Αφηρημένο

Η παρεκκλίνουσα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF) σηματοδότηση συνδέεται με την ανάπτυξη του όγκου σε πλακώδες καρκίνωμα της κεφαλής και του τραχήλου στον άνθρωπο (HNSCC), και είναι μια σημαντική εστίαση της στοχευμένης θεραπείας. Cetuximab, ένα μονοκλωνικό αντίσωμα έναντι EGFR, υπήρξε επιτυχής σε παράταση της επιβίωσης, αλλά έχει μόνο ένα ποσοστό ανταπόκρισης συρρίκνωση του όγκου κατά 10% σε ένα κλινικό περιβάλλον. Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να συγκρίνει dacomitinib (PF-00299804), ένας αναστολέας της κινάσης μικρό μόριο τυροσίνης επόμενης γενιάς που αμετάκλητα μπλοκ πολλαπλές οικογένεια υποδοχέων HER (HER-1 (EGFR), HER-2 και HER-4 κινάσες τυροσίνης), για να cetuximab, η τρέχουσα FDA ενέκρινε αντι-EGFR φάρμακο για HNSCC και erlotinib, ένα ειδικό μικρό μόριο αναστολέα κινάσης τυροσίνης του EGFR. Dacomitinib, erlotinib και cetuximab δοκιμάστηκαν σε ένα πάνελ κυτταρικών σειρών 27 HNSCC. Η θεραπεία με 100 μg /ml του cetuximab ή 1 υΜ της erlotinib παρεμπόδισε ανάπτυξη κατά τουλάχιστον 50% σε 7/27 κυτταρικές σειρές, ενώ η θεραπεία με 1 μΜ του dacomitinib είχαν παρόμοια αναστολή της ανάπτυξης σε 17/27 γραμμές. Οι κυτταρικές γραμμές που αντιπροσωπεύουν τρία επίπεδα ευαισθησίας για dacomitinib εξετάστηκαν περαιτέρω χρησιμοποιώντας κηλίδες Western, του κυτταρικού κύκλου και την ανάλυση απόπτωσης. Η θεραπεία με 100 ηΜ dacomitinib μειωμένη δραστηριότητα EGFR και κατάντη ΑΚΤ και οδούς ERK πιο αποτελεσματικά από τη θεραπεία με 100 μg /ml του cetuximab σε όλες τις δέκα γραμμές που ελέγχθηκαν. Αν και οι δύο ενώσεις απόπτωση που επάγεται σε παρόμοια επίπεδα, dacomitinib προκάλεσε μεγαλύτερη σύλληψη G0 /G1. Ευαισθησία σε αποκλεισμός EGFR συσχετίστηκε με τα επίπεδα του EGFR και ERK και δεν συνδέθηκε με κοινές ογκογονικές μεταλλάξεις και παραλλαγές αριθμού αντιγράφων. Φωσφορυλιωμένη και συνολική EGFR και τα επίπεδα ERK συσχετίζονται με την ευαισθησία τόσο cetuximab και dacomitinib. Τρεις από τις τέσσερις γραμμές στην εξαιρετικά ευαίσθητη ομάδα είχαν τα υψηλότερα επίπεδα των φωσφορυλιωμένων και συνολική EGFR και ERK μεταξύ των δέκα επιλεγμένων γραμμών, ενώ οι τρεις ανθεκτικές γραμμές είχαν συλλογικά τα χαμηλότερα επίπεδα. Ούτε ρΑΚΤ ούτε takt συνδέθηκε με ευαισθησία

Παράθεση:. ‘Αλλα F, Hamidi Η Fejzo MS, Letrent S, Finn RS, Kabbinavar F, et al. (2013) Dacomitinib, μια μη αναστρέψιμη Pan-ErbB αναστολέας καταργεί σημαντικά την ανάπτυξη σε καρκίνο κεφαλής και τραχήλου μοντέλα που παρουσιάζουν χαμηλή ανταπόκριση στο cetuximab. PLoS ONE 8 (2): e56112. doi: 10.1371 /journal.pone.0056112

Επιμέλεια: Nils Cordes, Dresden University of Technology, Γερμανία

Ελήφθη: 23 Απρ, 2012? Αποδεκτές: 8, Γενάρη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 6η Φεβρουαρίου του 2013

Copyright: © 2013 ‘Αλλα et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. SL είναι υπάλληλος της Pfizer. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις πολιτικές PLoS ONE για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

πλακώδες καρκίνωμα της κεφαλής και του τραχήλου (HNSCC), η οποία αποτελείται από τους καρκίνους που προέρχονται από η από του στόματος και των ρινικών κοιλοτήτων, λάρυγγα, φάρυγγα, τα χείλη και τα ιγμόρεια, είναι η έκτη πιο κοινή μορφή καρκίνου σε όλο τον κόσμο, με συχνότητα εμφάνισης ξεπερνώντας 500.000 περιπτώσεις ετησίως [1], [2]. Παρά το εξελισσόμενο μοντέλο διαχείρισης πολυτροπικότητας ενσωμάτωση χειρουργική επέμβαση, χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία, η συνολική επιβίωση παραμένει φτωχή με ένα σχετικό ποσοστό επιβίωσης 5 ετών κάτω του 50% (SEER HNSCC stats). Το κεφάλι και τη διαχείριση του καρκίνου του τραχήλου κατέχει σημαντικές δυνατότητες για την αξιοποίηση των στοχευμένων βιολογικές θεραπείες, μια στρατηγική η οποία έχει κάνει σημαντικές προόδους στη θεραπεία άλλων ιστολογίες συμπεριλαμβανομένων των καρκίνων του μαστού [3], του παχέος εντέρου [4], και ο καρκίνος του πνεύμονα [5] . Ο πρωταρχικός αιτιολογικός παράγοντας για πνεύμονα και καρκίνο κεφαλής και λαιμού είναι το κάπνισμα, και οι δύο έχουν παρόμοια μοριακά χαρακτηριστικά που έχουν εμπλακεί στην παθογένεση της νόσου, όπως ένα βασικό ρόλο του υποδοχέα παράγοντα ανθρώπινου επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) στην ανάπτυξη του όγκου.

