Αφηρημένο

Διοίκηση αναποτελεσματική αντικαρκινική θεραπεία σχετίζεται με περιττές τοξικότητα και ανάπτυξη ανθεκτικών κλώνων. Καρκίνος βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν με (CSLCs) αντισταθεί χημειοθεραπεία, προκαλώντας έτσι υποτροπή της νόσου. Έτσι, η ανάπτυξη ενός τεστ που προσδιορίζει την πιο αποτελεσματική διαχείριση χημειοθεραπεία προσφέρει μεγάλη υπόσχεση για εξατομικευμένη αντικαρκινική θεραπεία. Έχουμε αναπτύξει μία δοκιμασία ex vivo χημειοθεραπεία ευαισθησία (ChemoID), η οποία μετρά την ευαισθησία των CSLCs καθώς και το μεγαλύτερο μέρος των κυττάρων του όγκου σε μια ποικιλία παραγόντων χημειοθεραπείας. Δύο ασθενείς, ένας άνδρας ηλικίας 21 ετών (ασθενής 1) και ένα θηλυκό 5 μηνών (ασθενής 2), που επηρεάζονται από αναπλαστικό WHO βαθμού-ΙΙΙ ependymoma υποβλήθηκαν σε διαλογή χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία ChemoID. Ο ασθενής 1 βρέθηκε ευαίσθητα στο συνδυασμό της ιρινοτεκάνης και bevacizumab, η οποία οδήγησε σε παρατεταμένη εξέλιξη της νόσου ελεύθερη περίοδο 18 μηνών. Μετά από υποτροπή, ο συνδυασμός των διαφόρων φαρμάκων χημειοθεραπείας ελέγχθηκε και πάλι με την δοκιμασία ChemoID. Βρήκαμε ότι ισοθειοκυανικού βενζυλίου (BITC) αύξησε σημαντικά την χημειοευαισθησία των κυττάρων ependymoma στο συνδυασμό της ιρινοτεκάνης και bevacizumab. Μετά από ασθενή 1 επεξεργάστηκε για δύο μήνες με ιρινοτεκάνη, bevacizumab και συμπληρώματα της σταυρανθή φυτικά εκχυλίσματα που περιέχει BITC, παρατηρήσαμε πάνω από το 50% των όγκων οπισθοδρόμηση σε σύγκριση με το προ-ChemoID σάρωση όπως αποδεικνύεται από MRI. Ασθενής 2 βρέθηκε ανθεκτικά σε όλες τις θεραπείες και δοκιμάζονται ακόλουθες 6 κύκλους βινκριστίνη, καρβοπλατίνη, κυκλοφωσφαμίδιο, ετοποσίδη, και σισπλατίνη σε διάφορους συνδυασμούς, ο όγκος αυτού του ασθενούς γρήγορα προχωρήσει και η θεραπεία δέσμη πρωτονίων προτάθηκε. Όπως ήταν αναμενόμενο μελέτες σε ζώα που διεξήχθησαν με ξενομοσχεύματα που προέρχονται ασθενών που έλαβαν θεραπεία με ChemoID προβληθεί φάρμακα ανακεφαλαιώνει την κλινική παρατήρηση. Αυτή η δοκιμασία καταδεικνύει ότι οι ασθενείς με την ίδια ιστολογική στάδιο και το βαθμό του καρκίνου μπορεί να ποικίλει σημαντικά στην κλινική απόκριση τους, γεγονός που υποδηλώνει ότι ChemoID δοκιμή που μετρά την ευαισθησία του CSLCs καθώς και το μεγαλύτερο μέρος των κυττάρων του όγκου σε μια ποικιλία χημειοθεραπευτικών παραγόντων μπορεί να οδηγήσει σε περισσότερο αποτελεσματικές και εξατομικευμένες αντικαρκινικές θεραπείες στο μέλλον

Παράθεση:. Mathis SE, Alberico Α, Nande R, Neto W, Lawrence L, Μακάλιστερ DR, et al. (2014) χημειοθεραπείες πρόβλεψης-Δοκιμασία για στόχευση καρκινικά βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν σε ασθενείς που πάσχουν από εγκεφαλικούς όγκους. PLoS ONE 9 (8): e105710. doi: 10.1371 /journal.pone.0105710

Επιμέλεια: Κατερίνα Cinti, Ινστιτούτο Κλινικής Φυσιολογίας, c /o Toscana Ίδρυμα Επιστημών Ζωής, Ιταλία

Ελήφθη: May 27, 2014? Αποδεκτές: 23 Ιουλίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 21, Αυγούστου του 2014

Copyright: © 2014 Mathis et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Οι παρούσες μελέτες υποστηρίζεται εν μέρει από το Εθνικό Κέντρο για την Προώθηση της Μεταγραφική Επιστημών, Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας, μέσω του αριθμού επιχορήγηση UL1TR000117 από το Εθνικό Κέντρο Έρευνας Πόρων (NCRR), και 5P20RR020180 από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, WV-INBRE 5P20RR016477, και εν μέρει από ένα Μεταγραφική βραβείο του Πανεπιστημίου Μάρσαλ, και ένα βραβείο από το Πανεπιστήμιο τμήμα Marshall της Νευροεπιστήμης (στη ΔΕΗ). Το περιεχόμενο αυτού του χειρογράφου είναι αποκλειστική ευθύνη των συγγραφέων και δεν αντιπροσωπεύουν απαραίτητα τις επίσημες απόψεις της NCRR και ΝΙΗ. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Αν και επενδυμωμάτων είναι η τρίτη πιο κοινός τύπος εγκεφαλικού όγκου στα παιδιά (μετά από αστροκύτωμα και μυελοβλάστωμα), είναι σχετικά σπάνια, με περίπου 200 περιπτώσεις διαγιγνώσκονται στις ΗΠΑ κάθε χρόνο [1], [2]. Αντιπροσωπεύουν το 60% του συνόλου των ενδομυελική όγκων και 50% προκύψουν στο filum terminale [3].

Η θεραπεία της επενδυμωμάτων μπορεί να είναι προκλητική. Η αρχική πρότυπη θεραπεία για ependymoma είναι χειρουργική επέμβαση συχνά ακολουθείται από θεραπεία με ακτινοβολία, και χημειοθεραπεία. Μολονότι η χημειοθεραπεία έχει χρησιμοποιηθεί εκτεταμένα σε παιδιά με επενδυμώματα, υπάρχει μικρή κλινική απόδειξη ότι η χημειοθεραπεία βελτιώνει την επιβίωση των παιδιών με αυτόν τον τύπο του όγκου. Η χημειοθεραπεία συνήθως προορίζεται για ασθενείς με υπολειπόμενη όγκου μετά από χειρουργική επέμβαση και για παιδιά ηλικίας κάτω των 3 ετών, σε μια προσπάθεια να καθυστερήσει η ακτινοθεραπεία [4].

