το μέσο ποσοστό κυτταρική προσκόλληση υπολογίστηκε.

προσάρτηση σε ακινητοποιημένο κολλαγόνο

πλάκες 6-φρεατίων επικαλύφθηκαν με κολλαγόνο G (που εξάγεται από δέρμα μοσχαριού, που αποτελείται από 90% κολλαγόνο τύπου Ι και 10% κολλαγόνο τύπου III? Biochrom, Βερολίνο, Γερμανία? αραιώνεται στα 400 μg /ml σε PBS) όλη τη νύχτα. Πλαστικά πιάτα που σερβίρονται ως μάρτυρας φόντο. Οι πλάκες πλύθηκαν με 1% BSA (αλβουμίνη βόειου ορού) σε PBS για να εμποδίσει μη ειδικής προσκόλλησης κυττάρου. 0,5 × 10

6 κύτταρα όγκου στη συνέχεια προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο και αφέθηκαν για επώαση 60 λεπτών. Στη συνέχεια, τα μη προσκολλημένα κύτταρα όγκου πλένονται καλά, τα υπόλοιπα προσκολλητικά κύτταρα καθηλώθηκαν με 1% γλουταραλδεΰδη και μετρήθηκαν μικροσκοπικά. Ο μέσος ρυθμός κυτταρική προσκόλληση, που ορίζεται από τα προσκολλημένα κύτταρα

επικάλυψη καλά – προσκολλημένων κυττάρων

φόντο, υπολογίστηκε από πέντε διαφορετικά πεδία παρατήρησης

Μέτρηση του όγκου κυτταρικής μετανάστευσης

ορού που επάγεται. χημειοτακτική μετακίνηση εξετάστηκε χρησιμοποιώντας 6-φρεατίων transwell θαλάμους (Greiner, Frickenhausen, Germany) με 8- μm πόρους. 0,5 × 10

6 RT112, UMUC-3 ή TCCSup κύτταρα /ml τοποθετήθηκαν στον άνω θάλαμο σε μέσο απαλλαγμένο από ορό, είτε ατελώς αμυγδαλίνη (τερματιστεί «αμυγδαλίνη Α») ή περιέχουν αμυγδαλίνη (τερματιστεί «αμυγδαλίνη Β») . Ορού μέσο ελεύθερο στον άνω θάλαμο και 10% ορό στον κάτω θάλαμο παρείχε την κλίση ορός ο απαραίτητος για τη μετανάστευση των κυττάρων του όγκου σε αυτό το μοντέλο. Μετά από 20 ώρες επώαση, η άνω επιφάνεια της μεμβράνης Transwell σκουπίστηκε απαλά με μια μπατονέτα για την απομάκρυνση κυττάρων, τα οποία δεν είχαν μεταναστεύσει. Κύτταρα τα οποία είχαν μετακινηθεί προς την κλίση του ορού προς την κάτω επιφάνεια της μεμβράνης σημάνθηκαν σύμφωνα με αιματοξυλίνη και μετρήθηκαν μικροσκοπικά. Ο ρυθμός μετανάστευσης μέση υπολογίστηκε από πέντε διαφορετικά πεδία παρατήρησης.

επιφανειακή έκφραση Ιντεγκρίνης

Καρκινικά κύτταρα πλύθηκαν σε διάλυμα αποκλεισμού (PBS, 0,5% BSA) και στη συνέχεια επωάστηκαν για 60 λεπτά στους 4 ° C με φυκοερυθρίνη (ΡΕ) συζευγμένη μονοκλωνικά αντισώματα που κατευθύνονται κατά των ακόλουθων υποτύπους ιντεγκρίνης: αντι-α1 (IgG1? κλώνος SR84), αντι-α2 (IgG2a? κλώνος 12F1-Η6), αντι-α3 (IgG1? κλώνος C3II.1), αντι-α4 (IgG1? κλώνος 9F10), αντι-α5 (IgG1? κλώνος ΙΙΑ1), αντι-α6 (IgG2a? κλώνος GoH3), αντι-β1 (IgG1? κλώνος MAR4), αντι-β3 (IgG1? κλώνος VI-PL2 ) ή αντι-β4 (IgG2a? κλώνος 439-9B? όλα: BD Pharmingen, Heidelberg, Germany). Ιντεγκρίνης έκφραση των καρκινικών κυττάρων μετρήθηκε στη συνέχεια χρησιμοποιώντας ένα ΡΑΟδοαη (BD Biosciences, Heidelberg? FL-2Η (log) ανάλυση ιστογράμματος κανάλι? 1 × 10

4 κύτταρα /σάρωση) και εκφράζεται ως μονάδες μέση τιμή φθορισμού. Ένα ποντίκι IgG1-PE (MOPC-21) ή IgG2a-ΡΕ (G155-178? Όλα: BD Biosciences). Χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος ισοτύπου

