Αφηρημένο

Στόχος

Για να εξεταστεί η σύνδεση των έξι γλουταθειόνης τρανσφεράσης (GST) πολυμορφισμών του γονιδίου (GSTT1, GSTP1 /rs1695, GSTO1 /rs4925, GSTO2 /rs156697, GSTM1, GSTA1 /rs3957357 ) με την επιβίωση των ασθενών με μυϊκή διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης και του γονότυπου τροποποιώντας επίδραση στην χημειοθεραπεία.

ασθενείς και Μέθοδοι

Ένα σύνολο 105 ασθενών με καρκίνο της ουροδόχου κύστης μυών επεμβατικές συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη. Η παρακολούθηση διήρκεσε 5 χρόνια. Η επίδραση του

GSTs

πολυμορφισμών στην πρόβλεψη της θνησιμότητας αναλύθηκε από τα μοντέλα αναλογικών κινδύνων κατά Cox, ενώ η ανάλυση Kaplan-Meier διεξήχθη για να εκτιμήσει τις διαφορές στην επιβίωση.

Αποτελέσματα

GSTT1 ενεργό

,

GSTO1 Asp140Asp

ή

GSTO2 Asp142Asp

γονότυπων ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες του υψηλότερου κινδύνου θανάτου μεταξύ των ασθενών με καρκίνο της ουροδόχου κύστης (HR = 2,5,

P

= 0,028? HR = 2,9,

P

= 0.022? HR = 3,9,

P

= 0.001? αντίστοιχα) και επηρεάζεται σημαντικά τη συνολική επιβίωση. Δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ της

GSTP1

,

GSTM1

και

GSTA1

γονιδίου παραλλαγές με συνολική θνησιμότητα. Μόνο

GSTO2

πολυμορφισμός έδειξε μία σημαντική επίδραση στην επιβίωση στην υποομάδα των ασθενών που έλαβαν χημειοθεραπεία (

P

= 0,006).

Συμπέρασμα

GSTT1 ενεργό

γονότυπο και

GSTO1 Asp140Asp

και

GSTO2 Asp142Asp

γονότυπους μπορεί να έχουν προγνωστική /φαρμακογονιδιωματικών ρόλο σε ασθενείς με μυϊκή διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης

Αιτιολογική αναφορά.: Ντιούκιτς TI, Σάβιτς-Ραντόιεβιτς AR, Pekmezovic TD, Matic MG, Pljesa-Ercegovac MS, Coric VM, et al. (2013) S-τρανσφεράσης γλουταθειόνης Τ1, Ο1 και Ο2 πολυμορφισμοί συνδέονται με την επιβίωση στην Muscle Επεμβατική καρκίνο της ουροδόχου κύστης ασθενείς. PLoS ONE 8 (9): e74724. doi: 10.1371 /journal.pone.0074724

Επιμέλεια: Zhengdong Zhang, Ιατρικό Πανεπιστήμιο Nanjing, Κίνα

Ελήφθη: 4 Ιουνίου του 2013? Δεκτές: 2, Αυγούστου 2013? Δημοσιεύθηκε: 11 του Σεπτεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Ντιούκιτς et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Υπουργείο Παιδείας, Επιστημών και Τεχνολογικής Ανάπτυξης [επιχορήγηση 175.052] σερβική. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

τρανσφερασών γλουταθειόνης (GST) είναι ένζυμα αποτοξίνωσης που παίζουν ρόλο στη σύζευξη του ενδογενούς ή εξωγενούς ξενοβιοτικών τοξίνες σε γλουταθειόνη (GSH), ωστόσο αρκετές λειτουργία GSTs ως GSH υπεροξειδάσες [1]. Η οικογένεια του κυτοσολίου GSTs έχει διαφορετικές κατηγορίες, συμπεριλαμβανομένης της Άλφα (GSTA), Mu (ΟδΤΜ), Pi (ΠΣΕΠ), Omega (GSTO) και Theta (GSTT) κατηγορίας [1]. Πολυμορφικό έκφραση GSTA1, GSTM1 και GSTO1 επηρεάζει τον κίνδυνο του μεταβατικού κυτταρικού καρκινώματος (TCC) της ουροδόχου κύστης [2], [3]. Up-ρυθμιζόμενη δραστηριότητα GST είναι ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα ενός κακοήθους φαινοτύπου του TCC και θεωρείται σημαντικό να διατηρηθεί μια οξειδωτικών-αντιοξειδωτικών ισορροπία προς μια πιο μειωμένη κατάσταση κατά τη διάρκεια της εξέλιξης των όγκων αυτών [4]. Ενζυματική δραστικότητα των πρωτεϊνών GST θα μπορούσαν να επηρεάσουν την ικανότητα αρκετών φαρμάκων, που χρησιμοποιούνται για την θεραπεία των ασθενών TCC, για να προκαλέσει το θάνατο καρκινικών κυττάρων. Ως εκ τούτου, είναι λογικό να υποθέσουμε ότι οι πολυμορφισμοί κοινή GST μπορεί να έχει ένα προγνωστικό ή /και φαρμακογονιδιωματικών ρόλο σε ασθενείς TCC, ειδικά στην περίπτωση του μυός επιθετικοί όγκοι.

