Αφηρημένο

Φόντο

Περιτοναϊκής εισβολή του καρκίνου του παχέος εντέρου είναι ένας σημαντικός προγνωστικός παράγοντας. Περιτοναϊκή εισβολή μπορεί αντικειμενικά ταυτοποιηθεί ως periotoneal ελαστικό laminal εισβολή (ELI) χρησιμοποιώντας elastica λεκέ, και το μικροπεριβάλλον του καρκίνου που σχηματίζεται από την περιτοναϊκή εισβολή (CMPI) μπορεί επίσης να παρατηρηθούν. Θήκες με ELI δείχνουν πιο συχνά μακρινή μετάσταση και η επανάληψη. Ως εκ τούτου, CMPI μπορεί να αντιπροσωπεύει ένα συγκεκριμένο περιβάλλον που διευκολύνει την εξέλιξη του όγκου. Παθολογική και βιολογικές έρευνες CMPI μπορεί να ρίξει φως σε αυτό, ενδεχομένως, διακριτικό μικροπεριβάλλον του καρκίνου.

Μέθοδοι

Αναλύσαμε μικροσυστοιχίες ιστό περιοχή-ειδικά για τον προσδιορισμό των παθολογικά χαρακτηριστικά του CMPI, και διαδίδεται subperitoneal ινοβλάστες (ΔΠΠ ) και ινοβλάστες υποβλεννογόνια (SMFs) από ανθρώπινο ιστό του παχέως εντέρου. Βιολογικά χαρακτηριστικά και τα αποτελέσματα των αναλύσεων του προφίλ γονιδιακής έκφρασης συγκρίθηκαν με την καλύτερη κατανόηση της περιτοναϊκής εισβολής του καρκίνου του παχέος εντέρου και πώς αυτό μπορεί να σχηματίσουν ένα ειδικό μικροπεριβάλλον μέσω της αλληλεπίδρασης με ΔΠΠ. Ποντίκι όγκους ξενομοσχεύματος, που προέρχονται από συν-ένεση των καρκινικών κυττάρων είτε με ΔΠΠ ή SMFs, δημιουργήθηκαν για να αξιολογήσουν τον ενεργό ρόλο τους για την εξέλιξη του όγκου και των μεταστάσεων.

Αποτελέσματα

Βρήκαμε ότι ίνωση με άλφα λείου μυός ακτίνη (α-SMA) έκφραση ήταν μια σημαντική παθολογικό χαρακτηριστικό της CMPI. Οι διαφορές στον πολλαπλασιασμό και την έκφραση του γονιδίου προφίλ αναλύσεις πρότεινε ΕΑΔ και SMFs ήταν διακριτοί πληθυσμοί, και ότι ΔΠΠ χαρακτηρίζονταν από μια υψηλότερη έκφραση της εξωκυττάριας ουσίας (ECM) -associated γονίδια. Επιπλέον, σε σύγκριση με SMFs, ΕΑΔ έδειξαν περισσότερο μεταβλητή μεταβολή στην γονιδιακή έκφραση μετά τον καρκίνο με κύτταρα-διέγερση μέσο. ανάλυση Gene οντολογία αποκάλυψε ότι ΔΠΠ-ειδικά γονίδια απορυθμίζεται εμπλουτίστηκαν με δεσμεύσεως της ακτίνης ή συσταλτικές σχετιζόμενη γονιδίων που περιλαμβάνουν α-SMA κωδικοποιεί ACTA2. Mouse όγκους ξενομοσχεύματος που προέρχεται από συν-ένεση των καρκινικών κυττάρων με ΔΠΠ έδειξαν ενίσχυση της ανάπτυξης του όγκου, μετάσταση, και την ικανότητα για το σχηματισμό όγκου σε σύγκριση με εκείνα που προέρχονται από συν-ένεση με τα καρκινικά κύτταρα και SMFs.

Συμπεράσματα

CMPI είναι μια ειδική μικροπεριβάλλον, και την αλληλεπίδραση των ΕΑΔ και καρκινικών κυττάρων μέσα CMPI την προώθηση της ανάπτυξης των όγκων και των μεταστάσεων

Παράθεση:. Kojima Μ, Higuchi Υ, Yokota Μ, Ishii G, Saito Ν, Aoyagi Κ, et al. (2014) Ανθρώπινα Subperitoneal ινοβλαστών και Cancer Cell Αλληλεπίδραση Δημιουργεί μικροπεριβάλλον που Ενισχύει την εξέλιξη του όγκου και των μεταστάσεων. PLoS ONE 9 (2): e88018. doi: 10.1371 /journal.pone.0088018

Επιμέλεια: Soroku Yagihashi, Χιροσάκι Πανεπιστήμιο Graduate School of Medicine, Ιαπωνία

Ελήφθη: 27η Σεπτεμβρίου 2013? Δεκτές: 2, Γενάρη του 2014? Δημοσιεύθηκε: τέταρτης Φεβρουαρίου 2014

Copyright: © 2014 Kojima et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από JSPs KAKENHI αριθμό επιχορήγηση 24590458, και επιχορήγηση του 3ου χρόνου συνολικής στρατηγικής 10 ετών για τον έλεγχο του Καρκίνου (23-Α-3). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Αν και το μέγεθος του όγκου είναι ένας σημαντικός προγνωστικός παράγοντας σε πολλούς καρκίνους, η πρόγνωση στον καρκίνο του γαστρεντερικού είναι στρωματοποιημένη όχι με το μέγεθος του όγκου, αλλά από την εξάπλωση του όγκου [1]. Περιτοναϊκή εισβολή σε καρκίνο του παχέος εντέρου έχει αναφερθεί ότι είναι ένας ισχυρός προγνωστικός παράγοντας, αλλά αυτός ο όρος δεν ήταν καλά καθορισμένη, και έχουν αμφισβητηθεί μεθόδους ανίχνευσης και διάγνωσης [2] – [4]. Πρόσφατες παθολογικές αναφορές έχουν δείξει ότι elastica κηλίδα, η οποία αναδεικνύει την περιτοναϊκή ελαστικό έλασμα κοντά στην periotoneal επιφάνεια, είναι χρήσιμα για την αντικειμενική ανίχνευση της περιτοναϊκής εισβολής. Εμείς και άλλοι έχουν διαπιστώσει ότι περιτοναϊκή εισβολή ορίζεται ως εισβολή όγκου πέρα ​​από την περιτοναϊκή ελαστικό έλασμα (ελαστική laminal εισβολή: ELI) είναι ένας ισχυρός προγνωστικός παράγοντας που μπορεί να επηρεάσει τα μελλοντικά κριτήρια pT στην Ένωση για τη Διεθνή Έλεγχο του Καρκίνου (UICC) ταξινόμηση ΤΝΜ [5] – [7]. Το περιτόναιο είναι μια πολύ λεπτή μεμβράνη, σε απόσταση 500 μm πάχους, και η περιτοναϊκή ελαστικό έλασμα υπάρχει μέσα αυτής της μεμβράνης. Η συχνότητα του σύγχρονου μετάσταση και επανάληψης αυξάνεται κατά 2 έως 4 φορές όταν ένας όγκος εισβάλλει αυτή στενό χώρο [5]. Τα αποτελέσματα αυτά μπορεί να υποδηλώνουν ότι η εξέλιξη του όγκου και μετάσταση διευκολύνονται από ένα μικροπεριβάλλον του καρκίνου που σχηματίζεται από περιτοναϊκής εισβολής (CMPI). Η έκταση της CMPI μπορούν να ταυτοποιηθούν με τη χρήση elastica λεκέ, και παθολογικά χαρακτηριστικά του CMPI μπορεί επίσης να προσδιοριστεί.

