Αφηρημένο

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του παγκρέατος (PCA) είναι ένας επιθετικός όγκος που συνδέεται με τα υψηλά ποσοστά θνησιμότητας. Πλειονότητα των ασθενών PCA διαγιγνώσκονται συνήθως σε στάδια τέλη του όγκου όταν οι θεραπευτικές επιλογές είναι περιορισμένες. Τα Τα microRNAs (miRNA) που εμπλέκονται στην ανάπτυξη των όγκων και είναι κοινώς απορρυθμιστεί στο PCA. Ως απόδειξη της αρχής μελέτη, με στόχο την αξιολόγηση των δυνατοτήτων των κοπράνων miRNAs ως βιοδείκτες για τον καρκίνο του παγκρέατος.

Υλικά και Μέθοδοι

Το συνολικό RNA εξήχθη από τα περιττώματα χρησιμοποιώντας miRNA Mini Kit της Qiagen . Για την έκφραση των miRNAs αναλύει έχουμε επιλέξει ένα υποσύνολο 7 miRNAs που συχνά απορυθμίζεται σε PCA (miR-21, -143, -155, -196a, -210, -216a, -375). Στη συνέχεια, τα επίπεδα έκφρασης αυτών των miRNAs προσδιορίστηκαν σε δείγματα κοπράνων από τους ελέγχους (n = 15), η χρόνια παγκρεατίτιδα (η = 15) και ασθενείς PCA (n = 15) με τη χρήση ποσοτικών δοκιμασιών TaqMan-PCR.

Αποτελέσματα

Όλα τα επιλεγμένα miRNAs ήταν ανιχνεύσιμα σε δείγματα κοπράνων με υψηλή επαναληψιμότητα. Τέσσερα από επτά miRNAs (MIR-216α, -196a, -143 und -155) ανιχνεύθηκαν σε χαμηλότερες συγκεντρώσεις σε κόπρανα ασθενών PCA σε σύγκριση με τους ελέγχους (ρ & lt? 0,05). Ανάλυση των κοπράνων έκφρασης των miRNAs σε ελέγχους και ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα και PCA έδειξε ότι η έκφραση του miR-216a, -196a, -143 und -155 ήταν υψηλότερα σε ελέγχους και το χαμηλότερο στην PCA. Η έκφραση των υπόλοιπων τριών miRNAs (miR-21, -210 και -375) παρέμειναν αμετάβλητα μεταξύ των ελέγχων και οι ασθενείς είτε με χρόνια παγκρεατίτιδα ή PCA.

Συμπέρασμα

Τα στοιχεία μας παρέχουν νέες αποδείξεις για τη διαφορική έκφραση του miRNAs σε κόπρανα ασθενών με PCA. Αν επικυρωθεί με επιτυχία σε προοπτικές μελέτες μεγάλης κλίμακας, οι κοπράνων βιοδείκτες miRNA μπορεί να προσφέρει νέα εργαλεία για την έρευνα PCA έλεγχο

Παράθεση:. Link A, Becker V, Goel Α, WEX Τ, Malfertheiner P (2012) Σκοπιμότητα κοπράνων Τα microRNAs ως νέων βιολογικών δεικτών για καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 7 (8): e42933. doi: 10.1371 /journal.pone.0042933

Επιμέλεια: Jörg Δ Hoheisel, Deutsches Krebsforschungszentrum, Γερμανία

Ελήφθη: 9 Γενάρη του 2012? Αποδεκτές: 16, Ιουλίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 8 Αυγούστου, 2012

Copyright: © Σύνδεσμος et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του παγκρέατος (PCA) είναι η δεύτερη κύρια αιτία του γαστρεντερικού καρκίνου που σχετίζονται με θανάτους στην Ευρώπη και τις ΗΠΑ [1], [2]. Παρά τις εντατικές βασικής και κλινικής έρευνας, η μέση επιβίωση των ασθενών με PCA παραμένει περίπου 6-10 μήνες μετά τη διάγνωση, η οποία αναδεικνύει την επιθετική βιολογία του όγκου αυτής της ασθένειας [3]. Η πλειοψηφία των ασθενών με PCA (& gt? 80%) που υπάρχει με τις περιφερειακές ή μακρινό διάδοση του όγκου κατά τη διάγνωση που τους καθιστά μη επιλέξιμες για χειρουργική αφαίρεση του όγκου, η οποία είναι προς το παρόν η μόνη πιθανή θεραπευτική αγωγή για αυτή την κακοήθεια [1], [3]. Εκτός από το δυναμικό του καρκίνου προληπτικά αλλαγές στον τρόπο ζωής (διατροφή, η σωματική άσκηση, διακοπή του καπνίσματος, κλπ), τη διαλογή και ανίχνευση των πρώιμων PCA θεωρείται ως πιο ελπιδοφόρα στρατηγική για την μείωση PCA που σχετίζεται με θνησιμότητα [4] – [6]. Τρέχουσες κλινικές διαλογής και διαγνωστικές διαχείριση ασθενών PCA βασίζεται σε τεχνικές απεικόνισης όπως ενδοαυλικό υπέρηχο (EUS) ή αυξημένης αντίθεσης πολυ-ανιχνευτή αξονική τομογραφία. Ωστόσο, λόγω της επεμβατικής φύσης τους, τη χρήση της ακτινοβολίας, και χαμηλή ευαισθησία /ειδικότητα, τέτοιες τεχνικές στην καλύτερη περίπτωση μπορεί να χρησιμοποιηθεί μόνο για τον έλεγχο σε ασθενείς υψηλού κινδύνου (π.χ. κληρονομικό PCA, σύνδρομο Peutz-Jeghers κλπ) [6], [7]. Ως εκ τούτου, υπάρχει άμεση ανάγκη για την αναγνώριση και την ανάπτυξη νέων βιολογικών δεικτών, κατά προτίμηση μη επεμβατικές διαγνωστικές τεχνολογίες που θα μπορούσε να προβλέψει την εξέλιξη του PCA ή τη διάγνωση του σε πρώιμα στάδια.

