Αφηρημένο

Ιστορικό

ενδονεοπλαστική στεροειδογένεση και συστατικές υποδοχέα ανδρογόνων (AR) δραστηριότητα έχουν συσχετισθεί με ευνουχισμό ανθεκτικά καρκίνο του προστάτη (CRPC). Αυτή η μελέτη είχε σκοπό να εξετάσει αν μεταστάσεις CRPC οστών εξέφρασαν υψηλότερα επίπεδα των ενζύμων στεροειδή μετατροπή από μη επεξεργασμένο οστικές μεταστάσεις. Στερεοειδογόνο επίπεδα του ενζύμου αναλύθηκαν επίσης σε σχέση με την έκφραση μόνιμα ενεργές παραλλαγές AR (AR-Vs) και σε κλινικές και παθολογικές μεταβλητές.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Τα ανεπεξέργαστα, ορμόνη-αφελείς (HN , n = 9) και CRPC δείγματα οστικές μεταστάσεις (n = 45) ελήφθησαν από 54 ασθενείς σε χειρουργική επέμβαση μετάσταση. Μη-κακοήθεις και κακοήθεις δείγματα προστάτη αποκτήθηκαν από 13 δείγματα προστατεκτομή. τα επίπεδα μεταγραφής και πρωτεΐνες αναλύθηκαν με πραγματικού χρόνου RT-PCR, ανοσοϊστοχημεία και ανοσοκηλίδωση. Δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στην στερεοειδογόνο επίπεδα του ενζύμου εντοπίστηκαν μεταξύ CRPC και οστικές μεταστάσεις ΠΝ. Σημαντικά υψηλότερα επίπεδα SRD5A1, AKR1C2, AKR1C3 και HSD17B10 mRNA ήταν όμως βρέθηκαν σε οστικές μεταστάσεις από ότι σε μη-κακοήθη και /ή κακοήθη ιστό του προστάτη, ενώ το CYP11A1, CYP17A1, HSD3B2, SRD5A2, και τα επίπεδα HSD17B6 mRNA σε μεταστάσεις ήταν σημαντικά χαμηλότερα . Μια υπο-ομάδα των μεταστάσεων εξέφρασαν πολύ υψηλά επίπεδα AKR1C3, η οποία δεν οφείλεται σε γονιδιακή ενίσχυση όπως εξετάστηκε με τη δοκιμασία αντίγραφο παραλλαγή αριθμό. Δεν βρέθηκε κάποια σχέση μεταξύ AKR1C3 έκφραση και χρώση των πυρηνικών AR, πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων ή την έκβαση των ασθενών μετά από μεταστάσεις χειρουργική επέμβαση. Με μία μόνο εξαίρεση, τα επίπεδα πρωτεΐνης υψηλής AR-V βρέθηκαν σε οστικές μεταστάσεις, με χαμηλά επίπεδα AKR1C3, ενώ μεταστάσεις με υψηλά επίπεδα AKR1C3 περιλαμβάνονται κυρίως τα χαμηλά επίπεδα AR-V, υποδεικνύοντας διακριτούς μηχανισμούς πίσω από ευνουχισμό αντοχή σε επιμέρους οστικές μεταστάσεις.

Συμπεράσματα /Σημασία

Induced ικανότητα μετατροπής των επινεφριδίων, αδένες που προέρχεται στεροειδή σε πιο ισχυρά ανδρογόνα αναφέρθηκε σε μια υπο-ομάδα των οστικών μεταστάσεων PC. Αυτό δεν σχετίζεται με CRPC αλλά απλώς με το προχωρημένο στάδιο της μετάστασης. Υπο-ομάδες των οστικών μεταστάσεων θα μπορούσε να προσδιορίζονται σύμφωνα με τα επίπεδα έκφρασης τους AKR1C3 και AR-Vs, η οποία μπορεί να έχει σημασία για την ανταπόκριση του ασθενούς σε 2

ου γραμμής θεραπεία αποστέρησης ανδρογόνων

Παράθεση:. Jernberg Ε, Thysell Ε, Bovinder Ylitalo Ε, Rudolfsson S, Crnalic S, Widmark A, et al. (2013) Χαρακτηρισμός του καρκίνου του προστάτη οστικές μεταστάσεις Σύμφωνα με τα επίπεδα έκφρασης των στερεοειδογόνο Ένζυμα και ανδρογόνων υποδοχέων Splice παραλλαγές. PLoS ONE 8 (11): e77407. doi: 10.1371 /journal.pone.0077407

Επιμέλεια: Kaustubh Ντάτα του Πανεπιστημίου της Νεμπράσκα Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: May 14, 2013? Αποδεκτές: 2 Σεπτεμβρίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 7 Νοεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Jernberg et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το σουηδικό Συμβούλιο Έρευνας, το σουηδικό Αντικαρκινική Εταιρεία, το Ίδρυμα Έρευνας για τον Καρκίνο στη Βόρεια Σουηδία, Ίδρυμα Έρευνας για τον Καρκίνο Λεόντων, και το Πανεπιστήμιο της Umea. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η θεραπεία πρώτης γραμμής για ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο του προστάτη (PC) είναι θεραπεία στέρησης ανδρογόνων (ADT). Αυτή η θεραπεία είναι αποτελεσματική στους περισσότερους ασθενείς, αλλά μετά από μια περίοδο αρχικής όγκων διαγραφής γενικά υποτροπιάζουν, κυρίως μέσα στο οστό, και στη συνέχεια ονομάζονται ευνουχισμός ανθεκτικά PC (CRPC).

