Αφηρημένο

Ιστορικό

Τα στοιχεία δείχνουν μια σύγχυση επίδραση της αναντιστοιχίας επισκευής (MMR) σχετικά με την κατάσταση ανοσολογικής απόκρισης σε καρκίνο του παχέος εντέρου. Η αναγνώριση της έμφυτης και της προσαρμοστικής κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος, που μπορεί να συμπληρώσει την καθιερωμένη προγνωστική επίδραση των CD8 σε ασθενείς με MMR-καλά του παχέος εντέρου, που αντιπροσωπεύουν το 85% του συνόλου των περιπτώσεων, δεν έχει πραγματοποιηθεί.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

καρκίνους του παχέος εντέρου από μια δοκιμή (n = 1197) και εξωτερική επικύρωση (n = 209), ομάδα της MMR-καλά του παχέος εντέρου ήταν τοποθετημένα σε εφάπαξ και πολλαπλές μικροσυστοιχίες γροθιά ιστού. Ανοσοϊστοχημική ποσοτικοποίηση (0-3) πραγματοποιήθηκε για CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD68, CD163, FoxP3, GranzymeB, iNOS, μαστοκυττάρων τρυπτάσης, MUM1, PD1 και TIA-1 που διηθούν όγκο (TILs) αντιδραστικά κύτταρα. Διεξήχθησαν πειράματα Συνέκφραση σε φρέσκα δείγματα ορθοκολικού καρκίνου χρησιμοποιώντας ειδικούς δείκτες κυτταρικού πληθυσμού. Στην ομάδα δοκιμής, μεγαλύτεροι αριθμοί CD3 + (ρ & lt? 0.001), CD4 + (p = 0,029), CD8 + (ρ & lt? 0.001), CD45RO + (p = 0,048), FoxP3 + (ρ & lt? 0.001), GranzymeB + (ρ & lt? 0.001), iNOS + (p = 0,035), MUM1 + (p = 0,014), PD1 + (p = 0,034) και TIA-1 + TILs (p & lt? 0.001) συνδέθηκαν με ευνοϊκό αποτέλεσμα. Ρύθμιση για την ηλικία, το φύλο, το στάδιο TNM και μετεγχειρητικής θεραπείας, υψηλότερα CD8 + (p & lt? 0.001? HR (95% CI): 0,66 (0,64 – 0,68)) και TIA-1 + (ρ & lt? 0.001? HR (95% CI ): 0,56 (0,5-0,6)) ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες. Επιπλέον, μεταξύ των ασθενών με CD8 + διηθήσεις, TIA-1 περαιτέρω στρωματοποιημένη 355 (35,6%) των ασθενών σε προγνωστικές υποομάδες (p & lt? 0.001? HR (95% CI): 0.89 (95% CI: 0,8-0,9)). Τα αποτελέσματα αυτά επιβεβαιώθηκαν από την ομάδα επικύρωσης (p = 0,006). ΤΙΑ-1 + κυττάρων ήταν ως επί το πλείστον CD8 + (57%), αλλά και βάφτηκαν για TCRγδ (22%), CD66b (13%) και μόνο σπάνια για CD4 +, τα μακροφάγα και ΝΚ κυττάρων δεικτών.

Συμπεράσματα

TIA-1 προσθέτει προγνωστικές πληροφορίες για το στάδιο TNM και επικουρική θεραπεία σε ασθενείς με MMR-καλά καρκίνο του παχέος εντέρου. Η προγνωστική επίδραση των CD8 + TILs διαταράσσεται από την παρουσία της TIA-1 + το οποίο μεταφράζεται σε βελτιωμένη διαστρωμάτωση κινδύνου για περίπου το 35% όλων των ασθενών με MMR-καλά παχέος εντέρου

Παράθεση:. Zlobec Ι, Karamitopoulou Ε, Terracciano L, Piscuoglio S, Iezzi G, Muraro MG, et al. (2010) TIA-1 Τα κυτταροτοξικά Κόκκος-Associated RNA Δεσμευτική Πρωτεΐνη Βελτιώνει την προγνωστική απόδοσης των CD8 σε Ασυμφωνία Επισκευή-Έμπειρος του καρκίνου του παχέος εντέρου. PLoS ONE 5 (12): e14282. doi: 10.1371 /journal.pone.0014282

Επιμέλεια: Alfons Navarro, Πανεπιστήμιο της Βαρκελώνης, Ισπανία

Ελήφθη: 3 Ιουν, 2010? Αποδεκτές: 16 του Νοέμβρη 2010? Δημοσιεύθηκε: 10 του Δεκεμβρίου του 2010

Copyright: © 2010 Zlobec et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς χρηματοδοτήθηκαν από το Ινστιτούτο Παθολογίας, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Βασιλείας, Έρευνας λογαριασμό πισίνα. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου μπορεί να θεωρηθεί ως μια αλληλεπίδραση μεταξύ από όγκο και υποδοχής που σχετίζονται με παράγοντες [1]. Πειραματικά στοιχεία τα τελευταία 20 έτη παρέχει στήριξη για την έννοια της immunosurveilllance στον καρκίνο, εμπλέκοντας τόσο έμφυτη και προσαρμοστική ανοσολογικές αποκρίσεις [2]. Σε καρκίνο του παχέος εντέρου, έχουν CD3, CD4, CD8, CD20, Granzyme Β και FoxP3 + λεμφοκύτταρα που διηθούν όγκο (TILs) έχουν ταυτοποιηθεί ως πιθανοί δείκτες της έκβασης, ενώ ο προσδιορισμός των κυτταροτοξικών Τ-λεμφοκυττάρων, ιστιοκυττάρων και δενδριτικά κύτταρα ως παράγοντες εμφάνισης των αντι -tumor απαντήσεις υπογράμμισε νέους δρόμους για τις πιθανές ανοσοθεραπεία [3], [4], [5].

