Αφηρημένο

Εντοπισμός πιθανών καρκινικών δεικτών θα βοηθήσει διαστρωμάτωση και τον εντοπισμό κακοήθους δυναμικού ενός όγκου και την απάντησή της σε συγκεκριμένες θεραπείες. IL-6 έχει αναφερθεί ότι είναι ένας προγνωστικός δείκτης σε διάφορους καρκίνους. Ως εκ τούτου, η παρούσα μελέτη διεξήχθη για να αναδείξει το ρόλο της IL-6 στην βελτίωση της θεραπείας και για τον καθορισμό της πρόγνωσης του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Επελέγησαν Οι ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές ουροδόχου κύστης ΗΤ1376 και HT1197 για πειράματα κυτταρικής και των ζώων, στα οποία βιολογικές αλλαγές μετά πειραματική χειραγώγηση της IL-6 είχαν διερευνηθεί, μεταξύ των οποίων η συμπεριφορά του όγκου και των συναφών σηματοδότηση στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης. Επιπλέον, επελέγησαν κλινικά δείγματα από 85 ασθενείς με διηθητικό, και 50 με μη-μυϊκή καρκίνους της ουροδόχου κύστης επεμβατική για ανοσοϊστοχημική χρώση για να αξιολογηθεί η προγνωστική ικανότητα της IL-6 σε σχέση με την κλινική έκβαση. Τα στοιχεία έδειξαν ότι η IL-6 υπερεκφράστηκε σε δείγματα καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε σύγκριση με μη-κακοήθεις ιστούς τόσο σε mRNA και τα επίπεδα πρωτεΐνης. Θετική χρώση της IL-6 συσχετίστηκε σημαντικά με υψηλότερο κλινικό στάδιο, υψηλότερη ποσοστό υποτροπής μετά θεραπευτική αγωγή, και μειωμένο ποσοστό επιβίωσης. Η ανάπτυξη του όγκου και επεμβατική ικανότητα εξασθένησαν όταν η IL-6 έχει αποκλειστεί. Οι υποκείμενες αλλαγές περιλαμβάνουν μειωμένη πολλαπλασιασμό των κυττάρων, λιγότερο επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ), μειωμένη DNA μεθυλοτρανσφεράση 1 έκφραση και εξασθενημένα αγγειογένεση. Συμπερασματικά, τα ευρήματα μας έδειξαν ότι η IL-6 θα μπορούσε να είναι ένας σημαντικός προγνωστικός για κλινικό στάδιο και την πρόγνωση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Επιπλέον, με στόχο την IL-6 μπορεί να είναι μια πολλά υποσχόμενη στρατηγική για την αντιμετώπιση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης

Παράθεση:. Chen MF, Λιν PY, Γου CF, Chen WC, Wu CT (2013) IL-6 Έκφραση Ρυθμίζει Ογκογονικότητα και συσχετίζεται με Η πρόγνωση για τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης. PLoS ONE 8 (4): e61901. doi: 10.1371 /journal.pone.0061901

Επιμέλεια: Πέτρος Canoll, το Πανεπιστήμιο Columbia, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 6 Δεκ, 2012? Αποδεκτές: δέκατης τέταρτης Μάρτη 2013? Δημοσιεύθηκε: 30 Απριλίου 2013

Copyright: © 2013 Chen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το έργο υποστηρίχθηκε από Chang Gung Memorial Hospital, την Ταϊβάν, τη χορήγηση CMRPG690332-3. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος ουροδόχου κύστης αντιπροσωπεύει ένα φάσμα νεοπλασιών, συμπεριλαμβανομένων των μη-μυϊκό επεμβατική (NMIBC), μυϊκή επεμβατικές, και μεταστατικές βλάβες. καρκίνωμα από μεταβατικό επιθήλιο (TCC) της ουροδόχου κύστης είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου ουροδόχου κύστης και εκδηλώνεται σε δύο διακριτές μορφές με διαφορετικές κλινικές και βιολογικές συμπεριφορές. Περίπου το 70% των ασθενών παρουσιάζουν μη-μυϊκή επεμβατική όγκους, ενώ το υπόλοιπο 30% παρούσα με διηθητικό όγκων. Παρά την καλή πρόγνωση για τους ασθενείς με επιφανειακή νόσο, η υποτροπή είναι συνηθισμένη και συνδέεται με την ανάπτυξη του μυϊκού-διεισδυτικής νόσου [1]. Σχεδόν οι μισοί από όλους τους ασθενείς που παρουσιάζουν μυϊκό-διεισδυτική νόσο ή εκείνους που έχουν ήδη προχωρήσει σε αυτή την κατάσταση το λιμάνι λανθάνουσα μακρινή μετάσταση και έχουν χαμηλό ποσοστό επιβίωσης 5 ετών [2]. Σε αντίθεση με άλλα ουρολογικά καρκίνους, ο καρκίνος της ουροδόχου κύστης στερείται κλινικής χρήσιμα βιοδείκτες για την πρόβλεψη στάδιο της νόσου και της κλινικής έκβασης. Ως εκ τούτου, οι μοριακοί δείκτες που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη διαστρωμάτωση και να προσδιορίσει αληθινή κακοήθους δυναμικού ενός όγκου και την απόκριση της σε συγκεκριμένες θεραπείες που απαιτούνται

