Abstract

Ο Abelson (c-Abl) πρωτο-ογκογονιδίου κωδικοποιεί μια εξαιρετικά διατηρημένη κινάσης τυροσίνης πρωτεΐνης μη υποδεκτικές που παίζει ένα ρόλο στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, τη διαφοροποίηση, την απόπτωση και την κυτταρική προσκόλληση. c-Abl αντιπροσωπεύει ένα συγκεκριμένο στόχο κατά του καρκίνου στον καρκίνο του προστάτη ως ανώμαλη δραστικότητα αυτής της κινάσης έχει εμπλακεί στη διέγερση της ανάπτυξης και της εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη. Ωστόσο, ο μηχανισμός ρύθμισης της c-Abl δεν είναι γνωστή. Εδώ αναφέρουμε ότι οι Abl κινάσες ρυθμίζεται από ένα μυθιστόρημα microRNA, του miR-4723, στον καρκίνο του προστάτη. Έκφραση προφίλ έκφρασης miR-4723 σε μία ομάδα του καρκίνου του προστάτη κλινικών δειγμάτων έδειξε ότι miR-4723 έκφραση ευρέως εξασθενημένος στον καρκίνο του προστάτη. Χαμηλή miR-4723 έκφραση συσχετίστηκε σημαντικά με κακή έκβαση επιβίωση και αναλύσεις μας δείχνουν ότι το miR-4723 διαθέτει σημαντικές δυνατότητες ως βιοδείκτη της νόσου για τη διάγνωση και την πρόγνωση του καρκίνου του προστάτη. Για να αξιολογηθεί η λειτουργική σημασία της μείωσης των miR-4723 έκφραση σε καρκίνο του προστάτη, miR-4723 υπερεκφράστηκε σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη που ακολουθείται από λειτουργικές δοκιμασίες. miR-4723 υπερέκφραση οδήγησε σε σημαντική μείωση στην ανάπτυξη των κυττάρων, clonability, εισβολή και τη μετανάστευση. Είναι σημαντικό, miR-4723 έκφρασης οδήγησε σε δραματική επαγωγή της απόπτωσης σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη που υποδηλώνει ότι το miR-4723 είναι ένα προ-αποπτωτικό miRNA που ρυθμίζουν την καρκινογένεση του προστάτη. Ανάλυση των υποθετικών miR-4723 στόχους έδειξε ότι το miR-4723 στοχεύει ιντεγκρίνης άλφα 3 και πρωτεΐνες δέσμευσης μεθυλο CpG εκτός από την Abl1 και Abl2 κινάσες. Περαιτέρω, βρήκαμε ότι η έκφραση της κινάσης Abl συσχετίζεται αντίστροφα με miR-4723 έκφραση σε καρκίνο του προστάτη κλινικά δείγματα. Επίσης, Abl1 νοκ ντάουν phenocopies μερικώς miR-4723 επανέκφραση σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη που υποδηλώνει ότι Abl είναι λειτουργικά σχετικό στόχο του miR-4723 στον καρκίνο του προστάτη. Εν κατακλείδι, έχουμε εντοπίσει ένα νέο microRNA που μεσολαβεί ρύθμιση των Abl κινασών στον καρκίνο του προστάτη. Αυτή η μελέτη δείχνει ότι το miR-4723 μπορεί να είναι ένας ελκυστικός στόχος για θεραπευτική παρέμβαση σε καρκίνο του προστάτη

Παράθεση:. Arora S, Saini S, Fukuhara S, Majid S, Shahryari V, Yamamura S, et al. (2013) microRNA-4723 Αναστέλλει προστάτη ανάπτυξης καρκίνου μέσω αδρανοποίηση του Abelson Οικογένεια μη υποδεκτικές Πρωτεϊνικές κινάσες τυροσίνης. PLoS ONE 8 (11): e78023. doi: 10.1371 /journal.pone.0078023

Επιμέλεια: Jin Ερ Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center & amp? Research Institute, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: May 28, 2013? Δεκτές: 7 του Σεπτεμβρίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 1 Νοέμβρη, 2013

Copyright: © 2013 Arora et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Κέντρο Έρευνας Πόρων των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας (NIH), μέσω επιχορήγησης Αριθμός RO1CA 138642, RO1CA160079, T32DK007790 και VA κριτική Αξιών και VA Έργου του Προγράμματος. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η πιο κοινή ανδρική κακοήθεια και η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο μεταξύ των ανδρών στις Ηνωμένες Πολιτείες. Προστάτη μετάσταση στα οστά του καρκίνου είναι η κύρια αιτία θνησιμότητας στις πληγείσες ασθενείς [1]. Παρά τις πολλές προόδους, την κλινική διαχείριση του καρκίνου του προστάτη είναι δύσκολο και είναι μια κύρια αιτία νοσηρότητας και θνησιμότητας που σχετίζονται με τον καρκίνο. Οι κύριες προκλήσεις περιλαμβάνουν περιορισμένες θεραπευτικές επιλογές για μεταστατικό, ο ευνουχισμός ανθεκτική ασθένεια και την αδυναμία των σημερινών διαγνωστικές εξετάσεις να διακρίνονται εύκολα από βραδείας εξέλιξης επιθετικούς όγκους [2]. Ως εκ τούτου, υπήρξε μεγάλο ενδιαφέρον για την ταυτοποίηση νέων, αναπληρωτής βιοδείκτες του καρκίνου του προστάτη, η οποία θα μπορούσε να οδηγήσει στην ανάπτυξη καλύτερων προγνωστικών, διαγνωστικών και θεραπευτικών παρεμβάσεων για την ασθένεια.