Τόσο MVAC (μεθοτρεξάτη, βινβλαστίνη, δοξορουβικίνη και σισπλατίνη) και GC /cis (γεμσιταβίνη και σισπλατίνη) πρωτόκολλα που χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία των ασθενών με μυϊκή TCC επιθετικοί όγκοι περιέχουν φάρμακα (σισπλατίνη και δοξορουβικίνη) αποδείχθηκε ότι είναι υποστρώματα για ΠΣΕΠ [5]. Ο πολυμορφισμός του

GSTP1

, με αποτέλεσμα ένα αμινο-οξύ υποκατάσταση ισολευκίνης από βαλίνη (Ile105Val), επηρεάζει σημαντικά τη δραστικότητα του ενζύμου και σχετίζεται με την κλινική έκβαση των ασθενών που έλαβαν με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία [6]. Παρά το γεγονός ότι η βιομετατροπή της σισπλατίνης και δοξορουβικίνης ως αποτέλεσμα τον σχηματισμό προϊόντων σύζευξης γλουταθειόνης, τα οποία είναι αποτελεσματικά εξωθούνται από το κύτταρο από ειδικές αντλίες εξαγωγής, τα δεδομένα σχετικά με το ρόλο του GSTP1 στον περιορισμό της αποτελεσματικότητας της θεραπείας και που επηρεάζουν την επιβίωση [7 ] των ασθενών με μυϊκή επεμβατική TCC λείπει. Εκτός από GSTP1,

ενεργό GSTT1

γονότυπο θα μπορούσαν να επηρεάσουν την ικανότητα των δοξορουβικίνη και κυκλοφωσφαμίδη για να παραχθεί οξειδωτική βλάβη του DNA λόγω δραστηριότητα υπεροξειδάσης του [8]. πολυμορφισμοί κοινή διαγραφή του

GSTT1

καταργήσει ενζυμική δραστηριότητα. Πρόσφατα, έχει προταθεί ότι οι πολυμορφισμοί σε γονίδια που κωδικοποιούν μέλη της κατηγορίας ωμέγα GSTO1-1 και GSTO2-2 μπορεί επίσης να επηρεάσουν το επίπεδο του οξειδωτικού στρες, αν και οι μηχανισμοί της διαφορικής πρωτεΐνης λειτουργία των διαφόρων ισομορφών πρωτεΐνης είναι λιγότερο καλά κατανοητές. Συγκεκριμένα, η δραστηριότητα GSTO1 και GSTO2 έκθεμα dehydroascorbate (DHA) αναγωγάσης εκτός από τα νέα thioltransferase, και δραστηριότητες monomethylarsenate αναγωγάσης [9]. GSTO2-2 έχει 70-100 φορές υψηλότερη DHA αναγωγάση (Dhar) δραστηριότητα από GSTO1-1 και θεωρείται ότι είναι το πιο δραστικό Dhar σε κύτταρα θηλαστικών [9]. Αυτή η δραστηριότητα Dhar του GSTO2 μπορεί να είναι κρίσιμη για τη διατήρηση των επιπέδων ασκορβικό οξύ (ΑΑ) όχι μόνο στην κανονική, αλλά και στα καρκινικά κύτταρα. Πολύ πρόσφατα, έχει δειχθεί ότι και οι δύο ωμέγα SNPs είχαν πολύ σημαντικές επιπτώσεις στα επίπεδα έκφρασης γονιδίου του GSTO2, αλλά όχι από GSTO1 σε κύτταρα του εγκεφάλου [10]. Υποθέσαμε ότι η GST ωμέγα πολυμορφισμοί μπορεί επίσης να οδηγήσει σε διαφορές ατομικές απαντώντας σε χημειοθεραπευτικά πρωτόκολλα TCC.

Στην παρούσα μελέτη εξετάσαμε τη συσχέτιση των έξι γλουταθειόνης τρανσφεράσης (GST) πολυμορφισμών του γονιδίου (GSTT1, GSTP1 /rs1695, GSTO1 /rs4925, GSTO2 /rs156697, GSTM1 και GSTA1 /rs3957357) με επιβίωση 5-yr σε 105 ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης μυών επεμβατική, καθώς και το γονότυπο τροποποιώντας επίδραση στην χημειοθεραπεία.

ασθενείς και Μέθοδοι

Έχουμε εντάχθηκαν 200 ασθενείς που διαγνώστηκαν πρόσφατα με TCC από την Κλινική της ουρολογίας, κλινικό κέντρο της Σερβίας, το Βελιγράδι. Παθολογική επαλήθευση της TCC πραγματοποιήθηκε ως μέρος της ρουτίνας ουρολογικής πρακτικής, συμπεριλαμβανομένης της ενδοσκοπική βιοψία ή χειρουργική εκτομή, ακολουθούμενη από την ιστοπαθολογική εξέταση από παθολόγους πίνακας-επικυρωμένο. Οι ασθενείς με μυϊκή επεμβατική όγκου (105 ασθενείς) θεωρήθηκαν από την αρχική ομάδα μελέτης για τη συγκεκριμένη έρευνα. Όλοι οι συμμετέχοντες έδωσαν τη γραπτή συγκατάθεση. Το πρωτόκολλο της μελέτης εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Ιατρικής Σχολής του Πανεπιστημίου του Βελιγραδίου, και η έρευνα διεξήχθη σύμφωνα με την Διακήρυξη του Ελσίνκι.