Σε καρκίνο του παχέος εντέρου, η ισορροπία μεταξύ host-και παράγοντες όγκου που σχετίζονται με εξηγείται από αναντιστοιχία επισκευή (MMR) ελλιπή ως σποραδικές περιπτώσεις, που αντιπροσωπεύουν περίπου το 15% όλων των όγκων και χαρακτηρίζεται από ελαττωματική MMR μηχανημάτων [6]. Οι ασθενείς με αυτές τις MMR ανεπάρκεια καρκίνων περιγράφονται ως έχουσες άφθονη CD8 + κυτταροτοξικών Τ-κυττάρων διεισδύσει [7] και συχνά συνδέονται με πιο «ευνοϊκή» χαρακτηριστικά του όγκου που σχετίζονται, ήτοι την παρουσία ενός πιέζει διαμόρφωση των συνόρων του όγκου, την παρουσία ενός διακριτικού μπάντα του περινεοπλασματικής φλεγμονής λεμφοκυτταρικής και λίγο όγκου εκβλάστηση, η τελευταία μία ιστομορφολογική σήμα κατατεθέν της επιθηλιακής μετάβασης μεσεγχυματικών [8]. Αυτό αστερισμό φαινοτυπική, από την «ανατροπή της κλίμακας« υπέρ μιας ισχυρής άμυνας μπορεί εν μέρει να είναι υπεύθυνη για την ευνοϊκότερη γενική πρόγνωση των ασθενών με MMR ανεπάρκεια σε σύγκριση με το MMR-καλά όγκους [9]. Είναι ενδιαφέρον ότι, παρά τη γνωστή σύγχυση επίδραση της κατάστασης MMR στις ανοσολογικές αποκρίσεις σε καρκίνο του παχέος εντέρου, συνολικές αναλύσεις των τύπων κυττάρων που εμπλέκονται στην ανοσολογική απόκριση και φλεγμονή δεν έχουν ακόμη συστηματικά πραγματοποιηθεί για MMR-καλά καρκίνων, καλύπτοντας το 85% όλων παχέος περιπτώσεων καρκίνου.

Ως εκ τούτου, ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να προσδιοριστεί η πρόσθετη προγνωστική πλεονέκτημα, πάνω από την απόδοση των CD8 μόνη της, της 12ης ιστού με βάση ανοσολογικές βιοδεικτών σε ασθενείς MMR-καλά καρκίνο του παχέος εντέρου. Αυτοί οι δείκτες πρωτεϊνών συμπεριλαμβανομένων των CD3, CD4, CD45RO, CD68, CD163, FoxP3, GranzymeB, iNOS, μαστοκυττάρων τρυπτάσης, MUM1p, PD1 και TIA-1 ήταν ειδικά επιλεγμένα για να καλύψει το ευρύτερο φάσμα των πιθανών τύπων κυττάρων που εμπλέκονται στην έμφυτη και προσαρμοστική ανοσοποιητικό απαντήσεις . Αυτό επιτεύχθηκε χρησιμοποιώντας μια αρχική ομάδα δοκιμής των 1197 ασθενών και μια εξωτερική ομάδα επικύρωσης των 209 ασθενών, αντίστοιχα, με πλήρη κλινικο-παθολογικές και την παρακολούθηση των δεδομένων.

Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

γραπτή συγκατάθεση έχει δοθεί από τους ασθενείς για τις πληροφορίες τους να αποθηκεύονται στη βάση δεδομένων του νοσοκομείου και να χρησιμοποιηθούν για την έρευνα. Η χρήση των ιστών εγκρίθηκε από τις αντίστοιχες Επιτροπές Δεοντολογίας του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου της Βασιλείας και το Πανεπιστήμιο Αθηνών. Φρέσκο ​​αποκοπεί κλινικά δείγματα που περιλαμβάνονται σε αυτή τη μελέτη συλλέχθηκαν από συναινούντων ασθενείς που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Βασιλείας.

Ομάδα Test

Οι ασθενείς και δείγμα χαρακτηριστικά.

1420 πρωτοβάθμια προ- είναι λειτουργικά χωρίς θεραπεία, οι ασθενείς μη επιλεγμένα σποραδικό καρκίνο του παχέος εντέρου αντιμετωπίζεται στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Βασιλείας μεταξύ των ετών 1987 και 1996 συμπεριλήφθηκαν στην παρούσα μελέτη. Αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η & amp? Ε) βάφονται διαφάνειες εξετάστηκαν από έναν έμπειρο γαστρεντερικό παθολόγο (Ι.Τ.) και κλινικά δεδομένα που ανακτήθηκαν από τους φακέλους των ασθενών, όπου αυτά είναι διαθέσιμα. Κλινική έκβαση ενδιαφέροντος ήταν ειδική για τον καρκίνο του χρόνου επιβίωσης. Μια μικροσυστοιχία ιστού από αυτούς τους 1420 ασθενείς κατασκευάστηκε. Από κάθε ασθενή, έναν εκπρόσωπο μπλοκ όγκου διάτρητη χρησιμοποιώντας έναν κύλινδρο ιστού 0,6 mm σε διάμετρο. Ιστός έφερε σε ένα μπλοκ παραφίνης δικαιούχου (3 × 2,5 cm) χρησιμοποιώντας ένα σπιτικό ημι-αυτόματο arrayer ιστού. 57 ιστούς από φυσιολογικούς ορθοκολικό βλεννογόνο συμπεριλήφθηκαν ως μάρτυρας.

