Αφηρημένο

Στόχοι

Αυτή η μελέτη είχε σκοπό να παρακολουθήσει τις αλλαγές στην αγγειογένεση του όγκου μετά θερμαίνεται ΠΡΙΟϋΟΕ (60 ° C) έγχυση μέσω της ηπατικής αρτηρίας σε ένα μοντέλο κουνελιού του καρκίνου του VX2 ήπατος.

Υλικά και Μέθοδοι

Είκοσι κουνέλια με VX2 ηπατικών όγκων χωρίστηκαν τυχαία σε 2 ομάδες (10 κουνέλια σε κάθε ομάδα). Υπό αναισθησία, ένας καθετήρας δια-ηπατική αρτηριακή έγχυση εκτελέστηκε, και ΠΡΙΟϋΟΕ (37 ° C? Ομάδα ελέγχου) ή θερμαίνονται ΠΡΙΟϋΟΕ (60 ° C? Ομάδα που υπέστη αγωγή) εγχύθηκε εντός των ηπατικών αρτηριών των ζώων. Στη συνέχεια, οι αλλαγές στην αγγειογένεση των όγκων αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας τις ακόλουθες δείκτες και μεθόδους. 1. επίπεδα υποδοχέα του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGFR) και αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) έκφραση στον όγκο αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας westem αποτύπωση και σε πραγματικό χρόνο αλύσου ποσοτικής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR). 2. πολλαπλασιαζόμενο κύτταρο πυρηνικό αντιγόνο (PCNA) έκφραση στον όγκο εκτιμήθηκε μέσω ανοσοϊστοχημική χρώση. 3. Οι μορφολογικές αλλαγές στα αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα όγκου παρατηρήθηκαν χρησιμοποιώντας μικροσκοπία μετάδοσης ηλεκτρονίου (ΤΕΜ).

Αποτελέσματα

επίπεδα VEGFR και VEGF mRNA και έκφρασης πρωτεΐνης μειώθηκαν στην ομάδα που λάμβανε σε σύγκριση με το ομάδα ελέγχου. PCNA πρωτεΐνη έδειξαν μειωμένα επίπεδα έκφρασης στην ομάδα θεραπείας σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. ΤΕΜ έδειξαν ότι η ενδοθηλιακών κυττάρων ενδοπλασματικό δίκτυο επεκτάθηκε, η chondriosome ήταν πρησμένο, και οι μικρολάχνες ενδοθηλιακών κυττάρων μειώθηκαν μετά θερμαίνονται έγχυση ΠΡΙΟϋΟΕ.

Συμπεράσματα

Η αγγειογένεση του όγκου των κουνελιών με καρκίνο του VX2 ανεστάλη μετά την αρτηριακή θερμαινόμενη έγχυση ΠΡΙΟϋΟΕ σε σύγκριση με την έγχυση ΠΡΙΟϋΟΕ

Παράθεση:. Cao W, Xu Χ, Zhang J, Duan Υ (2013) Tumor αγγειογένεση μετά θερμαινόμενη ΠΡΙΟϋΟΕ έγχυση μέσω της αρτηρίας Ηπατική σε ένα κουνέλι Μοντέλο VX2 καρκίνου του ήπατος . PLoS ONE 8 (4): e61583. doi: 10.1371 /journal.pone.0061583

Επιμέλεια: Gayle Ε Woloschak, Northwestern University Feinberg School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 6 Δεκέμβρη του 2012? Αποδεκτές: 11, Μαρ, 2013? Δημοσιεύθηκε: 24 του Απριλίου του 2013

