Αφηρημένο

γαστρικού καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων των τύπων καρδιακή και μη καρδιακή είναι η δεύτερη συχνότερη αιτία θανάτων από καρκίνο σχετίζονται με όλο τον κόσμο. Ένα υποσύνολο των μη καρδιακή γαστρικό καρκίνο τόπους γενετικής προδιάθεσης έχουν αντιμετωπιστεί μεταξύ των ασιατικών μέσω μελετών συσχέτισης γονιδιώματος επίπεδο (GWASs). Αυτή η μελέτη ήταν να αξιολογήσει τις επιπτώσεις των πολυμορφισμών απλού νουκλεοτιδίου (SNPs) μακράς διαγονιδιακές μη-κωδικοποίησης RNAs (lincRNAs) σε μη καρδιακή γαστρικό καρκίνο ευαισθησία στην κινεζική πληθυσμούς. Έχουμε επιλέξει καιρό διαγονιδιακές RNAs μη-κωδικοποίησης (lincRNAs) που βρίσκεται σε μη καρδιακή τόπους σχετίζονται με τον κίνδυνο γαστρικού καρκίνου και εντοπίστηκαν 10 SNPs βρίσκονται εντός lincRNA εξονικό περιοχές. Εξετάσαμε εάν οι γενετικών πολυμορφισμών στο lincRNAs εξώνια που σχετίζονται με μη καρδιακή γαστρικό κίνδυνο καρκίνου σε 438 μη-καρδιακή ασθενείς με καρκίνο του στομάχου και 727 άτομα ελέγχου στην κινεζική πληθυσμούς με τη χρήση λογιστικής παλινδρόμησης. Λειτουργική ενδιαφέρον εξετάστηκε περαιτέρω με βιοχημικές αναλύσεις. Βρήκαμε ότι

lincRNA-NR_024015

φορέα rs8506AA συσχετίστηκε σημαντικά με τον κίνδυνο της μη καρδιακή γαστρικό καρκίνο (προσαρμοσμένη αναλογία πιθανοτήτων [OR] = 1,56, 95% CI = 1,03 – 2,39, σε σύγκριση με το rs8506 AG ή GG . γονότυπο Περαιτέρω ανάλυση διαστρωμάτωσης έδειξε ότι η επίδραση κίνδυνος ήταν πιο έντονη σε υποομάδες των καπνιστών (

P

= 0,001) Βιοχημική ανάλυση έδειξε ότι η G σε μια αλλαγή βάσης στο rs8506G & gt?. Α διαταράσσει τη θέση δέσμευσης για has- . miR-526b, επηρεάζοντας έτσι τη μεταγραφική δραστηριότητα του

lincRNA-NR_024015

και επηρεάζουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων παρούσα μελέτη μας δημιουργήσει μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ της rs8506G & gt? ένα πολυμορφισμός στο

lincRNA-NR_024015

εξόνιο και ο κίνδυνος της μη καρδιακή γαστρικό καρκίνο

Παράθεση: Fan QH, Yu R, Huang WX, Cui XX, Luo BH, Zhang LY (2014) το έχει-miR-526b Δεσμευτική-Site rs8506G & gt? πολυμορφισμό. στο

lincRNA-NR_024015

εξόνιο προσδιορίζονται από GWASs προδιαθέτουν να μη Καρδία γαστρικός καρκίνος του κινδύνου PLoS ONE 9 (3):. e90008. doi: 10.1371 /journal.pone.0090008

Επιμέλεια: Xiaoping Miao, MOE Βασικά Εργαστήριο Περιβάλλοντος και Υγείας, τη Σχολή Δημόσιας Υγείας, Tongji Medical College, Huazhong Πανεπιστήμιο Επιστήμης και Τεχνολογίας, η Κίνα

Ελήφθη: 11 Δεκεμβρίου του 2013? Αποδεκτές: 25 Γενάρη 2014? Δημοσιεύθηκε: 4 του Μάρτη, 2014

Copyright: © 2014 Fan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το Project το Suzhou Ταμείο Κοινωνικής Ανάπτυξης (SS08047), Τμήμα Ιατρικής Key επαρχίας Jiangsu το 2011. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου.

Αντικρουόμενα συμφέροντα: Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος στομάχου (GC) είναι η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο σε όλο τον κόσμο μετά τον καρκίνο του πνεύμονα το 2010, αν και οι θάνατοι θνησιμότητας. έχουν μειωθεί ελαφρά από 774.000 το 1990 σε περίπου 755.000 το 2010 [1], [2]. Επιδημιολογικές μελέτες έδειξαν ότι περιβαλλοντικό παράγοντα, συμπεριλαμβανομένης της διατροφής, το κάπνισμα καπνού, αλκοολούχων καταναλώσεων και, ιδιαίτερα, η μόλυνση με Helicobacter pylori σχετίζονται με υψηλότερο κίνδυνο για GC [3], [4]. Παρά την ύπαρξη αυτών αναγνωρισμένους παράγοντες κινδύνου, οι ερευνητές ακόμα πεπεισμένος ότι οι γενετικοί παράγοντες, ιδιαίτερα πολυμορφισμών απλού νουκλεοτιδίου (SNPs), είναι πιθανό να διαδραματίσει ουσιαστικό ρόλο στο κίνδυνο ενός ατόμου να αναπτύξει καρκίνο του στομάχου, καθώς μόνο ένα κλάσμα των εκτιθέμενων ατόμων να αναπτύξουν καρκίνο του στομάχου [5] .