Η χρόνια φλεγμονή συχνά προηγείται ή συνοδεύει σημαντικό αριθμό καρκίνων [3] – [5]. . Μία αύξηση στην φλεγμονωδών μεσολαβητών έχει δειχθεί ότι οδηγεί σε προαγωγή όγκων, εισβολή, και την αγγειογένεση [6] – [7]. Αν και ο ρόλος της χρόνιας φλεγμονής στην αιτιολογία του TCC της κύστης δεν έχει καθιερωθεί, υπάρχει απόδειξη ότι τοποθέτησης προφλεγμονωδών κυτοκινών παίζουν κρίσιμο ρόλο στην παθογένεση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, όπως IL-6, IL-8 και ΤΝΡ-α α [8]. Επιπλέον, επίμονα ενεργοποίηση STAT3 δείχθηκε να διατηρηθεί συστατική δραστικότητα ΝΡ-κΒ, παρέχοντας έτσι αποδείξεις για τη σχέση μεταξύ μονοπατιών σηματοδότησης ογκολογίας εντός της φλεγμονώδους μικροπεριβάλλον [9]. Η IL-6 είναι ένας σημαντικός ενεργοποιητής των μονοπατιών σηματοδότησης STAT3, και η κύρια κυτοκίνη που επηρεάζουν την φλεγμονώδη απόκριση σε ανθρώπους [10], [11]. IL-6 σηματοδότηση έχει ενοχοποιηθεί στη ρύθμιση της ανάπτυξης του όγκου και μεταστάσεις, και το επίπεδο του θα μπορούσε να συσχετιστεί με φτωχή πρόγνωση σε διαφορετικές μορφές καρκίνου [11], [12]. Επιπλέον, η αυξημένη IL-6 επίπεδα στον ορό έχουν αναφερθεί ότι συνδέονται με τη μετάσταση και φτωχή πρόγνωση του προστάτη, των ωοθηκών, της ουροδόχου κύστης και καρκίνους [13] – [15]. Αν και υπάρχουν στοιχεία που υποδεικνύουν ότι η IL-6 μπορεί να είναι ένας κρίσιμος παράγοντας σε διάφορες κακοήθειες, ο ρόλος του στην καρκίνο της ουροδόχου κύστης παραμένει ασαφής. Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, εστιάσαμε επί των υποκείμενων μηχανισμών της IL-6 και την πιθανή χρησιμότητά της για την αντιμετώπιση της ανάγκης επιθετική θεραπεία για τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης.

Υλικά και Μέθοδοι

Τα χαρακτηριστικά των ασθενών

το Διοικητικό συμβούλιο Institutional Review του Chang Gung Memorial Hospital ενέκρινε την παρούσα μελέτη (Αριθμός άδειας: 99-0207B). Οι γραπτές συγκαταθέσεις υπογράφηκαν από τους ασθενείς για δείγμα και οι πληροφορίες τους να αποθηκεύονται στο νοσοκομείο και να χρησιμοποιηθεί για την έρευνα. Συνολικά 85 ασθενείς με διηθητικό TCC της ουροδόχου κύστης (39 με στάδιο Τ2 και 46 με τα στάδια Τ3 -Τ4), ο οποίος ολοκλήρωσε μια πορεία οριστική χημειοακτινοθεραπεία θεραπείας (CCRT) εντάχθηκαν στη μελέτη. Με την ολοκλήρωση της CCRT, οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε μία επανάληψη υπολογιστική τομογραφία σαρώσεις (CT) και εξέταση κυστεοσκόπηση για να προσδιοριστεί η απόκριση στη θεραπεία. Ασθενείς παρατηρήθηκαν σε διαστήματα 3 μηνών για τα πρώτα 2 έτη και κάθε 6 μήνες μετά. Η παρακολούθηση των ασθενών συνεχίστηκε μέχρι το θάνατό τους, και τα τελικά σημεία ήταν η συνολική επιβίωση (OS), επιβίωση χωρίς εξέλιξη, πρότυπο αποτυχία και απάντηση σε οριστική CCRT. εξέλιξη της νόσου ορίστηκε ως τεκμηριωμένη τοπική υποτροπή ή απομακρυσμένες μεταστάσεις. Οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση SPSS έκδοση 17.0.

Η ανοσοϊστοχημική (IHC) χρώση

Εκτός από δείγματα ιστών που συλλέγονται από τους 85 ασθενείς με διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης, τα δείγματα ιστού της ουροδόχου κύστης συλλέχθηκαν για ανοσοϊστοχημική ( IHC) χρώση από 17 ασθενείς που πάσχουν από καρκίνο της ουροδόχου κύστης με μακρινή μετάσταση, 50 NMIBC ασθενείς, και 40 μη κακοήθεια ασθενείς. Φορμαλίνη σταθερό, εγκλεισμένους σε παραφίνη ιστούς που λαμβάνεται με διουρηθρική στη διάγνωση κόπηκαν σε τομές 5 μm, και τοποθετήθηκαν σε πλακίδια για χρώση IHC. Για ιστολογική αξιολόγηση της IL-6 χρώση, η χρώση βαθμολογήθηκε ανεξάρτητα από δύο παρατηρητές οι οποίοι ήταν τυφλός στην κλινική έκβαση των ασθενών? ασύμφωνα αποτελέσματα εξετάστηκαν, και επιτεύχθηκε συναίνεση. Στην παρούσα μελέτη, ένα κριτήριο περισσότερο από 10% θετική χρώση των καρκινικών κυττάρων θεωρήθηκε θετική σε IHC βαθμολόγησης, η οποία ορίζεται από λειτουργικά χαρακτηριστικό (ROC) καμπύλη ανάλυση δέκτη.

Κυτταρική καλλιέργεια και αντιδραστήρια

HT137 και HT1197, ανθρώπινου καρκίνου της ουροδόχου κύστης κυτταρικές σειρές, ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC). Η IL-6-εξουδετερωτικό αντίσωμα ελήφθη από την R &? D Systems (Minneapolis, ΜΝ) και το IL-6-GFP σίγησης (ανθρώπινη IL6 shRNA κατασκευάσματα σε ρετροϊικό φορέα GFP) και φορέα GFP-μάρτυρα (μη-αποτελεσματική κωδικοποιημένα κασέτα shRNA στο φορέα ρετροϊού GFP) ελήφθησαν από ΟηΟεηε Technologies, Inc. (Rockville, MD).

μοντέλο όγκου ξένου μοσχεύματος (έκτοπη και ορθοτοπική)

Αυτή η μελέτη πραγματοποιήθηκε σε αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις στον οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των ζώων Εργαστηρίου, όπως ψηφίστηκε από τα Ινστιτούτα του Εργαστηρίου ζώων Πόρων, Εθνικό Συμβούλιο Έρευνας, ΗΠΑ το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας των πειραμάτων σε ζώα των Chang Gung Memorial Hospital (Αριθμός άδειας: 2010070201) . Οκτώ εβδομάδων θηλυκούς αθυμικούς γυμνούς ποντικούς χρησιμοποιήθηκαν ως μοντέλο εμφύτευσης ξενομοσχεύματος όγκου. Στο έκτοπη μοντέλο εμφύτευση του όγκου, κύτταρα (5 × 10

6 καρκινικά κύτταρα εγχύθηκαν υποδόρια ανά εμφύτευση, πέντε ζώα ανά ομάδα) εμφυτεύθηκαν εντός του διμερούς ραχιαία περιοχή των γλουτών. Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε κάθε τρεις ημέρες μετά την εμφύτευση (ημέρα 0). Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε υποθέτοντας μια ελλειψοειδούς σχήματος. Στο ορθοτοπικό μοντέλο εμφύτευση του όγκου, πραγματοποιήσαμε ενδοκυστική ενστάλαξη των κυττάρων canccer όπως περιγράφηκε προηγουμένως (πέντε ζώα ανά ομάδα). Η έκταση της ορθοτοπική εισβολή όγκου μετρήθηκε μετά την εμφύτευση στους χρόνους που υποδεικνύονται. Η επίδραση της IL-6 διέγερση ερευνήθηκε επίσης

in vivo

. Για την ομάδα που έλαβε αγωγή, μια ενδοπεριτοναϊκή ένεση της IL-6 (60 ή 100 ng ανά ποντικό, 3 φορές την εβδομάδα) ξεκίνησε μία ημέρα πριν την εμφύτευση του όγκου.

