Αφηρημένο

Σελήνιο πρωτεΐνη δέσμευσης 1 (SBP1, SELENBP1, hsp56) είναι ένα σεληνίου σχετίζεται με πρωτεΐνη φαίνεται να είναι σε χαμηλότερα επίπεδα σε όγκους, και χαμηλότερα επίπεδα της είναι συχνά προγνωστικά της κακής κλινικό αποτέλεσμα. Η διάκριση νωχελικός από επιθετικό καρκίνο του προστάτη είναι μια μεγάλη πρόκληση στη διαχείριση της νόσου. Συσχετίσεις μεταξύ των επιπέδων SBP1, το βαθμό του όγκου και υποτροπή της νόσου μετά από προστατεκτομή ερευνήθηκαν από διπλή απεικόνιση ανοσοφθορισμού χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες ιστών που περιέχουν ιστό από 202 ασθενείς με καρκίνο του προστάτη που παρουσίασαν βιοχημική (PSA) υποτροπή μετά από προστατεκτομή και 202 συμφωνημένα ασθενείς της ομάδας ελέγχου των οποίων ο καρκίνος δεν είχε επαναληφθεί. Τα δείγματα συνοδεύονται από την ηλικία, την εθνικότητα, παθολογικές στάδιο και βαθμό Gleason και εικόνες ποσοτικά χρησιμοποιώντας το σύστημα πολυφασματική απεικόνιση Vectra. Φθορίζουσες σημάνσεις έγιναν στόχος για SBP1 και κυτοκερατινών 8/18 να περιορίσουν βαθμολόγησης σε κύτταρα όγκου, και κυττάρων-με-κύτταρο ποσοτικοποίηση των SBP1 στον πυρήνα και το κυτταρόπλασμα διεξήχθη. επιπέδων πυρηνικής SBP1 και η πυρηνική αναλογία κυτταρόπλασμα ήταν αντιστρόφως ανάλογα με την τάξη του όγκου χρησιμοποιώντας ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης. Μετά την ταξινόμηση των δειγμάτων σε τεταρτημόρια με βάση τα επίπεδα SBP1 μεταξύ των ελέγχων, οι όγκοι στο χαμηλότερο τεταρτημόριο είχαν περισσότερες από διπλάσιες πιθανότητες να επαναληφθεί σε σύγκριση με εκείνους σε οποιοδήποτε άλλο τεταρτημόριο. Οι επαγώγιμοι έκτοπη έκφραση SBP1 μείωσε την ικανότητα του HCT-116 κύτταρα ανθρώπινου όγκου να αναπτύσσονται σε μαλακό άγαρ, ένα μέτρο του μετασχηματισμού, χωρίς να επηρεάζει τον πολλαπλασιασμό. Κύτταρα που εκφράζουν SBP1 έδειξαν επίσης μια ισχυρή επαγωγή της φωσφορυλίωσης του καταστολέα όγκων ρ53 στη σερίνη 15. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η απώλεια του SBP1 μπορεί να παίζουν έναν ανεξάρτητο ρόλο συμβάλλοντας στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη και τα επίπεδα της μπορεί να είναι χρήσιμη στη διάκριση βραδείας από την επιθετική ασθένεια.

Παράθεση: Ansong E, Ying Q, Ekoue DN, Deaton R, Αίθουσα AR, Kajdacsy-Balla A, et al. (2015) Αποδεικτικά στοιχεία ότι το σελήνιο πρωτεΐνη 1 σύνδεσης είναι ένα ογκοκατασταλτικό στον καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 10 (5): e0127295. doi: 10.1371 /journal.pone.0127295

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Καρλ Γ Μάκη, του Πανεπιστημίου Rush Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 8 του Φλεβάρη 2015? Αποδεκτές: 13 Απριλίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 18 Μάη 2015

Copyright: © 2015 Ansong et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή υποστηρίζεται από μια επιχορήγηση από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας (Grant # R01CA127943) σε AMD και επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Grant # 91229115 και 81272251) για να WY

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη είναι ο συχνότερος τύπος καρκίνου στους άνδρες με εκτιμήσεις πάνω από 240.000 νέες περιπτώσεις καρκίνου και 33.000 θανάτους στις Ηνωμένες Πολιτείες μόνο το 2011 [1]. Η νόσος είναι κατά κύριο λόγο βρίσκονται μεταξύ των ηλικιωμένων ανδρών με περίπου 91% από αυτούς που διαγνώστηκαν με όγκους περιορίζεται στην πρωτογενή θέση ή τοπικού λεμφικού [2] κόμβους. Η έγκαιρη ανίχνευση του καρκίνου του προστάτη έχει βελτιωθεί δραματικά, αλλά γίνεται ολοένα και πιο σαφές ότι η θεραπεία δίνεται σε ένα μεγάλο τμήμα των ασθενών των οποίων η ασθένεια ήταν νωχελικός, ως εκ τούτου, έχει μικρή επίδραση στη νοσηρότητα και θνησιμότητα τους [3]. Λαμβάνοντας υπόψη τις αρνητικές παρενέργειες που σχετίζονται με θεραπείες για τον καρκίνο του προστάτη, όπως η ριζική προστατεκτομή, ορμονική θεραπεία, βραχυθεραπεία και άλλες μορφές θεραπείας ακτινοβολίας, μια μεγάλη πρόκληση στη διαχείριση του καρκίνου του προστάτη είναι να βρει αξιόπιστο μέσο για να διακρίνουμε κλινικά σημαντική νόσο από αυτό που είναι νωχελικός και σε καλύτερη θέση όχι υπό θεραπεία. Για να συμβάλλουν σε αυτή την προσπάθεια, έχουμε επικεντρωθεί στην πρωτεΐνη δέσμευσης Σελήνιο 1 (SBP1, SELENBP1, hsp56), μια πρωτεΐνη που περιέχει σελήνιο-που εκφράζεται σε μια ποικιλία τύπων ιστού, συμπεριλαμβανομένου του εγκεφάλου, του προστάτη, του πνεύμονα, και το έντερο. Η μορφή του σεληνίου σε SBP1 είναι άγνωστος ως είναι η φύση της σύνδεσης της: σελήνιο παραμένει δεσμευμένη στην πρωτεΐνη όταν ηλεκτροφορήθηκαν σε πηκτές ακρυλαμιδίου SDS αλλά διίσταται σε ακραίες τιμές ρΗ [4]. Η λειτουργία του SBP1, επίσης, δεν έχει τεκμηριωθεί, αν και μπορεί να συμμετέχει στην ενδο-Golgi μεταφορών [5], έχει δειχθεί ότι ρυθμίζει HIF-1α [6] και σχετίζεται με δύο διαφορετικές ισομορφές του νοη Hippel-Lindau πρωτεΐνη αλληλεπιδρά αποουβικιτινίωσης ένζυμο 1, το οποίο δείχνει SBP1 μπορεί να λειτουργεί σε υποβάθμιση πρωτεΐνη [6,7].