Για την ανάλυση επιβίωσης 5 ετών, τελικά σημεία θάνατο συλλέχθηκαν από τη σερβική Σύστημα ληξιαρχείου. Η παρακολούθηση ξεκίνησε με τη διάγνωση του καρκίνου και έληξε με το θάνατο ή την 1η

ης Νοεμβρίου 2012, ανάλογα με το ποιο ήρθε πρώτο.

Οι ασθενείς μας έλαβαν εισαγωγική θεραπεία MVAC (μεθοτρεξάτη, βινβλαστίνη, δοξορουβικίνη, σισπλατίνη) ή γεμσιταβίνη και σισπλατίνη (GC /Cis) συνδυασμό. Η αγωγή MVAC δόθηκε ως εξής: μεθοτρεξάτη και βινβλαστίνη την ημέρα 1, 8 και 15, δοξορουβικίνη και σισπλατίνη την ημέρα 2. Κύκλοι επαναλαμβάνονταν κάθε 2 εβδομάδες. Ο /Cis συνδυασμός GC χορηγήθηκε ως εξής: γεμσιταβίνη την ημέρα 1, 8 και 15, η σισπλατίνη την ημέρα 1. Κύκλοι επαναλαμβάνονταν κάθε 2 εβδομάδες. Κλινικές, αιματολογικές, βιοχημικές και εκτιμήσεις έγιναν πριν από κάθε κύκλο. Τα κριτήρια αποκλεισμού για χημειοθεραπεία είχαν μειωμένη νεφρική λειτουργία, η αιμοσφαιρίνη κάτω από 100 mg /L, λευκοκυττάρων κάτω των 3000 κυττάρων /ml και τα αιμοπετάλια κάτω από 100.000 κύτταρα /ml.

GST Γονοτυπικές

Το γονιδιακό DNA απομονώθηκε από το πλήρες αίμα χρησιμοποιώντας το κιτ QIAGEN QIAmp (Qiagen Inc., Valencia, CA, USA).

GSTA1 C-69T

πολυμορφισμός προσδιορίζεται με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης-πολυμορφισμό μήκους θραύσματος περιορισμού (PCR -RFLP) [11]. Μεταχειρισμένα εναύσματα ήταν

GSTA1 C-69T

προς τα εμπρός: 5′-TGTTGATTGTTTGCCTGAAATT-3 »και

GSTA1 C-69T

αντίστροφη, 5′-GTTAAACGCTGTCACCCGTCCT-3 ‘. Παρουσία του site περιορισμού καταλήγοντας σε δύο κομμάτια (481bp και 385bp) αναφέρεται μεταλλαγμένο αλληλόμορφο (

GSTA1 * Β /Β

) και εάν

GSTA1 * Α /Β

πολυμορφισμός που πραγματοποιήθηκαν οδήγησε σε ένα ακόμη κομμάτι των 96bp.

GSTM1

γονοτυπική έγινε με πολλαπλή PCR [11]. Μεταχειρισμένα εναύσματα ήταν

GSTM1

προς τα εμπρός: 5′-GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC-3 »και

GSTM1

αντίστροφη: 5′-GTTGGGCTCAAATATACGGTGG-3 ‘. Το εξόνιο 7 του

CYP1A1

γονίδιο συν-ενισχύεται και χρησιμοποιείται ως εσωτερικός έλεγχος με χρήση των ακόλουθων εκκινητών:

CYP1A1

προς τα εμπρός: 5′-GAACTGCCACTTCAGCTGTCT-3 »και

CYP1A1

αντιστρέψει : 5′-CAGCTGCATTTGGAAGTGCTC-3 ‘. Η παρουσία του

GSTM1-

ενεργά γονότυπος ανιχνεύθηκε από τη ζώνη σε 215bp, δεδομένου ότι η δοκιμασία δεν διακρίνει ετερόζυγη ή ομόζυγη γονότυπους άγριου τύπου.

GSTP1 Ile105Val

πολυμορφισμός αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο PCR-RFLP [11]. Μεταχειρισμένα εκκινητών ήταν:

GSTP1 Ile105Val

προς τα εμπρός: 5′-ACCCCAGGGCTCTATGGGAA-3 »και

GSTP1 Ile105Val

αντίστροφη: 5′-TGAGGGCACAAGAAGCCCCT-3 ‘. Παρουσία του site περιορισμού καταλήγοντας σε δύο κομμάτια (91ορ και 85bp) αναφέρεται μεταλλαγμένο αλληλόμορφο (Val /Val), ενώ αν Ιλ /Val πολυμορφισμός που πραγματοποιήθηκαν οδήγησε σε ένα ακόμη κομμάτι του 176bp.