μετανάστευση των κυττάρων και των κυττάρων εισβολή δοκιμασίας.

Ικανότητα για την κυτταρική εισβολή προσδιορίσθηκε με Δοκιμασία κυττάρων εισβολή (Trevigen, Gaithersburg, MD). Τα κορυφαία θάλαμοι προ-επικαλυμμένες με εκχύλισμα βασικής μεμβράνης (που προέρχεται από EHS όγκου και παρέχονται στο κιτ). Μετά από επώαση για 24 ώρες, ο αριθμός των κυττάρων στον κάτω θάλαμο προσδιορίστηκε με μέτρηση του φθορισμού calcein ανιόν που απελευθερώνεται από ενδοκυτταρικές καλσεΐνης ακετοξυμεθυλεστέρα. Για την επικύρωση των πειραμάτων σχετικά με τη μετανάστευση των κυττάρων, δοκιμασίες μηδέν έγιναν επίσης. Μια μεγάλη γρατσουνιά 2 χιλιοστά συντάχθηκε σε όλη κάθε κυτταρικό στρώμα χρησιμοποιώντας ένα ρύγχος πιπέτας. Οι πλάκες φωτογραφήθηκαν σε χρόνους που αναφέρονται.

ανοσοφθορισμού (IF) χρώση

Τα κύτταρα σπάρθηκαν επί γυάλινων καλυπτρίδων σε 5 × 10

4 κύτταρα /ml σε 6- φρεατίων για ανοσοφθορισμό (IF) χρώση με ή χωρίς θεραπεία. Στους καθορισμένους χρόνους μετά την αγωγή, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν με 2% παραφορμαλδεΰδη για 5 λεπτά, και πλύθηκαν σε PBS με Tween-20 (PBST). Τα πλακίδια επωάστηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου με αντισώματα έναντι Ε-καδερίνης και IL-6, που ακολουθείται από επώαση με Texas Red συζευγμένο με δευτερογενές αντίσωμα και αντικηλίδωση με 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη (ϋΑΡΙ).

σε πραγματικό χρόνο ανάστροφης μεταγραφής αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (RT-PCR)

σε πραγματικό χρόνο RT-PCR πραγματοποιήθηκε σε RNA που εκχυλίζεται από τα κύτταρα και δείγματα ιστών (δείγματα έξι καρκινικού ιστού και έξι μη-κακοήθεις ιστούς ? δύο δείγματα σε κάθε λωρίδα). Οι αλληλουχίες εκκινητών ήταν ως εξής: (προς τα εμπρός και πίσω, αντίστοιχα) 5′-GTTCTTCCTCCTGGAGAATGTCA-3 ‘και 5′-GGGCCACGCCGTACTG-3′ για DNMT-1? 5’-TACATCCTCGACGGCATCTC-3 ‘και 5′-GCTACATTTGCCGAAGA- -GCC-3’ για την IL-6. Ένα σύνολο εκκινητή β-ακτίνης χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Η βελτιστοποιημένη PCR πραγματοποιήθηκε σε ένα πολύχρωμο σύστημα ανίχνευσης PCR πραγματικού χρόνου iCycler iQ. Σημαντικές σήματα φθορισμού PCR από ιστό καρκινώματος κανονικοποιήθηκαν σε σχέση με τη μέση τιμή των σημάτων που λαμβάνονται από μη κακοήθεις ιστούς.

Ένζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) για την IL-6 επίπεδα

in vitro

και

in vivo

Η

δείγματα ούρων ελήφθησαν από 60 ασθενείς με καρκίνους της ουροδόχου κύστης (25 από τους ασθενείς με NMIBC, 35 από εκείνους με διηθητικό νόσος), και 20 δείγματα από ασθενείς χωρίς ενδείξεις μοχθηρία. Δείγμα 10 ml φρέσκου συλλέχθηκαν ούρα από κάθε υποκείμενο και στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκαν στις 3000 rpm για 5 λεπτά. Κατά το χρόνο της υποπολλαπλάσια των ούρων ανάλυση αποψύχθηκαν και ουρική IL-6 μετρήθηκαν στα υπερκείμενα. Εμπορικά διαθέσιμα δοκιμασία ELISA (HS ανθρώπινο IL-6 κιτ ανοσοδοκιμασίας? Κ &? D Systems) χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθούν τα επίπεδα της ουρικής IL-6. Οι δοκιμασίες διεξήχθησαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι καμπύλες βαθμονόμησης παρασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας καθαρισμένη πρότυπα για κάθε πρωτεΐνη αξιολογηθεί. Για να δοκιμαστεί η IL-6 επίπεδο στην κυτταρική υπερκείμενο, τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν με 1 ml μέσου χωρίς ορό για 24 ώρες σε πλάκα 6 φρεατίων. Το μέσο συλλέχθηκε και διαυγάστηκε με φυγοκέντρηση στα 3000 g. IL-6 επίπεδο στο υπερκείμενο ανιχνεύθηκε με δοκιμασία ELISA.