EGFR, το οποίο εκφράζεται σε υψηλό βαθμό σε μια σημαντική πλειοψηφία (έως 80-100%) του HNSCC, είναι της πρωτότυπο υποδοχέα της τυροσίνης οικογένειας HER υποδοχέα κινάσης, η οποία περιλαμβάνει HER1 /ErbB-1 /EGFR, HER2 /neu /ErbB-2, HER3 /ErbB-3 και HER4 /ErbB-4 [6]. Δεσμεύουν ένα από επτά προσδέματα του (η οποία περιλαμβάνει EGF και ΤΟΡ-άλφα) επάγει τον ομοδιμερισμό και ετεροδιμερισμό με άλλο μέλος της οικογένειας και η φωσφορυλίωση σε διάφορα κατάλοιπα τυροσίνης στην C-τελική περιοχή [7]. Η δέσμευση του ειδικό συνδετήρα, όπως ο επιδερμικός αυξητικός παράγοντας (EGF) και ο αυξητικός παράγοντας μετασχηματισμού (TGF-άλφα) για EGFR, έχει ως αποτέλεσμα τον διμερισμό του υποδοχέα και έναρξη μονοπατιών ενδοκυτταρικής σηματοδότησης. Σημαντικές κατάντη σηματοδότησης είναι μέσω της οδού της Ras-Raf-ΜΑΡΚ. Η ενεργοποίηση της Ras ξεκινά μια πολλαπλών βημάτων καταρράκτη φωσφορυλίωσης που οδηγεί στην ενεργοποίηση των MAPKs, ERK1 και ERK2, τα οποία ρυθμίζουν την μεταγραφή του τελικά μορίων που εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων [8]. Ένας άλλος σημαντικός στόχος στη σηματοδότηση EGFR είναι φωσφατιδυλινοσιτόλη 3-κινάση (Ρ13Κ) και ο μεταγενέστερος πρωτεΐνη-σερίνη /θρεονίνη κινάση Akt. Αυτή η τελευταία πρωτεϊνικής κινάσης μετάγει μοριακά σήματα τα οποία ενεργοποιούν κρίσιμα βήματα για την κυτταρική ανάπτυξη και την επιβίωση [8], [9].

ανώμαλη ενεργοποίηση του EGFR και κατάντη οδούς της έχει εμπλακεί σε αρκετές κακοήθειες [10]. Η υπερέκφραση του EGFR σε HNSCC έχει συσχετισθεί με χαμηλότερα ποσοστά ανταπόκρισης στη χημειοθεραπεία, και αυξημένη υποτροπή και την αντίσταση στη θεραπεία ακτινοβολίας [11], [12], [13]. Αρκετές ενώσεις που στοχεύουν EGFR έχουν εισέλθει επιτυχώς κλινική πρακτική στην θεραπεία του καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων μικρών μορίων τα οποία δεσμεύουν τον τομέα κινάσης τυροσίνης του EGFR όπως το gefitinib [14] (AstraZeneca, καρκίνος του πνεύμονα) και erlotinib [15] (OSI /Genentech, των πνευμόνων και του καρκίνου του παγκρέατος) και τα μονοκλωνικά αντισώματα cetuximab [16] (BMS /Imclone, του παχέος εντέρου, του πνεύμονα και καρκίνο κεφαλής και τραχήλου) και panitumumab [17] (Amgen, ορθοκολικό καρκίνο) οι οποίες συνδέονται εξωκυτταρική περιοχή του.

το δυναμικό του EGFR- κατευθυνόμενη θεραπεία για τη θεραπεία ασθενών με HNSCC έχει επικυρωθεί τελευταία δοκιμές στις οποίες ασθενείς που λαμβάνουν cetuximab και ακτινοβολία κατέδειξε βελτιωμένη επιβίωση και τοποπεριοχική ελέγχου, σε αντίθεση με θεραπεία με ακτινοβολία μόνη της [16]. Παρόμοιες βελτιώσεις παρατηρήθηκαν με την προσθήκη του cetuximab σε θεραπεία με βάση πλατίνα στη δοκιμή EXTREME [18]. Ωστόσο, οι αυξήσεις στον έλεγχο της επιβίωσης και του όγκου που προκύπτει από την προσθήκη του cetuximab σε αυτές τις δοκιμές είναι ακόμη μικρή, συχνά μετριέται σε μήνες ή εβδομάδες. Γι ‘αυτό το λόγο αναγνώριση της πρόβλεψης δεικτών για βελτιωμένη επιλογή των ασθενών, καθώς και ανάπτυξη πιο αποτελεσματικών παραγόντων που στοχεύουν αυτό το σημαντικό μονοπάτι είναι αναγκαία για την επίτευξη βελτιωμένα αποτελέσματα σε ασθενείς HNSCC.

Ένας λόγος απάντηση σε EGFR-σκηνοθεσία θεραπεία μπορεί να είναι χαμηλή είναι η συνεργασία και σηματοδότηση πλεονασμός μεταξύ των διαφόρων μελών της οικογένειας υποδοχέα ErbB [19]. Παρά την αναστολή της, ακόμη και τα πιο υψηλά εξέφρασε μέλος της οικογένειας (όπως είναι η περίπτωση όταν το cetuximab αναστέλλει την EGFR), ο πολλαπλασιασμός μπορεί να παραμείνει ανεμπόδιστη επειδή εναλλακτική σηματοδότηση από άλλους υποδοχείς διατηρούν την ενεργοποίηση των κοινών κατάντη οδούς που μοιράζονται τα μέλη της οικογένειας υποδοχέα ErbB. Έτσι, η στόχευση πολλαπλά μέλη της ομάδας υποδοχέα ErbB είναι μια ορθολογική προσέγγιση, ιδιαίτερα σε άτομα των οποίων η νόσος έχει προχωρήσει αρχικά ή έχουν αναπτύξει ανθεκτικότητα σε cetuximab θεραπεία. Αυτή η έννοια είναι η στήριξη από τους ασθενείς με καρκίνο του μαστού που παρουσίασαν εξέλιξη του όγκου μετά από αγωγή με trastuzumab (Herceptin, Genentech), ένα μονοκλωνικό αντίσωμα που στοχεύει εναντίον του HER2, έχουν καταδείξει αποκρίσεις στη διπλή EGFR και HER2 αναστολέας τυροσινικής κινάσης λαπατινίμπη (Tykerb, GSK) [20] .

