Αφηρημένο

θειοσεμικαρβαζονών (ΣΠΞ) αποτελούν μια ενδιαφέρουσα κατηγορία των υποκαταστατών που δείχνουν ένα ευρύ φάσμα βιολογικής δραστηριότητας, συμπεριλαμβανομένης της αντι-μυκητιασική, αντι-ιικές και αντικαρκινικές επιδράσεις. προηγούμενες μελέτες μας έδειξαν την ισχυρή

in vivo

αντικαρκινική δραστικότητα των νέων ΣΠΞ και την ικανότητά τους να ξεπεράσουν την αντίσταση να χρησιμοποιούνται κλινικά χημειοθεραπευτικά. Στην παρούσα μελέτη, 35 νέα ΣΠΞ από 6 διαφορετικές κατηγορίες σχεδιάστηκαν χρησιμοποιώντας ένα συνδυασμό retro-θραυσμάτων που εμφανίζονται σε άλλες ΣΠΞ. Επιπλέον, δι-υποκατάσταση στο τερματικό Ν4 άτομο, το οποίο είχε προηγουμένως εντοπιστεί να είναι κρίσιμη για ισχυρή αντικαρκινική δράση, διατηρήθηκε με την ενσωμάτωση μιας πιπεραζίνης ή μορφολίνης Ν4-based. Η αντι-πολλαπλασιαστική δραστικότητα των νέων ΣΠΞ εξετάστηκαν σε μια ποικιλία καρκινικών και φυσιολογικών κυτταρικών τύπων. Ειδικότερα, οι ενώσεις 1δ και 3γ επέδειξε τη μεγαλύτερη υπόσχεση ως παράγοντες κατά του καρκίνου με ισχυροί και επιλεκτικοί αντι-πολλαπλασιαστική δραστικότητα. Μελέτες σχέση δομής-δραστικότητας αποκάλυψε ότι οι χηλικοποιητές που χρησιμοποιούνται «μαλακό» άτομα-δότες, όπως το άζωτο και το θείο, οδήγησε σε ισχυρή αντικαρκινική δράση. Πράγματι, η

Ν

,

Ν

,

S

άτομο δότη σετ ήταν ζωτικής σημασίας για τη διαμόρφωση της οξειδοαναγωγής συγκροτήματα που δραστηριοποιούνται σιδήρου που ήταν σε θέση να προκαλέσει την οξείδωση του ασκορβικού. Αυτή η περαιτέρω υπογραμμίζει το σημαντικό ρόλο των αντιδραστικών ειδών οξυγόνου γενιάς στη μεσολάβηση ισχυρή αντικαρκινική δράση. Αξίζει να σημειωθεί ότι η μελέτη αυτή προσδιόρισε την ισχυρή και εκλεκτική αντικαρκινική δράση των 1δ και 3γ, που δικαιολογεί περαιτέρω εξέταση

Παράθεση:. SERDA Μ, Kalinowski DS, Rasko Ν, Potůčková Ε, Mrozek-Wilczkiewicz Α, Musiol R, et al. (2014) Διερεύνηση της Αντικαρκινική δράση των νέων θειοσεμικαρβαζονών που δημιουργούνται μέσω του συνδυασμού των Retro-Τμήματα: Διαχωρισμός των κρίσιμων σχέσεις δομής-δραστικότητας. PLoS ONE 9 (10): e110291. doi: 10.1371 /journal.pone.0110291

Επιμέλεια: Ashley Ι Μπους, του Πανεπιστημίου της Μελβούρνης, Αυστραλία

Ελήφθη: 7 Αύγ του 2014? Αποδεκτές: 10, Σεπτεμβρίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 16 Οκτωβρίου 2014

Copyright: © 2014 SERDA et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι μέσα στο χαρτί και Υποστήριξη αρχείο πληροφοριών της

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς εκτίμησαν την οικονομική στήριξη της Twing και DoktoRIS υποτροφιών PhD, NCN (DEC-2011/01 /N /ΝΖ4 /01166, 2013 /09 /Β /ΝΖ7 /00423 και N405 /068.440), και το Εθνικό Κέντρο Έρευνας και Ανάπτυξης, Βαρσοβία (ORGANOMET Δεν: PBS2 /A5 /40/2014 επιχορηγήσεις). Το έργο αυτό υποστηρίζεται επίσης από την επιχορήγηση του έργου από το Εθνικό Σύστημα Υγείας και Ιατρικής Συμβούλιο Έρευνας (NHMRC) της Αυστραλίας για την ΜΚΚ [Grant 632778]? και DSK [Grant 1048972]? ένα NHMRC Senior Principal Research Fellowship στο ΜΚΚ [Grant 571123]? και η Ελένη και ο Robert Ellis υποτροφία στο DSK από το Ίδρυμα Σίδνεϊ Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου του Σίδνεϊ. ΕΚ και TS εκτιμήσουν επίσης την υποστήριξη του Ιδρύματος Τσεχίας Επιστήμη Grant [13-15008S]. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο σίδηρος είναι ένα απαραίτητο στοιχείο που είναι απαραίτητο για μια σειρά κυτταρικών διεργασιών, όπως ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός [1], [2], [3]. Στην πραγματικότητα, το ένζυμο που περιέχουν σίδηρο, ριβονουκλεοτιδίου redutase, εμπλέκεται στην περιοριστικό του ρυθμού στάδιο της σύνθεσης του DNA και είναι υπεύθυνο για τη μετατροπή των ριβονουκλεοτιδίων με τους ομολόγους δεοξυριβονουκλεοτιδίου τους [4], [5]. Είναι σημαντικό ότι, οι μεταβολές στο μεταβολισμό του σιδήρου των καρκινικών κυττάρων σε σχέση με τους αντίστοιχους φυσιολογικούς ανέδειξαν τον ενδεχόμενο της θεραπείας αποσιδήρωσης να ενεργεί ως νέου λεωφόρος θεραπεία. Τα καρκινικά κύτταρα επιδεικνύουν μια υψηλότερη απαίτηση για το σίδηρο από τα φυσιολογικά κύτταρα και αυτό τονίζεται από την αυξημένη έκφραση του υποδοχέα τρανσφερίνης 1 (TfR1), που καταλαμβάνει σιδήρου από την πρωτεΐνη μεταφοράς σιδήρου, τρανσφερίνης (Tf), στην επιφάνεια των κυττάρων [6] , [7], [8]. Επιπλέον, η έκφραση του σιδήρου-εξαρτώμενο ένζυμο, αναγωγάση ριβονουκλεοτιδίου, είναι σημαντικά υψηλότερο σε καρκινικά κύτταρα από τα φυσιολογικά κύτταρα [9]. Αυτοί οι παράγοντες καθιστούν τα καρκινικά κύτταρα πιο ευαίσθητα σε αποσιδήρωσης

Αν και χηλικές ενώσεις σιδήρου (

π.χ.