Δεν είναι απολύτως σαφές για ποιο λόγο δεν υπάρχει μια βελτιωμένη επιβίωση με χημειοθεραπεία, αλλά είναι γνωστό ότι η αντίσταση σε μια ποικιλία που χρησιμοποιούνται συνήθως χημειοθεραπευτικών παραγόντων είναι κοινή σε ependymoma [5]. Ως εκ τούτου, έρευνα και ανάπτυξη νέων στρατηγικών και ολοκληρωμένες θεραπείες οφείλουν να βρουν πιο αποτελεσματικές θεραπείες για αυτόν τον τύπο όγκου.

Οι ασθενείς με την ίδια φάση και βαθμός του καρκίνου μπορεί να ποικίλλει σημαντικά σε κλινική ανταπόκριση και την ανοχή της χημειοθεραπείας τους. Αναποτελεσματικό αντικαρκινική θεραπεία μπορεί να οδηγήσει σε περιττή τοξικότητα και την ανάπτυξη ανθεκτικών κλώνων. Τα επιζώντα κύτταρα καρκίνου είναι συχνά πιο ανθεκτικοί στη θεραπεία. Πολλές προσπάθειες έχουν γίνει όλα αυτά τα χρόνια για την ανάπτυξη ενός

ex-vivo

εξέταση αντι-καρκίνου που θα μπορούσαν να βοηθήσουν να διακρίνουν τις καλύτερες επιλογές θεραπείας για κάθε ασθενή ξεχωριστά, ελαχιστοποιώντας ταυτόχρονα την τοξικότητα.

Τα ζωικά μοντέλα ξένου μοσχεύματος έχουν δείξει ότι μόνο ένα υποσύνολο των καρκινικών κυττάρων μέσα σε κάθε όγκου είναι ικανός να εκκινήσει την ανάπτυξη του όγκου. Αυτή η ικανότητα έχει αποδειχθεί σε διάφορους τύπους ανθρώπινων καρκίνων, για να συμπεριλάβει επενδυμώματα [6]. Αυτή η ομάδα των καρκινικών κυττάρων είναι λειτουργικά ορίζεται ως η «Cancer Stem-Like κυττάρων» (CSLC) υποσύνολο. Σύμφωνα με το «καρκίνο βλαστικών κυττάρων σαν« θεωρία, οι όγκοι είναι μια σύνθετη, αυξανόμενο πληθυσμό των μη φυσιολογικών κυττάρων που προέρχονται από μια μειοψηφία των CSLCs. Αυτά τα κύτταρα διατηρούν τα χαρακτηριστικά του στελέχους που μοιάζει με την έννοια ότι πολλαπλασιάζονται πολύ αργά και έχουν μια εγγενή ικανότητα να αυτο-ανανέωση και διαφοροποιούνται σε φαινοτυπικά ετερογενή, παρεκκλίνουσα απογόνους [7] – [10]. Σε αντίθεση με το μεγαλύτερο μέρος των καρκινικών κυττάρων, CSLCs αντισταθεί χημειοθεραπεία και η ακτινοβολία και είναι υπεύθυνα για την υποτροπή του όγκου και των μεταστάσεων [9], [10].

Μερικές επενδυμωμάτων εκφράζουν διάφορους δείκτες των βλαστική ικανότητα, συμπεριλαμβανομένης της CD133. Επιπλέον, υποτροπιάζουσα όγκοι εμφανίζουν μια υπογραφή γονιδιακή έκφραση που αποτελείται από πάνω ρυθμισμένα γονίδια που εμπλέκονται στην κινητοχώρου (ASPM, KIF11) ή στην ανάπτυξη του νευρικού συστήματος (οδοί CD133, Wnt και Notch) [11].

Στόχευση CSLCs στην Εκτός από το μεγαλύτερο μέρος των άλλων καρκινικών κυττάρων εντός ενός όγκου είναι ένα νέο παράδειγμα στη θεραπεία του καρκίνου. πρόσφατες μελέτες μας δείχνουν ότι ένα υδροδυναμικό Εστίαση βιοαντιδραστήρα (HFB) (Celdyne, Houston ΤΧ) εμπλουτίζει εκλεκτικά CSLCs από καρκινικές κυτταρικές γραμμές που μπορούν να χρησιμοποιηθούν σε μια δοκιμασία χημειοευαισθησίας [8]. Περαιτέρω, με τη χρήση αυτής της στρατηγικής θα βελτιστοποιηθεί ο εμπλουτισμός των CSLCs από βιοψίες όγκου και έχουν αναπτύξει την δοκιμασία ευαισθησίας σε χημειοθεραπεία ChemoID, η οποία μετρά την απόκριση του CSLCs και το μεγαλύτερο μέρος των καρκινικών κυττάρων σε χημειοθεραπεία για τον προσδιορισμό της πλέον αποτελεσματικός συνδυασμός των αντικαρκινικών φαρμάκων για κακοήθεις όγκους του το νευρικό σύστημα.

σε αυτή τη μελέτη αναφέρουμε, για πρώτη φορά, η έρευνά μας με χρήση της ανάλυσης ChemoID για τη μέτρηση της ευαισθησίας και της αντίστασης του CSLCs και μεγαλύτερο μέρος των κυττάρων του όγκου καλλιεργήθηκαν από 2 βιοψίες των ανθρώπινων ependymoma προκλήθηκαν με διάφορους χημειοθεραπευτικούς παράγοντες που επίσης συσχετίζεται με την απόκριση των ξενομοσχευμάτων ζώων αντιμετωπίζεται με τις προβλεπόμενες φάρμακα και με την κλινική ανταπόκριση των ασθενών που έλαβαν θεραπεία.

Υλικά και Μέθοδοι

Αντιδραστήρια

Βενζυλική ισοθειοκυανικό (BITC) αγοράστηκε από την Sigma Chemical Co. (St. Louis, ΜΟ). Bevacizumab (Avastin), σισπλατίνη, οξαλιπλατίνη, αραβινοσίδιο-C, VP-16, ιρινοτεκάνη (Camptosar, CPT-11), βουσουλφάνη, μεθοτρεξάτη, αποκτήθηκαν οι κλινικές παράγοντες ποιότητας χημειοθεραπεία.

Ασθενείς

περίπτωση 1 είναι ένα 21-year-old αρσενικό ασθενή με διάγνωση διασκληρικής, ενδομυελική, και εξωμυελικά αναπλαστικό διάχυτη νωτιαίου ependymoma, WHO βαθμού ΙΙΙ. Περίπτωση 2 είναι ένα 5-μηνών θηλυκό ασθενή με διάγνωση αναπλαστικού WHO βαθμού ΙΙΙ ependymoma.