Copyright: © 2013 Cao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε εν μέρει από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 81.170.400? https://www.nsfc.gov.cn) και επαρχία Shaanxi Επιστήμης και Τεχνολογίας Ανάπτυξης προβολής (No.2011K13-01-16? http: //www.sninfo.gov.cn). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Διαδερμική χημειοεμβολισμός (TACE) έχει γίνει αποδεκτό ως μια από τις πιο αποτελεσματικές μορφές ανακουφιστική θεραπεία για τους ασθενείς στη μέση και όψιμα στάδια της ηπατοκυτταρικού καρκινώματος (HCC), καθώς και για εκείνους που δεν είναι καλοί υποψήφιοι για χειρουργική επέμβαση στις ασιατικές χώρες, συμπεριλαμβανομένης της Κίνας [1], [2], [3]. Ωστόσο, η μακροπρόθεσμη επιβίωση μετά από μια διαδικασία TACE δεν είναι ικανοποιητική? το ποσοστό πενταετούς επιβίωσης κυμαίνεται σήμερα από 9% σε 32% [4], [5]. ΤΑΟΕ μπορεί να μειώσει το μέγεθος του όγκου [6], [7]. Ωστόσο, άλλες μελέτες έχουν βρει ΤΑΟΕ είναι ικανοποιητική επειδή αγγειογένεση όγκου μπορεί να αυξηθεί μετά TACE, και μόνο ένα μικρό ποσοστό των HCCs υποβλήθηκαν σε πλήρη νέκρωση [8]. Ως εκ τούτου, την αναστολή της αγγειογένεσης του όγκου μετά τη θεραπεία ΤΑΟΕ μπορεί να είναι μια πολλά υποσχόμενη στρατηγική για τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας.

Πρόσφατα, μερικές μελέτες έχουν χρησιμοποιήσει θερμοθεραπεία για να καταστείλει την ανάπτυξη του όγκου στο ήπαρ [9] και έχουν επαληθεύσει ότι η θεραπεία με ΠΡΙΟϋΟΕ στους 60 ° C παρατείνει την επιβίωση των κουνελιών με καρκίνο VX2 με αναστολή της ανάπτυξης του όγκου. Επιπλέον, αυτή η θεραπεία επηρεάζει τα επίπεδα AST στον ορό παρόμοια με ΠΡΙΟϋΟΕ στους 37 ° C [10]. In vivo μελέτες έχουν δείξει επίσης ότι θερμαίνεται έγχυση αλατούχου διαλύματος μέσω της ηπατικής αρτηρίας μπορεί να μεταβάλει τον όγκο αγγειακή διαπερατότητα επηρεάζοντας τα επίπεδα έκφρασης του VEGF ή VEGFR [11], [12], επειδή αυτές οι δύο πρωτεΐνες είναι δύο σημαντικοί παράγοντες που σχετίζονται με την αγγειογένεση των όγκων [13 ], [14]. Ως εκ τούτου, ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να παρατηρήσει τις αλλαγές στην αγγειογένεση των όγκων και να αναλύσει τις βαθύτερες αιτίες μετά trans-ηπατικές, αρτηριακή, θερμάνθηκε (60 ° C) ΠΡΙΟϋΟΕ εμβολισμό μέσω της ηπατικής αρτηρίας σε ένα μοντέλο κουνελιού του καρκίνου του VX2 ήπατος.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Όλα τα ζωικά πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με το πρωτόκολλο που εγκρίθηκε από την ιδρυματική φροντίδα των ζώων μας και να χρησιμοποιήσετε επιτροπή (2.010.038) και σε συμμόρφωση με τις οδηγίες του ιδρύματος.

Μοντέλα ζώων

Είκοσι αρσενικά λευκά κουνέλια Νέας Ζηλανδίας (βάρους 3,0-3,5 kg, κατά μέσο όρο 3,2 ± 0,2 kg) επιλέχθηκαν τυχαία από το πειραματικό κέντρο ζώων του πανεπιστημίου μας. κύτταρα καρκινώματος VX2 διατηρήθηκαν ως μια γραμμή όγκου στο εργαστήριό μας.

Τα κουνέλια αναισθητοποιήθηκαν με ενδοφλέβιο πεντοβαρβιτάλη του νατρίου (25 mg /kg). Στη συνέχεια, οι τρίχες πάνω από την κοιλιακή περιοχή των κουνελιών απομακρύνθηκαν με 8% θειούχο νάτριο, και η περιοχή καθαρίστηκε με φυσιολογικό ορό. Ένα εναιώρημα ιστού VX2 όγκου (περίπου 1.5-2 × 10

6 κύτταρα) εγχύθηκε μέσω μιας βελόνας 18-gauge στο αριστερό λοβό του ήπατος διαδερμικά με καθοδήγηση υπερήχων. Το τραύμα διατηρούνται αποστειρωμένα, και το κουνέλι ζωτικά σημεία (ιδιαίτερα ο ρυθμός της αναπνοής) παρακολουθούνταν στενά κατά τη διάρκεια της εμφύτευσης. Στη συνέχεια, αντιβιοτικά (γενταμυκίνη 2,5 mg /kg) εγχύθηκαν ενδομυϊκά μετά την εμφύτευση. Τα ζώα παρατηρήθηκαν με υπερηχογραφία (Acuson Corp, USA) μέχρις ότου οι όγκοι έφθασαν 2 εκατοστά σε διάμετρο και στη συνέχεια χρησιμοποιήθηκαν για πειραματισμό. Το υπερηχογράφημα έγινε από τον ίδιο χειριστή με καθετήρα 7v3c σε συχνότητα 7,0 MHz.