Στατιστική ανάλυση

Survival πιθανοτήτων αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier. Η επιβίωση υπολογίστηκε από την ημερομηνία της αγωγής άρχισε να την ημερομηνία του θανάτου ή της πλέον πρόσφατης παρακολούθησης. Η σημασία των διαφορών μεταξύ των ομάδων αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας την δοκιμασία log-rank. Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο όψεων, με

σ

& lt? 0,05 ληφθούν για να καταδειχθεί η σημασία. Σημασία της διαφοράς μεταξύ των δειγμάτων προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας t-test του Student. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα του μέσου (SEM). Τρεις επαναλήψεις διεξήχθησαν για την αξιολόγηση κάθε πείραμα, και επαναλάβετε ολόκληρη τη σειρά πειραμάτων, τουλάχιστον δύο φορές. Ένα επίπεδο πιθανότητας p & lt? 0,05 εκδόθηκε καθ ‘όλη για να προσδιοριστεί η στατιστική σημαντικότητα εκτός αν αναφέρεται διαφορετικά

Αποτελέσματα

IL-6 εκφράσεις σε ασθενείς με καρκίνους της ουροδόχου κύστης

Το επίπεδο της IL. -6 σε δείγματα ιστών (έξι ζεύγη καρκίνου και των γειτονικών δειγμάτων μη κακοήθη ιστό) εξετάστηκε χρησιμοποιώντας mRNA και αναλύσεις πρωτεΐνης. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α, τα δείγματα καρκίνου της ουροδόχου κύστης που εκφράζεται σημαντικά υψηλότερο επίπεδο της IL-6 από τους μη-κακοήθεις ιστούς. ανάλυση IHC για TCC κύστη (Εικ. 1 Β και Πίνακας 1) έδειξαν θετική χρώση για την IL-6 σε 51% του Τ2 -Τ4 ιστών καρκίνου της ουροδόχου κύστης [28% (11/39) σε Τ2 έναντι 70% (32/46) σε Τ3 -Τ4?

P

= 0,0001]. Επιπλέον, το 65% (11/17) από τα πιο προηγμένα όγκους (ασθενείς με απομακρυσμένες μεταστάσεις) έδειξε θετική χρώση για την IL-6, αλλά μόνο 17,5% (7/40) των μη-κακοήθεις ιστούς ουροδόχου κύστεως και 26% (13 /50) των όγκων σε πρώιμο στάδιο (CIS ή Τ1) που εκφράζεται IL-6. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1 C, θετική χρώση για την IL-6 συσχετίστηκε σημαντικά με το κλινικό στάδιο (Τ2 -Τ4 εναντίον Τ1 και CIS?

P

= 0,005). Επιπλέον, τα ουρική επίπεδα της IL-6 εξετάστηκαν με ανάλυση ELISA. Τα μέσα επίπεδα της IL-6 σε δείγματα ούρων από ασθενείς με NMIBC (81 ± 30,8 pg /mL) και Τ2 διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης (98 ± 24 pg /mL) ήταν ελαφρά υψηλότερες από εκείνες χωρίς κακοήθους νόσου (25,14 ± 9,71 pg /mL), αλλά οι διαφορές δεν ήταν στατιστικά σημαντικές (Σχ. 1D). Η ουρική IL-6 επίπεδα ήταν σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς με Τ3 -Τ4 τοπικού προχωρημένους καρκίνους της ουροδόχου κύστης (250 ± 27 pg /mL) σε σύγκριση με εκείνες σε ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης ≤T2 ή μη κακοήθη νόσο (

P

= 0,01).

Α. Επίπεδα της IL-6 εξετάστηκαν σε έξι δείγματα (ζεύγη καρκίνου (C) και των παρακείμενων μη-κακοήθεις ιστούς (Ν)? Δύο δείγματα σε μια λωρίδα) με RT-PCR και ανάλυση Western blotting. Για πραγματικού χρόνου RT-PCR ανάλυση, ο άξονας-γ δείχνει την αναλογία της IL-6 σε καρκινικό ιστό διαιρούμενο με ότι στις μη-κακοήθεις δείγμα. Στήλες, σημαίνει από τρία ξεχωριστά πειράματα? Μπαρ, τυπική απόκλιση (SD)? *,

P & lt?

0.05. B. Η ανοσοϊστοχημική χρώση του καρκίνου ανθρώπινης κύστης δείγματα με αντι-IL-6 αντισώματος. Αντιπροσωπευτικά διαφάνειες εμφανίζονται. δεδομένα C. Η IHC έδειξε ότι η IL-6 επίπεδα συσχετίζονταν σημαντικά με κλινικό στάδιο. D. Η ουρική IL-6 επίπεδα των ασθενών εξετάστηκαν με ανάλυση ELISA. Στήλες, σημαίνει από τρία ξεχωριστά πειράματα? Μπαρ, SD? *,

P & lt?

0.05. (NT, ασθενείς με μη-κακοήθεις παθήσεις).

Η

Ο ρόλος της IL-6 στην ανάπτυξη του όγκου και την εισβολή

Για να διερευνηθεί κατά πόσο η IL-6 παίζει ένα ρόλο στην επιθετική συμπεριφορά του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, HT1197 και ΗΤ1376 κύτταρα επιμολύνθηκαν με το φορέα σίγησης IL-6-GFP. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α, ο φορέας αποσιώπηση της IL-6 μείωσε σημαντικά IL-6 έκφραση σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές. Όπως καθορίζεται από μετρήσεις βιώσιμων κυττάρων πάνω από έξι ημέρες (Σχήμα 2Β), ο φορέας αποσιώπηση της IL-6 εξασθενημένα σημαντικά τον ρυθμό πολλαπλασιασμού των HT1197 και ΗΤ1376 κύτταρα. Επιπλέον, η χρήση ξενομοσχεύματος όγκοι μοντέλο, η αναστολή της IL-6 οδήγησε σε βραδύτερη ανάπτυξη όγκου

in vivo

(Σχ. 2C). Τα δεδομένα αποδεικνύουν ότι ο φορέας σίγηση IL-6 ανέστειλε σημαντικά τον ρυθμό ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων κύστης. Επιπροσθέτως, η IL-6 διάνυσμα σίγηση εξασθένισε σημαντικά την επεμβατική ικανότητα των καρκινικών κυττάρων κύστης, όπως καταδεικνύεται με χρήση προσδιορισμών μετανάστευση μηδέν [16] και δοκιμασία εισβολής

in vitro

(Σχ. 3Α, Σχ. S1). Ένα ορθοτοπικό τεχνική εμφύτευσης του όγκου χρησιμοποιήθηκε για να εξετασθούν τα αποτελέσματα του φορέα σίγασης IL-6 επί επεμβατική ικανότητα

in vivo

(Σχ. 3Β). Δεκαέξι ποντίκια έλαβαν ενδοκυστική ενστάλαξη κάθε κύστη καρκινικής κυτταρικής γραμμής. Μετά από 28 ημέρες, 13 ποντικούς (81%) ενσταλάζεται με κύτταρα HT1197, τέσσερις (25%) ενσταλάζεται με κύτταρα HT1197 συν φορέα IL-6 σίγηση, 11 (69%) με κύτταρα ΗΤ1376, και δύο (13%) με κύτταρα ΗΤ1376 συν IL-6 διάνυσμα σίγηση αναπτυχθεί ενδοκυστική όγκους. Τα δεδομένα έδειξαν ότι ο φορέας αποσιώπηση της IL-6 μειώθηκε επεμβατική ικανότητα

in vivo

.

