Αφηρημένο

Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μια θανατηφόρα ασθένεια, και τις στρατηγικές ως εκ τούτου αποτελεσματική θεραπεία ή /και πρόληψη χρειάζονται επειγόντως. Οι στόχοι αυτής της μελέτης ήταν να εξετάσει τους μοριακούς μηχανισμούς με τους οποίους embelin ανέστειλε την ανάπτυξη ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος

in vitro

, και ξενομοσχευμάτων σε ποντικούς Balb C γυμνούς ποντικούς, και του παγκρέατος ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων που απομονώθηκαν από Kras

G12D διαγονιδιακά ποντίκια. δοκιμασίες ΧΤΤ διεξήχθησαν για μέτρηση της κυτταρικής βιωσιμότητας. κύτταρα AsPC-1 εγχύθηκαν υποδορίως σε Balb c γυμνούς ποντικούς και κατεργάζεται με embelin. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων και την απόπτωση μετρήθηκαν με χρώση Ki67 και TUNEL, αντίστοιχα. Η έκφραση του Akt, και Sonic hedgehog (Shh) και των προϊόντων τους γονιδίου στόχου μετρήθηκαν με την ανοσοϊστοχημεία, και ανάλυση στυπώματος Western. Τα αποτελέσματα της embelin στα παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα που απομονώνονται από 10 μήνες Εξετάστηκαν επίσης παλιά Kras

ποντίκια G12D. Embelin ανέστειλε την κυτταρική βιωσιμότητα σε καρκίνο του παγκρέατος AsPC-1, PANC-1, ΜΙΑ PaCa-2 και κυτταρικές σειρές Hs 766T, και αυτές οι ανασταλτικές επιδράσεις είχαν μπλοκαριστεί είτε με συστατικώς δραστική πρωτεΐνη Akt ή Shh. Embelin-ποντικούς που υπέστησαν αγωγή έδειξαν σημαντική αναστολή στην ανάπτυξη του όγκου που σχετίζεται με μειωμένη έκφραση των δεικτών του κυτταρικού πολλαπλασιασμού (Κί67, PCNA και Bcl-2) και του κυτταρικού κύκλου (κυκλίνη D1, CDK2, και CDK6), και επαγωγή απόπτωσης (ενεργοποίηση του κασπάσης-3 και διάσπαση της PARP, και αυξημένη έκφραση του Bax). Επιπλέον, embelin ανέστειλε την έκφραση των δεικτών της αγγειογένεσης (COX-2, VEGF, VEGFR, και IL-8), και μετάσταση (ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9) σε ιστούς όγκων. Η αντικαρκινική δράση του embelin συσχετίστηκε με την αναστολή των οδών Akt και Shh σε ξενομοσχεύματα, και παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα που απομονώνονται από Kras

ποντίκια G12D. Επιπλέον, embelin επίσης ανέστειλε επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά μετάβασης (ΕΜΤ) έως ρύθμισης Ε-καδερίνης και αναστολή της έκφρασης του σαλιγκαριού, Slug, και ZEB1. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι μπορούν να αναστείλουν embelin παγκρεατικό ανάπτυξη του καρκίνου, η αγγειογένεση και μετάσταση καταστέλλοντας οδούς Akt και Shh, και μπορεί να αναπτυχθεί για τη θεραπεία ή /και πρόληψη του καρκίνου του παγκρέατος

Παράθεση:. Huang Μ, Tang SN, Upadhyay G, Marsh JL, Jackman CP, Shankar S, et al. (2014) Embelin καταστέλλει την ανάπτυξη των ανθρωπίνων καρκίνο του παγκρέατος Ξενομοσχεύματα, και καρκίνο του παγκρέατος κύτταρα που απομονώνονται από Kras

G12D ποντίκια από ανασταλτικός Akt και Sonic Hedgehog Pathways. PLoS ONE 9 (4): e92161. doi: 10.1371 /journal.pone.0092161

Επιμέλεια: Irina U. Agoulnik, Διεθνές Πανεπιστήμιο της Φλόριντα, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: May 11, 2013? Αποδεκτές: 19 Φεβρουαρίου 2014? Δημοσιεύθηκε: δεύτερης Απριλίου 2014

Copyright: © 2014 Huang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μια άκρως επιθετική κακοήθη νοσήματα σε όλο τον κόσμο . Το συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5 ετών αυτής της θανάσιμης ασθένειας είναι λιγότερο από 5% [1]. Λόγω του διηθητικού και μεταστατικές χαρακτηριστικά του, & lt? 10% των ασθενών είναι κατάλληλοι για εγχείρηση κατά τη στιγμή της διάγνωσης. Η κακή πρόγνωση της νόσου σχετίζεται με καθυστερημένη παρουσίαση, επιθετική τοπική εισβολή και νωρίς μετάσταση. Συμβατική χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία είναι γενικά αναποτελεσματική, και η εμφάνιση ανθεκτικότητας στα φάρμακα είναι κοινή [2], [3]. Η γεμσιταβίνη είναι ένα ισχυρό αντικαρκινικό φάρμακο εγκριθεί για τη θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος, αλλά το ποσοστό ανταπόκρισης είναι πολύ κακή. Οι κυριότερες ελλείψεις της τρέχουσας θεραπείας γκεμσιταμπίνης είναι ταχεία μεταβολική αδρανοποίηση του και στενό θεραπευτικό παράθυρο. FOLFOX χημειοθεραπεία (φολινικό οξύ, 5-φλουορουρακίλη και οξαλιπλατίνη) χρησιμοποιείται συνήθως για τη θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος με περιορισμένη επιτυχία. Διάφοροι παράγοντες που σχετίζονται με αυξημένο κίνδυνο για καρκίνο του παγκρέατος και σε αυτά περιλαμβάνονται ο διαβήτης, η χρόνια παγκρεατίτιδα, πριν γαστρική χειρουργική επέμβαση, το κάπνισμα, την ακτινοβολία, και ειδικών πολυμορφισμών γονιδίου [4], [5]. Κληρονομική και αρκετές αποκτήθηκαν μεταλλάξεις γονιδίου (π.χ. Kras) είναι κοινά σε όγκους του παγκρέατος [6]. Μεταλλάξεις στο εξαρτώμενη από κυκλίνη αναστολέα κινάσης ρ16, το ογκοκατασταλτικό γονίδιο

p53,

και Smad4 έχουν επίσης εντοπιστεί [7], [8]. Ως εκ τούτου, η κατανόηση της παθογένειας της preinvasive στάδιο, και την ανάπτυξη αποτελεσματικών στρατηγικών για την πρόληψη και /ή τη θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος είναι υψίστης σημασίας.