ChemoID δοκιμασία πραγματοποιήθηκε μετά από γραπτή συγκατάθεση του ασθενούς σύμφωνα με τα δεοντολογικά πρότυπα της Διακήρυξης του Ελσίνκι (1964, όπως τροποποιήθηκε τελευταία το 2008) του Παγκόσμιου Ιατρικού Συλλόγου. Οποιαδήποτε πληροφορία, συμπεριλαμβανομένων εικόνων, έχει ανώνυμα. Marshall Διοικητικό κριτική Πανεπιστήμιο Θεσμική (IRB) έχει εγκρίνει αυτήν την έρευνα στο πλαίσιο του πρωτοκόλλου # 326290. Οι συμμετέχοντες ή κηδεμόνες του συμμετέχοντα (σε περίπτωση ενός συμμετέχοντος παιδιού) παρέχεται γραπτή συγκατάθεσή τους για μια IRB εγκεκριμένο έντυπο συγκατάθεσης να συμμετάσχουν σε αυτή τη μελέτη, αφού εκπαιδεύονται για το ερευνητικό πρωτόκολλο. επιτροπές δεοντολογίας /IRB στο Πανεπιστήμιο Μάρσαλ ενέκρινε την εν λόγω διαδικασία συναίνεσης. Για τους συμμετέχοντες Παιδιά με τη μελέτη, γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από τον πλησιέστερο συγγενή, επιστάτες, φύλακες ή για λογαριασμό των ανηλίκων /παιδιών που εντάχθηκαν στη μελέτη σας.

εναιώρημα μεμονωμένων κυττάρων και Πρωτοβάθμια Cell Culture

Single-κυτταρικά εναιωρήματα από τις βιοψίες ependymoma παρασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας την gentleMACS διαστάσεως (Miltenyi, Auburn, CA), και C σωλήνες χρησιμοποιώντας ένα τυποποιημένο, ημι-αυτοματοποιημένο πρωτόκολλο που βασίζεται σε έναν συνδυασμό μηχανική διάσπαση ιστού και επώαση με 50% διάλυμα 0,025% θρυψίνη και Accutase (Καινοτόμες τεχνολογίες κυψελών, San Diego, CA). Τα κύτταρα σειριακά επιστρώθηκαν σε 24 φρεατίων, 12-φρεατίων, 6-φρεατίων, 10-cm αγωγή πιάτα και καλλιεργήθηκαν για συρροής σε μέσο RPMI-1640 συμπληρωμένο με 5% ακτινοβολημένα, θερμικά απενεργοποιημένο, ορίζεται εμβρυϊκό βόειο ορό (Thermofisher /Hyclone), και 50 U της πενικιλίνης και 5 μg στρεπτομυκίνης /mL μέσου (Thermofisher /Mediatech).

Τρισδιάστατο βιοαντιδραστήρα CSLCs Πολιτισμού

Μια υδροδυναμική εστίαση βιοαντιδραστήρα (HFB) (Celdyne, Χιούστον TX ) χρησιμοποιήθηκε όπως περιγράφεται προηγουμένως να πολλαπλασιάζονται επιλεκτικά CD133 (+) καρκινικά βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν [8]. Μέσα καλλιέργειας, οξυγόνωση, την ταχύτητα, τη θερμοκρασία και CO

2 διατηρήθηκαν σταθερά σταθερή για δέκα ημέρες.

Τα κύτταρα μετρήθηκαν και 1 χ 10∧6 κύτταρα τοποθετήθηκαν στο περιστρεφόμενο δοχείο ορίζεται σε 25 στροφές ανά λεπτό με ροή αέρα ορίζεται σε 20%. Τα κύτταρα στη συνέχεια απομακρύνθηκαν και μετρήθηκαν πάλι χρησιμοποιώντας αποκλεισμό trypan blue για να καθοριστεί η κυτταρική βιωσιμότητα και ο αριθμός των κυττάρων και καλλιεργήθηκαν σε 96 φρεάτια για δοκιμή χημειοευαισθησίας. Τα κύτταρα επωάστηκαν επίσης με φθορίζοντα αντισώματα για φαινοτυπική χαρακτηρισμό [8].

ταξινόμηση κυττάρων

Μέχρι 1 × 10∧7 κύτταρα ταξινομήθηκαν με μαγνητικό-ενεργοποιούμενο κυτταρικό διαχωρισμό του συστήματος (MACS) , το οποίο αποτελείται από μαγνητικά σφαιρίδια συζευγμένα με ένα αντίσωμα έναντι CD133 (Miltenyi, Auburn, CA). Εν συντομία, τα κύτταρα συλλέχθηκαν χρησιμοποιώντας 0.25% θρυψίνη, σφαιροποιήθηκαν και σημάνθηκαν με CD133 /1 βιοτίνη και CD133 /2-ΡΕ. Τα κύτταρα πλύθηκαν και σημάνθηκαν με αντι-βιοτίνη μαγνητικά σφαιρίδια, και στη συνέχεια διέρχεται από μία μαγνητική στήλη όπου CD133 (+) Κύτταρα διατηρήθηκαν, ενώ μη σημασμένο κύτταρα περνούν μέσω της στήλης. Το CD133 (+) διατήρησε κύτταρα εκλούστηκαν από τις στήλες μετά την απομάκρυνση από το μαγνήτη. Θετικά και αρνητικά κύτταρα στη συνέχεια αναλύθηκαν με FACS για την καθαρότητα.

Μελέτες Κυτταρομετρίας Ροής

Τα κύτταρα αναλύθηκαν από τα αντιγονικά κριτήρια χρησιμοποιώντας αντι-CD34 (Milteny Biotech, Auburn, CA), -CD38 ( Milteny Biotech, Auburn, CA), -CD44 (BD Bioscience, Sparks, MD), -CD117 (Milteny Biotech, Auburn, CA), -CD133 /2 (prominin1) (Milteny Biotech, Auburn, CA), -Oct3 /4 (BD Bioscience, Sparks, MD), και -Nanog (BD Bioscience, Sparks, MD). Εν συντομία, τα κύτταρα αποκολλήθηκαν χρησιμοποιώντας 0.02% EDTA σε PBS και σύμπηκτα (10 λεπτά στις 1000 στροφές ανά λεπτό), πλύθηκε σε 0.1% BSA σε PBS 1Χ σε 4 ° C και επωάστηκαν σε ένα διάλυμα 1 mg αντισώματος 9 mL 0,1% BSA σε 1Χ PBS. Τα κύτταρα πλύθηκαν στο ίδιο διάλυμα άπαξ και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μια ροή C6 Accuri κυτταρόμετρο (BD Biosciences, San Jose, CA).