GSTT1

γονοτυπική διεξήχθη με πολλαπλή PCR [11]. Μεταχειρισμένα εναύσματα ήταν

GSTT1

-forward: 5′-TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC-3 »και

GSTT1

ανάστροφης: 5′-TCACGGGATCATGGCCAGCA-3 ‘. Η ανάλυση δεν κάνει διάκριση μεταξύ ετερόζυγη ή ομόζυγη γονότυπους άγριου τύπου, ως εκ τούτου, η παρουσία του 480bp μπάντες ήταν ενδεικτική για το

GSTT1-

ενεργό γονότυπο.

GSTO1 Ala140Asp

πολυμορφισμός προσδιορίστηκε με τη μέθοδο PCR-RFLP με Marahatta

et al.

[12]. Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν ήταν

GSTO1 Ala140Asp

προς τα εμπρός: 5′-GAA CTT GAT GCA CCC TTG GT-3 »και

GSTO1 Ala140Asp

αντίστροφη: 5′-TGA TAG CTA GGA GAA ΑΤΑ ΑΤΤ AC- 3 ‘. Η παρουσία της θέσης περιορισμού καταλήγοντας σε δύο κομμάτια (186 και 68 bp) έδειξε

άγριου τύπου AlaAla

ομοζυγώτες, και εάν

AlaAsp

ετεροζυγώτες που πραγματοποιήθηκαν, οδήγησε σε ένα ακόμη κομμάτι του 254 bp.

GSTO2 Asn142Asp

πολυμορφισμός προσδιορίστηκε με τη μέθοδο PCR-RFLP από Marahatta

et al.

[12]. Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν ήταν

GSTO2 Asn142Asp

προς τα εμπρός: 5′-ΑΟΟ CAG AAC ΑΟΟ AAC ΤΟΟ AA-3 »και

GSTO2 Asn142Asp

αντίστροφη: 5′-GAG GGA CCC CTT ΤΤΤ GTA CC-3 ‘. Η παρουσία της θέσης περιορισμού καταλήγοντας σε δύο κομμάτια (122 και 63 bp) έδειξε

AspAsp

ομοζυγώτες της πολυμορφική αλληλουχία, ενώ αν

AsnAsp

ετεροζυγώτες που πραγματοποιήθηκαν, οδήγησε σε ένα ακόμη κομμάτι του 185 bp.

η στατιστική ανάλυση

η στατιστική ανάλυση έγινε χρησιμοποιώντας το στατιστικό πακέτο για τις Κοινωνικές Επιστήμες (SPSS, έκδοση 15.0? SPSS Inc, Chicago, Illinois, USA). ανάλυση επιβίωσης διεξήχθη χωριστά στη συνολική ομάδα και στην υποομάδα των ασθενών που έλαβαν χημειοθεραπεία. Η μέθοδος Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί η αθροιστική πιθανότητα επιβίωσης. Η δοκιμή μακράς-rank διεξήχθη για την αξιολόγηση της διαφορές στην επιβίωση ανάλογα με τις διαφορετικές κατηγορίες των μεταβλητών.

Η προγνωστική αξία των διαφορετικών γονότυπων GST στη συνολική θνησιμότητα εκτιμήθηκε από τις ανάλογες μοντέλα παλινδρόμησης κινδύνου Cox, αναπροσαρμόζεται από οι παράγοντες σύγχυσης σε δύο μοντέλα. Στο Μοντέλο 1, οι προσαρμογές που έγιναν για την ηλικία και το φύλο. Υπόδειγμα 2 περιλαμβάνονται οι συμπαράγοντες στο μοντέλο 1 συν μια πρόσθετη προσαρμογή για το βαθμό. Οι ενώσεις παρουσιάζονται ως αναλογίες κινδύνου (HR) με τα αντίστοιχα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (95% CI).

Αποτελέσματα

Τα χαρακτηριστικά των ασθενών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Η μέση ακόλουθες up ήταν 38,2 ± 23,1 μήνες (κυμαινόμενες από 1 έως 66 μήνες). Γονοτυπική επιχειρήθηκε σε 105 ασθενείς και 101 ασθενείς του γονότυπου ήταν επιτυχής για όλους τους γονότυπους που εξετάστηκαν. Από 101 ασθενείς, 62 πέθαναν (61,4%) από καρκίνο της ουροδόχου κύστεως και 12 ασθενείς (11,9%) χάθηκαν κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης.

Η

Η κατανομή γονότυπος

GSTT1, GSTP1, GSTO1 , GSTO2, GSTM1

και

GSTA1

παρουσιάζεται στον πίνακα 2. Η συχνότητα των

GSTT1, GSTP1, GSTM1

και

GSTA1

γονότυπων σε ασθενείς TCC αντιστοιχεί σε εκείνη που που έχουν ήδη αναφερθεί σε TCC ομάδα ασθενών (Matic Μ, δεκτή για δημοσίευση στο Ουρολογικής Ογκολογίας). Η συχνότητα των παραλλαγών γονιδίων τάξης GST ωμέγα είναι το σύμφωνα με τα στοιχεία της Lesseur et al [13].