Embelin, που προέρχεται από τον καρπό του

Embelia Ribes

Burm φυτό (Myrsinaceae), έχουν αποδειχθεί ότι κατέχουν αντικαρκινική δραστικότητα [9]. Παρόλο που αρχικά ανακαλύφθηκε ως αναστολέας ΧΙΑΡ [10], και αυτό επίσης αναστέλλει την κυτταρική μετανάστευση και εισβολή και επάγει την απόπτωση [11]. Έχει αποδειχθεί ότι διεγείρει απόπτωση σε παγκρέατος, του παχέος εντέρου, του προστάτη και του καρκίνου του πνεύμονα κυττάρων και χρόνια λευχαιμία και πολλαπλό κύτταρα μυελώματος [12], [13]. Μπορεί επίσης να ρυθμίζουν τον όγκο του ανοσοποιητικού μικροπεριβάλλον στο Kras

ποντίκια G12D [14]. Επιπλέον, STAT3 μονοπάτι έχει δειχθεί ότι ρυθμίζουν τις δραστηριότητες αντι-φλεγμονώδη και αντι-καρκινικών embelin [15]. Ενισχύει τις προ-απόπτωσης της TRAIL [16]. Παρά τις διαπιστώσεις αυτές, τους μοριακούς μηχανισμούς μέσω των οποίων embelin αναστέλλει την ανάπτυξη όγκου, αγγειογένεση και μετάσταση δεν είναι καλά κατανοητή.

Η PI3K /Akt μονοπατιού σηματοδότησης παίζει σημαντικό ρόλο στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την επιβίωση, και είναι συχνά και ενεργοποιούνται ανωμάλως σε μεταγενέστερα στάδια της πορογενές αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος (PDAC) [17]. PTEN ποντίκια knockout όρους με ενεργό Kras

G12D έδειξαν σημαντικά επιταχυνόμενη ανάπτυξη των κυψελοειδών για τον πόρο μεταπλασία (ADM), κακοήθη παγκρέατος ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (mPanIN), και PDAC μέσα σε 12 μήνες [18]. Το πιο σημαντικό, όλα τα ποντίκια με Kras

ενεργοποίηση G12D και ομόζυγη διαγραφή PTEN υπέκυψε στον καρκίνο κατά 21 ημέρες. Η μελέτη αυτή επιβεβαίωσε το ρόλο PTEN, και το προκύπτον απορύθμιση της PI3K /AKT σηματοδότησης άξονα στην έναρξη και την εξέλιξη PDAC. Ομοίως, έχουμε δείξει πρόσφατα ότι η ρεσβερατρόλη μπορεί να εμποδίσει την παγκρέατος καρκινογένεση στο Kras

ποντίκια G12D [19]. Εδώ, επιδιώξαμε να εξετάσει τις αντι-πολλαπλασιαστικές επιδράσεις της embelin στα παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα που απομονώνονται από Kras

ποντίκια G12D.

Sonic hedgehog (Shh) είναι μέλος του Hedgehog (Hh) οικογένεια εκκρινόμενων σηματοδότησης πρωτεΐνες που έχουν διάφορες λειτουργίες κατά τη διάρκεια των σπονδυλωτών ανάπτυξη και στην ομοιόσταση των ιστών [20]. Ακατάλληλη δραστικότητα του μονοπατιού σηματοδότησης Hh έχει συνδεθεί με τους τύπους όγκων που προκύπτουν σποραδικά ή σε γενετικά προδιατεθειμένα άτομα [21]. Η σύνδεση του Shh να Patched (Ptch) υποδοχείς προκαλεί απώλεια δραστικότητας Ptch και επακόλουθη φωσφορυλίωση και μετα-μεταγραφική σταθεροποίηση του smoothened (SMO), [22]. Η οικογένεια Gli παραγόντων μεταγραφής ρυθμίζει αρκετών γονιδίων τα οποία paly ρόλους στον κυτταρικό κύκλο, τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την απόπτωση [23]. Είναι ενδιαφέρον, Gli ρυθμίζει την ίδια την έκφραση της και άλλα μέλη της Shh οδού όπως Patched 1 και Patched 2 και παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα που απομονώνονται από Kras

ποντίκια G12D. Η ενεργοποίηση της Shh μέσω Smo μπορεί να συμβεί είτε με διέγερση της πρωτεΐνης Hh ή μέσω απώλεια δραστικότητας Ptch [23]. Shh μονοπάτι διεγείρει την ανάπτυξη των κυττάρων σε αυτοκρινή και παρακρινή τρόπο [24]. Έχουμε αποδείξει προσφάτως ότι διάφοροι παράγοντες προφύλαξης και αντικαρκινικά φάρμακα μπορούν να αναστείλουν την ανάπτυξη των κυττάρων του παγκρέατος καρκινικών κυττάρων και βλαστικών καρκίνο in vitro και in vivo [19], [25] – [31]. Η αναστολή της μόνη της ή σε συνδυασμό με άλλους Shh μονοπάτι μπορεί να είναι αποτελεσματική για τη θεραπεία ή /και πρόληψη του καρκίνου του παγκρέατος.

Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να εξετάσει τους μοριακούς μηχανισμούς με τους οποίους embelin αναστέλλει την ανάπτυξη όγκου, αγγειογένεση , και μετάσταση των παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων ξενομόσχευμα σε Balb C γυμνούς ποντικούς. Επιπλέον, οι μοριακοί μηχανισμοί με τους οποίους embelin ανέστειλε την ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων που απομονώνονται από Kras

Εξετάστηκαν επίσης τα ποντίκια G12D. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι embelin ανέστειλε την ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων

in vitro,

AsPC-1 ανάπτυξη του όγκου ξενομοσχεύματος

in vivo

και τα παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα που απομονώνονται από Kras

ποντίκια G12D με την καταστολή Akt και Shh μονοπάτια σηματοδότησης. Εν κατακλείδι, μπορεί να αναπτυχθεί για την πρόληψη ή /και θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος.

Αποτελέσματα

Embelin Αναστέλλει τη βιωσιμότητα των κυττάρων στον καρκίνο του παγκρέατος κυτταρικές γραμμές

Θα εξεταστεί πρώτα η αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της embelin σε τέσσερις παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές AsPC-1, PANC-1, ΜΙΑ PaCa-2 και Hs 766T με δοκιμασία ΧΤΤ. Αυτές οι κυτταρικές γραμμές υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με embelin (0-15 μΜ) για 48 ώρες, και η βιωσιμότητα των κυττάρων πραγματοποιήθηκε με δοκιμασίες ΧΤΤ. Όπως φαίνεται στο Σχ. 1Α και Β, embelin ανέστειλε την κυτταρική βιωσιμότητα σε όλες τις κυτταρικές σειρές. Στη συνέχεια εξετάσαμε τη συμμετοχή της κασπάσης σε αυτή τη διαδικασία χρησιμοποιώντας ένα τηγάνι αναστολέα της κασπάσης z-VAD-fmk. Αν και z-VAD-αναστολέα μόνη ήταν αναποτελεσματική στην αναστολή της βιωσιμότητας των κυττάρων, είναι αποκλεισμένη σημαντικά αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της embelin σε κυτταρικές σειρές PANC-1 (Σχ. 1 Γ και Δ) AsPC-1 και. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι κασπάσης (ες) μπορεί να χρειάζονται ενεργοποίηση για την αναστολή της ανάπτυξης των κυττάρων από embelin.

, κυτταρικές σειρές (Α και Β), ο καρκίνος του παγκρέατος AsPC-1, PANC-1 ΜΙΑ PaCa-2 και Hs 766T υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με embelin (0-15 μΜ) για 48 ώρες. Στο τέλος της περιόδου επώασης, ΧΤΤ δοκιμασίες διεξήχθησαν για μέτρηση της κυτταρικής βιωσιμότητας. (Γ και Δ), Επιδράσεις των τηγάνι αναστολέα της κασπάσης για αντι-πολλαπλασιαστικές επιδράσεις της embelin. Ο καρκίνος του παγκρέατος AsPC-1 και PANC-1 κύτταρα προεπωάστηκαν z-VAD-fmk (10 μΜ) για 2 ώρες και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με διάφορες δόσεις embelin (0-15 μΜ) για 48 ώρες. Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε με δοκιμασία ΧΤΤ. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τον μέσο όρο ± S.D. α, β, γ, δ, και ε = σημαντικά διαφορετική από την αντίστοιχη του ελέγχου, η P & lt?. 0.05

Η

συστατικά ενεργός Akt ή Shh πρωτεΐνη αναστέλλει την αντι-πολλαπλασιαστικές επιδράσεις των Embelin

Akt έχει δειχθεί να ρυθμίζει Shh μονοπάτι με φωσφορυλίωση Gli. Στη συνέχεια εξετάσαμε εάν η ενεργοποίηση του Akt και Shh τις οδούς μπλοκ αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της embelin χρησιμοποιώντας συστατικώς δραστική πρωτεΐνη Akt και Shh, αντίστοιχα. Ουσιαστικά δραστική Akt (CA-Akt) έχει περιγραφεί προηγουμένως [28]. Διάφορες δόσεις του embelin (0-15 μΜ) ανέστειλε κυτταρική βιωσιμότητα των κυττάρων επιμολυσμένα με άδειο φορέα (Εικ. 1Α και Β) AsPC-1 και-1 PANC. Επιπλέον, ουσιαστικά δραστική Akt (CA-Akt) ανέστειλε σημαντικά την αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της embelin σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι embelin μπορούν να αναστείλουν τον πολλαπλασιασμό των παγκρεατικών κυττάρων καρκίνου καταστέλλοντας Akt μονοπάτι.

επόμενο εξετάστηκε εάν η Shh μεσολαβεί μονοπάτι αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της embelin. Παγκρέατος κυτταρικές γραμμές καρκίνου επωάστηκαν με Shh πρωτεΐνη να ενεργοποιήσει Gli. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2 Γ και Δ, διάφορες δόσεις embelin (0-15 μΜ) ανέστειλε κυτταρική βιωσιμότητα των κυτταρικών γραμμών AsPC-1 και PANC-1. Αντίθετα, η Shh πρωτεΐνη ανέστειλε σημαντικά την αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της embelin σε αυτούς τους δύο παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι embelin μπορούν να αναστείλουν τον πολλαπλασιασμό των παγκρεατικών κυττάρων καρκίνου καταστέλλοντας Shh μονοπάτι.

(Α και Β), η αναστολή των αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της embelin με ιδιοσυστατικά ενεργή Akt. Παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα AsPC-1 και PANC-1 επιμολύνθηκαν παροδικά είτε με κενό φορέα ή ουσιαστικά δραστική Akt (CA-Akt), και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με διάφορες δόσεις embelin (0-15 μΜ) για 48 ώρες. Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε με δοκιμασία ΧΤΤ. (Γ και Δ), η αναστολή των αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της embelin από την Shh πρωτεΐνη. Ο καρκίνος του παγκρέατος AsPC-1 και τα κύτταρα PANC-1 προκατεργάστηκαν με πρωτεΐνη Shh (2 μΜ) για 2 ώρες, και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με διάφορες δόσεις embelin (0-15 μΜ) για 48 ώρες. Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε με δοκιμασία ΧΤΤ. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τον μέσο όρο ± S.D. A, AA, β, γ, δ, και ε = σημαντικά διαφορετικό από το άλλο, η P & lt?. 0.05

