Abstract

Μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα (NSCLC) είναι ο πιο κοινός τύπος καρκίνου του πνεύμονα, η οποία περιλαμβάνει περίπου το 75-80% όλων των καρκίνων του πνεύμονα. Γεμσιταμπίνη είναι ένα εγκεκριμένο φάρμακο χημειοθεραπείας για NSCLC. Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να αναπτύξει μια νέα στρατηγική για τη βελτίωση της θεραπευτικής αποτελεσματικότητας των Γεμσιταβίνη για NSCLC από την συγχορηγείται iRGD πεπτιδίου. Δείξαμε ότι τα ποσοστά θετική έκφραση της ανβ3, ανβ5 και ΕΠΜ-1 στο Α549 κυτταρική γραμμή ήταν 68,5%, 35,3% και 94,5%, αντίστοιχα. Η ποσότητα του Evans Blue συσσωρευτεί στον όγκο της ομάδας Evans Blue + iRGD ήταν 2,5 φορές μεγαλύτερη από Evans Blue ομάδας. Τα ποσοστά της αναστολής της ανάπτυξης των όγκων της ομάδας iRGD, την ομάδα γεμσιταβίνη και την ομάδα Γεμσιταβίνη + iRGD ήταν 8%, 59,8% και 86,9%, αντίστοιχα. Τα αποτελέσματα των μελετών έδειξαν ότι μηχανισμού έκφραση PCNA στην ομάδα Γεμσιταβίνη + iRGD μειώθηκαν 71,5% σε σύγκριση με εκείνη στην ομάδα γεμσιταβίνη. Ο ρυθμός της απόπτωσης στην ομάδα Γεμσιταβίνη + iRGD ήταν 2,2 φορά εκείνη της ομάδας γεμσιταβίνη. Ως εκ τούτου, ο όγκος διείσδυσης Peptide iRGD μπορεί να ενισχύσει την ικανότητα του όγκου διεισδυτική και η θεραπευτική αποτελεσματικότητα γεμσιταβίνη στο ξενομόσχευμα Α549. Η συνδυασμένη εφαρμογή των γεμσιταβίνη με iRGD μπορεί να είναι μια νέα στρατηγική για την ενίσχυση της κλινικής θεραπευτικής αποτελεσματικότητας της γεμσιταβίνης σε ασθενείς με ΜΜΚΠ

Παράθεση:. Zhang Q, Zhang Υ, Li K, Wang Η, Li H, Zheng J (2015) Μια στρατηγική Μυθιστόρημα για να βελτιώσει τη θεραπευτική αποτελεσματικότητα της γεμσιταβίνης για μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα από τον όγκο διείσδυσης Peptide iRGD. PLoS ONE 10 (6): e0129865. doi: 10.1371 /journal.pone.0129865

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Rossella Rota, Ospedale Pediatrico Bambino Gesu », Ιταλία

Ελήφθη: 25η Οκτωβρίου 2014? Αποδεκτές: 13 του Μάη 2015? Δημοσιεύθηκε: 12 Ιουνίου 2015