κηλίδωση Western

Για να διερευνήσουν το περιεχόμενο ιντεγκρίνης, Προϊόντα λύσης κυττάρου όγκου εφαρμόσθηκαν σε ένα πήκτωμα πολυακρυλαμιδίου 7% και ηλεκτροφορήθηκαν για 90 λεπτά στους 100 V. Η πρωτεΐνη μετά μεταφέρθηκε σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης. Μετά από αποκλεισμό με μη λιπαρό ξηρό γάλα για 1 ώρα, οι μεμβράνες επωάστηκαν όλη τη νύκτα με τα μονοκλωνικά αντισώματα που αναφέρονται παραπάνω. Επιπροσθέτως, σηματοδότηση ιντεγκρίνης που σχετίζονται εξερευνήθηκε με αντι-ιντεγκρίνης-συνδεδεμένη κινάση (ILK? Κλώνου 3, αραίωση 1:1000), αντι-κινάσης εστιακής προσκόλλησης (ΡΑΚ? Κλώνος 77, αραίωση 1:1000) και αντι-φωσφο-ειδικό FAK (pY397? κλώνος 18, αραίωση 1:1000) αντισώματα (όλα: BD Biosciences). HRP-συζευγμένο αντίσωμα κατσίκας αντι-ποντικού IgG (Upstate Biotechnology, Lake Placid, ΝΥ, USA? Αραίωση 1:5.000) χρησίμευσε ως δευτερεύον αντίσωμα. Οι μεμβράνες επωάστηκαν με συντομία αντιδραστήριο ανίχνευσης ECL (ECL ™, Amersham /GE Healthcare, München, Germany) για την οπτικοποίηση των πρωτεϊνών και στη συνέχεια αναλύονται με το σύστημα FX7 Fusion (Peqlab, Erlangen, Germany). β-ακτίνη (1:1.000? Sigma, Taufenkirchen, Γερμανία). υπηρέτησε ως εσωτερικός έλεγχος

Gimp 2.8 λογισμικό χρησιμοποιήθηκε για να εκτελέσει την ανάλυση πυκνότητα pixel των πρωτεϊνικών ζωνών. Η αναλογία της έντασης πρωτεΐνης /ένταση β-ακτίνης υπολογίστηκε, και εκφράζονται σε ποσοστό, σε σχέση με τους ελέγχους στο 100%.

siRNA γκρεμίζω μελέτες

Τα καρκινικά κύτταρα (3 × 10

5/6 για φρεατίων) μορφομετατράπηκαν με μικρό παρεμβαλλόμενο RNA (siRNA) που κατευθύνονται έναντι β1 ιντεγκρίνης (2 μΜ, αλληλουχία στόχος: AAAAGTCTTGGAACAGATCTG, HS_ITGB1_5, Qiagen, Hilden, Γερμανία) ή ιντεγρίνης β4 (2 μΜ, αλληλουχία στόχος: GTGGATGAGTTCCGGAATAAA? Hs_ITGB4_5 , Qiagen) με ένα αντιδραστήριο siRNA /διαμόλυνσης αντιδραστήριο (HiPerFect Transfection? Qiagen) αναλογία 1:06. Μη επεξεργασμένα κύτταρα και κύτταρα επεξεργασμένα με 5 siRNA ελέγχου ηΜ (Όλα τα αστέρια αρνητικός siRNA ελέγχου? Qiagen) χρησίμευσαν ως μάρτυρες. Στη συνέχεια, όγκος προσκόλλησης κυττάρου σε ακινητοποιημένο κολλαγόνο, καθώς και τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων αναλύθηκε όπως αναφέρεται ανωτέρω.

Στατιστικά

Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν 3-6 φορές. Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε με την Wilcoxon-Mann-Whitney-U-test. Οι διαφορές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές σε αξία απ ​​μικρότερη από 0,05.

Αποτελέσματα

αμυγδαλίνη μειώνει την αλληλεπίδραση όγκο ενδοθηλίου και μήτρα του όγκου

αμυγδαλίνη σημαντικά μειωμένη προσκόλληση όλων των κυττάρων του καρκίνου της ουροδόχου κύστης τρεις γραμμές για HUVEC σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα κύτταρα (Σχ. 1). προσκόλλησης κυττάρου της TCCSup και RT112 ήταν πιο έντονα μεταβληθεί από αμυγδαλίνη από εκείνη του UMUC-3 κύτταρα. Καμία διαφορά μεταξύ βραχυπρόθεσμων (24 ώρες) και μακροπρόθεσμα (2 εβδομάδες) θεραπείας αμυγδαλίνη ήταν εμφανής. Η ικανότητα δέσμευσης των UMUC-3, TCCSup και RT112 κύτταρα σε ακινητοποιημένα κολλαγόνο ήταν επίσης σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται, σε σύγκριση με τους ελέγχους (Σχ. 2). Η επέκταση της περιόδου θεραπείας από 24 ώρες έως 2 εβδομάδες δεν αύξησε περαιτέρω το δυναμικό μπλοκαρίσματος του αμυγδαλίνη. Κανένα σημάδι τοξικότητας που οφείλεται σε αμυγδαλίνη ανιχνεύθηκε με την trypan blue δοκιμή αποκλεισμού.