Η σημασία τέτοιων μη-επεμβατική βιοδεικτών έχει από μακρού αναγνωρισθεί. Κατά συνέπεια, το αίμα, τα κόπρανα ή άλλα σωματικά υγρά σήμερα πιστεύεται ότι είναι οι καλύτερες λεωφόρους για την έρευνα των βιοδεικτών που ενσωματώνει ένα ευρύ φάσμα γενετικών ή /και επιγενετικών αλλαγών που σχετίζονται με τον καρκίνο [6], [8]. Με βάση αυτό το παράδειγμα, πολλαπλές βιοδείκτες όπως hTERT, CA72-4, οστεοποντίνη, REG4, MIC-1,

K-ras

,

p-53

ή παρεκκλίνουσα μεθυλίωση των CpG νησίδες της τα γονίδια καταστολής του όγκου είναι επί του παρόντος υπό αξιολόγηση [3], [9] – [11]. Παρ ‘όλα αυτά, μέχρι σήμερα, μόνο αντιγόνο υδατάνθρακα 19-9 (CA19-9) έχει βρει κλινική χρησιμότητα της στην έγκαιρη ανίχνευση επανεμφάνισης της νόσου, μετά από χειρουργική θεραπεία των ασθενών PCA [12]. Ωστόσο, η χρήση του CA19-9 για το PCA-ελέγχου δεν συνιστάται λόγω της χαμηλής ευαισθησίας και ειδικότητας [13].

Τα microRNAs (miRNAs), οι μικρές μη-κωδικοποίησης μεταγραφές των ~ 22 νουκλεοτιδίων, έχουν πρόσφατα έχουν ταυτοποιηθεί ως μια νέα κατηγορία κυτταρικών μορίων με σημαντικές διαγνωστικές, προγνωστικές και θεραπευτικές συνέπειες [14]. MiRNAs παίζουν σημαντικό ρόλο σε ένα ευρύ φάσμα φυσιολογικών και παθολογικών διαδικασιών [15]. Λόγω της ρύθμισης της έκφρασης γονιδίου, miRNAs εμπλέκονται στα πρώιμα στάδια του καρκίνου παθογένεση της πολλαπλής ανθρώπινων καρκίνων [15], [16]. Επιπλέον, η ύπαρξη των μοναδικών προτύπων έκφρασης των miRNAs επιτρέπουν την αναγνώριση των διαφορετικών τύπων και υποτύπων καρκίνου [17] – [19]. Ένα από τα πιο ενδιαφέροντα χαρακτηριστικά του miRNAs είναι βιολογική σταθερότητα σε σχέση με το DNA ή mRNA. MiRNAs είναι αξιοσημείωτα προστατεύεται από ενδογενείς και εξωγενείς αποικοδόμηση λόγω του μικρού μεγέθους και exosomal παρουσία τους στα υγρά του σώματος [20], [21]. Με βάση αυτό το παράδειγμα, αρκετές ερευνητικές ομάδες έχουν δείξει ανεξάρτητα το δυναμικό των miRNA ως βιοδείκτες με βάση το αίμα για PCA [21] – [23]. Ενώ η προσέγγιση με βάση το αίμα είναι ακόμα θέμα της εντατικής έρευνας, έχει επίσης προταθεί ότι γαστρεντερικού καρκίνου που σχετίζονται με γενετικές και επιγενετικές μεταβολές μπορεί δυνητικά να ανιχνευθεί στα κόπρανα [8], [24]. Λαμβάνοντας υπόψη την υψηλή διαθεσιμότητα (-1.5 λ) των παγκρεατικών παραγωγή χυμών και η έκκριση στο έντερο, έχει υποτεθεί ότι προκαρκινικές ή πρώιμο καρκίνο σχετίζονται μοριακές αλλαγές μπορεί να είναι ανιχνεύσιμη στα περιττώματα και αίμα των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος, προσφέροντας έναν ισχυρό λόγο για κοπράνων ερευνητικών βιοδεικτών [8]

.

Λαμβάνοντας υπόψη ότι PCA σχετίζεται με μοναδικό σχέδιο τροποποίησης της έκφρασης των miRNAs, υποθέσαμε ότι miRNA υπογραφή έκφραση μπορεί να είναι αναγνωρίσιμα σε κόπρανα ασθενών με παγκρεατικό νεοπλασία. Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε το δυναμικό των κοπράνων έκφρασης των miRNAs αναλύσεις για τον προσδιορισμό PCA. Ως απόδειξη του κεφαλαίου, αποδεικνύουμε ότι αρκετές κοπράνων miRNAs εκφράζονται διαφορικά σε ασθενείς με τη νόσο του παγκρέατος. Πιλοτική αναλύσεις των δειγμάτων κοπράνων από ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα και PCA προτείνουν ένα πιθανό ρόλο για κοπράνων miRNAs ως νέα βιοδείκτες στην πρώιμη ανίχνευση του PCA.

Υλικά και Μέθοδοι

Κλινικά δείγματα

Η μελέτη διεξήχθη στα αρχειοθετημένα δείγματα κοπράνων από διαδοχικούς ασθενείς που έχουν συλλεχθεί για κλινικές αναλύσεις και μελλοντικά συλλέγονται κόπρανα από υγιή άτομα. Όλα τα προοπτικά προσληφθεί υγιείς εθελοντές υπό την προϋπόθεση γραπτή συγκατάθεση και το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο κριτική Θεσμικών στο Baylor University Medical Center [24]. Τα αρχειοθετημένα δείγματα κοπράνων ήταν de-εντοπίστηκαν, δεδομένου ότι η γραπτή συγκατάθεση δεν θα μπορούσε να επιτευχθεί λόγω της μετανάστευσης ή θανάτου του ασθενούς, καθώς και το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review του Πανεπιστήμιο του Μαγδεμβούργου (Magdeburg, Γερμανία). Συνολικά 45 δείγματα κοπράνων, συμπεριλαμβανομένων 15 έλεγχοι, 15 ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα και 15 ασθενείς PCA συμπεριλήφθηκαν στην μελέτη. Τα δείγματα ελέγχου επιλέχθηκαν τυχαία από τα δείγματα κοπράνων συλλέγονται για την ανίχνευση

Helicobacter pylori

στα κόπρανα από ασθενείς με μη κακοήθεις GI-διαταραχές, όπως παλινδρόμηση ή γαστρίτιδα. Δείγματα από ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα και PCA επιλέχθηκαν από διαδοχικούς ασθενείς με διαθέσιμα δείγματα κατεψυγμένου κοπράνων, τα οποία συλλέχθηκαν για την ανάλυση κοπράνων

ελαστάσης

επίπεδα ως συνήθης διαγνωστική δοκιμή για εξωκρινούς παγκρέατος ανεπάρκεια. Τα κλινικά και δημογραφικά στοιχεία των ασθενών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1.