τα επίπεδα

Χαμηλή SBP1 σχετίζονται με την κακή κλινική έκβαση σε διάφορους τύπους καρκίνου. Αυτό δείχθηκε πρώτα για τα αδενοκαρκινώματα του πνεύμονα, όπου τα χαμηλά επίπεδα SBP1 συνδέθηκαν στενά με κακή επιβίωση [8]. Στη συνέχεια, τα χαμηλά επίπεδα SBP1 ομοίως δειχθεί ότι συνδέεται με την κακή πρόγνωση της ωοθηκικής [9], του παχέος εντέρου [10,11] και πιο πρόσφατα ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [12]. Λίγα είναι γνωστά για το ρόλο SBP1 στην καρκίνο του προστάτη, αν και εκφράζεται έντονα σε φυσιολογικό ιστό ανθρώπινου προστατικού [13]. Εδώ, θα υποβάλει έκθεση σχετικά με την αξιολόγηση του κατά πόσον τα επίπεδα των SBP1 είναι ενδεικτικά της πιθανότητας βιοχημικής υποτροπής του καρκίνου του προστάτη, χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες έκβαση των ιστών, καθώς και μελέτες για να ξεκινήσει την κατανόηση βιολογικό ρόλο SBP1 σε καρκίνο.

Υλικά και Μέθοδοι

Η UIC Γραφείο για την Προστασία των υποκειμένων της έρευνας κατέληξε στο συμπέρασμα ότι το έργο αυτό δεν ανταποκρίνεται στον ορισμό του ανθρώπινου υποκειμένου της έρευνας. Όλα τα δεδομένα που προέρχονται από ανθρώπινο ιστό αναλύθηκε ανώνυμα.

Η ανοσοϊστοχημεία

προστάτη έκβαση του καρκίνου μικροσυστοιχίες ιστού ελήφθησαν από τη Συνεργατική Καρκίνος του προστάτη ιστών Πόρων (CPCTR), ένα πολυ-θεσμική κοινοπραξία στην τράπεζα προστατεκτομή ιστών , καθώς και των σχετικών δεδομένων των ασθενών, συμπεριλαμβανομένων δημογραφικά στοιχεία, η χειρουργική παθολογία και την παρακολούθηση της ιστορίας, κάτω από ένα σύνολο ενιαίων κατευθυντήριων γραμμών. Η CPCTR έχει συγκεντρώσει περισσότερα από 6.000 καρκίνο του προστάτη και τον έλεγχο δειγμάτων, τη μεγαλύτερη συλλογή αυτού του τύπου των ιστών διαθέσιμα σε αυτή τη χώρα με τα κλινικά και παθολογικά αποτελέσματα [14,15]. Οι συστοιχίες που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη περιλαμβάνουν πυρήνες ιστού διαμέτρου 0,6 mm, που εις τετραπλούν, από 202 άνδρες ( «υποθέσεις») που παρουσίασαν βιοχημική υποτροπή (μια απλή τιμή PSA μετά τη χειρουργική επέμβαση πάνω από 0.4 ng /ml ή δύο διαδοχικά τις PSA πάνω από 0,2 ng /ml) μετά από προστατεκτομή και 202 μη επαναλαμβανόμενων ελέγχων συμφωνημένα στην ηλικία κατά την επέμβαση (+/- 5 έτη), το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης, τη φυλή, το σκορ Gleason (πρωτοβάθμια και δευτεροβάθμια) και παθολογικές στάδιο. Οι ιστοί στις διαφάνειες αποκλείστηκαν με H

2O

2 Blocking Reagent (Abcam) για 30 λεπτά, υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ένα διάλυμα αποκλεισμού πρωτεΐνης για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, ξεπλύθηκαν και επωάστηκαν με αντι-SBP-1 μονοκλωνικού αντισώματος ποντικού (Cat # M061-3, MBL International.) και το /18 αντίσωμα Ck8 (American Research Products), και τα δύο σε ένα τίτλο 1: 100 για 60 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Τα πλακίδια ξεπλύθηκαν σε TBST για 5 λεπτά, και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με αντι-ποντικού Alexa Fluor 647 και αντι-κουνελιού Alexa Fluor 488 πολυμερές για 20 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Τα πλακίδια ξεπλύθηκαν σε απεσταγμένο νερό? πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με DAPI, αφυδατωμένα μέσα από μια κλίση αλκοόλ και τοποθετείται με Micromount (Leica Microsystems). SBP1 και Ck8 /18 ανιχνεύθηκαν σε χρωματισμένο πυρήνες από πολυφασματική σάρωση χρησιμοποιώντας το ποσοτικό σύστημα απεικόνισης Vectra (Perkin Elmer, Hopkinton, ΜΑ). Αυτοφθορισμό αφαιρέθηκε από τις εικόνες και τα επιθηλιακά (όγκου) περιοχές του κάθε πυρήνα εντοπίστηκαν από Ck8 /18 χρώση χρησιμοποιώντας ενημερώσει (Perkin Elmer) αλγόριθμοι μηχανικής μάθησης. Εγχειρίδιο επεξεργασία αφαιρεθεί καλοήθους επιθηλίου από την ανάλυση. χρώση ϋΑΡΙ αναγνωρίστηκε από το λογισμικό ως πυρήνας κάθε κυττάρου, και η κυτταροπλασματική σήμα ελήφθη με δειγματοληψία του περι-πυρηνική περιοχή. Εντός των περιοχών του όγκου, έχουμε εξάγονται δύο πυρηνικών και κυτταροπλασματικών στοιχείων από το κανάλι SBP1 σε μια βάση ανά-κυττάρων.

