Αφηρημένο

Ιστορικό

Η νέα υδατοδιαλυτή ένωση STA-1474 μεταβολίζεται σε ganetespib (πρώην STA-9090), ένας ισχυρός αναστολέας της HSP90 δείχθηκε προηγουμένως να σκοτώσει κυνικός κυτταρικές σειρές όγκων

in vitro

και αναστέλλουν την ανάπτυξη του όγκου κατά τον καθορισμό των ποντικών ξενομοσχεύματα. Ο σκοπός της ακόλουθης μελέτης ήταν να επεκτείνει αυτές τις παρατηρήσεις και να διερευνήσει την ασφάλεια και την αποτελεσματικότητα του STA-1474 σε σκύλους με αυθόρμητη όγκους.

Μέθοδοι και Ευρήματα

Αυτή ήταν μια Φάσης 1 μελέτη, στην οποία σκυλιά με αυθόρμητη όγκους έλαβαν STA-1474 σε ένα από τρία διαφορετικά δοσολογικά σχήματα. αξιολογήθηκαν φαρμακοκινητική, τοξικότητα, αλλαγών των βιοδεικτών, και τις απαντήσεις των όγκων. Είκοσι πέντε σκύλους με μία ποικιλία καρκίνων εγγράφηκαν. Τοξικότητες ήταν κατά κύριο λόγο γαστρεντερικής φύσης που αποτελείται από διάρροια, εμετό, ανορεξία και λήθαργος. Προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης της πρωτεΐνης HSP70 σημειώθηκε στα δύο δοκίμια όγκου και PBMCs εντός 7 ώρες μετά τη χορήγηση του φαρμάκου. Μετρήσιμα αντικειμενικές αποκρίσεις παρατηρήθηκαν σε σκύλους με κακοήθη ασθένεια βασεόφιλου κυττάρου (n = 3), οστεοσάρκωμα (n = 1), μελάνωμα (n = 1) και καρκίνωμα του θυρεοειδούς (n = 1), για ένα ποσοστό απόκρισης 24% (6 /25). Σταθερή νόσο (& gt? 10 εβδομάδες) παρατηρήθηκε σε 3 σκύλους, για μια προκύπτουσα συνολική βιολογική δραστηριότητα του 36% (9/25)

Συμπεράσματα

Αυτή η μελέτη αποδεικνύει ότι STA-1474. εκθέματα βιολογική δραστηριότητα σε ένα σχετικό μεγάλο ζωικό μοντέλο καρκίνου. Λόγω της ομοιότητας των σκύλων και των ανθρώπινων καρκίνων σε σχέση με τη βιολογία του όγκου και την ενεργοποίηση της HSP90, είναι πιθανό ότι STA-1474 και ganetespib θα καταδείξει συγκρίσιμα αντικαρκινική δράση σε ασθενείς ανθρώπους

Παράθεση:. London CA, αρκούδα MD , McCleese J, Foley KP, Paalangara R, Inoue T, et al. (2011) Φάση Ι Αξιολόγηση των STA-1474, ένα προφάρμακο της Νέας HSP90 αναστολέα Ganetespib, σε σκύλους με καρκίνο Αυθόρμητη. PLoS ONE 6 (11): e27018. doi: 10.1371 /journal.pone.0027018

Επιμέλεια: Μιχαήλ Β Blagosklonny, Roswell Park Cancer Institute, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 9 του Ιουλίου 2011? Δεκτές: 7, Οκτωβρίου, 2011? Δημοσιεύθηκε: 3 Νοεμβρίου 2011

Copyright: © 2011 Λονδίνο et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η κλινική δίκη υποστηρίχθηκε από τη χρηματοδότηση από Synta Pharmaceuticals Corp. Οι χρηματοδότες συνέβαλαν στο σχεδιασμό της μελέτης, φαρμακοκινητική ανάλυση και προετοιμασία του χειρογράφου, αλλά δεν είχε κανένα ρόλο στη θεραπεία και την αξιολόγηση των σκύλων σε αυτή τη μελέτη

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Η συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

πρωτεΐνη θερμικού σοκ 90 (HSP90), ένας μοριακός συνοδός που προωθεί την διαμορφωτικές ωρίμανση και σταθεροποίηση της μια μεγάλη ποικιλία πρωτεϊνών πελάτη, είναι ένα υποσχόμενο στόχο για θεραπευτική παρέμβαση σε καρκίνο [1], [2], [3], [4]. Πολλοί πελάτες της HSP90 είναι γνωστά ογκοπρωτεΐνες, συμπεριλαμβανομένων των μελών της οικογένειας EGFR, Akt, Bcr-Abl, μεταλλαγμένο ρ53, Kit, και Met, μεταξύ άλλων [1], [3]. Η αναστολή της λειτουργίας της HSP90 προάγει την αποδόμηση αυτών των πρωτεϊνών πελάτη περισσότερες φορές μέσω της οδού πρωτεασώματος ουμπικουϊτίνης οδηγώντας τελικά σε απόπτωση [2], [3], [4]. Επιλεκτικότητα των αναστολέων της HSP90 για κακοήθη έναντι φυσιολογικά κύτταρα πιστεύεται ότι παρέχεται από το γεγονός ότι η συσσώρευση του υπερ-εκφράζεται και μεταλλαγμένες πρωτεΐνες πελάτης προωθεί μια μετατόπιση προς το δραστικό, super-συνοδού σύνθετη μορφή HSP90 σε καρκινικά κύτταρα [5], [6 ], [7]. Σε αυτή την κατάσταση, μια πρωτεΐνη πελάτη συνεργάτες με HSP90 με τη βοήθεια της συν-συνοδούς όπως p23, Hsp40, HOP, και HIP [3], [5], [6]. Αυτή η εξαιρετικά chaperone σύμπλοκο εμφανίζει ενισχυμένη δραστικότητα ΑΤΡάσης, και κατά συνέπεια συχνά δεσμεύει μικρό μόριο ATP μιμητικά με υψηλότερη συγγένεια από την μη συμπλοκοποιημένη μορφή του HSP90, οδηγώντας σε συσσώρευση σε όγκους σε σχέση με φυσιολογικούς ιστούς. Ως εκ τούτου, η ενισχυμένη δραστηριότητα της HSP90 παρέχει μεγαλύτερη ευαισθησία των κακοήθων κυττάρων σε απώλεια της λειτουργίας της HSP90 [5]. Στόχευση HSP90 στον καρκίνο είναι επίσης ελκυστική δεδομένου ότι δεν μεταλλάξεις αντοχής έχουν εντοπιστεί σε αυτή την πρωτεΐνη σε ανθρώπινους καρκίνους, γεγονός που υποδηλώνει ότι αντιπροσωπεύει ένα σχετικά σταθερό στόχο για θεραπεία απεξάρτησης [8]. Επειδή η αναστολή της HSP90 μπορεί να επηρεάσει πολλαπλά μονοπάτια που συμβάλλουν συχνά στην ογκογόνο διαδικασία, οι αναστολείς της HSP90 έχουν το δυναμικό να επιδεικνύουν ευρεία δραστικότητα σε πολλαπλές τύπους όγκων [1], [3].