Πειραματική Ομαδοποίηση

Είκοσι φέρουν όγκο κουνέλια χωρίστηκαν τυχαία σε 2 ομάδες (n = 10 ανά ομάδα) ? κάθε ομάδα δόθηκε ένα από τα δύο σκευάσματα.

Η ομάδα ελέγχου έλαβε ένα παρασκεύασμα ΠΡΙΟϋΟΕ (Aulnay Sous-Bios, Γαλλία) σε φυσιολογική θερμοκρασία (37 ° C).

Η ομάδα θεραπείας που έλαβε ένα παρασκεύασμα που λαμβάνεται με θέρμανση ΠΡΙΟϋΟΕ στους 60 ° C με σταθερή θερμοκρασία επώασης.

αρτηριακού καθετηριασμού

μια τομή έγινε στα κουνέλια υπό αναισθησία για να εκθέσουν δεξιά μηριαία αρτηρία τους. Στη συνέχεια, ένα μικρο-καθετήρας (2.7 /2.9 Fr επανασχηματοποιήσιμο Τύπος, Terumo, Japan) εισήχθη μέσα στην μηριαία αρτηρία και τοποθετείται εντός της ηπατικής αρτηρίας υπό ακτινοσκόπηση.

Στη συνέχεια, υπό ακτινοσκόπηση, η παρασκευή αιμάτωσης (1 mL /σώμα) για κάθε ομάδα σταδιακά χέρι εγχέεται στο ηπατικής αρτηρίας, με μεγάλη προσοχή για να κρατήσει το άκρο του καθετήρα στην ηπατική αρτηρία και να αποφευχθεί η εκροή του παρασκευάσματος. Μετά ενδοαρτηριακή ένεση, ο καθετήρας αφαιρέθηκε, η μηριαία αρτηρία συνδέθηκε, και η γενεσιουργός πληγή έκλεισε. ζωτικά σημεία του κουνελιού, ειδικά ρυθμό της αναπνοής του, ήταν παρακολουθείται στενά κατά τη διάρκεια της αγγειοοίδημα διαδικασία. DSA εικόνες της χρώσης όγκου VX2 ήπατος αποκτήθηκαν πριν και μετά την έγχυση.

Ζώων Θυσία

Σε 24 ώρες μετά την έγχυση προετοιμασία, τα ζώα θανατώθηκαν με υπερβολική δόση υδρίτη χλωράλης.

Ανοσοϊστοχημεία

δείγματα όγκων ιστού από κάθε κουνέλι σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη. Στη συνέχεια, 3- έως 5-μm πάχους φέτες κόπηκαν και υπέστησαν επεξεργασία για την ανοσοϊστοχημική χρώση.

Για την ανίχνευση της έκφρασης και την τοποθεσία του PCNA πρωτεΐνης σε ιστούς όγκων, τα τμήματα του δείγματος επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με ένα ποντικού αντι-ΡΟΝΑ (Abcam, Cambridge, UK) μονοκλωνικό αντίσωμα και στη συνέχεια με ένα δευτερεύον αντίσωμα αντι-ποντικού (Dako) για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, μετά την οποία οι αντιδράσεις πρόσδεσης οπτικοποιήθηκαν με 3-30-διαμινοβενζιδίνη τετραϋδροχλωρική (DAB) υπόστρωμα . Οι πυρήνες ελαφρά με αιματοξυλίνη. Η ανοσοϊστοχημική χρώση αξιολογήθηκε με 2 παθολόγους με τυφλό τρόπο. Το ολόκληρο τμήμα του κάθε slide εξετάστηκε κάτω από μικροσκόπιο φωτός. Τα επίπεδα της πρωτεΐνης PCNA βαθμολογήθηκαν σε τέσσερις ομάδες: 0, χωρίς χρώση? 1+, κυτταροπλασματική χρώση σε λιγότερο από το 10% των κυττάρων? 2+, κυτταροπλασματική χρώση σε 10-50% των κυττάρων? και 3+, κυτταροπλασματική χρώση σε περισσότερο από το 50% των κυττάρων