Η

δείγματα κοπράνων συλλογή

Όλα τα δείγματα που συλλέγει και επεξεργάζεται ομοιόμορφα χρησιμοποιώντας σωλήνες συλλογής περιττωμάτων του δείγματος (Sarstedt AG, Nümbrecht, Γερμανία) όπως εφαρμόζεται στα συνήθη κλινική ρυθμίσεις. Περιπατητικούς ασθενείς κλήθηκαν να συλλέξουν τα περιττώματα στο σπίτι και να φέρει τα κόπρανα κατά τη διάρκεια της επόμενης παρουσίασης στο τμήμα. Δείγμα κοπράνων από σταθερές ασθενείς έχουν συλλεχθεί σε παρόμοιο τρόπο. Πριν από την επίτευξη του εργαστηρίου τα δείγματα είτε αποθηκεύτηκαν στους + 4 ° C ή σε θερμοκρασία δωματίου. Μόλις τα δείγματα έφθασαν το εργαστήριο, τα δείγματα κλασματοποιήθηκαν και αποθηκεύθηκαν συνεχώς στους -30 ° C μέχρι περαιτέρω χρήσης.

RNA απομόνωση

Ολικό RNA (συμπεριλαμβανομένων των miRNAs) εκχυλίστηκε από δείγματα κοπράνων χρησιμοποιώντας Qiagen του miRNAeasy Mini Kits (Qiagen) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. Εν συντομία, περίπου 30-50 μΙ κατεψυγμένων διαιρέθηκε σε ίσα κλάσματα σκαμνί ομογενοποιήθηκε με RNase-free νερό σε ένα σύνολο 150 μΐ και αμέσως λύονται με 800 μΐ αντιδραστηρίου λύσης QIAzol (Qiagen, Hilden, Germany). Καταβύθιση έγινε με χλωροφόρμιο και η υδατική φάση αναμίχθηκε με 1.5 όγκους αιθανόλης 100%. Μετά την έκλουση, η ποιότητα του RNA εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας αναλογίες Α260 /Α280 χρησιμοποιώντας UV-φασματοσκοπία και τα δείγματα φυλάχθηκαν στους -80 ° C μέχρι την περαιτέρω ανάλυση.

microRNA ποσοτικοποίηση με πραγματικού χρόνου PCR

Ποσοτική έκφραση miRNA αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση είτε TaqMan miRNA Δοκιμασίες (Applied Biosystems, CA, USA) ή τη μέθοδο SYBRgreen σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, όπως περιγράφεται προηγουμένως [24]. Μετά την ανάστροφη μεταγραφή, τα δείγματα έτρεξαν χρησιμοποιώντας σύστημα ανίχνευσης iCycler IQ® (Bio-Rad, CA, USA). Για να αποφευχθεί η δια-πλάκα προκατάληψη /μεταβλητότητα, έκφραση miRNA αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση ενός ενιαίου πλάκας 96 φρεατίων εις διπλούν. Οι διαφορές μεταξύ των ομάδων παρουσιάζονται ως ΔΟΙ, το οποίο αντιπροσωπεύουν οι διαφορές μεταξύ της μέσης τιμής Ct της miRNA του ενδιαφέροντος και της μέσης τιμής Ct της normalizer miRNA. Χρησιμοποιήσαμε miR-16 για την εξομάλυνση των κοπράνων miRNA σε όλα τα δείγματα, όπως έχει αποδειχθεί ότι είναι πιο σταθερά εκφρασμένη σε διαφορετικά δείγματα κοπράνων συμπεριλαμβανομένων δειγμάτων από ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνο, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. Επιλογή των microRNAs διεξήχθη χρησιμοποιώντας τα ακόλουθα κριτήρια: α) αναφέρονται ως παγκρέατος-ειδικό microRNA (MIR-375) [25]? β) έχουν αναφερθεί στο παρελθόν για πιθανή εμπλοκή σε παγκρεατικά καρκινογένεση (MIR-21, -196a, -210, -143, -155, -375, -216a) [26] – [28]? γ) διαφορική έκφραση miRNAs έχει αναφερθεί για το αίμα (MIR-21, -155, -196a, -210) [21] – [23] και /ή παγκρεατικό υγρό (MIR-21, -155? Πίνακας 2) [29 ]. Οι αλληλουχίες εκκινητών για τους προσδιορισμούς RT-PCR παρατίθενται στον Πίνακα S1.

Η

microRNA μικροσυστοιχιών προφίλ έκφρασης και ανάλυσης δεδομένων

microRNA μικροσυστοιχιών προφίλ έκφρασης διεξήχθη με σκοπό να αξιολογήσει την παρουσία επιλεγμένων miRNAs στα κόπρανα, όπως περιγράφεται προηγουμένως [24]. Εν συντομία, ολικό RNA εκχυλίστηκε από ένα μόνο δείγμα κοπράνων από ένα υγιές υποκείμενο χρησιμοποιώντας miRNAeasy Mini Kit Qiagen, όπως περιγράφεται παραπάνω. Ενίσχυση και υβριδισμός διεξήχθη σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Illumina, Inc., San Diego, CA). επεξεργασία των δεδομένων των μικροσυστοιχιών και η ανάλυση πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του λογισμικού BeadStudio Illumina του. Κανονικοποίησης έχει πραγματοποιηθεί με τη χρήση του πακέτου λογισμικού Lumi Bioconductor δημιουργία των τιμών log έκφρασης των miRNAs [30]. Μετά από συντηρητική βήμα φιλτραρίσματος καθετήρα, η οποία εξαιρούνται ανιχνευτές που δεν φθάσει την τιμή ανίχνευσης της P & lt? 0.05 οι αναλύσεις που είχε ως αποτέλεσμα την αξιόπιστη ανίχνευση για 630 ανιχνευτές