, δεσφερριοξαμίνη? DFO). Έχουν χρησιμοποιηθεί κλινικά για τη θεραπεία της νόσου υπερφόρτωσης σιδήρου [1], [3 ], τα νέα θειοημικαρβαζόνη (TSC) χηλικοποιητές έχουν ευρέως διερευνηθεί ως δυνάμει αντι-καρκινικοί παράγοντες [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20], [21]. Αν και οι μοριακοί μηχανισμοί που εμπλέκονται στη δραστηριότητα του ΣΠΞ δεν έχουν πλήρως διευκρινιστεί, ένας αριθμός των τρόπων δράσης έχουν αναφερθεί [3], [15], [21], [22], [23]. Αυτό περιλαμβάνει:

(

1

)

την αναστολή της κυτταρική πρόσληψη σιδήρου από Tf [10], [13], [18]?

(

2

)

την κινητοποίηση του σιδήρου από τα κύτταρα [10], [13], [18]?

(

3

)

την αναστολή της δραστηριότητας της ριβονουκλεοτιδικής αναγωγάσης [24], [25]?

(

4

)

το up-ρύθμιση του καταστολέα πρωτεΐνης μετάσταση, Ν-myc κατάντη ρυθμίζονται γονίδιο 1 [26], [27], [28], [29]? και

(

5

)

τις οξειδοαναγωγικές σχηματισμό συμπλεγμάτων ενεργό μέταλλο που παράγουν αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS) [10], [15], [21], [23 ], [30]. Αυτός ο τελευταίος μηχανισμός είναι σημαντική, ειδικά καθώς μελέτες έχουν καταδείξει το σημαντικό ρόλο της παραγωγής ROS στην αύξηση της επιλεκτική δράση των χηλικοποιητών έναντι κυττάρων όγκου [10], [15], [21].

Ο TSC, 3- αμινοπυριδίνη-2-καρβοξαλδεϋδη θειοημικαρβαζόνη (Triapine? Εικ. 1), έχει εξεταστεί σε & gt? 20 Φάση Ι και II κλινικών δοκιμών ως νέο χημειοθεραπευτικό του καρκίνου [11], [31], [32], [33], [34 ], [35], [36], [37], [38], [39], [40], [41]. Παρόλο που κλινικές δοκιμές χρησιμοποιώντας Triapine έδειξαν γενικά περιορισμένη δραστηριότητα κατά των όγκων [36], [37], [38], [40], άλλες μελέτες έχουν δείξει θετικά αποτελέσματα σε τοπικά προχωρημένο τραχήλου της μήτρας και του κόλπου καρκίνους όταν συγχορηγείται με σισπλατίνη και ακτινοχημειοθεραπεία [33], [34]. Αξιοσημείωτες παρενέργειες που παρατηρούνται κατά τη χορήγηση Triapine περιλαμβάνουν μεθαιμοσφαιρίνης σχηματισμός και υποξία [35], [39], [41] και τα προβλήματα αυτά έχουν καταστήσει αναγκαία την ανάπτυξη άλλων πιο ενεργή και επιλεκτική ΣΠΞ με ισχυρή αντικαρκινική δράση.

Η

Αρκετές τάξεις ΣΠΞ έχουν αναπτυχθεί ως πιθανοί παράγοντες κατά του πολλαπλασιασμού (Σχ. 1), ένας αριθμός των οποίων εμφανίζουν σήμανση και επιλεκτική δράση κατά του όγκου τόσο

in vitro

[10], [15] [21], [42] και

in vivo

[12], [21], [26], [42]. Για παράδειγμα, μια πενθήμερη αγωγή με δι-2-pyridylketone 4,4-διμεθυλο-3-θειοημικαρβαζόνη (Dp44mT? Εικ. 1) στα 0.4 mg /kg σε ποντίκια μείωσε την ανάπτυξη ενός καρκινώματος πνεύμονα ποντικού Μ109 έως 47% του ελέγχου [21]. Επιπλέον, Dp44mT έδειξε ισχυρός και εκλεκτικός αντικαρκινική δραστικότητα

in vitro

και

in vivo

έναντι σε μία κλίμακα ξενομοσχευμάτων ανθρώπινου όγκου [42] και ήταν σε θέση να σχηματίσουν σύμπλοκα οξειδοαναγωγικό δραστικό μέταλλο που δημιουργούν ROS [15], [21], [30]. Αν και αυτή η TSC έδειξε μεγάλες δυνατότητες, απέδειξε καρδιακή ίνωση σε υψηλές, μη-βέλτιστες δόσεις [42]. Έτσι, περαιτέρω έρευνες σε ανάλογα Dp44mT ήταν αναγκαίες και έχουν ως αποτέλεσμα την ανάπτυξη του δι-2-pyridylketone 4-κυκλοεξυλ-4-μεθυλ-3-θειοημικαρβαζόνη (dpc? Εικ. 1) [12], [26]. DPC έδειξε επιλεκτική

in vitro

και

in vivo

δραστικότητα κατά του όγκου τόσο από την ενδοφλέβια [12], [26] και από του στόματος τρόπους [12] και επί του παρόντος αξιολογούνται περαιτέρω για την είσοδο σε κλινικές δοκιμές. Πρόσφατα, άλλοι ΣΠΞ έχουν επίσης δειχθεί να έχουν μια νέα εφαρμογή ως ενισχυτές φωτοδυναμική θεραπεία [43].