Η

Embelin αναστέλλει την ανάπτυξη των AsPC-1 ξενομοσχεύματα σε Balb C Nude ποντίκια

προκειμένου να εξεταστεί η ογκογόνο δυναμικό του embelin, εξετάσαμε πρώτα τις επιδράσεις της embelin επί της ανάπτυξης AsPC-1 ξενομόσχευμα όγκων σε Balb C γυμνούς ποντικούς. κύτταρα AsPC-1 εγχύθηκαν υποδορίως στα πλευρά του Balb C Nude ποντίκια. Μετά το σχηματισμό του όγκου, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με embelin (0 ή 40 mg /kg σωματικού βάρους), μέσω καθετηριασμού (από Δευτέρα έως Παρασκευή, μία φορά την ημέρα) για 6 εβδομάδες. Όπως φαίνεται στο Σχ. 1Α, embelin ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου του παγκρέατος AsPC-1 σε Balb C γυμνούς ποντικούς. Επιπλέον, embelin δεν είχε καμία επίδραση στο σωματικό βάρος του AsPC-1 ποντικών που φέρουν όγκο, αν και τα ποντίκια κέρδισαν βάρος κατά τη διάρκεια της θεραπείας (Εικ. 3Β). Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι δεν τήρησε καμία τοξικότητα στο ήπαρ, σπλήνα και το έντερο των ποντικών που έλαβαν θεραπεία με embelin, γεγονός που υποδηλώνει ότι είναι ένα ασφαλές φυσικό προϊόν.

AsPC-1 κύτταρα (2 × 10

6 κύτταρα αναμιγνύονται με Matrigel, 50:50 αναλογία) εμφυτεύθηκαν υποδορίως στα πλευρά του Balb C γυμνών ποντικών. ποντίκια που φέρουν όγκου υποβλήθηκαν σε αγωγή με embelin (0 ή 40 mg /kg σωματικού βάρους), μέσω καθετηριασμού (από Δευτέρα έως Παρασκευή, μία φορά την ημέρα) για 6 εβδομάδες. Ο όγκος του όγκου (Α) και το σωματικό βάρος των ποντικών (Β) καταγράφηκαν κάθε εβδομάδα. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τον μέσο όρο ± S.D. * = Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο, Ρ & lt? 0,05

Η

Embelin Αναστέλλει Tumor πολλαπλασιασμό των κυττάρων, και επάγει την απόπτωση μέσω της ενεργοποίησης της κασπάσης-3 και διάσπαση πολυ (ΑΟΡ-ριβόζη) πολυμεράσης (PARP)

Εξετάσαμε επόμενο τις επιδράσεις της embelin στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε ιστούς όγκων που προέρχονται από τον έλεγχο και την embelin ποντίκια με αγωγή με χρήση αντι-ΡΟΝΑ ή αντι-Κί67 αντισωμάτων (Εικ. 4). PCNA και Κί67 είναι οι δείκτες του κυτταρικού πολλαπλασιασμού. Embelin ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε ιστούς όγκων που λαμβάνονται από AsPC-1 ξενομοσχευμάτων σε σύγκριση με τα ποντίκια ελέγχου, όπως μετρήθηκε με ανοσοϊστοχημεία (IHC) και η ανάλυση στυπώματος Western (WB).

(Α), Έκφραση PCNA, Κί67, κασπάσης-3, και PARP σε ιστούς όγκων. Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε για να μετρηθεί η έκφραση του PCNA, Ki67, δραστική κασπάση-3 και PARP σε ιστούς όγκων απομονώνονται από τον έλεγχο και ποντικούς embelin αγωγή. (Β), Ποσοτικοποίηση των TUNEL θετικών κυττάρων. Η απόπτωση μετρήθηκε με δοκιμασία TUNEL. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τον μέσο όρο ± S.D. * = Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο, η P & lt? 0,05. (C), Effects of embelin στους δείκτες του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και απόπτωσης. Η ανάλυση στυπώματος Western εκτελέστηκε για να μετρηθεί η έκφραση του PCNA, Ki67, κασπάσης-3 και PARP σε ιστούς όγκων. Η β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

Η ενεργοποίηση της κασπάσης και διάσπαση της PARP υποστρώματος του είναι τα σημάδια αίθουσα της απόπτωσης [32]. Στη συνέχεια εξετάσαμε εάν επάγεται embelin των κυττάρων του όγκου απόπτωση μέσω της ενεργοποίησης της κασπάσης-3 και διάσπαση της PARP. Η ενεργοποίηση της κασπάσης-3 μετρήθηκε με IHC και ανάλυση στυπώματος Western χρησιμοποιώντας ενεργό αντι-κασπάση-3 αντίσωμα (Σχ. 4Α και Β). Embelin που προκαλείται κασπάσης-3 ενεργοποίησης. PARP είναι ένα υπόστρωμα της κασπάσης-3 [32]. θεραπεία Embelin οδήγησε σε διάσπαση της PARP. Η ενεργοποίηση της κασπάσης-3 με embelin συσχετίζεται με τη διάσπαση της PARP σε ιστούς όγκων. Συνολικά, αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι embelin ανέστειλε τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την απόπτωση που επάγεται σε παγκρεατικά ιστούς όγκου μέσω αναστολής του PCNA, Ki67, και ενεργοποίηση της κασπάσης-3 και διάσπαση της PARP.