Real Time ποσοτικής πολυμεράσης

Αλυσιδωτή Αντίδραση

Ο όγκος δείγματα συλλέγονται και αποθηκεύονται σε RNAwait (Applygen, Beijin, Κίνα) σε. – 70 ° C μετά από τα κουνέλια θυσιάστηκαν. Ολικό RNA απομονώθηκε από τα δείγματα με αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA), και cDNA συνετέθη από 1 μα ολικού RNA με την First-Strand cDNA Synthesis Kit (Toyobo, Osaka, Japan). Οι ολιγονουκλεοτιδικοί εκκινητές για αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) σχεδιάστηκαν ως ακολούθως: VEGF, 5′-GCAGAAGAAGGAGACAATAAACC-3 ‘και 5′-GCACGCAGGAAGGCTTGAATA-3′? VEGFR 5’-CCAGGGAGAAGCAGAGCCAC-3 ‘και 5′-TGCCAATACCAGCGGATGTG-3′? και β-ακτίνη, 5’-CGAGATCGTGCGGGACAT-3 ‘και 5′-CAGGAAGGAGGGCTGGAAC-3’. Οι αντιδράσεις PCR πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν χρησιμοποιώντας SYBR Green Real-time PCR κύριο μείγμα (Toyobo). Τα σχετικά επίπεδα έκφρασης του VEGF mRNA προσδιορίσθηκαν ποσοτικά με τη χρήση του 2

-ΔΔCt μέθοδο [15].

Western Blotting

Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε λύση σε παγωμένο ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (2 πιΜ EDTA , 10 mM EGTA, 0,4% NaF, 20 mM Tris-HCl, 1% ΝΡ-40, 1% Triton Χ-100, αναστολείς πρωτεάσης, ρΗ 7.5) χρησιμοποιώντας ένα γυάλινο ομογενοποιητή. Οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας τον προσδιορισμό πρωτεΐνης δικιγχονινικού οξέος (BCA) (Pierce, Rockford, IL). Οι πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση επί πηκτώματος δωδεκυλθειικού νατρίου πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE) και μεταφέρθηκαν σε Hybond ECL μεμβράνες νιτροκυτταρίνης (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ). αναλύσεις κηλίδος Western πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση αντι-VEGFR αντίσωμα (Abcam, Cambridge, UK) και ένα αντι-νΕΟΡ αντίσωμα (Santa Cruz, CA, USA), και ένα αντι-β-ακτίνης αντίσωμα χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Στη συνέχεια, τα δείγματα επωάστηκαν με ένα είδος ταιριαστό υπεροξειδάση αρμορακίας (HRP) δευτερογενές αντίσωμα. Οι κηλίδες αναπτύχθηκαν με διάλυμα υποστρώματος χημειοφωταύγειας (Pierce, Rockford, IL) και εκτέθηκαν σε φιλμ ακτίνων Χ. Οι IDVs υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα ηλεκτρονικό σύστημα ανάλυσης εικόνας (Fluor Chen 2.0) και ομαλοποιήθηκε ως προς την έκφραση της β-ακτίνης.

Αφού ελήφθησαν Ηλεκτρονική Μικροσκοπία (ΤΕΜ) οι ιστοί του όγκου , επελέγησαν και χωρίστηκαν σε 1 mm

3 τεμάχια και σταθεροποιήθηκαν με 2,5% γλουταραλδεΰδη-4% παραφορμαλδεΰδη για αρκετές ημέρες στους 4 ° C κλάσματα αργού μικροαγγείων απομονώνεται από τον ιστό του όγκου. Στη συνέχεια, με τη χρήση τυποποιημένων διαδικασιών, ημι-λεπτή και εξαιρετικά λεπτές τομές παρασκευάστηκαν και χρωματίστηκαν με οξικό ουρανύλιο και κιτρικό μόλυβδο, και οι αλλαγές στα αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα όγκου παρατηρήθηκαν χρησιμοποιώντας ΤΕΜ (JEM-1200ΕΧ, Jeol, Tokyo, Japan).