Δοκιμασία Μέθοδοι.

Η μικροσυστοιχία ιστός ανοσοβαφή για 13 ανοσολογικών δεικτών πρωτεΐνης και των δεικτών επιδιόρθωσης αταίριαστων βάσεων. Τα πρωτόκολλα για MLH1, MSH2, MSH6, CD8 και FoxP3 έχουν περιγραφεί αλλού [10]. Εν συντομία, τα υπόλοιπα πρωτόκολλα πραγματοποιήθηκαν ως εξής: CD163? NeoMarkers, MS-1103, μονοκλωνικά, 1:40 Κιτρικό ρυθμιστικό ρΗ 6, 100 ° C, 30 ‘? CD20? Dako, M0755, μονοκλωνικά, δύο παρα δέκα Κιτρικό ρυθμιστικό ρΗ 6, 100 ° C, 30 ‘? CD4? NeoMarkers, MS-1528, μονοκλωνικά, 1:40 Κιτρικό ρυθμιστικό ρΗ 6, 100 ° C, 60 ‘? CD68? Dako, M0876, μονοκλωνικά, 1:200, Κιτρικό ρυθμιστικό ρΗ 6, 100 ° C, 15 ‘? GranzymeB? Novocastra, NCL-L-GRAN-Β, 1:10, Κιτρικό ρυθμιστικό ρΗ 6, 120 ° C, 10 ‘, iNOS? Abcam, ab15323, πολύκλωνα, 1:100 ρυθμιστικό ER1, 20 ‘, τρυπτάση κυττάρου Mast? Ντάκο, M7052, μονοκλωνικά, 1:2000, καμία ανάκτηση? Mum1? Dako, M7259, μονοκλωνικά, 1:50, Κιτρικό ρυθμιστικό ρΗ 6, 100 ° C, 30 ‘? PD1? R &? D Systems, AF1086, μονοκλωνικά δύο παρα είκοσι Κιτρικό ρυθμιστικό ρΗ 6, 120 ° C, 10 ‘? TIA-1? Immunotech, IM2550, μονοκλωνικά, 1:250, καμία ανάκτηση? CD3? Dako, μονοκλωνικά, ρυθμιστικού κιτρικού? 1:50? και Οϋ45ΚΟ? Thermo Scientific UCHL-1, μονοκλωνικό, ρυθμιστικό κιτρικού, 1:500. Αρνητικός έλεγχος ιστοί ελέγχθηκαν και υποβλήθηκε το ίδιο πρωτόκολλο με το πρωτογενές αντίσωμα παραλειφθεί.

πρωτεϊνικών δεικτών βαθμολογήθηκαν από τρεις παρατηρητές (A.L., S.P., Α.Τ.) με ανάλυση του αριθμού των θετικών κυττάρων ανά γροθιά μικροσυστοιχιών ιστού. Κανένα λογισμικό ανάλυσης εικόνας χρησιμοποιήθηκε. Ο συνολικός αριθμός των ανοσοδραστικών κυττάρων εντός του μικροπεριβάλλον του όγκου αξιολογήθηκε, ανεξάρτητα από εντοπισμού (ενδονεοπλασματική ή στρωματική). Ο συνολικός αριθμός των κυττάρων ανά γροθιά μικροσυστοιχιών ιστού δόθηκαν δεκάδες 0 όταν δεν υπάρχουν θετικά κύτταρα ήταν παρόντα, και τα σκορ 1, 2 και 3 όταν 1-10 θετικά κύτταρα, 11-50 θετικά κύτταρα και & gt? 50 θετικά κύτταρα ανά γροθιά θα μπορούσε να είναι παρατήρησε, αντίστοιχα. Για PD1 και iNOS, περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν ως την πλήρη απουσία ή παρουσία οποιωνδήποτε θετικών κυττάρων.