Η Abelson (Abl) οικογένεια των εξαιρετικά διατηρημένη μη υποδεκτικές πρωτεϊνικές κινάσες τυροσίνης παίζουν σημαντικούς ρόλους σε διάφορες βιολογικές διαδικασίες, συμπεριλαμβανομένων κυτταρική επιβίωση, τον πολλαπλασιασμό, την κυτταρική προσκόλληση και την κινητικότητα [3]. Τα κύτταρα θηλαστικών έχουν δύο Abl οικογένεια kinases- Abl1 (c-Abl) και Abl2 (Abl-Σχετικές-Gene, Arg) – που εκφράζονται παντού [3], [4]. Κεντρική τις βιοχημικές και φυσιολογικές λειτουργίες των Abl κινασών είναι συνδυασμός τους ρυθμιζόμενη SH3-SH2-ΤΚ (Src ομολογία 3-κινάση Src ομολογίας 2-τυροσίνη) κασέτα τομέα με κυτταροσκελετού σε πρωτεΐνες και τους τομείς δέσμευσης του DNA, ένας συνδυασμός που παρέχει μοναδική ικανότητες σηματοδότησης σε αυτές τις πρωτεΐνες [5]. Η δραστικότητα των κινασών Abl ρυθμίζεται αυστηρά από ένα πολύπλοκο σύνολο των ενδομοριακών αλληλεπιδράσεων που προσκρούσουν στην περιοχή της κινάσης Abl και οδηγούν σε αποτελεσματική αυτόματη αναστολή της δραστηριότητας κινάσης τυροσίνης [6]. Η διακοπή της αυτο-αναστολή, όπως με μετατόπιση του

Abl1

ή

Abl2

δίπλα σε μια ποικιλία από διαφορετικά γονίδια (π.χ.

Bcr

,

Τηλ

,

ETV6

), οδηγεί σε συστατική ενεργοποίηση, η οποία κινεί κακοήθειες, ιδιαίτερα οι λευχαιμίες [4], [7], [8]. Μεταλλάξεις στο

Abl1

γονίδιο που συνήθως σχετίζεται με τη χρόνια μυελογενή λευχαιμία (CML), όπου το

Abl1

γονίδιο ενεργοποιείται με το να μετατοπίζεται μέσα στο

Bcr

(περιοχή breakpoint cluster) γονίδιο στο χρωμόσωμα 22, δημιουργώντας ένα νέο γονίδιο σύντηξης,

Bcr-Abl

, το οποίο κωδικοποιεί μια άναρχη, τυροσίνη κινάση.

Αν και Abl1 και Abl2 είναι γνωστές για την οδήγηση ανάπτυξης λευχαιμίας, ο ρόλος τους στην συμπαγείς όγκους έχει εκτιμηθεί μόλις πρόσφατα [4]. c-Abl και /ή Abl2 ενεργοποιούνται σε μερικές στερεές κυτταρικές γραμμές όγκου μέσω μοναδικών μηχανισμών που δεν περιλαμβάνουν γονιδιακής μετάλλαξης /μετατόπιση, και η ενεργοποίηση τους προάγει τον πολλαπλασιασμό, αποικοδόμηση μήτρας, εισβολή, ογκογένεση, και /ή μετάστασης, ανάλογα με τον τύπο του όγκου [4]. Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι η ενεργοποίηση της c-Abl /Abl2 προωθεί εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη [4]. c-Abl και /ή έκφραση Abl2 ήταν σημαντικά αυξημένη (που αξιολογείται με ανοσοϊστοχημεία [IHC]) σε διάφορους όγκους, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη [4], [9], [10]. Σημαντικά, φίμωση c-Abl ανέστειλαν τον πολλαπλασιασμό των οστεοβλαστών και προήγαγε τη διαφοροποίηση των οστεοβλαστών, υποδεικνύοντας ότι η αναστολή της c-Abl μπορεί να εμποδίσει τη μεταστατική ανάπτυξη των οστών [11]. Dasatinib (BMS-354825), μια διπλή κινάση της οικογένειας Src (SFK) [12] και αναστολέα κινάσης Abl [13] είναι να δοκιμαστεί κλινικά για την αγωγή οστικών μεταστάσεων καρκίνου του προστάτη και είναι προς το παρόν στη φάση 3 κλινικές δοκιμές [14] – [ ,,,0],16]. Ένας άλλος αναστολέας SFK /Abl bosutinib (SKI-606) μπλοκάρει τη μετανάστευση, εισβολή, ανεξάρτητη από προσκόλληση ανάπτυξη και εξάπλωση των PC3 και DU-145 καρκινικών κυττάρων του προστάτη που συνοδεύεται από σημαντική μείωση στη φωσφορυλίωση σηματοδότησης μορίων (ΑΚΤ, που ενεργοποιείται από μιτογόνο πρωτεΐνη κινάση , κινάση εστιακής προσκόλλησης) [17]. Επιπλέον, bosutinib ανέστειλε

in vivo

ανάπτυξη του όγκου PC3 από subcuteaneous ή intraskeletal ένεση [4], [17]. Η ενεργοποίηση της c-Abl με προερχόμενο από αιμοπετάλια αυξητικό παράγοντα (PDGF) προωθείται προστάτη επιβίωση των καρκινικών κυττάρων [18]. Abl κινάσες παίζουν επίσης ρόλο στη ρύθμιση του καρκίνου του προστάτη κινητικότητα /εισβολή και την εξέλιξη [19] – [21]. Έτσι, Abl κινάσες παίζουν σημαντικούς ρόλους στον καρκίνο του προστάτη και αντιπροσωπεύουν σημαντικούς στόχους για ειδική θεραπεία κατά του καρκίνου. Ωστόσο, ο μοριακός μηχανισμός του υπερ-έκφραση του Abl κινασών στον καρκίνο του προστάτη δεν είναι γνωστή. Εδώ αναφέρουμε ότι οι Abl κινάσες ρυθμίζεται από ένα μυθιστόρημα microRNA, του miR-4723, στον καρκίνο του προστάτη.

Τα microRNAs (miRNAs) αποτελούν μια εξελικτικά συντηρημένη κατηγορία των μικρών RNAs μη κωδικοποιητική που ρυθμίζουν αρνητικά την έκφραση πολλαπλών γονιδίων μέσω ειδική αλληλουχίας ειδικές αλληλεπιδράσεις με τις 3 ‘αμετάφραστες περιοχές (UTRs) του συγγενή στόχους mRNA [22]. Έχει εδραιωθεί ότι miRNAs ελέγχουν διάφορες βασικές κυτταρικές διαδικασίες όπως πολλαπλασιασμό, απόπτωση, τη διαφοροποίηση, την ανάπτυξη [23], και εμπλέκονται σε ανθρώπινες ασθένειες, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου [24]. Οι miRNAs έχουν ταυτοποιηθεί ότι λειτουργούν ως κλασική ογκογονίδια ή γονίδια καταστολής όγκου [24]. Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι υπάρχουν συσχετισμοί μεταξύ της έκφρασης των miRNAs και κλινική υποτροπή, την ανάπτυξη των μεταστάσεων και /ή την επιβίωση [25], [26]. Λόγω πρότυπα έκφρασης τους ιστούς και συγκεκριμένες ασθένειες και κανονιστικό δυναμικό, miRNAs αξιολογούνται ως πιθανοί βιοδείκτες για τη διάγνωση και την πρόγνωση των ανθρώπινων κακοηθειών [27].