Τα κύτταρα του όγκου υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 10 mg /ml αμυγδαλίνη είτε για 24 ώρες ή για 2 εβδομάδες. Οι μάρτυρες έλαβαν μέσο κυτταρικής καλλιέργειας μόνο. 0,5 × 10

6 καρκινικά κύτταρα /φρεάτιο προστέθηκαν σε HUVEC μονοστοιβάδες για 0,5, 1 και 2 ώρες. Η μέση προσκολλημένα κύτταρα όγκου από πέντε πεδία υπολογίσθηκε και απεικονίζεται ως ποσοστό του μάρτυρα 100% (διακεκομμένη γραμμή). Ένας εκπρόσωπος των έξι πειράματα. * Υποδηλώνει σημαντική διαφορά με τους μάρτυρες.

Η

Τα κύτταρα του όγκου υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 10 mg /ml αμυγδαλίνη είτε για 24 ώρες ή για 2 εβδομάδες. Κύτταρα που δεν αντιμετωπίζεται με αμυγδαλίνη χρησίμευσαν ως μάρτυρες. 0,5 × 10

6 κύτταρα /φρεάτιο προστέθηκαν σε ακινητοποιημένα κολλαγόνου για 60 λεπτά. υπολογίστηκε μέσος αριθμός προσκολλημένων καρκινικών κυττάρων από πέντε πεδία. Ένας εκπρόσωπος των έξι πειράματα. * Υποδηλώνει σημαντική διαφορά με τους μάρτυρες.

Η

Amygdalin μεταβάλλει τη μεταναστευτική συμπεριφορά των καρκινικών κυττάρων

έκθεσης των κυττάρων όγκου σε αμυγδαλίνη για 24 ώρες δεν άλλαξε μεταναστευτική δραστηριότητα τους (εικ. 3) . Ωστόσο, μετά από μια περίοδο προκατεργασίας 2 εβδομάδων μειωθεί ο αριθμός των UMUC-3 και RT112 κύτταρα κάτω από την μεμβράνη του θαλάμου Transwell, σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα κύτταρα ελέγχου. Η ανασταλτική δράση σε UMUC-3 κύτταρα ήταν περισσότερο έντονη όταν αμυγδαλίνη παρέμεινε στο μέσο της κυτταρικής καλλιέργειας κατά τη διάρκεια της 20 ώρες μεταναστευτικά επώασης ( «αμυγδαλίνη Β»), σε σύγκριση με μέσο ελεύθερο αμυγδαλίνη ( «αμυγδαλίνη Α»). Αυτή η διαφορά στο 20 ώρες μεταναστευτικών επώασης με ή χωρίς αμυγδαλίνη δεν ανιχνεύθηκε στα κύτταρα RT112, όπου η μετανάστευση έχει αποκλειστεί σε παρόμοιο βαθμό. Σε αντίθεση με RT112 και UMUC-3 κύτταρα, μια μαζική αύξηση στην κυτταρική μετανάστευση TCCSup μετά σημειώθηκε 2 εβδομάδες αμυγδαλίνη προεπεξεργασία.

Τα κύτταρα όγκου υποβλήθηκε σε επεξεργασία με αμυγδαλίνη για 24 ώρες ή για 2 εβδομάδες σπάρθηκαν στον άνω θάλαμο με ένα χημειο-προσελκυστικό στο κατώτερο φρεάτιο. Τα κύτταρα αφέθηκαν να μετακινηθούν επί 20 ώρες, είτε σε αμυγδαλίνη μέσο ελεύθερο (αμυγδαλίνη-Α) ή σε μέσο που περιέχει αμυγδαλίνη (αμυγδαλίνη-Β). Τα κύτταρα μεταναστεύουν προς την κατώτερη επιφάνεια της μεμβράνης μετρήθηκαν. Οι έλεγχοι οριστεί σε 100%. Ένας εκπρόσωπος των έξι πειράματα. * = Σημαντική διαφορά με τους μάρτυρες. # = Σημαντική διαφορά μεταξύ αμυγδαλίνη-Α και αμυγδαλίνη-Β.