Η στατιστική ανάλυση

Δεδομένα αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με. GraphPad Prism 4.0 λογισμικό (San Diego, CA, USA) ή SPSS 17.0 (IBM Deutschland GmbH, Μόναχο, Γερμανία). Οι διαφορές μεταξύ δύο ομάδων αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας t-τεστ Student. Οι διαφορές μεταξύ περισσοτέρων των δύο ομάδων αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kruskal-Wallis με πολλαπλή σύγκριση κατάλληλα Dunn του

post hoc

δοκιμή. αναλύσεις συσχέτισης πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση της δοκιμής του Pearson. Όπου ενδείκνυται, λογαριθμική παλινδρόμηση χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό του R

2 και να δημιουργήσει την εξίσωση της πλαγιάς. Ένα δύο όψεων p-τιμή του & lt?. 0.05 θεωρήθηκε ως σημαντική

Αποτελέσματα

Η επιλογή των κοπράνων miRNAs

Για να διερευνηθεί κατά πόσο οι ασθενείς PCA έχουν ανιχνεύσιμο κοπράνων αλλαγές έκφρασης των miRNAs, πραγματοποιήσαμε την πρώτη συστηματική ανάλυση της βιβλιογραφίας με στόχο να επιλέξετε διάφορες miRNAs με την υψηλότερη ένδειξη για miRNA απορρύθμιση σε ασθενείς PCA. Με βάση την διαφορική έκφραση miRNA σε παγκρεατικά ιστούς όγκου [18], [26] – [28], μεταβολές στην παγκρεατικό χυμό [29] και στο αίμα [21] – [23], όπως περιγράφεται παραπάνω. Εμείς στη συνέχεια επιλέγονται 5 ρυθμίζεται προς τα πάνω (miR-21, -210, -143, -155, -196a) και 2 μειωτικά miRNAs (miR-216α και -375) για περαιτέρω αναλύσεις. Ο πίνακας 2 παρέχει μια γενική εικόνα του PCA που σχετίζονται με αλλαγές της έκφρασης των miRNAs. Να αποκτήσουν μια συνολική εικόνα για την ικανότητα ανίχνευσης των επιλεγμένων miRNAs στα περιττώματα σε φυσιολογικά υγιή άτομα, κοπράνων προφίλ έκφρασης των miRNAs έγινε χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες miRNA, χρησιμοποιώντας ένα μόνο δείγμα κοπράνων από το υγιείς εθελοντές. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α, όλα τα επιλεγμένα miRNAs ήταν παρόντες στα περιττώματα σε ανιχνεύσιμες συγκεντρώσεις

(Α) έκφραση miRNA microarray αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση μικροσυστοιχιών Illumina να αξιολογήσει την παρουσία επιλεγμένων miRNAs (MIR-16,. – 375, -196a, -216a, -21, -143, -155 και -210) σε ένα μόνο δείγμα κοπράνων από υγιές άτομο. Κοπράνων έκφραση miRNA μετατράπηκε σε log-έκφραση τιμές παρακάτω Lumi Bioconductor εξομάλυνση. (Β & amp? C) Έκφραση επιλεγμένων miRNA επιβεβαιώθηκε σε όλα τα 45 δείγματα, συμπεριλαμβανομένων των ελέγχων, χρόνια παγκρεατίτιδα και ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος. Σχήμα (Β) αντιπροσωπεύει τις πρώτες έκφρασης των miRNAs Ct-τιμές για την ποιοτική αξιολόγηση. (C) Κανονικοποίηση διεξήχθη με τη χρήση τυποποιημένων ΔΟΙ-μέθοδο χρησιμοποιώντας miR-16 ως εσωτερική κοπράνων normalizer.

Η

Διακύμανση και την ομαλοποίηση των κοπράνων miRNAs

Στη συνέχεια, μελετήσαμε την έκφραση miRNA σε όλα δείγματα ταυτόχρονα. Συνολικά, όλες οι κοπράνων miRNAs αναλύθηκαν έδειξαν υψηλό βαθμό μεταβλητότητας (πάνω από 10 Ct του) για τις πρώτες τιμές (Σχήμα 1Β). Για την κανονικοποίηση της έκφρασης miRNA, ΔCt-τιμές υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας miR-16 ως εσωτερικό ενδογενή normalizer όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. Μετά την κανονικοποίηση, ανακαλύψαμε ότι τα επίπεδα έκφρασης του miR-375, -21 και -210 έδειξε χαμηλή (τυπική απόκλιση (± SD) 0,76, 0,71, 0,78, αντίστοιχα), καθώς και εκείνα miR-216α, -143 και -155 ( ± SD: 3,31, 1,97, 2,15, αντίστοιχα) έδειξε υψηλή διακύμανση μεταξύ των ατόμων σε όλα τα δείγματα (Σχήμα 1C)

μακροπρόθεσμη σταθερότητα των κοπράνων miRNAs

έχει ήδη αποδειχθεί ότι. κοπράνων miRNAs είναι σταθερά σε προσφάτως συλλεγέντα δείγματα ή FOBT-kits [24], αλλά δεν είναι γνωστό εάν miRNAs είναι σταθερά κατά τη διάρκεια μακροχρόνιας αποθήκευσης. Για να δοκιμαστεί η σταθερότητα των miRNAs υπό τις συνθήκες μακροχρόνιας αποθήκευσης, αναλύσαμε δείγματα κοπράνων miRNA από μια πρόσθετη ομάδα από 30 υγιείς εθελοντές. Μεταξύ αυτών, δεκαπέντε δείγματα κοπράνων (1-15) συλλέχθηκαν μεταξύ 2004 και 2006 και δεκαπέντε δείγματα (16-30) μεταξύ 2009 και 2010. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α, όλα αναλύονται miRNAs κατέδειξε παρόμοια επίπεδα έκφρασης τόσο για miR-16 και miR-196a. Η μέση ± SD για miR-16 (Σχήμα 2Β) ήταν 30,53 ± 2,21 για τα δείγματα μετά από μακροχρόνια αποθήκευση σε σύγκριση με 29.59 ± 1.39 για φρέσκα συλλέγονται δείγματα (p = 0,172), και του miR-196a ήταν 33,41 ± 2,84 έναντι 32,75 ± 1,43 (ρ = 0,426), αντιστοίχως (Σχήμα 2C). Μετά από εξομάλυνση με miR-16, σημαίνει ΔΟΙ αξίας για miR-196a ήταν -2,88 ± 1,03 για τα δείγματα που συλλέγονται από 2004-2006 και -3,16 ± 0,93 (p = 0.441) για δείγματα που συλλέγονται κατά τη διάρκεια του 2009-2010 (Σχήμα 2D).