Έχουμε εξετάσει προηγουμένως μία ποικιλία ΣΠΞ κινολόνης που βασίζεται επιδεικνύουν

in vitro

αντι- πολλαπλασιαστική δραστηριότητα [16]. Κατά την τρέχουσα έρευνα, συνθέσαμε 35 μυθιστόρημα ΣΠΞ 6 μαθήματα που έχουν σχεδιαστεί από τον συνδυασμό των ενεργών κομματιών που υπάρχουν στο αναφερθεί στο παρελθόν ανάλογα [16], [44]. Προγενέστερες μελέτες έδειξαν ότι δι-υποκατάσταση στο τερματικό (Ν4) άζωτο είναι ζωτικής σημασίας για την αποτελεσματική αντικαρκινική δράση [12], [21]. Στην παρούσα μελέτη, έχουμε διατηρημένα δι-υποκατάσταση στην Ν4 άτομο μέσω της κατασκευής ενός πιπεραζίνης ή μορφολίνης Ν4-based, ένα θραύσμα που είναι παρούσα σε πολλές δραστικές ΣΠΞ [45], [46]. Η αντι-πολλαπλασιαστική δραστικότητα και εκλεκτικότητα αυτών των νέων ΣΠΞ εξετάστηκε

in vitro

κατά ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών τύπων και κανονικών κυττάρων ανθρώπινων δερματικών ινοβλαστών (NHDF). Αυτές οι σειρές που κατέδειξαν την ικανότητα να σχηματίζουν σύμπλοκα οξειδοαναγωγικά ενεργός σίδηρος και μεσολαβούν την οξείδωση του ασκορβικού έδειξε ισχυρή αντι-πολλαπλασιαστική δράση, υπογραμμίζοντας τη σημασία της δημιουργίας ROS σε αντικαρκινική δράση τους.

Υλικά και Μέθοδοι

Τα αντιδραστήρια αγοράστηκαν από την Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA), ACROS Organics (Geel, Βέλγιο) ή Princeton Chemicals Ltd (Λούτον, Bedfordshire, Ηνωμένο Βασίλειο). Silica gel 60 (0.040-0.063 mm? Merck, Darmstadt, Germany) χρησιμοποιήθηκε για χρωματογραφία στήλης. Χρωματογραφία λεπτής στιβάδας πειράματα (TLC) διεξήχθη επί πυριτικής πηκτής αλουμίνας-backed 40 F

254 πλάκες (Merck). Οι πλάκες φωτίζονται κάτω από υπεριώδες (254 nm) και αξιολογήθηκαν σε ατμούς ιωδίου. Τα σημεία τήξης προσδιορίστηκαν σε ένα όργανο Optimelt MPA100 (Stanford Research Systems, Sunnyvale, CA, USA) και δεν είναι διορθωμένα. φασματοσκοπία υψηλής ανάλυσης μάζας (HRMS) ανάλυση διεξήχθη για όλες τις νέες ενώσεις σε ένα φασματόμετρο Finnigan ΜΑΤ95 (Thermo Fisher Scientific, Βρέμη, Γερμανία) ή σε ένα φασματόμετρο Mariner ESI-TOF (Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific).

Όλα

1 Η- και

φάσματα 13C-NMR καταγράφηκαν σε ένα φασματόμετρο Bruker ΑΜ-400 (399,95 MHz για

1? 99,99 MHz για

13C? BrukerBioSpin Corp., Coventry, UK) . Οι χημικές μετατοπίσεις αναφέρονται σε ppm έναντι του εσωτερικού προτύπου, Si (CH

3)

4. Εύκολα ανταλλάξιμα σήματα είχαν παραλειφθεί όταν διάχυτη. Συνθέσεις πραγματοποιήθηκαν σε έναν αντιδραστήρα CEM-DISCOVERY μικροκυμάτων (CEM Corporation, Matthews, NC, USA) με τη θερμοκρασία και τον έλεγχο της πίεσης.

Σύνδεση

P

αξίες υπολογ υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας ChemDraw 12 (Perkin-Elmer, Waltham, MA, USA) με την εκτέλεση του κατακερματισμού Crippen του [47], ο κατακερματισμός Viswanadhan του [48] και η μέθοδος Broto του [49] και, στη συνέχεια, τον υπολογισμό του μέσου καταγραφής

P

υπολ.

Σύνθεση Θειοσεμικαρβαζίδιο Πρόδρομοι (α-στ)

Γενική μέθοδος Ι

Ν

αλκυλ ή

Ν

-αρυλ πιπεραζίνη ( 6 mmol) προστέθηκε σε ένα διάλυμα από 1,1′-θειοκαρβονυλδιϊμιδαζόλη (6 mmol? 1,068 g) σε 25 mL διχλωρομεθανίου και το μίγμα της αντίδρασης αναδεύτηκε για 24 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Ο οργανικός διαλύτης διαχωρίζεται και εκχυλίζεται 3 φορές με τη χρήση νερού, στη συνέχεια ξηραίνεται πάνω από άνυδρο θειικό μαγνήσιο, διηθείται και συμπυκνώνεται για την παροχή των παραγώγων αργού πιπεραζίνης. Αυτά τα ακατέργαστα προϊόντα χρησιμοποιούνται στο επόμενο στάδιο χωρίς περαιτέρω καθαρισμό. Αυτά τα ενδιάμεσα προστέθηκαν σε ένα διάλυμα ένυδρης υδραζίνης σε 25 ml αιθανόλης σε θερμοκρασία δωματίου. Το μίγμα της αντίδρασης ανέρρευσε για 3 ώρες και ψύχθηκε για να ληφθεί ένα λευκό ίζημα το οποίο συλλέχθηκε

μέσω

διήθηση ως το τελικό προϊόν (Σχ. 2). Όλα λαμβάνεται θειοημικαρβαζίδια κρυσταλλώνονται από μεθανόλη. Βλέπε S1 αρχείου για λεπτομέρειες δομικό χαρακτηρισμό και την κρυσταλλική δομή (Εικ. S1 σε File S1) και δεδομένα (Πίνακας S1 σε S1 File) 4-αιθυλπιπεραζίνη-1-καρβοθειοϋδραζίδη (α).

Η

Γενικά μέθοδος II.

