Αφηρημένο

Κίνηση, την ανάπτυξη, την υποτροπή και μετάσταση του κεφαλιού και του λαιμού καρκινώματα πλακωδών κυττάρων (HNSCC) έχουν που σχετίζονται με τη συμπεριφορά των καρκινικών βλαστοκυττάρων (CSC) που μπορούν να αναγνωριστούν από τους αλδεΰδης-αφυδρογονάση-ισομορφή-1 (ΑΙ_ϋΗ1) δραστηριότητα. Εμείς ποσοτικά και εμπλουτίζεται ΑΙ_ϋΗ1

+ κυττάρων μέσα σε κυτταρικές σειρές HNSCC και στη συνέχεια χαρακτηρίζεται φαινοτυπικά και λειτουργικές ιδιότητες τους, όπως την ικανότητα εισβολής και επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT). Σφαιροειδές πολιτισμό εμπλουτισμένα CSC από πέντε HNSCC κυτταρικές σειρές έως και 5 φορές. Σε σφαιροειδή προερχόμενα κύτταρα (SDC) και το πατρικό μονοστιβάδα κυτταρική γραμμή που λαμβάνεται ΑΙ_ϋΗ1, CD44, CD24, Ε-καδερίνη, α-SMA, και η έκφραση βιμεντίνης συγκρίθηκε με κυτταρομετρία ροής και ανοσοφθορισμού μαζί με ανάλυση πολλαπλασιασμού και του κυτταρικού κύκλου. δραστηριότητα Εισβολή αξιολογήθηκε με Matrigel δοκιμασία και έκφραση βλαστική ικανότητα που σχετίζονται με παράγοντες μεταγραφής (TF) Nanog, Oct3 /4, Sox2 και ΕΜΤ-σχετιζόμενα γονίδια Snail1 και 2, και Twist με πραγματικού χρόνου PCR. Όλες οι κυτταρικές γραμμές που σχηματίζονται σφαιροειδή που θα μπορούσε να αυτο-ανανέωση και να σειριακά εκ νέου περάστηκαν. έκφραση ΑΙ_ϋΗ1 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε SDC. ΑΙ_ϋΗ1

+ κύτταρα έδειξαν αυξημένη αποικία-σχηματισμό. Το ποσοστό των κυττάρων με ένα υποθετικό δείκτη αστερισμό CSC του CD44

+ /CD24

– ήταν εξαιρετικά μεταβλητή (0,5% έως 96%) σε μονοστιβάδα και σφαιροειδές πολιτισμούς και επικαλύπτεται σε 0% -33% με την CD44

+ /CD24

– /ΑΙ_ϋΗ1

+ κυττάρων υποσύνολο. SDC είχαν σημαντικά υψηλότερη εισβολή δραστηριότητα. mRNA των γονιδίων που σχετίζονται με βλαστική ικανότητα Sox2, Nanog, και Oct3 /4 ήταν σημαντικά αυξημένη σε SDC από όλες τις κυτταρικές σειρές. Twist ήταν σημαντικά αυξημένη σε δύο ενώ Snail2 παρουσίασαν σημαντική αύξηση σε ένα και σημαντική μείωση στην SDC των δύο κυτταρικών σειρών. SDC είχαν υψηλότερο ποσοστό G0 φάση, έδειξαν έκφραση υψηλού επιπέδου των α-SMA και βιμεντίνης, αλλά μειώθηκαν σημαντικά έκφραση Ε-καδερίνης. HNSCC γραμμές λιμάνι δυναμικό CSC, που χαρακτηρίζεται από ΑΙ_ϋΗ1 και της έκφρασης TF βλαστική ικανότητα δείκτη, καθώς και ιδιότητες, όπως εισβολής, ηρεμία, και EMT. CSC μπορεί να εμπλουτιστεί με τεχνικές καλλιέργειας αγκύρωση-ανεξάρτητη, η οποία μπορεί να είναι σημαντική για τη διερεύνηση της συμβολής τους στην αντίσταση της θεραπείας, η επανεμφάνιση του όγκου και των μεταστάσεων