miR-4723 είναι ένα πρόσφατα ανακαλύφθηκε miRNA [28] το οποίο δεν έχει μελετηθεί. Αναλύσαμε την έκφραση του miR-4723-5p (κύρια μορφή miR-4723, που αναφέρεται ως miR-4723) έκφραση σε μια ομάδα του καρκίνου του προστάτη κλινικά δείγματα και διαπίστωσαν ότι miR-4723 έκφρασης είναι ευρέως εξασθενημένος στον καρκίνο του προστάτη και σχετίζεται σημαντικά με κακή έκβαση επιβίωση και την εξέλιξη του όγκου. Λειτουργικές μελέτες που χρησιμοποιούν κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη έδειξαν ότι η ανασύσταση του miR-4723 έκφρασης οδήγησε σε σημαντική μείωση στην ανάπτυξη των κυττάρων, clonability, εισβολή και τη μετανάστευση. Σημαντικά, miR-4723 επανέκφραση οδήγησε σε δραματική επαγωγή της απόπτωσης σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη που υποδηλώνει ότι το miR-4723 είναι ένα προ-αποπτωτικών miRNA που ρυθμίζει την καρκινογένεση του προστάτη. Περαιτέρω, τα δεδομένα μας δείχνουν ότι αυτό το μυθιστόρημα miRNA είναι ένας σημαντικός ρυθμιστής της Abl1 και Abl2 κινάσες οι οποίες με τη σειρά του ρυθμίζει την καρκινογένεση του προστάτη. Απ ‘όσο γνωρίζουμε αυτή είναι η πρώτη αναφορά ότι (i) ορίζει νέα miRNA μεσολάβηση ρύθμιση του Abl κινασών στον καρκίνο του προστάτη και (ii) προσδιορίζει ένα νέο ογκοκατασταλτικό miRNA στον καρκίνο του προστάτη. Αυτό το ρυθμιστικό μηχανισμό δυνητικά θα είναι χρήσιμες για την θεραπευτική παρέμβαση στον καρκίνο του προστάτη.

Αποτελέσματα

miR-4723 Έκφραση ευρέως εξασθενημένο στον καρκίνο του προστάτη

Για να αξιολογηθεί ο ρόλος του ΜΙΚ 4723 στον καρκίνο του προστάτη, miR-4723 έκφραση αναλύθηκε σε ανθρώπινα δείγματα ανθρώπινες κλινικές προστάτη (Σχ. 1Α). Τα κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά των ασθενών συνοψίζονται στον Πίνακα S1. Εξετάσαμε τα επίπεδα έκφρασης του miR-4723 στη σύλληψη λέιζερ μικροτομή ιστούς (LCM) του καρκίνου του προστάτη (n = 57) και συμφωνημένα γειτονικό φυσιολογικό περιοχές με πραγματικού χρόνου PCR. Ενώ η έκφραση του miR-4723 ήταν αμετάβλητη σε 6/57 περιπτώσεις (10%) και τα υψηλότερα σε 9/57 περιπτώσεις (16%), ένα σημαντικό κλάσμα των δειγμάτων ιστών (42/57, ~ 74%) παρουσίασαν χαμηλότερα miR-4723 επίπεδα σε σχέση με συμφωνημένα φυσιολογικούς ιστούς. Οι διαφορές ήταν στατιστικά σημαντικές με τη δοκιμή Rank Wilcoxon Signed (p & lt? 0,0001). Αυτό υποδηλώνει ότι miR-4723 είναι ευρέως μειωτικά στον καρκίνο του προστάτη και είναι ένας δυνητικός καταστολέας όγκων του καρκίνου του προστάτη.

(Α) ανάλυση Ποσοτική RT-PCR της σχετικής miR-4723 επίπεδα έκφρασης σε σύλληψη λέιζερ μικροδιατομή (LCM) PCa ιστούς (n = 57) και τον ασθενή συμφωνημένα παρακείμενο φυσιολογικό περιοχές. Τα δεδομένα ομαλοποιήθηκαν σε έλεγχο RNU48. Ο πίνακας συνοψίζει τις σχετικές miR-4723 επίπεδα έκφρασης σε αυτά τα δείγματα. (Β) Συσχέτιση του miR-4723 έκφρασης με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά των ασθενών με καρκίνο του προστάτη, συμπεριλαμβανομένων Gleason βαθμό, παθολογικές στάδιο και βιοχημική υποτροπή.

Η

Ελάττωση του miR-4723 Έκφραση συνδέεται με την εξέλιξη του όγκου στον καρκίνο του προστάτη

Θα καθοριστεί αν miR-4723 έκφρασης στην κλινική ιστούς συσχετίστηκε με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά όπως Gleason βαθμό, παθολογικές στάδιο και βιοχημική υποτροπή του καρκινώματος (Εικ. 1Β). Μειώθηκε miR-4723 έκφραση παρατηρήθηκε στο 66% των περιπτώσεων χαμηλής ποιότητας Gleason (4-6), το 74% των περιπτώσεων Gleason βαθμό 7 και στο 75% των περιπτώσεων του υψηλότερου βαθμού Gleason (8-10). Η τάση αυτή υποδηλώνει ότι η έκφραση του miR-4723 τείνει να μειώνεται σε υψηλότερες καρκίνο του προστάτη βαθμού. Ομοίως, μειώθηκε miR-4723 έκφραση παρατηρήθηκε στο 68% των περιπτώσεων των παθολογικών στάδιο pT2 vs 73% των περιπτώσεων ρΤ3, ενώ δεν υπήρξε καμία σημαντική συσχέτιση με βιοχημικούς υποτροπή.

miR-4723 είναι μια πιθανή διαγνωστικές και προγνωστικές δείκτη στον καρκίνο του προστάτη