Μια μικροσυστοιχία ιστού διευκολύνει την αξιολόγηση της έκφρασης πρωτεΐνης για ένα μεγάλο αριθμό από μπλοκ ιστού από ένα μόνο δείγμα, και οι μικροσυστοιχίες ιστού περιοχής ειδικό έχουν αναφερθεί ότι είναι χρήσιμα για τη μελέτη των συγκεκριμένων περιοχών του όγκου σε μεγάλες ομάδες [8]. Μετά τον προσδιορισμό των CMPI χρησιμοποιώντας elastica λεκέ, ένας πυρήνας ιστός μπορεί να ληφθεί από αυτή την περιοχή και μπορεί επίσης να πραγματοποιηθεί η σύγκριση με τα χαρακτηριστικά των άλλων περιοχών του όγκου. Αυτή η διαδικασία μπορεί να επιτρέψει την αξιολόγηση των σημαντικών βιολογικών φαινομένων που συμβαίνουν σε αυτό το μικροπεριβάλλον του καρκίνου.

Οι πρόσφατες εξελίξεις στην έρευνα για τον καρκίνο έχουν καθιερώσει την έννοια της μικροπεριβάλλον του καρκίνου που προάγει την έναρξη του όγκου, την εισβολή και τη μετάσταση [9]. Αν και το μικροπεριβάλλον του καρκίνου αποτελείται από πολλούς τύπους κυττάρων, η χρήση των μικροσυστοιχιών ιστού περιοχή-ειδικά μπορεί να επιτρέψει την εστίαση στα συστατικά των κυττάρων που χαρακτηρίζουν CMPI. Επιπλέον, εάν αυτά τα συστατικά των κυττάρων μπορεί να καλλιεργηθεί από την ιστολογικά αντίστοιχη subperitoneal περιοχή, μια βιολογική μελέτη για να διευκρινίσει αυτό το υποτιθέμενο καρκίνο προώθηση μικροπεριβάλλον μπορεί να πραγματοποιηθεί.

Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να εξηγήσει πώς η παχέος πρόγνωση του καρκίνου επηρεάζεται από την περιτοναϊκή εισβολή. Κατασκευάσαμε σύστημα μικροσυστοιχιών ιστού περιοχή-ειδικά για τον προσδιορισμό των χαρακτηριστικών συστατικά των κυττάρων του CMPI. Στη συνέχεια, καλλιεργούνται ειδικών υποπληθυσμών ινοβλαστών από την υποβλεννογόνια και subperitoneal στρώματα του ανθρώπινου κολονικού τοιχώματος. Τα βιολογικά χαρακτηριστικά και προφίλ γονίδιο ινοβλαστών υποβλεννογόνου (SMFs) και subperitoneal ινοβλάστες (ΔΠΠ) με ή χωρίς καρκίνο του κυττάρου-ρυθμισμένο μέσο (CCCM) διέγερση συγκρίθηκαν. Στη συνέχεια, κατασκευάσαμε όγκους ξενομοσχεύματος με συν-ένεση των καρκινικών κυττάρων είτε με ΔΠΠ ή SMFs. Η μελέτη μας πρότεινε ένα νέο υποψήφιο για ένα μικροπεριβάλλον του καρκίνου, την προώθηση στον καρκίνο του παχέος εντέρου και διευκρινιστεί ΔΠΠ ως ζωτικής σημασίας παίκτες στην ενίσχυση της εξέλιξης του όγκου και των μεταστάσεων.

Ασθενείς και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από το Εθνικό συμβούλιο Cancer Center Νοσοκομείο Ανατολή Institutional Review (No: 19-021). Η γραπτή γενική συναίνεση για τη χρήση βιολογικών υλικών για την έρευνα λήφθηκε από κάθε συμμετέχοντα πριν από την απόκτηση του ιστού. πειράματα σε ζώα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας Ζώων του Εθνικού Κέντρου Καρκίνου Νοσοκομείο Ανατολή (K11-032).

Χαρακτηριστικά ασθενών και Ανίχνευση ELI

Τετρακόσια συνεχόμενους ασθενείς με ταξινόμηση ΤΝΜ (5

η έκδοση) ρΤ3 και pT4a καρκίνο του παχέος εντέρου [10], που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση μεταξύ 1996 και 2003 στο Εθνικό Κέντρο καρκίνου Νοσοκομείο Ανατολή, είχαν εγγραφεί. Χρησιμοποιώντας elastica λεκέ, εντοπίσαμε 173 περιπτώσεις με ELI και εξετάζεται περαιτέρω αυτές χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες ιστό περιοχή-ειδικά [5], [8]. Από τις 173 περιπτώσεις με ELI, 107 ήταν ρΤ3 και 66 ήταν pT4a.