Παρά τα χαμηλά επίπεδα κυκλοφορούντων ανδρογόνων σε ευνουχισμένους άνδρες η πλειοψηφία των CRPC όγκων δείχνουν υποδοχέα (AR) δραστηριότητα ανδρογόνων και την έκφραση των γονιδίων που ρυθμίζονται AR [1]. Πιθανοί μηχανισμοί πίσω δραστικότητα AR σε CRPC περιλαμβάνουν ενίσχυση AR γονιδίου και οι μεταλλάξεις, ενδονεοπλαστική σύνθεση των ανδρογόνων, και έκφραση ιδιοσυστατικά ενεργές παραλλαγές ματίσματος AR [2], [3]. Αξίζει να σημειωθεί ότι ορισμένοι CRPC όγκους, και τα μεμονωμένα καρκινικά κύτταρα στους περισσότερους ασθενείς, δείχνουν πολύ χαμηλή ή απουσία ανοσοχρώση πυρηνικών AR, και παράγοντες κατάντη του AR δεν είναι κατ ‘ανάγκη τα πάνω ρυθμισμένα σε εκείνες τις περιπτώσεις [4], [5], [6] , [7]. Έχουμε χαρακτηρίζεται πρόσφατα μια σειρά από ορμόνες αφελή (ΗΝ) και CRPC οστικές μεταστάσεις σε ασθενείς, σύμφωνα με την ενεργοποίηση AR και την έκφραση των παραλλαγών AR ματίσματος (AR-Vs) [5], [8]. Επίπεδα του AR-V7 (επίσης ονομάζεται AR3) [9], [10] και AR-V567es [11] παραλλαγές αυξήθηκαν σε CRPC σύγκριση με μεταστάσεις ΗΝ και, επιπλέον, βρέθηκε ότι εκφράζεται υψηλά σε μια υπο-ομάδα των CRPC ασθενείς με ιδιαίτερα κακή πρόγνωση [8]. Η AR-V7 και AR-V567es στερούνται επικράτεια δέσμευσης συνδέτη (LBD) και διαθέτουν συστατική δραστικότητα [9], και οι ασθενείς εκφράζουν αυτά τα AR-Vs δείχνουν πιθανώς φτωχή απόκριση σε ADT και αντι-AR φάρμακα που στοχεύουν το LBD. Μερικοί CRPC ασθενείς ωστόσο ανταποκρίνονται στις 2

ου γραμμή ADT και αυτό μπορεί να οφείλεται σε ενδονεοπλαστική στεροειδογένεση και την παραγωγή της τεστοστερόνης, διυδροτεστοστερόνη (DHT), ή άλλα ανδρογόνα σε επίπεδα αρκετά υψηλά για την ενεργοποίηση AR, όπως αναφέρθηκε από τους άλλους [13 ], [14], [15], [16]. Είναι, όμως, δεν είναι γνωστό πότε αυτά στερεοειδογόνο ένζυμα είναι up-ρυθμίζονται. Είναι αυξήθηκαν ήδη είχαν λάβει προηγουμένως θεραπεία μεταστάσεις ΠΝ, ή όπως το AR-Vs [8] αυξηθεί ως αποτέλεσμα της θεραπείας ευνουχισμό; Ένας σκοπός αυτής της μελέτης ήταν επομένως να αναλυθεί έκφραση ενζύμων στεροειδούς μετατρεπτικού δυνητικά εμπλέκονται στη σύνθεση της τεστοστερόνης και DHT σε ένα σύνολο ΗΝ και CRPC οστικές μεταστάσεις που λαμβάνονται από ασθενείς σε χειρουργική επέμβαση μετάσταση. Επιπλέον, τα επίπεδα έκφρασης του ενζύμου αναλύθηκαν σε σχέση με την έκφραση του AR-Vs, προκειμένου για τον εντοπισμό πιθανών διαφορετικών μηχανισμών πίσω CRPC σε επιμέρους οστικές μεταστάσεις.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική δήλωση

Η μελέτη εγκρίθηκε από την τοπική ηθική επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημίου της Umea και οι συμμετέχοντες έδωσαν γραπτή ή προφορική συγκατάθεση. Λόγω της οξείας κατάστασης όταν η χειρουργική επέμβαση μετάσταση στα οστά γίνεται προκειμένου τα συμπτώματα της σπονδυλικής στήλης ανακούφιση και πάρεση, logistics δεν επιτρέπουν πάντοτε ως εκ τούτου γραπτή συγκατάθεση και το τοπικό συμβούλιο ηθική επανεξέταση ειδικά εγκριθεί επίσης προφορική συγκατάθεση. Προφορική συγκατάθεση τεκμηριώνεται από τον ιατρό στο περιοδικό ασθενή.

Ασθενείς

Bone μετάσταση ιστού λήφθηκε από τη σειρά των νωπών-κατεψυγμένων και φορμόλη σταθερό βιοψίες που ελήφθησαν από ασθενείς με τον υπολογιστή που λειτουργεί για το μεταστατικό σπονδυλικής στήλης συμπίεση του νωτιαίου μυελού ή παθολογικά κατάγματα στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Umea (2003-2011). Τα κλινικά χαρακτηριστικά και θεραπείες συνοψίζονται στον Πίνακα 1, και αυτή η σειρά ασθενής έχει περιγραφεί προηγουμένως στο Crnalic et al [5], [17], [18]. Η μελέτη περιλαμβάνει επίσης 13 ασθενείς οι οποίοι υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ριζική προστατεκτομή στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Umea, μεταξύ Φεβρουάριο του 2005 και Σεπτέμβριο του 2006. Η μέση ηλικία των ασθενών ήταν 60 έτη (εύρος 48 έως 68 έτη) και διάμεση τιμή του PSA ήταν 6.6 ng /ml (εύρος 3,5 -24 ng /ml). Έντεκα από τους ασθενείς είχαν όγκους κατατάσσονται ως αποτέλεσμα Gleason (GS) 7 και δύο ως GS 8. Τέσσερις από τους όγκους ήταν στο στάδιο Τ2 και εννέα στο στάδιο Τ3. Πρόσθετες πληροφορίες σχετικά με το χειρισμό του ιστού έχει περιγραφεί προηγουμένως σε Hornberg et al [8].