Ομάδα Επικύρωση

221 μη επιλεγμένα, μη συνεχόμενες ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνο που έλαβαν αγωγή στο Πανεπιστήμιο Αττικό Νοσοκομείο, Πανεπιστήμιο Αθήνα, Ελλάδα μεταξύ των ετών 2004 και 2006 συμπεριλήφθηκαν ως ανεξάρτητη ομάδα επικύρωσης. H & amp? Ε διαφάνειες εξετάστηκαν και κλινικά δεδομένα που ανακτώνται από τους φακέλους των ασθενών (Πίνακας 1). Κλινική έκβαση ενδιαφέροντος ήταν ειδική για τον καρκίνο του χρόνου επιβίωσης. Μια μικροσυστοιχία ιστού του πρωτογενούς ορθοκολικού καρκίνου εκτομές από αυτούς τους 221 ασθενείς κατασκευάστηκε. Προκειμένου να αποκλειστεί προκατάληψη λόγω πιθανών ετερογένεια του όγκου, κάθε ασθενής είχε πολλαπλά διατρήσεις ιστών και όγκων που λαμβάνονται από σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, εγκλεισμένα σε παραφίνη μπλοκ χρησιμοποιώντας έναν κύλινδρο ιστού με διάμετρο 0,6 mm, τα οποία στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε μπλοκ παραφίνης έναν παραλήπτη χρησιμοποιώντας ένα σπιτικό ημιαυτόματο arrayer ιστού. Κάθε ασθενής έπρεπε κατά μέσο όρο 4 διατρήσεις όγκου περιλαμβάνονται στην περιοχή, συμπεριλαμβανομένου του 2 από το κέντρο του όγκου και 2 από το μεταναστευτικό μέτωπο. Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε για τη μικροσυστοιχία ιστό σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που περιγράφονται παραπάνω για την ομάδα δοκιμής. Η έκφραση πρωτεΐνης αξιολογήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο βαθμολόγησης που περιγράφεται παραπάνω από έναν έμπειρο γαστρεντερικές παθολόγο (EK).

Η

Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής για φρέσκο ​​κλινικά δείγματα

Δέκα προσφάτως αφαιρεθέντες κλινικά δείγματα ήταν συλλέγονται και όγκου θραύσματα κιμάς και ενζυματικά σε πέψη προκειμένου να λάβει εναιωρήματα μονών κυττάρων. Τα κύτταρα χρωματίστηκαν με επιφάνεια ισοθειοκυανική φθορεσκεΐνη (FITC) -σημασμένου αντισώματα ειδικά για CD4, CD16 ή CD66b (BD Pharmingen, San Diego, CA) ή Τ-κυττάρων-υποδοχέα (TCR) γδ (eBioscience, La Jolla, CA) και τα μόρια με APC-επισημασμένα αντισώματα ειδικά για CD56 ή Vα24-Jα18 TCR (BD Pharmingen). Μετά την πλύση, τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με 2% φορμαλδεΰδη και στη συνέχεια κατέστησαν διαπερατά με 0,5% σαπωνίνη πριν από την ενδοκυτταρική χρώση με ΤΙΑ-1-ειδικά αντισώματα ΡΕ-επισημασμένο (Immunotech, Marseille, France).

Μελέτη

Ο σχεδιασμός της μελέτης σκιαγραφείται στο Σχήμα 1. εν συντομία, μετά τον αποκλεισμό του MMR με ανεπάρκεια περιπτώσεις από την ομάδα δοκιμής, μονοπαραγοντική ανάλυση και μοντέλα πολλαπλών μεταβλητών χρόνου επιβίωσης αξιολογήθηκαν για τον προσδιορισμό των ισχυρότερα ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτες πρωτεϊνών και συνδυασμένη αξία τους. Η ανεξάρτητη προγνωστική αξία στη συνέχεια αξιολογήθηκε σε ασθενείς MMR-καλά ορθοκολικού καρκίνου από τον Όμιλο επικύρωσης.

(Α) 1420 καρκίνων του παχέος εντέρου ήταν τοποθετημένα πάνω σε ιστικές μικροσυστοιχίες και ανοσοχρωματίστηκε για 13 δείκτες πρωτεϊνών και την επισκευή ασυμφωνία (MMR) πρωτεΐνες. MMR ανεπάρκεια όγκους αποκλείστηκαν. (Β) 221 καρκίνους του παχέος εντέρου ήταν τοποθετημένα σε μικροσυστοιχίες ιστό πολλαπλών γροθιά και ανοσοχρωματίστηκε για ανεξάρτητους προγνωστικούς παράγοντες που προσδιορίζονται στην ομάδα δοκιμών. MMR ανεπάρκεια όγκους αποκλείστηκαν από την ανάλυση και την επικύρωση των προγνωστικών αποτελεσμάτων που πραγματοποιούνται για τις υπόλοιπες 209 ασθενείς.

Η

Στατιστική Ανάλυση

Για να αποφευχθεί η προκατάληψη από διχοτομηθεί πρωτεΐνη ανοσολογική αντίδραση, οι αναλύσεις ήταν εκτελούνται από την εξέταση βαθμολογίες 0, 1, 2 και 3 [11]. Καμπύλες Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκαν για να αξιολογηθεί η επίδραση της έκφρασης της πρωτεΐνης στη συνολική ειδική για τον καρκίνο επιβίωση. Σημασία αξιολογήθηκε σε μονοπαραγοντική ανάλυση με τη δοκιμασία log-rank. Cox μοντέλα αναλογικών κινδύνων χρησιμοποιήθηκαν για να δοκιμαστεί η ταυτόχρονη επίδραση στην συνολική ειδική για τον καρκίνο επιβίωση της έκφρασης πρωτεΐνης μαζί με γνωστούς προγνωστικούς παράγοντες και την υπόθεση αναλογικών κινδύνων εξετάστηκε με αξιολόγηση της καταγραφής (-log (επιβίωση)) έναντι log του χρόνου επιβίωσης γραφικές παραστάσεις. Αντί να εκτελεί ανάλυση διάσπαση-ομάδα, όλα τα μοντέλα πολλαπλών μεταβλητών επικυρώθηκαν και 95% CI λαμβάνονται μέσω 200 bootstrapped επαναλήψεις των δεδομένων [12], [13]. Όλες οι δοκιμασίες ήταν δύο όψεων. Λείπει μεταβλητές θεωρήθηκαν να λείπει τυχαία. Δεν τεκμαίρεται έγινε μάλλον διαγραφή υπόθεση-σοφός πραγματοποιήθηκε όταν είναι απαραίτητο. Οι Ρ-τιμές που αναφέρθηκαν, χωρίς προσαρμογή για πολλαπλές διορθώσεις [14]. Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη SAS v9.1 (The SAS Institute, Cary, NC, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής).