Α. Αποτελέσματα της IL-6-GFP σίγησης διάνυσμα σε IL-6 σε επίπεδο HT1197 και ΗΤ1376 κυττάρων, όπως αποδεικνύεται από ανάλυση ανοσοφθορισμού. Αντιπροσωπευτικά μικρογραφήματα δείχνεται, με τις αντίστοιχες ανοσοφθορισμού χρώματα (DAPI, μπλε? GFP, πράσινη? IL-6, κόκκινο). IL-6 επίπεδα ήταν σημαντικά μειωμένα από το IL-6-GFP σίγησης σε σύγκριση με τον φορέα ελέγχου GFP. B. Επιπτώσεις του φορέα αποσιώπηση της IL-6 και στο εξής ποσοστά πολλαπλασιασμό των HT1197 και ΗΤ1376 καρκινικά κύτταρα. Ο ίδιος αριθμός κυττάρων (10

4) απλώθηκε σε κάθε πλάκα την ημέρα 0 και αφέθηκαν να αναπτυχθούν σε αντίστοιχες καλλιέργειες τους. Μετρήσαμε τον αριθμό των βιώσιμων κυττάρων μετά από επώαση για 2, 4, και 6 ημέρες. Ο άξονας y αντιπροσωπεύει τον αριθμό βιώσιμων κυττάρων. Point, μέση τριών ξεχωριστών πειραμάτων. Μπαρ, SD. *,

P & lt?

0.05. C. Επίδραση της IL-6 αναστολή στην ανάπτυξη ξενομοσχεύματος όγκου. Κάθε σημείο αντιπροσωπεύει το μέσο όρο τριών ξεχωριστών πειραμάτων? μπαρ, SD? *,

P & lt?

0.05. Η έκφραση του IL-6 αξιολογήθηκε επίσης με ανοσοχημική χρώση των ξενομοσχευμάτων. Αντιπροσωπευτικά διαφάνειες εμφανίζονται στην × 400 μεγέθυνση.

Η

Α. Η επεμβατική ικανότητα των καρκινικών κυττάρων κύστης με ή χωρίς το φορέα αποσιώπηση της IL-6 αξιολογήθηκε με δοκιμασίες μετανάστευσης μηδέν. Τα αποτελέσματα από αντιπροσωπευτικά διαφάνειες απεικονίζεται. Στήλη, μέση τριών ξεχωριστών πειραμάτων. Μπαρ, SD. *,

P & lt?

0.05. B. Η επεμβατική ικανότητα των καρκινικών κυττάρων κύστης με ή χωρίς το φορέα αποσιώπηση της IL-6 αξιολογήθηκε με ορθοτοπική εμφύτευση του όγκου ποντικού. Οι αντιπροσωπευτικές διαφάνειες και ποσοτικά δεδομένα δείχνονται. Ο γ-άξονας αντιπροσωπεύει την αναλογία των ποντικών που παρουσιάζουν ενδοκυστική όγκους, κανονικοποιημένη σε αυτά που λαμβάνουν ορθοτοπική εμφύτευση του όγκου. Ο φορέας σίγηση IL-6 μείωσε το ρυθμό της εμφύτευσης του όγκου στην ουροδόχο κύστη και συνδέθηκε με ένα μικρότερο μέγεθος του όγκου. Στήλη, μέση τριών ξεχωριστών πειραμάτων. Μπαρ, SD. *,

P & lt?

0.05. (CV, κύτταρα επιμολυσμένα με τον φορέα ελέγχου? IL-6 SV, κύτταρα επιμολυσμένα με τον φορέα αποσιώπηση της IL-6). C. Μεταβολή Ε-καδερίνης σε κύτταρα αξιολογήθηκε και οι αντιπροσωπευτικές μικροφωτογραφίες φαίνονται, με τις αντίστοιχες ανοσοφθορισμού χρώματα (DAPI, μπλε? GFP, πράσινη? Ε-καδερίνης, κόκκινο). D. Μεταβολή ΕΜΤ-συνδεόμενες πρωτεΐνες σε επιμολυντές αξιολογήθηκε με ανάλυση Western κηλίδωση (CV, κύτταρα επιμολυσμένα με τον φορέα ελέγχου? IL-6 SV, κύτταρα επιμολυσμένα με τον φορέα αποσιώπηση της IL-6). Ε Μεταβολή EMT που σχετίζονται με τις πρωτεΐνες στα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με JAK inhibitor- AG490.

Η

Ο ρόλος της IL-6 σε EMT αλλάζει

EMT είναι ένα σημαντικό γεγονός στην εισβολής [17] , και εξετάσαμε αν αυτό είναι ο μηχανισμός που υπογραμμίζει την επιθετική συμπεριφορά της IL-6-θετικού καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3C-D, ο φορέας αποσιώπηση της IL-6 αυξημένη έκφραση Ε-καδερίνης που σχετίζεται με μείωση στη αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) και μεταλλοπεπτιδάση μήτρα 9 (ΜΜΡ-9) εκφράσεων σε κύτταρα όγκου [18]. Έχει αναφερθεί ότι η IL-6 είναι ένας σημαντικός ενεργοποιητής των STAT3 σηματοδότησης, και η ενεργοποίηση της σηματοδότησης STAT3 παίζει ένα ρόλο στην επαγωγή της επιθετικής συμπεριφοράς του όγκου και EMT αλλαγές στον καρκίνο [19]. Όταν μπλοκαριστεί η ενεργοποίηση STAT3 με JAK αναστολέα-AG490, οι πρωτεΐνες ΕΜΤ σχετίζονται μειώθηκαν (Σχ. 3Ε). Οι παρατηρήσεις αυτές πρότειναν ότι οι αυξημένες συμπεριφορά και EMT αλλαγές επιθετικό όγκο που προκαλείται από IL-6 μπορεί να προκαλείται από την ενεργοποίηση STAT3, ένα μέρος τουλάχιστον.