Η

Η προετοιμασία των δειγμάτων

Εκπρόσωπος περιοχές οστικών μεταστάσεων, πρωτογενείς PC και μη κακοήθη ιστό του προστάτη ήταν κρυο -sectioned σε σωλήνες εκχύλισης και RNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το πρωτόκολλο ΤπζοΙ (Invitrogen, Στοκχόλμη, Σουηδία) ή AllPrep DNA /RNA /Protein Mini Kit (Qiagen, Sollentuna, Σουηδία). Για τις περιπτώσεις ήταν DNA και πρωτεϊνών αναλύθηκαν παράλληλα με το RNA, τα νουκλεϊκά οξέα και πρωτεΐνες απομονώθηκαν από τις ίδιες τομές ιστών χρησιμοποιώντας τη μέθοδο AllPrep. Τα ποσοστά των κυττάρων όγκου στα δείγματα ήταν πάνω από 50% στην πλειονότητα των περιπτώσεων. Οι συγκεντρώσεις RNA και DNA προσδιορίστηκαν ποσοτικά με μετρήσεις απορρόφησης χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο (ND-1000 φασματοφωτόμετρο? NanoDrop Technologies, Inc., Wilmington, DE). Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε με τη δοκιμασία πρωτεΐνης BCA (Pierce Chemical Co., IL, USA). Η ποιότητα του RNA αναλύθηκε με το 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) και επαληθεύεται να έχει έναν αριθμό ακεραιότητα του RNA ≥6.

Real time RT-PCR

RNA ήταν ανάστροφα μεταγραφέντος με αντίστροφη μεταγραφάση Superscript II (Invitrogen) σε συνολικό όγκο 10 μΙ. Η επακόλουθη ενίσχυση PCR εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας το Biorad iQ5 iCycler (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) ή το ΑΒΙ PRISM 7900HT Μέσο (Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA) σε ένα συνολικό όγκο 20 μΐ χρησιμοποιώντας το SYBR IQ Green (εργαστήρια Bio-Rad) Supermix ή η γονιδιακή έκφραση βασικού μείγματος TaqMan (Applied Biosystems, Life Technologies Europe BV, Στοκχόλμη, Σουηδία) σύμφωνα με τα πρωτόκολλα των κατασκευαστών. Οι αλληλουχίες εκκινητών φαίνονται στον Πίνακα S1. Κάθε δείγμα εις διπλούν και προσαρμόζονται για τα αντίστοιχα επίπεδα RPL13A mRNA. Ανάλυση καμπύλης τήξης επιβεβαίωσε τα ενισχυμένα προϊόντα, τα οποία αναλύθηκαν επίσης με ηλεκτροφόρηση πηκτής αγαρόζης 1% για να επιβεβαιωθεί το αναμενόμενο μέγεθος (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Ανοσοϊστοχημεία

Δείγματα σταθεροποιήθηκαν σε ρυθμισμένη φορμαλίνη, απασβεστώθηκαν σε μυρμηκικό οξύ, και ενσωματωμένα σε παραφίνη [5]. Πέντε μm τομές παραφίνης αποπαραφινοποιήθηκαν σύμφωνα με τυπικές διαδικασίες, βρασμένα σε 0,01 Μ κιτρικού ρυθμιστικού διαλύματος, ρΗ 6,0, και ανοσοχρώση για AKR1C3 (NP6-G6.A6, αραιώνεται 1:1000, Sigma, Saint Louis, Missouri, USA), AR (PG -21, αραιωμένο 1:25, Upstate, Lake Placid, ΝΥ, USA), PSA (A0562, αραιωμένο 1:2000, ϋΑΚΟ, Glostrup, Δανία) και Ki67 (MIB1, αραιωμένο 1:50, ϋΑΚΟ) με Ultraview Ανίχνευση Οικουμενική DAB Kit (Ventana Medical Systems). Πυρηνική AR και κυτταροπλασματική AKR1C3 και χρώση PSA σε επιθηλιακά καρκινικά κύτταρα βαθμολογήθηκαν ανάλογα με την ένταση (0 = καμία χρώση, 1 = ασθενής, 2 = μέτρια, 3 = έντονη χρώση) και το κλάσμα των χρωματισμένων κυττάρων (1 = 1-25%, 2 = 26-50%, 3 = 51-75%, 4 = 76-100%). Μια συνολική βαθμολογία (που κυμαίνονται 0-12) λήφθηκε πολλαπλασιάζοντας τις βαθμολογίες έντασης χρώσης και του κλάσματος. Κί67 βαθμολογήθηκαν με αξιολόγηση 300-1000 καρκινικά επιθηλιακά κύτταρα ανά ασθενή, όπως περιγράφεται παραπάνω [5].

Αντιγραφή αριθμός ανάλυση

Ο αριθμός αντιγράφων του γονιδίου AKR1C3 σε οστικές μεταστάσεις PC εξετάστηκε χρησιμοποιώντας ο Hs03060693_cn και οι δοκιμασίες αριθμού αντιγράφων Hs02574521_cn TaqMan (Applied Biosystems, Life Technologies Europe BV, Στοκχόλμη, Σουηδία), η στόχευση AKR1C3 εξόνιο 2 και εξόνιο 7, αντίστοιχα. Οι δοκιμασίες διεξήχθησαν σύμφωνα με την περιγραφή του κατασκευαστή, με RNaseP ως γονίδιο αναφοράς, και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό αντιγραφής καλούντος (Applied Biosystems).

