Αφηρημένο

ιντεγκρίνης ανβ6 εκφράζεται έντονα σε μια σειρά ανθρώπινων καρκίνων και συχνά συσχετίζεται με την επιβίωση των ασθενών. Η παρούσα μελέτη εξετάζει τις συσχετίσεις μεταξύ ανβ6 έκφρασης και τον ασθενή κλινικο-παθολογικών χαρακτηριστικών στο Στάδιο Β και Γ Φάση του καρκίνου του ορθού, συμπεριλαμβανομένης της συνολικής επιβίωσης. Η έκφραση της ανβ6 μετρήθηκε σε 362 Στάδιο Β ή Γ δείγματα ορθού ιστού στην κεντρική περιοχή του όγκου, επεμβατική εμπρός όγκου και των παρακείμενων μη νεοπλαστικά βλεννογόνο χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία. Κατανομή των ανβ6 βρέθηκε να είναι σημαντικά υψηλότερη στο μεταναστευτικό μέτωπο σε σύγκριση με τις κεντρικές περιοχές του όγκου (ρ & lt? 0.001) ή σε γειτονικές μη νεοπλασματικά βλεννογόνου (ρ & lt? 0.001) υποδηλώνοντας ανβ6 παίζει ένα ρόλο στην κύτταρο όγκου εισβολή. Ωστόσο, ιντεγκρίνης ανβ6 έκφραση δεν συσχετίστηκε με κλινικο-παθολογικές λειτουργίες ή τη συνολική επιβίωση που δείχνει ότι δεν είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης διαφοροποίησης Στάδιο Β ή καρκίνου του ορθού C. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ανβ6 η έκφραση της ανβ6 συμμετέχει στα αρχικά στάδια (δηλ Στάδια Α /Β) της εξέλιξης όγκων και όχι στα τελευταία στάδια (δηλαδή Στάδια C /D). Ωστόσο, η μελέτη μας έδειξε ότι η έκφραση του καρκίνου του ορθού ανβ6 δεν αυξάνει μεταξύ Στάδια Β και C, αλλά μπορεί να εμφανιστεί νωρίτερα, δηλαδή πριν ή κατά τη διάρκεια του καρκίνου του Σταδίου Β

Παράθεση:. Ahn SB, Mohamedali Α, Chan C , Fletcher J, Kwun SY, Clarke C, et al. (2014) Οι συσχετισμοί μεταξύ της έκφρασης ιντεγκρινών ανβ6 και Κλινικο-παθολογικά χαρακτηριστικά στο Στάδιο Β και Γ Φάση του καρκίνου του ορθού. PLoS ONE 9 (5): e97248. doi: 10.1371 /journal.pone.0097248

Επιμέλεια: Ju-Seog Λι, του Πανεπιστημίου του Τέξας MD Anderson Cancer Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 11 Νοέμβρη 2013? Αποδεκτές: 16 Απριλίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: May 12, 2014

Copyright: © 2014 Ahn et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το παρόν έργο υποστηρίχθηκε από το Κέντρο Biofocus Ερευνών, το Πανεπιστήμιο Macquarie και επιχορηγήσεις από NHMRC (1010303) και του καρκίνου του Συμβουλίου ΝΝΟ. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η κατάταξη της σοβαρότητας του καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC) βασίζεται σήμερα σε κλινικές και ιστολογικές προσδιορισμό της έκτασης της εξάπλωσης του όγκου. Τα καρκινικά κύτταρα μπορούν να βρίσκονται εντός του τοιχώματος του εντέρου (Στάδιο Α), εκτείνεται πέρα ​​από το propria muscularis (Στάδιο Β), ή μετάσταση στους λεμφαδένες (Στάδιο C) ή απομακρυσμένα όργανα (Στάδιο D). Πέντε χρόνια στατιστικές CRC επιβίωση δείχνουν σημαντική μείωση στην επιβίωση μεταξύ Στάδιο Β και C, που αντιστοιχεί σε διαφορά στην μετάσταση λεμφαδένα [1]. Αν και κλινικο-παθολογική στάσης είναι η τρέχουσα χρυσό πρότυπο τεχνική για τον προσδιορισμό της πρόγνωσης, η χρήση των νέων πρωτεϊνών βιοδεικτών που εκφράζεται ή ενισχύεται σε ένα στάδιο-ειδικό τρόπο κατά τη διάρκεια της εξέλιξης μπορεί να αυξήσει την ακρίβεια και την αξιοπιστία των ιστολογικών προσδιορισμών. Ένας συνδυασμός ενός υγιούς συστήματος σταδιοποίησης CRC και την παρουσία των προγνωστικών βιοδεικτών πρωτεΐνης έχει προταθεί ως μια πιο αποτελεσματική προσέγγιση για τη διάγνωση, πρόγνωση και θεραπεία καθοδήγηση [2].