διθειάνθρακας (CS

2) (0.2 mol, 12.06 mL) προστέθηκε στάγδην σε 15 λεπτά σε

N

-methylcyclohexylamine (0.2 mol, 26.3 mL) σε NaOH διαλύματος (0,8 Μ, 250 mL). Το μίγμα της αντίδρασης εντατικά αναδεύτηκε για 20 λεπτά και στη συνέχεια χλωροοξικό νάτριο (0,2 mol) προστέθηκε στο διάλυμα και αφέθηκε να αναδεύεται για 15 ώρες. Το μίγμα της αντίδρασης εξουδετερώθηκε με πυκνό HCl (20 mL) για να δώσει το ενδιάμεσο ως ένα λευκό ίζημα carboxymethylthiocarbamate. Το λαμβανόμενο ενδιάμεσο carboxymethylthiocarbamate (0.08 mol) στη συνέχεια αντέδρασε με ένυδρη υδραζίνη (0.08 mol) σε νερό (10 mL). Αυτό το μίγμα της αντίδρασης ηπίως υπό κάθετο ψυκτήρα για 2 ώρες για να δώσει λευκούς κρυστάλλους της θειοημικαρβαζίδιο (Εικ. 3). Το τελικό προϊόν κρυσταλλώνεται από μεθανόλη-νερό (1/1,

ν /ν

).

Η

Παρασκευή Παραγώγων TSC

Τα ετεροαρωματικά ανάλογα TSC συντέθηκαν με αντίδραση του αντίστοιχου ετεροαρωματικό κετόνη ή καρβαλδεΰδη και θειοημικαρβαζίδιο υπό ακτινοβόληση με μικροκύματα. Ισομοριακές ποσότητες του κατάλληλου θειοημικαρβαζίδιο (0,5 mmol) και καρβονυλική ένωση (0,5 mmol) διαλύθηκαν σε 4 mL EtOH με την προσθήκη 0,1 ml οξικού οξέος ως καταλύτη (Εικ. 4). Το προκύπτον μίγμα θερμάνθηκε σε ένα αντιδραστήρα μικροκυμάτων στους 83 ° C /30 min (μεγ. Ισχύς μικροκυμάτων 50 W). Μετά την ψύξη, το κατακρημνισθέν στερεό διηθήθηκε και πλύθηκε με αιθέρα. Το τελικό προϊόν καθαρίστηκε χρησιμοποιώντας κρυσταλλοποίηση (από αιθανόλη ή μεθανόλη) ή με χρωματογραφία στήλης. Δείτε S1 αρχείου για λεπτομέρειες δομικό χαρακτηρισμό, την κρυσταλλική δομή (Σχ S2 σε S1 αρχείου.) Και δεδομένων (Πίνακας S1 στο S1 Αρχείο) του

Z

–

Ν

‘- (δι (πυριδιν -2-υλ) μεθυλενο) -4- (πυριδιν-2-υλ) πιπεραζίνη-1-καρβοθειοϋδραζίδη (1δ) και ισοσβεστικό καμπύλες (Εικ. S3 σε S1 File).

Η

HPLC Καθαρότητα δεδομένων

Η τελική καθαρότητα των ΣΠΞ προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τους ακόλουθους γενικούς όρους: Gynkotek HPLC Σύστημα (Gynkotek)? Αντλία T580? Αυτόματο δειγματολήπτη GINA50 (Gynkotek)? Ανιχνευτής DAAD UVD340U? Στήλη: HILIC Kinetex 100 Α (Phenomenex, Torrance, CA, USA)? Ροή: 0.5 mL /min (0-1 λεπτά), 0,5-1,2 mL /min (1-3 λεπτά), 1.2 mL /min (3-7 λεπτά), 1,2 – 0,5 mL /min (7-8 λεπτά), 90% CH

2Cl

2, 10% CH

3OH? Υν στα 250 nm? Λογισμικό: Chromeleon (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Βλέπε S1 αρχείου για δεδομένα HPLC καθαρότητα (Πίνακας S2 σε S1 File).

Cell Culture

Το ανθρώπινο τύπους καρκινικών κυττάρων (neuroepithelioma (SK-N-MC), ο καρκίνος του παχέος εντέρου (HCT116 με άγρια -τύπου ρ53 (ρ53

+ /+)), λέμφωμα Burkitt (Raji) και)) κύτταρα τραχηλικού καρκινώματος (HeLa και φυσιολογικών ανθρώπινων δερματικών ινοβλαστών (NHDF) ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, ΗΠΑ). ρ53 HCT116 null (p53

– /-) κύτταρα ελήφθησαν από την Μαρία Sklodowska-Curie Memorial Κέντρο Καρκίνου και το Ινστιτούτο Ογκολογίας, την Πολωνία

Τα κύτταρα SK-N-MC καλλιεργήθηκαν σε ελάχιστο βασικό μέσο. (ΜΕΜ? Life Technologies, Grand Island, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ) που περιέχει 10% (ν /ν) ορό εμβρύου μόσχου (FBS? Life Technologies), 1 mM πυροσταφυλικό νάτριο (Life Technologies), 1% (ν /ν) μη απαραίτητα αμινοξέα (Life Technologies), 2 mM Ε-γλουταμίνη (Life Technologies), 100 U /mL πενικιλλίνη (Life Technologies), 100 μg /mL στρεπτομυκίνη (Life Technologies) και 0,28 μg /mL fungizone (Bristol Myers Squibb Pharmaceuticals, Μόντρεαλ , Καναδάς). Τα κύτταρα HCT116 και NHDF αναπτύχθηκαν σε μέσο Eagle τροποποιημένο κατά Dulbecco (DMEM? Sigma-Aldrich) συμπληρωμένου με 12% (ν /ν) θερμο-απενεργοποιημένο FBS (HCT116? Life Technologies) ή 15% (ν /ν) FBS (NHDF? Life Technologies), 100 μg /mL γενταμυκίνης (Polfa Warszawa SA, Βαρσοβία, Πολωνία), 100 μg /mL στρεπτομυκίνης (Polfa) και 100 U /mL πενικιλίνη (Polfa). Τα κύτταρα Raji και HeLa καλλιεργήθηκαν εντός μέσου Roswell Park Memorial Institute (RPMI-1640? Sigma-Aldrich) με την προσθήκη 10% (ν /ν) θερμο-απενεργοποιημένο FBS (Life Technologies) και τα συμπληρώματα που περιγράφονται για SK-Ν- κύτταρα MC παραπάνω. Όλες οι κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν υπό πρότυπες συνθήκες στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα σε 5% CO

2 και υποκαλλιεργήθηκαν κάθε 3-4 ημέρες, όπως απαιτείται.