Η

αμυγδαλίνη ενεργεί για ιντεγκρίνης έκφραση α και β επιφάνεια

Η ιντεγκρίνη υποτύπους α2, α3, α5, α6, β1 και β3 έντονα εκφράζεται επί UMUC-3 κύτταρα, α4 ήταν πολύ μέτριας εκφράσεως και α1 και β4 δεν εκφράστηκαν (εικ. 4, αριστερά). Αμυγδαλίνη αυξημένα α3, αλλά μειώνεται α5, α6, β1 και β3, ανεξάρτητα από το χρόνο έκθεσης. Δεν αμυγδαλίνη που προκαλείται τροποποίηση σημειώθηκε σε α4 ιντεγκρίνης. Ο υποδοχέας α2 ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω μετά από 24 ώρες, αλλά τα πάνω ρυθμισμένη μετά από 2 εβδομάδες έκθεση αμυγδαλίνη (εικ. 4, δεξιά). κύτταρα TCCSup εξέφρασε σαφώς την α2, α3, α5, α6, β1 και μέλη β4 ιντεγκρίνης (εικ. 5, αριστερά). Ο τύπος β3 ήταν μετρίως που υπάρχει στην επιφάνεια των κυττάρων. Αμφότερα τα α1 και α4 υποτύπων δεν ήταν ανιχνεύσιμα. Amygdalin οδήγησε σε σημαντική αύξηση της ιντεγκρίνης α5, α6, β1 και β4 σε TCCSup, οπότε η εφαρμογή 2 εβδομάδες επάγεται ισχυρότερες επιπτώσεις από την 24 h επώασης (εικ. 5, δεξιά). Οι α2 και β3 υπότυπους ενισχύθηκαν μετά από 2 εβδομάδες, αλλά όχι μετά από 24 ώρες. α3 δεν αλλοιώνεται από αμυγδαλίνη. κύτταρα RT112 χαρακτηρίστηκαν από υψηλό α2, α3, α6, β1 και β3 επίπεδο έκφρασης (εικ. 6, αριστερά). Ιντεγκρίνη α5 ήταν μέτρια εκφράζεται, και β3 ήταν μόνο ελαφρώς αυξημένα πάνω από το βασικό. Οι ιντεγκρίνες α1 και α4 δεν εκφράστηκαν σε κύτταρα RT112. Η ιντεγκρίνες α3, α6, β3 και β4 ήταν όλα κατασταλεί από αμυγδαλίνη (εικ. 6, δεξιά). Οι συνέπειες για α3 και β3 δεν εξαρτάται από το αν αμυγδαλίνη είχε εφαρμοστεί για 24 ώρες ή 2 εβδομάδες ενώ α6 και β4 είχαν μειωθεί σε μεγαλύτερο βαθμό μετά από 2 εβδομάδες, σε σύγκριση με 24 ώρες. α2 σαφώς αυξημένη μετά από 2 εβδομάδες, αλλά όχι μετά από 24 ώρες, και α5 και β1 παρέμεινε αμετάβλητη από αμυγδαλίνη.

Το αριστερό πλαίσιο απεικονίζει την έκφραση της ιντεγκρίνης όπως οικόπεδα ιστόγραμμα με διακεκομμένη γραμμή δείχνει φθορισμό υποβάθρου και μια σταθερή γραμμή που υποδεικνύει ειδικό φθορισμό σε μη επεξεργασμένα κύτταρα. Το δεξί πλαίσιο δείχνει έκφραση ιντεγκρίνης υποτύπου μετά από 24 ώρες και για 2 εβδομάδες έκθεσης αμυγδαλίνη, σε σύγκριση με ελέγχους, ορίζεται σε 100%. Ν.Ο. = Δεν υπολογίζονται. * Υποδηλώνει σημαντική διαφορά με τους μάρτυρες.

Η

Το αριστερό πλαίσιο απεικονίζει την έκφραση της ιντεγκρίνης όπως οικόπεδα ιστόγραμμα με διακεκομμένη γραμμή δείχνει φθορισμό υποβάθρου και μια σταθερή γραμμή που υποδεικνύει ειδικό φθορισμό. Το δεξί πλαίσιο δείχνει έκφραση ιντεγκρίνης υποτύπου μετά από 24 ώρες και για 2 εβδομάδες έκθεσης αμυγδαλίνη, σε σύγκριση με ελέγχους, ορίζεται σε 100%. Ν.Ο. = Δεν υπολογίζονται. * Υποδηλώνει σημαντική διαφορά με τους μάρτυρες.

Η

Το αριστερό πλαίσιο απεικονίζει την έκφραση της ιντεγκρίνης όπως οικόπεδα ιστόγραμμα με διακεκομμένη γραμμή δείχνει φθορισμό υποβάθρου και μια σταθερή γραμμή που υποδεικνύει ειδικό φθορισμό. Το δεξί πλαίσιο δείχνει έκφραση ιντεγκρίνης υποτύπου μετά από 24 ώρες και για 2 εβδομάδες έκθεσης αμυγδαλίνη, σε σύγκριση με ελέγχους, ορίζεται σε 100%. Ν.Ο. = Δεν υπολογίζονται. * Υποδηλώνει σημαντική διαφορά με τους μάρτυρες.