Copyright: © 2015 Zhang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της επαρχίας Jiangsu (BK2012146, https://www.jstd.gov.cn/), Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (81.301.946, https://www.nsfc.gov.cn/), Jiangsu Επαρχιακό Γραφείο του Ιδρύματος Εκπαίδευσης (JHB2012-34, https://www.ec.js.edu.cn/), έργο που χρηματοδοτείται από την Κίνα Ίδρυμα Μεταδιδακτορικός Science (2013M540467, https://res.chinapostdoctor.org.cn/BshWeb/index.shtml), και Xuzhou Ίδρυμα Ιατρικό Κολέγιο (2012KJZ23, https://www.xzmc.edu.cn/). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν έχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία των θανάτων από καρκίνο που σχετίζονται με όλο τον κόσμο και συνεχίζει να δείχνουν μια αυξανόμενη συχνότητα [1, 2]. Μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα (NSCLC) είναι ο πιο κοινός τύπος καρκίνου του πνεύμονα, η οποία περιλαμβάνει περίπου 75-80% όλων των καρκίνων του πνεύμονα [3]. Η διάγνωση γίνεται συχνά σε ασθενείς με προχωρημένο στάδιο της νόσου, και σχεδόν τα δύο τρίτα του συνόλου των περιπτώσεων, ο καρκίνος έχει ήδη εξαπλωθεί πέρα ​​από μια εντοπισμένη περιοχή κατά τη στιγμή της διάγνωσης [4-6]. Αυτό περιορίζει τις επιλογές για τη θεραπεία και οδηγεί σε κακή πρόγνωση με διάμεση επιβίωση κάτω των 12 μηνών [7, 8]. Οι περισσότεροι ασθενείς με ΜΜΚΠ παρόν με ανεγχείρητο νόσο, και, ως εκ τούτου, οι τρέχουσες θεραπευτικές επιλογές της χημειοθεραπείας και της ακτινοθεραπείας είναι παρηγορητική, στην καλύτερη περίπτωση [7, 9]. Πολλά παραδοσιακά κυτταροτοξικά φάρμακα, συμπεριλαμβανομένων Βινδεσίνη, καρβοπλατίνη, ετοποσίδη, ιφοσφαμίδη, κυκλοφωσφαμίδη και μιτομυκίνη, έχουν χρησιμοποιηθεί ως μονοθεραπεία σε περιπτώσεις NSCLC. Κατά τα τελευταία χρόνια, ορισμένες νέες χημειοθεραπευτικούς παράγοντες όπως βινορελβίνη, πακλιταξέλη, δοκεταξέλη και γεμσιταβίνη έχουν εφαρμοστεί επίσης για τη θεραπεία του NSCLC. Ωστόσο, αυτά τα χημειοθεραπευτικά μέσα προσφέρουμε μόνο μικρές βελτιώσεις στη συνολική επιβίωση [10].

Η γεμσιταβίνη είναι ένα ανάλογο δεοξυκυτιδίνης που μετατρέπεται in vivo σε ενεργούς μεταβολίτες, συμπεριλαμβανομένων διφθοροδεοξυκυτιδίνη δι- και τριφωσφορική [11]. Το ανάλογο τριφωσφορική του γεμσιταβίνη αντικαθιστά ένα από κατά τη διάρκεια της αντιγραφής του DNA των νουκλεϊκών οξέων δομικά στοιχεία (στην περίπτωση αυτή, κυτιδίνης). Αυτή η αύξηση του όγκου συλλήψεις διαδικασίας και, τελικά, οδηγεί σε απόπτωση. Ένας άλλος στόχος της γεμσιταβίνη είναι ριβονουκλεοτιδικής αναγωγάσης. Το ανάλογο διφωσφορικό δεσμεύεται με την ενεργή θέση της ριβονουκλεοτιδικής αναγωγάσης και μη αναστρέψιμα αδρανοποιεί το ένζυμο. Μόλις το ένζυμο αναστέλλεται, αντιγραφή και επιδιόρθωση του DNA τερματίζονται, και την απόπτωση επάγεται [11-13]. Η γεμσιταβίνη έχει εγκριθεί από την Υπηρεσία Τροφίμων και Φαρμάκων (FDA) ως μία αγωγή για προχωρημένο και μεταστατικό NSCLC, καρκίνο του παγκρέατος, καρκίνο ουροδόχου κύστης, καρκίνο ωοθηκών και του καρκίνου του μαστού μόνο του ή σε συνδυασμό με άλλα φάρμακα [14].

Κλινικές μελέτες έχουν αποδείξει ότι γεμσιταβίνη θα μπορούσαν να παρατείνουν την επιβίωση και τη βελτίωση της ποιότητας ζωής των ασθενών με προχωρημένο NSCLC [14, 15]. Μερικές μελέτες έχουν αναφέρει ότι Γεμσιταβίνη αποδίδει σταθερά τα ποσοστά ανταπόκρισης που υπερβαίνει το 20%, όταν χρησιμοποιείται ως μονοθεραπεία [14, 16, 17]. Ωστόσο, γεμσιταβίνη συχνά αποτυγχάνει να επιτύχει επαρκή έλεγχο της νόσου λόγω της ανεπαρκούς κυτταροτοξικότητα στα κύτταρα του όγκου και απαράδεκτες παρενέργειες. Η μέση επιβίωση παρατείνεται για μόλις 2-4 μήνες, και οι περισσότεροι ασθενείς πεθαίνουν από την εξέλιξη της νόσου [7, 9]. Ως εκ τούτου, μια απλή αύξηση της δόσης δεν μπορεί να βελτιώσει την κατάσταση των ασθενών? αντιθέτως, αυτό μπορεί να οδηγήσει σε σοβαρές παρενέργειες.