Για να αξιολογηθεί η μακροπρόθεσμη σταθερότητα των δειγμάτων, που πραγματοποιήθηκε miRNA αναλύσεις στα δείγματα κοπράνων που συλλέγονται σε διαφορετικά χρονικά σημεία. Δείγματα 1-15 συλλέχθηκαν μεταξύ 2004 και 2006 και τα δείγματα 16-30 μεταξύ 2009 και 2010 από υγιή άτομα. Όλα τα δείγματα αποθηκεύονται και υποβάλλονται σε επεξεργασία σε παρόμοιες συνθήκες. Σχήμα (Α) δείχνει διακυμάνσεις miR-16 και έκφραση miR-196α μεταξύ όλων των δειγμάτων κοπράνων. (Β) miR-16 και (γ) έκφραση του miR-196a σε υποομάδα αναλύσεις έδειξαν παρόμοια έκφραση (p & gt? 0,1). (Δ) της έκφρασης Κανονικοποιημένη miR-196a είναι συγκρίσιμη σε μακροπρόθεσμες και βραχυπρόθεσμες αποθηκευμένα δείγματα (p = 0.441). (Ε) Από miR-216α ήταν παρούσα στα κόπρανα σε χαμηλότερες συγκεντρώσεις, και η έκφρασή του αναλύθηκε με δύο ανεξάρτητους ποσοτικής RT-PCR εκτελείται για να αξιολογηθεί η αναπαραγωγιμότητα της ανάλυσης (ρ & lt? 0,0001). Κανονικοποίηση διεξήχθη με τη χρήση miR-16 ως εσωτερική normalizer.

Η

Η αναπαραγωγή των αποτελεσμάτων για τα miRNAs με χαμηλή έκφραση

Μεταξύ όλων αναλύονται miRNAs, miR-216a ήταν παρούσα στα κόπρανα στο χαμηλότερο συγκέντρωση (Σχήμα 1 C). Για να διερευνηθεί αν ακόμη miRNA με χαμηλή έκφραση μπορεί να αναλυθεί αξιόπιστα και επαναλήψιμα στα κόπρανα, θα εκτελούνται δύο ανεξάρτητες μετρήσεις έκφρασης. Όπως καταδεικνύεται στο Σχήμα 2Ε, έκφραση miR-216α ήταν αναπαραγώγιμα ανιχνεύθηκε στα κόπρανα από όλα τα δείγματα παρά τα χαμηλά συγκέντρωση της (R

2 = 0.761, ρ & lt? 0,0001)

διαφορική έκφραση κοπράνων miRNAs σε ασθενείς PCA.

Για να αξιολογηθεί κατά πόσον κοπράνων miRNA προσέγγιση ανάλυση της έκφρασης μπορεί να είναι χρήσιμο στο PCA διάγνωση, 45 δείγματα κοπράνων αξιολογήθηκαν. Τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Δεκαπέντε δείγματα κοπράνων από τους ελέγχους συγκρίθηκαν με δεκαπέντε κάθε από ασθενείς με PCA και με χρόνια παγκρεατίτιδα. Όλα τα 7 δοκιμαστεί miRNAs που άφθονα απορυθμίζεται στον καρκίνο του παγκρέατος, ήταν παρόντες στα κόπρανα, αν και με συγκεκριμένες διαφοροποιήσεις στην έκφραση των miRNAs. Τέσσερις από 7 miRNAs (miR-196a, -216a, -143 και -155) εκφράστηκαν σε σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα σε δείγματα κοπράνων από ασθενείς με PCA σε σύγκριση με τους μάρτυρες (Kruskal-Wallis με τη θέση της δοκιμής p & lt Dunn του? 0,05 για miR-196a και miR-216a και η p & lt? 0,001 για miR-143 και -155). Μεταξύ αυτών, μόνο miR-143 και -155 αποκαλύπτει σημαντικές διαφορές μεταξύ των ασθενών με χρόνια παγκρεατίτιδα και τους ελέγχους. Είναι ενδιαφέρον, αναλύσεις υποομάδων μεταξύ των τριών ομάδων έδειξε σταδιακή μείωση του

μεσαίο

ΔΟΙ για miRNA έκφραση σε δείγματα κοπράνων από τους ελέγχους για τη μείωση της έκφρασης σε ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα και χαμηλότερη σε ασθενείς με PCA (miR-196a: -2,50 έναντι -3,00 έναντι -3,65? miR-216a: -5,30 έναντι -9,10 έναντι -10,80? miR-143: -5,20 έναντι -6,00 έναντι -7,35 και miR-155: 0,15 έναντι -1,95 έναντι -2,55 για τους ελέγχους vs. χρόνια παγκρεατίτιδα vs. PCA, αντίστοιχα), όπως φαίνεται στο Σχήμα 3. αξίζει να σημειωθεί ότι παρά την χαμηλότερη έκφραση miRNA σε κόπρανα από ασθενείς με PCA και χρόνια παγκρεατίτιδα, οι διαφορές έκφρασης miRNA δεν ήταν στατιστικά σημαντικές. Αξίζει να σημειωθεί ότι, miR-21, -375 και -210, τα οποία συχνά απορυθμίζεται σε καρκίνους του παγκρέατος, βρέθηκαν να είναι αμετάβλητη στα κόπρανα από τους ελέγχους και τους ασθενείς με PCA και χρόνια παγκρεατίτιδα (Σχήμα 3).