Η

Τροποποιήσεις ιντεγκρίνης πρωτεϊνών με αμυγδαλίνη

Μεταβολές της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες ιντεγκρίνης που προκαλείται από αμυγδαλίνη δείχνονται στο σχήμα 7 (αριστερά) και ποσοτικοποίηση εκφράζεται ως ποσοστιαία διαφορά μεταξύ κυττάρων όγκου ελέγχου και κύτταρα όγκου υποβλήθηκε σε επεξεργασία με αμυγδαλίνη (δεξιά). Σε UMUC-3 κύτταρα, α6 και β3 κατεστάλησαν τόσο από 24 ώρες και για 2 εβδομάδες εφαρμογή αμυγδαλίνη, ενώ α2 και β1 ήταν πάνω ρυθμισμένα. Μια προκαλούμενη αμυγδαλίνη αύξηση α5 ήταν εμφανής αλλά αυτό το αποτέλεσμα περιορίζεται στην εφαρμογή αμυγδαλίνη 2 εβδομάδα. α3 ιντεγκρίνης ήταν ελαφρώς αυξημένη έναντι των μαρτύρων μετά από 24 ώρες, αλλά όχι μετά από 2 εβδομάδες. Η ιντεγκρίνες α1, α4 και β4 δεν ήταν ανιχνεύσιμα με κηλίδωση Western. Η ιντεγκρίνη που σχετίζονται με τη σηματοδότηση των πρωτεϊνών ΙίΚ και pFAK είχαν μειωθεί μετά την εφαρμογή 2 εβδομάδες αμυγδαλίνη. Παρόμοια δράση που ασκείται επί κυττάρων TCCSup, αφού α2, α5 και β1 αυξηθεί και β3 μειώθηκε κάτω από αμυγδαλίνη (2 εβδομάδες & gt? 24 h). Σε αντίθεση με UMUC-3, α6 ενισχύθηκε μετά από 24 ώρες, αλλά μειώνεται μετά από 2 εβδομάδες. β4, δεν εκφράζεται σε UMUC-3, κάτω-ρυθμίζονται από αμυγδαλίνη (2 εβδομάδες & gt? 24 h). Η εφαρμογή αμυγδαλίνη 2 εβδομάδες οδήγησε σε απώλεια pFAK και ελαφρώς μειωμένη ILK. Αξιολόγηση των RT112 αποκάλυψε αυξημένη ιντεγκρίνης α2 προκαλούνται από 24 ώρες ή θεραπεία αμυγδαλίνη 2 εβδομάδα. α6 και β4 ιντεγκρίνες ήταν κάτω-ρυθμίζονται με 2 εβδομάδες & gt? 24 h. Υπήρχε επίσης μια ελαφρά αύξηση του α3 μετά από 24 ώρες, αλλά όχι μετά από 2 εβδομάδες, ένα φαινόμενο που παρατηρείται επίσης σε UMUC-3 κύτταρα. Σε αντίθεση με UMUC-3 και TCCSup, ο υπότυπος α5 σε RT112 ήταν μόνο μετρίως ανιχνεύσιμη στα κύτταρα ελέγχου και περαιτέρω μειώθηκε μετά τη φαρμακευτική αγωγή. Αμυγδαλίνη επιπλέον επηρεάζεται σχετίζονται ιντεγκρίνης σηματοδότηση σε RT112, αποδεικνύεται από μειωμένη FAK και pFAK.

Οι έλεγχοι παρέμειναν χωρίς θεραπεία. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Η εικόνα δείχνει έναν εκπρόσωπο από τρία ξεχωριστά πειράματα. Ν.Ο. δηλώνει «μη ανιχνεύσιμο». Ποσοτικοποίηση της ιντεγκρίνης έκφρασης υποτύπου απεικονίζεται στα δεξιά. πυκνότητα pixel δίνεται σε ποσοστό σε σχέση με τους μάρτυρες που δεν αντιμετωπίζονται με αμυγδαλίνη. * Υποδηλώνει σημαντική αύξηση μετά από δύο 24 ώρες και δύο εβδομάδες θεραπείας αμυγδαλίνη, #indicates σημαντική μείωση μετά από δύο 24 ώρες και δύο εβδομάδες θεραπείας αμυγδαλίνη, σε σύγκριση με τους μάρτυρες.

Η

β1 και β4 ιντεγκρίνης νοκ ντάουν

Amygdalin μεταβάλλεται σαφώς το προφίλ ιντεγκρίνης έκφραση όλων των κυτταρικών σειρών καρκίνου τρία κύστης. Να διερευνήσει κατά πόσον οι τροποποιήσεις ιντεγκρίνης είναι σχετικές με τη μεταστατική εξέλιξη, γκρεμίζω μελέτες πραγματοποιήθηκαν με τα μέλη της β-ιντεγκρίνης που υπηρετούν ως αντιπρόσωποι. Από β1 (αλλά όχι β3 και β4) ήταν ιδιαίτερα εκφράζεται σε έλεγχο UMUC-3 και TCCSup και σημαντικά μειωμένη από αμυγδαλίνη, β1 χτυπήθηκε κάτω σε αυτά τα κύτταρα και τα πειράματα πρόσφυση και τη μετανάστευση επαναλαμβάνεται (εικ. 8). Η ιντεγκρίνη β1 επίσης σε μεγάλο βαθμό εκφράζεται επί RT112 αλλά δεν τροποποιούνται από αμυγδαλίνη, σε αντίθεση με β4, η οποία πληρούσε τα δύο κριτήρια, δηλαδή υψηλή αρχική έκφραση και σημαντική διαφοροποίηση από αμυγδαλίνη. Ως εκ τούτου, β4 χτυπήθηκε κάτω στην κυτταρική σειρά RT112 πριν από την υποταγή στην ανάλυση προσκόλλησης και της μετανάστευσης (εικ. 8, κάτω δεξιά). Απώλεια β1 συνοδεύτηκε από μία σημαντική μείωση σε UMUC-3 δέσμευσης (εικ. 8) και τη μετανάστευση (εικ. 9). Από την άλλη πλευρά, TCCSup πρόσδεσης στο κολλαγόνο ενισχύθηκε (εικ. 8), ενώ TCCSup μετανάστευση δεν επηρεάστηκε από β1 γκρεμίζω (εικ. 9). Κάτω ρύθμιση της ιντεγκρίνης β4 σε κύτταρα RT112 δεν μεταβάλλουν τις ιδιότητες πρόσφυσης (εικ. 8), αλλά μαζικά μπλοκάρει τη μετανάστευση (εικ. 9).