Μέχρι σήμερα, με την πρόοδο της αλληλουχίας μεταγραφικό επόμενης γενιάς (RNA-Seq), υπήρξε μια βαθιά αλλαγή στην μας κατανόηση του ολόκληρο το σύνολο των μεταγραφικών εκτροπές σε μια νόσο, συμπεριλαμβανομένων των νέων μεταγραφές και μη-κωδικοποίησης RNAs (ncRNAs) δεν μετριέται με συμβατικές αναλύσεις [6] – [9]. Από όλες τις σήμερα χαρακτηρίζεται κατηγορίες μη κωδικοποίησης RNAs μόρια, αυτοί έχουν κληθεί καιρό παρεμβαίνουν ncRNAs (lincRNAs) μεγαλύτερο από 200 νουκλεοτίδια (nt), τα οποία στερούνται ένα ανοιχτό πλαίσιο ανάγνωσης και δεν επικαλύπτονται γονιδίων που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη [7], [10]. Ομάδες lincRNAs έχουν χαρακτηριστεί καλά σε κάποιο βαθμό και αποδείχθηκε ότι συσχετίζεται με σημαντικά κυτταρικές διεργασίες όπως αποτύπωση, το Χ χρωμόσωμα αδρανοποίηση, συντήρηση pluripotency, και μεταγραφική ρύθμιση [10] – [15]. Επιπλέον, οι αναδυόμενες ενδείξεις απορυθμισμένης έκφρασης lincRNA σε πολλές καρκίνους έχουν προκύψει lincRNA ως μια νέα πτυχή της βιολογίας, με στοιχεία που δείχνουν ότι ένα σημαντικό ρόλο για τη συμμετοχή των lincRNA στην καρκινογένεση στον άνθρωπο και τη μετάσταση [16], [17]. Πράγματι, ένα καλά-περιγράφονται παράδειγμα,

Hotair

έχουν μελετηθεί οι εισφορές στο σταδιακή εξέλιξη της ογκογένεσης [11], [18], τονίζοντας το ρόλο της lncRNAs στη βιολογία του καρκίνου. Επιπλέον, η μεγάλη μη κωδικεύουσα RNA

MALAT1

(μετάσταση που σχετίζεται πνεύμονα αδενοκαρκίνωμα μεταγραφής 1), είναι συχνή απορρύθμιση και ως προγνωστική δείκτη για μια ποικιλία ανθρώπινων καρκίνων του παχέος εντέρου, του μαστού και του προστάτη [19] – [ ,,,0],22]. Παρ ‘όλα αυτά, οι μηχανισμοί που διέπουν τη συγκεκριμένη λειτουργία της lincRNAs στην ανάπτυξη καρκίνου δεν έχει πλήρως οριοθετηθεί.

Κατά την τελευταία δεκαετία, πολλαπλές αμερόληπτες μελέτες συσχέτισης γονιδιώματος-ευρεία (GWAS) έχουν διευρύνει την κατανόησή μας για γενετικές παραλλαγές που σχετίζονται με διαφορετικούς τύποι ασθενειών και καρκίνων με υψηλές τεχνολογίες απόδοσης [23]? Ωστόσο, τουλάχιστον το ένα τρίτο των ταυτοποιημένων παραλλαγές είναι εντός μη-κωδικοποίησης διαστήματα [24]. Πρόσφατα, δύο GWAS αποκάλυψε ότι αρκετές θέσεις κίνδυνο ευαισθησίας που σχετίζονται με μη καρδιακή γαστρικό καρκίνο (NCGC) κινδύνου σε ένα κινεζικό πληθυσμό. ανάλυση Βιοπληροφορική έχει αποκαλύψει πολλές lincRNAs κοντά σε αυτές τις θέσεις. Επιπλέον, αρκετές σχετικές πολυμορφισμούς μονών νουκλεοτιδίων (SNPs) που βρίσκονται στις εξονικό περιοχές της lincRNAs που μπορεί να συνδέσει με NCGC εντοπίστηκαν? Ωστόσο, η συσχέτιση μεταξύ των γενετικών παραλλαγών στα εξώνια lincRNAs και την ευαισθησία του καρκίνου σπάνια έχει αναφερθεί.

Στην παρούσα μελέτη, υποθέσαμε ότι SNPs στην εξονικό περιοχή της lincRNAs μπορεί να αλλάξει τα επίπεδα έκφρασης και ως εκ τούτου μπορεί να συμβάλει στην NCGC. Για να ελέγξει την υπόθεση αυτή, πραγματοποιήσαμε μια μελέτη ασθενών-μαρτύρων στο νοσοκομείο για τη διερεύνηση των συσχετίσεων μεταξύ αυτών των SNPs και ευαισθησία σε NCGC σε ένα κινεζικό πληθυσμό.

Υλικά και Μέθοδοι

Θέματα Μελέτη

Όλα τα θέματα στην τρέχουσα μελέτη ήταν εθνοτικά ομοιογενείς Κινέζων Χαν, συμπεριλαμβανομένων 438 ασθενών NCGC και 727 υγιείς μάρτυρες. Οι ασθενείς που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση στα συμβεβλημένα νοσοκομεία του Πανεπιστημίου Soochow (Suzhou) ήταν διαδοχικά προσληφθεί 2003-2009, με ποσοστό ανταπόκρισης 94%. Οι ασθενείς ήταν από την πόλη Suzhou και τις γύρω περιοχές της, και δεν υπήρχαν περιορισμοί στην ηλικία, το φύλο, και ιστολογία. Λεπτομέρειες σχετικά με τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Ο όγκος, κόμβος, μετάσταση (TNM) ταξινόμηση και όγκου στάσης αξιολογήθηκαν σύμφωνα με την 2002 αμερικανική μεικτής επιτροπής σχετικά με το σύστημα του καρκίνου Σταδιοποίηση. έλεγχοι πληθυσμού ήταν χωρίς καρκίνο ανθρώπους που ζουν στην περιοχή Suzhou? επιλέχθηκαν από διατροφική έρευνα που πραγματοποιήθηκε κατά την ίδια περίοδο, όπως συλλέχθηκαν οι υποθέσεις. Τα δείγματα ελέγχου ήταν στη διάθεσή μας από προηγούμενες μελέτες που επιλέχθηκαν τυχαία από μια βάση δεδομένων που αποτελείται από 3500 άτομα βασίζεται σε μια φυσική εξέταση [25] – [27]. Η μέτρηση για ορό H.pylori ανοσοσφαιρίνη G σε ασθενείς NCGC και ελέγχων καθορίστηκε με ανοσορροφητική δοκιμασία συνδεδεμένη με ένζυμο (ELISA). Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την επιτροπή ιατρικής δεοντολογίας του Πανεπιστημίου Soochow. Όλοι οι συμμετέχοντες ήταν γενετικά άσχετη εθνοτικών Κινέζων Χαν και κανένας δεν είχε μετάγγιση αίματος τους τελευταίους 6 μήνες. Έχοντας δώσει γραπτή συγκατάθεση, κάθε συμμετέχων είχε προγραμματιστεί για μια συνέντευξη με ένα δομημένο ερωτηματολόγιο για τη συλλογή επιλεγμένες πληροφορίες, και να δωρίσει 5 ml περιφερικού αίματος.