Η

Ο Πίνακας 3 συνοψίζει τη σύνδεση των έξι GSTs πολυμορφισμών και τη συνολική θνησιμότητα σε TCC ομάδα. Η παρουσία του

GSTT1 ενεργό

γονότυπος ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης του υψηλότερου κινδύνου συνολικής θνησιμότητας μεταξύ των ασθενών TCC (HR = 2,5, 95% CI: 01.01 – 05.05?

P

= 0,028? Πίνακας 3). Η ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier σε ολόκληρη την ομάδα των ασθενών TCC αποδειχθεί μικρότερη μέση συνολική επιβίωση μετά τη διάγνωση του TCC σε ασθενείς με

GSTT1 ενεργό

αλληλόμορφα σε σύγκριση με φορείς της διπλής διαγράφεται

GSTT1

αλληλόμορφα (36,9 ± 2,8 έναντι 46,4 ± 5,4 μήνες, αντίστοιχα?

P

= 0,063? Fig.1A). επιβίωση των ασθενών σε σχέση με το

GSTT1

δεν επηρεάστηκε από την χημειοθεραπεία (Σχήμα 1β).

Η

Όσον αφορά

GSTP1

πολυμορφισμό,

GSTP1 Ile

αλληλόμορφο φορείς ήταν σε υψηλότερο κίνδυνο συνολικής θνησιμότητας και είχε ένα πολυπαραγοντικό ρυθμιστεί (υπόδειγμα 2) HR 2,1 (95% CI: 0,7 έως 5,9?

P

= 0,175? Πίνακας 3) σε σύγκριση με GSTP1

Val

ομοζυγώτες. Η ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier σε ολόκληρη την ομάδα των ασθενών που επέδειξε μικρότερη μέση συνολική επιβίωση σε ασθενείς με φορείς από τουλάχιστον ένα

GSTP1 Ιλ

αλληλόμορφο σε σύγκριση με

GSTP1 Val

ομοζυγώτες (36,9 ± 2,7 vs. 49,5 ± 6,8 μήνες, αντιστοίχως?

P

= 0.157? Εικ. 2α). επιβίωση των ασθενών σε σχέση με το

GSTP1 Ile105Val

δεν επηρεάστηκε από την χημειοθεραπεία (Σχήμα 2β).

Η

Όσον αφορά

GSTO1

πολυμορφισμό, η παρουσία και των δύο μεταλλαγμένα αλληλόμορφα (

Asp140Asp)

βρέθηκε σε 8 ασθενείς και ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης του υψηλότερου κινδύνου συνολικής θνησιμότητας (HR = 2,9, 95% CI: 01.02 – 07.04? p = 0,022? Πίνακας 3). Παρά το γεγονός ότι,

GSTO1 Asp140Asp

γονότυπος έχει μια μικρή συχνότητα, έχει μια μεγάλη λειτουργική σημασία δεδομένου ότι 6 από τους 8 ασθενείς με αυτό το γονότυπο πέθανε κατά τη διάρκεια 5 ετών παρακολούθησης. Η ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier σε ολόκληρη την ομάδα με TCC έχει δείξει μικρότερη συνολική επιβίωση μετά τη διάγνωση TCC σε ασθενείς φορείς του GSTO1

Asp140Asp

σε σύγκριση με τους μεταφορείς τουλάχιστον ένα

GSTO1 Ala

αλληλόμορφο ( 27,3 ± 7,6 έναντι 40,1 ± 2,6 μήνες, αντίστοιχα?

P

= 0,068, σχήμα 3α). επιβίωση των ασθενών σε σχέση με το

GSTO1

δεν επηρεάστηκε από την χημειοθεραπεία (Σχήμα 3β).

Η

Ομοίως με

GSTO1

, η παρουσία και των δύο μεταλλαγμένων

GSTO2

αλληλόμορφα (

Asp142Asp)

ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης του υψηλότερου κινδύνου συνολικής θνησιμότητας μεταξύ των ασθενών TCC. Αυτό το γονότυπο είχε την πιο έντονη επίδραση από την άποψη του κινδύνου θνησιμότητας από το ένα πολυπαραγοντικό προσαρμοσμένο (υπόδειγμα 2) HR 3,9 (95% CI: 01/08 – 08/09?

P

= 0.001? Πίνακας 3) παρατηρήθηκε. Εννέα από τους 10 ασθενείς με GSTO2

Asp142Asp

γονότυπο πέθαναν μέσα σε 5 έτη παρακολούθησης. Η ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier σε ολόκληρη την ομάδα με μυϊκή επεμβατική TCC αποδειχθεί ότι η

GSTO2 Asp142Asp

ομοζυγώτες είχε δύο φορές μικρότερη μέση επιβίωση σε σύγκριση με τους ασθενείς με τουλάχιστον ένα

Αδη

αλληλόμορφο (23,8 ± 4,2 έναντι 40,8 ± 2,7 μήνες, αντίστοιχα?