Ανοσοαποτύπωσης

22Rv1 κύτταρα διατηρούνται σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή ( ATCC) και η πρωτεΐνη εκχυλίστηκε ως ανωτέρω. Δείγματα (10 μg πρωτεΐνης) διαχωρίστηκαν με 7.5% SDS-PAGE υπό αναγωγικές συνθήκες και στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF (Immobilon-P, Millipore, Billerica, ΜΑ). Οι μεμβράνες μπλοκαρίστηκαν σε 5% γάλα που ακολουθείται από επώαση πρωτογενές αντίσωμα σε 4 ° C όλη τη νύχτα (Ν-20 αντίσωμα, αραιωμένο 1:500 σε 1% γάλα /PBST, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) προκειμένου να ανιχνευθεί η πλήρης μήκους AR και περίπου 80 kDa περικοπεί AR-Vs με άθικτο Ν-τερματικά. Η δευτερεύουσα IgG αντι-κουνελιού (Dako, Glostrup, Denmark) αντίσωμα (αραιώθηκαν 1:20 000 σε 2,5% γάλα) εφαρμόστηκε μετά το πλύσιμο σε PBST και επωάστηκαν για 1 ώρα σε RT. έκφραση της πρωτεΐνης οπτικοποιήθηκε μετά από εκτεταμένη πλύση χρησιμοποιώντας το Advanced κιτ ανίχνευσης ECL (GE Healthcare, Buckinghamshire, Ηνωμένο Βασίλειο). Τα φίλτρα στη συνέχεια απογυμνώνεται, σύμφωνα με πρότυπες διαδικασίες, και αναλύθηκαν για τα πρωτεϊνικά επίπεδα της ακτίνης με τη χρήση του αντισώματος κουνελιού αντι-ακτίνης από την Sigma (Saint Louis. Missouri), αραιωμένο 1:8000, προκειμένου να εξασφαλιστεί η ίση δείγμα φόρτωσης. σήματα ECL ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα σαρωτή ChemiDoc και το λογισμικό Quantity One 4 (Bio-Rad Laboratories). Η ένταση της ζώνης 80 kDa σε κάθε δείγμα ασθενούς αναλύθηκε και εκφράζεται σε σχέση με την αντίστοιχη πλήρους μήκους ένταση AR μπάντα. Το εκχύλισμα των κυττάρων 22Rv1 λειτούργησε ως θετικό δείγμα ελέγχου σε κάθε τζελ.

Η στατιστική ανάλυση

Οι συσχετίσεις μεταξύ των μεταβλητών αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τεστ κατάταξης Spearman. Ομάδες συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney U για τις συνεχείς μεταβλητές και το Chi-square test για τις μεταβλητές κατηγοριών. ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier διεξήχθη με το θάνατο του υπολογιστή ως εκδήλωση και ο χρόνος παρακολούθησης καθώς ο χρόνος μεταξύ χειρουργική επέμβαση μετάσταση και την τελευταία εξέταση παρακολούθησης (Δεκέμβριος 2012). Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του στατιστικού πακέτου για τις Κοινωνικές Επιστήμες, SPSS 20.0 (SPSS, Inc, Chicago, USA). Μια τιμή Ρ μικρότερη ή ίση με 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

Δεν γενική επαγωγή στερεοειδογόνο ενζύμων σε ευνουχισμό ανθεκτικό σε σύγκριση με ορμόνες αφελής οστικές μεταστάσεις

επίπεδα έκφρασης γονιδίων των βασικών ενζύμων που εμπλέκονται στο σχηματισμό της τεστοστερόνης και DHT από χοληστερόλη (σχήμα 1) εκτιμήθηκαν με ανάλυση RT-PCR του ΗΝ (n = 9) και CRPC οστικές μεταστάσεις (n = 45) σε σύγκριση με το πρωτογενές προστάτη περιφερειακή ζώνη όγκου (n = 13) και μη-κακοήθεις ιστούς του προστάτη (n = 13).

Ένζυμα με σημαντικά υψηλότερα επίπεδα mRNA που παρατηρείται σε οστικές μεταστάσεις από ότι σε μη-κακοήθη και /ή κακοήθη ιστό προστάτη εμφανίζονται με έντονη γραφή και τα ένζυμα με σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα παρατηρούνται σε οστικές μεταστάσεις φαίνεται στο

πλάγιους

. Τα στεροειδή που εκκρίνεται από τα επινεφρίδια τονίζονται με γκρι χρώμα.

Η

Κανένας από τους αναλύθηκαν ενζύμων στην οδό στεροειδογένεση (Σχήμα 1 και 2) έδειξε σημαντικά διαφορετικά επίπεδα έκφρασης του mRNA μεταξύ ΗΝ και CRPC οστικές μεταστάσεις (για σύγκριση μεταξύ μεταστάσεις και προστατικού ιστού βλέπε παρακάτω). Η μεταβλητότητα μεταξύ διαφορετικών CRPC μεταστάσεις ήταν ωστόσο μεγάλα και τα άτομα με ιδιαίτερα υψηλή έκφραση ειδικών στερεοειδογόνο ένζυμα παρατηρήθηκαν στην ομάδα CRPC (Σχήμα 2).

Όλα τα επίπεδα mRNA διορθώθηκαν για τα επίπεδα mRNA του γονιδίου housekeeping RPL13A και κανονικοποιήθηκαν προς τη μέση τιμή των δειγμάτων πρωτογενούς όγκου. * P & lt? 0,05. ** P & lt? 0,01, *** P & lt? 0.001. Ανοικτοί κύκλοι δείχνουν ακραίες τιμές και τις ακραίες. Χ δείχνει ακραία επίπεδα έξω από την κλίμακα.

Η

οστικές μεταστάσεις του καρκίνου του προστάτη μπορούν να μετατρέψουν αδύναμα κυκλοφορούντων ανδρογόνων σε πιο ισχυρός αυτά, αλλά μάλλον έχουν χαμηλή γενική ικανότητα de-novo στεροειδογένεση

επίπεδα Αντίγραφο της ένζυμα στα πρώιμα στάδια της στεροειδογένεσης μειώθηκαν σε ΗΝ και CRPC οστικές μεταστάσεις, σε σύγκριση με μη-κακοήθη ιστό προστάτη (Σχήμα 2)? διάμεσος CYP11A1, τα επίπεδα CYP17A1, και HSD3B2 mRNA ήταν 0,15, 0,29, και 0,32 φορές σε ΗΝ και 0,14, 0,32, και 0,31 φορές σε CRPC οστικές μεταστάσεις σε σύγκριση με τα επίπεδα σε μη κακοήθη ιστό προστάτη (Ρ = 0.004, 0.025 και 0.071, και Ρ = 0,00004, 0,019 και 0,01, αντίστοιχα). Το μεσαίο επίπεδο του mRNA CYP11A1 στις CRPC μεταστάσεις ήταν 0,41 φορές σε σχέση με το επίπεδο στον ιστό πρωτοπαθούς όγκου (Ρ = 0,011, σχήμα 2), ενώ η CYP17A1 και τα επίπεδα HSD3B2 mRNA σε CRPC οστικές μεταστάσεις δεν ήταν σημαντικά διαφορετικές από τα επίπεδα του πρωτογενούς ιστού όγκου. Ωστόσο, τα επίπεδα CYP11A1 mRNA συσχετίστηκαν με το αντίστοιχο CYP17A1, τα επίπεδα HSD3B2, SRD5A1 και SRD5A2 mRNA στα CRPC μεταστάσεις (Rs = 0,80, P & lt? 0,000001, Rs = 0.740, P & lt? 0,000001, Rs = 0,53, P & lt? 0,0002, και Rs = 0.70, Ρ & lt?. 0.000001), υποδεικνύοντας ότι τα πρώιμα στάδια της στεροειδογένεσης μπορεί να είναι ενεργή σε μεμονωμένες μεταστάσεις