Η πρώτη κατηγορία των αναστολέων της HSP90 βασίστηκε επί γκελνταναμυκίνη, ένα βενζοκινόνη ανσαμυκίνη αντιβιοτικό που προσδένεται στο Ν-τερματικό σύνδεσης ΑΤΡ τσέπη του HSP90, εμποδίζοντας έτσι τη λειτουργία της ΑΤΡάσης. Γκελνταναμυκίνη και ημι-συνθετικά παράγωγα της 17-AAG και 17-DMAG εμποδίζουν την σταθεροποίηση των πρωτεϊνών του πελάτη, με τελικό αποτέλεσμα την υποβάθμιση τους [9], [10], [11]. Ωστόσο, γκελνταναμυκίνη και τα παράγωγά της έχουν ένα αριθμό περιορισμών, συμπεριλαμβανομένων προκλήσεων μορφοποίησης και παρενέργειες όπως ηπατοτοξικότητα [12]. STA-1474 (Synta Pharmaceuticals Corp, Lexington, ΜΑ, USA) είναι ένα ιδιαίτερα διαλυτό προφάρμακο ganetespib (πρώην STA-9090), μία νέα ένωση ρεσορκινόλης που περιέχει άσχετο με γκελνταναμυκίνη που δεσμεύεται στον τομέα ΑΤΡ-biding στο Ν-τελικό άκρο του HSP90 και δρα ως ισχυρός αναστολέας της HSP90. Ganetespib επάγει αποικοδόμηση πολλαπλών πρωτεϊνών πελάτη HSP90, σκοτώνοντας μια ευρεία ποικιλία των ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών σειρών σε χαμηλές συγκεντρώσεις nanomolar

in vitro

, και παρουσιάζει ισχυρή αντικαρκινική δράση σε μοντέλα όγκου ξενομοσχεύματος σε ποντίκια ([13], [ ,,,0],14], [15] και αδημοσίευτα στοιχεία, Synta Pharmaceuticals Corp.).

Σε προηγούμενες μελέτες, αποδείξαμε ότι ganetespib και υδατοδιαλυτά προφάρμακο STA-1474 της έχουν δραστικότητα έναντι κυνικός κυτταρικών γραμμών όγκου [14], [ ,,,0],15]. Θεραπεία της οστεοσαρκώματος (OSA) και μαστοκυττάρων όγκου (MCT) κυτταρικές γραμμές είτε με ganetespib ή STA-1474 αναστολή που προκαλείται από την ανάπτυξη, την απόπτωση που ήταν caspase3 /7 που εξαρτώνται από, και αδρανοποίηση ή /και προς τα κάτω ρύθμιση PKIT /Kit, pMet /Met , pAkt /Akt, και pSTAT3. Τόσο ganetespib και STA-1474 επέδειξε ανώτερη δραστηριότητα στο γελδαναμυκίνης παράγωγο 17-ΑΑΟ. Ganetespib ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού MCT, ενώ STA-1474 που προκαλείται από την υποχώρηση του όγκου, της κασπάσης-3 ενεργοποίησης και προς τα κάτω ρύθμιση της φωσφο-Met (pMet) /Met και ρ-Akt /Akt σε ξενομοσχεύματα OSA [14], [15] . Ο σκοπός της ακόλουθης κλινικής δοκιμής ήταν να επεκταθεί

in vitro

και ποντικού μελέτες μας και τη διερεύνηση της ασφάλειας και της αποτελεσματικότητας του STA-1474 σε σκύλους με αυτόματους όγκους ως προοίμιο για μελλοντικές κλινικές εργασίες σε ανθρώπους με καρκίνο.

Υλικά και Μέθοδοι

Επιλεξιμότητα

Αυτή η κλινική μελέτη εγκρίθηκε από την εκτελεστική επιτροπή του Ohio State University Κτηνιατρική Medical Center νοσοκομείο, τον Ιούλιο του 2007. η γραπτή συγκατάθεση από τον ιδιοκτήτη του κάθε σκύλου ζητήθηκε σύμφωνα με IACUC και το The Ohio State University College κατευθυντήριων γραμμών κτηνιατρικής. STA-1474 χορηγήθηκε σε σκύλους με αυθόρμητες όγκους που είχαν αποτύχει συμβατική θεραπεία ή για τα οποία δεν υπήρχαν εναλλακτικές θεραπευτικές επιλογές, ή για τα οποία η συμβατική θεραπεία δεν ήταν επιθυμητή από τον ιδιοκτήτη. Για να είναι επιλέξιμες για τη μελέτη, κάθε σκύλος πρέπει να έχουν διαγνωστεί με ένα από ένα επιλεγμένο σύνολο ιστολογικά επιβεβαιωμένο αυθόρμητη κακοήθειες, και έχουν εκπληρώσει όλα τα κριτήρια ένταξης και κανένα από τα κριτήρια αποκλεισμού. Επιλέξιμες κακοήθειες περιλαμβάνονται τα καρκινώματα, σαρκώματα, όγκοι μαστοκυττάρων, ιστιοκυτταρικά σαρκώματα, ή λεμφώματα. Πρόσθετα κριτήρια επιλεξιμότητας περιλαμβάνονται: & gt? 1 έτους κατά την έναρξη της μελέτης? επαρκή λειτουργία των οργάνων? τουλάχιστον 2 εβδομάδες από προηγούμενη χημειοθεραπεία ή ακτινοβολία με πλήρη ανάρρωση από την οξεία τοξικότητα αυτών των θεραπειών (3 εβδομάδες για μία χειρουργική διαδικασία)? τουλάχιστον 1 εβδομάδα από προηγούμενη θεραπεία με οποιοδήποτε άλλο δοκιμαζόμενο φάρμακο? δεν διάγνωση της λευχαιμίας? και δεν υπάρχουν στοιχεία εγκεφαλικών μεταστάσεων ή οποιαδήποτε σοβαρή συστημική διαταραχή δεν συμβιβάζεται με τη μελέτη, κατά την κρίση του ερευνητή.