Μία πρόσφατα προταθείσα δυναμικό προγνωστικός βιοδείκτη είναι η ανβ6 ιντεγκρίνης. Αυτή η πρωτεΐνη εκφράζεται έντονα σε πολλούς τύπους καρκίνων και έχει προταθεί ότι είναι ένας προγνωστικός δείκτης της κακής επιβίωσης σε CRC, γαστρικό αδενοκαρκίνωμα και τραχηλικού πλακώδους καρκινώματος [3] – [6]. Ιντεγρίνης ανβ6 είναι ένας υποδοχέας διαμεμβράνης που αποτελείται από μη-ομοιοπολικά συνδεδεμένα αν και β6 υπομονάδες, όπου οι εταίροι β6 υπομονάδας αποκλειστικά με αν και εκφράζεται μόνο σε επιθηλιακούς ιστούς [7]. ανβ6 είναι συχνά συγκεντρώνονται σε χαμηλής διαφοροποίησης όγκους εγγύς εισβολή περιθώρια καρκίνο [8] – [11]. Επίσης, έχει αναγνωριστεί ως ένας σημαντικός παράγοντας στο

«επιθηλιακά σε μεσεγχυματικά μετάβαση»

(EMT), που χαρακτηρίζεται από απώλεια της κυτταρικής προσκόλλησης, την καταστολή της E-cadherin και την αύξηση της κινητικότητας των κυττάρων κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του καρκινώματος [12] . Ιντεγκρίνης ανβ6 πιστεύεται ότι λειτουργούν σε ένα πολύπλοκο τρόπο, την κίνηση των κυττάρων καταρρακτών σηματοδότησης ενώ επίσης αλληλεπιδρά με κλειδί εξωκυττάρια μήτρα (ECM) πρωτεΐνες και ενεργοποίηση σημάτων ανάπτυξης, όπως λανθάνων μετασχηματισμού β1 αυξητικού παράγοντα (TGF-β1), ένα αναγνωρισμένο επαγωγέα του ΕΜΤ [3 ], [13]. Προς υποστήριξη του ισχυρισμού αυτού, διαμεσολαβούμενη από αντίσωμα αναστολή της ενεργοποίησης ΤΟΡ-β1 ανβ6 μεσολάβηση καταστέλλει ΕΜΤ [14]. Επιπλέον, ανβ6 ιντεγκρίνης έχει δειχθεί ότι παίζουν ζωτικό ρόλο σε ένα μοντέλο ΕΜΤ CRC σφαιροειδές προκαλούνται μέσω της ενεργοποίησης του ΤΟΡ-β1 και επακόλουθη μετανάστευση των κυττάρων επί διάμεση ινονεκτίνη [11].

Σε αντίθεση με τις περισσότερες άλλες ιντεγκρίνες, ανβ6 σήματα μέσω ενός μοναδικού 12-μερές κυτταροπλασματική αλληλουχία ο-τερματικού που αλληλεπιδρά άμεσα με τον εξωκυτταρικό κινάση σήματος ρυθμιζόμενη (ΕΚΚ2) ενεργοποίηση του /ΜΑΡΚ μονοπάτι ERK που συχνά υπερεκφράζεται σε υψηλά CRC μετάσταση [15]. Η β6 • αλληλεπίδραση ERK2 είναι επίσης υπεύθυνη για την ιντεγκρίνη μεσολάβηση μεταλλοπρωτεάσης μήτρας 9 (ΜΜΡ9) έκκριση (μέσω ΜΑΡΚ) που επιτρέπει την υποβάθμιση της ECM, διευκολύνοντας τη διαφυγή των κυττάρων [16], [17]. Εν ολίγοις, είναι ανβ6 ένας ρυθμιστής της μετάστασης και βρέθηκε να υπερεκφράζεται σε πολλούς φαινοτύπους καρκίνου. Ενώ το σύνολο των στοιχείων που εμπλέκουν ανβ6 στη μετάσταση είναι σημαντική, υπάρχουν μελέτες που έχουν εξετάσει, όταν γίνεται υπερεκφράζεται ή αν υπάρχει συσχετισμός μεταξύ ανβ6 και την επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του ορθού. Σε αυτή τη μελέτη, εξετάζουμε συγκεκριμένα ανοσοϊστοχημική έκφραση της ανβ6 το 362 ασθενείς με καρκίνο του ορθού Σταδίου Β ή C στην κεντρική περιοχή του όγκου, η επεμβατική εμπρός και δίπλα μη νεοπλαστικά βλεννογόνο.

Υλικά και Μέθοδοι

ασθενής ομάδα

Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε χειρουργική εκτομή για καρκίνο του ορθού σε Concord νοσοκομείο, μια τριτοβάθμια παραπομπή νοσοκομείο στο Σίδνεϋ της Αυστραλίας, μεταξύ του Ιανουαρίου 1988 και του Δεκεμβρίου 2001. Όλες οι εκτομές έγιναν από ειδικούς του παχέος χειρουργοί μετά από μια τυποποιημένη τεχνική (συνολικά ανατομική ανατομή) [18]. Το ορθό ορίστηκε ως συμπεριλαμβανομένου του κόμβου ορθοσιγμοειδικής, αλλά χωρίς το πρωκτικό κανάλι. Κλινικά δεδομένα από τους ασθενείς εισήχθησαν σε μια προοπτική βάση δεδομένων που άρχισε το 1971, συμπεριλαμβανομένων των πληροφοριών σχετικά με τα χαρακτηριστικά των ασθενών, συννοσηρότητα, την παρουσίαση, έρευνες, χειρουργική αντιμετώπιση, επιπλοκές, επικουρική θεραπεία, την παθολογία και την παρακολούθηση [19], [20]. Το Έργο CRC σε Concord Νοσοκομείο πραγματοποιείται υπό την έγκριση της Επιτροπής Δεοντολογίας της Νότιας Δυτική Περιοχή του Σίδνεϊ Υγείας (CH62 /6/2011-136) με τη γραπτή συγκατάθεση, σύμφωνα με τις απαιτήσεις της ΝΝΟ Ανθρωπίνων Ιστών Πράξη του 1983 και την NHMRC Εθνική Δήλωση για Ηθικής συμπεριφοράς στο Ανθρώπινο Ερευνητικό 2007. Η μελέτη, επίσης, που εγκρίθηκε από την Επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημίου Macquarie του Ανθρώπου (# 5201100858). Οι ασθενείς που έλαβαν εισαγωγική ακτινοθεραπεία είτε είχαν μικρό ή μεγάλο θεραπείας φυσικά με ή χωρίς σχετιζόμενη χημειοθεραπεία. Η επιλογή για τη θεραπεία βασίστηκε σε κλινικά ευρήματα και τη συζήτηση σε ένα δουλεύουν με συνάντηση.