Λόγω της παρατηρούμενης διαδεδομένη αρνητική ρύθμιση του miR-4723 στον καρκίνο του προστάτη κλινικά δείγματα, αξιολογήσαμε την πιθανή κλινική σημασία του miR-4723 έκφρασης. Για τον προσδιορισμό του δυναμικού ικανότητα των miR-4723 ως διαγνωστικό βιοδείκτη για τον καρκίνο του προστάτη, πραγματοποιήσαμε ROC (Receiver Operating Χαρακτηριστική) αναλύσεις για την ομάδα των κλινικών δειγμάτων (Εικ. 2Α). αναλύσεις ROC έδειξαν ότι η έκφραση του miR-4723 μπορεί να είναι μια ενιαία, σημαντική παράμετρος για τη διάκριση μεταξύ φυσιολογικών και καρκινικών ιστών με μια περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC (AUC) του 0,727 (95% CI: 0,655 – 0,792, p & lt? 0,0001). Περαιτέρω, έχουμε στρωματοποιημένη καρκίνο του προστάτη κλινική ομάδα μας βασίζεται σε miR-4723 έκφρασης και πραγματοποιείται ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier. Αυτή η ανάλυση έδειξε ότι η επιβίωση ήταν σημαντικά μειωμένη σε ασθενείς με χαμηλή έκφραση του miR-4723 (Εικ. 2Β) (p = 0,0431). Αυτές οι αναλύσεις δείχνουν ότι το miR-4723 διαθέτει σημαντικό δυναμικό για να χρησιμοποιηθεί ως διαγνωστικό και προγνωστικό δείκτη για τον καρκίνο του προστάτη.

(Α) ROC ανάλυση καμπύλης που δείχνει την ικανότητα του miR-4723 έκφρασης για να διακρίνουν μεταξύ κακοήθων και μη δείγματα ιστού κακοήθους προστάτη. Καμπύλες επιβίωσης (Β) Kaplan-Meier για ασθενείς με καρκίνο του προστάτη, κατηγοριοποιημένα βάσει των miR-4723 έκφραση (χαμηλή και υψηλή). τιμή p βάσει του τεστ log rank (* p & lt? .05).

Η

miR-4723 υπερέκφραση Καταστέλλει Ογκογονικότητα κυττάρων καρκίνου του προστάτη

Για να εκτιμηθεί η δυνατότητα για μια κατασταλτική όγκου ρόλο του miR-4723, υπερεκφράσαμε miR-4723 σε προστάτη καρκινικές κυτταρικές γραμμές (PC3 και LNCaP) ακολουθούμενο από λειτουργικές δοκιμασίες (Εικ. 3). Παροδική διαμόλυνση των miR-4723 πρόδρομος οδήγησε σε υπερέκφραση του miR-4723 όπως προσδιορίστηκε με PCR πραγματικού χρόνου (Εικ. S1). Η έκφραση του miR-4723 οδήγησε σε αξιοσημείωτη μορφολογικές αλλαγές σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές (Σχ. 3Α). Συγκεκριμένα, μια έντονη μείωση στο κλάσμα επιμήκη, σχήματος ατράκτου κύτταρα παραλληλίζεται με μία αύξηση σε στρογγυλεμένες, αποπτωτικά κύτταρα. Οι μορφολογικές αλλοιώσεις που παρατηρήθηκαν με miR-4723 υπερέκφραση πρότεινε την αύξηση των αποπτωτικών κυττάρων. Μια σημαντική μείωση στη βιωσιμότητα των κυττάρων παρατηρήθηκε με το χρόνο σε PC3 /LNCaP κύτταρα που υπερεκφράζουν miR-4723 (Σχ. 3Β) σε σύγκριση με τα κύτταρα που εκφράζουν τον έλεγχο miR (MIR-CON). miR-4723 υπερέκφραση επίσης μειώθηκε ικανότητας κλωνισμού των κυττάρων PC3 /LNCaP σε σύγκριση με το miR-CON (Σχ. 3C). Transwell μετανάστευση και προσδιορισμούς εισβολής έδειξαν ότι miR-4723 έκφραση μείωσε την μετανάστευση (Εικ. 3D) και εισβολή (Εικ. 3Ε) των δύο κυτταρικών σειρών. Αυτές οι παρατηρήσεις υποδεικνύουν ότι miR-4723 υπερέκφραση καταστέλλει την ογκογονικότητα των κυττάρων καρκίνου του προστάτη.

Για να αξιολογηθεί η λειτουργική σημασία του mir-4723 στον καρκίνο του προστάτη, miR-4723 πρόδρομος υπερεκφράζεται σε PC3 /κυτταρικές σειρές LNCaP με παροδική επιμόλυνση ακολουθούμενη από λειτουργικές δοκιμασίες (που εκτελείται 72 ώρες μετά την επιμόλυνση). (Α) Οι μορφολογικές αλλοιώσεις στα PC3 /LNCaP κύτταρα κατά miR-4723 έκφραση αξιολογούνται από microsopy αντίθεσης φάσης. (Β) δοκιμασία κυτταρικής βιωσιμότητας, δοκιμασία Invasion (C) δοκιμασία σχηματισμού αποικίας, (D) δοκιμασία Transwell-μετανάστευση και (Ε) σε PC3 κύτταρα /LNCaP ψευδώς επιμολυσμένα, ή επιμολυσμένα με miR-CON ή miR-4723 (* Ρ & lt? 0,05 ).

η

η υπερέκφραση του miR-4723 επάγει την απόπτωση σε κύτταρα του προστάτη Καρκίνος

Μετρήσαμε την απόπτωση σε έλεγχο (εικονικές ή miR-CON επιμολυσμένα) και miR-4723-επιμολυσμένα κύτταρα με τη ροή κυτταρομετρική ανάλυση αννεξίνης-ν-ΡΙΤΟ-7-AAD χρώση κυττάρων PC3 (Εικ. 4Α-Β). Παρατηρήθηκε ότι οι μέσες κλάσματα αποπτωτικών κυττάρων (Early αποπτωτικών + αποπτωτικά) ήταν σημαντικά αυξημένα κατά miR-4723 επανέκφραση (12% + 5%) σε σύγκριση με miR-CON ή ψευδο-επιμολυσμένα κύτταρα (3% + 1%) με ταυτόχρονη μείωση στον πληθυσμό βιώσιμων κυττάρων. Αυτό οδηγεί σε μια προ-αποπτωτικό ρόλο του miR-4723 και υποδηλώνει ότι το miR-4723 επηρεάζει αποπτωτικών μονοπατιών στη ρύθμιση ογκογενετικότητας.