Αριθμητικά (Α ) έως (G) αντιπροσωπεύουν διαφορετικές miRNAs που επιλέχθηκαν για τη μελέτη με βάση τα μεταβολές στους ιστούς PCA. * Αντιπροσωπεύει p & lt? 0,05, *** – p & lt? 0.001. Συντομογραφίες: υποκείμενα Ν-ελέγχου, CP-χρόνια παγκρεατίτιδα, PCA- καρκίνο του παγκρέατος. Τα δεδομένα που υπάρχουν ως οικόπεδα box-και-μουστάκια: τα ανώτερα και κατώτερα όρια των κουτιά δείχνουν το 75

ου και 25

ου εκατοστημόρια, οι γραμμές μέσα στα κουτιά – οι διάμεσοι, και η άνω και κάτω οριζόντιες μπάρες υποδηλώνουν το 90

ου και 10

ου τοις εκατό, αντιστοίχως.

η

Ένας συνδυασμός των miRNAs ως διαγνωστικό εργαλείο για την PCA

έχει αναφερθεί στο παρελθόν ότι πρότυπο έκφρασης της αρκετές miRNAs και όχι μεμονωμένα miRNA θα μπορούσε να οδηγήσει σε υψηλότερη ευαισθησία και ειδικότητα για την αναγνώριση των ανθρώπινων καρκίνων. [28] Με βάση αυτή την παραδοχή υποθέσαμε ότι ο συνδυασμός των 4 διαφορικά εκφρασμένων miRNAs θα παρέχουν καλύτερη διάκριση των ασθενών με PCA σε σύγκριση με τους μάρτυρες. Δεδομένου ότι όλα τα 4 miRNAs έδειξε σταδιακή μείωση της έκφρασης των miRNAs, που συνοψίζεται ΔΟΙ τιμές του miR-196a, -216a, -143 και -155 για κάθε δείγμα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, τα

διάμεση

ΣΔCt-τιμές ήταν: για τους ελέγχους -12,78 έναντι -21,45 για χρόνια παγκρεατίτιδα έναντι -23,25 για PCA (Kruskal-Wallis test p & lt? 0.0002, οι έλεγχοι μετά τη δοκιμή του Dunn εναντίον της χρόνιας παγκρεατίτιδας ή PCA p & lt? 0,05 και 0,001, αντίστοιχα). Χρησιμοποιώντας αυτόν τον συνδυασμό, πετύχαμε

διάμεση

ΔΟΙ-Value διαφορά των 10,47 (ή 1418 φορές) μεταξύ της PCA και των ελέγχων, ενώ η διαφορά ΔΟΙ αξίας για miR-143 και μόνο ήταν 2,15 (ή 4,4 φορές).

άθροισμα των ΔCt τιμές του miR-196a, -216a, -143 και -155 έγινε για τον υπολογισμό της ΔΟΙ τιμή σ. * – P & lt? 0,05, *** – p & lt? 0.001. Συντομογραφίες: υποκείμενα Ν-ελέγχου, CP-χρόνια παγκρεατίτιδα, PCA- καρκίνο του παγκρέατος. Τα δεδομένα που υπάρχουν ως οικόπεδα box-και-μουστάκια: τα ανώτερα και κατώτερα όρια των κουτιά δείχνουν το 75

ου και 25

ου εκατοστημόρια, οι γραμμές μέσα στα κουτιά – οι διάμεσοι, και η άνω και κάτω οριζόντιες μπαρ χαρακτηρίζει το 90

ου και 10

ου τοις εκατό, αντιστοίχως.

η

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη απόδειξη της αρχής, αξιολογήσαμε σκοπιμότητα των κοπράνων miRNAs ως δυναμικό βιοδείκτες για την ανίχνευση του PCA. Χρησιμοποιώντας ένα υποσύνολο των miRNAs που συχνά απορυθμίζεται σε PCA, βρήκαμε ότι miR-196α, -216a, -143 και -155 είναι παρόντα σε χαμηλότερα επίπεδα σε δείγματα κοπράνων από ασθενείς με PCA σύγκριση με τους μάρτυρες. Επιπλέον, δείχνουμε ότι οι αλλαγές στην έκφραση κοπράνων miRNA μπορούν επίσης να ανιχνευθούν σε ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα. Τέλος, αποδεικνύουμε ότι ο συνδυασμός ενός υποσυνόλου miRNAs μπορεί να παρέχει μια ανώτερη διαγνωστική αξία με μεγαλύτερη ευαισθησία και ειδικότητα για την ταυτοποίηση των παγκρεατικών νεοπλασίας.

Εκτός από τις τεχνικές απεικόνισης, υπάρχει σαφής ανάγκη για εναλλακτικές ρυθμίσεις για την έγκαιρη ανίχνευση του PCA. Για παράδειγμα, η επεμβατική συλλογή του παγκρεατικού υγρού ή του παγκρέατος βούρτσισμα αγωγός μπορεί να φαίνεται ελπιδοφόρων? Αυτό μπορεί να γίνει μόνο σε ένα περιορισμένο αριθμό ασθενών λόγω διεισδυτικότητα και την έλλειψη καταλληλότητας για τους σκοπούς του ελέγχου της. Με βάση το αίμα έρευνα των βιοδεικτών ήταν πάντα το επίκεντρο, καθώς έχει τεράστιες δυνατότητες για την ανάπτυξη μη επεμβατικές προσεγγίσεις διαλογής. Ωστόσο, κόπρανα έχουν επίσης προταθεί ως πολλά υποσχόμενη εναλλακτική λύση, ειδικά για κακοήθειες GI συνδέονται, λόγω των συνεχών αποβολή αποφλοιωμένα κύτταρα και παραγωγή παγκρεατικό υγρό [8], [24]. Πιστεύεται ότι κοπράνων δείκτες μπορεί να έχουν ακόμη υψηλότερη διαγνωστική απόδοση, δεδομένου ότι το μοριακό σχετίζονται με τον καρκίνο αλλοιώσεις στο DNA, mRNA και miRNAs μπορούν να ανιχνευθούν πολύ νωρίτερα στα περιττώματα. Πρόσφατα, εμείς και άλλοι έχουν δείξει ότι η ανίχνευση του κοπράνων miRNAs είναι μια εφικτή προσέγγιση που έχει ένα υψηλό βαθμό αναπαραγωγιμότητας, και ότι οι ασθενείς με νεοπλασία κόλον συχνά δείχνουν υψηλότερη έκφραση του miR-21 και -106a σε σύγκριση με ελέγχους [24], [31 ]