Η

Επιλογή SNP

Όλα δημοσιευθεί βιβλιογραφία ερευνά τη σύνδεση μεταξύ γενετικής προδιάθεσης και του κινδύνου NCGC ήταν επιλέξιμες. Ψάξαμε για τις μελέτες έως Αύγουστος του 2013 με τη χρήση του PubMed βάση δεδομένων και Web of Science. Σχετικούς όρους αναζήτησης ήταν «Η μελέτη του γονιδιώματος-ευρεία ένωση», «GWAS», «NCGC», «γαστρικό καρκίνο», «τον καρκίνο του στομάχου», και «Ασίας». Έχουμε, επίσης, έψαξε το χέρι τους καταλόγους αναφοράς σε επιλεγμένα άρθρα. Αποκλείσαμε πρώτον μερικά άρθρα με σάρωση τους τίτλους και περιλήψεις των μελετών που δεν γράφτηκαν στα αγγλικά. Στη συνέχεια, μετά την ανάγνωση του πλήρους κειμένου των υπολοίπων άρθρων, εντοπίσαμε ένα τελικό σύνολο των μελετών. Όλες οι επιλεγμένες μελέτες πληρούν τα ακόλουθα κριτήρια: (1) το αποτέλεσμα της έρευνας δεν βασίζονται σε GWAS σε σχέση με NCGC στον άνθρωπο? (2) τα άρθρα δημοσιεύθηκαν στα αγγλικά? (3) επιλέχθηκαν οι πιο πρόσφατες μελέτες μεταξύ των επικαλυπτόμενων δεδομένων και διπλές δεδομένων? (4) GWAS διεξήχθη με τη χρήση της τεχνολογίας chip. Τα κύρια κριτήρια αποκλεισμού ήταν (1) σχόλια, τα σεμινάρια, τα γράμματα, και editorials? (2) εις διπλούν δεδομένων? (3) δεν είναι ένα σχέδιο περίπτωση ελέγχου? και (4) επικαλυπτόμενα δεδομένα ή δεδομένα που αποτελούν αντικείμενο ντάμπινγκ από τις τελευταίες εκθέσεις. Στη συνέχεια, πλυμένα το τόποι ευαισθησία που προσδιορίζονται από GWAS για NCGC σε επιλεγμένα είδη, 4 lincRNAs που δεν συμπίπτουν με τις αναγνωρισμένες γονίδια μέσα σε 1-MB σειρά από αυτούς τους τόπους, σε οποιαδήποτε κατεύθυνση (συνολικά έκταση 2 MB), έγιναν τελικά εντοπίστηκαν από τη βάση δεδομένων του ανθρώπου lincRNAs [28]. Επιπλέον, το λογισμικό Haploview 4.2 χρησιμοποιήθηκε για τη βιοπληροφορική ανάλυση του μπλοκ απλότυπος με βάση τα πληθυσμιακά δεδομένα Κινέζοι Χαν Πεκίνο (CHB) σε HapMap (HapMap Data Release 27 Φάση ΙΙ + ΙΙΙ, Φεβρουάριο του 2009, στο συγκρότημα NCBI B36, dbSNP B126). Αυτά τα SNPs με μικρές συχνότητες αλληλόμορφο μεγαλύτερη από 5% στην κινεζική πληθυσμό εκχυλίζεται. Υπήρχαν τρία τετράγωνα απλότυπος στον κινεζικού πληθυσμού (Σχήμα 1Α). Τα SNPs απλότυπος-tagging επιλέχθηκαν με το λογισμικό Haploview 4.2 του προγράμματος Tagger? διαπιστώθηκε ότι η rs11752896, rs11752942, rs4714336 και rs4711631 καλύπτονται τον απλότυπο στο πεδίο 1 σε συχνότητα 100% (rs11752896 και rs11752942: D ‘= 1.0, r

2 = 1,0? rs11752896 και rs4714336: D’ = 1,0, r

2 = 1,0? rs11752896 και rs4711631: D ‘= 1.0, r

2 = 1,0). Επιπλέον, rs2467950, rs2450764 και rs9312, rs8506 κάλυψε την απλότυπο στο πεδίο 1 σε 100%, αντίστοιχα (rs2467950 και rs2450764: D ‘= 1.0, r

2 = 1,0? Rs9312 και rs8506: D’ = 1.0, r

2 = 1,0). SNPs rs2304285 και rs2477757 είναι έξω από τα τετράγωνα. Ως εκ τούτου, η SNPs rs11752896, rs2467950, rs8506, rs2477757 και rs2304285 επιλέχθηκαν ως πέντε πιθανά λειτουργικά SNPs στο εξονικές των επιλεγμένων lincRNAs που θα αναλυθεί για τις ενώσεις τους με κίνδυνο γαστρικού καρκίνου.