δοκιμασίας (Α) απόπτωση στα κύτταρα PC3 μετά miR-CON (αριστερά πάνελ) ή ΜΙΚ 4723 (δεξιά πάνελ) επιμόλυνσης για 72 ώρες όπως εκτιμάται με χρώση αννεξίνης V-FITC /7-AAD. (Β) Εκπροσώπηση της μέσης αποπτωτικών κλάσματα (πρώιμη + τέλη αποπτωτικών) σε κάθε ομάδα (* p & lt? .05)

Η

miR-4723 Προκαλεί G2-M σύλληψης σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη

FACS (ενεργοποιούμενη από φθορισμό ταξινόμηση κυττάρων) ανάλυση έδειξε ότι η έκφραση του miR-4723 σε κύτταρα PC3 να οδηγήσει σε σημαντική αύξηση του αριθμού των κυττάρων στην φάση G2-M του κυτταρικού κύκλου σε σύγκριση με miR-CON (Εικ. 5) . Αυτό υποδηλώνει ότι το miR-4723 έκφραση προκαλεί G2-M σύλληψη στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη.

Η ανάλυση κυτταρικού κύκλου μετά την μακέτα (αριστερό πάνελ) /miR-CON (μεσαίο πάνελ) ή miR-4723 (δεξιά πλευρά) θεραπείες που δείχνει επαγωγή της G2 Μ σύλληψης /φάση με miR-4723. 72 ώρες μετά την επιμόλυνση. κύτταρα χρωματίστηκαν με DAPI πυρηνική χρώση για ανάλυση FACS.

Η

miR-4723 Στόχοι Abl κινασών σε κύτταρα του προστάτη Καρκίνος

Για τον εντοπισμό δραστών του miR-4723, έναν κατάλογο των πιθανών στόχων miRNA δημιουργήθηκε συνδυάζοντας προβλεφθεί στόχων από την miRDB αλγόριθμο πρόβλεψης στόχος [29], [30] και προφίλ την έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με την απόπτωση και του κυτταρικού κύκλου χρησιμοποιώντας μονοπάτι επικεντρώθηκε PCR Arrays. Συνεπής με τις παρατηρούμενες επιδράσεις του miR-4723 στην απόπτωση και στον κυτταρικό κύκλο, βρήκαμε αρκετά βασικά μόρια αυτών των κυτταρικών διαδικασιών ως πιθανοί miR-4723 στόχους. Ο χαρακτηρισμός των γονιδίων που σχετίζονται με τον κύκλο απόπτωση και κυττάρων έδειξε σταθερά προς τα κάτω ρύθμιση του γονιδίου Abl1 (Σχ. 6Α-Β). Για την επικύρωση των αποτελεσμάτων αυτών, εκτελέσαμε ανάλυση RT-PCR για να εξετάσει τα σχετικά επίπεδα έκφρασης του mRNA της Abl1 και διαπίστωσε ότι miR-4723 υπερέκφραση οδηγεί σε μειωμένη έκφραση Abl1 (Εικ. 6C). Αυτό υποδηλώνει ότι το miR-4723 καταστέλλει Abl1 μέσω της υποβάθμισης του mRNA.

(Α) προφίλ των αποπτωτικών γονιδίων και, σχετίζεται (Β) του κυτταρικού κύκλου των γονιδίων μετά από υπερέκφραση του miR-4723 σε κύτταρα PC3 που δείχνει προς τα κάτω ρύθμιση των Abl1 από ΜΙΚ 4723. (C) Σχετική έκφραση του mRNA του γονιδίου Abl1 όπως αξιολογείται με RT-PCR. (Δ) Σχηματική αναπαράσταση του Abl1 και Abl2 3′-UTRs δείχνει τις σχετικές θέσεις των τόπων miR-4723 δεσμευτική υποθετικό. (Ε) ανοσοστυπώματα του ενδογενούς Abl1, Abl2 και άλλα miR-4723 στόχων σε κύτταρα PC3 διαμολύνθηκαν όπως υποδεικνύεται. GAPDH χρησιμοποιήθηκε έλεγχο φόρτωσης. (F) Abl1 3 ‘UTR κατασκεύασμα που περιλαμβάνει θέσεις πρόσδεσης miR-4723 ή το κατασκεύασμα ελέγχου ταυτόχρονα σε κύτταρα PC3 με miR-4723 ή miR-CON και προσδιορίστηκαν για σχετική δραστηριότητα λουσιφεράσης (* p & lt? .05)

μας

in silico

αναλύσεις έδειξαν ότι Abl1 διαθέτει πέντε πιθανά miR-4723 θέσεις στόχου εντός 3′-UTR (Εικ. 6D) του. Sites 2-5 Τα εξελικτικά συντηρημένες σε πρωτεύοντα (χιμπατζή, γορίλα, πιθήκου rhesus) (Εικ. S2). Επίσης, βρήκαμε ότι η στενά συνδεδεμένη Abl2 διαθέτει ένα δυναμικό σημείο στόχο miR-4723 εντός 3′-UTR του (Εικ. 6D, κάτω πίνακας). Αυτή η ιστοσελίδα διατηρείται σε χιμπατζή και γορίλα (Εικ. S2).

Καθοδηγούμενη από τα ευρήματα αυτά, πραγματοποιήσαμε ανάλυση Western blot για το υποτιθέμενο miR-4723 στόχων σε κύτταρα PC3 που ήταν είτε ψευδο-επιμολυσμένα ή επιμολυσμένα με miR-4723 /miR-CON (Σχ. 6Ε). Είναι ενδιαφέρον, miR-4723 υπερέκφραση οδήγησε σε μειωμένα επίπεδα της πρωτεΐνης του Abl1 και Abl2 που κωδικοποιούν την οικογένεια Abelson των πρωτεϊνικών κινασών τυροσίνης μη υποδεκτικές. Επιπλέον, βρήκαμε ότι το miR-4723 καταστέλλει πρωτεΐνη μεθυλο CpG δέσμευσης (MeCP2) και ιντεγκρίνης, άλφα 3 (ITGA3). Το 3’UTR της MeCP2 διαθέτει δέκα πιθανές τοποθεσίες miR-4723-στόχο, ενώ εκείνη του ITGA3 έχουν τέσσερις πιθανούς miR-4723 θέσεις-στόχους (Εικ. S3).