Παράθεση:. Chen C, Wei Υ, Hummel Μ, Hoffmann ΤΚ, Gross Μ, Kaufmann AM, et al. (2011) Αποδεικτικά στοιχεία για τα επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση σε καρκινικά βλαστικά κύτταρα της Κεφαλής και Τραχήλου πλακωδών κυττάρων καρκίνωμα. PLoS ONE 6 (1): e16466. doi: 10.1371 /journal.pone.0016466

Επιμέλεια: Λιν Ζανγκ, University of Pennsylvania, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 20η Σεπτεμβρίου 2010? Αποδεκτές: 20 Δεκ του 2010? Δημοσιεύθηκε: 27, Ιανουαρίου 2011

Copyright: © 2011 Chen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη χρηματοδοτήθηκε εξ ολοκλήρου από τα χρήματα από Charite-Universitätsmedizin. Δεν χρησιμοποιήθηκαν εξωτερικές πηγές χρηματοδότησης για τη μελέτη αυτή. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

HNSCC λογαριασμούς για περίπου 6% όλων των περιπτώσεων καρκίνου και για περίπου 650.000 νέες περιπτώσεις και 350.000 θανάτους παγκοσμίως κάθε χρόνο [1], [2], [3]. Οι πρόοδοι στην θεραπεία έχουν βελτιώσει την ποιότητα της ζωής, αλλά τα ποσοστά επιβίωσης παρέμειναν αμετάβλητα κατά τη διάρκεια των τελευταίων δεκαετιών. Η θνησιμότητα από την ασθένεια αυτή παραμένει υψηλή λόγω της ανάπτυξης των απομακρυσμένων μεταστάσεων και την εμφάνιση των τοπικών και συστηματικών υποτροπές ανθεκτικά σε χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία. Συνεπώς, είναι απαραίτητο να αναπτυχθεί μια βαθύτερη κατανόηση της βιολογίας της ασθένειας αυτής, προκειμένου να αναπτυχθούν πιο αποτελεσματικές θεραπευτικές προσεγγίσεις.

Απόδειξη έχει πρόσφατα συσσωρεύονται για να υποστηρίξουν την υπόθεση ότι οι όγκοι περιέχουν ένα μικρό υποπληθυσμό των κυττάρων που ονομάζεται καρκινικά βλαστικά κύτταρα (CSC), οι οποίες παρουσιάζουν αυτο-ανανέωση ικανότητες και είναι υπεύθυνος για τη συντήρηση και τη μετάσταση των όγκων [4]. CD44

+ /CD24

-κύτταρα έχουν κατ ‘αρχάς προτείνεται να παρουσιάζουν CSC ιδιότητες στον καρκίνο του μαστού [5].

Στη συνέχεια, CD133 βρέθηκε να προσδιορίσει CSC στους όγκους του εγκεφάλου [6], ορθοκολικό καρκίνωμα [7], και καρκίνωμα του παγκρέατος [8]. Σε HNSCC, πρίγκιπας et al. πρώτα έδειξε ότι ένα CD44

+ πληθυσμό κυττάρων έχει τις ιδιότητες της CSC [9], αλλά σχετικά υψηλό αριθμό των κυττάρων αυτών (

Για να αντιμετωπιστεί αυτό το θέμα, μελετήσαμε την έκφραση των δεικτών μυοϊνοβλαστών βιμεντίνης και α-SMA σε SDC από 3 κυτταρικές σειρές που έχουν διαφορετικά επίπεδα έκφρασης ΑΙ_ϋΗ1 σε μονοστρωματική καλλιέργεια (χαμηλή: UD-SCC1: 9,4 ± 5,3%, μέσο: UT-SCC22: 16.9 ± 4.1 %, υψηλό: UT-SCC24A: 25,8 ± 3,0%). Βρήκαμε ότι οι διάφορες κυτταρικές σειρές και SDC που παράγεται από αυτές τις κυτταρικές σειρές ποικίλη στην αναλογία των κυττάρων που εκφράζουν βιμεντίνης και α-SMA (Πίνακας 3). UD-SCC1 δεν έδειξαν α-SMA κύτταρα που εκφράζουν και ασθενή (12,5 ± 2,5%) βιμεντίνης έκφραση των κυττάρων στην καλλιέργεια μονοστοιβάδας. Σε αντίθεση, UT-SCC24A (Σχήμα 7) και UT-SCC22 κύτταρα μονοστιβάδας προερχόμενων είχε μια σχετικά υψηλή συχνότητα βιμεντίνης και α-SMA κύτταρα που εκφράζουν το οποίο υποδεικνύει ότι αυτές οι κυτταρικές σειρές έχουν τόσο επιθηλιακών και μεσεγχυματικών χαρακτηριστικά. Είναι ενδιαφέρον ότι αυτές οι δύο κυτταρικές γραμμές έχουν ένα σχετικά υψηλό ποσοστό των κυττάρων στις καλλιέργειες μονοστοιβάδας που είναι ΑΙ_ϋΗ1 θετικά (Πίνακας 3). Παρ ‘όλα αυτά, όπως σφαιροειδές πολιτισμούς, όλες οι κυτταρικές σειρές που περιέχονται περισσότερες α-SMA και βιμεντίνης θετικών κυττάρων από τις αντίστοιχες κυτταρικές σειρές γονική μονοστοιβάδα.