STA-1474 σκεύασμα

STA-1474, ένα διαλυτό προφάρμακο της ganetespib, παρασχέθηκε με Synta Pharmaceuticals Corp (Σχήμα 1). Λυοφιλοποιημένο STA-1474 φαρμακευτικό προϊόν φυλάχτηκε σε 4 ° C και να προστατεύεται από το φως, μέχρι την ημέρα της θεραπείας. Drug διαλύθηκε σε Plasmalyte 148 USP και το ρΗ ρυθμίστηκε στο εύρος 6,0 έως 7,0, με χρήση πρότυπου διαλύματος 0,1 Ν ΝαΟΗ για μία τελική συγκέντρωση 3 mg /mL. Το διάλυμα φαρμάκου διηθήθηκε στείρα με 0.2 μ φίλτρο νάιλον και φορτώνεται σε ένα μη-DEHP διαδρομή υγρού IntraVia

TM 250 mL άδειο δοχείο. Το φορτωμένο σάκο έγχυσης στη συνέχεια συνδέεται με έναν επένδυση πολυαιθυλενίου εξαερίζεται σετ paclitaxel, που περιέχει ένα φίλτρο 0.22 μ, για χορήγηση. Τόσο το σάκο έγχυσης και η γραμμή καλύφθηκαν για να προστατεύεται από το φως. διάλυμα φαρμάκου χρησιμοποιείται εντός 24 ωρών από την παρασκευή.

Ορατή είναι η χημική δομή του STA-1474, ένα υδατοδιαλυτό φωσφορικό προφάρμακο της ganetespib.

Η

Σχεδιασμός μελέτης

Αυτή η μελέτη ήταν μια φάσης Ι δόση κλιμακώνεται, ανοικτή αξιολόγηση ετικέτα της ασφάλειας και της φαρμακοκινητικής της STA-1474 σε πελάτη που ανήκει σκύλους με αυθόρμητη κακοήθειες. Οι σκύλοι χορηγήθηκαν STA-1474 σε ένα από τα τρία δοσολογικά σχήματα και αξιολογήθηκαν εβδομαδιαία ή δύο φορές την εβδομάδα ανάλογα με το σχήμα που χρησιμοποιείται. Αξιολόγηση των κλινικών τοξικοτήτων και ανταπόκρισης του όγκου εκτελέστηκε σε κάθε επίσκεψη. Οι σκύλοι αξιολογήθηκαν για αιματολογικές και βιοχημικές τοξικότητες κάθε 7 ημέρες με τη ρουτίνα bloodwork. Η αρχική δόση του STA-1474 ορίστηκε σε 7 mg /kg με βάση τα προηγούμενα δεδομένα από συνήθεις εργαστηριακές σκύλους (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα) και η κλιμάκωση της δόσης ορίστηκε σε προσαυξήσεις 2,5 mg /kg σε ομάδες των 3 μέχρι τοξικότητα περιοριστική της δόσης (DLT) ήταν αναγνωρισθείς. Το DLT θεωρήθηκε κάθε βαθμού 3 ή 4 αιματολογική ή μη αιματολογική τοξικότητα με βάση τα καθιερωμένα κριτήρια VCOG-CTAE [16]. Επιπλέον, τυχόν χρόνιων μη-βαθμού 3 ή 4 τοξικότητες θεωρείται ότι περιορίζουν σημαντικά την ποιότητα της ζωής (δηλαδή, λήθαργος, ανορεξία) ήταν χαρακτηριστεί ως ΔΛΤΣ. πρόοδο ή σημεία και τα συμπτώματα σίγουρα σχετίζονται με τη νόσο της νόσου δεν θεωρήθηκαν ανεπιθύμητες ενέργειες (ΑΕ).

Τοξικότητα

αξιολόγηση

Κάθε ασθενής υποβλήθηκε σε μια βάση πλήρες ιστορικό, φυσική εξέταση, και πριν από τη δόση εργαστηριακή αξιολόγηση που περιλάμβανε μια γενική εξέταση αίματος (CBC), το προφίλ των βιοχημικών δεικτών, και ανάλυση ούρων. Οι ασθενείς αξιολογήθηκαν για δυσμενή συμβάντα κατά τις ημέρες 8, 15, 22, και 29, στον οποίο χρόνο μετρούν ένα πλήρες αίμα με διαφορική διεξήχθησαν και κλινική χημεία. Ανάλυση ούρων έγινε κατά την έναρξη και επαναλαμβάνεται μόνο εάν ενδείκνυται. Διατάξεις που αφορούν ελάχιστες απαιτήσεις αιματολογικών να συνεχίσει δοσολογίας περιλήφθηκαν στο πρωτόκολλο: αιματοκρίτης & gt? 25%, ουδετερόφιλα & gt? 1500 /L, αιμοπετάλια & gt? 100.000 /L. Επιπλέον, ηπατικών τρανσαμινασών πρέπει να είναι & lt?. 4X ανώτερο φυσιολογικό όριο με μια κανονική ολική χολερυθρίνη και της κρεατινίνης ορού να συνεχίσει STA-1474 θεραπείας

Η ταυτόχρονη φάρμακα

Για την πρόληψη ή την αντιμετώπιση των ναρκωτικών -σχετικών γαστρεντερικές τοξικότητες, υποστηρικτική φροντίδα χορηγήθηκε, όπως απαιτείται για τα σκυλιά που συμμετείχαν στις καθημερινές ομάδες δοσολογίας. Αυτό συνήθως αποτελούνταν από φαμοτιδίνη, μετρονιδαζόλη, λοπεραμίδη, μετοκλοπραμίδη, ονδανσετρόνη, ή /και μαροπιτάντης. Αντιισταμινικά χορηγήθηκαν σε σκύλους με μαστοκυττάρων όγκους, καθώς οι εν λόγω όγκοι είναι γνωστό ότι απελευθερώνουν ισταμίνη. Άλλες υποστηρικτική φροντίδα χορηγείται σε σκύλους αποτελούνταν από πρεδνιζόνη και μη στεροειδή αντιφλεγμονώδη φάρμακα για τη θεραπεία που σχετίζονται με όγκους φλεγμονή, ανορεξία, και για τον έλεγχο του πόνου.