Η κατασκευή του Χώρου-Ειδικές ιστικές μικροσυστοιχίες

Για να φωτιστούν τα παθολογικά χαρακτηριστικά της CMPI στον ιστό του καρκίνου του παχέος εντέρου, ορίσαμε τον καρκίνο μικροπεριβάλλον ως εξής: (α) CMPI έχει σύνορα όγκου με περιτοναϊκή εισβολή και (β) το μικροπεριβάλλον του καρκίνου που σχηματίζεται από υποβλεννογόνια εισβολή (CMSI) έχει ένα υποβλεννογόνια επεμβατική σύνορο του όγκου (Σχήμα 1Α) [5]. Η μικροσυστοιχία ιστός 2-σημείο Στη συνέχεια, προσδιορίστηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [8]. Κάθε περιοχή του όγκου σημαδεύτηκε με μελάνι στην ιστολογική slide? ένα ενιαίο πυρήνα ιστού 2 mm σε διάμετρο ελήφθη από κάθε μικροπεριβάλλον του καρκίνου και μεταφέρθηκε σε ένα μπλοκ υποδοχής χρησιμοποιώντας έναν ιστό Microarrayer (Azumaya, Tokyo, Japan). Σε 24 περιπτώσεις, ανεπαρκής καρκινικό ιστό ελήφθη από το CMPI. Ωστόσο, επαρκής ιστός ελήφθη σε 149 περιπτώσεις? αυτά αναλύθηκαν ιστολογικά και ανοσοϊστοχημικά (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι S1, και ο Πίνακας S1).

(Α) Schema του μικροπεριβάλλοντος του καρκίνου που σχηματίζεται από περιτοναϊκή εισβολή (CMPI) και στο μικροπεριβάλλον του καρκίνου που σχηματίζεται από υποβλεννογόνια εισβολή (CMSI) ορίζεται ως (α) επεμβατική μέτωπο με περιτοναϊκή εισβολή και (β) υποβλεννογόνια επεμβατική εμπρός, αντίστοιχα. (Β) Η κατανομή της ίνωσης σε ιστό ανθρώπινου καρκίνου του παχέος εντέρου. Σκούρο γκρι μπάρες δείχνουν τον αριθμό των περιπτώσεων με ίνωση πάνω από το 50% του πυρήνα από κάθε περιοχή του όγκου, και ανοιχτό γκρι μπάρες δείχνουν τον αριθμό των περιπτώσεων χωρίς εκτεταμένη ίνωση. Δείγματα πυρήνα με CMPI παρουσίασαν υψηλότερη συχνότητα έντονη ίνωση από ό, τι δείγματα πυρήνα με CMSI (

P

& lt? 0,01). (Γ) Κατανομή της έκφρασης α-SMA σε ιστό ανθρώπινου καρκίνου του παχέος εντέρου. CMPI έδειξαν υψηλότερες εκφράσεις α-SMA από εκείνες που παρατηρούνται σε CMSI (

P

& lt? 0,01). (D) Διανομή CD3-θετικών κυττάρων σε ιστό ανθρώπινου καρκίνου του παχέος εντέρου. Οι αριθμοί των CD3-θετικών κυττάρων δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ CMPI και CMSI. (Ε) Διανομή CD68-θετικών κυττάρων σε ιστό ανθρώπινου καρκίνου του παχέος εντέρου. Οι αριθμοί των CD68-θετικών κυττάρων δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ CMPI και CMSI. (Στ) διανομή CD31-θετικών αγγείων σε ιστό ανθρώπινου καρκίνου του παχέος εντέρου. Αριθμοί των CD31-θετικών σκάφη δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ CMPI και CMSI. Τα αποτελέσματα στο (Β) που παρουσιάζεται από τους αριθμούς περίπτωση, και εκείνες (C-F) παρουσιάζονται ως η μέση τιμή ± SD από 149 περιπτώσεις (**

P

& lt? 0,01).

Η

αντισώματα, Regents, και ανοσοϊστοχημεία

τα αντισώματα, τα αντιδραστήρια και οι ανοσοϊστοχημικές διαδικασίες που χρησιμοποιούνται περιγράφονται στο Υλικά και Μέθοδοι S1 και S2 ο πίνακας.

Αξιολόγηση της περιοχης-ειδικού ιστού Microarray τμήματα

εικόνες διαφανειών υψηλής ανάλυσης αποκτήθηκαν από όλα τα δοκίμια ιστού με αιματοξυλίνη-ηωσίνη (ΗΕ) και χρώση ανοσοϊστοχημείας, χρησιμοποιώντας NanoZoomer σαρωτή διαφανειών 2.0-ΗΤ (Hamamatsu Photonics, Hamamatsu, Ιαπωνία). Όλες οι πυρήνες εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό πρόγραμμα προβολής (NDP άποψη: Hamamatsu Photonics, Hamamatsu, Ιαπωνία). Όταν η περιοχή του ίνωσης υπερέβη το 50% ενός συνόλου πυρήνος ιστού με ένα διαμέτρου 2 χιλ κατόπιν χρώση Η.Ε., αυτό ορίστηκε ως θετικό για αισθητή ίνωση. Για ανοσοϊστοχημική χρώση, hot spots με CD3-, CD31- και CD68-θετικά επιλέχθηκαν κύτταρα ή σκάφη στο λογισμικό θεατή, τότε μια εικόνα των x20 μεγέθυνση (0,51 mm

2) λήφθηκε, και να αποθηκευτεί ως αρχείο JPEG . Θετικά κύτταρα ή τα σκάφη μετρήθηκαν σε κάθε εικόνα χρησιμοποιώντας το λογισμικό μορφομετρικών (WinRoof, Mitani Corporation, Fukui, Ιαπωνία). Επιπλέον, η περιοχή με την υψηλότερη άλφα λείου μυός ακτίνη (α-SMA) έκφραση σε ινοβλάστες επιλέχθηκε, στη συνέχεια, μια μεγέθυνση x20 (0,51 mm

2) εικόνα λήφθηκε, και αποθηκεύεται ως αρχείο JPEG. Η αναλογία των θετικών περιοχής α-SMA στην εικόνα υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό μορφομετρικών, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [11]. Η έκφραση α-SMA σε φυσιολογικό μυϊκό ιστό, όπως προσδιορίζεται με σύγκριση με έναν αύξοντα slide Η.Ε., δεν αξιολογήθηκε. HE και ανοσοϊστοχημική χρώση των δεδομένων CMPI συγκρίθηκε με εκείνη του CMSI για τη διαλεύκανση των ιστολογικών χαρακτηριστικών των CMPI.