κύτταρα όγκου επιμολύνθηκαν με β1 ιντεγκρίνης ή β4 siRNA. Μη κατεργασμένα κύτταρα (ελέγχου) και κύτταρα κατεργασμένα με μπερδεμένο siRNA (έλεγχος siRNA) χρησίμευσαν ως μάρτυρες. Η αποτελεσματικότητα του knockdown υποδοχέα αξιολογήθηκε με κηλίδωση Western (κάτω δεξιά). Ένας εκπρόσωπος των έξι πειράματα. * Υποδηλώνει σημαντική διαφορά με τους μάρτυρες.

Η

Καρκινικά κύτταρα επιμολυσμένα με β1 ιντεγκρίνης ή β4 siRNA ή ομελέτα siRNA (siRNA ελέγχου). Έλεγχοι παρέμεινε χωρίς θεραπεία (έλεγχος). Οι τιμές παρουσιάζονται ως μεταναστεύσει κύτταρα ανά 0,25 χιλιοστά

2. Ένας εκπρόσωπος των έξι πειράματα. * Υποδηλώνει σημαντική διαφορά με το μη επεξεργασμένο έλεγχο. Ένθετο που λαμβάνονται από το σχήμα 8.

Η

Συζήτηση

Από καρκινικών κυττάρων αλληλεπίδραση με το αγγειακό ενδοθήλιο είναι απαραίτητο για τα κύτταρα του όγκου να εγκαταλείψουν την κυκλοφορία του αίματος για την εγκατάσταση σε δευτερεύουσες θέσεις, παρεμβαίνοντας με τη διαδικασία αυτή είναι ζωτικής σημασίας για την παρεμπόδιση της μετάστασης. Η παρούσα έκθεση δείχνει ότι αμυγδαλίνη αναστέλλει σημαντικά προσκόλληση καρκινικών κυττάρων κύστης σε ενδοθηλιακά κύτταρα. Από αμυγδαλίνη μειώνει τον αριθμό των κυττάρων του όγκου, λιγότερα κύτταρα μπορούν να σέρνονται κάτω από το στρώμα ενδοθηλιακών να έλθει σε επαφή με τις πρωτεΐνες μήτρας σε μεταστάσεις. Το επόμενο βήμα στη μετάσταση περιλαμβάνει την μήτρα κολλαγόνου. Αλληλεπίδραση κυττάρων όγκου με το κολλαγόνο δεν πρέπει μόνο να συμβεί για να ξεφύγουν από τον πρωτογενή όγκο, αλλά και να επιτρέπει την επεμβατική εξαπλώνεται στο όργανο-στόχο, όταν τα κύτταρα όγκου είχαν διαπεράσει ενδοθηλιακού φραγμού αίματος [11]. Με την παρουσία του αμυγδαλίνη, τα καρκινικά κύτταρα που χρησιμοποιούνται στην παρούσα έρευνα χάσει την ικανότητά τους να συνδέονται με ακινητοποιημένο κολλαγόνο. Ως εκ τούτου, μπορεί να επιβραδύνει την αμυγδαλίνη μεταστατική εξέλιξη εμποδίζοντας μηχανικές επαφές των κυκλοφορούντων κυττάρων του όγκου στο τοίχωμα του αγγείου και του υπο-ενδοθηλιακή μήτρα. διάδοση όγκου, ωστόσο, δεν περιορίζεται σε δεσμευτική. Τα κύτταρα θα πρέπει επίσης να αποκολληθούν από πρωτεΐνες μήτρας να εισβάλουν ιστού. Amygdalin επηρέασε την ικανότητα μετανάστευσης όλων των κυτταρικών σειρών καρκίνου της κύστεως μετά από 2 εβδομάδες, αλλά όχι μετά από 24 ώρες, υποδεικνύοντας ότι η μακροχρόνια θεραπεία μπορεί να είναι απαραίτητη για να αλλάξει κυττάρου όγκου κινητικότητα.