Ερευνήσαμε αν η πρωτο-ογκογονίδιο c-Abl είναι μια άμεση λειτουργική στόχος του miR-4723 στον καρκίνο του προστάτη. Παροδική διαμόλυνση των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων PC3 με το πλασμίδιο Abl1 3’UTR μαζί με miR-4723 πρόδρομος οδήγησε σε σημαντική μείωση της δραστικότητας προαγωγέα σε σύγκριση με τον φορέα ελέγχου (Σχ. 6Ε) υποδηλώνοντας ότι miR-4723 καταστέλλει άμεσα αυτό το γονίδιο. Αυτές οι παρατηρήσεις μας οδήγησαν στο συμπέρασμα ότι το miR-4723 ρυθμίζει μια ομάδα γονιδίων που παίζουν σημαντικό ρόλο στην κυτταρική επιβίωση, προσκόλληση, την εισβολή και τη μετάσταση ιδιαίτερα Abl κινάσες.

Abl1 Νοκ ντάουν Phenocopies Μερικώς miR-4723 επανέκφραση στον καρκίνο του προστάτη κύτταρα

για να προσδιορίσετε αν Abl είναι λειτουργικά σχετικό στόχο του miR-4723 στον καρκίνο του προστάτη, θα αναστέλλεται η έκφραση Abl1 χρήση siRNA για να δείτε αν Abl1 νοκ ντάουν λειτουργικά μιμείται τα αποτελέσματα του miR-4723 υπερέκφραση. Εμείς αγωγή PC3 κυττάρων με Abl1 siRNA που ακολουθείται από

in vitro

λειτουργικές δοκιμασίες (Εικ. 7). Δύο σετ siRNA κατά Abl1- Abl1 siRNA1 και siRNA2- χρησιμοποιήθηκαν για να επιτευχθεί αποτελεσματική knockdown όπως εκτιμάται με ανοσοστύπωμα ανάλυση (Σχ. 7Α). Η μη ειδική siRNA (NS) χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος. Μια σημαντική μείωση στη βιωσιμότητα των κυττάρων παρατηρήθηκε σε κύτταρα που υπέστησαν κατεργασία PC3 Abl1 siRNA σε σύγκριση με κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με έλεγχο siRNA (Σχ. 7Β). Abl1 knockdown οδήγησε επίσης σε μειωμένη κλωνογονικότητας των κυττάρων PC3 σε σύγκριση με τον έλεγχο (σχ. 7C). Η ανάλυση κυτταρικού κύκλου έδειξε ότι Abl1 νοκ ντάουν οδήγησε σε G2-M σύλληψη φάση παρόμοια με miR-4723 υπερέκφραση (Σχ. 7D). δοκιμασία απόπτωσης έδειξαν ότι τα κλάσματα αποπτωτικό κυτταρικό αυξήθηκαν σημαντικά κατά Abl1 knockdown σε σύγκριση με τον έλεγχο siRNA-επεξεργασμένα κύτταρα, μια επίδραση παρόμοια με αυτή που παρατηρήθηκε κατά miR-4723 επαναφορά σε κύτταρα PC3 (Εικ. 7Ε). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι Abl1 είναι ένας σημαντικός καθοριστικός παράγοντας των ογκογόνων ιδιοτήτων των κυττάρων καρκίνου του προστάτη και ότι η αναστολή Abl1 phenocopies εν μέρει τα αντι-ογκογόνο επιδράσεις του miR-4723 στον καρκίνο του προστάτη.

PC3 κύτταρα επιμολυσμένα με Abl1 siRNA /siRNA μη ειδική (NS) έλεγχος για 72 ώρες ακολουθούμενο από διάφορες δοκιμασίες. Δύο σειρές siRNA εναντίον Abl1- Abl1 siRNA1 και siRNA2- χρησιμοποιήθηκαν για λειτουργικές δοκιμασίες. (Α) σχετική έκφραση πρωτεΐνης Abl1 μετά siRNA επιμολύνσεις όπως αξιολογείται με ανοσοκηλίδωση. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (Β) δοκιμασία κυτταρικής βιωσιμότητας, (Γ) δοκιμασία σχηματισμού αποικίας, (D) Η ανάλυση κυτταρικού κύκλου, (Ε) Προσδιορισμός απόπτωσης σε κύτταρα PC3 μετά NS siRNA (αριστερό πάνελ) /Abl1 siRNA1 (μεσαίο πλαίσιο) /Abl1 siRNA2 (δεξί πάνελ) θεραπείες.

η

η έκφραση της Abl κινάσης είναι αντιστρόφως ανάλογη με το miR-4723 Εκδήλωση για τον καρκίνο του προστάτη

Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω Abl ως παθολογικά σχετικό στόχο του miR-4723

in vivo

, εξετάσαμε τη συσχέτιση μεταξύ miR-4723 και έκφραση Abl σε ένα υποσύνολο των κλινικών ομάδα μας. Πραγματοποιήσαμε ανοσοϊστοχημική χρώση για Abl σε ιστούς προστάτη (n = 12) και παρατηρήθηκε μια αρνητική συσχέτιση μεταξύ Abl και miR-4723 έκφραση (Εικ. 8). Κλινικά δείγματα με χαμηλή έκφραση miR-4723 (σε σχέση με παρακείμενο φυσιολογικό ιστό) έδειξαν υψηλά επίπεδα έκφρασης Abl (Εικ. 8).

Εξετάσαμε τη συσχέτιση μεταξύ miR-4723 και έκφραση Abl σε ένα υποσύνολο των κλινικών μας κοόρτη εκτελώντας ανοσοϊστοχημική χρώση για Abl σε ιστούς προστάτη (n = 12). Σχετικά επίπεδα έκφρασης του Abl (όπως Ο IHC) και miR-4723 (όπως προσδιορίζεται με RT-PCR) για τα δείγματα που αναλύθηκαν εκπροσωπούνται στο γράφημα μπαρ.