πρωτογενή στοιχεία και Κυτταρικές Γραμμές

υποβλεννογόνια ιστός ελήφθη από ιστό σιγμοειδές περισσότερο από 5 cm μακριά από τον όγκο. Κολικού ιστού αποκόπηκε από το μυϊκό στρώμα στην πλευρά του αυλού, και ελήφθησαν lamina propria και βλεννογόνους ιστούς στρώμα. Στη συνέχεια, το χόριο ήταν καθαρίζεται μακριά για να αποκτήσουν υποβλεννογόνια ιστό. Subperitoneal ιστός ελήφθη από το μεσεντέριο σιγμοειδές κόλον κατά περισσότερο από 5 cm μακριά από τον όγκο χρησιμοποιώντας λειτουργούν τσιμπιδάκια και ψαλίδι. Αυτοί οι ιστοί πλύθηκαν με αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS) και επωάστηκαν σε 5% θρυψίνη για 20 λεπτά, 3 φορές. Το υπερκείμενο φυγοκεντρήθηκε, απλώθηκε σε ένα πιάτο, και ελήφθησαν ινοβλάστες υποβλεννογόνια (SMFs) και subperitoneal ινοβλάστες (ΕΑΔ) και στη συνέχεια αναπτύχθηκαν και διατηρήθηκαν σε MF-μέσο (Toyobo, Tokyo, Japan) [12]. Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν σε κύτταρα εντός 8 περάσματα.

Οι ανθρώπινες ορθοκολικού καρκίνου κυτταρικές σειρές DLD-1 και Caco-2 ελήφθησαν από την American Type Culture Collection και αναπτύχθηκαν σε μέσο Eagle τροποποιημένο κατά Dulbecco (DMEM) (Sigma- Aldrich, Saint Louis, ΜΟ) που περιέχει 100 U /mL πενικιλλίνη, 100 μg /mL στρεπτομυκίνη (Sigma-Aldrich, Saint Louis, ΜΟ), και 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (FBS?. Gibco, Palo Alto, CA)

Δοκιμασία πολλαπλασιασμού Κυττάρου, ανοσοκυτταροχημική χρώση, και κυτταρομετρία ροής Ανάλυση

προσδιορισμούς κυτταρικού πολλαπλασιασμού, ανοσοκυτταροχημική χρώση, και κυτταρομετρία ροής αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι S1.

διέγερση ινοβλάστες με Cancer Cell Medium

Αρχικά, 1.7 × 10

4 /cm

2 ινοβλαστών και κυττάρων DLD-1 αναπτύχθηκαν χωριστά σε DMEM που περιέχει 100 U /mL πενικιλλίνη, 100 μg /mL στρεπτομυκίνη, και 10% FBS για 48 ώρες, και στη συνέχεια παρέμειναν νηστικά για 24 ώρες. Στη συνέχεια, το μέσο απομακρύνθηκε από τα ινοβλάστες, και το μέσο από τα κύτταρα στερήθηκαν DLD-1 προστέθηκε στα ινοβλαστών για 24 ώρες για να καθιερώσει ινοβλάστες με καρκίνο των κυττάρων ρυθμισμένο μέσο (CCCM) διέγερση. Ως έλεγχος, ινοβλάστες πεινασμένο για 48 ώρες (παράγοντας των ινοβλαστών χωρίς CCCM). ΔΠΠ και SMFs είτε με είτε χωρίς CCCM αξιολογήθηκαν με χρήση ανάλυσης ανοσοκυτταροχημεία ή γονιδιακής έκφρασης. Όσο για την αξιολόγηση των ανοσοκυτταροχημική έκφραση α-SMA, επιλέχθηκε η περιοχή με την υψηλότερη έκφραση α-SMA, στη συνέχεια, μια μεγέθυνση x20 (0,51 mm

2) εικόνα λήφθηκε, και να αποθηκευτεί ως αρχείο JPEG. Η αναλογία των α-SMA θετική περιοχή της εικόνας υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό μορφομετρικών (WinRoof, Mitani Corporation, Fukui, Ιαπωνία).

Ανάλυση

γονιδιακής έκφρασης με χρήση μικροσυστοιχιών

Τρεις σειρές των ΕΑΔ και SMFs , είτε με είτε χωρίς CCCM, ελήφθη από 3 διαφορετικούς ασθενείς, χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Χρησιμοποιήσαμε GeneChip Human Genome U133 Plus 2.0 συστοιχίες (Affymetrix, Santa Clara, CA). cDNA Target παρήχθη από 100 ng του συνολικού RNA που εκχυλίζεται από κάθε δείγμα χρησιμοποιώντας 3 ‘IVT Express Kit (Affymetrix, Santa Clara, CA). Οι διαδικασίες για την υβριδοποίηση στόχου, το πλύσιμο και χρώση για ενίσχυση σήματος διεξήχθησαν σύμφωνα με τα πρωτόκολλα του προμηθευτή. Οι συστοιχίες σαρώθηκαν με σαρωτή Gene Chip 3000 (Affymetrix, Santa Clara, CA), και η ένταση του κάθε χαρακτηριστικό της συστοιχίας υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας GeneChip Software λειτουργίας, έκδοση 1.1.1 (Affymetrix, Santa Clara, CA). Η μέση ένταση τυποποιήθηκε με την ένταση στόχο, ο οποίος ορίστηκε ίση με το 1000, σε σύγκριση με αξιοπιστία διαφορετικές συστοιχίες. Οι τιμές ήταν μεταμορφωθεί καταγραφής και μεσαίο επίκεντρο. Η GeneSpring προγράμματα (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) και Excel (Microsoft Corporation, Redmond, WA) χρησιμοποιήθηκαν για την πραγματοποίηση αναλύσεων η αριθμητική για την επιλογή του γονιδίου.

Ξενομοσχεύματος μεταμόσχευση και Ογκου Δοκιμασία Σχηματισμού

είτε 1 × 10

6 ανθρώπινα ορθοκολικού καρκίνου κύτταρα Caco-2 ή DLD-1 μόνη, ή είτε με 1 χ 10

6 ΔΠΠ ή SMFs, ενέθηκαν υποδορίως (sc) στο πίσω μέρος του SCID ποντίκια (8 -12 εβδομάδες της ηλικίας? CLEA, Tokyo, Japan). Οι όγκοι των όγκων υπολογίστηκαν εβδομαδιαία όπως περιγράφηκε προηγουμένως [13]. Ποντικοί ενέθηκαν με Caco-2 μόνο ή με είτε ΔΠΠ ή SMFs θανατώθηκαν μετά από 10 εβδομάδες, και εκείνοι που ενέθηκαν με DLD-1 μόνο του ή με είτε ΔΠΠ ή SMFs σκοτώθηκαν μετά από 8 εβδομάδες, και τα βάρη των όγκων αξιολογήθηκαν. Για μακρινές μεταστατικές ανάλυση, του πνεύμονα και του ήπατος ιστός απομακρύνθηκε και σταθεροποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη, και για την ανάλυση των λεμφαδένα μετάστασης, το λαιμό και το βουβωνικό λιπώδη ιστό αφαιρέθηκε επίσης και σταθερά? Όλοι οι ιστοί ιστολογικά εξετάστηκαν. Χρησιμοποιήσαμε 8 ποντικών σε κάθε ομάδα.