ChemoID Δοκιμασία

Ευαισθησία στη χημειοθεραπεία αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας μία δοκιμασία βιωσιμότητας (WST8) επί 1 × 10∧3 κύτταρα επιστρώνονται σε 5 αντίγραφα σε πλάκες 96 φρεατίων. Εν συντομία, ίσο αριθμό μεγαλύτερο μέρος των κυττάρων του όγκου που αναπτύσσονται σε μονοστιβάδα και CSLCs καλλιεργούνται στο βιοαντιδραστήρα, μετρήθηκαν και σπάρθηκαν χωριστά σε 96-φρεατίων και επωάστηκαν στους 37 ° C για 24 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια προκλήθηκαν για 1 ώρα με παλμό με ένα πάνελ των αντικαρκινικών φαρμάκων, όπως επιλέγεται από τον ογκολόγο ώστε να μιμείται τη μέση κλινική πρόγραμμα έγχυσης χημειοθεραπεία.

Για να μελετηθεί η επίδραση της BITC επί χημειοευαισθητοποίηση καρκινικών κυττάρων στη χημειοθεραπεία φάρμακα, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με μία ώρα παλμό 5-30 BITC μΜ ακολουθούμενη από μία ώρα από τα διάφορα αντικαρκινικά φάρμακα. Κάθε αντικαρκινικό φάρμακο δοκιμάστηκε σε ένα εύρος δόσεων, συμπεριλαμβανομένης της κλινικώς σχετική δόση.

Μια δοκιμασία WST8 διεξήχθη 48 ώρες μετά την χημειοθεραπεία για την αξιολόγηση της βιωσιμότητας των κυττάρων όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12]. Ένα διάγραμμα δόσης-απόκρισης αναπτύχθηκε στην οποία τα δείγματα βαθμολογήθηκαν ως απόκριση (κυτταρική επιβίωση 0-30%), το ενδιάμεσο (30-60% επιβίωση των κυττάρων), και δεν ανταποκρίνονται (60-100% επιβίωση των κυττάρων).

Ο περιορισμός Δοκιμασία Αραίωση Ογκογονικά σε ανοσοποιητικού Ελλιπή ποντίκια

Μια σειρά από 1 × 10∧2, 1 × 10∧3, 1 × 10∧4, και 1 × 10∧5 ependymoma κύτταρα από τον ασθενή 1 έλαβαν υποδόρια ένεση σε 5 θύμο αδένα ανοσοανεπάρκεια nude

nu /nu ποντικούς ανά ομάδα. Εν συντομία, ένας ίσος αριθμός των γονικών μεγαλύτερο μέρος των κυττάρων του όγκου που αναπτύσσονται σε μονοστιβάδα 2D, CD133 (+) τρισδιάστατα καλλιεργούνται στο βιοαντιδραστήρα hydrofocusing, και CD133 (+) MACSorted CSLCs ενέθηκαν με 100 μL του matrigel στο πλευρό του NOD-

Scid

ποντίκια και σε σύγκριση με την αύξηση των αρνητικών κυττάρων CD133 για 3 μήνες.

Μελέτη χημειοθεραπεία ζώων

Όλες οι μελέτες σε ζώα έχουν διεξαχθεί μετά την έγκριση από την Μάρσαλ Πανεπιστημίου IACUC, το πρωτόκολλο # 373017. Οι επιδράσεις των χημειοθεραπειών σε διαλογή in vitro με τον προσδιορισμό ChemoID δοκιμάστηκε σε βιοψίες ανθρώπινων όγκων που ήταν ξενομόσχευμα στο πλευρό ενός NOD-

Scid

μοντέλο ποντικού. 1 × 10∧6 κύτταρα ependymoma αναμίχθηκαν σε 100 μL του matrigel (BD Biosciences, San Jose, CA) εγχέεται υποδόρια στο πλευρό του 10 αθυμικών, NOD.Cg-Prkdc

Scid

ll2rgtm1wjl /SzJ ανοσοανεπαρκών ποντικών ( NOD-

Scid

) /ομάδα και αναπτύχθηκαν για 10 εβδομάδες ή μέχρι 100 mm∧3. Τα ποντίκια τυχαιοποιήθηκαν σε διάφορες ομάδες θεραπείας και ελέγχου και η χημειοθεραπεία χορηγήθηκε με ενέσεις ενδοπεριτοναϊκή (ε.π.) σε 200 μλ ως εξής σε μία περίοδο 4 εβδομάδων: 1) Ομάδα # 1, ομάδα ελέγχου με πρωτογενή κύτταρα όγκου εγχέεται πλευρό και λήψη ε.π. αποστειρωμένα ενέσεις φυσιολογικού ορού. Ομάδα # 2, Πειραματικής Ομάδας με ένεση ί.ρ. με το λιγότερο αποτελεσματικό χημειοθεραπεία όπως προσδιορίζεται από τη δοκιμασία

in vitro

ChemoID. Ομάδα # 3, Πειραματικής Ομάδας με ένεση ί.ρ. με τον πιο αποτελεσματικό χημειοθεραπεία, όπως καθορίζεται από το

in vitro

ChemoID δοκιμασία. Ομάδα # 4, Πειραματικής Ομάδας με ένεση ί.ρ. με τη δεύτερη πιο αποτελεσματική χημειοθεραπεία όπως καθορίζεται από το

in vitro

ChemoID δοκιμασίας. Η ομάδα # 5, Πειραματικής Ομάδας με ένεση ί.ρ. με τον πιο αποτελεσματικό συνδυαστική χημειοθεραπεία, όπως καθορίζεται από το

δοκιμασία in vitro

ChemoID.

δόσεις του ποντικιού Χημειοθεραπεία υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας μια επιφάνεια σώματος (BSA) μέθοδος κανονικοποίησης [13] από την κλινική δόση και επαληθεύονται σύμφωνα με τις δόσεις που καθορίστηκαν προηγουμένως από την αναζήτηση βιβλιογραφίας.

ευθανασία

τα ζώα θανατώθηκαν μετά από τις τρέχουσες κατευθυντήριες γραμμές που καθορίζονται από την τελευταία έκθεση της Ομάδας AVMA για ευθανασία με τη χρήση εισπνοή CO2 και ασφυξία που ακολουθείται από του τραχήλου της μήτρας εξάρθρωση.

στατιστική ανάλυση

η στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση του στατιστικού λογισμικού IBM SPSS. Τα αποτελέσματα για κάθε παραλλαγή των διαφόρων πειραματικών σχεδιασμών αντιπροσωπεύουν ένα μέσο όρο 3 διαφορετικά πειράματα. Τα δεδομένα από 5 μετρήσεις κατά μέσο όρο? ο συντελεστής διακύμανσης μεταξύ αυτών των τιμών δεν υπερέβη ποτέ το 10%. Οι μέσες τιμές και τυπικά σφάλματα υπολογίστηκαν για κάθε σημείο από τα συνενωμένα κανονικοποιηθεί για τον έλεγχο των δεδομένων. Στατιστική ανάλυση της σημασίας των αποτελεσμάτων έγινε με ANOVA 1 δρόμου.