P

= 0,008, σχήμα 4α). ανάλυση επιβίωσης σε μια υποομάδα ασθενών που έλαβαν χημειοθεραπεία, έδειξε στατιστικά σημαντική μικρότερη επιβίωση σε ασθενείς με φορείς και των δύο μεταλλαγμένα αλληλόμορφα σε σύγκριση με φορείς από τουλάχιστον ένα

GSTO2 Αδη

αλληλόμορφο (19,4 ± 3,4 μήνες έναντι 40,3 ± 3,7 μήνες , αντίστοιχα?.

P

= 0,006, σχήμα 4β)

η

Δεν υπήρχαν ισχυρή στατιστική συσχέτιση μεταξύ GSTM1 και γονιδίων GSTA1 παραλλαγές με συνολική θνησιμότητα σύμφωνα με τον Cox (Πίνακας 3) και ο Kaplan-Meier ανάλυση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Συζήτηση

στην παρούσα μελέτη δείξαμε ότι

GSTT1 ενεργό

γονότυπο ή ομόζυγο μεταλλαγμένο

GSTO1 Asp140Asp

και

οι GSTO2 Asp142Asp

γονότυπους που σχετίζονται με χειρότερη πρόγνωση και μικρότερη επιβίωση σε ασθενείς με μυϊκή διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης. Εκτός αυτού,

GSTP1 Ιλ

φορείς παρουσίασαν αυξημένη, αλλά ασήμαντο, συνολικό κίνδυνο θνησιμότητας.

Ομόζυγος διαγραφή στο

GSTM1

γονίδιο έχει συσχετιστεί με μικρότερη επιβίωση μετά τη διάγνωση του καρκίνου της ουροδόχου κύστης 95 ασθενείς όπως φαίνεται από Nørskov et al [14]. Στην παρούσα μελέτη δεν βρήκαμε τη συσχέτιση μεταξύ

GSTM1 null

γονότυπο και την επιβίωση της μυϊκής επεμβατικές ασθενείς TCC. Από την άλλη πλευρά,

GSTT1 ενεργό

γονότυπος έχει συσχετισθεί με χαμηλότερη recurrence- και επιβίωση χωρίς εξέλιξη σε ασθενείς με μη διηθητικό TCC [15]. Παρόμοια προγνωστική σημασία του

GSTT1

έχει επίσης αποδειχθεί σε ασθενείς με διηθητικό TCC στην παρούσα έρευνα. Ο κίνδυνος που παρέχονται από

GSTT1 ενεργό

αλληλόμορφο για τη θνησιμότητα θα μπορούσε να εξηγηθεί από την άποψη τόσο αντιοξειδωτική δράση της πρωτεΐνης GSTT1 και του δυνητικού ρόλου της στην αδρανοποίηση των ελεύθερων ριζών που παράγονται από αντικαρκινικά φάρμακα. Κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του TCC, σημαντικές αλλαγές συμβαίνουν στην ομοιόσταση κύτταρο οξειδοαναγωγής που μπορεί να επηρεάσει αποπτωτικά μονοπάτια σηματοδότησης [16]. Το οξειδωτικό-αντιοξειδωτικό ισορροπία σε TCC ευνοεί πιθανότατα την κατάσταση μειωμένης καθώς τα αυξημένα επίπεδα ανηγμένης γλουταθειόνης αναφέρθηκαν σε αυτούς τους όγκους. Επιπλέον, τα επάνω ρυθμισμένη δραστηριότητες των αντιοξειδωτικών ενζύμων συμπεριλαμβανομένων GSTT1 έχουν επίσης παρατηρηθεί σε TCC [16], [17]. Μπορεί να σκεφτεί ότι GSTT1 πάνω ρύθμιση δεν εμφανίζεται σε ασθενείς TCC με

GSTT1 null

γονότυπο. Ως εκ τούτου, η καλύτερη έκβαση των ασθενών αυτών μπορεί να εξηγηθεί από την απούσα αντιοξειδωτική δράση GSTT1, η οποία ευνοεί περισσότερο παραπροϊόντων του οξειδωτικού στρες σε κύτταρα όγκου και βραδύτερη εξέλιξη του όγκου. Παρόμοια προγνωστικό ρόλο του

GSTT1 ενεργό

γονότυπο έχει βρεθεί επίσης σε οστεοσάρκωμα [18]. Τίθεται το ερώτημα εάν κάποιο από τα φάρμακα που χρησιμοποιούνται στη θεραπεία των ασθενών TCC αντιπροσωπεύει ένα υπόστρωμα GSTT1. Diedrich et al. [19] έδειξε ότι GSTT1 μπορεί να θεωρηθεί ως ένα σημαντικό παράγοντα για τη χημειοθεραπεία του γλοιοβλαστώματα. Αν και δεν υπάρχουν στοιχεία σχετικά με το ρόλο του GSTT1 στην αδρανοποίηση των φαρμάκων σε MVAC και GC πρωτόκολλα /cis, τουλάχιστον δύο από αυτές (δοξορουβικίνη και σισπλατίνη) ασκούν μηχανισμού δράσης τους μέσω αέργου είδη οξυγόνου καθώς και αποπτωτικά ενεργοποίηση μονοπατιού [20]. Στη μελέτη μας περαιτέρω διαστρωμάτωση των ασθενών σύμφωνα με χημειοθεραπεία δεν έδειξε σημαντική επίδραση του