δράση Amygdalin σχετικά με την διαφορετική κύτταρο όγκου γραμμές δεν ήταν ταυτόσημα. Η μετανάστευση των UMUC-3 και RT112 έχει αποκλειστεί, ενώ ο αριθμός των κυττάρων που μεταναστεύουν TCCSup αυξάνεται με αμυγδαλίνη. Αυτό σημαίνει ότι αν και αμυγδαλίνη μειώνει το ρυθμό προσκόλλησης σε όλες τις καρκινικές κυτταρικές γραμμές, υπάρχει ο κίνδυνος ότι η χρόνια έκθεση αμυγδαλίνη σε λίγα εναπομείναντα κύτταρα ενός συγκεκριμένου υποτύπου του όγκου σαν TCCSup μπορεί να οδηγήσει σε αυξημένη δραστηριότητα ατμομηχανή. Είτε λόγω ενός επίκτητο ή ενδογενή ανθεκτικότητα ή λόγω της ανάπτυξης των ανεπιθύμητων βρόχοι ανάδρασης παραμένει ασαφής, αλλά αυτό σημαίνει ότι δεν είναι όλοι οι ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης μπορεί να επωφεληθούν εξίσου καλά από αμυγδαλίνη. Σύμφωνα με αυτή την κερδοσκοπία, έχει πρόσφατα αποδειχθεί ότι η ανάπτυξη αντοχής συνοδεύεται από ένα λειτουργικό διακόπτη του υποδοχείς ιντεγκρίνης, οδηγώντας τα καρκινικά κύτταρα σε υψηλή κινητικότητα [12].

Chen et al. Πρόσφατα εικάζουν ότι τα καρκινικά κύτταρα με μια υψηλή ταχύτητα μετανάστευσης είναι πολύ πιο πιθανό να μεταστάσεις από εκείνους με χαμηλή ταχύτητα μετανάστευσης [13]. Αυτό, ωστόσο, δεν μπορεί να επιβεβαιωθεί από άλλη έρευνα στην οποία ο αριθμός των μεταναστευτικών κυττάρων όγκου και η απόσταση και την ταχύτητα της μετανάστευσης δεν συσχετίζονται με την κακοήθη δυναμικό των καρκινικών κυττάρων [14]. Μάλλον, η κατεύθυνση της κυτταρικής κινητικότητας έδειξε την κακοήθη δυναμικό των καρκινικών κυττάρων [14]. Να αποκτήσουν περαιτέρω κατανόηση, μελέτες σε ζώα έχουν μόλις αρχίσει να εξερευνήσετε στην πρόοδο του όγκου vivo υπό θεραπεία αμυγδαλίνη.

Ο ρόλος των ιντεγκρινών στην σχηματίζουν δεσμούς κυττάρου-κυττάρου και κυττάρου-μήτρας απαραίτητα για την προσκόλληση, την εξαγγείωση και τη μετανάστευση έχει το πρώτο άνοιγμα [15], [16], όπου η υπομονάδα β1 ιντεγκρίνης έχει δειχθεί ότι παίζουν έναν κεντρικό ρόλο στην κυτταρική σειρά καρκίνου της ουροδόχου κύστης Τ24. Ωστόσο, δεν είναι όλες οι κυτταρικές σειρές καρκίνου της ουροδόχου κύστης που χαρακτηρίζεται από τον ίδιο ιντεγκρίνης μοτίβο. Στην παρούσα έρευνα αμυγδαλίνη τροποποιημένα προσκόλληση και μετανάστευση και να μεταβληθεί προφίλ έκφρασης ιντεγκρίνης με διαφορετικό τρόπο σε διαφορετικές κυτταρικές σειρές. Ιντεγκρίνης β4 δεν εκφράστηκε στις UMUC-3, αλλά για RT112 και TCCSup, ενώ β3 ήταν μόνο οριακά ανιχνεύσιμη σε RT112 αλλά έντονα ανιχνεύσιμο σε UMUC-3 και TCCSup κύτταρα. Μια έρευνα περιλαμβάνει την επίδραση του βαλπροϊκού οξέος επί προσκόλλησης κυττάρου της ουροδόχου κύστης στο κολλαγόνο [17], αποκάλυψε επίσης τροποποίηση του προφίλ έκφρασης ιντεγκρίνης, ανάλογα με την κυτταρική σειρά που χρησιμοποιείται. Άλλοι ερευνητές έχουν αναφέρει διαφορετικές υποοικογένειες ιντεγκρίνης σε UMUC, Τ24, J82, RT-4, 253J και τα κύτταρα Hu456 [18], [19]. Κάθε κυτταρική γραμμή μπορεί, ως εκ τούτου, έχουν οριστεί ένα χαρακτηριστικό υποδοχέα και φαρμακευτική αγωγή μπορεί να επηρεάσει ιντεγκρίνης υποοικογένειες διαφορετικά.