σ

τιμές μικρότερες από 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.

Αποτελέσματα

Ασθενής 1 Ιστορία και επιλογής των χημειοθεραπείες με ChemoID Δοκιμασία

Ένα σωματικά δραστήριοι 17 year-old άνδρες παρουσιάζονται τον Οκτώβριο του 2005 με παραισθησία στα πόδια του και μια μάλλον σοβαρή οξυδερκής απώλεια. Αυτό έγινε σταδιακά χειρότερα το Δεκέμβριο του 2005 ανεβαίνει στα πόδια του με μάλλον σοβαρή μούδιασμα στο δεξί πόδι και τον πόνο στο αριστερό του πόδι, από τα μέσα του μηρού μέχρι τα μέσα του μοσχαριού έσω. Κατά την εξέταση δεν είχε εστιακό αδυναμία σε όλη την άνω και κάτω άκρα του. Είχε υποαλγησία με μερική αισθητήρια επίπεδο στην άνω θωρακική μοίρα της σπονδυλικής στήλης προς τα κάτω. Είχε, επίσης, σοβαρή απώλεια της ιδιοδεκτικότητας στα πόδια και τα δάχτυλα των ποδιών του. Μαγνητική τομογραφία (MRI) της αυχενικής μοίρας έδειξε την παρουσία του μια ανώμαλη μάζα Ενίσχυση, η οποία εκτείνεται από τα μέσα του C5 σε κατώτερη C7 (4.5 σε μήκος × 1.0 × 2.0 cephalocaudal και προσθιοπίσθια διάσταση) που προκαλείται συμπίεση του νωτιαίου μυελού (Εικόνα 1Α). Μαγνητική τομογραφία της θωρακικής μοίρας έδειξε μια βελτίωση της βλάβης σε T2-3 (1.5 σε μήκος × 0,6 × 0,6 cm σε προσθιοπίσθια και εγκάρσια διάσταση) με αρκετά άλλα μικρότερα οζώδη μάζες, που φαίνεται καλύτερα στο Τ2 σταθμισμένη ακολουθία, η οποία εκτείνεται σε όλο το θώρακα επίπεδο για να Τ11 (Εικόνα 1Β).

Α) Απεικόνιση Μαγνητικού Συντονισμού (MRI) της αυχενικής μοίρας που δείχνει την παρουσία ενός ενίσχυσης μάζα, η οποία εκτείνεται από τα μέσα του C5 σε κατώτερη C7 (4.5 σε μήκος × 1.0 × 2.0 cephalocaudal και διάσταση προσθιοπίσθια) και προκαλώντας συμπίεση του νωτιαίου μυελού. Β) μαγνητική τομογραφία της θωρακικής μοίρας δείχνει μια βελτίωση της βλάβης σε T2-3 (1.5 σε μήκος × 0,6 × 0,6 cm σε προσθιοπίσθια και εγκάρσια διάσταση) με αρκετά άλλα μικρότερα οζώδη μάζες, που φαίνεται καλύτερα στο Τ2 σταθμισμένη ακολουθία, η οποία εκτείνεται σε όλο το θώρακα επίπεδο για Τ11. Γ) αιματοξυλίνη και ηωσίνη χρώση ενός τμήματος όγκου που δείχνει ένα γενικό κυρίαρχο πυκνή κυτταρικό συστατικό, με πρωτόγονα πυρηνικά χαρακτηριστικά, μιτωτική δραστηριότητα, νέκρωση και αγγειακό πολλαπλασιασμό. Η παρουσία καλά σχηματισμένα, προφανές περιαγγειακή pseudorosettes (με vasocentric μοτίβο, περιαγγειακή αποπυρηνικοποιημένη ζώνη, και κλασικό λεπτό νευρογλοιακά διαδικασίες που ακτινοβολεί από /προς το τοίχωμα του αγγείου) βρέθηκαν υποστηρίζουν τη διάγνωση της διασκληρικής, εξωμυελικών αναπλαστικό διάχυτη νωτιαίου ependymoma, βαθμού ΠΟΥ ΙΙΙ.

Η

Ο ασθενής έλαβε μια πεταλεκτομή το Δεκέμβριο του 2005 σε C5, C6, C7 και με μερική εκτομή του όγκου στο μικροσκόπιο χρησιμοποιώντας μικροχειρουργικές τεχνικές. Μετά την χειρουργική επέμβαση, ο ασθενής υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ακτινοβολία και τεμοζολομίδη

Η μορφολογική ανάλυση των τμημάτων ιστολογίας χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη & amp.? Ηωσίνη έδειξε μια συνολική κυρίαρχη πυκνή κυτταρικού συστατικού, με πρωτόγονα και πλειομορφικές πυρήνες, αυξημένη μιτωτική ρυθμό και την απόπτωση, και εστίες με πολλαπλασιασμό μικροαγγειακή. Η παρουσία καλά σχηματισμένα, προφανές περιαγγειακή pseudorosettes (με vasocentric μοτίβο, περιαγγειακή αποπυρηνικοποιημένη ζώνη, και κλασικό λεπτό νευρογλοιακά διαδικασίες που ακτινοβολεί από /προς το τοίχωμα του αγγείου) βρέθηκαν να υποστηρίζουν τη διάγνωση της αναπλαστικό διάχυτη νωτιαίου ependymoma, WHO βαθμού ΙΙΙ. Το σχήμα 1C δεικνύει την αιματοξυλίνη και ηωσίνη χρώση ενός τμήματος όγκου κατά τη διάγνωση του 2005.

Τμήματα του όγκου αξιολογήθηκαν με τεχνικές ανοσοϋπεροξειδάσης με αντίστοιχα τμήματα ελέγχου χρώση. Ο όγκος έδειξε θετική χρώση με αντισώματα σε νευρωνικά ειδική ενολάση, βιμεντίνη, S-100, και GFAP. Ασθενής χρώση εμφανίστηκε με τα αντισώματα έναντι ακτίνης. Εστιακή χρώση συνέβη με αντισώματα σε επιθηλιακό αντιγόνο μεμβράνης, κυτοκερατίνης AE1 /AE3, και συναπτοφυσίνη. Ο όγκος ήταν αρνητικός για λευκοκυττάρων κοινό αντιγόνο, δεσμίνη, και μυογενίνη. Επιπλέον, ένα τμήμα βάφονται με PAS έδειξε μια εστιακή PAS-θετικό υλικό ινιδικό. Τμήματα και μπλοκ όγκου, αποστέλλεται επίσης στην Βιοπαθολογίας Κέντρο (BPC) του Παιδικού Oncology Group (COG) ήταν δύο neuropathologists επανεξεταστεί ανεξάρτητα την υπόθεση και επιβεβαίωσε τη διάγνωση της αναπλαστικό ependymoma, WHO βαθμού ΙΙΙ.