Αποτελέσματα

Ομάδα Test

Καρκίνος-ειδική επιβίωση Ανάλυση του μονοπαραγοντική ( Σχήμα 2)

ευνοϊκότερες χρόνο επιβίωσης παρατηρήθηκε για τους ασθενείς με υψηλότερο αριθμό των CD3 + (p & lt?. 0.001), CD4 + (p = 0,029), CD8 + (p & lt? 0.001), CD45RO + (p = 0,048), FoxP3 + (p & lt? 0.001), GranzymeB + (p & lt? 0.001), iNOS + (p = 0,035), MUM + 1 (p = 0,014), PD1 + (p = 0,034) και TIA-1 + TILs (p & lt? 0.001). Αντιπροσωπευτικά μικροφωτογραφίες αυτών των δεικτών πρωτεΐνης και ανοσοδραστικά κύτταρα φαίνεται στο Σχήμα 3.

Τόνισε δείκτες είναι εκείνοι που δείχνει μια σημαντική συσχέτιση με την πρόγνωση.

Η

Α) CD3, Β) CD4, C ) CD8, D) CD45RO, E) FoxP3, F) Granzyme Β, Γ) iNOS, Η) MUM1, Ι) PD1, J) TIA-1.

Η

Καρκίνος-ειδική επιβίωση Ανάλυση του πολυμεταβλητών .

Σημαντικές δείκτες δοκιμάστηκαν σε δύο μοντέλα πολλαπλών μεταβλητών. Αξιολογήσαμε πρώτα την προγνωστική επίδραση των δεικτών προσαρμογής για τις επιδράσεις της ηλικίας κατά τη διάγνωση, το φύλο, Pt, PN, βαθμός του όγκου και η αγγειακή εισβολή. CD3 (n = 945? 434 θανάτους? P = 0,128), CD4 (n = 1.026? 491 θανάτους? P = 0,463), CD45RO (n = 866? 401 θανάτους? P = 0,181), FoxP3 (n = 1.091? 519 θάνατοι ? p = 0,185), GranzymeB (n = 987? 479 θανάτους? p = 0.091), iNOS (n = 1023? 493 θανάτους? p = 727), MUM1 (n = 1082? 516 θανάτους? p = 0.173), και PD1 (n = 1.096? 523 θανάτους? p = 0.389) δεν έδειξε επίδραση στο χρόνο επιβίωσης μετά την προσαρμογή για τις εν λόγω εγκατεστημένος προγνωστικές παραμέτρους. Σε αντίθεση, CD8 (n = 1019? 489 θανάτους? P & lt? 0.001) και TIA-1 (n = 1005? 481 θανάτους? P & lt? 0.001) διατηρείται πολύ θετική και σημαντική επίδραση τους στην έκβαση των ασθενών

. ένα μοντέλο χρόνος δεύτερη επιβίωσης (Πίνακας 2) η επίδραση των CD8 και TIA-1 και πάλι δοκιμάζεται αυτή τη φορά μαζί με την ηλικία των ασθενών κατά τη διάγνωση, το φύλο, pT, pN, μετάσταση και επικουρική θεραπεία. Τα αποτελέσματα υπογραμμίζουν μια πολύ σημαντική θετική επίδραση των δύο δεικτών: (1) CD8 + (n = 292? 75 θανάτους? HR: 0,66 (95% CI: 0,64 – 0,68) και (2) ΤΙΑ-1 + (n = 290? 82 θανάτους ? HR: 0,56 (95% CI: 0,5-0,6))

η

Χαρακτηρισμός της TIA-1-κύτταρα που εκφράζουν

Δεδομένου ότι TIA-1 υποτίθεται ως δείκτης για.. ενεργοποιημένα CD8 + Τ-κύτταρα, επαληθεύσαμε τη συνέκφραση του ΤΙΑ-1 επί CD8 + Τ κυττάρων με κυτταρομετρία ροής σε λεμφοκύτταρα που διηθούν όγκο (TILs) από 10 προσφάτως αφαιρεθέντες κλινικά δείγματα. Τα ποσοστά των συνολικών κυττάρων ΤΙΑ-1 + κυμαίνονταν από 0,86 να 6,52 (μέση :. 3.7 ± 1.6) (Σχήμα 4Α) Costaining με δείκτες ειδικούς για καθορισμένους πληθυσμούς κυττάρων επιβεβαίωσε ότι το μεγαλύτερο πληθυσμό 1 ΤΙΑ-+ κύτταρα αναπαριστάται από CD8 + Τ κύτταρα (57 ± 8%) που ακολουθήθηκε από κύτταρα TCRγδ (22 ± 10% ) και CD66b + ουδετερόφιλα (13 ± 12%). Σε αντίθεση αμελητέα ποσοστά CD4 + Τ κύτταρα, μακροφάγα (ταυτοποιείται ως κύτταρα CD16 + CD56-), κύτταρα ΝΚ (ταυτοποιείται ως CD56 + κύτταρα), και ΝΚ /Τ κύτταρα, (που εκφράζουν Va24-Ja18 TCR), παρατηρήθηκαν (Σχήμα 4 Β, C). ΤΙΑ-1 έκφραση ανιχνεύθηκε σε μια πλειοψηφία των διηθητικών CD8 + κύτταρα (64 ± 22%), ενώ το υπόλοιπο κλάσμα (35 ± 22%) ήταν ΤΙΑ-1 αρνητική (Σχήμα 4C, D).