Για να διευκρινιστεί η ικανότητα των ινοβλαστών για την ενίσχυση του σχηματισμού όγκου, σειριακές αραιώσεις DLD-1 καρκινικά κύτταρα Caco-2 ή παρομοίως συν-ένεση είτε με 1 χ 10

6 SMFs ή ΔΠΠ. σχηματισμός όγκου αξιολογήθηκε 4 εβδομάδες μετά την ένεση. Χρησιμοποιήσαμε 4 ποντίκια για κάθε ομάδα.

Στατιστική Ανάλυση

X

2 δοκιμών και

t

test του Student χρησιμοποιήθηκαν στην μικροσυστοιχία ιστό ανάλυση, δοκιμασία πολλαπλασιασμού κυττάρου, μεταμόσχευση ξενομοσχεύματος, και δοκιμασία σχηματισμού όγκου. Ένα

P

& lt? 0,05 ορίστηκε ως στατιστικά σημαντική. Στην ανάλυση μικροσυστοιχιών, δεδομένα γονιδιακής έκφρασης αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας GeneSpring GX12 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA). δεδομένα σειρά συνοψίστηκαν με τη χρήση MAS5 και κανονικοποιούνται με λογαριθμική μετατροπή και μεσαίο κεντράρισμα για αναλύσεις αριθμητική για την επιλογή του γονιδίου. Για ανάλυση κύριων συνιστωσών (PCA), χρησιμοποιήσαμε σύνολα ελέγχων που είχαν μετρηθεί αξιόπιστα και κυμαινόταν από 3 φορές πάνω από την παγκόσμια μέση σε τουλάχιστον 2 δείγματα (περίπου 10%)? αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση GeneSpring GX12. Τα διαφορικά εκφρασμένων σύνολα στέλεχος που χρησιμοποιείται στον εποπτευόμενο ιεραρχική ομαδοποίηση επιλέχθηκαν με βάση την

P

& lt? 0.05 και διπλώστε την αλλαγή (FC) & gt? 2.0.

P

τιμές υπολογίστηκαν με τη χρήση ένας τρόπος ANOVA με Benjamini και Hochberg FDR διόρθωση πολλαπλές δοκιμές. Ιεραρχική ομαδοποίηση με το βάρος του μέσου όρου σύνδεσης ομαδοποίηση έγινε χρησιμοποιώντας τα προγράμματα Cluster και Treeview (Michael Eisen, Πανεπιστήμιο του Στάνφορντ, genome-www.stanford.edu). Η λειτουργική σχολιασμό ομαδοποίησης της ανάλυσης Γονιδιακή Οντολογία Εμπλουτισμός πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του λογισμικού DAVID, με την αυστηρότητα ταξινόμηση οριστεί σε «High», καθώς και οι σημαντικές συστάδες επιλέχθηκαν με βάση την βαθμολογία εμπλουτισμού & gt? 2,0 και

P

& lt? 0.01 (ακριβής δοκιμασία του Fisher μετά Benjamini και Hochberg FDR διόρθωση πολλαπλές δοκιμές) [14], [15].

Αποτελέσματα

ιστολογικά χαρακτηριστικά του ELI

Δεν είναι μόνο τα καρκινικά κύτταρα, αλλά επίσης τις ποικιλίες του στρωματικά κύτταρα αποτελούν διακεκριμένη μικροπεριβάλλον του καρκίνου, και κάποια προώθηση μετάσταση όγκου [9]. Κατ ‘αρχάς, θα διευκρινιστεί τα σημαντικά ιστολογικά χαρακτηριστικά του CMPI να ρίξει φως σε φαινόμενα που συμβαίνουν σε αυτό το περιβάλλον, χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες ιστό περιοχή-ειδικά. Οι κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά των 149 υποθέσεων που χρησιμοποιήθηκαν φαίνονται στον Πίνακα S1. Στις χρώση Η.Ε., βρήκαμε εκτεταμένη ίνωση (πάνω από 50%) συχνότερα σε CMPI από ό, τι φαίνεται στο CMSI (Σχήμα 1Β). Η αναλογία του α-SMA θετικών περιοχή στην CMPI ήταν επίσης υψηλότερη από αυτή που παρατηρείται σε CMSI (Σχήμα 1 C). Οι αναλογίες των Τ λεμφοκυττάρων, μακροφάγων, ή μικροαγγείων αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας CD3, CD68, ή CD31, αντίστοιχα, δεν ήταν σημαντικά διαφορετικές μεταξύ CMPI και CMSI (Σχήμα 1 D-F). Τόσο στην CMPI και CMSI, παχουλά ατρακτοειδή ινοβλάστες ήταν σημαντική πηγή έκφρασης α-SMA, και ο λόγος επιτυχώς αναλύθηκε με τη χρήση λογισμικού μορφομετρικής (Σχήμα 2Α-D). Λαμβάνοντας υπόψη τα προηγούμενα αποτελέσματα μας, η οποία έδειξε ότι περιτοναϊκή εισβολή ορίζεται από ELI ήταν στενά συνδεδεμένη με μακρινή μετάσταση, υποθέσαμε ότι ινοβλάστες στο στρώμα subperitoneal μπορούσε να εμπλέκεται όχι μόνο σε εμφανή ίνωση και την ενεργοποίηση, αλλά και στην εξέλιξη και τη μετάσταση του όγκου. Στη συνέχεια αποφάσισε να απομονώσει τους ινοβλάστες από το subperitoneal στρώμα που ιστολογικά αντιστοιχεί στην περιτοναϊκή εισβολή. Οι ινοβλάστες από το στρώμα υποβλεννογόνιο χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες.

(Α) ιστολογικά χαρακτηριστικά του συστατικού στρωματικών του CMPI. Τόσο στην CMPI και το μικροπεριβάλλον του καρκίνου που σχηματίζεται από υποβλεννογόνια εισβολή (CMSI), παχουλό ατρακτοειδή ινοβλάστες ήταν σημαντικές πηγές του στρώματος. (Β) Θέσεις έκφραση α-SMA βρέθηκε σε ινοβλάστες. (C) Μεγαλύτερη μεγέθυνση αποκάλυψε σαφέστερα παχουλό ατρακτοειδή ινοβλάστες. (Δ) Χρησιμοποιώντας το λογισμικό μορφομετρικών, εμείς με επιτυχία ανιχνευθεί και να αναλυθεί η έκφραση α-SMA.