(Α) χρώση ανοσοφθορισμού των μονοστρωματική (Α1-3 και Β1-3) και σφαιροειδές (C1-3 και D1-3) καλλιέργειες από UT-SCC24A με αντισώματα που κατευθύνονται εναντίον της α-SMA (πράσινο) και βιμεντίνης (κόκκινο). Όλα τα SDC (πάνελ C και D) δείχνουν υψηλά επίπεδα των δεικτών μεσεγχυματικών α-SMA και βιμεντίνης σύγκριση με τους ομολόγους μονοστοιβάδα τους. ανάλυση της έκφρασης Ε-καδερίνης (Β) με FACS. Σε σύγκριση με τους ομολόγους μονοστρωματική τους, σφαιροειδή έδειξαν μειωμένη έκφραση Ε-καδχερίνη? δύο πληθυσμοί κυττάρων που προέρχονται από UT-SSC24A μπορούν να διαχωριστούν ανάλογα με το επίπεδο έκφρασης Ε-καδχερίνη, γεγονός που δείχνει ότι η SDC έχουν αποκτήσει μυοϊνοβλαστών χαρακτηριστικά από EMT.

Η

EMT συνοδεύεται επίσης από απώλεια των επαφών κυττάρου-κυττάρου στα επιθηλιακά κύτταρα, χαρακτηρίζεται από μία ρύθμιση προς τα κάτω της έκφρασης Ε-καδερίνης. Ο αριθμός των Ε-καδερίνης κύτταρα που εκφράζουν σε SDC και μονοστοιβάδες ποσοτικοποιήθηκε με FACS (Σχήμα 7, Πίνακας 3). Το SDC έδειξαν σημαντικά αυξημένες αναλογίες Ε-καδερίνης αρνητική σε χαμηλή κύτταρα που εκφράζουν σε σύγκριση με τους ομολόγους τους μονοστιβάδας προερχόμενων, υποδεικνύοντας απώλεια της κυτταρικής προσκόλλησης σε αυτό το υποπληθυσμό.

Τέλος, δοκιμάσαμε επίσης την εκ νέου προσκόλληση του σφαιροειδή να πλαστικό πολιτισμό. Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν τα σφαιροειδή προσαρτάται στη φιάλη και άρχισε να αναπτύσσεται ως μια μονοστρωματική καλλιέργεια, η α-SMA και επίπεδο βιμεντίνης μειώθηκε, και τα περισσότερα από τα κύτταρα που αναπτύχθηκαν έξω από τα σφαιροειδή χρωματίστηκαν αρνητικά για αυτά τα δύο δείκτες (Σχήμα 8).