επίπεδα μεταγραφής πολλών ενζύμων που εμπλέκονται σε μεταγενέστερες βαθμίδες της σύνθεσης ανδρογόνων αυξήθηκαν σε μεταστάσεις σε σύγκριση με μη κακοήθη του προστάτη και πρωτογενείς ιστό του όγκου (Σχήμα 2). Η διάμεση AKR1C3 και τα επίπεδα AKR1C2 mRNA ήταν 5,5 και 5,4 φορές υψηλότερη σε ΗΝ (Ρ = 0,03, Ρ = 0,007) και 3,7 και 5,8 φορές υψηλότερη σε CRPC οστικές μεταστάσεις (Ρ = 0,0006, Ρ = 0,00008), αντίστοιχα, σε σύγκριση με πρωτογενή όγκων του προστάτη. Παρατηρήσαμε μια μετατόπιση από SRD5A2 προς έκφραση SRD5A1 mRNA με εξέλιξη από μη κακοήθεις του προστάτη σε PC και PC μετάσταση (Σχήμα 2), η οποία είναι σύμφωνη με τα αποτελέσματα προηγούμενων μελετών [14], [15], [19]. Μια παρόμοια μετάβαση από πρωτίστως HSD17B6 έκφραση σε μη-κακοήθη και πρωτογενούς ιστού του όγκου του προστάτη να υλοποιηθεί κυρίως HSD17B10 σε μεταστάσεις PC Επιπλέον, διαπιστώθηκε (Σχήμα 2). Τα επίπεδα AKR1C3 mRNA συσχετίζονταν σημαντικά με την AKR1C2 και τα επίπεδα UGT2B15 mRNA (Rs = 0,39, P = 0,008 και Rs = 0,49, P = 0,001).

Όλα μαζί αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι οι οστικές μεταστάσεις PC σε ασθενείς μπορεί να ώθησαν την ικανότητα να μετατρέπει τα ανδρογόνα με χαμηλή συγγένεια AR σε πιο ισχυρά ανδρογόνα, ενώ

de novo

σύνθεση των ανδρογόνων από χοληστερόλη είναι λιγότερο πιθανό.

Ορισμένες οστικές μεταστάσεις εκφράζουν πολύ υψηλά επίπεδα AKR1C3

Αν και κανένας από τους εξετάστηκαν στερεοειδογόνο ένζυμα έδειξαν σημαντικά αυξημένα επίπεδα έκφρασης σε σύγκριση με CRPC ΗΝ οστικές μεταστάσεις, οι μεμονωμένες CRPC μεταστάσεις παρατηρήθηκε ότι εκφράζουν πολύ υψηλά επίπεδα μεταγραφής (Σχήμα 2). Ένα ένζυμο που δείχνει ιδιαίτερα υψηλά επίπεδα του mRNA σε μια υποομάδα CRPC μεταστάσεων ήταν AKR1C3. Καθώς το ένζυμο αυτό έχει την ικανότητα να μετατρέπει κυκλοφορούν DHEA και ανδροστενεδιόνη (συντίθεται στα επινεφρίδια) σε 5-androstenediol και τεστοστερόνης, θεωρήθηκε ότι είναι ιδιαίτερου ενδιαφέροντος.

Για να καθοριστεί εάν τα επίπεδα AKR1C3 mRNA στις μεταστάσεις αντανακλώνται στα αντίστοιχα επίπεδα πρωτεΐνης, εκτιμήσαμε την πρωτεϊνική έκφραση AKR1C3 με ανοσοϊστοχημεία και με τη χρήση ενός συστήματος βαθμολόγησης που έλαβε τόσο ένταση και την κατανομή χρώσης υπόψη (Σχήμα 3). Κυτταροπλασματική AKR1C3 ανοσοχρώση καταδείχθηκε στα περισσότερα επιθηλιακά κύτταρα του όγκου, ενώ η πυρηνική χρώση ήταν ετερογενή παρατηρούμενη και δεν σκόραρε. Όλες οι μεταστάσεις έδειξαν ισχυρή θετική χρώση στα ενδοθηλιακά κύτταρα, ενώ παρατηρήθηκε μεταβλητή χρώση σε ινοβλάστες και αιμοποιητικών κυττάρων στο μυελό των οστών. Η AKR1C3 ανοσοχρώσης συνολική βαθμολογία είχε υψηλή συσχέτιση με τα επίπεδα AKR1C3 mRNA στα αντίστοιχα μεταστάσεις (Rs = 0,73, P & lt? 0,000001, n = 51). έκφραση υψηλού AKR1C3 δεν οφειλόταν σε γονιδιακή ενίσχυση AKR1C3, σύμφωνα με AKR1C3 ανάλυση αριθμού αντιγράφων του γονιδίου 6 δειγμάτων μεταστάσεων (3 δείγματα με ακραία επίπεδα AKR1C3 mRNA και συνολικές βαθμολογίες ανοσοχρώση 12 και 3 δείγματα με χαμηλή έκφραση AKR1C3) σε σχέση με 2 μη δείγματα κακοήθους προστάτη (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Μια συνολική βαθμολογία (που κυμαίνονται 0-12) λήφθηκε πολλαπλασιάζοντας το σκορ ένταση χρώσης (0-3) στον όγκο επιθηλιακά κύτταρα με το σκορ θετικό κλάσμα (1 -4). (Α) Ιστόγραμμα σύμφωνα με την συνολική βαθμολογία χρώση AKR1C3 στην ορμόνη-αφελή (γκρι) και τον ευνουχισμό ανθεκτικά μεταστάσεις (μαύρο) των οστών. (Β) Εκπρόσωπος τμήμα των οστικών μεταστάσεων με AKR1C3 συνολική βαθμολογία 0. (γ) Εκπρόσωπος τμήμα της μετάστασης οστών με AKR1C3 συνολική βαθμολογία 12. Bar δείχνει 100 μΜ.