παθολογοανατομική εξέταση του δείγματος εκτομή

Από την εξέταση των δειγμάτων εκτομή ακολούθησε ένα πρότυπο πρωτόκολλο [1]. Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε ως η μεγαλύτερη διάσταση της επιφάνειας. Ελήφθησαν μπλοκ για να αποδειχθεί μέγιστη άμεση διείσδυση του όγκου του τοιχώματος του εντέρου. Πρόσθετες μπλοκ ελήφθησαν ειδικώς για να αποδειχθεί η σχέση μεταξύ του όγκου και οποιοδήποτε προσκολλημένο δομή ή ιστό [21], καθώς και γραμμές εκτομής και της ελεύθερης επιφάνειας ορογόνο [22]. επίπεδο του όγκου στο ορθό μετρήθηκε από το πρωκτικό χείλος. Φλεβική εισβολή από τον όγκο που αναφέρεται εμπλοκή μεγάλου ή μικρού πάχους τοιχώματα των φλεβών, είτε εντός είτε εκτός του τοιχώματος του εντέρου. Όταν υπήρχε αμφιβολία ως προς το αν μια δομή που συμμετείχαν ήταν μια φλέβα, μια αρνητική διαπίστωση καταγράφηκε. Μια κορυφής κόμβος ορίστηκε ως η πλέον εγγύς οποιωνδήποτε κόμβων που βρίσκονται μέσα 1 εκατοστό από την απολίνωση ενός αγγείου που ονομάζεται στην κορυφή ενός αγγειακού μίσχου. Βαθμός του όγκου εκτιμήθηκε λαμβάνοντας υπόψη το βαθμό διαφοροποίησης και ανάπλαση, η φύση του περιθωρίου όγκου (πιέζοντας ή διείσδυση) και την παρουσία και τη σημασία των αγγειακών εισβολής [19]. συστήματος Όλα τα παθολογικά χαρακτηριστικά αναλύθηκαν σε κάθε δείγμα και η παρουσία ή απουσία καταγράφεται ρητά, χωρίς δεδομένα που λείπουν για κάθε μεταβλητή.

Οι όγκοι οργάνωσε σύμφωνα με την αυστραλιανή Κλινικο-Παθολογική στάσης (ΑΚΕ) [1] για την CRC που φιλοξενεί υπο-στάδια συμβατό με άλλα κλινικοπαθολογική συστήματα σταδιοποίησης TNM, όπως [23]. Μια δυνητικά θεραπευτική λειτουργία ορίστηκε ως εκείνη όπου δεν υπήρξαν συστηματικές μεταστάσεις κατά τη στιγμή της λειτουργίας και χωρίς όγκων προσδιορίζονται ιστολογικά στο εγγύς, άπω ή περιφερειακή γραμμές εκτομής ιστολογικά (ΑΚΕ τα στάδια Α, Β, C).

ιστού κατασκευή μικροσυστοιχιών

μικροσυστοιχίες ιστού (TMA) κατασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας ένα προηγμένο ιστού arrayer ATA-100 (Chemicon, Temecula, CA, USA). Πυρήνες (1,5 mm) ελήφθησαν από προσεκτικά επιλεγμένα, μορφολογικά αντιπροσωπευτικές περιοχές του αρχικού μπλοκ παραφίνης και παρατάσσονται σε φρέσκα μπλοκ παραλήπτη παραφίνης. Δοκιμίων από την κεντρική περιοχή του όγκου (αποφεύγοντας αυλού επιφάνειες), την επεμβατική μπροστινό μέρος του όγκου και ιστολογικά φυσιολογικό βλεννογόνο.

ανοσοϊστοχημεία (IHC)

Ένα μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (MAb) έναντι πλήρους μήκους ανθρώπινο ανβ6 (κλώνος 6.2A1, IgG1) (Biogen Idec, Cambridge, ΜΑ, USA) χρησιμοποιήθηκε στην IHC. Η ειδικότητα του αντι-ανβ6 μονοκλωνικό αντίσωμα 6.2A1 έχει αναφερθεί σε αρκετές μελέτες [14], [24] – [26]. Όλα τα τμήματα TMA προετοιμάστηκαν και επεξεργασία ταυτόχρονα με την ίδια παρτίδα της πρωτοβάθμιας και δευτεροβάθμιας αντισώματα και χρώση αντιδραστηρίων, καταργώντας την ανάγκη για την ανάπτυξη ενός εσωτερικού προτύπου. IHC πραγματοποιήθηκε με δύο διαφορετικά συστήματα ενίσχυσης ανίχνευσης: ένα σύμπλοκο αβιδίνης-βιοτίνης (ABC) και ένα σύστημα ανίχνευσης IHC με βάση πολυμερές. Για ABC IHC, 4 μm παραφίνη-ενσωματωμένες ενότητες TMA ήταν αφαιρείται η παραφίνη και επανυδατώθηκαν, και ενδογενούς υπεροξειδάσης μπλοκαρίστηκε με 3% H