Dacomitinib (Pfizer) είναι ένας αναστολέας της δεύτερης γενιάς Pan-ErbB που δεσμεύεται μη αντιστρεπτά αρκετά μέλη της οικογένειας της, συμπεριλαμβανομένου ErbB-1, ErbB-2 και erbB-4 [21]. Σημαντικές αποκρίσεις in-vitro παρατηρήθηκαν με χαμηλές συγκεντρώσεις dacomitinib σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα ανθεκτικό σε gefitinib [22] και σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού ανθεκτικό σε trastuzumab και λαπατινίμπη [23]. Στην κλινική, μια φάσης Ι δόσης μελέτη κλιμάκωσης σε ασθενείς με προχωρημένους κακοήθεις συμπαγείς όγκους αποδειχθεί καλά ανεκτές δόσεις με σημαντική αντικαρκινική δράση [24]. Πρόσφατες Φάση Ι και ΙΙ δοκιμές σε προχωρημένο NSCLC έχουν δείξει ελπιδοφόρα κλινική δραστηριότητα, όπως μετράται με σταθεροποίηση της νόσου και τη βελτίωση της επιβίωσης χωρίς εξέλιξη σε ασθενείς που προχώρησαν σε θεραπεία πλατίνα και είχαν προηγουμένως λάβει θεραπεία με erlotinib [25]. Με βελτιωμένες φαρμακοκινητικές ιδιότητες της, συμπεριλαμβανομένης της αυξημένης βιοδιαθεσιμότητας, ο χρόνος ημιζωής και χαμηλότερη κάθαρση σε σύγκριση με μη αναστρέψιμους αναστολείς της Pan-ErbB πρώτης γενιάς, όπως CI-1033, dacomitinib είναι ένα ελκυστικό μέσο για την πιθανή κλινική χρήση σε HNSCC [21]. Ο στόχος της παρούσας μελέτης ήταν να προσδιοριστεί in-vitro αποτελέσματα αντι-πολλαπλασιασμό των Dacomitinib σε HNSCC κυτταρικές σειρές. Αυτό περιλαμβάνει τη διαλεύκανση των μηχανισμών που εξηγούν τη δραστηριότητα ErbB κατευθύνεται θεραπεία σε HNSCC μοντέλα κυτταρικής σειράς, καθώς και συγκριτική αξιολόγηση της αποτελεσματικότητάς του κατά του μόνο FDA ενέκρινε στοχευμένη θεραπεία για τη θεραπεία HNSCC.

Αποτελέσματα

τηλέφωνα Γραμμές ανθεκτικό στο cetuximab ανταποκρίνονται στις Dacomitinib σε χαμηλή συγκέντρωση

Μια ομάδα κυτταρικών σειρών 27 HNSCC αντικατοπτρίζει την ανατομική ετερογένεια της νόσου χρησιμοποιήθηκε για να δοκιμαστούν τα αντιπολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της dacomitinib (PF-00299804) και cetuximab, το μόνο FDA εγκεκριμένη στοχευμένη θεραπεία σε HNSCC. (Πίνακας 1).

η

Dacomitinib ανέστειλε την ανάπτυξη όλων των κυτταρικών σειρών καρκίνου κεφαλής και λαιμού σε ένα εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο. Εντούτοις, υπήρξε σημαντική ετερογένεια σε g τιμές IC50 σε όλη την οθόνη, με ένα 4 log-πλάσια διαφορά μεταξύ των πιο ευαίσθητων και λιγότερο ευαίσθητων κυτταρικές γραμμές (Σχήμα 1α). Ένα αποκοπής 1 μΜ χρησιμοποιήθηκε για τη στρωματοποίηση αποκρίνεται κυτταρικές σειρές βασίζεται σε προηγούμενη μελέτη στο καρκίνο του μαστού πίνακα κυτταρική γραμμή [23]. 17/27 κυτταρικές σειρές που ορίζονται ως dacomitinib αποκρίνεται και είχε g IC50 μικρότερη από 1 μΜ. Η θεραπεία με 100 μg /ml του cetuximab οδήγησε σε μεγαλύτερη από 50% αναστολή σε 7/27 κυτταρικές σειρές (Σχήμα 1β). Η απόκριση των κυτταρικών σειρών είτε ένωση δεν συσχετίζονται με την ανατομική θέση πρωτογενούς όγκου.

Τα κύτταρα μετρήθηκαν μετά από πέντε ημέρες αγωγής. SE ράβδοι προήλθαν από τα πειράματα επαναλήφθηκαν τουλάχιστον δύο φορές. Οι ζ τιμές Α Dacomitinib IC50 που διοργανώνονται από το χαμηλότερο στο υψηλότερο IC50 g σε λογαριθμική κλίμακα. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σε συγκεντρώσεις από 0,001 έως 10 υΜ. Β αναστολή της ανάπτυξης Ποσοστό με θεραπεία με cetuximab. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σε μία σταθερή δόση των 100 μg /mL. Οι ζ τιμές C. Η erlotinib IC50 που διοργανώνονται από το χαμηλότερο στο υψηλότερο IC50 g σε λογαριθμική κλίμακα. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σε συγκεντρώσεις από 0,015 να 10 υΜ. Κόκκινο δείχνει την οριακή ευαισθησία. Για dacomitinib και erlotinib, η οριακή ευαισθησία ορίζεται σε 1 μΜ, και για το cetuximab έχει ρυθμιστεί σε 50%.

Η

Επιπλέον, η ίδια ομάδα που χρησιμοποιείται για την εκτίμηση της ευαισθησίας του cetuximab και dacomitinib στα κύτταρα HNSCC χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η ευαισθησία της erlotinib, ένα ειδικό μικρό μόριο αναστολέα κινάσης τυροσίνης EGFR. Παρά το γεγονός ότι η erlotinib δεν είναι εγκεκριμένο από τον FDA θεραπεία σε HNSCC, είναι σε παρόμοια κατηγορία της στοχευμένης θεραπείας, όπως dacomitinib. Έτσι, για να εκτιμήσει αν η διαφορά μεταξύ των dacomitinib και cetuximab παρατηρήθηκε παραπάνω σχετίζεται με τις φαρμακολογικές διαφορές μεταξύ των κατηγοριών φαρμάκων, δηλαδή το αντίσωμα έναντι αναστολέας μικρό μόριο, παρά βιολογική τους στόχους που αξιολόγησε επίσης την ευαισθησία της erlotinib. Μόνο 25.6% (7 από τους 27) HNSCC κυτταρικές γραμμές ήταν erlotinib αποκρίνεται και είχαν μια IC50 μικρότερη από 1 μΜ (Εικόνα 1 C). Αυτό το ποσοστό των ιδιαίτερα ευαίσθητων κυτταρικών σειρών (που ορίζονται ως εκείνες με IC50 λιγότερο από 1 μΜ) ήταν (ο όρος «ποσοστό ανταπόκρισης» θα πρέπει να διατηρούνται για μια πραγματική κλινική μελέτη που χρησιμοποιεί το συνηθισμένο πλήρη /μερική συνολική για να δημιουργήσει αυτήν την τιμή. Είναι ειδικό για αυτό και δεν θα πρέπει να συγχέουμε τους αναγνώστες σε μια προκλινική μελέτη εκτός αν είναι μελέτης ξενομοσχεύματος όγκου κλπ).