(Α-Γ) Light-μικροσκοπικές εικόνες με μορφή αντίθεσης φάσης σφαιροειδή UD-SCC1 την επανατοποθέτηση να καλύψει διαφάνειες κατά τη διαδικασία της εκ νέου ανάπτυξης σε ένα φαινότυπο μονοστοιβάδα. (Α) 24 ώρες μετά την επανασύνδεση, ορισμένα ατρακτοειδόμορφα κύτταρα αναπτύσσονται έξω από προσκολλημένη σφαιροειδή. (Β) 72 ώρες μετά την επανασύνδεση, οι περισσότεροι από το σχήμα των συνδεδεμένων κυττάρων »μοιάζει γονική μονοστοιβάδας ομόλογό τους (C). (D-E) Έμμεση χρώση ανοσοφθορισμού των επανατοποθετηθεί σφαιροειδή μετά από 24 ώρες χρωματίστηκαν με ϋΑΡΙ (D1, E1), α-SMA (D2? Πράσινο), και βιμεντίνης (Ε2? Κόκκινο). Εικόνες D3 και Ε3 δείχνουν την επικάλυψη με πυρηνική χρώση. Τα βέλη απεικονίζουν ξεπέρασμα κύτταρα που ακτινοβολεί από το σφαιροειδές. Η έκφραση του α-SMA και βιμεντίνης μειώθηκε σε ξεπέρασμα κύτταρα (βέλη) μετά επανασύνδεσης και το μεγαλύτερο μέρος της χρώσης περιοριζόταν σε σφαιροειδή ενώ τα περισσότερα από τα κύτταρα που αναπτύχθηκαν από σφαιροειδή ήταν χωρίς χρώση.

Η

Συζήτηση

Στη βιολογία του όγκου πολλές προσπάθειες έχουν γίνει για να εξηγήσει τις εμβρύου-όπως χαρακτηριστικά μετασχηματισμένων καρκινικών κυττάρων. Η ικανότητα των CSC για την ανοικοδόμηση του όγκου από ένα και μόνο κύτταρο θα μπορούσε να εξηγήσει πολλές από τις διαφορές που διακρίνουν τα καρκινικά κύτταρα από διαφοροποιημένα σωματικά κύτταρα, όπως αθανασία, αδράνεια, εισβολή που οδηγεί σε μετάσταση, και την επανάληψη μετά τη θεραπεία. Πρίγκιπας και οι συνεργάτες του [9], έδειξε ότι ένα μικρό πληθυσμό CD44

+ HNSCC-κύτταρα έχουν χαρακτηριστικά CSC, η οποία θα μπορούσε να οδηγήσει σε νέα όγκων in vivo (≈5,000 κύτταρα εγχέονται). Mack και οι συνεργάτες αμφισβήτησαν τη χρήση CD44 ως ειδικό δείκτη CSC σε HNSCC αφού CD44 εκφράστηκε σε αφθονία στα περισσότερα κύτταρα όγκου εντός HNSCC (60% -100%) και ως εκ τούτου δεν θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για τη διάκριση της κανονικής από καλοήθη ή κακοήθη επιθήλια του κεφαλιού και του λαιμού [10]. ΑΙ_ϋΗ1 δείχθηκε πρόσφατα να είναι πιο κατάλληλος δείκτης για τον εντοπισμό υποθετικών CSC του HNSCC και άλλα επιθηλιακά καρκίνους [11], [12], [13], [14], [15]. Σε HNSCC, Chen et al έδειξε ότι 3000 ΑΙ_ϋΗ1

+ HNSCC κύτταρα από πέντε ασθενείς σε ξένο μόσχευμα ποντίκια οδήγησε σε όλες τις περιπτώσεις, στην παραγωγή των ορατών όγκων 6 εβδομάδες μετά την ένεση, ενώ το 10

4 ΑΙ_ϋΗ1

– κύτταρα απέτυχαν να παράγουν όγκους. [12], [39]. Περιγράφουμε μία μέθοδο για τον πολλαπλασιασμό και τον εμπλουτισμό του ΑΙ_ϋΗ1

+ κυτταρικές καλλιέργειες HNSCC κυτταρικές σειρές. Τα κυτταρικά-όπως χαρακτηριστικά βλαστικών αυτών των κυττάρων αναλύθηκαν με σύγκριση της έκφρασης του αντιγόνου επιφάνειας και την έκφραση του εμβρύου TF καθώς και τα λειτουργικά χαρακτηριστικά των γονικών μονοστοιβάδας κυτταρικές γραμμές. Η παρατήρηση ότι σφαιροειδή-καλλιέργειες δεν αποτελούνται από ένα ομοιογενές κυτταρικό πληθυσμό προκάλεσε περαιτέρω subanalyses που αποκάλυψε έναν πληθυσμό κυττάρου με έκφραση του ΕΜΤ-δείκτες. Αυτό μπορεί να σημαίνει ότι αυτά τα κύτταρα έχουν ένα ενεργοποιημένο ΕΜΤ-πρόγραμμα και καταδεικνύει μια πιθανώς στενή σχέση μεταξύ CSC και κυττάρων με ένα ενεργοποιημένο πρόγραμμα ΕΜΤ που μπορεί να προέρχεται από την CSC.