Η

Συζήτηση

μια επεκτατική σώμα της βιβλιογραφίας δείχνει ότι τα miRNAs μεταβληθεί σημαντικά στον καρκίνο του προστάτη [31]. Καθώς οι μοριακές αλληλεπιδράσεις των miRNAs με συγγενή γονίδια στόχους τους διερευνώνται, η παρούσα μελέτη είχε ως στόχο να προσδιορίσει νέες miRNAs που ρυθμίζουν την καρκινογένεση του προστάτη. Σε αυτή τη μελέτη, εντοπίσαμε ένα νέο όγκου-κατασταλτικό miRNA, miR-4723, στον καρκίνο του προστάτη. miR-4723 είναι ένα πρόσφατα ανακαλύφθηκε miRNA [28] η οποία δεν έχει διερευνηθεί ακόμα. Έκφραση προφίλ έκφρασης miR-4723 σε μία ομάδα του καρκίνου του προστάτη κλινικών δειγμάτων έδειξε ότι miR-4723 έκφραση ευρέως μειωτικά στον καρκίνο του προστάτη. Κατά την άποψη της χαμηλής έκφρασης του, αξιολογήσαμε τις δυνατότητες του miR-4723 ως βιοδεικτών του καρκίνου του προστάτη. Οι αναλύσεις μας δείχνουν ότι η χαμηλή έκφραση του miR-4723 μπορεί να είναι μια σημαντική παράμετρος για τη διάκριση ανάμεσα στην κανονική του προστάτη και του όγκου των ιστών. Περαιτέρω, χαμηλή έκφραση του miR-4723 συσχετίστηκε σημαντικά με κακή έκβαση της επιβίωσης και εξέλιξης του όγκου σε κλινικά δείγματα. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι η νέα αυτή miRNA έχει σημαντικές δυνατότητες ως βιοδείκτη της νόσου για τη διάγνωση του καρκίνου του προστάτη και την πρόγνωση.

Η παρατηρούμενη αρνητική ρύθμιση του miR-4723 έκφραση σε προστάτη κλινικά δείγματα πρότεινε, επίσης, ότι η νέα αυτή miRNA μπορεί να έχουν όγκο κατασταλτική δραστηριότητα. Για να δοκιμάσετε αυτό, πραγματοποιήσαμε λειτουργικές μελέτες χρησιμοποιώντας τον καρκίνο του προστάτη κυτταρικές σειρές PC3 και LNCaP. Υπερεκφράσαμε miR-4723 σε αυτές τις κυτταρικές σειρές προστάτη που ακολουθείται από λειτουργικές δοκιμασίες. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η υπερέκφραση του miR-4723 σε κύτταρα προστάτη καταστέλλει ογκογενετικότητας, επιβεβαιώνοντας τον όγκο-κατασταλτικό ρόλο του miR-4723 στον καρκίνο του προστάτη. miR-4723 υπερέκφραση οδήγησε σε σημαντική μείωση στην ανάπτυξη των κυττάρων, clonability, εισβολή και τη μετανάστευση. Είναι σημαντικό, οι μελέτες αυτές δείχνουν ότι το miR-4723 είναι ένα προ-αποπτωτικών miRNA που ρυθμίζει την καρκινογένεση του προστάτη. Αυτή είναι η πρώτη έκθεση που εμπλέκουν ένα ρόλο καταστολέα όγκων για αυτό το miRNA στον καρκίνο του προστάτη όπου δείχνουμε ότι έχει μια σημαντική προ-αποπτωτική ρόλο.

Σε κύτταρα θηλαστικών, miRNAs γονιδιακή σίγηση αιτία των γονιδίων στόχων τους μέσω τόσο μεταγραφική αναστολή και την υποβάθμιση του mRNA και ένα άτομο miRNA είναι ικανός να ρυθμίζει δεκάδες διακριτών mRNAs [22]. Για να κατανοήσουμε την λειτουργικός ρόλος του miR-4723 στην καρκινογένεση προστάτη, ψάξαμε για υποθετικών γονιδίων-στόχων που παίζουν σημαντικό ρόλο στην κυτταρική επιβίωση, προσκόλληση, εισβολή και μετάσταση. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η c-Abl πρωτοογκογονίδιο και Abl2 /Arg είναι σημαντικές λειτουργικές στόχους του miR-4723 στον καρκίνο του προστάτη. Abl1 και Abl2 κωδικοποιούν την οικογένεια Abelson των πρωτεϊνικών κινασών τυροσίνης μη υποδεκτικές που εκφράζονται παντού και άκρως συντηρημένες σε μεταζώων εξέλιξη [3]. Αυτές οι κινάσες παίζουν ένα ρόλο στην ρύθμιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, της διαφοροποίησης, της απόπτωσης, κυτταρική προσκόλληση και το άγχος απαντήσεις [3]. Η ανώμαλη δραστικότητα αυτών των κινασών τυροσίνης έχουν εμπλακεί στη διέγερση της ανάπτυξης του καρκίνου και της προόδου σε διάφορους όγκους, ιδιαίτερα λευχαιμίες. Μελέτες δείχνουν ότι η ενεργοποίηση της c-Abl /Abl2 προωθεί εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη [4]. Σε όγκους του προστάτη, c-Abl και /ή έκφραση Abl2 αυξήθηκε σημαντικά όπως αξιολογείται με ανοσοϊστοχημεία [IHC]) [4], [9], [10]. Η ενεργοποίηση της c-Abl με προερχόμενο από αιμοπετάλια αυξητικό παράγοντα (PDGF) προωθείται προστάτη επιβίωση των καρκινικών κυττάρων με διέγερση έκφρασης του αντιαποπτωτικού πρωτεΐνης, MCL-1, μέσω ενός μονοπατιού σηματοδότησης ρ68 /β-κατενίνης [18]. Abl κινάσες παίζουν επίσης ένα ρόλο στην κινητικότητα /εισβολή των καρκινικών κυττάρων του προστάτη, όπως c-Abl /Arg-μεσολάβηση φωσφορυλίωση του γαλεκτίνης-3 εμπόδισε διάσπαση του από την PSA αυξάνοντας έτσι πλήρους μήκους εξωκυτταρική γαλεκτίνης-3 και την προώθηση της μετανάστευσης και της εισβολής των κυττάρων προστάτη [19], [21]. Ένας ρόλος της c-Abl στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη έχει αποδειχθεί λόγω της ικανότητάς της να φωσφορυλιώνει ένα Wiskott-Aldrich οικογένεια πρωτεϊνών σύνδρομο, μέλος 3 (WASF3), μια πρωτεΐνη που ελέγχει την κυτταρική κινητικότητα και την εισβολή και ρυθμίζεται αυξητικά σε προχωρημένο μεταστατικό PCa [20 ]. Έτσι, αυτές οι κινάσες είναι σημαντικοί στόχοι για ειδική θεραπεία κατά του καρκίνου και αναστολείς της κινάσης Abl είναι επί του παρόντος σε κλινικές δοκιμές για τη θεραπεία της μετάστασης του προστάτη του οστού του καρκίνου. Dasatinib (BMS-354825), μια διπλή κινάση της οικογένειας Src (SFK) [12] και ο αναστολέας της κινάσης Abl [13] είναι σήμερα σε Φάσης 3 κλινικές δοκιμές [14] – [16]. Το dasatinib καταστέλλει τον πολλαπλασιασμό και ενισχύει τη διαφοροποίηση των οστεοβλαστών, υποδεικνύοντας ότι η αναστολή της c-Abl μπορεί να εμποδίσει τη μεταστατική ανάπτυξη των οστών [11]. Bosutinib (SKI-606), ένα άλλο αναστολέα SFK /Abl, αναστέλλει την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων του προστάτη