Οι έρευνες σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη έχουν αποκαλύψει ότι η αρχική προφίλ ιντεγκρίνης ενός συγκεκριμένου κλώνου του όγκου μπορεί να καθορίσει μοριακής ανταπόκρισης της να φαρμακευτική θεραπεία [20]. Πράγματι, αμυγδαλίνη επηρέασε τη σύνθεση ιντεγκρίνης των αξιολογούνται τα καρκινικά κύτταρα της ουροδόχου κύστης με διαφορετικό τρόπο. Στα κύτταρα UMUC-3 β1 και β3 επιφάνεια έκφραση ελαττώθηκε από αμυγδαλίνη, αλλά ενισχυμένη σε κύτταρα TCCSup. Σε κύτταρα RT112 β4 αντί β1 μεταβλήθηκε με αμυγδαλίνη. Ενδοκυτταρικά και τα επίπεδα ιντεγκρίνης μεμβράνη επίσης επηρεάζονται διαφορετικά από αμυγδαλίνη στην UMUC-3 και TCCSup κύτταρα. Σε UMUC-3 κύτταρα ενδοκυτταρική β1 ιντεγκρίνης ήταν αυξημένη και η έκφραση επιφάνεια μειώνεται, υποδεικνύοντας ότι αμυγδαλίνη επάγει την μετατόπιση του β1 ιντεγκρίνης μακριά από την επιφανειακή μεμβράνη. Σε TCCSup κύτταρα β1 ιντεγκρίνης εκφράσεως είναι αυξημένο τόσο ενδοκυτταρικά και επί της μεμβράνης επιφάνεια. Amygdalin προκάλεσε μια μείωση στην ενδοκυτταρική ιντεγκρίνης β3 και στις δύο UMUC-3 και TCCSup κύτταρα. Επιφανειακή έκφραση, ωστόσο, δεν ήταν το ίδιο, με UMUC-3 κύτταρα τα οποία εμφανίζουν μία επαγόμενη αμυγδαλίνη μείωση στην β3 ιντεγκρίνης και τα κύτταρα TCCSup παρουσιάζοντας αύξηση. Η κύρια μετατόπιση σε TCCSup κυττάρων από το κυτταρόπλασμα στη μεμβράνη επιφάνεια, φαίνεται, ως εκ τούτου, να κατευθύνεται σε β3 ιντεγκρίνης.

Κατάργηση ορισμένων υποτύπων ιντεγκρίνης από την κυτταρική επιφάνεια δεν είναι ο μόνος μηχανισμός ρύθμισης προσκόλλησης των καρκινικών κυττάρων. διακίνησης Ιντεγκρίνης μεταξύ ενδοκυτταρικά διαμερίσματα και στην επιφάνεια του κυττάρου έχει αποδειχθεί ότι είναι μια απαραίτητη προϋπόθεση για την αφαίρεση του υποδοχέα στη βάση του κυττάρου προεξοχών. Ανακύκλωση ιντεγκρίνης πίσω στην αιχμή των κυττάρων υποστηρίζει την προσκόλληση [21]. Μια προκλινική μελέτη για τη νεφρική καρκινικών κυττάρων έδειξε ότι τόσο ιντεγκρίνης υποδοχέα πάνω και προς τα κάτω ρύθμιση μπορεί να οδηγήσει τα καρκινικά κύτταρα προς κακοήθεια. Κατά συνέπεια, η θεραπευτική παρέμβαση με στόχο την «περαιτέρω μετατόπισης» ορισμένα μόρια ιντεγκρίνης μπορεί να παρέχει μια επιλογή για την πρόληψη της κακοήθειας [22].

Η σημασία των ιντεγκρινών για την προσκόλληση και τη μετανάστευση αποδείχθηκε από knock-down μελέτες για β ιντεγκρίνες με είτε υψηλή αρχική επιφανειακή έκφραση ή ισχυρά αμυγδαλίνη που προκαλείται αλλοίωση. Τα κριτήρια αυτά πληρούνται για β1 σε UMUC-3 και TCCSup κύτταρα και για β4 στα κύτταρα RT112. Καταστολή των β1 συσχετίζονται καλά με μειωμένη δέσμευση και τη μετανάστευση δραστηριότητα UMUC-3, το οποίο είναι σύμφωνο με in vitro μελέτες με Τ24 και 5637 κύτταρα [23], [24]. Ως εκ τούτου, η απώλεια της β1 μπορεί να είναι ένα μηχανισμός με τον οποίο αμυγδαλίνη επιβραδύνει UMUC-3 διάδοση όγκου. κύτταρα TCCSup, όμως, συμπεριφέρονταν διαφορετικά υπό αποκλεισμό β1. εκδηλώσεις στο κολλαγόνο όντως αυξηθεί Binding, υποδεικνύοντας ότι αυτός ο υποδοχέας σε αυτά τα κύτταρα μπλοκ κυττάρου-κυττάρου ή κυττάρου-μήτρας επαφές. Διαφορική ιντεγκρίνης καθοδηγείται συγκολλητική συμπεριφορά διαφόρων υποσειρές όγκων έχει προηγουμένως παρατηρηθεί. Ο αποκλεισμός της υπομονάδας α3 έχει δειχθεί ότι αναστέλλει HCV29 κύστη προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων στο πρωτεΐνες μήτρας λαμινίνη και φιμπρονεκτίνη, αλλά έχει ένα αντίθετο αποτέλεσμα επί κυτταρικής πρόσφυσης Τ24 και Hu456.