Η στατιστική ανάλυση

Οι φθορίζουσες εντάσεις των πυρηνικών και κυτταροπλασματικών SBP1 αξιολογήθηκαν για ομαλότητα και log-μετασχηματιστεί για στατιστική ανάλυση. Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε τρεις κατηγορίες με βάση την Gleason βαθμό τους (κατηγορία 1 = Gleason ≤6, Κατηγορία 2 = Gleason 7 (3 + 4) Κατηγορία 3 = Gleason 7 (4 + 3) ή ≥8). Πυρήνες με Gleason σκορ 4 + 3 ανατέθηκαν στην κατηγορία 3, το υψηλότερο ομάδα Gleason, επειδή τα ποσοστά θνησιμότητας των ασθενών με καρκίνο του προστάτη Gleason βαθμολογία: 4 + 3 είναι τρεις φορές υψηλότερο από 3 + 4 καρκίνους Stark 2009 [16]. Η συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων SBP1 και την κατηγορία Gleason αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το τεστ Wilcox Rank Sum. ιστούς των ασθενών ήταν επίσης ανατεθεί σε τεταρτημόρια με βάση την ένταση SBP1 μεταξύ των ατόμων της ομάδας ελέγχου. Υπό όρους μοντέλα λογιστικής παλινδρόμησης ήταν εξοπλισμένη για την εκτίμηση πιθανότητες αναλογίες και 95% διαστήματα εμπιστοσύνης για τον κίνδυνο της βιοχημικής υποτροπής για κάθε τεταρτημόριο SBP1. Οι υπό όρους μοντέλα ενσωματώνονται προσαρμογή για μεταβλητές που ταιριάζουν περίπτωση ελέγχου? επιπλέον μοντέλα ταιριάζουν με προ-χειρουργικές PSA ως συμμεταβλητή, δεδομένου ότι το PSA δεν ήταν ένας παράγοντας που να ταιριάζουν. Όλα τα δεδομένα που λαμβάνονται χρησιμοποιώντας ανθρώπινο ιστό αναλύθηκε ανώνυμα.

Κατασκευή πλασμιδίου

Μια δομή έκφρασης SBP1 δοξυκυκλίνη επαγόμενο δημιουργήθηκε με την εισαγωγή του

SBP1

ανοιχτό πλαίσιο ανάγνωσης που παράγονται από ενίσχυση PCR χρησιμοποιώντας ένα παρελθόν που παράγεται SBP1 κατασκευάσει ως το πρότυπο [17] και πρόσδεση στο pRetroX-Tight-Pur φορέα (Clontech, Mountain View, CA). Για την ενίσχυση, μία προς τα εμπρός εκκινητή (5′-ΑΑΤ ATAGCGGCCGCTACAGCATGGCTACGA-3 ‘) και αντίστροφος εκκινητής (5′-ACGAATTCGCTCAAATCCAGATGTCAGAGC-3’) χρησιμοποιήθηκαν, το προϊόν ενίσχυσης υπέστη πέψη με

NotI

και

EcoRI

και κατευθυντικά συνδέθηκε εντός του φορέα. Το σύστημα έκφρασης επαγώγιμου περιλαμβάνει το pRetroX-Tight-Pur-Teton-Σύνθετη πλασμίδιο που περιέχει το γονίδιο τρανσενεργοποιητή Tet-On. Οι κωδικοί γονίδιο Tet-On για μια πρωτεΐνη που δεσμεύεται με την περιοχή του υποκινητή του πλασμιδίου pRetroX-Tight-Pur και επάγει μεταγραφή του γονιδίου καθοδικά του υποκινητή σε απόκριση σε δοξυκυκλίνη. Το γονίδιο SBP1 εισήχθη κατάντη της περιοχής ανταποκρίνεται υποκινητή δοξυκυκλίνη στο πλασμίδιο pRetroX-Tight-Pur αποδίδοντας το pRetroX-Tight-Pur-SBP1.

Cell Culture

Το κύτταρο ανθρώπινου καρκινώματος παχέος εντέρου HCT116 γραμμή επαληθεύθηκε (Genetica DNA Αποχωρητήρια, Burlington, NC) και διατηρήθηκαν σε μέσο McCoy 5Α (Mediatech, Manassas, VA), και η γραμμή GP2-293 ρετροϊικής συσκευασίας διατηρήθηκε σε μέσο ϋΜΕΜ (Life Technologies, Carlsbad, CA). Όλα τα μέσα συμπληρώθηκαν με 10% FBS, 100 U /mL πενικιλλίνη, και 100 μg /mL στρεπτομυκίνη και επωάσθηκε στους 37 ° C με 5% CO

2. Η συγκέντρωση σεληνίου του ορού χρησιμοποιείται προσδιορίστηκε να είναι 152 nM με φούρνο γραφίτη φασματομετρία ατομικής απορρόφησης πραγματοποιήθηκε στο Texas A & amp? Μ Κτηνιατρικό Διαγνωστικό Εργαστήριο στη Κόλετζ Στέισον, Τέξας. Τόσο η τρανσενεργοποιητή Tet-On και οι κατασκευές έκφρασης SBP1 συσκευάστηκαν σε σωματίδια ρετροϊού με συνεπιμόλυνση του κάθε πλασμιδίου με την έκφραση ρετροϊικό περιβλήματος ρ-VSV-G κατασκευάσματος εντός του κυττάρου γραμμή συσκευασίας GP2-293, και χρησιμοποιήθηκε για να μολύνει κύτταρα HCT116. Τα μολυσμένα κύτταρα κλωνικά επιλεγεί 400ug /ml G418 (Sigma) και 1 ug /mL πουρομυκίνη (Sigma), επεκτάθηκαν και διαλογή για επαγώγιμη έκφραση SBP1 με κηλίδωση Western μετά από θεραπεία με 1,0 ug /mL δοξυκυκλίνη για 48 ώρες.

Western Blotting

τα επεξεργασμένα κύτταρα συλλέχθηκαν με λύση σε 1Χ ρυθμιστικού λύσης κυττάρων (Cell Signaling, Danvers, ΜΑ) που περιέχει 1 mM PMSF (Cell Signaling). Κυτταρολύματα έβρασαν σε NuPAGE LDS Sample Buffer (Life Technologies) και 10χ αναγωγικό μέσο (Life Technologies) για 5 λεπτά και εφαρμόσθηκε σε μία 4-12% κλίση Bis-Tris μετουσιωτική πηκτή πολυακρυλαμιδίου (Life Technologies). Μετά την ηλεκτροφόρηση, οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη Immobilon-FL (Millipore) μέσω ηλεκτροστύπωσης. Αντισώματα έναντι των ακόλουθων πρωτεϊνών χρησιμοποιήθηκαν: SBP1 και GPx-1 (ποντικού, MBL International, Woburn, ΜΑ), ρ-Ρ53, (κουνέλι, Cell Signaling), Ρ53 (κουνέλι, Santa Cruz, Santa Cruz, CA), και β ακτίνη (κουνέλι, Abcam, Cambridge, ΜΑ).