Τα σφαιροειδή είναι τρισδιάστατα (σφαιρικό) συστάδες καρκινικών κυττάρων που προέρχονται από ένα ή περισσότερα κυτταρικών κλώνων. Σε σύγκριση με το κύτταρο διπλασιασμό φορές μετριέται σε μονοστρωματική καλλιέργεια, ο ρυθμός και ο τρόπος της σφαιροειδές ανάπτυξης in vitro καλύτερη αγώνες που παρατηρούνται σε όγκους in vivo [40]. Anchorage ανεξάρτητη ανάπτυξη έχει δειχθεί ότι μια ιδιότητα κοινή χρήση από φυσιολογικά κύτταρα των ιστών που εμφανίζουν ιδιότητες βλαστοκυττάρων [41]. Επίσης CSC που προέρχονται από μελάνωμα [42], του καρκίνου του μαστού [43], και γλοιοσαρκώματος [19] ήταν σε θέση να πολλαπλασιάζονται αγκυροβόλιο ανεξάρτητα και εμφανίζει τον φαινότυπο των μη προσκολλημένων σφαιροειδή.

Όπως επεξηγείται στον καρκίνο του μαστού, για παράδειγμα, υποθετική CSC (CD44

+ /CD24

-) μπορεί να εμπλουτιστεί in-vitro με απομόνωση mammospheres από καλλιέργειες εναιωρήματος [43], [44]. Στη μελέτη μας, βρήκαμε τη συχνότητα των CD44

+ /CD24

– κυττάρων στις γραμμές HNSCC να είναι εξαιρετικά μεταβλητή (από 0,5% έως 97%). Επιπλέον, δεν θα μπορούσε να εμπλουτιστεί με σφαιροειδές καλλιέργεια. Σε αντίθεση, ΑΙ_ϋΗ1 θετικά κύτταρα βρέθηκαν να είναι εξαιρετικά εμπλουτισμένο σε σφαιροειδείς καλλιέργειες από τις πέντε HNSCC κυτταρικές γραμμές. Αν σπάρθηκαν σε πολύ χαμηλό densitiy, FACS ταξινομημένο ΑΙ_ϋΗ1

+ κύτταρα σχηματίζονται σημαντικά περισσότερες αποικίες στη συνέχεια το ALDH

– πληθυσμού, υποδεικνύοντας μία υψηλότερη πολλαπλασιαστική ικανότητα αυτού του υποπληθυσμού. Άλλοι έχουν δείξει, ότι ΑΙ_ϋΗ1

+ ή ΑΙ_ϋΗ1

+ /CD44

+ /CD24

– κυτταρικούς πληθυσμούς που απομονώθηκαν από HNSCC ασθενείς έχουν μεγαλύτερη πιθανότητα ογκογένεσης τότε ΑΙ_ϋΗ1

– κυττάρων, ακόμη και αν ήταν CD44

24

– αν ξενομεταμοσχευμένων σε ποντίκια [12]

Καρκίνος και φυσιολογικά βλαστικά κύτταρα (SC) μοιράζονται πολλαπλασιαστικές ιδιότητες της αυτο-ανανέωσης, ησυχίας και της έκφρασης των βασικών μεταγραφικών παραγόντων (TF. ). Chickarmane et al. [45] ρυθμίσετε έναν υπολογιστή-μοντέλο για να περιγράψει τους βασικούς συνδυασμούς παράγοντα μεταγραφής στην SC και ορίζεται υψηλά επίπεδα Oct3 /4, Sox2, και Nanog. Από την άλλη πλευρά, Ji et al. [46] σε σύγκριση το ρόλο του Oct3 /4 και Nanog σε μεταμορφωμένα (t-hPSCs), και φυσιολογικά ανθρώπινα πολυδύναμα βλαστικά κύτταρα (hPSCs). Σε αντίθεση με την κανονική SC, αυτο-ανανέωση και η επιβίωση των Τ-hPSCs βρέθηκε να είναι ανεξάρτητη από Oct3 /4 έκφρασης. Σε αντίθεση, η γενετική knockdown του Nanog προκάλεσε πλήρη απώλεια της αυτο-ανανέωσης ταυτόχρονα με απόπτωση σε Τ-hPSCs. Στη μελέτη μας, η έκφραση της Oct3 /4, Sox2, και Nanog ήταν up-ρυθμίζονται SDC στις κυτταρικές σειρές που προέρχονται από πέντε HNSCC. Αυτό σημαίνει ότι η SDC μπορεί να έχει τις ιδιότητες των βλαστικών κυττάρων.