Η

Στα CRPC οστικές μεταστάσεις, το AKR1C3 συνολική βαθμολογία χρώσης συσχετίστηκε με τα επίπεδα UGT2B15 mRNA (Rs = 0,39, Ρ = 0,009, η = 43), το οποίο θα μπορούσε να αναφέρει παραγωγή DHT σε μεταστάσεις με έκφραση πρωτεΐνης υψηλής AKR1C3. Ήταν όμως προφανές ότι η έκφραση της πρωτεΐνης υψηλής AKR1C3 δεν συνδέονται άμεσα με την υψηλή δραστηριότητα AR σε CRPC μεταστάσεις? 14 από τα 18 (78%) δείγματα με βαθμολογία χρώση υψηλή AKR1C3, ορίζεται ως AKR1C3 ανοσοχρώση βαθμολογία πάνω μεσαίο (6), και 15/25 (60%) δείγματα με βαθμολογία χρώση χαμηλή AKR1C3 (≤6) έδειξε υψηλή χρώση των πυρηνικών AR βαθμολογίες (≥8, πάνω διάμεσος, όπως ορίζεται στο [5], P = 0,22). Σύμφωνα με τα προηγούμενα αποτελέσματα [5], η υψηλή ανοσοχρώση AR στις μεταστάσεις σχετίστηκε με μικρότερη ειδική για τον καρκίνο επιβίωση μετά μετάσταση χειρουργική επέμβαση (log-rank = 8.1, Ρ = 0.004, η = 45). Σε αντίθεση με αυτό, δεν υπήρχε συσχέτιση βρέθηκε μεταξύ του ανοσοχρώσης AKR1C3 και ειδική για τον καρκίνο επιβίωση των CRPC ασθενών μετά από χειρουργική επέμβαση μετάσταση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Επίσης δεν υπήρχε συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ της AKR1C3 ανοσοχρώση σκορ και το σκορ χρώση PSA (τα δεδομένα δεν φαίνονται) ή ο δείκτης πολλαπλασιασμού των κυττάρων του όγκου (Ki67 σκορ χρώση, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Έκφραση στερεοειδογόνο ενζύμων σε σχέση με το τα επίπεδα της συναρμογής των υποδοχέων των ανδρογόνων παραλλαγές

Το AR επίπεδα πρωτεΐνης μελετήθηκαν με ανάλυση ανοσοαποτύπωσης της 29ης CRPC οστικές μεταστάσεις επιλέγονται με βάση τα αποτελέσματα AR ανοσοϊστοχημεία να συμπεριλάβει AR χαμηλή προς AR μεταστάσεις υψηλή βαθμολογία, και όπου παρέχεται επαρκής ιστός παρέμεινε για να επιτρέψει ανοσοαποτύπωση ανάλυση. Το πλήρες μήκος του AR κατά προσέγγιση 110 kDa ανιχνεύτηκε στις περισσότερες περιπτώσεις, ενώ κόλουρου AR-Vs περίπου 80 kDa, υπέθεσε ότι αντιπροσωπεύει AR παραλλαγές ματίσματος που στερείται της LBD C-τερματικό πεδίο, ανιχνεύτηκαν σε ορισμένες περιπτώσεις (Σχήμα 4). Η ένταση του 80 kDa ζώνης ήταν έντονα συσχετίζεται με αντίστοιχο επίπεδο AR-V7 mRNA (Rs = 0.76, Ρ & lt? 0,000002, δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), σύμφωνα με τις δικές προηγούμενα αποτελέσματα [8]. Σε Hornberg et al [8] ασθενείς με υψηλά επίπεδα μετάσταση του AR-V7 mRNA, ορίζεται να έχουν επίπεδα mRNA στο ανώτερο τεταρτημόριο, βρέθηκαν να έχουν εξαιρετικά φτωχή πρόγνωση. Με βάση αυτή τη γνώση, και χρησιμοποιώντας μια παρόμοια προσέγγιση, 7 δείγματα αναλύθηκαν με ανοσοστύπωση ορίστηκαν να εκφράζουν υψηλά επίπεδα του AR-Vs ως ο λόγος μεταξύ των εντάσεων των 80 και των ζωνών 110 kDa βρέθηκαν εντός του 75

ου εκατοστημόριο των δεδομένων (≥0.5).

η ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα που στοχεύει το Ν-τερματικό πεδίο της AR. Το εκχύλισμα των κυττάρων 22Rv1 συμπεριλήφθηκε ως θετικός μάρτυρας.

Η

Είναι ενδιαφέρον, μόνο ένας στους 13 (7,8%) CRPC μεταστάσεις με υψηλή έκφραση AKR1C3 (ανοσοχρώση βαθμολογία πάνω από διάμεση τιμή) έδειξε επίσης πρωτεΐνη υψηλής AR-V επίπεδα. Αυτό ήταν ένα σημαντικά χαμηλότερο κλάσμα από βρεθεί μεταξύ μεταστάσεις με χαμηλά επίπεδα AKR1C3 (6/15, 40%, Ρ = 0,049). Υποθέσαμε επίσης ότι καρκινικών κυττάρων έκφραση AKR1C3 και μόνιμα ενεργές παραλλαγές AR θα μπορούσε να έχει σημασία για την ατομική ανταπόκριση του όγκου σε 2

ου γραμμή ADT και κλινική πρόοδο [8], και οι 28 οστικές μεταστάσεις αξιολογούνται τόσο για AKR1C3 και AR-V ως εκ τούτου, η έκφραση χωρίστηκαν ανάλογα με τους AR-V και τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης AKR1C3, όπως φαίνεται στο Σχήμα 5, προκειμένου να αποδείξει υπο-ομάδες των πιθανή κλινική σημασία.

Υψηλά επίπεδα AKR1C3 ήταν βασικά βρέθηκαν σε μεταστάσεις με χαμηλή επίπεδα AR-Vs και αντίστροφα (P = 0,049, σύμφωνα με το Chi-square test).