Επίδραση της IL-6 επί της αγγειογένεσης

δεδομένα

ELISA απεκάλυψε ότι η IL-6 διάνυσμα σίγηση εξασθενημένος σαφώς έκκριση IL-6 σε υπερκείμενα κυτταρικής καλλιέργειας και ορό από ποντίκια μετά από 28 ημέρες από την εμφύτευση του όγκου (Σχ. 4Α). Τα CD31-μεσολάβηση αλληλεπιδράσεων ενδοθηλιακού κυττάρου-κυττάρου που εμπλέκονται στην αγγειογένεση [20]. Το Σχήμα 4Β έδειξε ότι η IL-6 διάνυσμα σίγηση εξασθενημένο αγγειογένεση αποδεικνύεται από την χρώση των CD31 και VEGF. Για να εξετασθεί περαιτέρω αν κυκλοφορούσα IL-6 που διευκολύνουν την επαγωγή της αγγειογένεσης, μια ενδοπεριτοναϊκή ένεση της IL-6 (60 ή 100 ng ανά ποντικό, 3 φορές την εβδομάδα) ξεκίνησε μία ημέρα πριν την εμφύτευση του όγκου. Όπως φαίνεται στην Εικόνα 4C, IL-6 προκάλεσε σχηματισμό σωλήνα αγγειογένεση και ενδοθηλιακή εντός του όγκου με τη χρώση του VEGF, ΜΜΡ-9 και CD31 σε ποντίκια που φέρουν όγκους για 2 εβδομάδες. Ως εκ τούτου, η επαγωγή της αγγειογένεσης μπορεί να είναι ένας από τους μηχανισμούς που είναι υπεύθυνοι για την προώθηση του όγκου από την IL-6.

A. Το επίπεδο της IL-6 σε υπερκείμενα κυτταρικής καλλιέργειας και ορό ποντικών που φέρουν όγκους με ή χωρίς το φορέα αποσιώπηση της IL-6 εξετάσθηκε με ELISA

in vitro

και

in vivo

. Στήλη, μέση τριών ξεχωριστών πειραμάτων. Μπαρ, SD. *,

P & lt?

0.05. Β Μεταβολή αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) και μεταλλοπεπτιδάση μήτρα 9 (ΜΜΡ-9), και CD31 σε ξενομοσχεύματα όγκου αξιολογήθηκε με ανοσοϊστοχημική χρώση. Τα αποτελέσματα από αντιπροσωπευτικά διαφάνειες απεικονίζεται. C. Επίδραση της IL-6 στην ανάπτυξη του όγκου ξενομοσχεύματος και την επαγωγή της αγγειογένεσης αξιολογήθηκε σε ποντίκια που φέρουν όγκους για 2 εβδομάδες. Κύτταρα όγκου εγχύθηκαν υποδορίως σε ποντικούς με ή χωρίς IL-6 ένεση, όπως αναφέρεται στο Υλικά και Μέθοδοι, και την ανάπτυξη του όγκου εξετάστηκαν 2 εβδομάδες αργότερα. Ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας MMP-9, εκπρόσωπος διαφάνειες CD31, και VEGF stained- αποδείχθηκε.

Η

Σχέση μεταξύ της έκφρασης της IL-6 και DNMT1 στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης

Όπως έχουμε αναφερθεί στο παρελθόν [21 ], τα υψηλότερα επίπεδα DNMT1 συσχετίστηκαν με επιθετική συμπεριφορά όγκου και EMT αλλαγές σε καρκίνους της ουροδόχου κύστης. Βρήκαμε υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ θετική χρώση για την IL-6 και DNMT1 για IHC χρώση των δειγμάτων καρκίνου της ουροδόχου κύστης (Σχ. 5Α). Με mRNA και ανάλυση πρωτεϊνών, μειωμένη IL-6 οδήγησε σε ανέστειλε DNMT1 σχετίζεται με εξασθενημένα STAT3 και ενεργοποίηση Akt (Εικ. 5Β-Γ). Εξετάσαμε περαιτέρω αν η αναστολή της IL-6 μειωμένη έκφραση DNMT1 μέσω αναστολής της ΑΚΤ χρησιμοποιώντας ένα PI3K αναστολέα LY294002 [22], ή προς τα κάτω ρύθμιση της STAT3 με STAT3 σύντομης παρεμβολής RNA (siRNA). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5D, η αναστολή της φωσφορυλίωσης Akt, αλλά όχι να μειωθεί ρ-STAT3, εξασθενημένα σημαντικά την έκφραση DNMT1. Ως εκ τούτου, προτείνεται ότι η ενεργοποίηση του ΑΚΤ μπορεί να είναι υπεύθυνη για την αυξημένη DNMT1 σε IL-6-θετικών καρκίνων της ουροδόχου κύστης.

A. IL-6 επίπεδο συσχετίστηκε θετικά με την έκφραση DNMT1 σε δείγματα ανθρώπινου καρκίνου της ουροδόχου κύστης (

P & lt?

0,0001). Αντιπροσωπευτικά διαφάνειες ενός επιλεγμένου δείγμα όγκου θετικά χρώση τόσο για IL-6 και DNMT1, και ένα άλλο δείγμα όγκου αρνητικά τόσο για την IL-6 και DNMT1 παρουσιάζονται σε μεγέθυνση × 400. B. Επίδραση της IL-6 στο επίπεδο της DNMT1, ρ-ΑΚΤ, και ρ-STAT3 εξετάστηκε με Western κηλίδωση CV, κύτταρα (επιμολυσμένα με τον φορέα ελέγχου? IL-6 SV, κύτταρα επιμολυσμένα με τον φορέα αποσιώπηση της IL-6 ). C. Επίδραση της IL-6 στο επίπεδο της DNMT1 και ρ-ΑΚΤ εκτιμήθηκε με ανοσοϊστοχημική χρώση, και τα αποτελέσματα από αντιπροσωπευτικά διαφάνειες απεικονίζεται. D. Επίδραση της IL-6 αναστολή από την IL-6-εξουδετερωτικό αντίσωμα, π-ΑΚΤ αναστολή από αναστολέα ΡΙ3Κ, και ρ-STAT3 αναστολή από STAT3 siRNA στο επίπεδο της DNMT1 εξετάστηκε με κηλίδωση Western (W, άγριου-τύπου? IL -6

-, κύτταρα κατεργασμένα με IL-6-εξουδετέρωσης Ab? STAT3

-, κύτταρα κατεργασμένα με Stat3 siRNA?. ΡΙ3Κ-Ι, κύτταρα κατεργασμένα με αναστολέα της ΡΙ3Κ

Η

IL- 6 σχετίζεται με την κλινική έκβαση της ουροδόχου κύστης TCC

Ο διάμεσος χωρίς εξέλιξη χρόνος επιβίωσης στις 85 ασθενείς ολοκλήρωσαν οριστική θεραπεία CCRT ήταν 36,97 μήνες. Με μονοπαραγοντική ανάλυση, θετική χρώση για την IL-6 ήταν σημαντικά σχετίζεται με υψηλότερη κλινική στάδιο, υψηλότερο ποσοστό αποτυχίας της νόσου μετά οριστική θεραπεία και μικρότερο χρόνο επιβίωσης (Πίνακας 1 και Σχήμα 6). Τα ευρήματα υπογραμμίζουν έντονα την συμβολή της IL-6 με την πρόγνωση στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης.