Οι μελέτες που ασχολούνται με τη γονιδιακή έκφραση προφίλ χρησιμοποιώντας in vivo επεμβατικές κύτταρα ή κύτταρα που υφίστανται EMT in vitro, αποκάλυψε μια μετάβαση από μια πολλαπλασιαστική σε μια επεμβατική φαινότυπο. Σε συμφωνία προς αυτήν την παρατήρηση, ο δείκτης πολλαπλασιασμού των κυττάρων Ki-67 έχει δειχθεί να επισημαίνουν μόνο μια μικρή μειονότητα των κυττάρων στο μεταναστευτικό μέτωπο σε σύγκριση με την πιο διαφοροποιημένη κεντρικό τμήμα του όγκου, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα καρκινικά κύτταρα μη πολλαπλασιαζόμενα που έχουν διαφύγει η μάζα του όγκου θα μπορούσε να έχει μεταστατικό δυναμικό [47]. Στη μελέτη μας, βρήκαμε ότι SDC είχαν υψηλότερο ποσοστό των Ki-67 αρνητικά κύτταρα σε σύγκριση με τις αντίστοιχες καλλιέργειες μονοστιβάδας. Αυτό δείχνει ότι η SDC είναι πιο ήρεμα από κύτταρα που προέρχονται από μονοστιβάδας. Έχουμε, επίσης, διαπίστωσε ότι SDC έχουν αυξημένη ικανότητα εισβολής, γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτά τα κύτταρα μπορεί να έχουν υψηλότερη ικανότητα να μεταστάσεις.

μυοϊνοβλάστες που είναι ένα είδος μεσεγχυματικών κυττάρων που παίζουν καθοριστικό ρόλο στην εισβολή και μετάσταση όγκου και θεραπευτική ανταπόκριση. Μπορούν να παράγουν διάφορους παράγοντες που μπορούν να διεγείρουν τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και να διευκολυνθεί η διείσδυση τους [31]. Ωστόσο, η προέλευση αυτών των μυοϊνοβλαστών δεν είναι σαφής. EMT έχει αναφερθεί ότι παίζει σημαντικό ρόλο στην έναρξη CSC [29]. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι οι μυοϊνοβλάστη-σαν κύτταρα είναι ένας υποπληθυσμός SDC. Αυτά τα σφαιρίδια που προέρχεται αποκλειστικά από κλωνοποιημένα κύτταρα του όγκου. Ως εκ τούτου, μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι οι μυοϊνοβλάστες θα μπορούσε να προκύψει μόνο από τα επιθηλιακά καρκινικά κύτταρα αλλάζοντας το επιθηλιακό σε ένα φαινότυπο μεσεγχυματικά μέσω EMT. Το πιο σημαντικό, όπως διαπιστώσαμε, ότι πάνω από το 90% των SDC βάφονται θετικά για την α-SMA και βιμεντίνης, ενώ το ποσοστό των ΑΙ_ϋΗ1

+ κυττάρων κυμαίνονταν από 37% έως 46,4%. Μια σημαντική μείωση της έκφρασης Ε-καδερίνης μπορεί να αποδειχθεί σε SDC, υποδεικνύοντας μία μείωση της επαφής μεταξύ κυττάρων σε καλλιέργειες σφαιροειδές. Αυτές οι εκφράσεις δείκτη ήταν αναστρέψιμες υπό συνθήκες καλλιέργειας, όπου σφαιροειδή θα μπορούσαν να προσχωρήσουν και τα κύτταρα αναπτύχθηκαν ακτινωτά έξω για να σχηματίσουν μια μονοστιβάδα.