Δοκιμασία Πολλαπλασιασμού

Η κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων (SK-N-MC: 1,5 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο? HeLa: 5,0 × 10

3 κύτταρα /φρεάτιο? Raji: 3,0 × 10

3 κύτταρα /και? HCT116: 3,5 × 10

3 κύτταρα /φρεάτιο? NHDF: 3,0 × 10

3 κύτταρα /φρεάτιο) 24 ώρες πριν από την προσθήκη των νέων ενώσεων. Οι δοκιμασίες διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας 72 h (SK-N-MC, Raji, HeLa) ή 96 ώρες (HCT 116, NHDF) περίοδο επώασης με τους παράγοντες στους 37 ° C. Αυτές οι συνθήκες σποράς και ανάπτυξης χρησιμοποιήθηκαν έτσι ώστε τα κύτταρα δεν έρχονται σε συρροή κατά τις περιόδους επώασης. Επιπλέον, DFO και Dp44mT συμπεριλήφθηκαν ως θετικοί έλεγχοι σε όλα τα πειράματα ως δραστηριότητα τους είναι καλά χαρακτηρίζεται από [21], [42], [50].

διαλύματα παρακαταθήκης χηλικοποιητή παρασκευάστηκαν σε DMSO και αραιώθηκαν σε μέσο, ​​έτσι ώστε το τελικό [DMSO] & lt? 0,05%. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως ποσοστό του μάρτυρα και το προκύπτον IC

50 τιμές υπολογίστηκαν με χρήση GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA). Το IC

50 ορίστηκε ως η συγκέντρωση αναγκαίο να μειωθεί η απορρόφηση στο 50% του μη επεξεργασμένου ελέγχου. Κάθε μεμονωμένη ένωση δοκιμάστηκε εις τριπλούν σε ένα μόνο πείραμα, με κάθε πείραμα επαναλαμβάνεται τρεις φορές. Μετά την επώαση του HCT 116 και κύτταρα NHDF με τις δοκιμαζόμενες ενώσεις, 20 μL του CellTiter 96 Υδατικό One Solution – MTS (Promega, Madison, WI, USA) προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο (με 100 μι ϋΜΕΜ χωρίς ερυθρό φαινόλης) και επωάστηκαν για 1 h /37 ° C. Η οπτική πυκνότητα των δειγμάτων αναλύθηκε στα 490 nm.

ΜΤΤ (3- [4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ] -2,5-διφαινυλοτετραζόλιο βρωμίδιο) χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση των αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα των χηλικοποιητών σε κύτταρα SK-N-MC και Raji. Μετά την επώαση με τις ενώσεις που ερευνήθηκαν, 10 μL ΜΤΤ (5 mg /ml σε PBS? Sigma-Aldrich) προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο. Μετά από 2 ώρες (SK-N-MC) ή 4 ώρες (Raji) επώαση, οι πλάκες φυγοκεντρήθηκαν και τα κύτταρα λύθηκαν με 100 μΙ 10% SDS-50% ισοβουτανόλης σε 0,01 Μ HCl (SK-N-MC ) ή DMSO (Raji). Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 570 nm. Τα αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα αυτών των νέων παραγόντων σε κύτταρα HeLa εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας χρώση κρυσταλλικό ιώδες (0.5% διάλυμα κρυσταλλικού ιώδους για 10 λεπτά). Τέλος, τα φρεάτια ξεπλύθηκαν με νερό και τα κύτταρα λύθηκαν με 2% SDS. Η οπτική πυκνότητα των δειγμάτων αναλύθηκε στα 595 nm.

Επισήμανση τρανσφερίνης με

59Fe

Η πρωτεΐνη μεταφοράς σιδήρου, Tf (Sigma-Aldrich), σημάνθηκε με

59Fe (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Boston, ΜΑ) για να σχηματίσει

59Fe

2-Tf χρησιμοποιώντας πρότυπες μεθόδους [6], [7]. Χωρίς περιορισμούς

59Fe αφαιρέθηκε με πέρασμα μέσα από μια στήλη Sephadex G25 και ακολούθησε εξαντλητικό αιμοκάθαρσης [6], [7].

Επίδραση των χηλικοί παράγοντες για την κινητοποίηση Cellular

59Fe

για να εξετασθεί η ικανότητα των νέων χηλικοποιητές για την κινητοποίηση

59Fe από κύτταρα SK-N-MC,

πειράματα εκροής 59Fe διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας καθιερωμένες τεχνικές [50], [51]. Η μονοστιβάδα κυττάρων δΚ-Ν-ΜΟ ήταν προεπισημαίνονται για 3 h στους 37 ° C σε ΜΕΜ που περιέχει

59Fe

2-Tf (0,75 μΜ). Τα κύτταρα στη συνέχεια πλύθηκαν τέσσερις φορές με παγωμένο PBS και επωάστηκαν για επιπλέον 3 ώρες στους 37 ° C με μέσο μόνο (ο έλεγχος) ή μέσο που περιέχει το χηλικοποιητή (25 μΜ). Μετά από αυτή την επώαση, το μέσο που περιείχε υπερκείμενη το απελευθερωμένο

59Fe διαχωρίστηκε από τα κύτταρα χρησιμοποιώντας μια πιπέτα Pasteur. Η ραδιενέργεια μετρήθηκε σε αμφότερα τα κύτταρα και το υπερκείμενο χρησιμοποιώντας έναν μετρητή γ-σπινθηρισμού (Wallac Οδηγό 3, Turku, Φινλανδία). Σε αυτές τις μελέτες, τα νέα προσδέματα συγκρίθηκαν με τα προηγουμένως χαρακτηριζόμενη χηλικά αντιδραστήρια, DFO και Dp44mT, η ικανότητά τους να κινητοποιούν κυτταρική

59Fe έχει εκτενώς εξεταστεί σε αυτά τα κύτταρα [10], [12], [17], [18 ], [50].