Embelin Ρυθμίζει Bcl-2 Μέλη της οικογένειας και Κυττάρων κύκλος Πρωτεΐνες, και αναστέλλει Akt ενεργοποίηση σε καρκινικών ιστών

Τα μέλη της οικογένειας Bcl-2 μπορούν είτε να προάγουν ή αναστέλλουν την απόπτωση [33], [34]. Ανάπτυξη σύλληψης από αναστολείς του κυτταρικού κύκλου μπορεί να οδηγήσει σε διέγερση απόπτωσης [35]. Ως εκ τούτου, μετρήθηκαν οι επιδράσεις του embelin στην έκφραση των πρωτεϊνών του κυτταρικού κύκλου (Κυκλίνη D1, CDK-2, και CDK-6), και Bcl-2 μελών της οικογένειας (Bcl-2, και Bax) σε ιστούς όγκων με ανάλυση κηλίδας Western και ανοσοϊστοχημεία. Όπως φαίνεται στο Σχ. 5, embelin ανέστειλε την έκφραση των πρωτεϊνών που σχετίζονται με τον κυτταρικό κύκλο κυκλίνης-D1, CDK-2 και CDK-6 στο AsPC-1 ξενομόσχευμα όγκων συγκριτικά με την ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία. Επιπλέον, embelin θεραπεία του AsPC-1 ξενομόσχευμα ποντικούς είχε σαν αποτέλεσμα την αναστολή της αντι-αποπτωτική πρωτεΐνη Bcl-2 και την επαγωγή του προ-αποπτωτική πρωτεΐνη Bax σε όγκους σε σύγκριση με ομάδα ελέγχου χωρίς αγωγή. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι μπορεί να ρυθμίσει embelin παγκρεατικού ανάπτυξη του όγκου του καρκίνου, προκαλώντας διακοπή του κυτταρικού κύκλου και επαγωγή απόπτωσης.

(Α), Έκφραση Bcl-2, Βαχ, κυκλίνη D1, CDK2, CDK6 και φωσφο-Akt. Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε όπως περιγράφεται στα υλικά και μεθόδους. (Β), ανάλυση στυπώματος Western εκτελέστηκε για να μετρηθεί η έκφραση του Bcl-2, Βαχ, κυκλίνη D1, CDK-2, CDK-6, π-ΑΚΤ (Ser473) και ΑΚΤ. Η β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

Ο ΡΙ3Κ /Akt μονοπάτι σηματοδότησης ρυθμίζει την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου και την καρκινογένεση, και είναι ουσιαστικά δραστική σε παγκρεατικά καρκινικά [36]. Anticancer παράγοντες που αναστέλλουν ΡΙ3Κ /Akt μονοπάτι μπορεί να αναπτυχθεί για τη διαχείριση του καρκίνου του παγκρέατος. Ως εκ τούτου, τη μέτρηση της έκφρασης του φωσφο-Akt σε ιστούς όγκου (Εικ. 5). Embelin ανέστειλε την έκφραση των pAkt σε ιστούς όγκων απομονώνονται από AsPC-1 ξενομοσχευμάτων σύγκριση με την ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία. Συνολικά, αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι embelin αναστέλλει ΡΙ3Κ /Akt μονοπάτι σε AsPC-1 ξενομόσχευμα όγκων, και η αναστολή της Akt μονοπατιού θα μπορούσε να προκαλέσει διακοπή του κυτταρικού κύκλου, καταστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του όγκου και την ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος.

Embelin αναστέλλει την αγγειογένεση

Η ανάπτυξη των συμπαγών όγκων εξαρτάται από την αγγειογένεση για την παροχή θρεπτικών συστατικών, αυξητικούς παράγοντες και οξυγόνο [37]. Αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα είναι μία εκκρινόμενη αυξητικός παράγοντας απαραίτητη για την αγγειογένεση. λειτουργίες VEGF τόσο φυσιολογικές και παθολογικές αγγειογένεση, ιδιαίτερα σε μετάσταση όγκου, γεγονός που το καθιστά ελκυστικό θεραπευτικό στόχο. Ως εκ τούτου, προσπάθησε να μετρήσει τις επιπτώσεις της embelin την αγγειογένεση με μέτρηση της έκφρασης του VEGF και VEGFR σε AsPC-1 ξενομοσχεύτηκε όγκων. Όπως φαίνεται στο Σχ. 6, η αγωγή των ποντικών που φέρουν όγκο με embelin είχε ως αποτέλεσμα σημαντική αναστολή στην έκφραση του VEGF και VEGFR σε ιστούς όγκου σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία.

(Α), Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε για να εξετάσει την έκφραση του VEGF, VEGFR, Cox -2, και IL-8 σε ιστούς όγκων απομονώνονται από τον έλεγχο και ποντικούς embelin αγωγή. (Β), ανάλυση στυπώματος Western εκτελέστηκε για να μετρηθεί η έκφραση του VEGF, VEGFR, Cox-2, και IL-8. Η β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (C), Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε για να εξεταστεί η έκφραση της Ε-καδερίνης, σαλιγκάρι, Slug, ZEB1, ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 σε ιστούς όγκων απομονώνονται από τον έλεγχο και ποντικούς embelin αγωγή. (D), ανάλυση στυπώματος Western εκτελέστηκε για να μετρηθεί η έκφραση της Ε-καδερίνης, σαλιγκάρι, Slug, ZEB1, ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9. Η β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

κυκλοοξυγενάσης-2 (COX-2) υπερέκφραση προωθεί φλεγμονή, πολλαπλασιασμό των ενδοθηλιακών κυττάρων, μετάσταση και η ογκογένεση [38]. Ως εκ τούτου, εξετάστηκε αν embelin αναστέλλει την έκφραση της COX-2 σε AsPC-1 ξενομόσχευμα όγκων. Όπως SHWON στο Σχ. 6, embelin ανέστειλε την έκφραση της COX-2 σε ιστούς όγκων απομονώνονται από AsPC-1 ξενομοσχευμάτων σύγκριση με την ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι embelin μπορεί να καταστείλει τη φλεγμονή και την ανάπτυξη του όγκου του παγκρέατος με την καταστολή του COX-2.