Μετά από υποτροπή και εξέλιξη, η ασθενής έλαβε συγκρότημα σχήμα χημειοθεραπείας τον Ιανουάριο του 2006 και τον Μάρτιο του 2006 με κυκλοφωσφαμίδη, θαλιδομίδη, celecoxib ακολουθούμενη από ετοποσίδη, θαλιδομίδη και celecoxib. χημειοθεραπεία ολοκληρώθηκε το Σεπτέμβριο του 2006, αλλά τον Αύγουστο του ασθενούς 2007 είχε εκ νέου ανάπτυξη του όγκου σε Τ7 Τ8 για το οποίο υποβλήθηκε σε ρομποτική θεραπεία ακτινοχειρουργική. Ο ασθενής είχε άλλη debulking χειρουργική επέμβαση, τον Απρίλιο του 2008, αλλά αργότερα, το Δεκέμβριο του 2008 είχε προοδευτικό μούδιασμα στα πόδια του, μαζί με τον πόνο στην πλάτη με μαγνητική τομογραφία που εμφανίζει υποτροπή στη χειρουργική περιοχή (Εικόνα 2Α), καθώς και την οσφυϊκή μοίρα της σπονδυλικής στήλης. Στη συνέχεια καθαρίζονται και πάλι με τεμοζολομίδη, αλλά δεν είχε καμία ανταπόκριση στη θεραπεία.

Α) 2009 MRI της αυχενικής μοίρας της σπονδυλικής στήλης που εμφανίζει υποτροπή στη χειρουργική περιοχή. Β) 2009 MRI της θωρακικής μοίρας που δείχνει την εξέλιξη της κύριας βλάβης μετρώντας 23,9 mm και η εμφάνιση πολλών άλλων μικρότερων αλλοιώσεων. Γ και Δ) 2010 MRI της αυχενικής μοίρας της σπονδυλικής στήλης και των θωρακικών δείχνει την υποχώρηση του όγκου μετά από μια θεραπεία με ιρινοτεκάνη και bevacizumab.

Η

Τον Μάρτιο του 2009, λόγω της εξέλιξης της νόσου είχε ένα θώρακα πεταλεκτομή και εκτομή του διασκληρικής ενδομυελική όγκου. Είχε σοβαρή συμπίεση του νωτιαίου μυελού και άρχισε να έχει αδυναμία στα πόδια του. Λόγω περαιτέρω υποτροπής, ο ασθενής είχε τότε μια άλλη debulking χειρουργική επέμβαση τον Ιούλιο του 2009. Έλαβε, επίσης, οξαλιπλατίνη και θεραπεία ετοποσίδη τον Ιούλιο και τον Αύγουστο του 2009, αλλά ο όγκος προχώρησε ακόμη περισσότερο (Σχήμα 2Β).

Τα κατάλληλα ενημερωμένη συγκατάθεση υπεγράφη και κατά το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης debulking Ιουλίου 2009, ελήφθη ένα στείρο βιοψία για την αξιολόγηση της ευαισθησίας των κυττάρων του όγκου (bulk του όγκου και CSLCs) προς πρότυπο-of-care χημειοθεραπευτικών φαρμάκων με χρήση του προσδιορισμού ChemoID μας. Η βιοψία τοποθετήθηκε σε RPMI-1640 στείρα μέσα και ιστός διασπάσθηκε στο εργαστήριο μας σε ένα ενιαίο-κυτταρικό εναιώρημα με τη χρήση ενός GentleMACS διαστάσεως ιστού (Miltenyi, Aubourn, CA). Το εναιώρημα ependymoma μονοκύτταρους καλλιεργήθηκε σε RPMI-1640 με την παρουσία 5% ακτινοβοληθεί, θερμικά απενεργοποιημένο, ορίζεται εμβρυϊκό βόειο ορό, στρεπτομυκίνη και πενικιλίνη και τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν ως μια μονοστοιβάδα επί 15 ημέρες. Τα κύτταρα του ανοσοφαινότυπου με τη ροή κυτταρομετρίας χρησιμοποιώντας αντισώματα κατά του CD34, CD38, CD44, CD117, CD133, OCT3 /4, και Nanog.

Τα κύτταρα ependymoma βρέθηκαν θετικά σε OCT3 /4 (2,73%), Nanog (0,95 %), CD133 (49,93%), CD117 (36,81%), και CD44 (20,39%) σε σύγκριση με ένα αντίσωμα ελέγχου ισοτύπου (σχήμα S1 ΑΕ). Μια διπλή χρώση των CD34 και CD38 έδειξε την παρουσία 1.88% των κυττάρων CD34 + /CD38 +, και 78,4% CD34 + /CD38- κύτταρα (Σχήμα S1 Ρ).

Για να επεκτείνει την CSLC πληθυσμός CD133 + κυττάρων από το επενδύμωμα πρωτογενή καλλιέργεια, τα κύτταρα επενδύμωμα καλλιεργήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [8]. 1 × 10∧6 των ependymoma κύτταρα από μια μονοστοιβάδα πρωτογενούς καλλιέργειας αναπτύχθηκαν για δέκα ημέρες, χρησιμοποιώντας Υδροδυναμική Εστίαση βιοαντιδραστήρα (HFB) (Celdyne, Houston, TX) [8]. Τα κύτταρα ependymoma καλλιεργήθηκαν στον βιοαντιδραστήρα σχηματίζονται συστάδες κυττάρων (Εικόνα 3Α), που επεκτάθηκαν 14,7 φορές (Πίνακας 1) και εμφανίστηκε να είναι 95,93% CD133 θετική μετά από 10 ημέρες καλλιέργειας στο βιοαντιδραστήρα (Σχήμα S1 C, εμπλουτισμένο CSLCs).