2O

2 σε μεθανόλη για 5 λεπτά. Το αντιγόνο ανάκτηση διεξήχθη χρησιμοποιώντας πεψίνη (DAKO, Carpinteria, CA) στους 37 ° C για 10 λεπτά. Οι τομές επωάστηκαν με ορό αλόγου (Vector Laboratories, Burlingame, CA) διάλυμα μπλοκαρίσματος (15 μl /ml) σε TBS-Tween20 για 20 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (RT) και στη συνέχεια επωάστηκαν με 0.5 mg /ml αντι-ανβ6 MAb σε RT για 60 λεπτά . Οι τομές επωάστηκαν με βιοτινυλιωμένη IgG αντι-ποντικού (Vector Laboratories) για 20 λεπτά σε RT και επωάζονται με το αντιδραστήριο Elite ABC (Vector Laboratories) για 20 λεπτά σε RT. Μεταξύ κάθε επώασης, TBS έγινε έκπλυση δύο φορές. υποστρώματος 3,3′-διαμινοβενζιδίνη σε 0,05 Μ Tris-HCL (ρΗ 7,4) εφαρμόστηκε για 5 λεπτά και η ένταση αυξάνεται με τμήματα επώαση σε CuSO

4 για 5 λεπτά. Οι πυρήνες των κυττάρων βάφτηκαν αντίθετα με αιματοξυλίνη Mayer του (Sigma, St. Louis, ΜΟ). Polymer-based IHC πραγματοποιήθηκε σε ένα Bond-Max Autostainer (Leica Microsystems, Bannockburn, IL) όπως περιγράφεται [27], εκτός από το ότι ανάκτηση αντιγόνου διεξήχθη με πεψίνη και 6.2A1 αντι-ανβ6 MAb (0,5 μg /ml) χρησιμοποιήθηκε ως πρωτογενές αντίσωμα. Ισότυπος IgG1 (R & amp? D Systems, Minneapolis, USA) χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός μάρτυρας

IHC αξιολόγηση

Η ανοσοαντιδραστικότητα για ανβ6 αξιολογήθηκε από δύο αξιολογητές ανεξάρτητα (SBA, CC), με 100. % Συμφωνώ, οι οποίοι δεν γνώριζαν την κατάσταση κλινικο-παθολογικές ασθενούς. εντάσεις χρώσης βαθμολογήθηκαν ξεχωριστά για την κεντρική περιοχή, επεμβατική μπροστά όγκου και φυσιολογικό βλεννογόνο και βαθμολογήθηκαν ως 0 = καμία χρώση, 1 = ασθενής χρώση, 2 = ενδιάμεσος χρώση και 3 = έντονη χρώση. Εάν ένταση χρώσης ήταν ετερογενή σε κάθε ενιαίο πυρήνα ιστού, η κυρίαρχη ένταση χρώσης καταγράφηκε.

Αποτελέσματα μεταβλητή και ασθενή

παρακολούθηση

Το αποτέλεσμα το συνολικό χρόνο επιβίωσης μετρήθηκε από την ημερομηνία χειρουργική εκτομή με ημερομηνία θανάτου από οποιαδήποτε αιτία, με τους χρόνους λογοκρισία για τους ασθενείς που έχασαν την παρακολούθηση ή που παρέμειναν ζωντανοί στο τέλος της μελέτης. Οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν ετησίως μέχρι το θάνατο ή μέχρι τις 31 Δεκεμβρίου, έχουν 2011. Λεπτομέρειες του πρωτοκόλλου παρακολούθησης περιγραφεί στο παρελθόν [18].

Στατιστική Ανάλυση

Το τεστ chi-τετράγωνο ή του Fisher ακριβής δοκιμή χρησιμοποιήθηκαν για να εξεταστεί η στατιστική σημαντικότητα των διαφορών σε αναλογίες. Η Wilcoxon ζεύγη υπογραφεί δοκιμή τάξεις χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση των κατανομών συχνότητας των ανβ6 έκφρασης μεταξύ του κεντρικού όγκου, μετωπική όγκου και φυσιολογικού βλεννογόνου. Οι συγκρίσεις του χρόνου επιβίωσης μεταξύ των στρωμάτων της έκφρασης ανβ6 και συμπαράγοντες έγιναν με τη μέθοδο Kaplan-Meier και δοκιμασία log-rank και Cox παλινδρόμησης και Wald p. Συνεχής και πολυ-κατηγορία συμπαράγοντες είχαν dichotomised σε συμβατικά ή άλλως κατάλληλα σημεία κοπής. Όπως κλινικο-παθολογικές στάδιο είναι ο ισχυρότερος προγνωστικός δείκτης της γνωστής πρόγνωση, ενώσεις με την επιβίωση εξετάστηκαν για το στάδιο Β και Γ χωριστά, καθώς και για τα δύο στάδια σε συνδυασμό, προκειμένου να εντοπιστούν τυχόν διαφορές στις επιπτώσεις της ανβ6 μεταξύ των σταδίων. Το επίπεδο για δύο ουρών στατιστική σημαντικότητα p ≤ 0,05 με διαστήματα εμπιστοσύνης (CI) στο επίπεδο του 95%. Οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με το λογισμικό SPSS έκδοση 20 (IBM Αυστραλία Limited)