Single κύτταρο εναιωρήματα που λαμβάνονται από προσφάτως αφαιρεθέντες δείγματα όγκου (n = 10) ήταν επιφάνεια βάφονται με FITC- ή APC-σημασμένα αντισώματα ειδικά για τους δείκτες που υποδεικνύονται επιφάνεια και ενδοκυτταρικώς χρωματίστηκαν με αντισώματα ΡΕ-επισημασμένο αντι-ΤΙΑ-1. Α) Τα ποσοστά των συνολικών 1 TIA-+ κύτταρα Β) Τα ποσοστά των CD8 + κυττάρων, τα κύτταρα TCRγδ, ουδετερόφιλα (που προσδιορίζονται ως CD66b + κύτταρα), τα CD4 + κύτταρα, τα μακροφάγα (που προσδιορίζονται ως + CD56- κύτταρα CD16), ΝΚ κύτταρα (CD16 + CD56 +) και τα κύτταρα ΝΚΤ (Vα24-Jα18 TCR +) παρατηρήθηκαν εντός περιφραγμένο κύτταρα TIA-1 +. C) Αντιπροσωπευτικά dot-plot απεικονίζει συν-έκφραση του ΤΙΑ-1 και CD8 μορίων εντός περιορισμένων λεμφοκυττάρων στο συνολικό κύτταρα που λαμβάνονται από κλινικό δείγμα. Δ) Τα ποσοστά των TIA-1 + και τα κύτταρα TIA-1- μέσα σε περιφραγμένο κύτταρα CD8 +.

Η

φαινοτυπική συνδυασμούς των CD8 /TIA-1.

επόμενο ανέλυσε τα φαινοτυπικά συχνότητες οι καρκίνοι του παχέος 1019 τόσο με αξιολογήσιμη CD8 και χρώση TIA-1. Παρατηρήθηκαν τρεις βασικούς φαινοτύπους: όγκοι αρνητικό και για τα δύο CD8 (Βαθμός 0) και ΤΙΑ-1 (Βαθμός 0) (n = 223? 21,9%), οι όγκοι θετικά για CD8 αλλά αρνητικά για ΤΙΑ-1 (n = 366? 36%) και οι όγκοι θετικά για αμφότερα τα CD8 και ΤΙΑ-1 (n = 350? 34,3%). Μόνο 80 όγκοι ήταν αρνητικά για CD8 και θετικά για ΤΙΑ-1 (7,8%). Λόγω αυτών των μικρών αριθμών, η ομάδα των αρνητικών όγκων CD8 είχε χαρακτηριστεί ως ένα ενιαίο υποομάδα ανεξάρτητα από TIA-1 έκφρασης.

Καρκίνος-ειδική ανάλυση επιβίωσης των CD8 + TILs στρωματοποιημένη κατά TIA-1.

χρονικές διαφορές επιβίωσης αναλύθηκαν για τις τρεις CD8 /ΤΙΑ-1 φαινοτύπων σε 998 ασθενείς για τους οποίους ο χρόνος επιβίωσης ήταν επίσης διαθέσιμα. Συνολικά, μια σημαντική διαφορά στην ειδική για τον καρκίνο χρόνους επιβίωσης παρατηρήθηκε μεταξύ των τριών ομάδων με τους ασθενείς με υψηλότερες ποσότητες CD8 + /ΤΙΑ-1 + TILs βιώνει το πιο ευνοϊκό αποτέλεσμα, που ακολουθείται από CD8 + /ΤΙΑ-1- περιπτώσεις και, τέλος, από CD8- ασθενείς (ρ & lt? 0,0001? Σχήμα 5). Είμαστε δίπλα εκτελούνται πολυπαραγοντική ανάλυση, συμπεριλαμβανομένης της ηλικίας προγνωστικούς παράγοντες, το φύλο, PT, βαθμίδα Ρη ΜΠ όπως επίσης και μετεγχειρητική θεραπεία και προσδιορίζεται το πρόσθετο πλεονέκτημα για τη διαστρωμάτωση των ασθενών με όγκους με τα υψηλότερα ποσά των CD8 + TILs από TIA-1. Μεταξύ των ασθενών με CD8-θετικών όγκων, ένα σχετικό κίνδυνο θανάτου από 0,89: παρατηρήθηκε για εκείνους με ταυτόχρονη ΤΙΑ-1-θετικούς όγκους (ρ & lt? 0,001? Πίνακας 2) (95% CI 0,8-0,9). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η προσθήκη του TIA-1 σε περιπτώσεις CD8-θετικότητα βελτιώνει τη διαστρωμάτωση του κινδύνου για το 35,6% (n = 355) των ασθενών.