(Α) ανισορροπία σύνδεσης (LD) χάρτη για επιλεγμένες SNPs του

lincRNA-NR_024015

εξόνιο. Έδειξε ότι rs11752896, rs11752942, rs4714336 και rs4711631 είναι LD με D ‘= 1? rs2467950 και rs2450764 είναι LD με D ‘= 1? rs9312 και rs8506 είναι LD με D ‘= 1. (β) τα επίπεδα της μεταγραφής πυρηνικής ελέγχου (

U6

), κυτταροπλασματική μεταγραφή ελέγχου (

GAPDH

mRNA), και

lincRNA -NR_024015

αξιολογήθηκαν με RT-qPCR πυρηνικών και κυτταροπλασματικά κλάσματα. Τα δεδομένα είναι μέσες ± τυπικό σφάλμα του μέσου όρου. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως ποσοστό του

U6

,

GAPDH

και

lincRNA-NR_024015 ελήφθησαν

επίπεδα και συνολικά επίπεδα για κάθε μία να είναι 100%. (C-D)

In-silico

πρόβλεψη των δομών αναδίπλωσης προκαλείται από rs8506G & gt? Α στο

lincRNA-NR_024015

. Το οικόπεδο στο βουνό είναι ένα xy-γράφημα που αντιπροσωπεύει μια δευτερεύουσα δομή συμπεριλαμβανομένης της δομής MFE, τη θερμοδυναμική σύνολο των δομών RNA (PF), και το κέντρο βάρους δομή σε οικόπεδο ύψος σε σχέση με τη θέση. «MFE» αντιπροσωπεύει ελάχιστη δομή ελεύθερη ενέργεια? «Pf» υποδεικνύει τη λειτουργία διαμέρισμα? «Κέντρο βάρους» αντιπροσωπεύει το κέντρο βάρους δομή.

Η

Γονοτυπικές Ανάλυση

Γονιδιώματος DNA εξήχθη από λεμφοκύτταρα περιφερικού αίματος των συμμετεχόντων στη μελέτη. Αλληλόμορφων ειδικών φασματομετρία μάζας MALDI-TOF χρησιμοποιήθηκε για γονότυπο τους δείκτες που χρησιμοποιούνται στην ένωση αναλύσεις, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27], [29]. Συνολικά 60 δείγματα επιλέχθηκαν τυχαία για άμεση αλληλούχιση για να επιβεβαιώσει τα γονοτυπική αποτελέσματα από την ανάλυση φασματομετρίας μάζας, και τα αποτελέσματα ήταν σε συμφωνία 100%. Περίπου το 10% των δειγμάτων ήταν επίσης τυχαία επιλεγμένα για ένα τυφλό επανάληψη του προσδιορισμού του γονότυπου χωρίς προηγούμενη γνώση της προηγούμενο αποτέλεσμα προσδιορισμού του γονότυπου ή την κατάσταση του να είναι μια υπόθεση και τον έλεγχο, και τα αποτελέσματα ήταν σε συμφωνία 100%.

Cell Culture

Η 293Τ ή HGC-27 κύτταρα αγοράστηκαν από την Τράπεζα κυττάρων του Type Culture Collection από την κινεζική Ακαδημία Επιστημών, Σαγκάη Ινστιτούτο Κυτταρικής Βιολογίας, και διαβιβάστηκαν για λιγότερα από 6 μήνες. Τα κύτταρα 293Τ ή HGC-27 διατηρήθηκαν σε DMEM με υψηλή γλυκόζη (Gibco-BRL, Gaithersburg, MD, USA) ή RPMI 1640 συμπληρωμένο με 10% θερμο-απενεργοποιημένο βόειο εμβρυϊκό ορό (Gibco-BRL, Gaithersburg, MD, USA) και 50 μg /ml στρεπτομυκίνη (Gibco-BRL, Gaithersburg, MD, USA) σε 37 ° C υπό την παρουσία 5% CO

2.

Υποκυτταρική κλασματοποίηση

HGC- 27 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε υγρό επωαστήρα για 2 ημέρες. Για υποκυτταρική κλασματοποίηση πειράματα, έως και 2 × 10

χρησιμοποιήθηκαν 6 κύτταρα. Κυτοσολικά και πυρηνικά εκχυλίσματα από κύτταρα καρκίνου του μαστού συλλέχθηκαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ Πυρηνική /κυτοσόλιο κλασματοποίησης (Biovision, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

In-silico

Πρόβλεψη Folding Κατασκευών Induced από Rs8506G & gt ? Α στο

LincRNA-NR_024015

Η

Καθώς ορισμένες δομές είναι πιο πιθανό να παίζουν σημαντικό ρόλο στις βιολογικές λειτουργίες? έτσι χρησιμοποιήσαμε RNAfold και SNPfold αλγόριθμους για να προβλέψει την πιθανή επίδραση της rs8506G & gt? Μια από τις τοπικές δομές αναδίπλωση του

lincRNA-NR_024015

με την ανάλυση των 61-bp περιοχές που πλευρίζουν τον πολυμορφισμό

Η κατασκευή του. δημοσιογράφος πλασμίδια

Δύο πλασμίδια αναφοράς που περιέχει 160 bp

lincRNA-NR_024015

κομμάτι εξόνιο περιοχή που πλευρίζει την rs8506G ή rs8506A αλληλόμορφο συντέθηκαν από το Genewiz Εταιρείας (Suzhou, Κίνα) και στη συνέχεια κλωνοποιήθηκε στον psiCHECK- 2 βασικό φορέα (Promega, Madison, WI) (Εικόνα 1Β). Η προκύπτουσα κατασκευή με το

lincRNA-NR_024015

rs8506 SNP (psiCHECK-2-lincRNA-rs8506G και psiCHECK-2-lincRNA- rs8506A) επιβεβαιώθηκε με αλληλούχιση.

παροδικές επιμολύνσεις και λουσιφεράσης

ανάλυση Βιοπληροφορική αποκάλυψε ότι η rs8506G & gt? Ένα πολυμορφισμός εντοπίσετε στο χώρο πρόσδεσης των microRNA έχει-miR-526b (https://snpinfo.niehs.nih.gov/). Με αυτόν τον τρόπο, οι μιμείται και αναστολείς της έχει-miR-526b (GenePharma Co, Σαγκάη) εφαρμόστηκαν για την ανάλυση της επίδρασης της έχει-miR-526b για psiCHECK-2-lincRNA-rs8506 γονίδια ρεπόρτερ

in vitro

. Τα κύτταρα 293Τ ή HGC-27 σπάρθηκαν σε πλάκες 24 φρεατίων (1 χ 10

5 κύτταρα ανά φρεάτιο) και καλλιεργήθηκαν σε 60-70% συρροή πριν την επιμόλυνση? κύτταρα στη συνέχεια επιμολύνθηκαν με τα πλασμίδια ανταποκριτές που περιγράφονται παραπάνω χρησιμοποιώντας Λιποφεκταμίνη 2000 (Invitrogen, CA, USA) όπως περιγράφεται προηγουμένως [25]. Σε κάθε φρεάτιο, συν-διαμόλυνση διεξήχθη χρησιμοποιώντας 800 ng της κατασκευασμένης DNA πλασμιδίου και 0, 1, ή 40 pmol microRNA έχει-miR-526b μιμείται (Shanghai GenePharma Co., Ltd.), και με ή χωρίς 40 pmol έχει-miR αναστολέας -526b, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η δραστικότητα λουσιφεράσης μετρήθηκε με το Dual-Λουσιφεράσης σύστημα προσδιορισμού ανταποκριτή (Promega, Madison, WI, USA) χρησιμοποιώντας ένα TD-20 /το 20 φωτόμετρο (Turner Biosystems, Sunnyvale, CA, USA), και τα αποτελέσματα ομαλοποιήθηκαν έναντι της δραστικότητας του η