Στατιστικές αναλύσεις

Όλα τα αποτελέσματα σημειώνονται ως μέσος όρος ± SD για κάθε ομάδα. t-test του Student διεξήχθη για να συγκρίνει τις δύο ομάδες, και U-test Mann-Whitney χρησιμοποιήθηκε για να συγκρίνουν τα επίπεδα της πρωτεΐνης PCNA μεταξύ των ομάδων. Μία τιμή Ρ μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκε σημαντική. Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS 16.0 για Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

Αποτελέσματα

DSA Εικόνα

Μετά τον εμβολισμό, το ήπαρ DSA εικόνες τα κουνέλια στην ΠΡΙΟϋΟΕ (60 ° C) ομάδα έδειξε περιγεγραμμένο αδιαφάνεια στην περιοχή του όγκου, ένα σημάδι της πλήρους απόφραξης του αγγειακού συστήματος του όγκου, και τα εγγύς φυσιολογικά αγγεία των κουνελιών παραμένουν ευρεσιτεχνίας (Εικ. 1).

Οι όγκοι έδειξαν αγγείωση στο ήπαρ, όπως προσδιορίζεται με DSA απεικόνισης (A, μαύρο βέλος). Μετά ΠΡΙΟϋΟΕ (60 ° C) ένεση, οι όγκοι είναι πλήρως ή σε μεγάλο βαθμό de-vascularized και να δείξει σε DSA ως ελάττωμα ΠΡΙΟϋΟΕ πλήρωσης (Β, μαύρο βέλος).

Η

Ανοσοϊστοχημική Ευρήματα

ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις αποκάλυψαν ότι η έκφραση PCNA πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε κυρίως σε βιώσιμα κύτταρα VX2 όγκου (Εικ. 2). Βρήκαμε ότι τα επίπεδα έκφρασης PCNA στην ομάδα αγωγής ήταν χαμηλότερες σε σχέση με την ομάδα ελέγχου (Πίνακας 1)

όπως ανιχνεύεται μέσω ανοσοϊστοχημείας, έκφραση πρωτεΐνης PCNA ανιχνεύθηκε κυρίως σε βιώσιμα κύτταρα VX2 όγκου (καφέ?. Α, μάρτυρας 400 ×?.. Β, αντιμετωπίζεται 400 ×)

η

πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR και Western Blot Ευρήματα

Όπως εντοπίστηκε με πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR (Σχήμα 3) , τα επίπεδα VEGF και VEGFR mRNA στην ομάδα που έλαβε ήταν σημαντικά χαμηλότερα από ό, τι στην ομάδα ελέγχου. Οι αναλύσεις στυπώματος Western έδειξε ότι τα επίπεδα έκφρασης του VEGFR και της πρωτεΐνης VEGF στην ομάδα που έλαβε ήταν επίσης σημαντικά χαμηλότερη από ότι στην ομάδα ελέγχου (Εικ. 3).

Οι σχετικές αλλαγές στην VEGFR ή πρωτεΐνη VEGF και τα επίπεδα mRNA σε ιστό όγκου ανιχνεύθηκαν μετά τη θεραπεία σε κάθε ομάδα (η = 10). Α και Β επίπεδα έκφρασης VEGFR και VEGF mRNA αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR, όπως περιγράφεται στο τμήμα Υλικά και Μέθοδοι. Γ και Δ VEGFR και τα επίπεδα της πρωτεΐνης VEGF ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση Western blot (πάνω πίνακας). β-ακτίνη ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. επίπεδα VEGFR και η έκφραση του VEGF έχουν ποσοτικοποιηθεί μέσω πυκνομετρία και απεικονίζονται ως πολλαπλάσια μεταβολή (κάτω πίνακας). Οι τιμές παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD 3 ανεξάρτητων πειραμάτων (*

P

& lt?. 0.05

vs ομάδα ελέγχου

).

Η

Ευρήματα TEM

αποτελέσματα ΤΕΜ αποκάλυψαν ότι το θερμαινόμενο ΠΡΙΟϋΟΕ διάχυσης που προκαλείται από τον αγγειακό ενδοθηλιακό κύτταρο ενδοπλασμικού δικτύου για την επέκταση και την chondriosome να διογκώνονται, και οι μικρολάχνες ενδοθηλιακών κυττάρων μειώθηκαν (Εικ. 4).