Επίδραση των χηλικών ενώσεων στην πρόληψη Cellular

59Fe πρόσληψη

Η ικανότητα των χηλικών παραγόντων για την πρόληψη της κυτταρικής πρόσληψης

59Fe από

59Fe

2-Tf εξετάστηκε χρησιμοποιώντας πρότυπες μεθόδους [10], [14], [17], [18], [50]. Μία μονοστιβάδα κυττάρων δΚ-Ν-ΜΟ επωάστηκαν με μέσο που περιέχει

59Fe

2-Tf (0.75 μΜ) και ο χηλικοποιητής (25 μΜ) για 3 ώρες στους 37 ° C. Το μέσο στη συνέχεια απομακρύνθηκε και τα κύτταρα πλύθηκαν τέσσερις φορές με παγωμένο PBS. Τα κύτταρα στη συνέχεια επωάστηκαν για 30 λεπτά στους 4 ° C με τη γενική πρωτεάση, προνάση (1 mg /mL? Sigma-Aldrich), προς απομάκρυνση δεσμευμένη σε μεμβράνη

59Fe. Τα κύτταρα απομακρύνθηκαν χρησιμοποιώντας ένα πλαστικό σπάτουλα και φυγοκεντρήθηκε στις 14.000 rpm /1 λεπτό για να διαχωριστεί εσωτερικεύονται από δεσμευμένες σε μεμβράνη

59Fe. Το κυτταρικό ίζημα επαναιωρήθηκε σε 1 mL PBS και το εσωτερικεύονται

59Fe μετρήθηκε σε μετρητή γ-σπινθηρισμού. Εσωτερικευμένη πρόσληψη

59Fe υπολογίστηκε ως ποσοστό του ελέγχου (μόνο το μέσο). Και πάλι, τα νέα προσδέματα συγκρίθηκαν με DFO και Dp44mT ως ικανότητά τους να αναστέλλουν την κυτταρική

πρόσληψη 59Fe έχει χαρακτηριστεί εκτενώς χρησιμοποιώντας κύτταρα SK-N-MC [10], [14], [17], [18], [ ,,,0],50].

Δοκιμασία ασκορβικό οξείδωση

Η ικανότητα των συμπλοκών σιδήρου των νέων προσδεμάτων να μεσολαβήσει την οξείδωση του υποστρώματος φυσιολογικού, ασκορβικό, εξετάσθηκε με τη χρήση καθιερωμένων μεθόδων [10], [18 ], [22], [52], [53]. Το ασκορβικό οξύ (100 μΜ) παρασκευάστηκε αμέσως πριν από κάθε πείραμα και επωάστηκε παρουσία Fe

III (10 μΜ? Ως ΡεΟ

3), ο χηλικοποιητής (1-60 μΜ) και μια 50-πλάσια μοριακή περίσσεια κιτρικού (500 μΜ). Η απορρόφηση στα 265 nm μετρήθηκε μετά από 10 και 40 λεπτά και η διαφορά στην απορρόφηση σε αυτά τα χρονικά σημεία υπολογίστηκε. Τα αποτελέσματα αυτών των πειραμάτων εκφράστηκαν ως ισοδύναμα δέσμευσης σιδήρου (IBE) λόγω της διαφορετικής θέσεις σύνδεσης υποκαταστατών των χηλικοποιητών εξετάστηκαν. Οι χηλικοποιητές, Dp44mT, DFO και αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ (EDTA) χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχοι ως η ικανότητα των συμπλοκών σιδήρου τους να οξειδώνουν ασκορβικό έχει χαρακτηριστεί εκτενώς [10], [15], [52], [53].

Στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± SD τουλάχιστον 3 πειράματα. Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση Prism v6 (GraphPad Software, Inc.) την εφαρμογή μιας μονόδρομης ANOVA με δοκιμή post-hoc Bonferroni του.

Αποτελέσματα και Συζήτηση

Drug Design

μοριακές ιδιότητες όπως το μοριακό βάρος (MW) και υπολογίζεται ο συντελεστής κατανομής οκτανόλης-νερού (log

P

calc) αποτελούν βασικούς παράγοντες για την επιτυχή ανάπτυξη των υποψήφιων φαρμάκων [54], [55]. Σε γενικές γραμμές, ο μέσος MW και συνδεθείτε

P

calc των φαρμάκων που έχουν ξεκινήσει στην αγορά είναι 300-450 Da και 2-4, αντίστοιχα [56], [57]. Λαμβάνοντας υπόψη αυτό, η κλινικώς δοκιμάζονται TSC, Triapine (ΜΒ: 195 Da? Log

P

calc: 0,761), αποτελεί μια ενδιαφέρουσα μόριο προβάδισμα με ένα σημαντικό απόθεμα σε MW και συνδεθείτε

P

υπολογισθέν για τροποποίηση.

Εντοπισμός λειτουργικά τμήματα για το σχεδιασμό φαρμάκου είναι ένα σύνθετο πρόβλημα που περιλαμβάνει διαφορετικές προσεγγίσεις, συμπεριλαμβανομένων εκείνων με μια πειραματική και θεωρητική βάση. Ο τελευταίος αποτελείται από μια ποικιλία μεθόδων μεταξύ των οποίων είναι εκείνα εντοπισμό πλεονεκτική υπο-δομές, ικριώματα ή /και συνδέτες με βάση προηγουμένως αναφερθείσες ενώσεις. Εναλλακτικά, ο κατακερματισμός των οργανικών μορίων σε μικρότερα τμήματα είναι μια σημαντική μέθοδος στην αντίστροφη συνθετική ανάλυση και έχει εμπνεύσει διάφορες ψευδο-ρετροσυνθετικών προσεγγίσεις [58]. Αυτό έχει εντοπιστεί θραύσματα τα οποία μπορεί να είναι χρήσιμα για το σχεδιασμό φαρμάκων. Για παράδειγμα, το δι-2-πυριδυλο [12], [15], [21], [59], κινολινυλ [60], πιπεραζινυλ [60], [61], [62], μορφολινύλιο [63] και κινοξαλινύλιο [ ,,,0],64] μοτίβα είναι κοινά τμήματα σε άλλους παράγοντες κατά του καρκίνου, τα οποία έχουν ενσωματωθεί στο σχεδιασμό των νέων ΣΠΞ που αναφέρονται στο παρόν.

στην παρούσα μελέτη, η κύρια λογική που διέπει την προσέγγισή μας ήταν ότι η νεοσυντιθέμενες ΣΠΞ θα πρέπει να διατηρηθεί η ισχυρή αντικαρκινική δράση των προδρόμων TSC τους, διατηρώντας κατάλληλα MW και log

P

αξίες υπολ να δείξει ουσιαστική υπόσχεση ως υποψήφια φάρμακα για φαρμακευτική ανάπτυξη. Χρησιμοποιήσαμε έναν συνδυασμό retro-θραυσμάτων που εμφανίζονται σε άλλες προδρόμους TSC [15], [16], [21], [44], [59] και άλλων αντικαρκινικών παραγόντων [60], [61], [62] , [63], [64]. Επιπλέον, δι-υποκατάσταση στο τερματικό Ν4 άτομο διατηρήθηκε μέσω της κατασκευής ενός πιπεραζίνης ή μορφολίνης Ν4-based (Εικ. 5), μία μονάδα η οποία παρατηρείται σε διάφορα ισχυρά ΣΠΞ [45], [46].