Renilla

γονίδιο της λουσιφεράσης. Κάθε ομάδα περιελάμβανε 6 επαναλήψεις, και ανεξάρτητα πειράματα εις τριπλούν έγιναν.

Κατασκευή Φορέα Έκφρασης

Για να μελετήσει περαιτέρω το ρόλο του

lincRNA-NR_024015

στην εξέλιξη του καρκίνου, η πλήρους μήκους cDNA του

lincRNA-NR_024015

φιλοξενούν rs8506G και αλληλόμορφα rs8506A συντέθηκαν με τη Genewiz Company (Suzhou, Κίνα) και μετά κλωνοποιήθηκαν στους φορείς pcDNA3.1. Η προκύπτουσα κατασκευή με το

lincRNA-NR_024015

rs8506 SNP (ροϋΝΑ-lincRNA-rs8506G και ροϋΝΑ-lincRNA-rs8506A) επιβεβαιώθηκε με αλληλούχιση.

Απομόνωση RNA και ποσοτική RT-PCR ανάλυση

Τριάντα δύο δείγματα ιστών NCGC ελήφθησαν από βιοψίες των μεμονωμένων ασθενών και αποθηκεύεται στους -80 ° C πριν από την ανάλυση. Ολικό RNA που λαμβάνονται από αυτές καρκινικούς ιστούς με αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Molecular Research Center, Inc). cDNA παρήχθη από mRNA με τη χρήση του τυχαίου εκκινητή και Superscript II (Invitrogen) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Σε πραγματικό χρόνο αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης ποσοτική (RT-PCR) διεξήχθη για να προσδιοριστεί ποσοτικά η σχετική γονιδιακή έκφραση των

lincRNA-NR_024015

, χρησιμοποιώντας ένα σύστημα ΑΒΙ Prism 7500 ακολουθία ανίχνευσης (Applied Biosystems) με βάση την SYBR πράσινο μέθοδο, και

GAPDH

χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικό γονίδιο αναφοράς σε κάθε αντίδραση.

Κυττάρου Ορατότητα Δοκιμασία

στο 96 φρεατίων, επίπεδου πυθμένα πλάκες (BD Biosciences, Bedford , ΜΑ), 100 μL HGC-27 κύτταρα συνεπιμολύνθηκαν με pcDNA-lincRNA-rs8506SNP και έχει-miR-526b ή ελέγχου μοιράστηκαν σε κάθε πηγάδι. Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε με Καταμέτρηση κυττάρων Kit-8 (CCK-8) (Dojindo Laboratory, Kumamoto, Japan) με βάση τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Στατιστική Ανάλυση

Οι διαφορές στις κατανομές των επιλεγμένων δημογραφικές μεταβλητές μεταξύ των περιπτώσεων και ελέγχων, καθώς και οι αλληλόμορφο και γονότυπο συχνότητες αξιολογήθηκαν με αμφίπλευρη δοκιμές chi-τετράγωνο. Άνευ όρων μοντέλα λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκαν για να υπολογιστούν οι ενώσεις των γονότυπων των SNPs με τον κίνδυνο του καρκίνου του στομάχου με αναλογίες πιθανοτήτων (OR) και τα διαστήματα τους εμπιστοσύνης 95% (ΠΙ), που ακολουθείται από ανάλυση διαστρωμάτωση με βάση την ηλικία, το φύλο, το κάπνισμα και την κατάσταση του πόσιμου. Logistic μοντελοποίηση παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκε στη δοκιμή τάσης, καθώς και για την αξιολόγηση του δυναμικού πολλαπλασιαστική και πρόσθετο γονίδιο-γονίδιο και τις αλληλεπιδράσεις παράγοντα γονίδιο-περιβάλλοντος. Επιπλέον, τα δεδομένα περαιτέρω στρωματοποίηση από το υπο-ομάδες των μεταβλητών κλινική-παθολογική. Στατιστική ισχύς υπολογίστηκε με την εφαρμογή του λογισμικού PS (https://biostat.mc.vanderbilt.edu/twiki/bin/view/Main/PowerSampleSize, προσπελαστεί 14 Δεκέμβρη του 2010). Η μονόδρομη δοκιμή ANOVA χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η επίδραση διαφόρων SNPs στο

lincRNA-NR_024015

έκφραση μεταγράφου. Όλες οι δοκιμασίες ήταν δύο όψεων με τη χρήση του λογισμικού SAS (έκδοση 9.1? SAS Institute, Cary, NC, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής). Ένα

P

& lt?. 0.05 χρησιμοποιήθηκε ως κριτήριο για την στατιστική σημαντικότητα

Αποτελέσματα

γονότυποι και κινδύνου μη καρδιακή Καρκίνος γαστρική

Στο παρούσα μελέτη, πέντε SNPs ήταν ο γονότυπος μεταξύ ασθενών και μαρτύρων. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, μία σημαντική συσχέτιση με NCGC κίνδυνος παρατηρήθηκε για rs8506G & gt? A. Συγκεκριμένα, τα αποτελέσματα του προσδιορισμού του γονότυπου έδειξε ότι σε σύγκριση με το rs8506GG ή AG γονότυπο,

lincRNA-NR_024015

φορέα rs8506AA συσχετίστηκε σημαντικά με τον κίνδυνο της μη καρδιακή γαστρικό καρκίνο (προσαρμοσμένη αναλογία πιθανοτήτων [OR] = 1,56, 95% CI = 1,03 – 2,39). Επιπλέον, υπάρχουν σημαντικές διαφορές εξετάστηκαν στα άλλα τέσσερα SNPs (