κυτταρικού πολλαπλασιασμού και της ανάπτυξης σε ημι-στερεά μέσα

ο πολλαπλασιασμός εκτιμήθηκε με τη χρήση του FluoReporter Μπλε φθορομετρικής dsDNA Ποσοτικοποίηση Kit (Invitrogen) που βασίζεται σχετικά με τη χρήση ενός Hoescht 33258 φθορίζουσα χρωστική για να μετρηθεί η ποσότητα του δίκλωνου DNA που υπάρχει σε κάθε φρεάτιο μιας πλάκας 96 φρεατίων ως ένδειξη της ποσότητας των ζώντων κυττάρων που υπάρχουν σε μια δεδομένη χρονική στιγμή. 5×10

2 κύτταρα τοποθετήθηκαν σε κάθε φρεάτιο από ένα μαύρο, σαφής κάτω πλάκα 96 φρεατίων και υποβλήθηκε σε επεξεργασία όπως υποδεικνύεται (48, 96 και 144 ώρες). Το μέσο καλλιέργειας απομακρύνθηκε σε επιλεγμένα χρονικά σημεία και οι πλάκες αμέσως αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρις ότου ολοκληρωθούν όλα τα χρονικά σημεία. Οι πλάκες αποψύχθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου και τα κύτταρα λύονται με αποσταγμένο νερό για την εκχύλιση κυτταρικό DNA. Hoechst 33258 βαφή προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο για τη χρώση του DNA, και ο φθορισμός ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας φίλτρα διέγερσης και εκπομπής στα 360nm και 460 nm αντίστοιχα. Προκειμένου να προσδιοριστεί η ικανότητα των SBP1 να επηρεάζουν την ανάπτυξη σε ημι-στερεό μέσο, ​​τα κύτταρα διεγείρονται για να εκφράσουν SBP1 καθώς SBP1-null κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με δοξυκυκλίνη, αναμιγνύεται με μέσα που περιέχουν 0,4% αγαρόζη, και κάθε ομάδα τοποθετήθηκε εις τριπλούν σε 6 φρεατίων που περιέχει 0.6% αγαρόζη σε μέσο. Κάθε φρεάτιο περιείχε 5×10

4 κύτταρα, και οι αποικίες μεγαλύτερο από 0,5 χιλιοστά μετρήθηκαν την ημέρα 15.

Αποτελέσματα

φθορισμού απεικόνισης των SBP1 στον ανθρώπινο καρκίνο του προστάτη υποδηλώνει ισχυρή πυρηνική εντόπιση και σποραδικές intraglandular έκφραση

Αφού αποκλείστηκαν κακής ποιότητας και καλοήθεις μόνο πυρήνες, η ομάδα για την ανάλυση που περιλαμβάνεται ιστού από 168 ζεύγη περίπτωση ελέγχου. Παραδείγματα σαρώνονται πυρήνων από τη μικροσυστοιχία που παρουσιάζεται στο Σχήμα 1. Ιδιαίτερα μεταβλητά επίπεδα πυρηνικής SBP1 συχνά παρατηρήθηκαν μεταξύ των επιθηλιακών κυττάρων στον ίδιο αδένα, με τα παρακείμενα κύτταρα συχνά παρουσιάζουν ποικίλη ένταση χρώσης μεταξύ των κυττάρων που ήταν SBP1-θετικά (Σχήμα 1Α). Επιπλέον, προστατικό ιστό με επίσης ποικίλει σε σχέση με την κυτταροπλασματική και πυρηνική χρώση, όπως επεξηγείται στο Σχήμα 1Β & amp? 1Γ.

Ένα παράδειγμα της εικόνας ενός πυρήνα που λαμβάνεται από την έκβαση CPCTR μικροσυστοιχίας ιστών χρωματίστηκαν με αντι-SBP1 (κόκκινο) αντισωμάτων που ακολουθείται από Alexa488 κατσίκας αντι-κουνελιού και Alexa647 κατσίκας αντι-ποντικού, αντίστοιχα. Οι πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με DAPI (μπλε). Α είναι ένα παράδειγμα εντοπισμένων πυρηνικών SBP1, Β δείχνει κυτταροπλασματική SBP1, και C είναι ένα παράδειγμα πολύ χαμηλή έκφραση SBP1 σε ιστό προστάτη.

Η

Η πυρηνική SBP1 να κυτταροπλασματική αναλογία συσχετίζεται αντίστροφα με καρκίνο του προστάτη Gleason σκοράρει

για να εκτιμηθεί η συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων SBP1 και το σκορ Gleason, οι ασθενείς χωρίστηκαν σε τρεις κατηγορίες με βάση την Gleason βαθμό τους (κατηγορία 1 = Gleason ≤6, Κατηγορία 2 = Gleason 7 (3 + 4) Κατηγορία 3 = Gleason 7 (4 + 3) ή ≥8). Ανάλυση των επιπέδων SBP1 σε προστατικούς ιστούς έδειξε ότι το μέσο σήμα πυρηνικής SBP1 σε κάθε κελί ήταν σημαντικά χαμηλότερη στην κατηγορία 3 από στην κατηγορία 2 (Σχήμα 2). Επιπροσθέτως, η πυρηνική: κυτταροπλασματική αναλογία SBP1 ήταν σημαντικά χαμηλότερη στην κατηγορία 3 έναντι κατηγορίας 1 (Σχήμα 3). Κυτταροπλασματική και τα συνολικά επίπεδα των κυττάρων SBP1 δεν σχετίστηκαν σημαντικά με σκορ Gleason, ούτε ήταν μια σημαντική διαφορά μεταξύ των κατηγοριών 1 και 3.

υπάρχει

Οι ασθενείς με καρκίνο του προστάτη μικροσυστοιχιών έκβαση ιστού διανεμήθηκαν σε τρεις κατηγορίες (Gleason Κατηγορία) με βάση σχετικά με σκορ Gleason (Α). Σημαίνει ποσοτικοποιημένους SBP1 ιστού κατετάγη για όλους τους ασθενείς και τους αποδίδεται μια βαθμολογία 1-368 βασίζεται σε σχετικά επίπεδα SBP1 όπου ο ασθενής με το χαμηλότερο ιστό SBP1 έλαβε ένα σκορ 1, και ο ασθενής με τα υψηλότερα επίπεδα SBP1 έλαβε βαθμολογία του 368. οικόπεδα Box-and-μουστακιού δείχνουν το εύρος των βαθμών από ασθενείς σε κάθε κατηγορία (κάθετες γραμμές) και την περιοχή του πρώτου και του τρίτου τεταρτημορίου σε κάθε κατηγορία (κουτιά). Η οριζόντια γραμμή στο εσωτερικό του κουτιού δείχνει την μέση. Η συσχέτιση μεταξύ SBP1 και Gleason Κατηγορία προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας SBP1 στον πυρήνα (Β), κυτόπλασμα (C) και το συνολικό κυττάρων (D).