ολοκληρώθηκαν απόκριση όγκου εκτίμηση

αξιολογήσεων των όγκων πριν από την εισαγωγή στη μελέτη, και τις ημέρες 8, 15, 22, και 29. για τα σκυλιά που συνεχίζεται πέρα ​​από τις προγραμματισμένες 4 δόσεις STA-1474, εκτιμήσεις απάντηση έγιναν κάθε 3-6 εβδομάδες μετά, ή κατά το χρόνο των υπόπτων εξέλιξης του όγκου. Οι απαντήσεις αξιολογήθηκαν από τον ερευνητή σύμφωνα με προκαθορισμένα κριτήρια πρωτοκόλλου. Η απάντηση σε σκύλους με καθορισμένες νόσου έγινε με κλινική εξέταση, ακτινογραφία, υπερηχογράφημα ή αξονική τομογραφία. Πολλές βλάβες δεν ήταν δεκτικά για την ποσοτική ακτινογραφική απεικόνιση, αλλά ακολούθησαν είτε με αύξοντα κλινική εξέταση (επιφανειακές βλάβες? Ψηλαφητή λεμφαδένες) ή με υπερηχογράφημα (κοιλιακό λεμφαδένες). Θώρακα βλάβες αξιολογήθηκαν από θωρακική ακτινογραφία και των ρινικών αλλοιώσεων από αξονική τομογραφία.

Η απάντηση σε σκύλους με μετρήσιμη νόσο κρίθηκε από τον ερευνητή βάσει των κριτηρίων RECIST [17]. Μια πλήρης απόκριση (CR) ορίστηκε ως η εξαφάνιση όλων των ασθενειών στις δύο μετρήσεις που διαχωρίζονται από μια ελάχιστη περίοδο 3 εβδομάδων. Μια μερική απόκριση (PR) ορίστηκε ως μείωση μεγαλύτερη από 30% στο άθροισμα του μακρύτερου διαμέτρου των βλαβών στόχων τεκμηριώθηκε από δύο εκτιμήσεις χωρίζονται από τουλάχιστον 3 εβδομάδες. Μια αύξηση του & gt? 20% στο μέγεθος όλων των μετρήσιμων περιοχών όγκων όπως μετράται με το άθροισμα της μεγαλύτερης διάμετροι των αλλοιώσεων στόχου λαμβάνεται ως αναφορά το μικρότερο άθροισμα από το την έναρξη της θεραπείας, ή την εμφάνιση οποιασδήποτε νέας βλάβης (ες) θα μπορούσε να χαρακτηρισθεί ως προοδευτική ασθένεια (PD). Μια μικτή ανταπόκριση (MR) ορίστηκε ως PR σε ορισμένες βλάβες στόχο με PD και σε άλλες βλάβες του στόχου. Σταθερή νόσος (SD) ορίστηκε από την απουσία κριτηρίων είτε για ένα απόκριση ή εξέλιξη. Τα σκυλιά που δεν είχαν καμία απόδειξη της εξέλιξης του όγκου και οι οποίοι δεν είχαν βιώσει κάποια μη αποδεκτή τοξικότητα ήταν επιλέξιμες για εκτεταμένη κύκλους θεραπείας. κλιμάκωση της δόσης σε ένα άτομο σκύλο επιτράπηκε αν ο σκύλος είχε την ανοχή της θεραπείας

Ganetespib φαρμακοκινητική

Τα δείγματα πλάσματος συλλέχθηκαν κατά την ημέρα 1 και την ημέρα 22 της θεραπείας στα καθορισμένα χρονικά διαστήματα:. πριν και μετά τη χορήγηση στα 30, 60, 90, 120, 180, 300 (5 ώρες), 540 (9 ώρες) και 1440 (24 ώρες) λεπτά σε σχέση με την έναρξη της δοσολόγησης. Την ημέρα 8, την ημέρα 15 και την ημέρα 29, το πλάσμα συλλέχθηκε πριν δοσολόγηση μόνο. Περίπου 1 ml αίματος από έναν μόνιμο καθετήρα, τοποθετείται σε ένα γυάλινο σωλήνα κενού ηπαρίνη νατρίου, και τοποθετήθηκαν σε πάγο μέχρι τη φυγοκέντρηση. Τα δείγματα αίματος φυγοκεντρήθηκαν σε 3300 rpm για 10 λεπτά, εντός 30 λεπτών από τη συλλογή. Το πλάσμα μεταφέρθηκε με πιπέτα σε δύο κρυοφιαλίδια και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C μέχρι την ανάλυση.

συγκεντρώσεις ganetespib πλάσμα προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας μια ειδική σειρά υγρής χρωματογραφίας φασματομετρίας μάζας (/MS-MS LC) μέθοδο. Τα δείγματα αναλύθηκαν σε ένα σύστημα HPLC αποτελείται από μια μονάδα διαχωρισμού ΗΡ1100 Agilent (Santa Clara, CA) συζευγμένο με ένα ανιχνευτή AB SCIEX API400 MS /MS (Foster City, CA). Σταθερές ραδιοεπισημασμένες ganetespib χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικό πρότυπο. εκχύλιση του δείγματος διεξήχθη με μία μέθοδο εκχύλισης υγρού-υγρού με 25 μL δείγματα πλάσματος και 800 μΐ μεθυλτριτοβουτυλαιθέρων. Η οργανική φάση των δειγμάτων εξατμίστηκε μέχρι ξηρού υπό άζωτο και ανασυστάθηκαν με διάλυμα νερού /ακετονιτριλίου για ένεση. Ο χρωματογραφικός διαχωρισμός επιτεύχθηκε σε μία αναλυτική στήλη αντίστροφης φάσης (4 μm σωματιδίων, 50 χ 2,0 mm i.d.) με βαθμιαίο διαλύτη έκλουσης νερό /0.1% μυρμηκικό οξύ και ακετονιτρίλιο /0.1% μυρμηκικό οξύ σε ταχύτητα ροής 500 μΕ /λεπτό. Ο συνολικός χρόνος λειτουργίας ήταν 4 λεπτά. Η ποσοτικοποίηση επιτεύχθηκε με ανίχνευση MS /MS σε τρόπο θετικού ιόντος με πολλαπλές παρακολούθησης αντίδραση. Το κατώτερο όριο ποσοτικοποίησης (LLOQ) ήταν 1,00 ng /ml, με εύρος συγκέντρωσης από 1,00 να 1000 ng /mL.

Οι φαρμακοκινητικές παράμετροι για ganetespib προσδιορίστηκαν από τα δεδομένα συγκέντρωσης πλάσματος χρησιμοποιώντας τη μονάδα μη διαμερισματικές Ανάλυση σε WinNonlin, έκδοση 5.2 (Pharsight Corporation, St.Louis, ΜΟ). Τα προ-δόση δείγματα που μετρήθηκαν κάτω από το LLOQ (BQL) υποβλήθηκαν σε θεραπεία ως μηδέν για τους υπολογισμούς. Μέγιστη συγκέντρωση (Cmax) και ο χρόνος μέγιστης συγκέντρωσης (Tmax) άμεσα προσδιορίζονται από τις παρατηρούμενες προφίλ συγκέντρωσης-χρόνου. Η περιοχή κάτω από την καμπύλη συγκεντρώσεως πλάσματος-χρόνου (AUC) υπολογίστηκε με το γραμμικό τραπεζοειδή κανόνα. Η φαινόμενη ημίσεια ζωή (t

1/2) υπολογίστηκε ως t

1/2 = 0,693 /λ, όπου λ είναι η σταθερά ρυθμού αποβολής εκτιμήθηκε από την παλινδρόμηση του τερματικού κλίση της συγκέντρωσης έναντι της καμπύλης χρόνου.