GSTT1

πολυμορφισμού στο ποσοστό επιβίωσης. Ως εκ τούτου, μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι

GSTT1

γονότυπος έχει μεγαλύτερη επιρροή στην εξέλιξη του όγκου με την αλλαγή ισορροπίας οξειδοαναγωγής της, τότε που επηρεάζουν το μεταβολισμό των ελεύθερων ριζών που παράγονται από αντικαρκινικά φάρμακα.

Ο ρόλος των

GSTP1

πολυμορφισμός στην αντίσταση χημειοθεραπεία έχει σαφώς τεκμηριωθεί σε συντριπτική πλειοψηφία των δύο in vivo και in vitro μελέτες [6], [21]. Σισπλατίνη και δοξορουβικίνη είναι αποδεδειγμένα υποστρώματα για GSTP1, με

GSTP1 Ile

ως παραλλαγή με περισσότερη συγγένεια [5]. Σε αυτή τη μελέτη, δεν βρήκαμε τη σημαντική συσχέτιση μεταξύ

GSTP1

πολυμορφισμού και χημειοθεραπεία απάντηση, αν και οι ασθενείς με

Val /Val

γονότυπου αποδεικνύεται πλέον η επιβίωση των φορέων ενός τουλάχιστον

Ile

αλληλόμορφο. Αυτή η ευεργετική επίδραση του

GSTP1 Val /Val

γονότυπο για επιβίωση έχει επίσης βρεθεί σε ολόκληρη την ομάδα των ασθενών TCC, συμπεριλαμβανομένων και εκείνων που δεν έλαβαν χημειοθεραπεία. Παρά το γεγονός ότι, απόπτωση αναστολή που προκαλείται από GSTP1: JNK αλληλεπίδραση είναι ένας βασικός μηχανισμός στην εξέλιξη του TCC [22], δεν υπάρχουν στοιχεία σχετικά με το διαφορικό αντιαποπτωτικού δραστηριότητα των διαφόρων πρωτεϊνών GSTP1 (Ile ή Val) σχετικά με δεσμευτικές JNK και την αναστολή της απόπτωσης. Ωστόσο, τα πιο πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι η πολυμορφική έκφραση GSTP1-1 στα κύτταρα MCF-7 διαφορικά μεσολαβούν την ενεργοποίηση της ΠΣΕΠ που σχετίζονται με δραστηριότητα Prdx6 υπεροξειδάσης, παρέχοντας μια πλατφόρμα να σημαίνει ότι εξαρτάται από την

ΠΣΕΠ

γονότυπο τους, άτομα θα έχουν τις σημαντικές διαφορές στην τοποθέτηση ένα αντιοξειδωτικό απάντηση [23]. Εάν αυτά τα αποτελέσματα μετατρέπονται σε ρύθμιση TCC, μπορεί να σκεφτεί ότι

GSTP1 Ile /Ιλ

συνεπάγεται υψηλότερη αντιοξειδωτική δυνατότητα που παρέχει το ευνοϊκό περιβάλλον για την εξέλιξη του όγκου και χειρότερη πρόγνωση.

Ο λειτουργικός ρόλος για πολυμορφισμούς σε τόσο GSTO1 και η O2 έχει αρχίσει να αναδυθεί πρόσφατα ως Allen et al. [10] έχουν δείξει ότι

GSTO1 AspAsp

και

GSTO2 AspAsp

είχε πολύ σημαντική επίδραση στα επίπεδα γονιδιακής έκφρασης χαμηλότερα του εγκεφάλου GSTO2, αλλά όχι GSTO1. Αν τέτοιου είδους ρύθμιση της έκφρασης GSTO2 υπάρχει επίσης στα κύτταρα TCC,

GSTO1

ή

GSTO2

πολυμορφισμούς θα οδηγήσει κατά πάσα πιθανότητα σε ελλειμματική δραστηριότητα Dhar, και χαμηλότερο επίπεδο ασκορβικό οξύ (ΑΑ) σε όγκο. Δεδομένου ότι, η πλειοψηφία των ασθενών TCC με

GSTO1

ή

GSTO2

πολυμορφισμούς έχασαν τη ζωή τους, αυτό θα σήμαινε το ρόλο αντι-όγκου της ΑΑ σε εξέλιξη TCC. Με δεδομένο το παραδοσιακό ρόλο του ΑΑ ως αντιοξειδωτικό, αυτά τα αποτελέσματα θα αντιπαραβάλλουν το αξίωμα που μείωσε το περιβάλλον ευνοεί την ανάπτυξη του TCC. Ωστόσο, φαίνεται ότι η αντικαρκινική δράση του ΑΑ έχει ένα βιολογικώς εύλογη εξήγηση, αφού λειτουργεί ΑΑ επίσης ως προ-οξειδωτικό και μπορεί να προωθήσει την απόπτωση σε κύτταρα όγκου όπως κυτταρική γραμμή καρκινώματος παχέος εντέρου [24]. Μελλοντικές μελέτες για συσχέτιση μεταξύ