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η διέλευση του αγγειακού τοιχώματος και η διείσδυση στο παρέγχυμα του όγκου κατά την ανυψωμένη ενδιάμεση πίεση σε όγκους παραμένει σημαντική πρόκληση για τη θεραπευτική αποτελεσματικότητα των περισσότερων κλινικών φαρμάκων [18]. Μερικά αντικαρκινικά φάρμακα μπορεί να διεισδύσει μόνο σε απόσταση 3 έως 5 διαμέτρους των κυττάρων από τα αιμοφόρα αγγεία σε στερεούς όγκους [19]. Για παράδειγμα, η συγκέντρωση του Doxorubicin μειώνεται εκθετικά καθώς η απόσταση από τα αιμοφόρα αγγεία του όγκου αυξάνεται, και φτάνει το μισό του περιαγγειακών συγκέντρωσή του σε απόσταση περίπου 40 μm [20]. Η κατανομή των Trastuzumab (Herceptin) στην εσωτερική περιοχή του ξενομοσχευμάτων όγκου μαστού είναι επίσης εξαιρετικά ετερογενής, η οποία οδηγεί σε μια έλλειψη έκθεσης πολλών κυττάρων όγκου σε ανιχνεύσιμα επίπεδα του φαρμάκου [21]. Ως εκ τούτου, αυξημένη διαπερατότητα του όγκου μπορεί να είναι μία χρήσιμη προσέγγιση για την ενίσχυση της θεραπευτικής αποτελεσματικότητας των φαρμάκων χημειοθεραπείας.

iRGD είναι ένα πεπτίδιο με όγκο διείσδυσης (CRGDK /RGPD /ΕΚ), που έχει μια ειδική διαπερατότητα σε ιστούς όγκων και στην αγγείωσης του όγκου [22]. Το τριπεπτίδιο RGD του iRGD δεσμεύουν το ιντεγκρίνες ανβ3 και ανβ5, οι εκφράσεις των οποίων περιορίζεται σε μεγάλο βαθμό σε όγκους (συμπεριλαμβανομένων αγγείωσης του όγκου και των κυττάρων) [22, 23]. Όταν iRGD δεσμεύεται με ιντεγκρίνες, ο πεπτιδικός δεσμός μεταξύ των αμινοξέων Κ και G διασπάται πρωτεολυτικά από τα επιφανειακά πρωτεασών κύτταρο? Στη συνέχεια, η αινιγματική C-άκρο κανόνα (CendR) μοτίβο (CRGDK /R) είναι εκτεθειμένη. Το μοτίβο CendR συνέχεια προσδένεται σε νευροπιλίνη-1 (ΕΠΜ-1). Η ενεργοποίηση του ΕΠΜ-1 αυξάνει την διαπερατότητα των αιμοφόρων αγγείων και ιστών του όγκου, η οποία επιτρέπει φάρμακα να εισχωρήσουν στην εσωτερική ιστό του όγκου πολύ πιο εύκολα [22-24]. Έχει επιβεβαιωθεί ότι iRGD έχει πολύτιμες δυναμικό ως ανιχνευτής στόχευσης για τη μοριακή απεικόνιση των όγκων και για τη διανομή φαρμάκων, και μπορεί να ενισχύσει την αποτελεσματικότητα των φαρμάκων μέχρι και 3 φορές [24].

Σε αυτή τη μελέτη, συνδυάσαμε γεμσιταβίνη με iRGD για τη θεραπεία γυμνούς ποντικούς ξενομοσχευμάτων ανθρώπινων NSCLC εγκατεστημένος με την Α549 κυτταρική γραμμή. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι θα μπορούσε να iRGD διεγείρει αποτελεσματικά Γεμσιταβίνη την αναστολή του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων και επάγουν απόπτωση των καρκινικών κυττάρων. Η in vivo θεραπευτική αποτελεσματικότητα επίσης σημαντικά ενισχυμένη. Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι η θεραπεία συνδυασμού με iRGD μπορεί να είναι μια πολλά υποσχόμενη μέθοδος για τη βελτίωση της κλινικής αποτελεσματικότητας του γεμσιταβίνη για τη θεραπεία του NSCLC.