Μια διαφορά επιβίωση καταδείχθηκε σε σύμφωνα με θετική χρώση της IL-6. Οι καμπύλες της συνολικής επιβίωσης Kaplan-Meier έδειξε ότι οι ασθενείς με υψηλότερα επίπεδα της IL-6 έκφραση είχαν μικρότερες περιόδους επιβίωσης.

η

Συζήτηση

Δείξαμε ότι η IL-6 εκφράστηκε σε υψηλότερα επίπεδα σε TCC κύστη από ότι σε μη-κακοήθεις ιστούς. Επιπλέον, θετική χρώση για την IL-6 κατά προτίμηση σχετίζεται με διηθητικό κύστη TCC σχέση με κατώτερο στάδιο της νόσου Ta-T1. Ακράτεια επίπεδα της IL-6 ήταν επίσης σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς με τοπικά προχωρημένο κύστη TCC συγκριτικά με ασθενείς με NMIBC. Ως εκ τούτου, IL-6 έκφραση μπορεί να σχετίζεται με μια πιο κακοήθη φαινότυπο.

Για να διερευνηθεί κατά πόσο η IL-6 ήταν υπεύθυνη για την επιθετική συμπεριφορά του κύστη TCC, IL-6 κατεστάλη σε καρκινικά κύτταρα κύστης με σταθερή επιμόλυνση με ένας φορέας σιγαστήρα. Δεδομένων αποκάλυψε ότι η αναστολή της IL-6 οδήγησε σε μειωμένη ανάπτυξη του όγκου της ουροδόχου κύστης

in vitro

και

in vivo

. Επιπλέον, ο φορέας αποσιώπηση της IL-6 εξασθενημένα σημαντικά την επεμβατική ικανότητα ανιχνεύεται σε κυτταρικές αναλύσεις εισβολή και ορθοτοπική μοντέλα ποντικών. Η IL-6 είναι ένας σημαντικός ενεργοποιητής των JAK /STAT3 σηματοδότηση [10], [11], και ενεργοποιείται σηματοδότηση STAT3 έχει αναφερθεί να συνεισφέρει στην ογκογένεση, με την προώθηση του πολλαπλασιασμού και EMT [18], [23]. Επιπλέον, η ενεργοποίηση STAT3 έχει δειχθεί ένα ρόλο στην προδιαθέσεως urothelial βασικά κύτταρα προς την οδό εξέλιξης CIS σε διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης [24]. Τα δεδομένα μας αποκάλυψαν ότι η αναστολή της IL-6 εξασθενημένη ενεργοποίηση STAT3 που σχετίζονται με αυξημένη Ε-καδερίνης και μειωμένη VEGF και ΜΜΡ-9 εκφράσεις. Αυξημένες εκφράσεις του VEGF και ΜΜΡ-9 αναφέρεται ότι συσχετίζονται με EMT αλλαγή και κακή πρόγνωση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης [25], [26]. Ως εκ τούτου, είναι πιθανό ότι η ενεργοποίηση STAT3 παίζει ένα ρόλο στην IL-6 μεταδίδει σε μεταγενέστερους στόχους που ρυθμίζουν ΕΜΤ και διεισδυτικότητα.

Δείξαμε ότι η IL-6 επίπεδα στον ορό και στα ούρα ήταν αυξημένα σε μια υποομάδα ασθενών με διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης, σύμφωνα με άλλες ερευνητικές [13], [27]. Η αγγειογένεση είναι ένας από τους μηχανισμούς που προωθούν την εξέλιξη του όγκου, και η έκφραση αγγειογόνων παραγόντων προτείνεται να έχουν προγνωστική αξία για την ανταπόκριση στη θεραπεία και την έκβαση σε ασθενείς με καρκίνο [28]. Επιπλέον, η IL-6 έχει αναφερθεί ότι παίζει πολλαπλές λειτουργίες στην αγγειογένεση και την αγγειακή μοντελοποίηση [29], και να αυξήσει την αγγειογένεση μεταγραφική του VEGF και ΜΜΡ-9 σε STAT3-εξαρτώμενο τρόπο. ενεργοποίηση STAT3 καταδείχθηκε να ρυθμίζει την έκφραση των γονιδίων που μεσολαβούν την αγγειογένεση?

e

.

g

., VEGF [30]. Κατά συνέπεια, οι δεσμοί μεταξύ της IL-6, την αγγειογένεση, και την προώθηση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε ποντικούς που φέρουν όγκο ερευνήθηκαν περαιτέρω στην παρούσα μελέτη. Χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο όγκου ξενομοσχεύματος, τα δεδομένα μας έδειξαν ότι η IL-6 επίπεδο θετικά με την αγγειογένεση και την ενεργοποίηση STAT3. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι η επαγωγή της αγγειογένεσης που προκαλείται από την ενεργοποίηση STAT3 μπορεί να είναι ένας από τους μηχανισμούς που διέπουν την επιθετικότητα των IL-6-θετικού καρκίνου της ουροδόχου κύστης.