Η

Αξίζει να σημειωθεί ότι καμία από τις μεταστάσεις με ομοιογενή χρώση AKR1C3, δηλαδή κλάσμα των θετικά χρωματισμένων κυττάρων άνω του 75% , έδειξαν υψηλά επίπεδα AR-V σε σύγκριση με 7/15 μεταστάσεις με & lt? 75% θετικά χρωματισμένα κύτταρα (P = 0,004). Η παρατήρηση αυτή αξίζει να εξεταστεί περαιτέρω, όπως θα μπορούσε να αναφέρει ότι τα υψηλά επίπεδα AR-V που προκαλείται προτιμότερο σε όγκους κύτταρα χωρίς ενδογενή στεροειδογένεση. Δυστυχώς, δεν ήμασταν σε θέση να μελετήσει αυτό υπέθεσαν ετερογένεια μεταξύ των κυττάρων του όγκου, όπως αντισώματα για την ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση των AR-Vs δεν ήταν διαθέσιμα.

Συζήτηση

ενδονεοπλαστική σύνθεση της τεστοστερόνης και DHT έχει πρότεινε να συμβάλουν στην ανάπτυξη CRPC. Στην παρούσα μελέτη συγκρίναμε τα επίπεδα έκφρασης των ενζύμων σε στερεοειδογόνο CRPC οστικές μεταστάσεις, με επίπεδα σε μεταστάσεις που λαμβάνονται από ασθενείς un-θεραπεία και, αναπάντεχα, δεν διαπίστωσε επαγωγή των ενζύμων σε εξετάστηκαν CRPC σύγκριση με μεταστάσεις ΗΝ. Εμείς όμως βρέθηκαν υψηλά επίπεδα έκφρασης ορισμένων στερεοειδογόνο ένζυμα? SRD5A1, AKR1C2, AKR1C3, και HSD17B10, σε οστικές μεταστάσεις, σε σύγκριση με μη κακοήθη προστάτη και καρκινικό ιστό πρωτογενούς προστάτη. Επιπλέον, ήμασταν σε θέση να δείξει σαφείς διαφορές στα επίπεδα έκφρασης της AKR1C3 και τα επίπεδα των παραλλαγών ματίσματος AR σε μεμονωμένες περιπτώσεις CRPC οστικές μεταστάσεις, η οποία υποθέτουμε θα μπορούσε να έχει σημασία για την απάντηση του ασθενούς σε 2

ου θεραπείες γραμμή.

ανδρογόνα ιστού μπορεί να προέρχεται από το

de novo σύνθεση

από χοληστερόλη [20], [21] ή με μετατροπή των επινεφριδίων προδρόμων σε πιο ισχυρά στεροειδή [22]. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν γενικά υψηλά επίπεδα AKR1C3 και SRD5A1 σε μεταστάσεις είναι σύμφωνη με προηγούμενες εκθέσεις [14], [15], [16] και μπορεί να αναφέρει τη σύνθεση της τεστοστερόνης και DHT σε ένα και δύο βήματα, αντίστοιχα, από το επινεφριδίων που προέρχονται από ανδροστενεδιόνη . Από τη δραστηριότητα των SRD5A1, DHT μπορούσε επίσης να συντεθούν μέσω 5α-αναγωγή της ανδροστενεδιόνης σε ανδροστανοδιόνη και στη συνέχεια με περαιτέρω μείωση του ανδροστανοδιόνη σε DHT με AKR1C3. Αυτή η διαδρομή για σύνθεση DHT, η οποία παρακάμπτει την τεστοστερόνη, δείχθηκε πρόσφατα από τον Chang και τους συνεργάτες του να κυριαρχήσει σε CRPC κυτταρικές σειρές όπως επίσης και σε μεταστάσεις δειγμάτων ασθενούς διεγείρονται με ανδροστενεδιόνη [23]. Επιπλέον, τα υψηλά επίπεδα AKR1C2 και HSD17B10 κάνουν σύνθεση DHT μέσω ανδροστερόνη και ανδροστανοδιόλης δυνατόν σε μεμονωμένες περιπτώσεις, παρόμοια με αυτό που έχει παρατηρηθεί σε κυτταρικές σειρές PC καθώς και σε ευνουχισμός ανθεκτικά ξενομοσχεύματα CWR22R σε ποντικούς [24]. Ενδονεοπλαστική σύνθεση ανδροστερόνης και ανδροστανοδιόλης θα μπορούσαν να διεγείρουν την ανάπτυξη του όγκου, όχι μόνο ως ενδιάμεσο στεροειδή σε σύνθεση DHT, αλλά επίσης ως ισχυροί ενεργοποιητές AR σε περιπτώσεις με μεταλλαγμένη ΑΕ [25]. Ομοίως θα μπορούσε να ανδροστενοδιόλη, presumingly που παράγονται από την DHEA σε μεταστάσεις με δραστηριότητα AKR1C3, ενεργοποιήστε ΑΕ με συγκεκριμένες μεταλλάξεις [26]. Σε αντίθεση με τις πρώτες αναφορές [14], [15], αλλά σύμφωνα με Hofland και τους συναδέλφους [16], βρήκαμε χαμηλά επίπεδα έκφρασης του CYP11A1, CYP17A1 και HSD3B2 στα δύο χωρίς θεραπεία και CRPC μεταστάσεις. Υψηλά επίπεδα CYP11A1, CYP17A1 και HSD3B2 mRNA ήταν αντί βρέθηκαν σε μη κακοήθη ιστό προστάτη, πιθανόν λόγω της υψηλής σύνθεση αυτών των ενζύμων σε φυσιολογικά στρωματικά κύτταρα προστάτη, και το ίδιο ίσχυε για SRD5A2 και HSD17B6 [27], [28], [ ,,,0],29], [30]. Από αυτό θα θέλαμε να συμπεράνουμε ότι τα ανδρογόνα των επινεφριδίων που προέρχονται συμβάλει πιθανότατα στην αύξηση των CRPC οστικές μεταστάσεις από ενδο-μεταστατικό μετατροπή τους σε πιο ισχυρά ανδρογόνα, ενώ

de novo

σύνθεση των ανδρογόνων από χοληστερόλη μέσα μεταστάσεις είναι λιγότερο πιθανό , εκτός ίσως σε μεμονωμένες περιπτώσεις με συσχετισμένη έκφραση CYP11A1, CYP17A1 και HSD3B2.