Αποτελέσματα

Από τα 1.804 Concord Νοσοκομείο CRC εκτομές από τον Ιανουάριο του 1988 μέχρι το Δεκέμβριο του 2001, οι ασθενείς αποκλείστηκαν με την ακόλουθη σειρά:. Εκείνους τους ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου (1022), προηγούμενες CRC (20), η φλεγμονώδης νόσος του εντέρου ή

πολυποδίασης coli

(9), ένα συγγενής πρώτου βαθμού με CRC (65) και Στάδιο α ή D όγκου (289), αφήνοντας 399 ασθενείς δυνητικά διαθέσιμα για την αξιολόγηση της ανβ6 σε αυτή τη μελέτη. Ωστόσο, 37 από αυτούς τους ασθενείς είχαν ανεπαρκή αρχειακό ιστό που διατίθενται για την αξιολόγηση, αφήνοντας 362 που ήταν εκτιμητέο. Διάφοροι αριθμοί αυτοί είχαν uninformative αποτέλεσμα για μία ή περισσότερες από τις εκτιμήσεις ανβ6 (υποδεικνύεται ενδεχομένως σε επόμενοι πίνακες). Συγκρίνοντας τις 362 ασθενείς οι οποίοι είχαν ένα αποτέλεσμα σε μία ή περισσότερες από τις εκτιμήσεις ανβ6 με το 37 ο οποίος δεν μπορούσε να εκτιμηθεί, δεν υπήρξαν σημαντικές διαφορές στο εύρος των μεταβλητών κλινικο-παθολογικές εξετάστηκαν. Έτσι, οι 362 ασθενείς αξιολογήθηκαν φαίνεται να είναι αντιπροσωπευτικό του συνόλου της πισίνας των 399 ασθενών από την οποία αντλήθηκαν. Οι κλινικο-παθολογικές χαρακτηριστικά αυτών των 362 ασθενών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1.

Η

Η έκφραση της ιντεγκρίνης ανβ6 στο Στάδιο Β και Γ δείγματα ορθού ιστού

Για να συγκρίνετε κατανομή των ανβ6 χρώση ένταση μεταξύ των κεντρικών, μετωπική καρκίνου του ορθού και ιστολογικά φυσιολογικό επιθηλιακό ιστό, και λόγω των διάφορους αριθμούς ασθενών με πληροφοριακό αποτελέσματα σε κάθε εκτίμηση, μια Wilcoxon ζεύγη υπογραφεί δοκιμή τάξεις διεξήχθη σε ασθενείς οι οποίοι είχαν μια ενημερωτική αποτέλεσμα και στις δύο αξιολογήσεις της κάθε ζεύγος. Η κατανομή των ανβ6 ένταση χρώσης ήταν σημαντικά υψηλότερη στην μετωπική σύγκριση με κεντρικό ιστό (n = 259, σ & lt? 0.001)? σημαντικά υψηλότερη στο μετωπιαίο σε σύγκριση με φυσιολογικό ιστό (n = 302, σ & lt? 0.001)? και ελαφρώς υψηλότερη στην κεντρική σύγκριση με φαινομενικά φυσιολογικού βλεννογόνου (n = 253, p = 0,049) (Πίνακας 2). Οι εντάσεις της έκφρασης ανβ6 μεταξύ του ορθού σταδίου καρκίνου του Β και Γ ιστών δεν έδειξε διαφορές στο εσωτερικό κάθε σημειωθούν τιμή (Σχήμα 1). Μη ειδική σύνδεση εξετάστηκε χρησιμοποιώντας MAbs σχετικές ελέγχου ισοτύπου και δείχθηκε σε όλες τις περιπτώσεις να είναι ασήμαντος.

Δεν υπήρχε διαφορά στα πρότυπα χρώσης σε κάθε σημειωθούν τιμή (0 ή 1 ή 2 ή 3) μεταξύ του καρκίνου του ορθού στάδιο Β και Γ ιστούς. (C): IgG1 αρνητικό έλεγχο. μπαρ κλίμακα:. 200 μm

Η

Συνέχεια λεπτομέρεια

Σε 110 (30,4%) ασθενείς που δεν είχε πεθάνει, ο χρόνος επιβίωσης κυμαινόταν από 103 μήνες έως 245 μήνες, με ένα διάμεση τιμή των 171 μηνών. Σε 243 (67,1%) ασθενείς που είχαν πεθάνει, ο χρόνος επιβίωσης κυμαινόταν από 2 ημέρες έως 243 μήνες, με ένα μέσο όρο 45 μήνες. Σε 9 (2,5%) ασθενείς που είχαν χάσει, ο χρόνος παρακολούθησης κυμάνθηκε 3-178 μήνες, με ένα μέσο όρο 51 μήνες.