Παρόμοια με εκείνη του cetuximab έτσι ώστε μόνο 7 από τα 27 HNSCC κυτταρικές σειρές είχαν επίσης μεγαλύτερη από το 50% αναστολή με 100 μg /ml του cetuximab θεραπείας. Αυτό έρχεται σε πλήρη αντίθεση με dacomitinib οποία επιτυγχάνεται ένα ιδιαίτερα ευαίσθητο ποσοστό 62,9% με το ίδιο 1 μΜ ευαισθησία αποκοπής. Από τις επτά γραμμές HNSCC ευαίσθητα σε erlotinib (IC50 & lt? 1 μΜ), πέντε είχαν μεγαλύτερη από 50% αναστολή μετά από αγωγή με 100 μg /ml του cetuximab. Οι άλλες δύο κυτταρικές γραμμές (UMSCC-25 και UMSCC-38), το οποίο είχε μια g IC50 των 0.367 και 0.508 μΜ είχαν αντίστοιχα 25,9% και 41,2% αναστολή με 100 μg /ml του cetuximab θεραπείας. Υπήρχαν δύο κυτταρικές σειρές οι οποίες είχαν μεγαλύτερη από 50% αναστολή μετά από θεραπεία με cetuximab, αλλά δεν έχουν λιγότερα 1 υΜ g IC50 με erlotinib. Οι κυτταρικές σειρές UMSCC-4 και FADU που είχε 75,6% και 56,4% αναστολή με θεραπεία με cetuximab, είχε IC50 g 1,19 και 1,192 μΜ αντίστοιχα μετά την αγωγή με erlotinib. Όλα τα επτά από τα erlotinib ανταποκρίνεται κυτταρικές σειρές ήταν επίσης dacomitinib ανταποκρίνεται. Από τα υπόλοιπα 20 κυτταρικές γραμμές, 16 είχε IC50 g μεταξύ 1 μΜ και 10 μΜ και 4 κυτταρικές σειρές δεν επέτυχαν IC50 g στη μέγιστη δοκιμάστηκαν συγκέντρωση 10 μΜ.

HNSCC ευαισθησία στην erlotinib ήταν παρόμοια με cetuximab ευαισθησία έτσι ώστε μόνο 25,6% (7/27) του πίνακα ήταν να ανταποκρίνεται στις erlontinib και cetuximab, ενώ 62,9% (17/27 HNSCC είχε IC50 g & lt? 1 μΜ) ήταν ανταποκρίνεται στις dacomitinib. Από το cetuximab έχει επιδείξει κλινική αξία και συνεπώς είναι ένα πρότυπο φροντίδας για καρκίνο κεφαλής και λαιμού, το υπόλοιπο της σύγκρισης έγινε μεταξύ dacomitinib και cetuximab.

Κοινή Oncogene Μεταλλάξεις και οι ενισχύσεις έχουν Σπάνιες στην HNSCC και δεν συσχετίζει με ευαισθησία στο cetuximab ούτε Dacomitinib

οι μεταλλάξεις στο EGFR, K-Ras και PI3K έχει αποδειχθεί ότι επηρεάζει απάντηση σε στοχευμένες θεραπείες [4], [26]. Ωστόσο, αυτές οι μεταλλάξεις δεν είναι άφθονα στο κεφάλι και το λαιμό δείγματα όγκου [27], [28]. Θέλαμε να αξιολογήσει εάν 1) πίνακα κυτταρική γραμμή μας ήταν αντικατοπτρίζουν την ίδια τάση και 2) εάν οι μεταλλάξεις σε αυτά τα γονίδια που σχετίζονται με την ευαισθησία στην cetuximab και dacomitinib. Πραγματοποιήσαμε ανάλυση μετάλλαξης στον πίνακα των κυτταρικών γραμμών καρκίνου κεφαλής και λαιμού που χρησιμοποιούνται στην ανάλυση πολλαπλασιασμού και διαπίστωσε ότι οι μεταλλάξεις ήταν σπάνια και δεν μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για να εξηγήσει την ευαισθησία στο cetuximab και dacomitinib (Πίνακας 1). Καμία από τις κυτταρικές σειρές harbored μεταλλάξεις του EGFR σε εξώνια 19 ούτε 21. Μόνο η κυτταρική γραμμή CAL-33 εμφάνισαν μια μετάλλαξη στα εξόνια 9 ή 20 του ΡΙ3Κ (α ετερόζυγο H1047R μεταλλαγμένο) και μόνο UMSCC-74Α παρουσίασαν μετάλλαξη KRAS (α ετερόζυγο G12D αλλοιουμένος). Αμφότερες αυτές οι κυτταρικές σειρές είχαν μία χαμηλότερη ευαισθησία σε dacomitinib αν και ήταν κάπως CAL33 ανταποκρίνεται στο cetuximab.

Amplification των κινασών τυροσίνης υποδοχέα έχει συσχετιστεί με ευαισθησία σε θεραπείες που στοχεύουν αυτούς τους υποδοχείς [29]. Προηγούμενες μελέτες έχουν βρει μέχρι 20% του HNSCC οι EGFR ενισχύεται, αλλά η προγνωστική και προβλεπτική αξία αυτής της εκτροπής έχει αναμειχθεί [30]. Πραγματοποιήσαμε ανάλυση FISH για την αξιολόγηση του αριθμού αντιγράφων του EGFR σε 19 από τις 27 κυτταρικές σειρές. Καμία από τις κυτταρικές γραμμές ενισχύθηκαν για EGFR και μόνο 4/19 κυτταρικές σειρές (UMSCC-5, UMSCC-11Α, CAL-27 και CAL-33) έδειξε αυξημένο αριθμό αντιγράφων του EGFR (Πίνακας 1). Είναι ενδιαφέρον, αυξημένο αριθμό αντιγράφων του EGFR δεν συσχετίστηκε με ευαισθησία στην dacomitinib? ένα από τα πιο γραμμών ευαισθησία (CAL-27) και μία από τις πιο ανθεκτικές γραμμές (CAL-33) ήταν μεταξύ των τεσσάρων γραμμών με κέρδη EGFR.