Βρήκαμε υψηλά επίπεδα έκφρασης της AKR1C3 σε μια υπο-ομάδα των οστικών μεταστάσεων PC, τα οποία επιβεβαιώνουν τα αποτελέσματα που έχουν αναφερθεί προηγουμένως σε ευνουχισμό ανθεκτικό πρωτογενές όγκων του προστάτη [16], [31] και CRPC ιστού διαφορετικής προέλευσης μεταστατικών [14], [15], [32]. Μια αύξηση στη δραστηριότητα AKR1C3 θα μπορούσε προφανώς να συμβάλλει στην μετατροπή των στεροειδών επινεφριδίων προερχόμενων σε πιο ισχυρή AR συνδέτες, όπως συζητήθηκε παραπάνω, και να AR ενεργοποίησης CRPC. Ομοίως, Hamid και συνεργάτες απέδειξαν AKR1C3 εξαρτώμενη σύνθεση της τεστοστερόνης σε CRPC κύτταρα διεγερμένα με DHEA [31]. Ευεργετικά αποτελέσματα των υψηλών επιπέδων AKR1C3 σε μεταστάσεις ΗΝ ή σε μεταστάσεις με χαμηλή ανοσοχρώση πυρηνική AR, όπως αποδεικνύεται για ορισμένες περιπτώσεις σε αυτή τη μελέτη, είναι λιγότερο σαφείς, αλλά μπορεί να εξαρτάται από άλλες αντιδράσεις οδηγείται από αυτό το ένζυμο. Εκτός από την 17β-υδροξυστεροειδούς αφυδρογονάσης (17β-HSD) AKR1C3 δραστηριότητα έχει επίσης προσταγλανδίνης F (ΤΕΣ) συνθάσης δραστηριότητα η οποία θα οδηγούσε σε πολλαπλασιασμό σε κύτταρα PC ανεξάρτητη από ανδρογόνο και την κατάσταση AR λόγω του σχηματισμού PGF επιμερών και ενεργοποίηση του υποδοχέα FP και επίσης, από την πρόληψη του σχηματισμού PGJ2 και pro-διαφοροποίηση και αντι-πολλαπλασιαστικές επιδράσεις της [33].

Εν κατακλείδι, θέλουμε να τονίσουμε ότι η αυξημένη έκφραση του όγκου των στερεοειδογόνο ενζύμων σε μεμονωμένους ασθενείς δεν συνδέεται σαφώς με CRPC αλλά απλώς συνδέονται με προχωρημένο στάδιο του όγκου, όπως μπορεί να δει κανείς όχι μόνο σε CRPC ιστού διαφορετικής προέλευσης [14], [15], [16], [31], [32], αλλά και στην προηγουμένως un-θεραπεία, ΗΝ, οστικές μεταστάσεις (αυτή η μελέτη). Επιπλέον, αυτή η μελέτη μαζί με τις προηγούμενες μελέτες δείχνουν ότι η CRPC όγκοι θα μπορούσαν να ταξινομηθούν σύμφωνα με διακριτά πρότυπα έκφρασης στεροειδογόνων ενζύμων, και έτσι πιθανώς διαφορετικών μηχανισμών πίσω ευνουχισμό-αντίστασης (αυτή τη μελέτη και [16], [32], [34]). Εμείς επιπλέον δείχνουν ότι η υπο-ομάδα των CRPC οστικές μεταστάσεις εκφράζουν υψηλά επίπεδα AKR1C3 είναι σε μεγάλο βαθμό διαφορετική από την υπο-ομάδα που εκφράζουν υψηλά επίπεδα LBD-περικοπεί, ουσιαστικά δραστική AR-Vs. Η πιθανή κλινική σημασία αυτού είναι ότι οι ασθενείς με υψηλή έκφραση AKR1C3 και έκφραση χαμηλού AR-V μπορεί να είναι ασθενείς που εμφανίζουν καλή ανταπόκριση στη θεραπεία με οξική αμπιρατερόνη (αναστολή CYP17, [35]) και /ή θα ωφεληθεί από φάρμακα που στοχεύουν AKR1C3 [36] , ενώ οι ασθενείς με υψηλή έκφραση μόνιμα ενεργών AR-Vs πιθανότατα δεν θα ανταποκριθεί σε οξικό αμπιρατερόνη ή σε οποιαδήποτε θεραπεία με στόχο τη σύνθεση ανδρογόνων ή το LBD του AR.

Ένας περιορισμός σε αυτό το έργο είναι ο περιορισμένος αριθμός των οστών μεταστάσεις, και επιπλέον το μόνο δείγμα μετάσταση εξετάζονται από κάθε ασθενή, η οποία προφανώς κάνουν συμπεράσματα σχετικά με αυτή την ετερογενή νόσου και τη γενική κατάσταση του ασθενούς αβέβαιο. Γνωρίζουμε επίσης ότι τα επίπεδα έκφρασης δεν απηχούν κατ ‘ανάγκη βιολογικές δραστηριότητες και υπόθεσή μας ότι πρότυπο έκφρασης του όγκου των στερεοειδογόνο AKR1C3 και ουσιαστικά δραστική AR παραλλαγές θα προβλέψουν την ανταπόκριση στην 2

ου θεραπείες γραμμή CRPC πρέπει να ελεγχθεί εκ των προτέρων σε κλινικές μελέτες.

Υποστήριξη Πληροφορίες

πίνακα S1.

Primer ακολουθίες που χρησιμοποιούνται για την ανάλυση σε πραγματικό χρόνο RT-PCR

doi:. 10.1371 /journal.pone.0077407.s001

(DOC)

Ευχαριστίες

Οι επιδέξιοι τεχνικά συνδρομή που παρέχεται από την κα Pernilla Andersson, Elisabeth Dahlberg, Μπριγκίτα Ekblom, και Inger Lindström.