Υλικά και Μέθοδοι

Κυτταροκαλλιέργεια

Η ανθρώπινο NSCLC που προέρχονται Α549 κυτταρική σειρά αγοράστηκε από την Σαγκάη Ινστιτούτο Βιοχημείας και κυτταρικής Βιολογίας, κινεζική Ακαδημία Επιστημών (Σαγκάη, Κίνα), και καλλιεργήθηκαν σε μέσο F-12K (Gibco, Grand Island, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ) με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (Gibco, Grand Island, NY, USA) και 1% πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη (Gibco, Grand Island, NY, USA).

Η κυτταρομετρία ροής

Ένα σύνολο 1 × 10

6 κύτταρα Α549 επωάστηκαν με φθορίζοντα-σημασμένα αντισώματα αραιωμένα σε 100 μΙ αλατούχου φωσφορικού ρυθμιστικού διαλύματος (PBS) για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Τα κύτταρα στη συνέχεια πλένονται, αναστέλλεται και αξιολογούνται με μια μηχανή FACS (FACSCanto II, Becton-Dickinson, USA). Ένα αντίστοιχο αντίσωμα ελέγχου ισοτύπου χρησιμοποιήθηκε σε όλες τις αναλύσεις. Τέλος, όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν με λογισμικό FlowJo (Tree Star, USA). FITC-συζευγμένο αντι-ανθρώπινο αντίσωμα ιντεγκρίνης ανβ3 ιντεγκρίνης ποντικού και ανβ5 αντισώματα αγοράστηκαν από Chemicon (CA, USA). Το αντίστοιχο αντίσωμα ελέγχου ισοτύπου, IgG1κ συζευγμένο με FITC ποντικού, αγοράσθηκε από eBioscience (San Diego, CA, USA). PE-συζευγμένο αντι-ανθρώπινο αντίσωμα ΕΠΜ-1 και τον έλεγχο ισοτόπου του αγοράστηκαν από MACS Miltenyi Biotec (Μπέργκις Γκλάντμπαχ, Nordrhein-Westfalen, Germany).

Ποντίκια και in vivo πειράματα

vivo πειράματα που εμπλέκονται ηλικίας 6 εβδομάδων θηλυκά BALB /C γυμνά ποντίκια (Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd, Πεκίνο, Κίνα), που στεγάστηκαν στο συγκεκριμένο παθογόνο, την ελεύθερη εγκατάσταση των ζώων Πειραματικό Κέντρο ζώων, Xuzhou Ιατρικό Κολέγιο (Κίνα ). Τα ζώα στεγάστηκαν με ένα κύκλο φωτός /σκότους 12 ωρών φωτός, σε θερμοκρασία (22 +/- 1 ° C) και υγρασίας (55 +/- 5%) ελέγχεται δωματίου. Όλοι οι ποντικοί είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε αποστειρωμένο νερό και τροφή. Όλα τα κλουβιά στεγάζεται έως 6 ζώα και περιείχε ροκανίδια ξύλου και ένα ανεξάρτητο σύστημα παροχής αέρα. Όλα τα πειραματικά πρωτόκολλα των ζώων εγκρίθηκαν και επανεξετάζονται από την επιτροπή φροντίδας ζώων και τη χρήση του Jiangsu Provincial Ακαδημίας της κινεζικής ιατρικής (SCXK 2012 – 0005). Κατά τη διάρκεια της in vivo πειράματα, τα ζώα σε όλες τις πειραματικές ομάδες εξετάστηκαν καθημερινά για σωματική δραστηριότητα. Στο τέλος του πειράματος, οι ποντικοί θυσιάστηκαν με αυχενική εξάρθρωση.