Παρακινημένοι από θερμαινόμενο ( 60 ° C) ΠΡΙΟϋΟΕ αιμάτωσης, τα αποτελέσματα ΤΕΜ αποκάλυψαν ότι η ενδοθηλιακή κύτταρο όγκου μικρολαχνών μειώθηκε (Α, 5,000 ×), το αγγειακό ενδοθηλιακό κύτταρο ενδοπλασματικό δίκτυο επεκταθεί, και η chondriosome διογκώθηκε (Β, 10000 ×).

η

Συζήτηση

ΤΑΟΕ για όγκο de-αγγείωση αναπτύχθηκε στη δεκαετία του 1970 [16]. Επί του παρόντος, ΤΑΟΕ είναι το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο πρωτοβάθμια επεξεργασία για ανεγχείρητο ΕΑΣ και είναι επίσης το πιο ευρέως χρησιμοποιείται για τη θεραπεία ασθενών στη λίστα αναμονής για μεταμόσχευση ήπατος. TACE καθυστερεί σημαντικά την εξέλιξη του όγκου [17], αλλά λίγες μελέτες έχουν αναφέρει μια αύξηση στα επίπεδα VEGF στον ορό μετά TACE [18]. Τα υψηλά επίπεδα του VEGF 1-2 ημέρες μετά ΤΑΟΕ σε ασθενείς HCC συνδέονται με μακρινή μετάσταση και δυσμενείς εκβάσεις [19].

ΠΡΙΟϋΟΕ έχει χρησιμοποιηθεί ως φορέας αντικαρκινικών παραγόντων σε στοχευμένες χημειοθεραπεία για το ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, και ΠΡΙΟϋΟΕ δεν χρησιμοποιείται μόνο για να γαλακτωματοποιήσει φάρμακα για ΤΑΟΕ, αλλά χρησιμοποιούνται επίσης ως ένας παράγοντας για εμβολισμός trans-ηπατικής αρτηριακής εμβολής και για όγκων de-αγγειοποίησης [17]. Επειδή η έκφραση της πρωτεΐνης VEGF στους όγκους μπορεί να ανταποκριθούν σε θερμότητα [11] και τα βιώσιμα καρκινικά αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα είναι ευαίσθητα στη θερμότητα τραυματισμό [20], και Ανάλυση φασματογράφου μάζας του φαρμάκου έδειξαν ότι η σισπλατίνη δεν επηρεάζεται από τη θερμότητα [21], και δοξορουβικίνη και μιτομυκίνη-C επίσης δεν αποικοδομείται σε θερμοκρασίες 60 βαθμών C [21], θερμάνθηκε ΠΡΙΟϋΟΕ ως νέο εμβολικών παράγοντα μέσω χορήγησης ηπατικής αρτηρίας μπορεί να διανείμει θερμότητα και γαλακτωματοποίηση συμβατικά φάρμακα TACE (δοξορουβικίνη, μιτομυκίνη-C, σισπλατίνη) προς το σύνολο του όγκου και μπορεί να επηρεάσει τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης VEGF στον όγκο ή την αγγείωση του όγκου.

Πρόληψη του όγκου αγγειογένεση Μετά θερμαινόμενη ΠΡΙΟϋΟΕ Injection

Μετά από έντονες ένεση ΠΡΙΟϋΟΕ, TEM αποκάλυψε ότι η ενδοθηλιακών κυττάρων του όγκου ενδοπλασματικό δίκτυο επεκτάθηκε, η chondriosome ήταν πρησμένο, και οι μικρολάχνες ενδοθηλιακών κυττάρων μειώθηκαν, η οποία είναι σημάδια βλάβης των ενδοθηλιακών κυττάρων. Αυτά τα σημάδια, αν και έμμεση, υποστηρίζουν την επίδραση της θερμότητας στα ενδοθηλιακά κύτταρα σε όγκους VX2? η ενδοαρτηριακή ΠΡΙΟϋΟΕ (60 ° C) ενέσεις φάνηκε να οδηγεί σε καταστροφή του όγκου τριχοειδή κλίνη.