P

& gt? 0,05). Έτσι, θα μπορούσαμε να συμπεράνουμε ότι η γενετική παραλλαγή rs8506G & gt? Ένα πολυμορφισμός στο

lincRNA-NR_024015

παίζει ένα σημαντικό ρόλο στη διαμεσολάβηση του κινδύνου NCGC

Η

διαστρωμάτωση Ανάλυση Rs8506G & gt?. Α γονότυποι και κίνδυνος NCGC

Πραγματοποιήσαμε περαιτέρω ανάλυση διαστρωμάτωση των ενώσεων μεταξύ παραλλαγή γονότυπους και τον κίνδυνο των NCGC από υποομάδες κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά NCGC σε αυτή τη μελέτη. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ των γονοτύπων παραλλαγής και του κινδύνου NCGC παρατηρήθηκε σε άτομα με το κάπνισμα (προσαρμογή OR = 2.48, 95% CI = 1,63 – 3,78, δοκιμή ομοιογένειας

P

= 0,001) , γεγονός που υποδηλώνει ότι το κάπνισμα ρυθμίζει τη σχέση μεταξύ του

lincRNA-NR_024015

rs8506G & gt? Μια παραλλαγή γονότυπους και τον κίνδυνο NCGC. Καμία σημαντική συσχέτιση βρέθηκε και σε άλλες υποομάδες.

Η

Κινητά Χαρακτηρισμός

LincRNA-NR_024015

Η

Τα επίπεδα της μεταγραφής πυρηνικής ελέγχου (

U6

), κυτταροπλασματική μεταγραφή ελέγχου (

GAPDH

mRNA), και

lincRNA-NR_024015

αξιολογήθηκαν με RT-qPCR πυρηνικών και κυτταροπλασματικά κλάσματα HGC-27 κύτταρα, αντίστοιχα. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το

GAPDH

mRNA ανιχνεύθηκε αποκλειστικά στο κυτταροπλασματικό κλάσμα, ενώ πυρήνας-διατήρησε

U6

βρέθηκε βασικά στο πυρηνικό κλάσμα. Και

lincRNA-NR_024015

έκφραση ήταν κυρίως κυτταροπλασματική (Εικόνα 1Β)

In-silico

Ανάλυση της επίδρασης της Rs8506G & gt?. Α στο

LincRNA-NR_024015

Πτυσσόμενα

Χρησιμοποιώντας RNAfold και SNPfold αλγορίθμων στο

σε-silico

ανάλυση, είχαμε προβλέψει τοπικές δομικές αλλαγές του

lincRNA-NR_024015

που προκαλείται από την rs8506G & gt? Ένα πολυμορφισμός που βρίσκονται εντός η εξονικό περιοχή του

lincRNA-NR_024015

. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1 C και D, τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η G σε μια αλλαγή βάσης του rs8506G & gt? Επηρεάζει άμεσα την αναδίπλωση του

lincRNA-NR_024015

, η οποία μπορεί να επηρεάσει την θέση πρόσδεσης για το microRNA. Αυτό μπορεί στη συνέχεια να επηρεάσει το

lincRNA-NR_024015

γονιδιακής έκφρασης

Rs8506G & gt? Α. Γονότυπους επηρεάσουν την

LincRNA-NR_024015

Έκφραση διαταράσσοντας τη δέσμευση του χει-miR-526b

in vitro

η

Δύο κατασκευάσματα γονιδίου αναφοράς λουσιφεράσης που περιέχονται rs8506G ή Α αλληλόμορφο προσδιορίστηκαν με παροδικά συν-επιμόλυνση με μιμούνται και αναστολέα έχει-miR-526b που στηρίζεται πρόσδεση σε rs8506G & gt? ένα πολυμορφικό χώρο με ανάλυση βιοπληροφορικής. Το αποτέλεσμα της δράσης της λουσιφεράσης έδειξαν ότι τα κύτταρα HEG-27 συν-επιμολύνθηκαν παροδικώς έχει-miR-526b μιμείται και να κατασκευάσει περιέχει το αλληλόμορφο rs8506G εμφάνισαν σημαντικά μειωμένη δραστηριότητα της λουσιφεράσης, σε ένα εξαρτώμενο από την συγκέντρωση τρόπο, και οι έχει-miR-526b αναστολείς σημαντικά αναστραφεί και αυξητικά τις δραστηριότητές τους. Ωστόσο, καμία εμφανής μεταβολή παρατηρήθηκε για γονίδιο αναφοράς με A αλληλόμορφο που έλαβαν θεραπεία με έχει-miR-526b μιμείται ή αναστολέων (

P

& gt? 0,05) (Σχήμα 2Α). Τα ίδια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν επίσης όταν αυτά τα πειράματα επαναλήφθηκαν χρησιμοποιώντας κύτταρα 293Τ (Σχήμα 2Β).

Αντιπροσωπευτικά γραφική παράσταση της λουσιφεράσης δραστικότητας παραλλαγής αλληλόμορφου επί λουσιφεράσης γονίδια αναφοράς που φέρει το

lincRNA-NR_024015

εξονικές περιοχή που εκτείνεται 160 bp που πλευρίζουν την rs8506G & gt? A τμήματα πολυμορφισμού στο HEG-27 (Α) και 293Τ κύτταρα (Β). Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως ποσοστό σε σχέση με την δραστικότητα λουσιφεράσης (δραστικότητα λουσιφεράσης Renilla μετρήθηκε και κανονικοποιήθηκε ως προς λουσιφεράση πυγολαμπίδας). Σχετική δραστηριότητα λουσιφεράσης της psiCHECK-2-

lincRNA-NR_024015

-G-αλληλόμορφο και psiCHECK-2-

lincRNA-NR_024015

-A-αλληλόμορφο κατασκευάσματα συνδιαμολύνονται με έχει-miR-526b μιμούνται και απαγορευτής. Έξι επαναλήψεις για κάθε ομάδα και το πείραμα επαναλήφθηκε τουλάχιστον τρεις φορές. Τα δεδομένα είναι μέσες ± SEM. Αστερίσκος υποδεικνύει μια σημαντική μεταβολή (