Η έκφραση της ανβ6 και οι ασθενείς επιβίωση

Kaplan-Meier επιβίωσης οικόπεδα έδειξαν ότι η συνολική επιβίωση δεν ήταν συνδεδεμένη σημαντικά είτε στην κεντρική ή μετωπική ανβ6 έκφραση, είτε για το στάδιο Β και Γ σε συνδυασμό ή ξεχωριστά (Σχήμα 2 και Πίνακας 3).

συνολική επιβίωση του 362 ασθενών με καρκίνο του ορθού (συνδυασμένη Stage B και C) δεν σχετιζόταν σημαντικά με κεντρικό (α) ή μετωπική (β) ανβ6 έκφρασης.

Η

Η έκφραση της ανβ6 και κλινικο-παθολογικών χαρακτηριστικών

Η αξιολόγηση της συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ιντεγκρίνης ανβ6 και κλινικο-παθολογικών χαρακτηριστικών έδειξε ότι ανβ6 έκφραση δεν συνδέθηκε με οποιοδήποτε χαρακτηριστικό κλινικο-παθολογικές (Πίνακας 3).

κλινικο-παθολογικά χαρακτηριστικά του σταδίου Β και C του καρκίνου του ορθού ασθενή

η συνολική επιβίωση ήταν σημαντικά μειωμένη σε ασθενείς ηλικίας 75 ετών και άνω, όσοι είχαν τη λειτουργία ενός Hartmann, όσοι με βλεννώδες ή σφραγίδα όγκους δακτύλιο, όταν ένα ακραίο λεμφαδένων είχε εμπλακεί, όταν ≥4 κόμβοι συμμετείχαν, εκείνοι με το Στάδιο Γ όγκου , σε όγκους υψηλής ποιότητας, με την παρουσία του φλεβικού εισβολή, όταν ένα παρακείμενο όργανο ή δομή είχε διεισδύσει από τον όγκο, και σε ασθενείς που δεν λαμβάνουν επικουρική χημειοθεραπεία. Σύνδεσης μεταξύ κλινικο-παθολογικά χαρακτηριστικά και τη συνολική επιβίωση στους 362 ασθενείς παρουσιάζεται στον Πίνακα 4.

Η

Ανίχνευση ανβ6 χρησιμοποιώντας βάση πολυμερές IHC

Polymer-based IHC διεξήχθη soley να ανίχνευση ανβ6 έχασε από τεστ ABC IHC. Αυτό ήταν ένα εργαλείο διερεύνησης για να προσδιοριστεί μόνο ανβ6 ένταση χρώσης και δεν χρησιμοποιήθηκε για να μετρήσει την επιβίωση των ασθενών. Μια σύγκριση των κατανομών των ιντεγκρίνης ανβ6 εντάσεις χρώσης των δύο τεχνικών IHC έδειξαν ότι ανβ6 έκφρασης χρησιμοποιώντας το πολυμερές με βάση IHC εμφανίστηκαν σε περισσότερο από το 90% των ιστών όλων των ασθενών σε όλες τις αξιολογήσεις (Πίνακας 5).

Η

Συζήτηση

σε αυτή τη μελέτη, δείχνουμε ότι η κατανομή της έκφρασης ιντεγκρίνης ανβ6 ήταν σημαντικά υψηλότερη στην επεμβατική μέτωπο του όγκου σε σύγκριση με την κεντρική περιοχή του όγκου (ρ & lt? 0.001) ή ιστολογικά φυσιολογικό βλεννογόνο (ρ & lt? 0.001) σε 362 ορθού Στάδιο Β και C. Ωστόσο, κλινικο-παθολογικών χαρακτηριστικά και η συνολική επιβίωση δεν ήταν στατιστικά που σχετίζονται με ιντεγκρίνη έκφραση ανβ6. Αυτή η παρατήρηση έρχεται σε αντίθεση με προηγούμενες αναφορές που υποδηλώνει ότι η έκφραση ανβ6 συνδέεται συχνά με κακή επιβίωση σε διάφορους καρκίνους [3], [6], [11], [26], [28]. Ωστόσο, οι άλλες μελέτες ανβ6 διεξήχθησαν σε όγκους σε πολλαπλές στάδια (δηλαδή, Στάδια Α έως Δ), ενώ η μελέτη μας επικεντρώθηκε μόνο στις Σκηνή Β και C και για πρώτη φορά αποκλειστικά για πρωκτική δείγματα καρκίνου.