GSTO

γονότυπο και φαινότυπο (επίπεδο GSTO2 πρωτεΐνη και δραστηριότητα Dhar), καθώς και μετρήσεων ΑΑ σε TCC θα ήταν απαραίτητο να δοθεί εξήγηση για το γεγονός ότι οι ασθενείς TCC με μεταλλαγμένο

GSTO2 Asp142Asp

γονότυπο είχαν 3,9 φορές αυξημένο κίνδυνο θανάτου σε σύγκριση με φορείς από τουλάχιστον ένα

GSTO2 Αδη

αλληλόμορφο, ενώ εκείνοι με

GSTO1 Asp140Asp

γονότυπο επέδειξαν 2,9 φορές αυξημένο κίνδυνο θανάτου από ό, τι οι ασθενείς με τουλάχιστον ένα

Ala

αλληλόμορφο. Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι

GSTO2

πολυμορφισμού ήταν η μόνη που έδειξε σημαντική επίδραση στην επιβίωση στην υποομάδα των ασθενών TCC που έλαβαν χημειοθεραπεία. Δηλαδή, οι ασθενείς TCC τόσο με

GSTO2 Asp

μεταλλαγμένα αλληλόμορφα είχε δύο φορές μικρότερη επιβίωση σε σύγκριση με τους μεταφορείς τουλάχιστον ένα

Αδη

αλληλόμορφο. Αυτό ενισχύει περαιτέρω την υπόθεση μας για τον ρόλο αντι-όγκου της ΑΑ σε TCC. Αυτή η υπόθεση είναι σε σχέση με τα αποτελέσματα του Catani κ.ά. [24], ο οποίος έδειξε ότι AA αυξάνει την αντι-νεοπλασματική δραστικότητα της σισπλατίνης αυξάνοντας έτσι την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων. Περισσότερα στοιχεία σχετικά με την πιθανή εφαρμογή του ασκορβικού οξέος για θεραπευτικούς σκοπούς σε διάφορους όγκους έχουν περιγραφεί σε αναθεώρηση του Λι και Schellhorn [25].

Ορισμένοι περιορισμοί θα μπορούσαν να θεωρηθούν στη μελέτη μας. Σχετικά μικρό αριθμό των συμμετεχόντων στη μελέτη και πολυμορφισμούς GST που μελετήθηκαν μπορεί να είναι οι πηγές των πιθανών προκαταλήψεων που μπορεί να επηρεάσει τα πορίσματα της μελέτης. Ωστόσο, ελέγξαμε αποτελέσματα των έξι πολυμορφισμών GST στην έκβαση σε ασθενείς TCC και ως εκ τούτου, μειώθηκαν σημαντικά μια ευκαιρία για μεροληψία δημοσίευσης. Δηλαδή, τα θετικά αποτελέσματα των γενετικών μελετών ανάλυση ενός μικρού αριθμού πολυμορφισμών (n = 1-3) πρέπει να αξιολογείται προσεκτικά και θεωρούνται σε χαμηλότερο επίπεδο των αποδεικτικών στοιχείων [26]. Εκτός αυτού, οι ασθενείς μας υποβλήθηκαν σε θεραπεία με πολυχημειοθεραπεία και για το λόγο αυτό, είναι δύσκολο να καθοριστεί η επίδραση των πολυμορφισμών GSTs για την έκβαση της θεραπείας για κάθε συγκεκριμένο φάρμακο. Παρ ‘όλα αυτά, αυτή η μελέτη μπορεί να προσφέρει κάποια ουσιαστική πληροφορία που θα μπορούσε να αποτελέσει τη βάση για μελλοντικές διαμήκη έρευνα, ιδίως όσον αφορά τους πολυμορφισμούς ωμέγα κατηγορία GST.

Στο σύνολό τους, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι

GSTT1 ενεργό

γονότυπο ή ομόζυγο μεταλλαγμένο

GSTO1 Asp140Asp

και

οι GSTO2 Asp142Asp

γονότυπους που σχετίζονται με χειρότερη πρόγνωση και μικρότερη επιβίωση σε ασθενείς με καρκίνο των μυών της εισβολής της ουροδόχου κύστης. GSTT1, GSTO1 και GSTO2 ως γενετικοί δείκτες μπορεί να έχουν προγνωστική ή φαρμακογονιδιωματικών ρόλο σε ασθενείς με μυϊκή διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης.

Ευχαριστίες

Θα θέλαμε να ευχαριστήσουμε τον κ Ντράγκοσλαβ Radosavljevic για την τεχνική υποστήριξη του στην η προετοιμασία χειρόγραφο.