μοντέλο όγκου

Το μοντέλο ανθρώπινης NSCLC καθορίστηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25]. Εν συντομία, 1 χ 10

7 κύτταρα Α549 ενέθηκαν στα αριστερά μασχάλες forelimb 6 BALB /c γυμνά ποντίκια. Όταν οι όγκοι αναπτύχθηκαν σε περίπου 150 mm

3, οι όγκοι συλλέχθηκαν και κατά διαστήματα σε όγκους ιστού (4-6 mm

3 σε μέγεθος). Στη συνέχεια, οι αριστερές μασχάλες forelimb του BALB /c γυμνά ποντίκια εμβολιάστηκαν s.c. με τα μπλοκ ιστού χρησιμοποιώντας ένα τροκάρ. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή, όταν οι όγκοι αναπτύχθηκαν στο επιθυμητό μέγεθος.

ανοσοφθορισμού χρώση

Όταν οι όγκοι έφθασαν περίπου 200 mm

3, τα ποντίκια θυσιάστηκαν, και οι όγκοι ανατμήθηκαν και τεμαχίστηκαν σε κρυοστάτη. Τα τμήματα από τις τέσσερις ομάδες (η = 3) επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με το ίδιο αντι-ανθρώπινο ανβ3, ανβ5 και αντισώματα ελέγχου ισοτύπου τους, όπως εκείνα που χρησιμοποιούνται στην ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. Τα τμήματα των δύο ομάδων βάφτηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με ένα αντι-ανθρώπινο αντίσωμα πρωτογενούς κουνελιού NRP-1 (Abcam, Beverly, ΜΑ, USA) και το αντίσωμα της ισοτυπικού ελέγχου (Abcam, Beverly, ΜΑ, USA). Στη συνέχεια, οι τομές χρωματίστηκαν με ένα DyLight 549-συζευγμένο κατσίκας αντι-κουνελιού IgG (H + L) δευτερογενές αντίσωμα (EarthOx, San Francisco, CA, USA) στους 37 ° C για 1 ώρα. Όλες οι τομές κατόπιν παρατηρήθηκαν και φωτογραφήθηκαν με ένα μικροσκόπιο φθορισμού (DS-Ri1, Nikon, Ιαπωνία).

διαπερατότητα Tumor δοκιμασία

Όταν οι όγκοι έφθασαν περίπου 150 mm

3, συνολικά 50 mg /kg Evans Blue, 4 mg /kg iRGD, 50 mg /kg Evans Blue + 4 mg /kg iRGD σε 200 μΙ PBS ως όχημα, ή 200 μΙ PBS μόνο χορηγήθηκαν με ένεση μέσα στις τέσσερις ομάδες ποντικών που φέρουν όγκο (n = 3) αντιστοίχως. Τριάντα λεπτά αργότερα, οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν με ένυδρη χλωράλη και διαχύθηκαν μέσω της καρδιάς με PBS με 1% BSA. Στη συνέχεια, τα όργανα και ιστούς όγκων συλλέχθηκαν. Για Evans Blue ποσοτικοποίηση, 10 μΐ Ν, Ν-διμεθυλοφορμαμιδίου προστέθηκε για κάθε 10 mg ιστού. Μετά την ομογενοποίηση, τα μείγματα επωάστηκαν στους 37 ° C για 24 ώρες, τα μίγματα στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκαν και τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν. Τέλος, ο ποσοτικός προσδιορισμός διεξήχθη με μέτρηση της απορρόφησης στα 600 nm με ένα φασματοφωτόμετρο (BioTek Epoch, USA).

In vivo μελέτες αποτελεσματικότητας

Όταν οι όγκοι έφθασαν περίπου 100 mm

3 μετά 10 ημέρες, οι ποντικοί χωρίστηκαν σε τέσσερις ομάδες (η = 6). Συνολικά, 100 mg /kg Γεμσιταβίνη (Merck, Darmstadt, Γερμανία), 4 mg /kg iRGD, 100 mg /kg Γεμσιταβίνη + 4 mg /kg iRGD σε 200 μΙ PBS ως όχημα, ή 200 μΙ PBS μόνο εγχύθηκαν στο ποντικοί από τις τέσσερις ομάδες μέσω της φλέβας της ουράς. Οι ενέσεις διεξήχθησαν δύο φορές την εβδομάδα για συνολικά 8 φορές. Ο όγκος των όγκων μετρήθηκε σε δύο κάθετες διευθύνσεις με ένα παχύμετρο, και το βάρος του γυμνών ποντικών υπολογίσθηκε κάθε τρεις ημέρες. Ο όγκος μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: V = 0,5 χ (W