CRC είναι μια καταστροφική ασθένεια του οποίου η πρωτεΐνη μοριακού βιοσημάδια σιγά-σιγά να διερευνηθούν. Η κατανόηση και ανίχνευση από αυτές μπορεί να βοηθήσουν την έγκαιρη διάγνωση, την πρόγνωση και τη θεραπεία της CRC [2]. Είναι γνωστό ότι η μετάσταση είναι η κύρια αιτία θνησιμότητας και η κύρια αιτία της αποτυχίας της αντικαρκινικών θεραπειών [29]. Πράγματι, έχει αποδειχθεί ότι η φαινοτυπική ιστολογικά παρατηρείται μετάβαση από μια μη μεταστατικό (Στάδιο Β) σε κομβικά μεταστατικό (σταδίου C) συσχετίζεται με κακή επιβίωση [1]. Σε μοριακό επίπεδο, ο διακόπτης των καρκινικών κυττάρων από έναν επιθηλιακό προς έναν φαινότυπο μεσεγχυματικά συνδέεται με την αποδόμηση της ECM και άλλες βασικές βιολογικές διαδικασίες που διευκολύνουν μετάσταση. Βασικά ρυθμιστές που μπορεί να ρυθμίζουν αυτές τις βιολογικές διαδικασίες είναι η απώλεια της Ε-καδερίνης, η ενεργοποίηση του ΤΟΡ-β1, οι αυξήσεις των πρωτεολυτικών συστήματα, όπως MMPs, ενεργοποιητή πλασμινογόνου ουροκινάσης (υΡΑ) και ο υποδοχέας υΡΑ (uPAR) [13], [30]. Σημαντικά, ιντεγκρίνης ανβ6 συνδέεται στενά με πολλές από τις διαδικασίες αυτές ρυθμιστές δρουν επί, συμπεριλαμβανομένης της οδού ΜΑΡΚ, μια από τις οδούς σηματοδότησης πρωτογενών εμπλέκονται στο μετασχηματισμό, τον πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετάσταση του CRC [3], [31]. Για παράδειγμα, ανβ6 ενεργοποιεί ΤΟΡ-β1 με την απελευθέρωση αυτής της πρωτεΐνης από ένα αδρανές σύμπλοκο [3]. Επομένως, δεν αποτελεί έκπληξη το γεγονός, ότι ανβ6 υπερεκφράζεται κυρίως σε πολλαπλασιαζόμενα επιθηλιακά κύτταρα όπου δραστηριοποιείται και προωθεί «οδηγούς» της μετάστασης. πρόσφατο ανέκδοτο έργο μας δείχνουν ότι ανβ6 αλληλεπιδρά με άλλες πρωτεΐνες, που βρέθηκαν επάνω ρυθμισμένη στο CRC (π.χ., uPAR), και αυτό έχει πλέον επιβεβαιωθεί με δοκιμασία απολίνωση εγγύτητα και σειρά πεπτιδίου. Δεν είναι γνωστό εάν η αλληλεπίδραση με άλλα μόρια μπορούν να ρυθμίζουν την βιολογία του ανβ6 δεδομένου ότι υΡΑΚ είναι ένα πολυ-λειτουργικό υποδοχέα κυτταρικής επιφάνειας που εμπλέκεται και στην αποδόμηση της ECM και την κυτταρική σηματοδότηση [32], καθώς επίσης και όντας ένας φτωχός προγνωστικός παράγοντας του CRC επιβίωσης [ ,,,0],33].

δεν κάνουμε μόνο τα αποτελέσματά μας Ανακεφαλαιώνοντας προηγούμενες μελέτες που αποδεικνύουν ανβ6 έκφρασης σε πολλαπλασιαζόμενα επιθηλιακά κύτταρα, αλλά επιβεβαιώνουν ότι είναι ανβ6 επιθηλιακά-περιορίζεται στον καρκίνο του ορθού. Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι η ανβ6 έκφραση συγκεντρώθηκε στην άκρη εισβολή των ωοθηκών όγκου και του στόματος καρκινώματα πλακωδών κυττάρων [8], [9], [34]. Τα αποτελέσματά μας επιβεβαιώνουν ότι ανβ6 είναι επίσης περισσότερο εντόνως εκφρασμένος στο μεταναστευτικό μέτωπο στον καρκίνο του ορθού σε σχέση με τις κεντρικές περιοχές της πρωκτικής όγκων ή /και φυσιολογικό βλεννογόνο προτείνοντας ανβ6 παίζει κρίσιμο ρόλο στην εισβολής καρκινικών κυττάρων.

Αυτή η μελέτη εστιάστηκε στην οριοθετούν αν σε πρωκτικές έκφραση του καρκίνου του ανβ6 θα μπορούσε να είναι ένας δείκτης της μετάβασης ενός όγκου από το στάδιο Β στο Στάδιο πρωτόκολλα χρώση C. δύο IHC έγιναν και τα δεδομένα από ABC-based IHC επιβεβαίωσε ότι ιντεγκρίνης ανβ6 δεν ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης σε αυτά τα δύο στάδια , ούτε ήταν συσχετίζεται με οποιοδήποτε κλινικο-παθολογικό χαρακτηριστικό που μελετήθηκαν. Το αποτέλεσμα αυτό ήταν αντίθετα με τις προσδοκίες, επειδή ανβ6 είχε προηγουμένως μια θετική συσχέτιση με την επιβίωση των ασθενών σε μια σειρά καρκίνων. Συγκεκριμένα, ανβ6 έχει ταυτοποιηθεί ως προγνωστικός δείκτης κακής επιβίωσης σε CRC [11], αδενοκαρκίνωμα στομάχου [6], [26] και του τραχήλου της μήτρας πλακώδες καρκίνωμα [28], όπου οι μελέτες CRC και γαστρικού καρκινώματος με βάση το στάδιο του όγκου Ι μέσω IV και τραχηλικού πλακώδους καρκινώματος ήταν σε ασθενείς που προσδιορίζονται ως FIGO Στάδιο ΙΑ μέσω IIB (που ισοδυναμεί με ΤΜΝ Στάδιο Ι-ΙΙ). Από τη μελέτη αυτή CRC (n = 488) [11], κατά Kaplan-Meier για έδειξε ότι ανβ6 συνδέθηκε έντονα με την επιβίωση σε όγκους πρώιμο στάδιο (Στάδιο Ι-ΙΙ), αλλά όχι για τις μετέπειτα όγκους σταδίου (σταδίου III-IV). Ομοίως, μια μελέτη 300 ασθενείς με γαστρικό καρκίνωμα [26] αποκάλυψε ότι ήταν ανβ6 ένας πιθανός παράγοντας κινδύνου τόσο νωρίς (Φάση Ι-ΙΙ) και προχωρημένο στάδιο (Στάδιο ΙΙΙ-IV), με την επιβίωση που συνδέονται πιο σημαντικά νωρίτερα από ό, τι αργότερα. Μια πρόσφατη μελέτη του γαστρικού καρκινώματος (n = 51) [6] αποδεικνύεται επίσης ανβ6 ήταν ένας φτωχός προγνωστικός παράγοντας, αλλά και επιβίωση δεν συσχετίστηκε σημαντικά με το στάδιο. Επιπλέον, η αυχενική μελέτη (n = 85) [28] αναφέρεται ανβ6 είναι μια δυσμενής προγνωστικός παράγοντας σε ασθενείς μεταξύ ΦΥΓΩ Στάδιο IA2-ΙΒ1 και ΙΒ2-IIB. Συνολικά, η έκφραση του ανβ6 προτείνεται να εμπλέκονται στα πρώτα στάδια της εξέλιξης του όγκου και όχι τα μεταγενέστερα στάδια, ωστόσο τα δεδομένα μας έχει αποκαλύψει ότι η έκφραση ανβ6 δεν αυξάνει μεταξύ του καρκίνου του ορθού Στάδια Β και C, αλλά μπορεί να εμφανιστεί νωρίτερα.