Baseline φωσφορυλιωμένη και Total EGFR επίπεδα με και χωρίς EGF Atimulation συσχετίστηκαν με ευαισθησία σε EGFR-σκηνοθεσία θεραπεία

για να αξιολογηθεί ο βαθμός στον οποίο dacomitinib και σηματοδότηση EGFR μπλοκ cetuximab σε γραμμές καρκίνου κεφαλής και τραχήλου κύτταρο και να εξακριβώσουν αν η αποτελεσματικότητά της στην EGFR αποκλεισμού συνδέεται με την ικανότητά τους να αναστέλλουν την ανάπτυξη, πραγματοποιήσαμε ανάλυση στυπώματος Western για την αξιολόγηση των επιπέδων πρωτεΐνης και κατάσταση φωσφορυλίωσης των βασικών μορίων στην EGFR μονοπάτι σηματοδότησης.

πραγματοποιήσαμε ανάλυση κηλίδας Western σε ένα υποσύνολο των κυτταρικών σειρών εκπρόσωπος του διαφορικού απόκριση σε dacomitinib θεραπεία. Τέσσερις γραμμές επιλέχθηκαν από την πλέον ευαίσθητη ομάδα (IC50 & lt? 10 ηΜ), τρεις γραμμές από τη μέτρια ομάδα (1 υΜ & gt? IC50 & gt? 10 ηΜ) και τρεις γραμμές από την ανθεκτική ομάδα (IC50 & gt? 1 μΜ). Η μέση g dacomitinib IC50 των επιλεγμένων κυτταρικών σειρών σε κάθε ομάδα παρουσιάζεται στο Σχήμα 2. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με είτε 100 ηΜ dacomitinib ή 100 μg /mL cetuximab στις δύο EGF-διεγερμένα και μη διεγερμένα κράτη. Τόσο σύνολο και φωσφορυλιωμένο EGFR (tEGFR και pEGFR) τα επίπεδα πρωτεΐνης αξιολογήθηκαν (Σχήμα 3α). Συνολικό επίπεδο EGFR σχετίζεται με την ευαισθησία να dacomitinib? τρεις από τις τέσσερις γραμμές στην ιδιαίτερα ευαίσθητη ομάδα είχαν τα υψηλότερα επίπεδα των φωσφορυλιωμένων και συνολική EGFR μεταξύ των δέκα επιλεγμένων γραμμών, ενώ οι τρεις ανθεκτικές γραμμές συλλογικά είχαν τα χαμηλότερα επίπεδα (Σχήμα 3α). Οι κυτταρικές σειρές στη μέτρια ομάδα είχαν ενδιάμεσα επίπεδα φωσφορυλιωμένης και ολικής EGFR. Για να συγκρίνετε τα επίπεδα pEGFR μεταξύ των ευαίσθητων, μέτρια και ανθεκτική ομάδες, εικόνες κηλίδος Western είχαν προσδιοριστεί ποσοτικά και το μέσο επίπεδο των pEgr για κάθε ομάδα ευαισθησία υπολογίστηκαν και ομαλοποίηση. Η θεραπεία με είτε την ένωση μπλοκαριστεί σημαντικά τα επίπεδα του EGF που διεγείρεται pEGFR στα εξαιρετικά ευαίσθητο και μέτρια ομάδες, αλλά όχι στην ανθεκτική ομάδα (σχήμα 3β).

Τέσσερις κυτταρικές γραμμές που επιλέγεται από την ομάδα εξαιρετικά ευαίσθητοι (IC50 g & lt? 10 nM), τρεις από τη μέτρια ομάδα (IC50 G10 nM – 1 μΜ) και τρεις από την ανθεκτική ομάδα (IC50 g & gt? 1 μΜ). Αυτές οι δέκα γραμμές που χρησιμοποιούνται στην κηλίδα Western και κυτταρομετρία ροής πειράματα. Μέσος g IC50 των επιλεγμένων ευαίσθητων γραμμών είναι 5 ηΜ? μέτρια 75 nM? ανθεκτικά 2186 nM.

Η

Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν για να συνδεθείτε φάση και κατεργάζεται με 100 nM dacomitinib ή 100 μg /mL cetuximab για 1 ώρα, με ή χωρίς επεξεργασία με 10 ng /mL συνδέτη ανασυνδυασμένου EGF. Τα κύτταρα κυτταρολύματα στη συνέχεια συλλέχθηκαν, και η πρωτεΐνη αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδος Western. εικόνες κηλίδα Β Western ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό ImageJ. Τα επίπεδα πρωτεΐνης ποσοτικοποιήθηκαν για κάθε κυτταρική σειρά και ήταν μέσες τιμές κατά ομάδα. Φωσφορυλιωμένη EGFR ομαλοποιήθηκε με τη συνολική EGFR. *. p & lt?. 0.05, έλεγχος τ

Η

Η θεραπεία είτε με φάρμακο δεν μειώνουν τα συνολικά επίπεδα EGFR (Εικόνα 3α). Ωστόσο, υπήρξε μια αξιοσημείωτη μείωση στη συνολική EGFR σε κύτταρα ελέγχου με διέγερση EGF. Είναι γνωστό ότι EGFR εσωτερικεύεται και συχνά αποικοδομούνται μετά από διέγερση με EGF ή άλλους συνδετήρες, η οποία μπορεί να εξηγήσει την παρατήρηση μας [31]. Προσθήκη είτε του φαρμάκου, ωστόσο, αναιρείται αυτό το αποτέλεσμα, το οποίο προσθέτει στοιχεία που αποδεικνύουν ότι οι ενώσεις οι οποίες δεσμεύουν EGFR μπορεί να αναστείλει την εσωτερίκευση και την υποβάθμιση.

Dacomitinib αλλά δεν το cetuximab αναστέλλει την EGF εξαναγκασμένη EGFR μεταγενέστεροι Pathways

Η PI3K- ΑΚΤ-mTOR και Ras-Raf-ΜΑΡΚ μονοπατιών σηματοδότησης είναι κατάντη δράστες της σηματοδότησης EGFR [8]. Θέλαμε να αξιολογηθεί η επίδραση των dacomitinib και cetuximab σε αυτά τα μονοπάτια. Πρώτον, αξιολόγησε τα επίπεδα της πρωτεΐνης του συνολικού ΑΚΤ (takt) και φωσφορυλιωμένη ΑΚΤ (ρΑΚΤ) κατά την αγωγή είτε με dacomitinib ή cetuximab. Σε συνθήκες ελέγχου, ούτε ρΑΚΤ ούτε επίπεδα takt συσχετίστηκαν με ευαισθησία (Σχήμα 4Α) είτε σε βασική γραμμή ή EGF διεγείρονται κατάσταση. EGF διέγερση αυξήθηκε σημαντικά ρΑΚΤ σε όλες τις κυτταρικές σειρές.

Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε λογαριθμικής φάσης και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 100 ηΜ dacomitinib ή 100 μg /mL cetuximab για 1 ώρα, με ή χωρίς επεξεργασία με 10 ng /mL ανασυνδυασμένο EGF συνδετήρα. Τα κύτταρα κυτταρολύματα στη συνέχεια συλλέχθηκαν και η πρωτεΐνη αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδος Western. εικόνες κηλίδα Β Western ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό ImageJ. Τα επίπεδα πρωτεΐνης ποσοτικοποιήθηκαν για κάθε κυτταρική σειρά και ήταν μέσες τιμές κατά ομάδα. Φωσφορυλιωμένη ΑΚΤ ομαλοποιήθηκε με τη συνολική ΑΚΤ. *. ρ & lt?. 0,05, έλεγχος τ

Η

Dacomitinib μειωμένα επίπεδα ρΑΚΤ σε όλες τις επτά κυτταρικές σειρές στις ευαίσθητες και μέτρια ομάδες και μία κυτταρική σειρά στην ανθεκτική ομάδα (UMSCC-1) τόσο βασική γραμμή και EGF διεγείρονται συνθήκες (Σχήμα 4Α). Dacomitinib ήταν σε θέση να μειώσει ρΑΚΤ επίπεδα ανθεκτική κυτταρική γραμμή UMSCC-17Β στο EGF διεγείρονται μόνο συνθήκες. Στο ανθεκτική κυτταρική γραμμή (UMSCC-74Α) επίπεδα ρΑΚΤ ήταν ελαφρώς μειωμένη στο EGF διεγείρονται κατάσταση. θεραπεία με cetuximab ήταν λιγότερο ισχυρή στη μείωση ρΑΚΤ. Η θεραπεία με cetuximab προκάλεσε μείωση της ρΑΚΤ μόνο σε πέντε από τους δέκα κυτταρικές γραμμές (2/4 ευαίσθητες σειρές, 3/3 μέτρια γραμμές και 0/3 ανθεκτικές γραμμές), και το επίπεδο της μείωσης ήταν σημαντικά μικρότερες από εκείνες που προκαλούνται από τη θεραπεία με dacomitinib , ανεξάρτητα από διέγερση EGF (Σχήμα 4α).

Όπως με EGFR, κηλίδες Western ποσοτικοποιήθηκαν και ομάδα ειδικά επίπεδα ρΑΚΤ ομαλοποίηση να takt προσδιορίστηκαν και συγκρίθηκαν (Σχήμα 4β). Χωρίς διέγερση EGF, και οι δύο ενώσεις μείωσε σημαντικά ρΑΚΤ επίπεδα στην εξαιρετικά ευαίσθητη ομάδα και όχι τα μέτρια ή ανθεκτικά ομάδες. Σε EGF διεγείρονται συνθήκες, dacomitinib ήταν σε θέση να μειώσει ρΑΚΤ επίπεδα σε τρεις ομάδες. Σε όλες τις ελεγχόμενες σενάρια, dacomitinib προκάλεσε μεγαλύτερες μειώσεις της ρΑΚΤ επίπεδα από cetuximab.

Η ενεργοποίηση της Ras με σηματοδότηση EGFR εκκινεί μια πολλαπλών βημάτων καταρράκτη φωσφορυλίωσης που οδηγεί στην ενεργοποίηση των MAPKs, ERK1 και ERK2, και, τελικά, ρυθμίζει τη μεταγραφή των γονιδίων που εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Σύνολο και φωσφορυλιωμένη ERK (ERK1 και 2) πρωτεΐνη επίπεδα (Terk και pERK) αναλύθηκαν κατά την αγωγή είτε με dacomitinib ή cetuximab. Στις συνθήκες ελέγχου, Terk και pERK επίπεδα πρωτεΐνης ήταν χαμηλότερες στην ιδιαίτερα ευαίσθητη ομάδα και υψηλότερο στην ανθεκτική ομάδα (Σχήμα 5α και 5β), ανεξάρτητα από διέγερση EGF. Η θεραπεία με είτε την ένωση μείωσε σημαντικά τα επίπεδα της pERK στις επτά κυτταρικές σειρές σε ιδιαίτερα ευαίσθητες και μέτρια ομάδες, και μόνο 1 (UMSCC-1) από τρεις κυτταρικές γραμμές ανθεκτικές στην ομάδα στην αρχική κατάσταση (σχήμα 5α). Κατά την διέγερση με EGF, pERK επίπεδα αυξήθηκαν σημαντικά σε όλες τις κυτταρικές σειρές. Υπό την προϋπόθεση αυτή, Dacomitinib εξακολουθούν να μπλοκάρει τη φωσφορυλίωση της ERK επίπεδα σε όλες τις επτά κυτταρικές σειρές στον ευαίσθητο και μέτρια ομάδα. Εκτός από τη μείωση pERK επίπεδα στο ανθεκτική γραμμή UMSCC-1, υπό EGF διεγείρονται κατάσταση, dacomitinib μείωσε επίσης pERK επίπεδα στην ανθεκτική γραμμή UMSCC-74Α. Cetuximab ήταν σε θέση να μειώσει pERK επίπεδα σε ένα ευαίσθητο μέτρια (FaDu) και ένα ανθεκτικό (UMSCC-74Α) γραμμή (SCC-9), μόνο. Σε όλα τα σενάρια, dacomitinib προκάλεσε μεγαλύτερη μείωση των επιπέδων pERK από το cetuximab.

Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν για να συνδεθείτε φάση και κατεργάζεται με 100 nM dacomitinib ή 100 μg /mL cetuximab για 1 ώρα, με ή χωρίς επεξεργασία με 10 ng /mL συνδέτη ανασυνδυασμένου EGF. Τα κύτταρα κυτταρολύματα στη συνέχεια συλλέχθηκαν και η πρωτεΐνη αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδος Western. εικόνες κηλίδα Β Western ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό ImageJ. Τα επίπεδα πρωτεΐνης ποσοτικοποιήθηκαν για κάθε κυτταρική σειρά και ήταν μέσες τιμές κατά ομάδα. Φωσφορυλιωμένη ERK ομαλοποιήθηκε σε ολική ΕΚΚ. *. p & lt? 0,05, **. p & lt?. 0.01, έλεγχος τ

Η

Δυτική κηλίδες ποσοτικά και ομάδα ειδικών επίπεδα pERK ομαλοποίηση να Terk προσδιορίστηκαν και συγκρίθηκαν (Σχήμα 5β). Χωρίς διέγερση EGF, και οι δύο ενώσεις μείωσε σημαντικά pERK επίπεδα στην ιδιαίτερα ευαίσθητη ομάδα και μέτριες ομάδες, αλλά δεν είναι ανθεκτική ομάδα. Σε EGF διεγείρονται συνθήκες, μόνο dacomitinib ήταν σε θέση να μειώσουν τα επίπεδα pERK. Σε όλες τις ελεγχόμενες σενάρια, dacomitinib προκάλεσε μεγαλύτερες μειώσεις της pERK επίπεδα από το cetuximab.