Σήμερα, υπάρχουν αδιάσειστα στοιχεία για την ιστο-ειδική μεταβολές στην έκφραση των miRNAs στο PCA [21], [26] – [28].. Αυτές οι miRNAs ήταν το επίκεντρο πολλών μελετών που αποδεικνύουν πολύπλοκες αλληλεπιδράσεις με τους βασικούς μονοπάτια και τους στόχους της παγκρεατικής καρκινογένεση. Με βάση τις υπάρχουσες γνώσεις για τα πρότυπα έκφρασης των miRNAs στο PCA, στην παρούσα μελέτη επιλέξαμε 7 PCA που σχετίζονται με miRNAs που είναι είτε σε απότομη ανωφέρεια (miR-21, -155, -143, -210 και – 196α) ή προς τα κάτω-ρυθμιζόμενη (miR -375, -216a) για την έκφραση των miRNAs αναλύσεις στα κόπρανα. Σε μια πιλοτική μελέτη, Bloomston et al. έδειξαν ότι PCA έχουν διακριτά πρότυπο έκφρασης των miRNAs με συγκεκριμένες μεταβολές των 25 miRNAs εναντίον καλοήθεις παγκρέατος ιστούς και 21 miRNAs κατά τη σύγκριση σε χρόνια παγκρεατίτιδα ιστούς. Χρησιμοποιώντας αυτό το πρότυπο έκφρασης miRNA οι συγγραφείς μπορούσε να διακρίνει PCA ιστούς από καλοήθεις και χρόνιας παγκρεατίτιδας ιστούς με ακρίβεια μεγαλύτερη από 90% [26]. Στη συνέχεια, αποδείχθηκε ότι η έκφραση του miR-21 και -196a συνδέθηκε με υψηλή πολλαπλασιασμό (Ki67-δείκτης), παρουσία ηπατικών μεταστάσεων και πρόβλεψη κακή επιβίωση /πρόγνωση [19], [26]. Τα στοιχεία μας επιβεβαιώνουν προηγούμενες αναφορές που δείχνουν αξιοσημείωτη σταθερότητα των κοπράνων miRNAs στα κόπρανα, καθώς και υψηλές συγκεντρώσεις τους υπάρχουν σε δείγματα κοπράνων [24], [32], [33]. Χρησιμοποιώντας την προσέγγιση βάσει στόχων, βρήκαμε διαφορική miRNA έκφραση των 4 από 7 miRNAs (miR-196a, -216a, -143 και -155) στα κόπρανα ασθενών με PCA σε σύγκριση με τους μάρτυρες, ενώ 3 miRNAs (miR-21, -375 και -210) εκφράστηκαν σε παρόμοια επίπεδα μεταξύ των διαφόρων υγιών ατόμων και ασθενών. Σε αυτή τη μελέτη απόδειξη της αρχής ότι ήταν κάπως περίεργο να σημειωθεί ότι τέσσερα από τα διαφορικά εκφρασμένων miRNAs στη μελέτη μας έδειξε μειωμένη έκφραση των miRNAs στα κόπρανα των ασθενών με PCA, ενώ προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει προς τα πάνω ρύθμιση του miR-196a, -143 και – 155 σε παγκρεατικά καρκινικούς ιστούς των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος και ρύθμιση προς τα κάτω του miR-216α [26] – [28]. Υποθέσαμε ότι ο λόγος για την αλλαγή στην κοπράνων εναντίον ιστούς έκφραση αυτών των miRNAs μπορεί να είναι λόγω των αλλαγών στα παγκρεατικά εκροή υγρού, το οποίο είναι συχνά παθολογική σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος και θα μπορούσε να είναι εν μέρει υπεύθυνη για αυτή ασύμφωνα παρατήρηση. Λόγω της αναδρομικής φύσης της μελέτης, ήμασταν σε θέση να συγκεντρώσει στοιχεία για την κατάσταση της χολής /απόφραξη του παγκρεατικού πόρου ή να εκτελέσει σε συνδυασμό όγκου και αναλύσεις κοπράνων miRNA. Ωστόσο, τα κέρδη υπόθεση μας υποστηρίζουν από διάφορες άλλο μελέτες. Πρώτον, είχε προηγουμένως δείξει ότι επιλέγεται miRNAs (MIR-21, -210, -155, -196a) έχουν προς τα πάνω ρυθμισμένη σε πλάσμα από ασθενείς με PCA, υποδηλώνοντας μηχανιστικής εμπλοκή τους στην καρκίνους του παγκρέατος [21], [22]. Δεύτερον, μια ανεξάρτητη μελέτη έδειξε αυξημένη έκφραση του miR-155 στο παγκρεατικό υγρό των ασθενών PCA [29], υποστηρίζοντας περαιτέρω παρατήρηση μας. Τρίτον, το δικό μας παρατήρηση για τη σταδιακή βαθμιαία μείωση στην έκφραση επιλεγμένων miRNAs στα κόπρανα των ασθενών με χρόνια παγκρεατίτιδα σε σύγκριση με ελέγχους και τους ασθενείς PCA υποστηρίζουν αυτό το επιχείρημα. Παρ ‘όλα αυτά, δεν βρήκαμε σημαντικές διαφορές στα κοπράνων έκφρασης των miRNAs μεταξύ PCA και σε ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα που μπορεί να αντανακλούν είτε την υψηλού κινδύνου για την ανάπτυξη PCA σε ασθενείς με εγκεφαλική παράλυση από τη μία πλευρά ή θα μπορούσε να προτείνει μια σχέση με εξωκρινή ή ενδοκρινή παγκρεατική ανεπάρκεια .