Αξιολόγηση της HSP70 έκφρασης

οι μικρές βιοψίες συλλέχθηκαν από ένα υποσύνολο των όγκων των ασθενών που ήταν προσβάσιμο σε 0, 7, και 24 ώρες μετά τη θεραπεία. Οι βιοψίες ελήφθησαν χρησιμοποιώντας 3 mm όργανο βιοψίας ή 14 gauge βελόνα Tru-cut. Όλα τα δείγματα τοποθετήθηκαν σε κρυοφιαλίδια, αμέσως καταψύχθηκε σε υγρό άζωτο και φυλάχθηκαν στους -80 ° C μέχρι την ανάλυση HSP70. Για να αξιολογηθεί σχετικά επίπεδα HSP70 στα συλλέγονται δείγματα όγκων, ένα εμπορικά διαθέσιμο HSP70-ένζυμο συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA? Υποδείγματα Δοκιμασία, Ann Arbor, ΜΙ) διεξήχθη. Κατεψυγμένα δείγματα όγκου κονιοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα παγωμένο γουδί και γουδοχέρι. Η σκόνη που προέκυψε επαναιωρήθηκε σε υγρό άζωτο, τα οποία συλλέγονται, κατόπιν διαιρείται ανάμεσα σε δύο 15 conicals mL? ένα κωνικό για ELISA και μία για στύπωμα Western (βλέπε μέθοδο κατωτέρω). Μόλις το υγρό άζωτο εξατμίζεται μακριά, τα δείγματα αφέθηκαν να αποψυχθούν επί πάγου. Δείγματα για ELISA επαναιωρήθηκαν σε (1Χ) το αντιδραστήριο εκχύλισης που περιέχει 1 μg /mL απροτινίνη, 1 μg /mL λευπεπτίνη, 1 μg /mL πεπστατίνη Α, 1 mM PMSF, 1 mM ορθοβαναδικό νάτριο, και 10 mM φθοριούχο νάτριο, χρησιμοποιώντας 1 mL για κάθε 0,5 εκατοστά

3 του ιστού. Τα δείγματα επωάστηκαν σε ένα ταλαντωτή για 1 ώρα στους 4 ° C, φυγοκεντρήθηκε για 15 λεπτά στους 4 ° C, και στη συνέχεια συλλέχθηκαν τα υπερκείμενα. δοκιμασία πρωτείνης Bradford ποσοτικοποίηση πραγματοποιήθηκε στα εκχυλίσματα χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο BioRad (BioRad, Hercules, CA). Τα δείγματα εξισωθεί με 250 μg /ml με το αντιδραστήριο εκχύλισης (1Χ), κλασματοποιήθηκε και αποθηκεύθηκε στους -80 ° C μέχρι την ανάλυση. Σε μεταγενέστερη ημερομηνία, κατεψυγμένα δείγματα στα οποία επιτρέπεται να αποψυχθούν σε πάγο, στη συνέχεια αραιώνεται διαδοχικά με αραιωτικό δείγματος 2 (που παρέχεται στο κιτ) με 1:04, 1:16 και 1:32. 100 μL από κάθε αραίωση προστέθηκαν σε κατάλληλα φρεάτια, εις διπλούν, του 96 φρεατίων προ-επικαλυμμένες πλάκα ELISA. Η ELISA πραγματοποιήθηκε ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή, και η απορρόφηση μετρήθηκε μέσα σε 30 λεπτά χρησιμοποιώντας μια συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας Spectramax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) με μήκος κύματος ρυθμισμένο στα 450 nm και μια διόρθωση μήκους κύματος στα 540 nm.

Για αξιολογήσουν τα επίπεδα HSP70 σε μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος, 8 ml πλήρους αίματος συλλέχθηκαν πριν από την χορήγηση δόσης και 24 ώρες μετά τη θεραπεία (σε μερικές περιπτώσεις και σε 7 ώρες μετά την αγωγή) την ημέρα 1 και την ημέρα 22 από την σφαγίτιδα φλέβα σε δύο 4 κ.εκ. BD Vacutainer σωλήνες CPT (BD, Franklin Lakes, NJ). Τα δείγματα διατηρούνται σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι τη φυγοκέντρηση για 1 ώρα στις 1600 RCF, εντός 2 ωρών από τη συλλογή. Μετά από φυγοκέντρηση, το στρώμα μονοπύρηνων κυττάρων στο πλάσμα μεταφέρθηκε σε 15 mL κωνικό. PBMCs πλύθηκαν με την προσθήκη 15 mL PBS και φυγοκέντρηση για 15 λεπτά σε 300 RCF. Μετά από δύο πλύσεις, οι σβώλοι κυττάρων επαναιωρηματοποιήθηκαν σε 1 mL PBS, και μεταφέρθηκαν σε ένα σωλήνα μικροφυγοκέντρησης mL 1.5. Τα κύτταρα σφαιροποιήθηκαν και πάλι με φυγοκέντρηση στα 13.000 RCF για 1 λεπτό. Το υπερκείμενο απομακρύνθηκε και τα σφαιρίδια κυττάρου όπου φλας καταψύχθηκε σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C. Αμέσως πριν από την ανάλυση, σφαιρίδια PBMC αφέθηκαν να αποψυχθούν σε πάγο, στη συνέχεια, κάθε δείγμα επαναιωρήθηκε σε 500 μL (1Χ) ρυθμιστικό Εκχύλιση με αναστολείς πρωτεάσης. Χρησιμοποιώντας τη μέθοδο που περιγράφηκε παραπάνω, τα δείγματα αναλύθηκαν για σχετικές συγκεντρώσεις των HSP70 με τη χρήση της HSP70-ένζυμο συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (υποδείγματα Δοκιμασία, Ann Arbor, ΜΙ).