P

& lt? 0.001). (C)

LincRNA-NR_024015

επίπεδα έκφρασης σε τριάντα δύο ασθενείς μη καρδιακή γαστρικό καρκίνο για διαφορετικές rs8506G & gt? A γονότυπους (15 rs8506GG, 11 rs8506AG και 6 rs8506AA)? δεδομένα είναι μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα του μέσου όρου. (D) HEG-37 κύτταρα συνεπιμολύνθηκαν pcDNA-lincRNA-rs8506G ή ροϋΝΑ-lincRNA-rs8506A με έχει-miR-526b. Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα συλλέχθηκαν, το RNA εκχυλίζεται και σε πραγματικό χρόνο PCR εκτελέστηκε. Τα δεδομένα είναι μέσες ± τυπικό σφάλμα του μέσου όρου. «Αστερίσκος» αντιπροσωπεύει

P

& lt? 0,05. ρυθμός πολλαπλασιασμού (Ε) Κύτταρα ‘ήταν σημαντικά αναστέλλεται όταν τα κύτταρα cotranfected

lincRNA-NR_024015

haboring rs8506G αλληλόμορφο και έχει-miR-526b. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων πραγματοποιήθηκε με τη δοκιμασία κυτταρικής βιωσιμότητας και η επίδραση έγινε φανερό από την ημέρα 2. Έξι επαναλήψεις για κάθε ομάδα και το πείραμα επαναλήφθηκε τουλάχιστον τρεις φορές. Τα δεδομένα είναι μέσες ± τυπικό σφάλμα του μέσου όρου. «Αστερίσκος» αντιπροσωπεύει

P

& lt?. 0.05

Η

Σύλλογος Rs8506G & gt? Ένα γενότυποι με

LincRNA-NR_024015

Έκφραση

Συλλέξαμε 32 ιστούς όγκων από τα ανεπεξέργαστα ασθενείς NCGC με διαφορετικούς γονότυπους και εκτελείται PCR πραγματικού χρόνου για την αξιολόγηση των επιπτώσεων της

lincRNA-NR_024015

rs8506G & gt? Ένα στο

lincRNA-NR_024015

έκφρασης. Το αποτέλεσμα έδειξε ότι οι ασθενείς με τους γονότυπους rs8506AG και rs8506AA εξέφρασαν σημαντικά υψηλότερα

lincRNA-NR_024015

επίπεδα mRNA (μέση τιμή ± SEM) σε σύγκριση με φορείς του γονότυπου rs8506GG (AG: 0,029 ± 0,005? ΑΑ: 0.040 ± 0.005? GG: 0,019 ± 0,004?

P

= 0,023), όπως φαίνεται στα Σχήματα 2C

Η Επίδραση του miRNA που εξαρτώνται από τον κανονισμό του

LincRNA-NR_024015

Έκφραση επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού.

Εμείς διερευνηθεί περαιτέρω αν η

lincRNA-NR_024015

rs8506G & gt? Ένα γονότυπους έχουν επιπτώσεις στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων στο

vitro

. Όπως φάνηκε στην Εικόνα 2D,

lincRNA-NR_024015

έκφραση μειώθηκε μετά από 24 ώρες επιμόλυνση σε κύτταρα συν-επιμολύνθηκαν παροδικώς με ροϋΝΑ-lincRNA-rs8506G και έχει-miR-526b σε σύγκριση με εκείνες συν-επιμολυσμένα με ροϋΝΑ-lincRNA- rs8506A και έχει-miR-526b (

P

& lt? 0.001). Κύτταρα με μειωμένη έκφραση του

lincRNA-NR_024015

είχε ένα αδύναμο ρυθμό ανάπτυξης των κυττάρων σε σύγκριση με τα κύτταρα επιμολυσμένα με ροϋΝΑ-lincRNA-rs8506A και έχει-miR-526b από την ημέρα 2 (

P

= 0,004 ) (Σχήμα 2Ε)

Dicussion

στην παρούσα μελέτη ασθενών-μαρτύρων νοσοκομείο με βάση που περιέχει συνολικά 438 ασθενείς και 727 υγιείς μάρτυρες, η ομάδα μας βρήκε το rs8506G & gt?. Α συνδέεται με κίνδυνοι NCGC. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι τα άτομα που μεταφέρουν τους γονότυπους rs8506AG και rs8506AA είχαν σημαντική αύξηση του κινδύνου για NCGC σύγκριση με το γονότυπο GG (

P

& lt? 0,05). Επιπλέον, φάνηκε ότι ένα υψηλό αποτέλεσμα κίνδυνος αυτού του πολυμορφισμού ήταν εντονότερη σε άτομα καπνίσματος. Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη για να αξιολογήσει πλήρως τη σχέση μεταξύ των παραλλαγών στο εξονικό της lincRNA και τον κίνδυνο NCGC.

Ως άλλη κατηγορία των ρυθμιστικών μη-κωδικοποίησης RNAs, lincRNAs, έχουν πρόσφατα μετακόμισε στο προσκήνιο της μη κωδικεύουσας μελέτη του RNA. Αυτά τα mRNA μόρια παρόμοια, στερούνται ένα σημαντικό ανοικτό πλαίσιο ανάγνωσης, είναι γενικά καλυμμένα, συγκολλημένα και πολυαδενυλιωμένα έχουν εμπλακεί σε ένα ευρύ φάσμα κυτταρικών διαδικασιών όπως είναι η πυρηνική αρχιτεκτονική, τη ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης, ανοσολογική επαγρύπνηση, ή πλειοδυναμία εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων. Μια χούφτα μελέτες έχουν αποδείξει lincRNAs αναδειχθεί ως μια νέα πτυχή της βιολογίας σε μία ποικιλία νοσηρών καταστάσεων, και οι αλλαγές στα επίπεδα έκφρασης του lincRNAs μπορεί να συμβάλει στην βιολογία του καρκίνου σε μεταγραφικό, μετα-μεταγραφικό και επιγενετικές επίπεδα [18], [30] – [32]. Μια εξέχουσα lincRNA,