Η

Απομόνωση και Χαρακτηρισμός των Καλλιεργημένα Ανθρώπινα ΕΑΔ και SMFs

Κατά την πρώτη, θα αξιολογηθεί η μορφολογική και βιολογική χαρακτηριστικά της ΕΑΔ και SMFs σε μια κανονική κατάσταση. Τόσο καλλιεργημένα ανθρώπινα ΕΑΔ και SMFs έδειξε παρόμοια ατρακτοειδή μορφολογικά χαρακτηριστικά (Σχήμα S1A-Β). ΔΠΠ και SMFs από 3 ασθενείς θα μπορούσαν να καλλιεργηθούν πάνω από 10 περάσματα, εκτός από 1 περίπτωση SPF (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Η ανοσοκυτταροχημεία και κυτταρομετρία ροής αποκάλυψε τα λαμβανόμενα ΕΑΔ και SMFs ήταν συνεπή με ινοβλάστες (Σχήμα S1c-D). Βρήκαμε ασθενής έκφραση α-SMA σε λίγες ΕΑΔ και SMFs. Ο χρόνος διπλασιασμού για ΕΑΔ και SMFs ήταν 79,9 ώρες και 36,3 ώρες, αντίστοιχα, και η αύξηση της SMFs ήταν ταχύτερη από εκείνη της ΕΑΔ (

P

& lt? 0.05), η οποία πρότεινε μια βιολογική διαφορά μεταξύ ΕΑΔ και SMFs ( Εικόνα S1E).

γονιδιακής έκφρασης σύγκριση μεταξύ ΕΑΔ και SMFs

Για να αξιολογηθούν τα φαινοτυπικά διαφορές μεταξύ των ΕΑΔ και SMFs, συγκρίθηκαν τα προφίλ γονιδιακής έκφρασης των ινοβλαστών, με ή χωρίς διέγερση CCCM. PCA αποκάλυψε 4 διακριτές ομάδες, ανάλογα με την προέλευση και CCCM διέγερση τους, η οποία ξεπέρασε το άτομο παραλλαγή (Σχήμα 3Α και Β). Εποπτευόμενοι ανάλυση συστάδων αποκάλυψε επίσης 4 διακριτές συστάδες (Σχήμα 3C). Αυτό έδειξε την φαινοτυπική διαφορά σε ινοβλάστες εντός του κόλου τοίχο. Και αυτή η διαφορά εξαρτάται από την histoanatomical τοποθεσίας. Επιπλέον, η αντίδραση σε ερεθίσματα CCCM ήταν επίσης διαφορετική.

(A) Το κόκκινο είναι το προφίλ των μικροσυστοιχιών στην SMFs με διέγερση CCCM, το μπλε είναι SMFs χωρίς διέγερση CCCM, το πράσινο είναι ΕΑΔ με διέγερση CCCM, και το ασήμι είναι ΔΠΠ χωρίς CCCM διέγερση. Τρισδιάστατη αναπαράσταση ανάλυση κύριων συνιστωσών (PCA) συστατικό 1, 2 και 3. (Β) Δύο διαστάσεων αναπαράσταση των συστατικών PCA 1 και 2 (άνω), και τα συστατικά PCA 1 και 3 (κατώτερο). Οι ινοβλάστες που σχηματίζεται ανεξάρτητα συστάδες, ανάλογα με histoanatomical θέση και την παρουσία CCCM διέγερσης. (C) Εποπτευόμενοι ανάλυση διασποράς σε ινοβλάστες αποκάλυψε επίσης διακριτές συστάδες ανάλογα με histoanatomical χώρο του ξενοδοχείου και την παρουσία CCCM διέγερσης. ανάλυση (D) Gene οντολογία απορυθμίζεται γονιδίων σε ΔΠΠ σύγκριση με SMFs. ανάλυση (Ε) Γονιδιακή οντολογία γονιδίων απορυθμίζεται σε ΕΑΔ με διέγερση CCCM, σε σύγκριση με SMFs με διέγερση CCCM. Τα περισσότερα από τα γονίδια με την αυξημένη εκφράσεις στο ΔΠΠ επελέγησαν μετά από διέγερση CCCM? Ωστόσο, υπήρχαν κάποιες διαφορές, και η σειρά των συστάδων σχολιασμό άλλαξαν μετά τη διέγερση CCCM.

Η

Στη συνέχεια, συγκρίναμε τα προφίλ γονιδιακής έκφρασης σε αυτούς τους ινοβλάστες με και χωρίς διέγερση CCCM, ξεχωριστά (Σχήμα 3D-Ε ). Δεδομένα από ΕΑΔ χωρίς διέγερση CCCM εμπλουτίστηκαν από το γονίδιο οντολογία (GO) όροι «εξωκυττάρια μήτρα» και «πρωτεϊνούχο εξωκυττάρια μήτρα», το οποίο σχηματίζεται σύμπλεγμα σχολιασμό 1. Σημαντικές expracellular μήτρα (ECM) συστατικά του κολλαγόνα (COL1A1, COL4A1, COL4A2, COL5A1 , και COL16A1), λαμινίνη, ινονεκτίνη ή συμπεριλήφθηκαν σε αυτό το σύμπλεγμα. Επιπλέον, η έκφραση του γονιδίου που σχετίζονται με τα συστατικά που προσδένονται στην ECM επίσης ρυθμίζεται αυξητικά σε ΕΑΔ και σχηματίζεται σχολιασμό συστάδα 2. σύμπλεγμα σχολιασμού 3 εμπλουτίστηκε για όρους που σχετίζονται με GO «κόκκους» ή «κυστίδια» (Σχήμα 3D και Πίνακας S3). Αυτό το αποτέλεσμα πρότεινε το προφίλ της γονιδιακής έκφρασης που συνδέονται με τη βασική λειτουργία σε ινοβλάστες είναι διαφορετική μεταξύ των ΕΑΔ και SMFs εντός του παχέος τοίχο. Τα 20 κορυφαία γονίδια υψηλής έκφρασης σε ΔΠΠ περιλαμβάνονται επίσης αρκετές συνιστώσες ECM. Γονίδια που σχετίζονται με ινωδογενέσεως ή την μυοϊνοβλαστικά διαφοροποίηση των FLI1 και NOX4 βρέθηκαν επίσης στα 20 κορυφαία γονίδια (Πίνακας S4). Μεταξύ άλλων γονιδίων υψηλής έκφρασης σε ΔΠΠ χωρίς διέγερση CCCM βρήκαμε Ακρίβ, SPARC, ή COL4A1, τα οποία είναι γνωστό ότι εκφράζεται έντονα στο στρώμα του καρκίνου? και πολλές από αυτές είναι προγνωστικοί παράγοντες [11], [16], [17]