Η

Οι ασθενείς στην μικροσυστοιχία έκβαση του καρκίνου του προστάτη κατανεμήθηκαν σε τρεις κατηγορίες (Gleason Κατηγορία) με βάση την βαθμολογία Gleason (Α). Η μέση ποσοτικοποιημένους SBP1 ιστού κατετάγη για όλους τους ασθενείς και τους αποδίδεται μια βαθμολογία 1-368 βασίζεται σε σχετικά επίπεδα SBP1 όπου ο ασθενής με τη χαμηλότερη πυρηνική ιστού: κυτταροπλασματική αναλογία SBP1 έλαβε ένα σκορ 1, και ο ασθενής με την υψηλότερη αναλογία λαμβάνεται ένα βαθμολογία των 368. οικόπεδα Box-and-μουστακιού δείχνουν το εύρος των βαθμών από ασθενείς σε κάθε κατηγορία (κάθετες γραμμές) και το εύρος του πρώτου και του τρίτου τεταρτημορίου σε κάθε κατηγορία (κουτιά). Η οριζόντια γραμμή στο εσωτερικό του κουτιού δείχνει την μέση.

Η

ασθενών με καρκίνο του προστάτη στο χαμηλότερο τεταρτημόριο της έκφρασης SBP1 είναι πολύ πιο πιθανό να επαναληφθεί μετά από ριζική προστατεκτομή

Για να καθοριστεί εάν υπήρχε ένα συσχέτιση μεταξύ SBP1 και βιοχημικής υποτροπής, επίπεδα SBP1 στον πυρήνα, κυτόπλασμα, και η συνολική κυττάρου πρώτα αναλύθηκαν με χρήση ενός αντίστοιχου t-test. Δεν παρατηρήθηκε καμία σημαντική διαφορά μεταξύ των επαναλαμβανόμενων περιπτώσεων και μη επανεμφανίστηκαν ελέγχους. Για να εξεταστεί η δυνατότητα μιας μη γραμμικής σύνδεσης μεταξύ της έκφρασης SBP1 και επανάληψη, τα δείγματα εναλλακτικά κατανεμημένα σε τεταρτημόρια με βάση τα επίπεδα SBP1 ιστού μεταξύ ελέγχων. Χρησιμοποιώντας αυτή την προσέγγιση, ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης των αποδόσεων διατεταρτημοριακά υποτροπής του καρκίνου του προστάτη έδειξε ότι οι ασθενείς στο χαμηλότερο τεταρτημόριο των επιπέδων πυρηνικής SBP1 είχαν σημαντικά περισσότερες πιθανότητες να επαναληφθεί από αυτούς που σε οποιαδήποτε άλλη τεταρτημόριο (Πίνακας 1). Όλες οι εκτιμήσεις προσαρμόστηκαν για PSA, Gleason βαθμό, το στάδιο, τη φυλή, το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης και την ηλικία κατά τη διάγνωση.

Η

Από εξαιρετικά μεταβλητή θέση ενδοκυτταρική SBP1 ήταν συχνά παρατηρούνται εντός των μεμονωμένων πυρήνων, που αξιολόγησε κατά πόσο ο λόγος του πυρηνικά στην κυτταροπλασματική SBP1 είχε σχέση με την πιθανότητα της βιοχημικής υποτροπής. Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε τεταρτημόρια με βάση την πυρηνική SBP1 να κυτταροπλασματική αναλογία, και εκτιμάται διαφοράς αναλογιών και 95% διαστήματα εμπιστοσύνης για τη συσχέτιση μεταξύ υποτροπής του καρκίνου του προστάτη και κάθε τεταρτημόριο ελήφθησαν. Δεν υπήρχε καμία ένδειξη για μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ της λόγο πυρήνα προς κυτόπλασμα του SBP1 και επανεμφάνισης του καρκίνου του προστάτη (πίνακας 2). Μια συνέχεια ανάλυση του ποσοστού των θετικών κυττάρων SBP1 σε μια δεδομένη πυρήνα αποκάλυψε μια μειωμένη likelyhood επανάληψης μεταξύ των ασθενών στα υψηλότερα τεταρτημόρια σε σύγκριση με το χαμηλότερο τεταρτημόριο. Σύνολο επί τοις εκατό των κυττάρων θετικότητα δεν συσχετίστηκε σημαντικά με υποτροπή (Πίνακας S1). Το όριο θετικότητας ορίστηκε από ορατά ανιχνεύσιμη ένταση.

Η

έκτοπη έκφραση SBP1 δεν επηρεάζει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HCT116 αλλά αναστέλλει αγκυροβόλιο επανάληψης ανεξάρτητη ανάπτυξη

Ο καρκίνος του προστάτη μετά από ριζική προστατεκτομή παρουσιάζεται επειδή πρωτοβάθμια όγκοι έχουν ήδη κάνει μετάσταση πριν από το χειρουργείο. Anchorage ανεξάρτητη ανάπτυξη έχει επικυρωθεί ως υποκατάστατο φαινότυπο του μεταστατικού δυναμικού χρησιμοποιώντας υπογραφές γονιδιακής έκφρασης [18]. Προκειμένου να διερευνηθεί επίδραση SBP1 για αγκύρωση ανάπτυξη ανεξάρτητη, ένα κατασκεύασμα έκφρασης SBP1 δοξυκυκλίνη επαγόμενο εισήχθη σε κύτταρα HCT116. Αυτά τα κύτταρα επιλέχθηκαν λόγω της έλλειψης ανιχνεύσιμη έκφραση SBP1, η παρουσία ενός άγριου τύπου ρ53 (βλέπε παρακάτω) και επειδή έχουν ήδη χρησιμοποιηθεί για τη μελέτη SBP1 λειτουργία [19]. S1A σχήμα δείχνει την ισχυρή επαγωγή SBP1 στα κύτταρα HCT116 TetSBP1.