Οι κυτοκίνες έχουν εμπλακεί στην έναρξη, την εξέλιξη και τη μετάσταση των συμπαγών όγκων και την αγγειογένεση [39]. Έχουμε αναφέρει πρόσφατα την απορύθμιση της έκφρασης κυτοκίνης ή /και σηματοδότηση σε παγκρεατικού καρκίνου [14], [25], [31]. Ο άξονας του υποδοχέα IL-8 /IL-8 παίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην μετάσταση και ανάπτυξη όγκου, και επίσης ρυθμίζουν μικροπεριβάλλον του όγκου [39]. Ως εκ τούτου, μετράται η έκφραση της IL-8 σε ιστούς όγκων απομονώνονται από τον έλεγχο και ξενομοσχεύματα embelin επεξεργασμένο. Θεραπεία της AsPC-1 ξενομόσχευμα ποντικούς με embelin οδήγησε σε καταστολή της IL-8 σε σύγκριση με το μη επεξεργασμένο ομάδα ελέγχου (Σχ. 6Α και Β). Αυτά τα δεδομένα προτείνουν ότι η αναστολή της άξονας του υποδοχέα IL-8 /IL-8 μπορεί να είναι σημαντική στην αναστολή του παγκρέατος ανάπτυξη του καρκίνου με embelin.

Embelin Αναστέλλει Δείκτες Επιθηλιακών-to-μεσεγχυματικά Μετάβασης (ΕΜΤ) σε AsPC-1 Ξενομοσχεύματα

Τα επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικών μετάβασης και αντίστροφη διαδικασία, μεσεγχυματικά-σε επιθηλιακό μετάβασης (ΚΟΑ), παίζουν σημαντικό ρόλο στην εμβρυογένεση, βλαστική ικανότητα, την εξέλιξη του καρκίνου, της μετάστασης και χημειοαντίσταση. Αρκετά μονοπάτια σηματοδότησης και κανονιστικού μεταγραφικά δίκτυα μπορούν να ρυθμίσουν EMT [40]. Ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα της ΕΜΤ είναι κάτω-ρύθμιση του μορίου κυτταρικής προσκόλλησης Ε-καδερίνης, και αυξητική ρύθμιση των μεσεγχυματικών δείκτη Ν-καδερίνης. Μια ποικιλία παραγόντων μεταγραφής, συμπεριλαμβανομένων των ομολόγων δακτύλου ψευδαργύρου Σαλιγκάρι (Σαλιγκάρι) και βασικούς παράγοντες έλικας-βρόχου-έλικας, όπως Twist, Zeb-1, και ZEB2, όλα αλληλεπιδρούν με το στοιχείο Ε-κουτί εντός του εγγύς περιοχή του Ε-καδερίνης υποστηρικτής. Κατά τη διάρκεια της ΕΜΤ, οι MMPs χωνέψει το εξωκυττάριας μήτρας και βασικής μεμβράνης και έτσι επιτρέπουν στα κύτταρα να εισβάλουν και να κάνουν μετάσταση [41]. Ως εκ τούτου, μετρήθηκαν οι επιδράσεις του embelin στην έκφραση της Ε-καδερίνης, σαλιγκάρι, Slug, ZEB1, ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 σε ιστούς όγκων. Θεραπεία της AsPC-1 ξενομόσχευμα ποντικών με embelin προκάλεσε την έκφραση της Ε-καδερίνης και ανέστειλε την έκφραση των ΜΜΡ-2, ΜΜΡ-9, σαλιγκάρι, Slug, και Zeb-1 σε καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με το μη επεξεργασμένο ομάδα ελέγχου (Σχ. 6 C και D). Τα δεδομένα μας δείχνουν ότι μπορούν να αναστείλουν embelin /αντίστροφη παγκρεατικού μετάσταση όγκου μέσω επαγωγής της έκφρασης της Ε-καδερίνης και αναστολής της που συνδέονται παραγόντων μεταγραφής (σαλιγκάρι, Slug, και ZEB1) και ΜΜΡ (ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9). Συνολικά, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι embelin μπορεί ένας δυνητικός αναστολέας της έγκαιρης μετάστασης.

Embelin Αναστέλλει Sonic Hedgehog Pathways, και Up-ρυθμίζει TRAIL-R1 /DR4 και TRAIL-R2 /DR5

Σσσς οδού προάγει κυτταρική εισβολή, τη μετανάστευση, τη μετάσταση, και την ανάπτυξη του όγκου με τη μεσολάβηση ένα πολύπλοκο δίκτυο σηματοδότησης σε παγκρεατικού καρκίνου [20], [42]. Αναστολή της Shh οδού έχει δειχθεί ότι καταστέλλει την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση. Ως εκ τούτου, ζήτησε να εξετάσει τα αποτελέσματα της embelin στην Shh οδό μετρώντας την έκφραση των μεταγραφικών παραγόντων Gli1 και Gli2. Gli1 ρυθμίζει τη δική της έκφραση. Θεραπεία της AsPC-1 ξενομόσχευμα ποντικούς με embelin ανέστειλε την έκφραση των Gli1 και Gli2 σε σύγκριση με μη κατεργασμένο έλεγχο (Εικ. 7 Α και Β). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι μπορούν να αναστείλουν embelin AsPC-1 ανάπτυξη του όγκου με την καταστολή Shh μονοπάτι.

(Α), Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε για να μετρηθεί η έκφραση του Gli1, Gli2, DR4 και DR5 σε καρκινικούς ιστούς που απομονώθηκαν από τον έλεγχο και την embelin κατεργασμένα ποντίκια. (Β), ανάλυση στυπώματος Western εκτελέστηκε για να μετρηθεί η έκφραση του Gli1, Gli2, DR4 και DR5. Η β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης

Η

Έχουμε αποδείξει ότι η ενεργοποίηση του μονοπατιού υποδοχέα TRAIL-θάνατος προκαλεί απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα [43] – [45].. Από TRAIL-R1 /DR4 και TRAIL-R2 /DR5 επάγονται από την αναστολή της δραστικότητας Gli [29], οι αναστολείς Shh μπορεί να συνδυαστεί με το TRAIL συνδέτη να διεγείρει απόπτωση. Κατά συνέπεια, εξετάσαμε τις επιδράσεις της embelin στην έκφραση του TRAIL-R1 /DR4 και TRAIL-R2 /DR5 σε καρκινικούς ιστούς που απομονώθηκαν από AsPC-1 ξενομοσχεύματα (Σχ. 7 Α και Β). Θεραπεία της AsPC-1 που φέρουν όγκο ποντικών με embelin επάνω ρυθμισμένη η έκφραση του TRAIL-R1 /DR4 και TRAIL-R2 /DR5 σε καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι embelin μπορεί να συνδυαστεί με συνδέτες υποδοχέα θανάτου (TRAIL ή αγωνιστικών αντισωμάτων) για τη θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος.