Στην πραγματικότητα, αν και η θερμότητα είναι τοξικό για αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα όγκου, η ακριβής επίδραση της θερμότητας επί των κυττάρων ποικίλλει ανάλογα με την θερμότητα έκταση και τη διάρκεια. Σοβαρή ή παρατεταμένη θερμότητα μπορεί να μεταβάλλει ενδοκυττάριων πρωτεϊνών (όπως μετουσίωση του κολλαγόνου και λιπιδική διπλοστοιβάδα απόψυξη) και επάγουν τον κυτταρικό θάνατο? αν η ζέστη είναι ήπια ή μικρή σε διάρκεια, μπορεί να προκαλέσει μια σειρά από προσαρμοστικές γενετικές μεταβολές στα κύτταρα [22].

Θερμαινόμενη ΠΡΙΟϋΟΕ αιμάτωση ενδέχεται να μην είναι επαρκής για να προκαλέσει όγκους του αγγειακού ενδοθηλίου κυτταρικό θάνατο, αλλά μπορεί να προκαλέσει μια σειρά της προσαρμοστικής γενετικές ή ενδοκυτταρικές πρωτεΐνες αλλαγές, όπως η αλλαγή της έκφρασης VEGFR σε αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα όγκου. Επειδή η αλλαγή της έκφρασης VEGFR είναι στενά συνδεδεμένη με τις αλλαγές της μορφολογίας των ενδοθηλιακών κυττάρων [23], παρατηρήσαμε τις μορφολογικές αλλαγές σε αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα όγκου με ΤΕΜ μετά θερμαίνεται έγχυση ΠΡΙΟϋΟΕ. Παρατηρήσαμε τη μείωση του VEGF και VEGFR mRNA και τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης προέκυψε από τις απαντήσεις του όγκου και ενδοθηλιακών κυττάρων στο θερμαινόμενο διαδικασία ΠΡΙΟϋΟΕ διάχυσης, αντίστοιχα. Η μειωμένη VEGF και τα επίπεδα της πρωτεΐνης VEGFR μπορεί να οφείλεται στην αναστολή της αγγειογένεσης των όγκων.

πρόληψη της ανάπτυξης του όγκου μετά Θερμαινόμενη ΠΡΙΟϋΟΕ αιμάτωσης

Οι θερμοκρασίες πάνω από 42,5 ° C είναι αποτελεσματική στην καταστολή της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων [24], αλλά αν η θερμοκρασία αυξάνεται πάνω από 45 ° C, βλάβη στα φυσιολογικά ηπατικά κύτταρα γίνεται μη αναστρέψιμη [24]. Με την κατανόηση της μη-ομογενή κατανομή των αιμοφόρων αγγείων, η ψύξη του όγκου της ροής του αίματος και τις διαφορές του μεγέθους του όγκου, καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι η θερμοκρασία του θερμαινόμενου ΠΡΙΟϋΟΕ στο εσωτερικό των όγκων πρέπει να είναι τουλάχιστον 43 ° C. Σε αυτή τη μελέτη, αρχικά μπορούμε σταδιακά χέρι εγχέεται υπό ακτινοσκόπηση για να αποφευχθεί η αντιρροή κατά τη διάρκεια της αιμάτωσης, δεύτερον χρησιμοποιήσαμε την διαδερμική μαθηματική καταγραφέα θερμοκρασίας για την παρακολούθηση της θερμοκρασίας διάχυσης, έτσι ώστε η θερμοκρασία του θερμαινόμενου ΠΡΙΟϋΟΕ μέσα στους ιστούς του ήπατος δεν ήταν μεγαλύτερη από 45 ° C κατά τη διάρκεια της αιμάτωσης θερμαίνεται, και στη μελέτη μας οι εγγύς φυσιολογικά αγγεία των κουνελιών παραμένουν ευρεσιτεχνίας παρατηρήθηκε από DSA μετά θερμαίνεται αιμάτωσης.

Χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία, παρατηρήθηκε χαμηλή έκφραση πρωτεϊνών PCNA σε καρκινικά κύτταρα μετά θερμαίνεται ΠΡΙΟϋΟΕ αιμάτωσης. Σύμφωνα με τα στοιχεία μας PCNA, η θεραπεία με 60 ° C ΠΡΙΟϋΟΕ αξιοσημείωτα ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου σε κουνέλια με καρκινώματα VX2 σε σύγκριση με εκείνους που έλαβαν θεραπεία με 37 ° C ΠΡΙΟϋΟΕ.