Σύνθεση νέων προσδεμάτων

Ο θειοημικαρβαζίδιο προδρόμους, Α-ρ (Εικ. 5), συνετέθησαν από εμπορικώς διαθέσιμα αντιδραστήρια σε μία διαδικασία δύο σταδίων η οποία έδωσε μέτρια έως υψηλές αποδόσεις (47- 95%). Η θεραπεία της δις (ιμιδαζόλιο) θειοκετόνη με την κατάλληλη πιπεραζίνη, ακολουθούμενη από την αντίδραση με ένυδρη υδραζίνη έδωσε την

N

-υποκατεστημένο πιπεραζίνη-based θειοημικαρβαζίδια σε υψηλή απόδοση (S1 File). Η τελική σειρά θειοημικαρβαζόνη, 1-6 (Σχ. 5), συντέθηκαν σε μέτρια έως υψηλή απόδοση (58 έως 96%) κατά βάση Schiff συμπύκνωση της κατάλληλης κετόνης /αλδεϋδης με τις προετοιμασμένες θειοημικαρβαζίδια. Η καθαρότητα των θειοσεμικαρβαζονών επιβεβαιώθηκε με HPLC και ήταν & gt? 95% (βλέπε πίνακα S2 σε S1 αρχείου)

Αντι-πολλαπλασιαστική δραστηριότητα των Μυθιστόρημα θειοσεμικαρβαζονών από μια ποικιλία Cancer Cell-Τύποι

Η ικανότητα του νέου θειοημικαρβαζόνη σειρά 1-6 για την αναστολή της κυτταρικό πολλαπλασιασμό των κυττάρων του όγκου εξετάστηκε σε μια ποικιλία καρκινικών κυτταρικών τύπων (Πίνακας 1), συμπεριλαμβανομένων των ανθρώπινων ρ53 άγριου τύπου και null καρκίνου του παχέος εντέρου (HCT116 ρ53

+ /+ και HCT116 ρ53

– /-, αντίστοιχα), λέμφωμα Burkitt (Raji), ανθρώπινου τραχηλικού καρκινώματος (HeLa) και neuroepithelioma (SK-N-MC) καρκινικά κύτταρα. Η ικανότητα αυτών των νέων παραγόντων σε καρκινικά κύτταρα-στόχους εκλεκτικότητα εκτιμήθηκε εξετάζοντας τις επιπτώσεις τους στη κυτταρικού πολλαπλασιασμού ενός θνητού τύπου κυττάρου, δηλαδή φυσιολογικά κύτταρα ανθρώπινων δερματικών ινοβλαστών (NHDF). Η αντι-πολλαπλασιαστική δραστικότητα της σειράς 1-6 παρουσιάζονται στον Πίνακα 1 και εκπροσωπείται επίσης ως χάρτες χρώμα (βλέπε Εικ. S4 στο File S1). Τα αποτελέσματα αυτών των νέων προσδεμάτων στη συνέχεια σε σχέση με τα ακόλουθα χηλικοποιητές που χρησιμοποιήθηκαν ως θετικοί έλεγχοι:

(

1

)

DFO, που χρησιμοποιούνται κλινικά για την θεραπεία της νόσου υπερφόρτωσης σιδήρου [1], [3] και

(

2

)

Dp44mT, ένα χηλικό παράγοντα με ισχυρή αντι-πολλαπλασιαστική δραστηριότητα

in vitro

και

in vivo

[15], [21].

Η

Όπως ήταν αναμενόμενο από προηγούμενες μελέτες μας [10], [14], [17], [18], [ ,,,0],50], ο χηλικοποιητής ελέγχου, DFO, έδειξαν φτωχή αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα σε όλα τα καρκίνο και φυσιολογικό κύτταρο-τύπων, με IC

50 τιμές που κυμαίνονται μεταξύ 4,74 έως & gt? 25 μΜ (Πίνακας 1). Σε αντίθεση, Dp44mT έδειξε επιλεκτική και ισχυρή αντικαρκινική δράση με IC

50 τιμές των 0,002 έως 0,04 μΜ, αλλά ήταν σημαντικά λιγότερο αποτελεσματικό σε θανάσιμο κύτταρα NHDF (IC

50: 15,38 μΜ? Πίνακας 1).

Λαμβάνοντας υπόψη την ανάπτυξη νέων θεραπευτικών κατά του καρκίνου, είναι αξιοσημείωτο ότι η έλλειψη έκφρασης της πρωτεΐνης καταστολέα όγκου, ρ53, σε μερικούς όγκους ενισχύσεις η εξέλιξη των νεοπλασματικών κυττάρων και προωθεί την αντίσταση ενάντια χημειοθεραπευτικά [65], [66] . Ως εκ τούτου, η χρήση των παραγόντων που είναι δραστικές έναντι αμφοτέρων των άγριου τύπου και null όγκων ρ53 είναι ζωτικής σημασίας, ιδιαίτερα λαμβάνοντας υπόψη την υψηλή επικράτηση μεταλλάξεων ρ53 σε προχωρημένους καρκίνους [42], [67]. Έτσι, εξετάσαμε αρχικά την αντι-πολλαπλασιαστική δραστηριότητα των νέων TSC σειρά 1-6 κατά της ανθρώπινης HCT116 ρ53

+ /+ και HCT116 ρ53

– /- κύτταρα καρκίνου κόλου (Πίνακας 1). Σημαντικά, τα αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της πλειονότητας των νέων ΣΠΞ έδειξε το ίδιο γενικό σχήμα δραστικότητας έναντι HCT116 ρ53

+ /+ και HCT116 ρ53

– /- κύτταρα, ανεξάρτητα από την κατάσταση της ρ53 (Πίνακας 1). Μια αξιοσημείωτη εξαίρεση της δραστικότητας μεταξύ αυτών των δύο κυτταρικών τύπων παρατηρήθηκε για την ένωση 3e, η οποία έδειξε ένα 100-πλάσια μείωση στην αντι-πολλαπλασιαστική δραστικότητα κατά τη σύγκριση HCT116 p53

+ /+ (IC

50: 0.05 μΜ) και HCT116 p53

– /- κύτταρα (IC

50: 5 μΜ? Πίνακας 1). Ωστόσο, συνολικά, η αντι-πολλαπλασιαστική δράση των ΣΠΞ ήταν γενικά ανεξάρτητα από την κατάσταση της ρ53 (Πίνακας 1), όπως δείχνεται για άλλες ενώσεις στην κατηγορία αυτή [16], [42]. Ως εκ τούτου, αυτή είναι μια σημαντική ιδιότητα του ΣΠΞ που θα μπορούσε να εξηγήσει αξιοσημείωτη δραστηριότητα τους, που έχει παρατηρηθεί με συναφείς παράγοντες σε μια ποικιλία καρκινικών κυτταρικών τύπων [42].