Αξιολόγηση των βιοψιών όγκου για έκφραση HSP90

κατεψυγμένα δείγματα όγκου επεξεργάστηκαν όπως περιγράφηκε παραπάνω, μετά επαναιωρήθηκαν σε 100-150 μλ ρυθμιστικού λύσης αποτελείται από 20 mM Tris-HCl ρΗ 8,0, 137 mM NaCl, 10% γλυκερόλη, 1% IGEPAL CA-630, 10 mM αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ (EDTA), 1 mg /mL απροτινίνη, 1 mg /mL λευπεπτίνη, 1 mg /mL πεπστατίνη Α, 1 mM φθοριούχου phenylmethysulphonyl, 1 mM ορθοβαναδικό νάτριο, 10 mM φθοριούχο νάτριο (όλα από την Sigma, St. Louis, ΜΟ). Δείγμα ανακινήθηκαν στους 4 ° C για 1 ώρα, και στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκαν για 15 λεπτά στις 13.000 RCF. Μια δοκιμασία πρωτείνης Bradford πραγματοποιήθηκε στα λύματα χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο BioRad (Hercules, CA). 60-100 μα πρωτεΐνης διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF. Οι μεμβράνες επωάστηκαν για μια νύχτα με αντι-HSP90 αντισωμάτων (Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ), πλύθηκαν, στη συνέχεια επωάστηκαν με υπεροξειδάση κρένου συνδεδεμένο δευτερεύον αντίσωμα. Οι μεμβράνες πλύθηκαν πάλι, στη συνέχεια εκτίθενται σε σήμα υπέρ West Dura παρατεταμένη διάρκεια Υπόστρωμα (Pierce, Rockford, IL) μεμβράνες απογυμνώθηκαν, πλύθηκαν, και ξαναϊχνηθετούνται για β-ακτίνης (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) χρησιμοποιώντας το i.d. SNAP συσκευή (Millipore, Billerica, ΜΑ) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Αποτελέσματα

Θέματα

Ένα σύνολο 25 σκύλων με μια ποικιλία των αυθόρμητων καρκίνων εντάχθηκαν στη μελέτη. Τα δημογραφικά στοιχεία των ασθενών και τον τύπο του όγκου που παρατίθενται στον Πίνακα 1. Η πλειοψηφία των σκύλων που συμμετείχαν σε αυτή τη μελέτη είχαν αποτύχει πριν αγωγές θεραπείας (n = 18, 72%) συμπεριλαμβανομένης της χειρουργικής επέμβασης, της ακτινοθεραπείας, της χημειοθεραπείας, ή έναν συνδυασμό αυτών των θεραπειών. Δεδομένων των προηγούμενα δεδομένα που αποδεικνύουν βιολογική δραστικότητα ganetespib σε κυνικός οστεοσαρκώματος (OSA) και κυτταρικές γραμμές όγκου των μαστοκυττάρων (MCT), καθώς και στοιχεία για υποχώρηση του όγκου /σταθεροποίηση σε μοντέλα ποντικού ξενομοσχεύματος του σκύλου OSA και MCT, τα σκυλιά με αυτούς τους τύπους όγκου ήταν εμπλουτισμένο σε αυτή μελέτη φάσης Ι. τύπους όγκων που αντιπροσωπεύεται περιλαμβάνονται OSA (n = 10), MCT (n = 4), καρκίνωμα του θυρεοειδούς (n = 3), λέμφωμα (n = 3), άλλα καρκίνωμα (n = 2), ρινική χονδροσάρκωμα (n = 1), από του στόματος κακόηθες μελάνωμα (n = 1), και από του στόματος ινοσάρκωμα (n = 1).

Η

οι ομάδες θεραπείας και φαρμακοκινητική ανάλυση

σκυλιά (n = 12) είχαν αρχικά τεθεί σε ένα θεραπευτικό σχήμα που αποτελείται από STA-1474 που χορηγείται ενδοφλεβίως σε διάρκεια μίας ώρας μία φορά την εβδομάδα. Μια δεύτερη ομάδα σκύλων (η = 6) χορηγήθηκε STA-1474 πάνω από 8 ώρες μία φορά την εβδομάδα. Αυτό το δοσολογικό σχήμα επιλέχθηκε στηρίζεται σε μερική απόκριση στη θεραπεία παρατηρήθηκε σε έναν σκύλο με κακοήθες μελάνωμα στην πρώτη ομάδα ακόλουθη εξαγγείωση του φαρμάκου και η έκθεση παρατεταμένη φάρμακο λόγω της αργής υποδόρια απορρόφηση. Η τρίτη ομάδα των σκύλων (η = 7) έλαβε STA-1474 χορηγήθηκε σε διάστημα μίας ώρας δύο φορές την εβδομάδα. Κάθε σκύλος τέθηκε σε μελέτη επρόκειτο να λάβουν τουλάχιστον 4 δόσεις STA-1474 με την επιλογή να συνεχίσει τη θεραπεία στο πρόσωπο του, είτε σταθερή νόσος ή μια αντικειμενική ανταπόκριση του όγκου.

Τα φαρμακοκινητικά δεδομένα συνοψίζονται στον Πίνακα 2 . Πλήρης φαρμακοκινητικές δειγματοληψία πραγματοποιήθηκε για όλα τα σκυλιά στη μελέτη αυτή κατά την πρώτη ημέρα της χορήγησης του φαρμάκου. Τα μέση συγκέντρωση πλάσματος – Τα προφίλ χρόνου για σκύλους στις τρεις ομάδες θεραπείας που φαίνεται στο Σχήμα 2α, με αντιπροσωπευτικά προφίλ για 6 σκύλους (2 σε κάθε ομάδα αγωγής) στο σχήμα 2β. Για σκύλους που λαμβάνουν οποιοδήποτε από τα τρία δοσολογικά σχήματα, η AUC ήταν σχετικά παρόμοια, που κυμαίνονται μεταξύ 5013-5701 ng /ml ganetespib-hr. Ωστόσο, οι ωριαίες εγχύσεις του φαρμάκου σε 9,25 mg /kg ή 5 mg /kg οδήγησε σε βραχύτερο Tmax (0,7 ώρες και 1,1 ώρες, αντίστοιχα) και υψηλότερη Cmax (3982 ng /ml και 3,415 ng /ml, αντίστοιχα) σε σύγκριση με το 8 ώρα έγχυση (Tmax 5,7 ώρες, Cmax 802 ng /ml)

α) η μέση συγκέντρωση πλάσματος ganetespib -. προφίλ χρόνου για κάθε δοσολογικό σχήμα β) συγκέντρωση Αντιπροσωπευτικά ganetespib πλάσματος – χρόνος προφίλ για δύο ασθενείς σε κάθε δοσολογικό σχήμα.