Dacomitinib Προκαλεί Μεγαλύτερη G0 /G1 σύλληψης από Το cetuximab

Dacomitinib και το cetuximab μπορεί να έχει ανασταλτική δράση επάγοντας διακοπή του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης . Οι ίδιες δέκα κυτταρικές γραμμές που επιλέγονται για τις δοκιμασίες κηλίδος Western, που αντιπροσωπεύουν τις διαφορετικές αποκρίσεις πολλαπλασιασμού των δύο ενώσεων, χρησιμοποιήθηκαν για να αναλυθούν οι επιπτώσεις επί του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης.

Dacomitinib προκάλεσε μεγαλύτερη αναστολή του κυτταρικού κύκλου από cetuximab. Μετά τη θεραπεία με 100 ηΜ dacomitinib ή 100 μg /mL cetuximab για πέντε ημέρες, υπήρξε μια σημαντική αύξηση στο ποσοστό των κυττάρων σε Ο0 /Ο1 φάση στους ευαίσθητους και μέτρια ομάδες με dacomitinib αλλά όχι με cetuximab σε σύγκριση με τον έλεγχο (Σχήμα 6α ). Αν και cetuximab προκάλεσε κάποια σύλληψη G0 /G1, αυτή η επίδραση δεν ήταν σημαντική σε σύγκριση με τον έλεγχο και σημαντικά χαμηλότερη από την επίδραση του dacomitinib τόσο στα ευαίσθητα και μέτρια ομάδες. Υπήρχε λιγότερο από πέντε τοις εκατό μείωση στην φάση S σε όλες τις συνθήκες, εκτός από το dacomitinib επεξεργασμένο μέτρια ομάδα η οποία είχε μια σημαντική μείωση (Σχήμα 6β). Η γενική τάση των επιπτώσεων στην φάση S μιμήθηκε τις επιπτώσεις στην G0 /G1 φάση. Σταθερά, dacomitinib θεραπεία των ευαίσθητων και της μέτριας ομάδες προκάλεσε μεγαλύτερη μείωση στην G2 από cetuximab θεραπεία (Σχήμα 6c).

Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 100 ηΜ dacomitinib ή 100 μg /mL cetuximab για πέντε ημέρες πριν την ανάλυση με τη χρήση της ροής κυτταρομετρία. Τα δεδομένα που εμφανίζονται είναι μέσο ποσοστό των κυττάρων στις αναθέσεις ομάδα από το Σχήμα 2. Α Μεταβολή ποσοστού των κυττάρων σε Ο0 /Ο1 φάση. Β Μεταβολή ποσοστό των κυττάρων στη φάση S. C. Μεταβολή ποσοστό των κυττάρων στη φάση G2. *. p & lt?. 0.05, έλεγχος τ

Η

Dacomitinib ήταν εξίσου αποτελεσματικό με το cetuximab σε επαγωγή της απόπτωσης. Στην ευαίσθητη και μέτρια ομάδες, αμφότερες οι ενώσεις προκάλεσαν μία μείωση στην εκατοστιαία αναλογία των κυττάρων που ζούσαν (Σχήμα 7Α). Υπήρξε μια ταυτόχρονη αύξηση του ποσοστού των κυττάρων που ήταν σε μια πρώιμη ή όψιμη αποπτωτική κατάσταση (Σχήμα 7Β, Σχήμα 7C). Λιγότερο από 6% των κυττάρων ήταν νεκρά σε οποιοδήποτε από τα πειράματα (Σχήμα 7D). Ούτε φάρμακο προκάλεσε σημαντική απόπτωση στην ανθεκτική ομάδα. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των ενώσεων στην επαγωγή της απόπτωσης.

A. Αλλαγές στα κύτταρα% διαβίωσης. B. Αλλαγές στο κελί σε πρώιμη απόπτωση. Γ αλλαγές στα κύτταρα στα τέλη της απόπτωσης. Δ Αλλαγές στη νεκρά κύτταρα%.

Η

Dacomitinib είναι πιο αποτελεσματική στην Μπλόκο EGFR σηματοδότηση από την

μικρό μόριο τυροσίνης κινάσης αναστολέα Η erlotinib

Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, η απόκριση σε πολύ ειδικές EGFR-σκηνοθεσία θεραπεία μπορεί να είναι χαμηλή, διότι εκεί ίσως τη συνεργασία και την απόλυση σηματοδότηση μεταξύ των διαφόρων μελών της οικογένειας υποδοχέα ErbB. Έτσι, αξιολογείται dacomitinib, έναν αναστολέα panHER με ευρεία ειδικότητα, σε ένα πάνελ από 27 HNSCC και έδειξε κυτταρικές γραμμές HNSCC είναι πιο ευαίσθητα σε αυτό από το μικρό μόριο αντι-EGFR erlotinib αναστολέας κινάσης τυροσίνης και το cetuximab αντι-ΕΟΡΚ αντίσωμα σε δοκιμασίες πολλαπλασιασμού (βλέπε Σχήμα 1) και χρησιμοποιώντας ένα υποσύνολο των δέκα κυτταρικές γραμμές δείξαμε ότι dacomitinib ήταν πιο αποτελεσματική στην παρεμπόδιση της σηματοδότησης EGFR από cetuximab. Ο χαρακτηρισμός του dacomitinib έγινε σε σύγκριση με το cetuximab, το μόνο FDA ενέκρινε αντι-ΕΟΡΚ παράγοντας στη θεραπεία της HNSCC. Ωστόσο, erlotinib και dacomitinib είναι και οι δύο αναστολείς μικρού μορίου, σε αντίθεση με cetuximab που είναι ένα αντίσωμα και έτσι την ικανότητά erlotinib να εμποδίσει σηματοδότηση EGFR αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας κηλίδωση Western.