Από όλες τις σειρές ΣΠΞ συντίθενται σε αυτό μελέτη, εκείνα τα ανάλογα που προέρχονται από δι-2-πυριδύλιο (1α-ε) έδειξαν την πλέον ισχυρή αντι-πολλαπλασιαστική δραστικότητα σε HCT116 ρ53

+ /+ και p53

– /- κύτταρα, με αποτέλεσμα IC

50 τιμές που κυμαίνονται από 0.0008-0.04 μΜ (Πίνακας 1). Ενώ τα ανάλογα προέρχονται από κινολιν-2-υλο (2a-f) και 8-υδροξυκινολιν-2-υλ (3α-στ) έδειξε μέτρια αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα (IC

50: 0,026 έως 3,55 και 0,004 έως 9,25 μΜ, αντίστοιχα). Αντιθέτως, οι εν λόγω χηλικά αντιδραστήρια που προέρχεται από το 7-υδροξυκινολιν-8-υλ (4α-f), κινοξαλιν-2-υλ (5α-f) και σαλικυλικό (6α-στ) ομάδες έδειξαν φτωχή αντικαρκινική δράση (IC

50: 1.02- & gt? 25 μΜ) σε HCT116 p53

+ /+ και p53

– /- κύτταρα (Πίνακας 1)

Μια παρόμοια γενική τάση στην αντι-πολλαπλασιαστική δράση του. νέα ΣΠΞ με εκείνες που παρατηρήθηκαν σε HCT116 ρ53

+ /+ και p53

– /- κύτταρα παρατηρήθηκε επίσης σε Raji, HeLa και κύτταρα SK-N-MC (Πίνακας 1). Πράγματι, οι εν λόγω χηλικές ενώσεις που περιέχουν το ήμισυ δι-2-πυριδύλιο (1α-ε) ήταν το πιο ισχυρό αντι-καρκίνου (IC

50: 0,0003 έως 2,21 μΜ) αναλόγων εξετάστηκαν. Ομοίως με τα δεδομένα HCT116, ενώσεις από τη σειρά 2 εμφανίζεται γενικά μέτρια αντι-πολλαπλασιαστική δράση (IC

50: 0,04 έως 5,14 μΜ) σε Raji, HeLa και SK-N-MC κύτταρα, ενώ σειρά 3, 4, 5 και 6 γενικά έδειξε μέτρια έως κακή αντι-πολλαπλασιαστικές επιδράσεις (Πίνακας 1).

Μόνο ένας ασθενής έως μέτρια συσχέτιση (

R

2 = 0,01 έως 0,6) ήταν εμφανής μεταξύ των αντι-καρκίνου δραστηριότητα της σειράς 1-6 και καταγραφής τους

P

αξίες υπολ, υποδηλώνοντας ότι άλλοι παράγοντες εκτός από την ικανότητά τους να διασχίζει την κυτταρική μεμβράνη με παθητική διάχυση ήταν κρίσιμες σε αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα τους.

αντι-πολλαπλασιαστική δραστικότητα της Novel θειοημικαρβαζόνες έναντι των φυσιολογικών, Mortal Cells

είναι σημαντικό ότι, για έναν πράκτορα να είναι χρήσιμο ως αντικαρκινικό φάρμακο, θα πρέπει να δείξει προτιμησιακή αντι-πολλαπλασιαστική δραστικότητα έναντι κυττάρων όγκου έναντι των φυσιολογικών, θνητό κυτταρικούς τύπους. Ως εκ τούτου, η επιλεκτικότητα των νέων ΣΠΞ εξετάστηκε σε θανάσιμο κύτταρα, δηλαδή κύτταρα NHDF. Από όλα τα ανάλογα που εξετάστηκαν, 1β, 1δ, 2β, 2στ και 3c έδειξε τη μεγαλύτερη αντι-πολλαπλασιαστική δραστηριότητα στην πλειονότητα των καρκινικών κυτταρικών τύπων (Πίνακας 1). Έτσι, για να εξετάσει την επιλεκτικότητα από τα 5 καλύτερα ΣΠΞ που αναφέρονται παραπάνω, δηλαδή 1β, 1δ, 2β, 2στ και 3γ, ένας «θεραπευτικός δείκτης» ήταν υπολογίζονται με τη διαίρεση του κυττάρου NHDF IC

50 από το IC

50 η νεοπλασματική HCT116 ρ53

+ /+ ή HCT116 ρ53

– /- κυτταρικούς τύπους (Πίνακας 2). Συγκεκριμένα, ο δείκτης επιλεκτικότητα των Dp44mT σύγκριση NHDFs να HCT116 p53

+ /+ ή HCT116 p53

– /- κυτταρικούς τύπους σημαδεύτηκε, όντας 7690 και 3076, αντίστοιχα

Η

Από. τα 5 πιο ισχυρό αντικαρκινικό ΣΠΞ περιγράφεται εδώ (Πίνακας 1), οι μεγαλύτερες θεραπευτικούς δείκτες εντοπίστηκαν για 1d και 3γ και ήταν 18 έως 2650 (Πίνακας 2). Αυτή η υψηλή εκλεκτικότητα έναντι των καρκινικών κυττάρων οφείλεται στο γεγονός ότι τόσο 1δ και 3γ έδειξε ισχυρή αντικαρκινική δράση (IC

50: 0,002 – 0,017 μΜ) σε κύτταρα HCT116, αλλά κυτταροτοξικότητα τους ήταν πολύ μειωμένη σε κύτταρα NHDF (IC

50: 0,16 έως 10,6 μΜ).