σε αυτή τη μελέτη, miRNA προφίλ ήταν αποκλειστικά χρησιμοποιηθεί για την απόκτηση συνολική επισκόπηση για την ταυτοποίηση των προτύπων έκφρασης miRNA σε δείγματα κοπράνων από ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος. Από διαθέσιμα δείγματα αναδρομικά συλλέγονται και αποθηκεύονται για μακροχρόνια, έχουμε απέφυγε προφίλ αυτών των καρκινικών ιστών, προκειμένου να αποφευχθεί η πιθανή προκατάληψη επιλογή χρησιμοποιώντας μια τεχνική υψηλής απόδοσης που βασίζεται σε μικροδιάταξη. Ακόμα κι αν επιλεγεί miRNAs έδειξαν ασήμαντες διαφορές μεταξύ CP και ασθενών PCA, πιστεύουμε ότι τα αποτελέσματά μας προκλητική για την έρευνα PCA βιοδείκτη, και παρέχει ένα συναρπαστικό εφαλτήριο για την ανάληψη πρόσθετων προοπτικές μελέτες στο μέλλον να αξιολογεί συστηματικά πιθανές διαφορές στην miRNAs που είναι μοναδικές για αυτά τα υποσύνολα των ασθενών σε σχέση με παγκρέατος και της χολής κατάστασης αγωγού. Τα αποτελέσματα της μελέτης μας υπογραμμίζουν την ανάγκη για περαιτέρω έρευνα σχετικά με τη βιολογική σημασία της απελευθερωμένης miRNAs σε παγκρεατικά νεοπλασία. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, τα περισσότερα από τα miRNAs αναλύονται στη μελέτη μας έχουν πολλαπλές, σχετίζονται με τον καρκίνο των στόχων επικυρωμένη γονίδιο σε ανθρώπινους καρκίνους. Για παράδειγμα, Gironella et al. έχουν δείξει ότι η πρωτεΐνη miR-155 όγκων-στόχων 53 επαγόμενη πυρηνική πρωτεΐνη 1 (TP53INP1) διαταράσσουν αντι-καρκινική δράση του σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα [34]. Διάφορες ομάδες έχουν δείξει ότι miR-21 στόχους ΡΤΕΝ, RECK, PDCD4, η οποία μπορεί να είναι υπεύθυνη του ογκογόνου ρόλος του miR-21 [35], [36]. Ομοίως, miR-143, το οποίο είναι συχνά απελευθερωθεί σε καρκίνους του παγκρέατος, έχει δειχθεί ότι αλληλεπιδρά με KRAS [37] και την επιστροφή των ογκοκατασταλτικών miRNA μπορεί να αναστέλλει την ανάπτυξη του όγκου σε μοντέλο ξενομοσχεύματος καρκίνου του παγκρέατος με χρήση παράδοση nanovector του miR-143/145 [38 ]. Επιπλέον, miR-196a και miR-210 έχει δειχθεί ότι παίζουν ένα ρόλο ογκογόνο με τη στόχευση διάφορα γονίδια καταστολής όγκου (ANXA1, KRT5, RAD52) που επηρεάζουν τον πολλαπλασιασμό και υποξικό στρες [39] – [42], ενώ miR-375 και -216a , τα οποία συχνά μειωτικά σε καρκίνο του παγκρέατος, έχουν εμπλακεί στην έκκριση ινσουλίνης και στη ρύθμιση της κυτταρικής επιβίωσης και του πολλαπλασιασμού με τη στόχευση αρκετά ογκογονίδια όπως ΡϋΚ1, JAK2, ATG7 [25], [43] – [46]. Τα δεδομένα αυτά ελκυστικά για περαιτέρω εντατική έρευνα της βιολογικής σημασίας των miRNAs ως βιολογική επίδραση της exosomal miRNA μπορεί να είναι πέρα ​​από τα κυτταρικά ή τοπικές καρκινικές επιδράσεις [47], [48].

Τα τρέχοντα δεδομένα εμπλέκουν ότι τα πρότυπα έκφρασης των miRNAs, αντί για ένα ενιαίο miRNA μπορεί να είναι απαραίτητη για την καλύτερη χρησιμότητα για μια διαγνωστική προσέγγιση miRNA-based. Για παράδειγμα, στη μελέτη μας, πραγματοποιήσαμε ένα απλό άθροισμα των τιμών ΔCt που μας επέτρεψε να επιτύχουμε μια καλύτερη διάκριση του διάμεσου ΔΟΙ τιμές ασθενείς με PCA σε σύγκριση με τους μάρτυρες. Μια τέτοια προσέγγιση μπορεί να έχει σημασία αν τα πρότυπα έκφρασης κοπράνων miRNA χρησιμοποιείται για τον έλεγχο των άλλων κακοηθειών GI. Αυτό είναι ιδιαίτερα σημαντικό δεδομένου ότι κοπράνων ανάλυση εφαρμόζεται ευρέως στην κλινική πρακτική, π.χ. κοπράνων εξετάσεις αίματος για τον ορθοκολικό προσυμπτωματικό έλεγχο του καρκίνου και για την αξιολόγηση της παγκρεατικής ελαστάσης στα κόπρανα ως βιοδείκτη για εξωκρινή παγκρεατική ανεπάρκεια. Αν επικυρωθεί στο μέλλον, το όραμα των κοπράνων προσέγγιση miRNA με βάση για τον προσδιορισμό των όγκων GI θα μπορούσε εύκολα να μεταφραστεί στα διαγνωστικά, μια προσέγγιση που θα έχει αναμφίβολα μια ανώτερη συμμόρφωση των ασθενών σε σύγκριση με τα διαθέσιμα σήμερα επεμβατικές διαγνωστικές εξετάσεις.

Αν και πολλά υποσχόμενη, κοπράνων miRNA προσέγγιση χρειάζεται περαιτέρω εντατική έρευνα πριν από την κλινική εφαρμογή. Όπως έχει ήδη αναγνωριστεί, λόγω της ικανότητάς μας να περιλαμβάνουν μόνο περιορισμένο αριθμό δειγμάτων σε αυτή τη μελέτη απόδειξη της αρχής, η στατιστική σημαντικότητα των αποτελεσμάτων μας παρέχει περιορισμένες ενδείξεις για κλινική εφαρμοσιμότητα και δυναμικό των κοπράνων miRNA για τη διάγνωση των ασθενών PCA στο άμεσο μέλλον. Παρ ‘όλα αυτά, πιστεύουμε ότι τα ευρήματά μας είναι νέα και μελλοντικές μελέτες, συμπεριλαμβανομένων υποψήφιους συλλογή των δειγμάτων με διάφορα στάδια όγκου με πλήρη βιοχημική και κλινική σχολιασμό για την απόφραξη παγκρεατικού /χοληδόχου πόρου απαιτούνται λόγω των πιθανών συνεπειών της απόφραξη του παγκρεατικού πόρου σε επίπεδα έκφρασης κοπράνων miRNA .