Η

Η αξιολόγηση της ασφάλειας

Οι ανεπιθύμητες ενέργειες κατά τη διάρκεια των κύκλων θεραπείας (συνοψίζονται στον πίνακα 3) αποτελούνταν σχεδόν εξ ολοκλήρου από γαστρεντερικές ενοχλήσεις (ανορεξία, ναυτία, έμετος, διάρροια) και λήθαργο. Δεν σχετίζονται με τα ναρκωτικά αιματολογικές ή βιοχημικές τοξικότητες παρατηρήθηκαν σε οποιεσδήποτε δόσεις. Ένα σκυλί με μεταστατικό οστεοσάρκωμα αναπτύσσεται οξεία ανουρία νεφρική ανεπάρκεια που κατέληξαν σε ευθανασία. Μεταγενέστερες νεκροψία αποκάλυψε την παρουσία μεγάλων όγκων εμβόλων σε αμφότερες τις νεφρικές αρτηρίες, χωρίς ενδείξεις προκαλούμενης από φάρμακο αλλαγές στο νεφρικό παρέγχυμα, και ως τέτοια προοδευτική ασθένεια προσδιορίστηκε να είναι η αιτία της παρατηρούμενης νεφρική ανεπάρκεια. Ένας δεύτερος σκύλος που αναπτύχθηκε δοκιμή οξείας ηπατικής λειτουργίας (ALT, ALP) και χολερυθρίνη αυξήσεις 24 ώρες μετά τη χορήγηση του φαρμάκου. Ο σκύλος στη συνέχεια έκανε εμετό μια μεγάλη ξένο σώμα που αποτελείται από επιθέματα γάζας που χρησιμοποιούνται για την επίδεση του site καθετήρα και τις βιοχημικές τιμές επέστρεψαν στο φυσιολογικό εντός 72 ωρών? μια μερική προσωρινή απόφραξη της κοινής χοληφόρου πόρου λόγω ξένο σώμα προσδιορίστηκε ότι είναι η αιτία των βιοχημικών αλλαγών σε αυτήν την περίπτωση.

Η

Δόση κλιμάκωση διεξήχθη και δοσοπεριοριστικές τοξικότητες ταυτοποιήθηκαν με τη χρήση της άπαξ ανά εβδομάδα ωριαία έγχυση. Ενώ σχεδόν όλα τα γαστρεντερικά τοξικότητες ήταν κυρίως βαθμού 1 ή 2 στη φύση, σε δόσεις άνω των 9,5 mg /kg, τα σκυλιά βρέθηκαν να έχουν λήθαργο και ανορεξία που οι ιδιοκτήτες αισθάνθηκε σημαντικά εξασθενημένη ποιότητα ζωής, με αποτέλεσμα τη διακοπή της χορήγησης του φαρμάκου. Για παράδειγμα, και οι τρεις σκύλους που έλαβαν 10.25 mg /kg του φαρμάκου παρουσίασαν διάρροια βαθμού 2, λήθαργος, ανορεξία και και κάθε εν συνεχεία έλαβαν μόνο μία δόση του φαρμάκου. Ως τέτοια, 9.5 mg /kg θεωρήθηκε ως η μέγιστη ανεκτή εβδομαδιαία δόση του φαρμάκου όταν χορηγείται εβδομαδιαίως επί 1 ή 8 ώρες. Σε αυτή τη δόση, οι γαστρεντερικές τοξικότητες ήταν διαχειρίσιμο με την προσθήκη συγχορηγούμενα φάρμακα που αποτελούνται από ονδανσετρόνη, μετοκλοπραμίδη ή /και μαροπιτάντη για ναυτία /έμετο και μετρονιδαζόλη και /ή λοπεραμίδης για τη διάρροια. Όλα τα σκυλιά που συνέχισαν τη θεραπεία με STA-1474 πέραν των αρχικών 4 κύκλους θεραπείας παρέμεινε για ταυτόχρονη χορήγηση φαρμάκων κατά τη διάρκεια της φαρμακευτικής αγωγής.

Η απόκριση στη θεραπεία

Τα ποσοστά ανταπόκρισης ήταν αποφασισμένοι για σκύλους εισήλθε στις 3 διαφορετικές ομάδες δοσολογίας. Για τα σκυλιά που έλαβαν μια φορά την εβδομάδα δοσολογικό σχήμα (n = 12), κανένας αντικειμενικός απαντήσεις που παρατηρήθηκαν με την εξαίρεση ενός σκύλου με ένα εκτεταμένο στόματος κακόηθες μελάνωμα που βίωσε μια εκδήλωση εξαγγείωση κατά τη διάρκεια του 4

ου θεραπεία με STA-1474. Αυτό το σκυλί είχε μια μερική απόκριση στο μέγεθος του όγκου και μετά από φαρμακοκινητική ανάλυση (Σχήμα 3), προσδιορίστηκε ότι η ακούσια υποδόρια χορήγηση οδήγησε σε μια εκτεταμένη Tmax, χωρίς σημαντική αλλαγή στην πραγματική AUC (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Ο ασθενής # 5 είχε μια επιθετική στόματος κακοήθους μελανώματος που είχαν εισβάλει μέσα στην ρινική κοιλότητα. Κατά τη διάρκεια του 4

ου κύκλου θεραπείας με STA-1474, ένα γεγονός εξαγγείωση συνέβη ως αποτέλεσμα μεταβολής της φαρμακοκινητικής του φαρμάκου. Μια σημαντική μείωση στην προφορική μάζα παρατηρήθηκε 7 ημέρες αργότερα και μια επακόλουθη αξονική τομογραφία επιβεβαίωσε μερική ανταπόκριση στη θεραπεία. Εμφανίζονται είναι δύο αντιπροσωπευτικά συμφωνημένα CT εικόνες του όγκου πριν και μετά τη θεραπεία.

Η

Βάσει των στοιχείων της βιολογικής δραστηριότητας που σχετίζεται με μεγαλύτερο Tmax, το φαρμακοκινητικό μοντέλο χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί ένα μοντέλο δοσολογία που θα επιτευχθεί ένα παρόμοιο Tmax όταν το φάρμακο χορηγήθηκε για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα με τον ίδιο ρυθμό δόσης. Προβλέφθηκε ότι 9,5 mg /kg του STA-1474 δίδεται πάνω από μια έγχυση 8 ώρα θα ήταν ως αποτέλεσμα συγκεντρώσεις πλάσματος του ganetespib πάνω από 100 ng /ml πλάσματος για 8-10 ώρες και, κατά συνέπεια, τις επόμενες 6 σκυλιά είχαν εισέλθει σε μια κοόρτη την αξιολόγηση αυτή δοσολογικό σχήμα. Επιπλέον, δύο σκυλιά από την πρώτη χορήγηση ομάδα (9,5 mg /kg μία φορά την εβδομάδα) μεταφέρθηκαν στο πρωτόκολλο έγχυσης 8 ώρα μετά την ολοκλήρωση των προγραμματισμένων 4 δόσεις του φαρμάκου. Από τις 6 σκύλοι αρχικά έλαβαν θεραπεία με τον πλέον έγχυση, υπήρχαν δύο μερικές αποκρίσεις (μεταστατικό καρκίνωμα του θυρεοειδούς, 36 εβδομάδες σχήμα 4α? Μεταστατικό OSA, 20 εβδομάδες Εικόνα 4b), ένα μεικτό απόκριση (μεταστατικό MCT, 16 εβδομάδων), και τα δύο σκύλοι παρουσίασαν σταθερή νόσο (και οι δύο με μεταστατικό OSA, 12 εβδομάδες). Ένας σκύλος με μεταστατικό καρκίνωμα του θυρεοειδούς που ενεργοποιείται από την 1 ώρα έως 8 ώρες έγχυση βιώσει σταθερή ασθένεια για 40 εβδομάδες και ο σκύλος με από του στόματος κακόηθες μελάνωμα και εξαγγείωση συμβάν εμφάνισαν συνεχή μερική απόκριση για 12 εβδομάδες, ενώ για το πρωτόκολλο έγχυσης 8 ώρας.