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων HCT116 δεν επηρεάστηκε σημαντικά από την έκφραση SBP1 (Σχήμα 4). HCT116 κύτταρα τα οποία περιέχουν μόνο το πλασμίδιο pRetroX-Tight-Pur-SBP1 χωρίς το πλασμίδιο Teton διενεργοποιητή χρησιμοποιήθηκαν για τον έλεγχο για τις επιδράσεις δοξυκυκλίνη επί του πολλαπλασιασμού και αναπτύχθηκαν ταυτόχρονα με τα κύτταρα TetSBP1, χρησιμοποιώντας τη διαφορά σε ανάπτυξη μεταξύ των κυττάρων ελέγχου με και χωρίς δοξυκυκλίνη σε κάθε χρόνο για να προσαρμοστούν τα δεδομένα πολλαπλασιασμό TetSBP1. Για να γίνει αυτό, η φθορίζουσα αναφερόμενη ανάπτυξη των επεξεργασμένων κυττάρων HCT116 δοξυκυκλίνης-TetSBP1 (φθορίζουσες μονάδες, FU) διαιρέθηκε με τη διαφορά της FU παρατηρήθηκε μεταξύ δοξυκυκλίνη κατεργασμένα και μη-κατεργασμένα κύτταρα ελέγχου. Για να προσδιοριστεί η ικανότητα του SBP1 να επηρεάζει την ανάπτυξη σε ημι-στερεό μέσο, ​​τα κύτταρα HCT116-TetSBP1 εκφράζουν SBP1 (+ Dox), καθώς και SBP1-null κύτταρα (-Dox) αιωρήθηκαν σε 0,4% αγαρόζη, επωάστηκαν, και οι αποικίες απαριθμήθηκαν 15 ημέρα μετά την τοποθέτηση. SBP1 μείωσε σημαντικά την ικανότητα των κυττάρων να αναπτύσσονται σε ημι-στερεά μέσα (Σχήμα 5)

κύτταρα HCT116-TetSBP1 με (+ Dox) και χωρίς (-Dox) SBP1 αναπτύχθηκαν για 6 ημέρες σε μια 96 φρεατίων πλάκα. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 1 ug /mL δοξυκυκλίνη 48 ώρες πριν από τη χρονική στιγμή 0 ώρα. Πεντακόσια κύτταρα σπάρθηκαν εις τριπλούν 24 ώρες πριν από τη χρονική στιγμή 0 ώρα. Σημασμένα με φθορισμό dsDNA από κάθε φρεάτιο μιας πλάκας 96 φρεατίων ποσοτικοποιήθηκε σε τέσσερα σημεία-ώρα 0, 48, 96, και 144 ώρες, και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν τυπικές αποκλίσεις σε κάθε χρονικό σημείο.

Η

Η ικανότητα των HCT116 κυττάρων με και χωρίς SBP1 να σχηματίζουν αποικίες σε μαλακό άγαρ μετρήθηκε. Κύτταρα που επάγεται για να εκφράσει SBP1 καθώς SBP1-null κύτταρα αναμίχθηκαν με μέσο που περιείχε 0,4% αγαρόζη, και κάθε ομάδα τοποθετήθηκε εις τριπλούν σε πλάκες 6 φρεατίων επικαλυμμένα με 0.6% αγαρόζη σε μέσο. Κάθε φρεάτιο περιείχε 5×10

4 κύτταρα, και οι αποικίες μεγαλύτερο από 0,5 χιλιοστά μετρήθηκαν κατά την ημέρα 15 της ανάπτυξης (Α). Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν S.D. (* Ρ & lt? 0,05 η = 3)

Η

SBP1 δεν αλλάζει την έκφραση του γλουταθειόνη υπεροξειδάσες-1 &.? 4, αναγωγάση της θειορεδοξίνης-1 ή NF-ĸB

Μια πιθανή εξήγηση για την κατασταλτική επίδραση του SBP1 επί αγκύρωση ανάπτυξη ανεξάρτητη είναι ότι επηρεάζει τα επίπεδα του selenoproteins που έχουν εμπλακεί στην ογκογόνο σηματοδότηση μέσω τροποποιήσεως των επιπέδων των αντιδραστικών είδη οξυγόνου (ROS). Για να διερευνηθεί αυτή η πιθανότητα, προϊόντα λύσης από κύτταρα HCT116 TetSBP1 με και χωρίς επαγωγή SBP1 ανοσοστυπώθηκαν χρησιμοποιώντας αντισώματα έναντι TrxRD1, GPx-1, και GPx-4. Αυτά τα τρία selenoproteins είναι αντιοξειδωτικά εμπλέκονται στην αιτιολογία πολλών καρκίνων [20]. SBP1 δεν άλλαξε τα επίπεδα οποιασδήποτε από τις selenoproteins εξετάστηκαν (S1B και S1c σχήμα), ούτε επηρεάζουν τα επίπεδα του παράγοντα ευαίσθητο μεταγραφής ROS NF-ĸB (S1 Α Σχήμα).

SBP1 ευαισθητοποιεί τα κύτταρα σε 5 -φθοριοπυριμιδίνη

Μια άλλη πιθανή εξήγηση για τη συσχέτιση μεταξύ επιθετικό καρκίνο του προστάτη και χαμηλά πυρηνική SBP1 είναι ότι τα καρκινικά κύτταρα, τα οποία συνήθως βιώνουν υψηλά χρωμοσωμική αστάθεια, έχουν πλεονέκτημα επιβίωσης όταν υπάρχει χαμηλή πυρηνική SBP1. Προκειμένου να διερευνηθεί εάν SBP1 επηρεάζονται κυτταρική απόκριση σε βλάβη του DNA, τα κύτταρα HCT116 υποβλήθηκαν σε αγωγή με 5-φθοριοουρακίλη (5-FU), η οποία εμποδίζει τη σύνθεση θυμιδίνης και οδηγεί σε βλάβη του DNA [21,22]. SBP1 προκλήθηκε σε κύτταρα HCT116 TetSBP1 με δοξυκυκλίνη και αναπτύχθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων για 6 ημέρες και σε δειγματοληψία σε 48 ώρες χρόνο σημεία ταυτόχρονα με SBP1-null κύτταρα ελέγχου στην ίδια συγκέντρωση 5 μΜ της 5-FU. Κύτταρα που εκφράζουν SBP1 ήταν πιο ευαίσθητα σε 5-FU έκθεση (Σχήμα 6).