ANRIL

, είχε λειτουργικά εμπλέκονται στην ανάπτυξη του καρκίνου, συνήθως καταστολή επιγενετικής γονιδιακής έκφρασης μέσω δέσμευσης και την πρόσληψη συγκροτήματα χρωματίνης τροποποίηση [33], [34]. Ένα άλλο διάσημο παράδειγμα είναι η lincRNA,

GAS5

? Οι γενετικές ανωμαλίες σε αυτό το τόπο lincRNA έχουν βρεθεί σε πολλούς τύπους όγκων, συμπεριλαμβανομένου του μελανώματος, του μαστού, του προστάτη και του καρκίνου [35] – [37]. Αυτές οι γραμμές των αποδεικτικών στοιχείων υποστήριξε τη σημασία της lincRNAs στην κυτταρική βιολογία και ογκογένεση. Πρόσφατα, δύο GWASs ανέφεραν ένα υποσύνολο των NCGC loci ευαισθησίας (5p13.1, 3q13.31, 8q24.3, 6p21.1 και 7p15.3) που συνδέονται με την ανάπτυξη του NCGC. ανάλυση Βιοπληροφορική αποκάλυψε αρκετές lincRNAs κλειστή για αυτούς τους τόπους. Επιπλέον, εντοπίστηκαν αρκετές σχετικές πολυμορφισμούς μονών νουκλεοτιδίων (SNPs) που βρίσκονται στις εξονικό περιοχές της lincRNAs που μπορεί να συνδέσει με NCGC. Όπως όλοι γνωστό, κατά την τελευταία δεκαετία, με τη διαθεσιμότητα των αλληλούχιση RNA μεγάλης κλίμακας, αυτό γίνεται τώρα αξιοσημείωτα σαφές ότι χιλιάδες γενετικές παραλλαγές που σχετίζονται με ασθένειες κατοικεί εκτός των γονιδίων ή ακόμα και σε έχουν ήδη ληφθεί με μη-κωδικοποίησης μεταγραφές του έργου του γονιδιώματος στα θηλαστικά [24]. Πρόσφατες αναδυόμενες αποδείξεις έχουν δείξει η συσχέτιση μεταξύ των SNPs κατοικούσε στο lincRNAs και ανθρώπινων καρκίνων. Για παράδειγμα, με βάση τα δεδομένα 1000 Γονιδιώματα, Guangfu Jin και colleages έχουν βρει ότι οι περιοχές του lncRNA είχαν πυκνότητα SNPs που είναι παρόμοια με τις περιοχές κωδικοποίησης πρωτεΐνης και περαιτέρω σημειώνονται τα SNPs φαινότυπο σχετιζόμενες με GWAS στην περιοχή lncRNA μπορεί να συμβάλει στην προστάτη κινδύνου [ ,,,0],38]. Μια πρόσφατη μελέτη ανέφερε επίσης ότι ένας γενετικός πολυμορφισμός σε

lincRNA-uc003opf.1

γονιδίου σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο ανάπτυξης οισοφαγικού καρκινώματος των πλακωδών κυττάρων στα κινέζικα πληθυσμούς [39]. Συλλογικά, παρούσα μελέτη μας είναι συνεπής με τα προηγούμενα ευρήματα έδειξαν ότι το

lincRNA-NR_024015

ήταν μέτρια πιο άφθονη στο κυτταρόπλασμα σε σύγκριση με τον πυρήνα του κλασματοποιημένου γαστρικού καρκινικών κυττάρων, γεγονός που υποδηλώνει ότι η λειτουργία αυτού του lincRNAs εξασκείται στο κυτταρόπλασμα . Τα αποτελέσματά μας παρείχε μια ισχυρή στοιχεία που να υποστηρίζουν μια υπόθεση για την κυτταροπλασματική ρύθμιση, με την οποία το

lincRNA-NR_024015

rs8506G & gt?. Ένας SNP μπορεί να επηρεάσει την έκφραση αυτής της lincRNA τροποποιώντας τη θέση δέσμευσης για την έχει-miR-526b

στην παρούσα μελέτη, τα αποτελέσματα μας συσχέτισης μεταξύ ενός γενετικού πολυμορφισμού στις εξονικό περιοχές της lincRNA και ευαισθησία σε NCGC ήταν αρχικά λήφθηκε στο κινεζικό πληθυσμό. Τα σχετικά μεγάλα μεγέθη δείγματος που χρησιμοποιήθηκε μείωσε το μέγεθος των ΙΑΠ που μπορεί να ανιχνευθεί στατιστικά. Επιπλέον, έχουμε πετύχει μια δύναμη μελέτη της πάνω από το 90% (δοκιμή διπλής όψης, α = 0.05) στην ανίχνευση ενός ή του 1,28 για τις rs8506AG + ΑΑ γονότυπους (που συμβαίνουν σε συχνότητα 42,5% μεταξύ των ελέγχων), σε σύγκριση με ο γονότυπος rs8506GG. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η ένωση είναι βιολογικά αληθοφανής και είναι συνεπής με τα ευρήματα των λειτουργικών μελετών μας.

Εν κατακλείδι, η παρούσα μελέτη παρείχε την πρώτη απόδειξη ότι γενετικών πολυμορφισμών στα εξονικό περιοχές της lincRNAs διαδραματίζουν ζωτικό ρόλο στη διαμεσολάβηση επιμέρους ευαισθησία σε NCGC. Τα αποτελέσματά μας υποστηρίζουν περαιτέρω την υπόθεση ότι οι γενετικές παραλλαγές σε lincRNA εξονικό περιοχές μπορεί να επηρεάσει ρύθμιση microRNA-μεσολάβηση και σχετίζονται με τον κίνδυνο της GC. Τα ευρήματά μας εγγυάται την επικύρωση σε μεγαλύτερες, κατά προτίμηση με βάση τον πληθυσμό, μελέτες ασθενών-μαρτύρων, καθώς και από καλά σχεδιασμένες μελέτες μηχανισμού.