α) Ο ασθενής # 14 είχε ένα τοπικά υποτροπιάζοντα καρκίνωμα του θυρεοειδούς με μεταστατική νόσο στους πνεύμονες. Αυτή η ασθενής έλαβε STA-1474 για το πρωτόκολλο έγχυσης 8 ώρα και παρουσίασαν μερική απόκριση στη θεραπεία τόσο του τοπικά υποτροπιάζοντα και μεταστατική νόσο. Που παρουσιάζονται είναι αντιπροσωπευτικά ακτινογραφίες πριν και μετά από 15 θεραπείες με STA-1474. Τα κίτρινα βέλη δείχνουν προς τα μεταστατικά πνευμονικά οζίδια. β) Ο ασθενής # 18 είχε μεταστατικό OSA στους πνεύμονες μετά από ακρωτηριασμό και τη χημειοθεραπεία για appendicular OSA. Αυτή η ασθενής έλαβε STA-1474 για το πρωτόκολλο έγχυσης 8 ώρες και παρουσίασαν μερική ανταπόκριση στη θεραπεία. Που παρουσιάζονται είναι αντιπροσωπευτικά ακτινογραφίες πριν και μετά από 4 θεραπείες με STA-1474. Τα κίτρινα βέλη επισημαίνουν τα μεταστατικά πνευμονικά οζίδια.

Η

Δεδομένου ότι η πλέον πρωτόκολλο έγχυσης φάνηκε να σχετίζεται με βιολογική δραστικότητα, θελήσαμε να προσδιοριστεί αν περισσότερο συχνή χορήγηση του STA-1474 χρησιμοποιώντας το πρωτόκολλο έγχυση διάρκειας 1 ώρας θα ήταν τόσο ανεκτή και να προκαλεί αντικειμενικές αποκρίσεις στη θεραπεία. Μία δόση των 5 mg /kg χορηγούμενα επί μία ώρα δύο φορές την εβδομάδα επιλέχθηκε με βάση τα προκαταρκτικά στοιχεία της ανοχής σε φυσιολογικούς σκύλους και φαρμακοκινητικής μοντελοποίησης (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α και Β, αυτό το δοσολογικό σχήμα οδήγησε σε Cmax και AUC ελαφρώς χαμηλότερη από εκείνη που δημιουργείται από τη δόση 9,5 mg /kg. Τοξικότητες που παρατηρήθηκαν ήταν παρόμοιες με αυτές με τη μια φορά την εβδομάδα υψηλότερη δόση STA-1474. Από τους 7 σκύλους χορηγείται αυτό το πρωτόκολλο, 2 παρουσίασαν μερικές αποκρίσεις στη θεραπεία (τόσο MCTs, Σχήμα 5) και οι δύο σκύλοι πήγε για να έχουν υπόλοιπα ασθένεια τους χειρουργικά. Ένας σκύλος (OSA μεταστατικό) παρουσίασαν σταθερή νόσο για ένα σύντομο χρονικό διάστημα, αλλά ο ιδιοκτήτης επέλεξε να μην συνεχίσουν τη θεραπεία και ως εκ τούτου, αυτό δεν πληρούν τα κριτήρια RECIST. Τα υπόλοιπα σκυλιά (λέμφωμα, n = 3? Μεταστατικό OSA, n = 1) παρουσίασαν προοδευτική ασθένεια

α) Ο ασθενής # 19 είχε επαναλαμβανόμενες βαθμού 3 δερματική MCTs.. Αυτή η ασθενής έλαβε STA-1474 για το πρωτόκολλο έγχυση διάρκειας 1 ώρας δύο φορές την εβδομάδα και παρουσίασαν μερική απόκριση στη θεραπεία των δερματικών βλαβών μετά από 7 θεραπείες. β) Ο ασθενής # 24 είχε ένα μεγάλο είχαν λάβει προηγούμενη θεραπεία δερματικών MCT. Αυτή η ασθενής έλαβε STA-1474 για το πρωτόκολλο έγχυση διάρκειας 1 ώρας δύο φορές την εβδομάδα και παρουσίασαν μερική απόκριση στη θεραπεία των δερματικών βλαβών μετά από 4 θεραπείες.

Η

Αξιολόγηση των HSP90 και HSP70 έκφραση σε δείγματα όγκων και PBMCs

Μετά από αναστολή του HSP90, η ταχεία προς τα άνω ρύθμιση της έκφρασης HSP70 συχνά σημειώνεται [14], [15], [18]. Ως εκ τούτου, προς τα πάνω ρύθμιση HSP70 μπορεί δυνητικά να χρησιμεύσει ως βιοδείκτη της απώλειας της λειτουργίας της HSP90. Για να προσδιοριστεί αν η θεραπεία με STA-1474 τροποποίησε την έκφραση της HSP70, HSP70 και αν θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως μια πιθανή ευαίσθητο υποκατάστατο βιοδείκτη για HSP90 PBMCs αναστολή συλλέχθηκαν πριν και μετά τη θεραπεία και κηλίδωση Western για HSP70 πραγματοποιήθηκε. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 6α, μικρές αυξήσεις στην έκφραση HSP70 ήταν εμφανείς στα δείγματα μετά τη θεραπεία PBMC, αν και αυτές οι αλλαγές ήταν δύσκολο να ποσοτικοποιηθεί με ακρίβεια. Κατά συνέπεια, μια δοκιμασία ELISA χρησιμοποιήθηκε για τις επακόλουθες δείγματα να εκτιμηθεί με μεγαλύτερη οριστικά προς τα πάνω ρύθμιση της HSP70.