Τα περισσότερα από τα γονίδια με την αυξημένη έκφραση σε ΔΠΠ χωρίς διέγερση CCCM διατηρήθηκαν επίσης με την παρουσία διέγερσης CCCM.? Ωστόσο, υπήρχαν ορισμένες διαφορές (Σχήμα 3D-Ε, Πίνακας S5-6). Σε GO ανάλυση της ΕΑΔ με τη διέγερση CCCM, η σειρά των συστάδων σχολιασμό άλλαξαν σε σύγκριση με αυτή που παρατηρήθηκε σε ΔΠΠ χωρίς διέγερση CCCM. Μεταξύ των 20 κορυφαίων γονίδια, 13 γονίδια συντηρημένα και 7 γονίδια αντικαταστάθηκαν. Τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν τη διαφορά στην αντίδραση σε ερεθίσματα CCCM μεταξύ ΕΑΔ και SMFs. Η ύπαρξη της ΕΑΔ-ειδικών γονιδίων που ρυθμίζεται αυξητικά μετά από διέγερση CCCM εκτιμήθηκε.

Στη συνέχεια αναλύονται αυτά τα γονίδια να καθοριστούν τα βιολογικά χαρακτηριστικά του ΕΑΔ μετά από έκθεση σε CCCM. Ένα διάγραμμα Venn αποκάλυψε 193 ρυθμίζεται προς τα πάνω γονίδια στην ΕΑΔ και 59 στο SMFs μετά από διέγερση CCCM. Από αυτούς, 51 ήταν συνήθως ρυθμίζεται προς τα πάνω τόσο στην ΕΑΔ και SMFs, 142 ήταν ΔΠΠ συγκεκριμένο, και μόνο το 8 ήταν SMFs συγκεκριμένο (Εικόνα 4Α). Στη συνέχεια επικεντρώθηκε επίσης στην μειωτικά γονίδια, και ανακάλυψε 215 ΕΑΔ και 146 στην SMFs. Από αυτά, 138 ήταν συνήθως μειωτικά τόσο στην ΕΑΔ και SMFs, 77 ήταν ΔΠΠ συγκεκριμένο, και μόνο το 8 ήταν SMFs συγκεκριμένο (Εικόνα 4Β). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η ΕΑΔ έδειξαν πιο μεταβλητή μεταβολή στην έκφραση του γονιδίου μετά από διέγερση CCCM. GO όρος ανάλυση SPF-ειδικών γονιδίων ρυθμίζεται προς τα κάτω μετά από διέγερση CCCM δεν προέκυψε κανένα σύμπλεγμα σχολιασμό πάνω από 3,0 της βαθμολογίας εμπλουτισμού (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Σε αντίθεση, GO όρος ανάλυση των γονιδίων ΕΑΔ ειδικών απορυθμίζεται μετά από διέγερση CCCM αποκάλυψε ότι όροι όπως «ακτίνης δέσμευσης», «συσταλτικές ίνα» «δεσμευτική πρωτεΐνη του κυτταροσκελετού», «περιοχή LIM», «μέρος συσταλτική ίνα», «sarcomere» και «myofibril» που σχηματίζεται σύμπλεγμα σχολιασμό 1-3 (Σχήμα 4C). Τα περισσότερα από αυτά τα γονίδια είναι γνωστό ότι σχετίζονται με την συστολή των κυττάρων. Μεταξύ των 20 κορυφαίων γονίδια ήταν πολλές κυτταροσκελετού ή συσταλτικότητα σχετίζονται γονίδια. Παραδόξως, ACTA2 που κωδικοποιεί α-SMA ρυθμίζεται αυξητικά συγκεκριμένα στην ΕΑΔ μετά CCCM διέγερση (Σχήμα 4D). Αυτό το αποτέλεσμα επιβεβαιώθηκε με ανοσοκυτταροχημεία (Σχήμα 4Ε-F). Μορφομετρική ανάλυση σε ανοσοκυτταροχημική έκφραση αποκάλυψε ότι η έκφραση α-SMA ρυθμίζεται αυξητικά ειδικά και σημαντικά σε ΔΠΠ μετά από διέγερση CCCM σε επίπεδο πρωτεΐνης (Εικόνα S2,

P

& lt? 0,05). Μεταβλητή ρύθμιση προς τα πάνω και προς τα κάτω ρύθμιση των γονιδίων μετά από διέγερση CCCM ήταν ένα σημαντικό χαρακτηριστικό στην ΕΑΔ. ACTA2 κωδικοποίησης α-SMA συμπεριλήφθηκε σε αυτό το ΔΠΠ-ειδική απορυθμίζεται σύνολο γονιδίων. Καρκίνο που σχετίζεται ινοβλάστες (CAFS) περιλαμβάνουν α-SMA-θετικά ενεργοποιημένα μυοϊνοβλάστες. Μαζί με το αποτέλεσμα της μικροσυστοιχίες ιστού περιοχή-ειδικά, σημειώνονται α-SMA έκφραση σε CMPI είναι εξαρτάται από τον ευαίσθητο χαρακτήρα του ΕΑΔ που μπορεί να σχετίζεται με τη διαφορά μικροπεριβάλλον του καρκίνου.

(Α) Γονίδια υπερεκφράζεται με διέγερση CCCM . (Β) Τα γονίδια ρυθμίζεται προς τα κάτω από CCCM διέγερση. (C) Top 3 συστάδες σχολιασμού στην ανάλυση γονιδιακής οντολογίας γονιδίων ΕΑΔ ειδικά υπερεκφράζεται με διέγερση CCCM. (D) Top 20 γονιδίων απορυθμίζεται συγκεκριμένα στην ΕΑΔ μετά από διέγερση CCCM. (Ε) Ανοσοκυτοχημική α-SMA έκφραση σε SMFs μετά από διέγερση CCCM. έκφρασης (F) Ανοσοκυτοχημική α-SMA στην ΕΑΔ μετά από διέγερση CCCM. έκφραση α-SMA ρυθμίζεται αυξητικά συγκεκριμένα στην ΕΑΔ μετά από διέγερση CCCM (βλέπε επίσης σχήμα S2).