Α) αντίθεσης φάσης εικόνα από ένα σύμπλεγμα εμπλουτισμένο CSLCs μετά από 7 ημέρες καλλιέργειας σε βιοαντιδραστήρα hydrofocusing. Β) με ανοσοανεπάρκεια γυμνά ποντίκια (ηυ /ηυ) εγχύθηκαν με 1 χ 10∧2 ependymoma κύτταρα MacSorted CD133 (+) κύτταρα ή CD133 (+) κύτταρα ependymoma αναπτύχθηκαν σε βιοαντιδραστήρα hydrofocusing, με τη βοήθεια 100 μι Matrigel στο πλευρό σχηματίζονται ένας όγκος μέσα σε 3 μήνες, σε σύγκριση με CD133 (-) κύτταρα

η

για να επαληθεύσετε τον όγκο έναρξη ικανότητα των HFB καλλιεργούνται κύτταρα, που εγχέεται 5 του ανοσοποιητικού ανεπάρκεια γυμνά ποντίκια /ομάδα μια σειρά από 1. × 10∧2, 1 × 10∧3, 1 × 10∧4, και 1 χ 10∧5 κύτταρα αναπτύσσονται στην HFB (-96% CD133 +) και συγκρίθηκε η ανάπτυξή τους σε ένα ίσο αριθμό CD133 (+) κύτταρα και MACsorted CD133 (-) κυττάρων για 3 μήνες. Παρατηρήσαμε ότι και οι δύο 1 × 10∧2 MacSorted CD133 (+) κύτταρα ή ο CD133 (+) από τον βιοαντιδραστήρα αυξήθηκαν σε όλες τις ανοσοποιητικού ανεπαρκή ποντίκια ενέθηκαν και σχημάτισε ένα ψηλαφητό όγκο μέσα σε 12 εβδομάδες (Σχήμα 3Β).

Για να εκτελεστεί ο προσδιορισμός ChemoID συγκρίσιμο αριθμό κυττάρων (1 χ 10∧5) μεγαλύτερο μέρος των κυττάρων του όγκου που καλλιεργούνται ως μονοστιβάδα 2D και CSLCs εμπλουτισμένο στο βιοαντιδραστήρα [8] ξεχωριστά επιστρώθηκαν σε πλάκες 96 πηγαδιών (n-5 αντίγραφα) και υποβλήθηκαν σε θεραπεία για μια ώρα με μια σειρά αντικαρκινικών φαρμάκων σε ένα εύρος συγκεντρώσεων συμπεριλαμβανομένης της κλινικά σχετική δοσολογία (Πίνακας 2). ChemoID δοκιμασία διεξήχθη χρησιμοποιώντας ένα πάνελ των φαρμάκων που αποτελείται από σισπλατίνη, οξαλιπλατίνη, αραβινοσίδιο-C, VP-16, βουσουλφάνη, μεθοτρεξάτη, ιρινοτεκάνη και bevacizumab όπως επιλέγεται από τον θεράποντα ογκολόγο.

Η

Ευαισθησία στη χημειοθεραπεία εκτιμήθηκε σε 48 ώρες από την δοκιμασία WST8 βιωσιμότητας. Ήταν κατηγοριοποιούνται ως ακολούθως με βάση το ποσοστό των μη βιώσιμων κυττάρων: αποκρίνονται (κυτταρική επιβίωση 0-40%), το ενδιάμεσο (40-70% επιβίωση των κυττάρων), και δεν ανταποκρίνονται (επιβίωση κυττάρων 70-100%). Η δοκιμασία WST8 διεξήχθη τρεις ξεχωριστές φορές με αντίγραφα n-5 και /φαρμάκου /δόση κάθε φορά.

ChemoID προσδιορισμού έδειξαν ότι τα κύτταρα που αναπτύχθηκαν σε ependymoma μονοστιβάδα και αντιπροσωπεύουν το μεγαλύτερο μέρος των καρκινικών κυττάρων ήταν ευαίσθητα σε κλινικά σημαντικές δόσεις σισπλατίνης, ιρινοτεκάνη, βουσουλφάνη, και ένα συνδυασμό ιρινοτεκάνη και bevacizumab σε στατιστικά σημαντικό τρόπο (ρ & lt? 0,05). Είναι ενδιαφέρον ότι οι CSLCs ήταν ευαίσθητα σε ένα συνδυασμό ιρινοτεκάνη και bevacizumab (ρ & lt? 0,05), ενδιαμέσως ευαίσθητα στη σισπλατίνη και ιρινοτεκάνη, αλλά δεν είναι ευαίσθητοι στην βουσουλφάνη. Από την άλλη πλευρά, τόσο οι CSLCs και το μεγαλύτερο μέρος των κυττάρων του όγκου δεν ήταν αποκριτικά στη μεθοτρεξάτη, οξαλιπλατίνη, αραβινοσίδιο-C, και VP-16 (Σχήμα 4).

1 × 10∧3 μεγαλύτερο μέρος των κυττάρων του όγκου ή CSLCs επιστρώθηκαν σε 5 αντίγραφα σε πλάκες 96-φρεατίων υποβλήθηκαν σε πρόκληση για 1 ώρα με παλμό με ένα πάνελ των αντικαρκινικών φαρμάκων που υποδεικνύεται από τον ογκολόγο. Μια δοκιμασία WST-8 εκτελέστηκε 48 ώρες μετά την χημειοθεραπεία για να αξιολογήσει τη βιωσιμότητα των κυττάρων. Τα δεδομένα απεικονίζονται σε γραφική παράσταση ράβδου ως απόκριση (η κυτταρική βιωσιμότητα 0-40%), μέτρια απόκριση (η κυτταρική βιωσιμότητα 40-70%), και δεν ανταποκρίνονται (70-100% βιωσιμότητα των κυττάρων). Ανοιχτό γκρι γραμμή αντιπροσωπεύει την ευαισθησία του CSLCs στη χημειοθεραπεία σε σχέση με το αρνητικό χωρίς θεραπεία κύτταρα ελέγχου. Σκούρο γκρι γραμμή αντιπροσωπεύουν ευαισθησία μεγαλύτερο μέρος των καρκινικών κυττάρων στη χημειοθεραπεία σε σχέση με μη επεξεργασμένα αρνητικά κύτταρα ελέγχου. Τα αντικαρκινικά φάρμακα δοκιμάζονται υποδεικνύεται στο κάτω μέρος του διαγράμματος. Στατιστική ανάλυση της σημασίας των αποτελεσμάτων έγινε με ANOVA 1 δρόμου. Οι αστερίσκοι υποδεικνύουν

σ

τιμές μικρότερες από 0.05.

Η

Λόγω της έλλειψης ανταπόκρισης σε μια διαχείριση οξαλιπλατίνη και ετοποσίδη δοθεί τον Αύγουστο του 2009 (Εικόνα 2Β) (η οποία ξεκίνησε πριν από τη λήψη των αποτελεσμάτων από τη δοκιμασία ChemoID), ο ασθενής υποβλήθηκε τον Οκτώβριο του 2009 μια θεραπεία με bevacizumab και ιρινοτεκάνη, η οποία χορηγήθηκε κάθε δύο εβδομάδες για 6 μήνες. Σε συνέχεια μαγνητική τομογραφία Μάη 2010 ο ασθενής έδειξε αρχική υποχώρηση της νόσου υπόλοιπο ελεύθερο από την εξέλιξη της νόσου για 18 μήνες (Σχήμα 2 Γ και Δ). Αυτό αντιστοιχεί στην μεγαλύτερη εξέλιξη της νόσου ελεύθερη περίοδο παρατηρήθηκε σε αυτόν τον ασθενή χωρίς σημαντική χειρουργική επέμβαση de-διογκωτικοί.