Η ανάπτυξη των κυττάρων HCT116-TetSBP1 μετρήθηκε μετά από μια θεραπεία 6 ημέρας με 5 μΜ 5-FU. Δίκλωνο DNA μετρήθηκε ως δείκτης της κυτταρικής ανάπτυξης κατά τέσσερις φορές σημεία-0, 48, 96, και 144 ώρες, και οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν την τυπική απόκλιση σε κάθε χρονικό σημείο (* ρ & lt? 0,05, ** ρ & lt? 0,01). Πεντακόσια κύτταρα σπάρθηκαν εις τριπλούν 24 ώρες πριν 0 σημείο μίας ώρας, και σημασμένο με φθορισμό dsDNA από κάθε φρεάτιο μιας πλάκας 96 φρεατίων μετρήθηκε ποσοτικά μετά τα κύτταρα λύθηκαν ενώ εξακολουθούν να συνδέονται με την πλάκα.

Η

SBP1 επάγει φωσφορυλίωση του ρ53 στη σερίνη 15

Προηγούμενη εργασία έχει περιγράψει την εμπλοκή της ρ53 στην κυτταρική απόκριση σε 5-FU [23,24]. Δεδομένης της ικανότητας των SBP1 να ευαισθητοποιήσει κύτταρα σε 5-FU, ερευνήσαμε αν SBP1 επηρεάζει την φωσφορυλίωση της σερίνης 15 (Ser15) στο ρ53, η οποία είναι μια μετα-μεταφραστική τροποποίηση που απαιτείται για την ενεργοποίηση του ρ53-εξαρτώμενη απόκριση βλάβης του DNA [25]. Κηλίδωση Western εκχυλισμάτων που παρασκευάζονται από κύτταρα HCT116 δεν ανίχνευσε φωσφορυλιωμένη p53-Ser15 (Σχήμα 7Α). Ωστόσο, η επαγωγή SBP1 οδήγησε σε ισχυρή φωσφορυλίωση της ρ53 επί Ser15 (Σχήμα 7Α). Είναι προφανές ότι η διέγερση της φωσφορυλίωσης του ρ53 σε Ser15 συνέπεσε με τη μείωση του συνολικού ρ53 (Εικ 7Β).

Σύνολο κυτταρικά εκχυλίσματα από δοξυκυκλίνη αγωγή ή μη κατεργασμένα κύτταρα HCT116-TetSBP1 αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ανοσοκηλίδωση για μεταβολές στην φωσφορυλιωμένη Ser15 σε ρ53 (Α) και τα επίπεδα συνολικής ρ53 (Β) σε απόκριση προς διέγερση του SBP1 χρησιμοποιώντας αντι-ανθρώπινο SBP1, φωσφο ρ53-Ser15, ρ53, και β-ακτίνης αντισώματα. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως ενδογενή έλεγχο.

Η

Συζήτηση

Η σχέση μεταξύ SBP1 και του καρκίνου του προστάτη επιθετικότητα ερευνήθηκε επειδή, προηγούμενες μελέτες ανέφεραν χαμηλότερα επίπεδα SBP1 σχετίστηκαν με την κακή κλινική έκβαση των ασθενών με διάφορους άλλους τύπους καρκίνου (που επισκοπείται στο [26]). Η συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων SBP1 και αρκετά κλινικά χαρακτηριστικά του καρκίνου του προστάτη εξετάστηκε χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες ιστό καρκίνου του προστάτη σχεδιάζονται για να ταυτοποιήσουν τις μεταβλητές που επηρεάζουν το αποτέλεσμα του ασθενούς. Όταν μια πιθανή συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων SBP1 και το σκορ Gleason ερευνήθηκε, τα συνολικά επίπεδα SBP1 δεν συσχετίστηκαν με σκορ Gleason, σύμφωνα με τις προηγούμενες δυτική εξέταση κηλίδα μας 24 δείγματα δείγματος προστατεκτομή [27]. Ωστόσο, στην παρούσα δεδομένων σε αυτό το χειρόγραφο, υπήρξε μια στατιστικά σημαντική πυρηνική κάτω SBP1: κυτταροπλασματική αναλογία στους ιστούς κατηγοριοποιούνται ως ανώτερο βαθμό του καρκίνου του προστάτη (Κατηγορία 3) σε σύγκριση με τους ιστούς κατηγοριοποιούνται ως χαμηλότερης ποιότητας (κατηγορία 1). Κατά την επακόλουθη ανάλυση της βιοχημικής υποτροπής, η κυτταρική τοποθεσία του SBP1 χρησιμοποιήθηκε επίσης στην ανάλυση της συστοιχίας ιστού, υποδεικνύοντας ότι οι ασθενείς στο χαμηλότερο τεταρτημόριο της έκφρασης πυρηνικών SBP1 είχαν σημαντικά περισσότερες πιθανότητες να επαναληφθεί από εκείνες σε οποιοδήποτε άλλο τεταρτημόριο. Η μηχανιστική σπουδαιότητα της κυτταρικής διαμερισματοποίηση SBP1 παραμένει άγνωστη, και καμία γνωστή ενζυματική δραστικότητα έχει αποδοθεί σε αυτή την πρωτεΐνη. Είναι δυνατόν, ωστόσο, ότι οι αλλαγές στην SBP1 ανέφερε αλληλεπίδραση και την πιθανή διαμόρφωσης επηρεάζει σε μη πυρηνικές πρωτεΐνες όπως GPx-1 και VDU1, συμβάλλουν στην βιολογική λειτουργία (ες) SBP1 του.