Η

ΔΠΠ Βελτιώστε την ανάπτυξη όγκου, μετάσταση όγκου και σχηματισμός Ικανότητα πιο έντονα από ό, τι SMFs

Για να φωτιστούν οι λειτουργικές διαφορές των ινοβλαστών στο κολονικό τοίχωμα, ενέθηκε ανθρώπινη ορθοκολικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές Caco-2 ή DLD-1 sc, μόνο, ή μαζί με είτε ΔΠΠ ή SMFs, σε SCID ποντίκια. Στις 7 εβδομάδες μετά την ένεση, όλα τα ποντίκια απέδειξαν σχηματισμό όγκου. Η ανάπτυξη των όγκων που προκύπτουν από τα καρκινικά κύτταρα ενέθηκαν μαζί με ΔΠΠ αυξήθηκε ταχύτερα από ότι προκύπτουν από την ένεση των καρκινικών κυττάρων και μόνο ή συν-ένεση με SMFs (Σχήμα 5Α). Τα τελικά βάρη των όγκων που προκύπτουν από τα καρκινικά κύτταρα συν-ένεση με ΔΠΠ ήταν επίσης μεγαλύτερες από εκείνες που προκύπτουν από την ένεση των καρκινικών κυττάρων μόνη της ή από συν-ένεση με SMFs (Σχήμα 5Β). Αν και η διαφορά δεν ήταν στατιστικά σημαντική, οι όγκοι που προκύπτουν από τη συν-ένεση κυττάρων DLD-1 με ΔΠΠ πιο συχνά ως αποτέλεσμα την λέμφο μετάσταση στους λεμφαδένες από ό, τι εκείνα που σχηματίζονται από το συν-έγχυση των κυττάρων DLD-1 με SMFs (Σχήμα 5C).

(Α, αριστερά) την ανάπτυξη του όγκου ξενομοσχεύματος σε ποντικούς που ενέθηκαν με DLD-1 ανθρώπινου ορθοκολικού καρκίνου κύτταρα μόνο (μπλε γραμμή, 840,7 ± 112,6 mm

3 σε 7 εβδομάδες), συν-εγχέεται με DLD-1 κύτταρα και ινοβλάστες υποβλεννογόνια (SMFs? κόκκινη γραμμή, 1178,0 ± 177,6 χιλιοστά

3 σε 7 εβδομάδες), και συν-ένεση με DLD-1 κύτταρα και subperitoneal ινοβλάστες (ΔΠΠ? πράσινη γραμμή, 1672,8 ± 214,7 χιλιοστά

3 7 εβδομάδων). Οι διαφορές του μεγέθους του όγκου μεταξύ των κυττάρων DLD-1 μόνο και κύτταρα DLD-1 με ΔΠΠ, και μεταξύ κυττάρων DLD-1 μόνο και κύτταρα DLD-1 με SMFs ήταν στατιστικά σημαντικές (

P

& lt? 0,05). (Α, δεξιά) την ανάπτυξη του όγκου ξενομοσχεύματος σε ποντικούς που ενέθηκαν με Caco-2 ανθρώπινου ορθοκολικού καρκινικά κύτταρα μόνο (μπλε γραμμή, 308,6 ± 127,7 mm

3 σε 9 εβδομάδες), συν-ένεση με τα κύτταρα Caco-2 και SMFs (κόκκινη γραμμή , 1363,1 ± 284,3 χιλιοστά

3 σε 9 εβδομάδες), και συν-ένεση με Caco-2 και ΔΠΠ (πράσινη γραμμή, 2595,1 ± 349,5 χιλιοστά

3 σε 9 εβδομάδες). Οι διαφορές του μεγέθους του όγκου μεταξύ των κυττάρων Caco-2 μόνο και κύτταρα Caco-2 με ΔΠΠ (

P

& lt? 0,01), καθώς και μεταξύ των Caco-2 κυττάρων με SMFs και κυττάρων Caco-2 με ΔΠΠ (

P

& lt? 0,05) ήταν στατιστικά σημαντικές. Ξενομοσχεύματος όγκοι που προέρχονται από συν-ένεση των καρκινικών κυττάρων και ΕΑΔ αυξήθηκε ταχύτερα από ό, τι εκείνα που προέρχονται από την ένεση των καρκινικών κυττάρων και μόνο, ή συν-ένεση των καρκινικών κυττάρων και SMFs. (Β, αριστερά) Ξενομοσχεύματος βάρος του όγκου σε ποντικούς που έχουν εγχυθεί με κύτταρα DLD-1 μόνη της ήταν 0,71 ± 0,11 g, συν-εγχέεται με DLD-1 κύτταρα και SMFs ήταν 1,27 ± 0,19 g, και συν-ένεση με DLD-1 κύτταρα και ΔΠΠ ήταν 1,82 ± 0,28 g σε 8 εβδομάδες. Οι διαφορές του βάρους του όγκου μεταξύ DLD-1 κύτταρα μόνο και τα κύτταρα DLD-1 με ΔΠΠ (

P

& lt? 0,01), και μεταξύ DLD-1 κύτταρα μόνο και DLD-1 κύτταρα με SMFs (

P

& lt? 0,05) ήταν στατιστικά σημαντικές. (Β, δεξιά) Ξενομοσχεύματος βάρος του όγκου σε ποντικούς που έχουν εγχυθεί με κύτταρα Caco-2 μόνο ήταν 0,53 ± 0,24 g, συν-ένεση με τα κύτταρα Caco-2 και SMFs ήταν 1,91 ± 0,34 g, και συν-ένεση με κύτταρα και ΔΠΠ Caco-2 ήταν 3,66 ± 0,45 g σε 10 εβδομάδες. Οι διαφορές του βάρους του όγκου μεταξύ DLD-1 κύτταρα μόνο και κυττάρων DLD-1 με ΔΠΠ (

P

& lt? 0.01), μεταξύ DLD-1 κύτταρα μόνο και DLD-1 κύτταρα με SMFs (

P

& lt? 0.05), καθώς και μεταξύ DLD-1 κύτταρα με ΕΑΔ και των κυττάρων DLD-1 με SMFs (

P

& lt? 0,05) ήταν στατιστικά σημαντικές. Βάρη των όγκων ξενομοσχεύματος που προέρχεται από συν-ένεση των καρκινικών κυττάρων με ΔΠΠ ήταν υψηλότερες από εκείνες των όγκων που προέρχονται από την έγχυση και μόνο τα καρκινικά κύτταρα, ή συν-ένεση των καρκινικών κυττάρων και SMFs (αριστερά: DLD-1, δεξιά: Caco-2) . (Γ) Αν και η τιμή δεν ήταν στατιστικά σημαντική, ξενομοσχεύματος όγκοι που προέρχονται από συν-ένεση του DLD-1 κύτταρα και ΔΠΠ έδειξε διπλάσια συχνότητα της μετάστασης λεμφαδένα (n = 4) σε σύγκριση με εκείνες που προέρχονται από συν-ένεση του DLD-