Επιπλέον, η σύγκριση των δύο εναλλακτικών πρωτοκόλλων χρώσης (με βάση τα πολυμερή έναντι μιας μεθόδου ABC IHC) έδειξε ότι η μέθοδος ενίσχυσης πιο ευαίσθητη βάση πολυμερές ανιχνεύεται ανβ6 έκφραση σε όλα σχεδόν τα (& gt? 90%) του καρκίνου του ορθού Στάδιο Β και C ιστούς. Τα δεδομένα αυτά υποστηρίζει επίσης ότι η έκφραση ανβ6 μπορεί να συμβεί νωρίτερα από ό, τι anticiptaed σε εξέλιξη CRC, δηλαδή πριν ή κατά τη διάρκεια του καρκίνου του Σταδίου Β.

Προηγούμενες μελέτες διαπιστώθηκε ανβ6 έκφραση είναι χαμηλή ή μη ανιχνεύσιμη σε φυσιολογικούς ενήλικες επιθήλια, αλλά εκφράζεται έντονα κατά τη διάρκεια της επούλωση ή /και του καρκίνου του τραύματος [3], [8], [34], πιθανώς εξηγεί γιατί ανβ6 διερευνάται ως μια ενδιαφέρουσα στόχο για απεικόνιση και θεραπεία [35] του καρκίνου. Εδώ, ανβ6 παρατηρήθηκε σε όλα σχεδόν τα ιστολογικά φυσιολογικό βλεννογόνο του ορθού λιγότερο από 1-2 cm από το περιθώριο του όγκου (δηλαδή, δίπλα μη νεοπλασματικά βλεννογόνου, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι ΕΜΤ-σχετίζεται αλλαγές που συμβαίνουν σε αυτόν τον ιστό). Η παρατήρηση ότι προφανώς παρακείμενο μη-νεοπλασματικές βλεννογόνο εκφράζει άλλα αντιγόνα που εμπλέκονται στην ανάπτυξη του καρκίνου (π.χ., EMT) υποστηρίζεται από μια μελέτη που αποδεικνύει δείκτες EMT (α-ακτίνη των λείων μυών & amp? ΣΑΛΙΓΚΆΡΙ) και EMT-επαγωγείς (ΜΜΡ2 & amp? TGF-β3 ) είναι ευρέως εκφράζονται σε ιστολογικά φυσιολογικούς ιστούς πλησίον περιθώρια όγκου του μαστού (δηλαδή, = 1 cm μακριά) ενώ τελεί μόνο αραιά εκφράζονται σε απόσταση 5 cm από τα ίδια περιθώρια του όγκου [36]. Η μελέτη αυτή ευθυγραμμίζεται στενά με τις τρέχουσες παρατηρήσεις μας ανβ6 εκφράζεται εντός 1 cm από το ορθό περιθωρίων καρκίνου, όπως ανβ6 είναι επίσης γνωστό ότι εμπλέκεται στην ΕΜΤ [14].

Εν κατακλείδι, ιντεγκρίνης ανβ6 συχνότερα εκφράζεται στο μεταναστευτικό μέτωπο του καρκίνου του ορθού. Ενώ πιθανώς παίζει έναν σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του όγκου, αυτό ιντεγρίνη δεν ενεργεί ως ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης σε πρωκτικές Στάδιο καρκίνο Β και C. Περαιτέρω μελέτες απαιτούνται για να οριοθετηθούν οι πρωτεΐνες εκφράζονται διαφορικά σε διάφορα στάδια του καρκίνου του ορθού.

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω Paul H. Weinreb και Sheila Μ Violette, από την Biogen Idec Inc., Cambridge Κέντρο, Cambridge, MA 02142, USA για την ευγενική παροχή του 6.2A1 αντίσωμα έναντι της ιντεγκρίνης ανβ6.