Η

Ομάδα Επικύρωση

Ένα εξωτερικό σύνολο επικύρωσης αναλύθηκε για CD8 + και TIA-1 + TILs. Σε αυτή την ομάδα MMR-καλά καρκίνο του παχέος εντέρου, μόνο 7 ασθενείς είχαν όγκους με CD8 + /ΤΙΑ-1- TILs Στην μονοπαραγοντική ανάλυση, οι διαφορές χρόνου επιβίωσης για ασθενείς με CD8 + /ΤΙΑ-1 + TILs ήταν σημαντικά υψηλότερη σε σύγκριση με τους ασθενείς με έλλειψη CD8 + TILs (p & lt? 0,0001). Επιβίωση χρονικές διαφορές μεταξύ των ασθενών με διαφορετικές CD8 φαινότυπους /TIA-1 αξιολογήθηκαν σε πολυπαραγοντική ανάλυση με το στάδιο Pt, στάδιο PN, ρΜ και επικουρική θεραπεία. Μεταξύ των ασθενών με CD8-θετικούς όγκους, TIA-1 θετικότητα οδήγησε σε σχετικό κίνδυνο 0,79 (95% CI: 0.7-0.9). Σε σύγκριση με τους ασθενείς με ΤΙΑ-1-αρνητικών καρκίνων (p = 0,006)

συζήτηση

Τα νέα ευρήματα αυτής της μελέτης σχετικά με 1406 MMR-καλά ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνο δείχνουν κατ ‘αρχάς, ότι η αύξηση του αριθμού των TIA-1 + TILs αντιπροσωπεύουν ένα ευνοϊκό και ανεξάρτητος προγνωστικός παράμετρος και η δεύτερη ότι εκτός από CD8, TIA- 1 βελτιώνει την προγνωστική διαστρωμάτωση των ασθενών κατά 35%.

Αν και η προγνωστική σημασία των άφθονων CD8 + TILs έχει προηγουμένως καθοριστεί [3], [5], [15], [16], [17], αυτή η μελέτη πηγαίνει ένα βήμα παραπέρα για να προσδιορίσει το δείκτη TIA-1 ως ιδιαίτερα χρήσιμο προγνωστικό παράμετρος σε καρκίνο του παχέος εντέρου και ιδιαίτερα σε όγκους με εμφανή κυτταροτοξικά CD8 + TILs. ΤΙΑ-1 είναι μια κυτταροπλασματική πρωτεΐνη σύνδεσης RNA κοκκία που σχετίζονται με πληροφορίες, που εκφράζεται σε κύτταρα με κυτταρολυτικό δυναμικό, συμπεριλαμβανομένου 50-60% των CD8 + Τ-λεμφοκυττάρων [18]. ΤΙΑ-1 έχει δειχθεί ότι εμπλέκεται σε Fas απόπτωση που διαμεσολαβείται σε μία ποικιλία ανθρώπινων κακοηθειών, και να ευαισθητοποιούν τα ενδοθηλιακά κύτταρα να προ-αποπτωτικών ερεθίσματα ενώ επίσης ενισχύοντας κυτταροτοξική δραστικότητα ΝΚ κυττάρων [19], [20], [21]. Τα αποτελέσματα μας είναι σε συμφωνία με αυτά τα ευρήματα. Εδώ, δείχνουμε ότι το 64% των CD8 + TILs συν-εκφράζουν TIA-1. Επιπλέον, έχουμε προσδιορίσει ένα μικρό πληθυσμό CD8- αλλά ΤΙΑ-1 + κυττάρων που διηθούν όγκο που αντιπροσωπεύουν πληθυσμούς κυττάρων TCRγδ και ουδετερόφιλα και σε μικρότερο βαθμό CD4 + Τ κύτταρα, μακροφάγα, κύτταρα ΝΚ, και ΝΚ /Τ κυττάρων.

οι έρευνες σχετικά με τις κλινικές και προγνωστικές επιπτώσεις της TIA 1-+ λεμφοκυττάρων είναι ως επί το πλείστον περιορίζονται σε αιματολογικές κακοήθειες με τόσο ευνοϊκά όσο και τα δυσμενή αποτελέσματα που αποδίδονται στην υπερβολική έκφραση της πρωτεΐνης αυτής [22], [23]. Μόνο μια χούφτα μελέτες έχουν αξιολογήσει την έκφραση TIA-1 σε TILs σε καρκίνο του παχέος εντέρου, που αφορούν πάνω ρύθμιση σε απόπτωση και την αύξηση του αριθμού των TIA-1 + TILs στο MMR ανεπάρκεια-όγκους [24], [25]. Είναι ενδιαφέρον ότι, στο MMR-καλά περιπτώσεις μας, δεν μπορέσαμε να βρούμε οποιαδήποτε συσχέτιση μεταξύ υψηλότερους αριθμούς TIA-1 + κυττάρων και την έκφραση του όγκου του αντι-αποπτωτικό δείκτη Bcl-2, προ-αποπτωτικών δεικτών απόπτωσης παράγοντα ενεργοποίησης-1 (αΡΑΡ-1 ) και θηλαστικών Sterile20-όπως κινάση 1 (MST-1), ούτε με ρ53 ή το δείκτη πολλαπλασιασμού Κί67 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ωστόσο, δεν έχουμε μόνο την έκθεση που αυξημένους αριθμούς TIA-1 + TILs συνδέεται στενά με βελτιωμένη κλινική έκβαση, αλλά αντιπροσωπεύουν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα, σε ομάδες δοκιμών και μελετών επικύρωσης. Το πιο σημαντικό, τα αποτελέσματα μας υποδεικνύουν ότι η επίδραση του ΤΙΑ-1 επί αποτέλεσμα είναι πρόσθετο σε CD8, ένα αποτέλεσμα το οποίο έχει επιπτώσεις για το 35% όλων των ασθενών. Ως εκ τούτου, η σημαντικά πιο ευνοϊκή έκβαση των ασθενών με CD8 + /TIA-1 + TILs σε σύγκριση με τις περιπτώσεις με CD8 + /TIA-1- TILs μπορεί να είναι ενδεικτική μιας πιο αποτελεσματικής ανοσολογικής από TILs με ένα ενεργοποιημένο και άκρως κυτταροτοξική δυναμικό.