Embelin αναστέλλει την ανάπτυξη των παγκρεατικών κυττάρων Cancer Απομονωμένος από Kras

G12D Ποντίκια

Kras μεταλλάξεις που βρίσκονται σε περίπου 95% των ανθρώπινων παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκινώματα [6]. Ως εκ τούτου, εξέτασαν τις επιδράσεις των embelin σχετικά με τα χαρακτηριστικά ανάπτυξης και πορείες σε καρκινικά κύτταρα ποντικού παγκρέατος απομονώνονται από 10-μηνών Kras

ποντίκια G12D σηματοδότησης. Ο καρκίνος του παγκρέατος κύτταρα απομονώθηκαν από ποντίκια και

in vitro

μελέτες διεξήχθησαν για να εξετάσει τα βιολογικά αποτελέσματα embelin. Embelin ανέστειλε την κυτταρική βιωσιμότητα και το σχηματισμό αποικιών σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα ποντικού (Σχ. 8Α). Για να επιβεβαιωθεί ο ρόλος της Shh, και μονοπάτια Akt σε αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της embelin, μετρήσαμε την έκφραση των συστατικών αυτών των οδών. Embelin ανέστειλε την έκφραση των Gli1 και Gli2 και στόχος κατάντη τους Κυκλίνη D1 σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα ποντικού (Σχ. 8Β). Επιπλέον, embelin ανέστειλε την έκφραση της φωσφο-Ακί, μιας κινάσης πολύ δραστική σε παγκρεατικά καρκίνου (Εικ. 8C). Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι embelin μπορεί να αναστείλει την ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος ποντικού καταστέλλοντας Shh και Akt μονοπάτια σηματοδότησης.

(Α), καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος απομονώθηκαν από 10-μηνών Kras

ποντίκια G12D. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με embelin (0-5 μΜ) για τη μέτρηση της βιωσιμότητας των κυττάρων και του σχηματισμού αποικιών σε 2 και 21 ημέρες, αντίστοιχα. * = Σημαντικά διαφορετικό από τον έλεγχο, η P & lt? 0,05. (Β), το ποντίκι του καρκίνου του παγκρέατος κύτταρα απομονώθηκαν από 10 μηνών Kras

ποντίκια G12D, και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ή χωρίς embelin (3 μΜ) για 36 ώρες. Στο τέλος της περιόδου επώασης, η πρωτεΐνη ακατέργαστο εκχυλίστηκε. Η ανάλυση στυπώματος Western εκτελέστηκε για να μετρηθεί η έκφραση του Gli1 και Gli2. Η β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (C), το ποντίκι του καρκίνου του παγκρέατος κύτταρα απομονώθηκαν από 10 μηνών Kras

ποντίκια G12D, και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ή χωρίς embelin (3 μΜ) για 36 ώρες. Η ανάλυση στυπώματος Western εκτελέστηκε για να μετρηθεί η έκφραση του phopho-Ακί (pAkt) και Akt. Η β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

Συζήτηση

Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μια από τις πιο επιθετικές και καταστροφικές κακοήθειες. Έχουμε αποδείξει, για πρώτη φορά, ότι embelin ανέστειλε βιωσιμότητα του παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές

in vitro

και AsPC-1 ανάπτυξη ξενομοσχευμένων όγκων που σχετίζονται με την καταστολή των οδών Akt και Shh. Επιπλέον, embelin ανέστειλε την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος απομονώνονται από Kras

ποντίκια G12D μέσω καταστολής των οδών Akt και Shh. Οι μέθοδοι αυτές έχουν δειχθεί ότι παίζουν σημαντικούς ρόλους σε παγκρεατικά καρκινογένεση. Embelin ανέστειλε πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων, και του κυτταρικού κύκλου, και απόπτωση. Embelin ανέστειλε επίσης δείκτες της αγγειογένεσης και της μετάστασης. Είναι ενδιαφέρον ότι, η θεραπεία της AsPC-1 ξενομόσχευμα ποντικούς με embelin οδήγησε σε πάνω ρύθμιση του υποδοχέα θανάτου DR4 και DR5, γεγονός που υποδηλώνει το συνδυασμό embelin με αγωνιστές TRAIL μπορούσε να είναι μια βιώσιμη στρατηγική για τη θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος του ανθρώπου.

Ο ΡΙ3Κ /Akt μονοπατιού σηματοδότησης ρυθμίζει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την επιβίωση, και συχνά και έκτροπα δραστηριοποιείται στην PDAC. Στη μελέτη μας, embelin ανέστειλε την φωσφορυλίωση /ενεργοποίηση της Akt σε ανθρώπινα και του παγκρέατος ποντικού καρκινικά κύτταρα και ιστούς. Η ενεργοποίηση του Kras οδηγεί σε φωσφορυλίωση και ενεργοποίηση της Akt κινάσης. Από embelin απόπτωση που επάγεται σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα που φέρουν μετάλλαξη Kras καταστέλλοντας Akt μονοπατιού, γεγονός που υποδηλώνει κλινικά οφέλη της εναντίον ανθρώπινου παγκρεατικού καρκίνου, όπου Kras είναι ως επί το πλείστον μεταλλαγμένα. Σε μια πρόσφατη μελέτη, η ετερόζυγη απώλεια του PTEN στην Kras

G12D μεταλλαγμένα ποντίκια επιτάχυνε την ανάπτυξη των κυψελοειδών για τον πόρο μεταπλασία (ADM), mPanIN και PDAC εντός ενός έτους [18]. Αυτή η μελέτη προτείνει έντονα το ρόλο της PTEN /PI3K /Akt και Kras μονοπάτια σηματοδότησης τόσο του παγκρέατος έναρξη και εξέλιξη του καρκίνου.