Επανεμφάνιση της ανάπτυξης του όγκου μετά από 18 μήνες χωρίς νόσο εξέλιξης μας οδήγησε να εξερευνήσουν νέες θεραπευτικές προσεγγίσεις για τη θεραπεία αυτής της ασθενούς Καρκίνος. Από αυτή την άποψη, ο συνδυασμός χημειοθεραπείας διερευνήθηκε προκειμένου να προσδιοριστούν φυσικές ενώσεις που μπορεί να αυξήσουν την κλινική αποτελεσματικότητα των αντικαρκινικών φαρμάκων.

BITC έχει αποδειχθεί σε άλλα εργαστήρια [14], [15] για την αύξηση της τηςχημειοευαισθησίας του καρκίνου κύτταρα. Έχουμε παρατηρήσει πρόσφατα στο εργαστήριο μας (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα) ότι βενζυλο ισοθειοκυανικό (BITC) αυξάνει ειδικώς την χημειοευαισθησία του CD133 θετικών καρκινικών κυττάρων. Επειδή τα πρωτογενή κύτταρα ependymoma των ασθενών μας εμφανίζεται ένα υψηλό ποσοστό των κυττάρων που είναι θετικά για CD133, θέλαμε να ελεγχθεί η υπόθεση ότι BITC θα μπορούσε να αυξήσει χημειοευαισθησία τους να ιρινοτεκάνη και bevacizumab. Βρήκαμε με τη δοκιμασία ChemoID ότι αυξανόμενες συγκεντρώσεις του BITC που κυμαίνονται από 2,5 μΜ έως 20 μΜ μείωσε τη βιωσιμότητα του CD133 (+) κύτταρα ependymoma του ασθενούς 1 από 90% έως 62% κατά στατιστικώς σημαντικό τρόπο (Σχήμα 5Α). δοκιμασία ChemoID προσδιορίζεται επίσης ότι ο συνδυασμός της ιρινοτεκάνης και ενός μη-τοξική συγκέντρωση 10 μΜ BITC μείωσε την βιωσιμότητα των κυττάρων ependymoma από 60% έως 40% (πάνω από 40% περισσότερο νόσο ευαίσθητη σε σύγκριση με μη BITC κατεργασμένα κύτταρα) (Σχήμα 5 Β) . Επιπλέον, ο συνδυασμός της ιρινοτεκάνης και bevacizumab με BITC μειωθεί ακόμη περισσότερο την βιωσιμότητα των κυττάρων ependymoma έως 30% (Σχήμα 5 Β). Ο ασθενής υποβλήθηκε σε αγωγή με ιρινοτεκάνη και bevacizumab, αλλά αυτή τη φορά με τον συνδυασμό 2 κάψουλες /ημέρα μιας λαχανικών Απόσπασμα Τριπλή Δράση σταυρανθή περιέχουν υψηλή συγκέντρωση BITC (LifeExtension, https://www.lef.org), για δύο μήνες. Μετά την θεραπεία συνδυασμού της ιρινοτεκάνης, bevacizumab και το συμπλήρωμα των σταυρανθών λαχανικών, έχουμε παρατηρήσει 4 εκ παλινδρόμησης (που αντιστοιχεί σε παλινδρόμηση 50%) των βλαβών στη θωρακική και αυχενική περιοχή [σύγκρινε Σχήμα 5C (σε επανάληψη) για να Σχήμα 5D (μετά τη θεραπεία)]. Επιπλέον, αναφέρουμε ότι ο ασθενής ήταν σε θέση να ανεχθεί την όλη πορεία των ιρινοτεκάνη και bevacizumab χημειοθεραπευτικό σχήμα με λιγότερη κούραση και την ανοχή στο κρύο.

Α) 1 × 10∧3 CSLCs απλώνονται σε 5 αντίγραφα σε 96 φρεατίων πλάκες αμφισβητηθεί για 1 ώρα με παλμό με 2,5, 10, και 20 μΜ BITC. Μία δοκιμασία WST-8 εκτελέστηκε 48 ώρες μετά τις θεραπείες για την αξιολόγηση της βιωσιμότητας των κυττάρων. Β) 1 × 10∧3 CSLCs επιστρώθηκαν σε 5 αντίγραφα σε πλάκες 96-φρεατίων υποβλήθηκαν σε πρόκληση για 1 ώρα με παλμό με 10 μΜ BITC ακολουθούμενη από 1 ώρα παλμό με 0,5 mM CPT-11. Μία δοκιμασία WST-8 εκτελέστηκε 48 ώρες μετά την χημειοθεραπεία για την αξιολόγηση της βιωσιμότητας των κυττάρων. Τα δεδομένα απεικονίζονται σε γραφική παράσταση ράβδου ως απόκριση (η κυτταρική βιωσιμότητα 0-40%), μέτρια απόκριση (η κυτταρική βιωσιμότητα 40-70%), και δεν ανταποκρίνονται (70-100% βιωσιμότητα των κυττάρων). Ανοιχτό γκρι γραμμή αντιπροσωπεύει την ευαισθησία του CSLCs στη χημειοθεραπεία σε σχέση με το αρνητικό χωρίς θεραπεία κύτταρα ελέγχου. Σκούρο γκρι γραμμή αντιπροσωπεύουν ευαισθησία μεγαλύτερο μέρος των καρκινικών κυττάρων στη χημειοθεραπεία σε σχέση με μη επεξεργασμένα αρνητικά κύτταρα ελέγχου. Στατιστική ανάλυση της σημασίας των αποτελεσμάτων έγινε με ANOVA 1 δρόμου. Οι αστερίσκοι υποδεικνύουν

σ

τιμές μικρότερες από 0.05. C) 2012 MRI του τραχήλου της μήτρας και θωρακικής μοίρας που εμφανίζει υποτροπή μετά από μια περίοδο χωρίς εξέλιξη 18 μήνες. Δ) 2012 MRI της αυχενικής μοίρας της σπονδυλικής στήλης που παρουσιάζουν εμφανή υποχώρηση του όγκου της θωρακικής μοίρας της σπονδυλικής στήλης βλάβης μετά από συνδυασμένη θεραπεία με ιρινοτεκάνη (CPT11), bevacizumab (Avastin), και συμπλήρωση BITC.

Η

Η αποτελεσματικότητα των χημειοθεραπειών προβληθεί σε vitro με τη δοκιμασία ChemoID ελέγχθηκαν επί των ependymoma κύτταρα του ασθενούς 1 που ήταν ξενομόσχευμα σε έναν NOD-

Scid

μοντέλο ποντικού (Σχήμα 6 Α και Β).