αναφερθεί στο παρελθόν [21] ότι DNMT1 μπορούσε να είναι ένα σημαντικό κλινικό προγνωστικό του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Μελέτες έχουν αναγνωρίσει ότι η έκφραση DNMT1 μπορεί να τροποποιηθεί άμεσα από προ-φλεγμονώδεις κυτοκίνες όπως η IL-6 σε ορισμένους τύπους κακοηθειών [5], [31], [32]. Μια θετική συσχέτιση μεταξύ της IL-6-θετικά δείγματα και πυρηνική χρώση για DNMT1 βρέθηκε με ανάλυση IHC στην παρούσα μελέτη. Η σχέση μεταξύ της IL-6 /σηματοδότηση STAT3 και DNMT1 σε καρκίνο της ουροδόχου κύστης εξετάστηκε περαιτέρω για να δούμε αν ρύθμιση των IL-6 /STAT3 αποτελέσματα σηματοδότησης σε αλλαγές της έκφρασης DNMT1. Η ανάλυση mRNA και η πρωτεΐνη αποκάλυψε ότι αναστέλλει IL-6 σηματοδότηση κατασταλεί έκφραση πυρηνικών DNMT1 σχετίζονται με μειωμένη ρ-ΑΚΤ και π-STAT3. Ωστόσο, απ ‘ευθείας αναστολή της STAT3 με STAT3 siRNA δεν είχε καμία εμφανή επίδραση στην έκφραση DNMT1. Η φωσφορυλίωση της Akt κινάσης έχει αναφερθεί ότι είναι ο μηχανισμός που ευθύνεται για ενισχυμένη έκφραση DNMT1 διεγείρονται από την IL-6 [33], [34]. Όταν μπλοκαριστεί φωσφοϊνοσιτιδίου 3 κινάση /Akt σηματοδοσίας χρησιμοποιώντας το ειδικό αναστολέα LY294002, η εξασθένηση της ενεργοποίησης ΑΚΤ συνδέθηκε με μειωμένη DNMT1. Ως εκ τούτου, προτείνουν ότι ενεργοποιείται IL-6 σηματοδότηση αυξημένη ενεργοποίηση των DNMT1 διαμεσολαβείται από την ενεργοποίηση της Akt σε TCC της ουροδόχου κύστης.

Εντοπισμός πιθανών παραγόντων έχει σημαντικές συνέπειες για την ανάπτυξη και την επιλογή των μοριακών στόχων στη θεραπεία του καρκίνου. πειραματικά δεδομένα μας έδειξαν ότι το επίπεδο του IL-6 είναι σημαντική για την επιθετική συμπεριφορά όγκου που φαίνεται στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης. Ως εκ τούτου, εξετάσαμε περαιτέρω την προβλεπτική ικανότητα των IL-6 όσον αφορά την κλινική έκβαση της ουροδόχου κύστης TCC μετά την οριστική CCRT. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι η ενισχυμένη έκφραση της IL-6 σχετίζεται σημαντικά με χαμηλότερο ποσοστό πλήρους ανταπόκρισης μετά τη θεραπεία, ένα υψηλότερο ποσοστό αποτυχίας της νόσου και μικρότερη περίοδο επιβίωσης, αποδεικνύοντας έναν ρόλο της IL-6 στην πρόβλεψη πρόγνωση. Τα δεδομένα που ελήφθησαν από την παρούσα μελέτη αποκάλυψε ότι η αυξημένη παραγωγή IL-6 είναι κρίσιμη σε επιθετικότητα του όγκου και την πρόγνωση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. Εμείς περιγράφονται τα κύρια μονοπάτια σηματοδότησης που πιστεύεται ότι συνδέει την IL-6 στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης (Σχ. 7).

Η

Εκτός από IL-6, αρκετές κυτοκίνες έχουν αναφερθεί ότι είναι σημαντικές σε μελέτες της ουροδόχου κύστης Καρκίνος. ΤΝΡ-α έχει δειχθεί ότι διεγείρουν καρκίνο της ουροδόχου κύστης κύτταρα να παράγουν ΜΜΡ-9, η οποία έχει εμπλακεί στην invaαsion και μετάσταση όγκου [35]. Μιάν et. al. ανέφεραν ότι η IL-8 αποκλεισμός ανέστειλε σημαντικά την έκφραση των ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9, με αποτέλεσμα την μείωση εισβολή [36]. Επιπλέον, η αυξημένη έκφραση της IL-8 συσχετίζεται με κακή πρόγνωση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης [37]. Η φλεγμονή μπορεί να θεωρηθεί ότι καθιστά δυνατή για τη συμβολή του στην απόκτηση των βασικών ικανοτήτων σήμα κατατεθέν. Οι βιολογικοί μηχανισμοί που συνδέουν την επιθετικότητα του όγκου σε IL-6, IL-8 και ΤΝΡ α δεν είναι σαφώς κατανοητή. Το θέμα χρειάζεται περαιτέρω έρευνα στο μέλλον.

Η μελέτη μας έχει ορισμένους περιορισμούς. Πρώτον, εξετάσαμε αναδρομικά την προγνωστική αξία της IL-6 σε ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης μόνο από το κλάσμα θετική χρώση. Επίσης, είναι μια αναδρομική ανάλυση ενός πληθυσμού με διαφορετικά κλινικά στάδια από ένα μόνο φορέα. Ως εκ τούτου, απαιτούνται περαιτέρω έρευνες σχετικά με τα επίπεδα της IL-6 σε ασθενείς με διάφορα στάδια σε μια προοπτική μελέτη που απαιτείται.

Στο σύνολό τους, τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι η IL-6 είναι ζωτικής σημασίας για την επιθετική ανάπτυξη του όγκου, και η κλινική έκβαση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης μετά οριστική ραδιοθεραπεία. Τα δεδομένα που υποστηρίζουν την αναδυόμενη υπόθεση ότι η IL-6 είναι μια κλινικά σημαντική προγνωστική ικανότητα πρόβλεψης και μπορεί να αντιπροσωπεύει ένα κατάλληλο στόχο για τη θεραπεία του καρκίνου της ουροδόχου κύστης.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

IL-6 αναστολή εξασθενεί την ικανότητα εισβολής. Η επεμβατική ικανότητα σε καρκινικά κύτταρα κύστης με ή χωρίς IL-6 διάνυσμα σίγησης αξιολογήθηκε. Τα αποτελέσματα φαίνονται από την αντιπροσωπευτική διαφάνειες και ποσοτικά δεδομένα. Ποσοτικοποίηση της ικανότητας εισβολής μετρώντας τον αριθμό των κυττάρων που εισβάλλουν για κάθε κατάσταση. Ο γ-άξονας αντιπροσωπεύει την αναλογία κανονικοποιηθεί από την τιμή της αντίστοιχης κυτταρικής γραμμής κάτω από συνθήκες ελέγχου. Στήλη, σημαίνει από τρία ξεχωριστά πειράματα? Bar, SD. *,

P

& lt? 0,05

doi: 10.1371 /journal.pone.0061901.s001

(ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω τον Δρ