Shh είναι ασυνήθιστα εκφράζεται σε αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος και προκαρκινικές αλλοιώσεις του (PanIN). Παγκρέατα ποντικών PDX-Shh (όπου Shh είναι misexpressed στον παγκρεατικό ενδόδερμα) αναπτύσσουν μη φυσιολογικές σωληνοειδείς δομές, PanIN-1 και -2 [46]. Επιπλέον, αυτές οι αλλοιώσεις PanIN περιέχουν επίσης μεταλλάξεις στο K-ras και υπερεκφράζουν HER-2 /neu, τα οποία είναι γενετικές μεταλλάξεις που βρέθηκαν νωρίς στην εξέλιξη του ανθρώπινου καρκίνου του παγκρέατος. Έχουμε αποδείξει πρόσφατα ότι τα συστατικά της Shh οδού είναι εντόνως εκφρασμένα σε ανθρώπινα παγκρεατικά καρκινικά βλαστικά κύτταρα και παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές, και αρκετές χημειοαποτρεπτικών παραγόντων παρεμπόδισε παγκρεατικό την ανάπτυξη του καρκίνου [19], [26], [27], [47]. Ομοίως, στην παρούσα μελέτη, embelin ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου AsPC-1 και την ανάπτυξη των κυττάρων ποντικού PDAC καταστέλλοντας Shh οδό. Σε μια άλλη μελέτη, δείχθηκε ότι η αναστολή της οδού της Hh μειωμένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων και την απόπτωση που επάγεται με αναστολή του ΡΙ3Κ /Akt μονοπατιού και καρκινικά βλαστικά κύτταρα [48]. Επιπλέον, έχουμε δείξει ότι η αναστολή της οδού σηματοδότησης Shh ανέστειλε σημαντικά ΕΜΤ καταστέλλοντας την ενεργοποίηση των παραγόντων μεταγραφής σαλιγκάρι και Slug, οι οποίες συσχετίστηκαν με σημαντικά μειωμένη εισβολή των βλαστικών κυττάρων του καρκίνου του παγκρέατος [26], [27], [47], [ ,,,0],49], [50], υποδηλώνοντας ότι η οδός σηματοδότησης Shh εμπλέκεται στις αρχές μετάσταση. Συνολικά, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η αναστολή της οδού Shh μπορεί να είναι ένας πιθανός μοριακός στόχος των νέων θεραπευτικών στρατηγικών για την ανθρώπινη καρκίνο του παγκρέατος.

Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ένα σημαντικό ρόλο για την COX-2 στην παθογένεση ενός ευρέος φάσματος κακοήθειες. COX-2 ρυθμίζεται αυξητικά σε παγκρεατικά PDAC [38]. διαγραφή COX-2 σε Pdx1 + παγκρεατικά προγονικά κύτταρα καθυστερεί σημαντικά την ανάπτυξη PDAC σε ποντικούς με ενεργοποίηση K-ras και ΡΤΕΝ απλοανεπάρκεια. Αντιστρόφως, COX-2 υπερέκφραση προωθεί πρώιμη έναρξη και την πρόοδο της PDAC στο μοντέλο ποντικού K-ras. Απώλεια της λειτουργίας ΡΤΕΝ είναι ένας κρίσιμος παράγοντας για τον καθορισμό θανατηφόρα PDAC έναρξη και η συνολική επιβίωση. Μηχανιστικά, η COX-2 υπερέκφραση αυξάνει τα επίπεδα ρ-Akt στο πρόδρομες βλάβες του Pdx1 (+)? K-ras (G12D) (/+)? ΡΤΕΝ (LOX) (/+) ποντικοί απουσία ΡΤΕΝ LOH. Σε αντίθεση, η διαγραφή της COX-2 στην ίδια ρύθμιση μειώνει ρ-Akt επίπεδα και πρόοδο του καρκίνου καθυστερήσεις. Αυτή η μελέτη προτείνει έναν σημαντικό ρόλο εγγενή κύτταρο για COX-2 σε έναρξη και την εξέλιξη του όγκου μέσω της ενεργοποίησης του μονοπατιού ΡΙ3Κ /Akt. Σε περίπτωση απουσίας του εγγενούς COX-2, PDAC αναπτύσσεται τελικά με μειωμένη FKBP5 και αυξημένη έκφραση GRP78, δύο εναλλακτικές οδούς που οδηγούν στην ενεργοποίηση Akt [38]. Ως εκ τούτου, η ταυτόχρονη αναστολή τόσο της COX-2 και Akt μπορεί να αντιπροσωπεύει μία νέα στρατηγική για τη διαχείριση του καρκίνου του παγκρέατος.

Τα κύτταρα όγκου υποβάλλονται σε ΕΜΤ είναι επίσης γνωστό ότι αυξάνει την έκκριση των συγκεκριμένων παραγόντων, συμπεριλαμβανομένων των κυτοκινών, χημειοκινών και ανάπτυξη παράγοντες, οι οποίοι θα μπορούσαν να παίξουν σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του όγκου [39], [51]. Στην παρούσα μελέτη, embelin ανέστειλε την έκφραση της IL-8 σε AsPC-1 ιστούς όγκων. Έτσι, η IL-8 αποκλεισμός σηματοδότησης από embelin μπορεί να παρέχει ένα μέσο για την αναστολή ή αναστροφή της EMT. Επιπλέον, η αναστολή των σαλιγκάρι, γυμνοσάλιαγκας και Zeb-1 έκφρασης και προς τα πάνω ρύθμιση της E-cadherin από embelin θα μπορούσε να ρυθμίσει παγκρέατος εξέλιξης του καρκίνου μέσω της επιρροής της στην αναστροφή της EMT. Κατά συνέπεια, η αναστολή της έκφρασης ή λειτουργίας του ΕΜΤ-επαγωγής παράγοντες μεταγραφής στον καρκίνο του παγκρέατος αναμένεται να οδηγήσει σε νέες θεραπευτικές στρατηγικές.

κύτταρο Καρκίνος μετάσταση είναι μια διαδικασία σταδιακή που περιλαμβάνει αποκόλληση των κυττάρων από τον πρωτογενή όγκο