Έχει αναφερθεί ότι η αναστολή αγγειογένεσης όγκου ενισχύει αντινεοπλασματική αποτελεσματικότητα [25]. Επειδή τα anoxemic καρκινικά κύτταρα έχει αποδειχθεί ότι είναι πιο ευαίσθητες στη θερμότητα από ό, τι τα φυσιολογικά κύτταρα [26], [27] και η θερμαινόμενη ΠΡΙΟϋΟΕ μπορεί να καταστρέψει την τριχοειδή όγκου κρεβάτι, το θερμαινόμενο ΠΡΙΟϋΟΕ μπορούν να κρατούνται στον όγκο, και η θερμότητα μπορεί να διανεμηθεί στους οι neogenetic τριχοειδή ολόκληρου του όγκου. Θεωρητικά, περισσότερη θερμότητα μπορεί να διεισδύσει στον εξωκυτταρικό χώρο των κυττάρων του όγκου για να επιτευχθεί αυξημένη θεραπευτική δράση. Οι πλέον τριχοειδή όγκου παρέμεινε στην περιοχή από 43 ° C έως 45 ° C, το περισσότερο θεραπευτικό αποτέλεσμα η θερμότητα είχε σε ιστούς όγκων, και, στη συνέχεια, έχει ως αποτέλεσμα την αναστολή της ανάπτυξης του όγκου και της αγγειογένεσης καρκινικών κυττάρων ».

Περιορισμοί

Αν και προσπαθήσαμε να εφαρμόσει διαδερμικής μαθηματική καταγραφέα θερμοκρασίας για την παρακολούθηση, ήμασταν σε θέση να μετρηθεί με ακρίβεια η θερμοκρασία του θερμαινόμενου ΠΡΙΟϋΟΕ σε ολόκληρο όγκου. Η μεταβολή του ιξώδους του ΠΡΙΟϋΟΕ με αυξημένη θερμοκρασία και τον αντίκτυπο της αλλαγής του ιξώδους στο όγκου όπως βιοκατανομή αλλοίωση δεν αξιολογήθηκαν στη μελέτη μας, αλλά θα πρέπει να αντιμετωπιστούν σε μελλοντικές μελέτες.

VX2 όγκου είναι γνωστό για την ανάπτυξη νέκρωσης που μπορεί να μεταβάλλει το ρυθμό νεοαγγείωση, οπότε σε αυτή τη μελέτη επιλέξαμε όγκους VX2 (14 ημέρες μετά την εμφύτευση) για πειραματική θεραπεία, επειδή οι όγκοι VX2 σε αυτή τη φάση έχουν ένα συγκριτικά μεγάλο όγκο του όγκου αλλά μικρού νέκρωσης όγκου και ως εκ τούτου έχουν μικρότερη επίδραση στο ρυθμό νεοαγγείωση [10], [28].

Συμπεράσματα

αναστέλλοντας αποτελεσματικά την αγγειογένεση του όγκου μετά ΤΑΟΕ έχει ένα ερευνητικό θέμα για κάποιο χρονικό διάστημα. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι μειώθηκε VEGF και τα επίπεδα της πρωτεΐνης VEGFR μπορούν να αποδοθούν σε όγκο αναστολή αγγειογένεσης σε κουνέλια με τον καρκίνο VX2 μετά την αρτηριακή θερμαίνεται έγχυση ΠΡΙΟϋΟΕ, αλλά τα κλινικά οφέλη αυτής της προσέγγισης χρειάζεται περαιτέρω αξιολόγηση, όπως η αλλαγή του ιξώδους ΠΡΙΟϋΟΕ και βιοκατανομή αλλοίωση με αυξημένη θερμοκρασία και ούτω καθεξής, θα πρέπει να θεωρείται. Έτσι, η μελέτη αυτή θα μπορούσε τελικά να διευκολύνει την προκλινική έρευνα, και πιστεύουμε ότι θερμαίνεται ένεση ΠΡΙΟϋΟΕ μπορεί να θεραπεύσει αποτελεσματικά προχωρημένο ή υποτροπιάζον ΕΑΣ.