2 χ L), όπου ο όγκος V = όγκος, W = η μικρότερη κάθετη διάμετρος και L = η μεγαλύτερη κάθετη διάμετρο. Την ημέρα 30, τα ποντίκια θυσιάστηκαν, οι όγκοι συλλέχθηκαν και ζυγίστηκαν. Η αναλογία αναστολής της ανάπτυξης του όγκου (TGIR) υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο TGIR = (W – W

t) /W χ 100%, όπου το W είναι το μέσο βάρος όγκου της ομάδας ελέγχου και W

t είναι ο μέσος όρος βάρος όγκου της ομάδας αγωγής. Όλες οι όγκοι κόπηκαν σε δύο μέρη, αντίστοιχα, και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία όπως ακόλουθη περιγραφή.

Ανοσοϊστοχημική χρώση

Ένα ήμισυ εκάστου όγκου συλλέγονται στο τέλος της μελέτης θεραπείας σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερων ρυθμισμένη φορμαλίνη, τότε εγκλείστηκαν σε παραφίνη, και κόπηκαν σε τομές 3-5μm [26]. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν με ένα σύστημα στρεπταβιδίνης-υπεροξειδάσης (SP), σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (ZSGB-BIO, Πεκίνο, Κίνα). πυρηνικό αντιγόνο πολλαπλασιαζόμενου κυττάρου (PCNA) ανιχνεύθηκε με αντι-ΡΟΝΑ αντισώματος (Abcam, Beverly, ΜΑ, USA). Απεικόνιση διεξήχθη με μικροσκοπία φθορισμού (DS-Ri1, Nikon, Ιαπωνία). Για τον προσδιορισμό του δείκτη IOD του PCNA, πέντε αντιπροσωπευτικές οπτικές περιοχές που ήταν θετικά για PCNA εξετάστηκαν από κάθε όγκου. Ο δείκτης PCNA για κάθε επιλεγμένη περιοχή αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό ΙΡΡ.

δοκιμασία TUNEL

Οι τομές παραφίνης παρασκευάσθηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω. Τα αποπτωτικά κύτταρα ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα TdT μεσολάβηση τέλος επισήμανση dUTP nick (TUNEL) Κιτ σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Roche, Mannheim, Germany). Ο αριθμός των TUNEL-θετικών κυττάρων μετρήθηκε σε πέντε τυχαία επιλεγμένα πεδία από κάθε όγκο, και το αποπτωτικό δείκτη για κάθε πεδίο υπολογίστηκε ως το ποσοστό των TUNEL θετικών κυττάρων σε σχέση με 100 τυχαία επιλεγμένα κύτταρα.

κηλίδας Western ανάλυση

Το άλλο μισό του κάθε όγκου ήταν συμπληρωματικό πρόγραμμα κατεψυγμένο σε υγρό άζωτο. Στη συνέχεια, η συνολική πρωτεΐνη εκχυλίζεται. PCNA ανιχνεύθηκε με κανονική κηλίδωση Western με το ίδιο αντίσωμα αντι-ΡΟΝΑ που χρησιμοποιήθηκε στο πείραμα ανοσοϊστοχημεία. IgG IRDye 800CW κατσίκας αντι-κουνελιού (Η + L) αντίσωμα (LI-COR Biosciences, Lincoln, ΝΕ, USA) χρησιμοποιήθηκε σαν το δευτερογενές αντίσωμα. β-ακτίνη ανιχνεύθηκε επίσης ως εσωτερικός έλεγχος. Εικόνες ελήφθησαν από την Οδύσσεια (LI-COR, USA) και ποσοτικούς προσδιορισμούς ένταση των ζωνών των Δυτικών κηλίδα εκτελέστηκαν από το λογισμικό ImageJ (National Institutes of Health, USA).