Τρεις κυτταρικές γραμμές που αντιπροσωπεύουν τις τρεις τάξεις της ευαισθησίας περιγράφηκε προηγουμένως εξετάστηκαν . Στην ευαίσθητη γραμμή ΗΝ5 dacomitinib ήταν πιο αποτελεσματική στην παρεμπόδιση της σηματοδότησης EGFR, είτε από cetuximab ή ερλοτινίμπη (Σχήμα 8Α). Μόνο ΗΝ5 κύτταρα κατεργασμένα με 100 ηΜ dacomitinib είχαν σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα ή pEGFR σύγκριση με τον έλεγχο. EGFR σηματοδότησης στην μετρίως ευαίσθητο γραμμή, UMSCC-38 και UMSCC-17B ήταν χαμηλή.

Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε λογαριθμικής φάσης και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 100 ηΜ dacomitinib, 100 ηΜ erlotinib ή 100 μg /mL cetuximab για μία ώρα . Τα κύτταρα κυτταρολύματα στη συνέχεια συλλέχθηκαν και η πρωτεΐνη αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδος Western. εικόνες κηλίδα Β Western ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό ImageJ. Τα επίπεδα πρωτεΐνης ποσοτικοποιήθηκαν για κάθε κυτταρική γραμμή. Φωσφορυλιωμένη ERK και AKT ομαλοποιήθηκαν σε άλφα τουμπουλίνης και παρουσιάζονται ως% του ελέγχου.

Η

Πιο σημαντικές αλλαγές παρατηρήθηκαν στις downstreams PI3K-AKT-mTOR και Ras-Raf-MAPK μονοπατιού, όπως dacomitinib ήταν σημαντικά πιο αποτελεσματική στην παρεμπόδιση τόσο φωσφορυλίωση του ΑΚΤ και ERK (Εικόνα 8Α). Western στυπώματα ποσοτικοποιήθηκαν και τα επίπεδα ρΑΚΤ και pERK παρουσιάστηκαν ως επί τοις εκατό του ελέγχου μετά από ομαλοποίηση σε άλφα τουμπουλίνης για τον έλεγχο για ολική πρωτεΐνη (Σχήμα 8Β). ΗΝ5 κύτταρο υποβάλλεται σε επεξεργασία με 100 ηΜ του erlotinib είχαν διπλάσια ρΑΚΤ με εκείνους που έλαβαν θεραπεία με 100 ηΜ dacomitinib. UMSCC-38 κυττάρων σε επεξεργασία με 100 ηΜ του erlotinib είχε 17 φορές περισσότερο ρΑΚΤ από εκείνους που αντιμετωπίστηκαν με την ίδια συγκέντρωση dacomitinib. Ομοίως, αν και τα τρία φάρμακα ήταν αποτελεσματικά ένα κλείδωμα ΕΚΚ φωσφο στην ευαίσθητη γραμμή ΗΝ5, UMSCC-38 υποβάλλεται σε επεξεργασία με 100 ηΜ του erlotinib είχε 4 φορές περισσότερο από ό, τι pERK σήματος UMSCC-38 κύτταρα επεξεργασμένα με την ίδια συγκέντρωση του dacomitinib. Η erlotinib ήταν λιγότερο αποτελεσματικό στην παρεμπόδιση τόσο φωσφο ΕΚΚ και AKT στην UMSCC-38 σε σύγκριση με το cetuximab και dacomitinib. Στο ανθεκτική γραμμή UMSCC-17Β, ούτε erlotinib ούτε dacomitinib είχε σημαντική επίδραση στην ρΑΚΤ αλλά dacomitinib ήταν πιο αποτελεσματική στην παρεμπόδιση pERK επίπεδο από erlotinib (Σχήμα 8Β).

Για να εκτιμηθεί αν μια εξάρτηση από τη δόση θα μπορούσε να θεωρηθεί χρησιμοποιώντας ένα υψηλότερη συγκέντρωση dacomitinib (1 μΜ) ελέγχθηκε σε μπλοκάρισμα ERK και ΑΚΤ μεσολαβούμενη σηματοδότηση στην ανθεκτική γραμμή, UMSCC-17Β. Σε σύγκριση με 100 nM θεραπεία, τα κύτταρα UMSCC-17B θεραπεία με 1 μΜ dacomitinib είχε μια μείωση κατά 25% σε ρΑΚΤ και μείωση κατά 21% σε pERK (Σχήμα 8Α και 8Β).

Συζήτηση

Η μη αναστρέψιμη παν-ErbB αναστολέας dacomitinib είναι σήμερα σε κλινικές μελέτες φάσης ΙΙΙ για τη θεραπεία ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα και έχει δείξει ελπιδοφόρα δραστηριότητα στη θεραπεία αυτής της κακοήθειας (https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT01000025). Επιδιώξαμε να συγκρίνουν τα αποτελέσματα της dacomitinib με cetuximab, έναν αναστολέα EGFR που είναι η επί του παρόντος το μόνο εγκεκριμένο FDA-στοχευμένη θεραπεία για τη θεραπεία HNSCC και με την erlotinib ένα μικρό αναστολέα μόριο EGFR που δεν έχουν ακόμη FDA ενέκρινε το HNSCC. Παρέχουμε ενδείξεις ότι η θεραπεία με ένα παν-HER αναστολέας όπως dacomitinib είναι πιο αποτελεσματική από τη χρήση του ειδικού αναστολείς EGFR cetuximab και erlotinib.

Τα δεδομένα μας καταδεικνύουν την αποτελεσματικότητα των dacomitinib στην κατάργηση της αύξησης των HNSCC κυτταρικών σειρών in vitro. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι κυτταρικές σειρές που εμφανίζουν δραματική αναστολή της ανάπτυξης με cetuximab παρουσίασε επίσης σημαντική αναστολή της ανάπτυξης με dacomitinib, η οποία καταδεικνύει, τουλάχιστον, η έλλειψη κατωτερότητας της dacomitinib σύγκριση με το cetuximab. Κλινικού ενδιαφέροντος είναι ότι 3/27 κυτταρικές γραμμές, το 11% του πάνελ, παρουσίασαν μεγαλύτερη από 90% αναστολή αύξησης με cetuximab, το οποίο θυμίζει την κλινική παρατήρηση ενός ποσοστού ανταπόκρισης 10% που παρατηρήθηκε σε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με cetuximab. Αυτές οι τρεις κυτταρικές γραμμές ήταν εξαιρετικά ευαίσθητοι στην dacomitinib καθώς με g τιμές IC50 λιγότερο από 10 ηΜ. Εάν αυτό προκλινικές παρατήρηση ισχύει κλινικά, θα προβλέψουμε τους ασθενείς που ανταποκρίνονται στο cetuximab θα ανταποκριθεί επίσης να dacomitinib.