Τα αποτελέσματα της μελέτης αυτής εντοπίστηκαν επίσης και διάφορα άλλα είδη TILs μέσα στο κέντρο του όγκου, όπως έχει θετικό αντίκτυπο στην πρόγνωση, για παράδειγμα FoxP3. Η προγνωστική ρόλος των Tregs φαίνεται να διαφέρει σημαντικά από τον τύπο του όγκου πιθανώς υποδεικνύοντας απόκλιση ρόλους αυτών των κυττάρων σε έναν ιστό με τρόπο που εξαρτάται [26] – [28]. Σε καρκίνο του παχέος εντέρου, οι περισσότερες μελέτες είναι σύμφωνα με τα ευρήματά μας δείχνουν ότι ένας μεγάλος αριθμός των FoxP3 Tregs είναι ένα ευνοϊκό προγνωστικό παράγοντα για την ελεύθερη νόσου και συνολική επιβίωση χρόνο [10], [29], [30]. Ωστόσο, το αποτέλεσμα αυτό, όπως τονίστηκε εδώ, δεν φαίνεται να είναι ανεξάρτητη από CD8 +.

Αν και η μελέτη μας μπορεί να περιορίζεται από ελλιπείς κλινικές πληροφορίες, σε ορισμένες περιπτώσεις, θα μπορούσαμε ακόμα να επιβεβαιώσει την ανεξάρτητη προγνωστική επίδραση της TIA-1 και της τροποποίησης επίδραση επί CD8 σε 500 ασθενείς με πλήρη TNM και πληροφορίες θεραπείας. Η κατάσταση MMR αναλύθηκε με έκφραση των δεικτών πρωτεΐνης MLH1, MSH2 και MSH6 και όγκων μόνο με θετικότητα σε όλους τους τρεις δείκτες συμπεριλήφθηκαν σε αυτή την ανάλυση. Αυτές οι δείκτες, καθώς και ΤΙΑ-1 και CD8 χρησιμοποιούνται συνήθως σε διαγνωστικές παθολογία, οι δύο τελευταίες για τον προσδιορισμό γενεαλογία Τ-κυττάρων και υποτύπους των λεμφωμάτων στηρίζοντας έτσι την αξία τους ως αξιόπιστα ερευνητικά εργαλεία, καθώς [31], [32]. Η χρήση των TMAs δημιουργεί συχνά την ανησυχία ότι η έκφραση της πρωτεΐνης ετερογενών όγκοι δεν εκπροσωπείται επαρκώς με τη χρήση αυτής της τεχνικής. Ωστόσο, στην καθημερινή διαγνωστική εργασία, η εμφάνιση των TILs είναι γνωστό ότι είναι αρκετά ομοιογενείς και ενώ μια γροθιά όγκου του δείγματος στην ομάδα δοκιμής, η επιπλέον προσθήκη ενός ομάδα επικύρωσης με μέσο όρο 4 γροθιές του όγκου ανά όγκο του δείγματος θα πρέπει να ελαχιστοποιηθεί η προκατάληψη από πιθανή ετερογένεια του όγκου [33]. Επιπλέον, τα οφέλη της μελέτης μας από τη χρήση ομάδες δοκιμής και επικύρωσης, οι οποίοι αντιπροσωπεύουν μια ανεξάρτητη, εξωτερική υποσύνολο επικύρωση στην οποία πρωτεϊνικών δεικτών αξιολογήθηκαν από πολλούς ανεξάρτητους παθολόγους, επιβεβαιώνοντας έτσι περαιτέρω την επαναληψιμότητα του συστήματος CD8 /TIA-1 βαθμολόγησης και το αποτέλεσμα για το αποτέλεσμα.

για να συνοψίσουμε, TIA-1 είναι ένας ισχυρός προγνωστικός ανοσολογική βιοδείκτη που συμβάλλει στην κλινική έκβαση σε ασθενείς με MMR-καλά του παχέος εντέρου, ανεξάρτητα από το στάδιο TNM και επικουρική θεραπεία. Η συνδυασμένη ανάλυση των CD8 /TIA-1 προσδιορίζει μια μεγάλη υποομάδα των ασθενών, οι οποίοι επωφελούνται από τη βελτιωμένη διαστρωμάτωση κινδύνου, τα οποία θα πρέπει να βοηθούν να προσαρμόσει περισσότερο ατομική κλινική διαχείριση των ασθενών με ορθοκολικό ασθενή με καρκίνο, ενώ παρέχει μια νέα πιθανή λεωφόρο της έρευνας για την ανάπτυξη στοχευμένων ανοσοθεραπεία.