in vitro

και

in vivo

[17]. Γενικά, αυτές οι μελέτες προτείνουν ότι οι κινάσες Abl παίζουν σημαντικούς ρόλους στον καρκίνο του προστάτη. Ωστόσο, οι μηχανισμοί ρύθμισης των δραστηριοτήτων κινάσης Abl δεν είναι πλήρως κατανοητοί. Εδώ αναφέρουμε ένα μυθιστόρημα miRNA με τη μεσολάβηση ρύθμιση αυτών των κινασών στον καρκίνο του προστάτη.

microRNA μεσολάβηση ρύθμιση των Abl1 και Bcr-Abl έχει διερευνηθεί σε αιμοποιητικά κακοήθειες. Bueno

et al.

Έδειξε ότι Abl1 είναι ένας άμεσος στόχος του miR-203 σε αιμοποιητικά κακοήθειες. miR-203 είναι φιμώνονται από γενετικούς και επιγενετικών μηχανισμών αιμοποιητικών κακοηθειών που εκφράζουν είτε Abl1 και Bcr-Abl1 επίπεδα και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων ανέστειλε [32] Abl1 ή Bcr-Abl1, και αποκατάσταση των miR-203 έκφρασης μειώνονται, [33]. Σε μια πρόσφατη μελέτη, miR-451 έχει επίσης δειχθεί να ρυθμίζουν αρνητικά την έκφραση Bcr-Abl σε χρόνια μυελογενή λευχαιμία [34], [35]. Ωστόσο, οι εν λόγω μελέτες στερούνται καρκίνο του προστάτη. Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη έκθεση για να δείξει μυθιστόρημα miRNA με τη μεσολάβηση αδρανοποίηση των Abl κινασών στον καρκίνο του προστάτη. Εν όψει των σημερινών αποτελεσμάτων μας, δείχνουν ότι οι παρατηρούμενες επιδράσεις του miR-4723 στην απόπτωση, τον πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετανάστευση που προκαλείται από την ικανότητά του να καταστείλει Abl κινάσες.

Ένα άτομο miRNA είναι σε θέση να ρυθμίζει αρκετές διακριτές mRNAs [36], [37], και έχει αποδειχθεί ότι πλειοτροπική καταστολή των πολλαπλών κατάντη στόχοι μπορεί να εξηγήσει τις φαινοτυπικές μεταβολές που παρατηρούνται με αλλαγμένη επίπεδα ορισμένων miRNAs [38] – [42]. Βρήκαμε ότι το miR-4723 καταστέλλει επίσης πρωτεΐνη μεθυλο CpG δέσμευσης (MeCP2) και ιντεγκρίνης, άλφα 3 (ITGA3). MeCP2 είναι μια πυρηνική πολυλειτουργική πρωτεΐνη που εμπλέκεται σε διάφορες κυτταρικές διαδικασίες, όπως χρωματίνης αναδιοργάνωση, αρχιτεκτονική, και μεταγραφική ρύθμιση [43]. Τα τελευταία χρόνια, ένας ρόλος για MeCP2 έχει προκύψει στην κυτταρική ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό [44]. Στον καρκίνο του προστάτη, οι μελέτες δείχνουν ότι MeCP2 απαιτείται για την ανάπτυξη καρκίνου του προστάτη κυττάρου [45], [46]. Η αναστολή της έκφρασης MeCP2 με σταθερή μικρή φουρκέτα RNA σταμάτησε την αύξηση των κανονικών και ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη κύτταρα ενώ έκτοπη έκφραση MeCP2 προσέφερε ένα πλεονέκτημα ανάπτυξης σε ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του προστάτη. Σημαντικά, επέτρεψε την έκφραση της ανδρογόνο-εξαρτώμενη κύτταρα να αναπτυχθούν ανεξάρτητα από τη διέγερση των ανδρογόνων και να διατηρήσει ογκογονικές ιδιότητες σε συνθήκες ανδρογόνα εξαντλημένο [45]. Σε μια άλλη μελέτη, αποσιώπηση MeCP2 σε κύτταρα PC3 οδήγησε σε μείωση του πολλαπλασιασμού και αυξημένη απόπτωση [46]. Ιντεγκρίνης Α3 (ITGA3), ένα μόριο κυτταρικής προσκόλλησης της οικογένειας ιντεγκρίνης παίζει έναν αριθμό ουσιαστικό ρόλο στις διαδικασίες που απαιτούνται για την ανάπτυξη του καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του πολλαπλασιασμού, της επιβίωσης, εισβολή, και μετάσταση [47]. Αυτή η ιντεγκρίνη μορφές υποδοχέα σύμπλοκα με διάφορα μεμβράνη, κυτταροσκελετικές και μόρια σηματοδότησης για τη ρύθμιση κυτταρική προσκόλληση, η μετανάστευση, η μεταγωγή σήματος κατά μήκος των κυτταρικών μεμβρανών, και την οργάνωση του κυτταροσκελετού [47], [48]. Οι ιντεγκρίνες είναι ελκυστικοί στόχοι για θεραπευτικά αντικαρκινικά και υπήρξαν προκλινική και κλινική ανάπτυξη ανταγωνιστών στόχευση ιντεγρινών [49].

Συμπερασματικά, η μελέτη μας προσδιορίζει miR-4723 ως ένα σημαντικό miRNA που ρυθμίζει την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη μέσω της αδρανοποίηση των Abl κινασών, MeCP2, ITGA3. Η μελέτη μας αποδεικνύει ότι χαμηλή έκφραση του miR-4723 συνδέεται με κακή επιβίωση και εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς και η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή UCSF για τα Ανθρώπινα Ερευνών (αριθμός έγκρισης: H9058-35751-01).