Για να διερευνήσουν τις μοριακών μηχανισμών με την οποία SBP1 μπορεί να επηρεάσει την επιθετικότητα του καρκίνου, μπορούμε να εκφράζεται εκτοπικά σε καλλιεργημένα κύτταρα τα οποία δεν εκφράζουν καμία ανιχνεύσιμη SBP1. Επαγωγή SBP1 σε αυτά τα κύτταρα μειωμένη ικανότητα τους να αναπτύσσονται σε ημι-στερεά μέσα, ενώ δεν επηρεάζει πολλαπλασιαστικές ιδιότητες των κυττάρων. Ενώ SBP1 έχει προηγουμένως δειχθεί να καταστέλλει αγκύρωση ανάπτυξη ανεξάρτητη τόσο PC3 και ανθρώπινου προστάτη όγκου κυτταρικές γραμμές που παράγονται LNCaP, SBP1 ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό μόνο των PC3 και LNCaP κύτταρα δεν [6]. Ως μέρος των προσπαθειών μας να αποκτήσουν μια κατανόηση του μηχανισμού με τον οποίο SBP1 προκάλεσε τις παρατηρούμενες φαινοτύπους, μια ισχυρή επαγωγή της φωσφορυλίωσης της p53 στη Ser15 παρατηρήθηκε (Σχήμα 5). Όπως πρόσφατα επεκτάθηκε κατά, φωσφορυλίωση του ρ53 σε Ser15 μπορεί να επηρεάσει μια ευρεία σειρά από ρ53-διαμεσολαβούμενη λειτουργίες, συμπεριλαμβανομένων διακοπή του κυτταρικού κύκλου, όπως επίσης και την απόκριση σε βλάβη του DNA και άλλες καταπονήσεις [28]. Συνεπώς, είναι κατανοητό ότι τουλάχιστον κάποιες από τις συνέπειες της απώλειας της έκφρασης SBP1 που συχνά συνοδεύει κακοήθη εξέλιξη θα μπορούσε να διαμεσολαβείται μέσω της μείωσης της φωσφορυλίωσης ρ53 σε αυτήν την θέση, και τις διαφορετικές επιπτώσεις των SBP1 επί HCT116, PC3 και LNCaP μπορεί να οφείλεται με τη διαφορετική ιδιότητα του ρ53 σε αυτά τα κύτταρα? HCT116 και LNCaP έχουν λειτουργικό p53 ενώ PC3 δεν [29,30]. Ομοίως, ρ53 εξαρτώμενων διεργασιών μπορεί να εμπλέκεται στην αύξηση της ευαισθησίας σε 5-FU που παρατηρείται όταν τα κύτταρα HCT116 επάχθηκαν για να εκφράσουν SBP1. Χρησιμοποιώντας πολυκύτταρων σφαιροειδών για να μελετήσει 5-FU αντίσταση σε καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα, Lee et al. ανέφεραν ότι SBP1 είχε εκφράζονται διαφορικά σε 5-FU ανθεκτικά κύτταρα και οι συγγραφείς αυτοί πρότειναν ότι SBP1 μπορεί να είναι μια νέα βιοδείκτης της 5-FU χημειοαντίσταση [31]. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται εδώ, μαζί με προηγούμενες μελέτες που έχουν αναφερθεί σχετικά με τις επιπτώσεις της SBP1 σε καλλιεργημένα κύτταρα ή η συχνή απώλεια SBP1 σε ανθρώπινους καρκίνους, υποστηρίζουν συλλογικά την έννοια της συμβάλλοντας ρόλος της απώλειας SBP1 στην εξέλιξη του καρκίνου.

Διατροφική πρόσληψη σεληνίου έχει συνδεθεί με μειωμένο κίνδυνο καρκίνου του προστάτη σε ανθρώπινο επιδημιολογικές μελέτες [32], αν και τα αποτελέσματα της SELECT δίκη συμπληρωμάτων σεληνίου αποδειχθεί ότι παρέχουν χαμηλές δόσεις του σεληνίου σε ηλικιωμένους άνδρες με μέσο κίνδυνο στη Βόρεια Αμερική δεν μειώνουν συχνότητα εμφάνισης καρκίνου του προστάτη [33]. Ο μηχανισμός με τον οποίο διαιτητική πρόσληψη σεληνίου θα μπορούσε ενδεχομένως την πρόληψη του καρκίνου του προστάτη παραμένει άγνωστη, αλλά μπορεί να περιλαμβάνει σελήνιο επηρεάζει σε σελήνιο που περιέχουν πρωτεΐνες, αρκετά από τα οποία έχουν εμπλακεί στον κίνδυνο του καρκίνου και άλλων ασθενειών που οφείλονται στην ένωση ειδικών γενετικών πολυμορφισμών με τον κίνδυνο της νόσου [34,35]. Οι επιδράσεις της κατανάλωσης σεληνίου επί SBP1 ή οποιοδήποτε από τα selenoproteins σεληνοκυστεΐνης περιέχουν παραμένουν άγνωστα. Ωστόσο, πληροφορίες σχετικά με την πιθανότητα των ασθενών με καρκίνο του προστάτη επαναλαμβανόμενες μετά από προστατεκτομή είναι κρίσιμης σημασίας στην προσπάθεια να αποφεύγονται οι άσκοπες θεραπεία για τους άνδρες με νωχελικός όγκους. Μελλοντικές μελέτες θα πρέπει να εξετάσει την προγνωστική χρησιμότητα της εξέτασης των επιπέδων SBP1 στον προστατικό ιστό και η περαιτέρω διερεύνηση κατά πόσο η απώλεια SBP1 συμβάλλει στην εξέλιξη της νόσου.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Εικ. έκφραση SBP1 δεν αλλάζει τα επίπεδα των GPx-1, GPx-4, NF-ĸB ή TrxRD1.

Σύνολο κυτταρικά εκχυλίσματα από δοξυκυκλίνη επεξεργασμένα ή μη επεξεργασμένα κύτταρα HCT116-TetSBP1 αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ανοσοαποτύπωση για αλλαγές στην NF-ĸB ( Α) και τα επίπεδα TrxRD1 (Β) ως απάντηση στην δοξυκυκλίνη εξαρτώμενη επαγωγή SBP1. Αντι-ανθρώπινο SBP1, TrxRD1, NF-ĸB και β-ακτίνης αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση των επιπέδων πρωτεΐνης. β-ακτίνης χρησιμοποιήθηκε ως ενδογενή έλεγχο. κύτταρα ελέγχου περιέχουν μόνο το πλασμίδιο pRetroX-SBP1 χωρίς μετενεργοποιητής

doi:. 10.1371 /journal.pone.0127295.s001

(ΔΕΘ)

S1 πίνακα. ασθενείς με καρκίνο του προστάτη με υψηλότερο ποσοστό θετική χρώση των πυρηνικών και κυτταροπλασματικών SBP1 σε όγκους του προστάτη τους ήταν λιγότερο πιθανό να επαναληφθεί.

λόγοι πιθανοτήτων (OR) και τα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (CI) για υποτροπή του καρκίνου του προστάτη κατά τεταρτημόριο του ποσοστού των θετικών πυρηνικών και κυτταροπλασματική χρώση SBP1. Θετικότητα ορίζεται από ορατά ανιχνεύσιμη ένταση, και ποσοτικά χρησιμοποιώντας τις μετρήσεις που λαμβάνονται από το σύστημα ποσοτική απεικόνιση VECTRA. Όλα ή εκτιμήσεις προσαρμόζονται για PSA, το βαθμό Gleason, το στάδιο του όγκου, και η ηλικία των ασθενών κατά τη διάγνωση

doi:. 10.1371 /journal.pone.0127295.s002

(DOCX)