Η στατιστική ανάλυση

SPSS έκδοση 16.0 για Windows χρησιμοποιήθηκε για όλες τις αναλύσεις. Τα ποσοτικά δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση (SD)? η σύγκριση μεταξύ των δύο ομάδων έγινε από ανεξάρτητους-δείγμα t-test, ενώ πολλαπλά δείγματα συγκρίθηκαν με μονόδρομη ANOVA, με α = 0.05 ως επίπεδο για τη δοκιμή. Τα αποτελέσματα θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές σε Ρ & lt? 0.05.

Αποτελέσματα

Η έκφραση της ΕΠΜ-1, ανβ3 και ανβ5 στο ανθρώπινο NSCLC που προέρχονται Α549 κυτταρική σειρά

Η έκφραση των ιντεγκρινών είναι σε μεγάλο βαθμό περιορίζεται σε όγκους (συμπεριλαμβανομένου η αγγείωση του όγκου και κύτταρα), και άλλες περιοχές της αγγειογένεσης ή επιδιόρθωσης ιστού [22, 27]. Νευροπιλίνη-1 επίσης υπερεκφράζεται σε πολλούς όγκους [22, 28]. Η ικανότητα του όγκου-διεισδυτική του iRGD εξαρτάται κυρίως από τα μόρια ανβ3, ανβ5 και NRP-1 υπερεκφράζεται σε καρκινικά κύτταρα [18]. Για να επιβεβαιωθεί η έκφραση αυτών των μορίων στην ανθρώπινη NSCLC κυτταρική γραμμή Α549, εκτελέσαμε ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α, τα θετικά ποσοστά έκφρασης της ανβ3, ανβ5 και NRP-1 ήταν 68,5%, 35,3% και 94,5%, αντίστοιχα. Αυτό το αποτέλεσμα κατέδειξε ότι η Α549 κυτταρική γραμμή μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να δημιουργήσει ένα ανθρώπινο μοντέλο NSCLC να μελετηθούν τα αποτελέσματα των συγχορηγούμενων iRGD.

(Α) ανάλυση Έκφραση ανβ3, ανβ5 και NRP-1 σε κύτταρα Α549 με κυτταρομετρία ροής. (Β) Ανάλυση της έκφρασης ανβ3, ανβ5 και NRP-1 σε ξενομοσχεύματα Α549 με χρώση ανοσοφθορισμού. EG, πειραματική ομάδα? CG, ομάδα ελέγχου. Τόσο ανβ3 και ανβ5 βάφονται πράσινα. ΕΠΜ-1 είναι χρωματισμένο κόκκινο. Πυρήνες βάφονται μπλε. Μεγέθυνση, × 400? Ράβδοι κλίμακας = 50 μm.

Η

Για να επιβεβαιωθεί η έκφραση της ανβ3, ανβ5 και ΕΠΜ-1 στον ιστό του όγκου, έχουμε αναπτύξει ένα γ γυμνό μοντέλο ξενομοσχεύματος BALB /ποντίκι με το ανθρώπινο NSCLC κυτταρική σειρά Α549. Η έκφραση της ανβ3, ανβ5, και ΕΠΜ-1 ανιχνεύθηκε περαιτέρω με χρώση ανοσοφθορισμού. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Β, ανβ3 (αριστερά), ανβ5 (μέση) και NRP-1 (δεξιά) έχουν υπερεκφράζεται σε ιστούς ξενομοσχεύματος.

Όγκου-διείσδυση του Evans Blue συγχορηγείται με iRGD

για να επιβεβαιωθεί η in vivo επίδραση του όγκου-διεισδυτική πεπτίδιο iRGD, χρωστική Evans Blue χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο φάρμακο για να προσδιοριστεί αν iRGD μπορεί να προωθήσει την πρόσληψη ενός φαρμάκου εντός ενός όγκου [18]. Evans Blue είναι ένα χρώμα σύνδεσης λευκωματίνης που μπορεί να διαπεράσει τα όργανα μέσω του αίματος και τη βαφή τα όργανα μπλε. Σε σύγκριση με τους ελέγχους, οι όγκοι της ομάδας Evans Blue + iRGD είχαν βαμμένα μια βαθύτερη μπλε, το οποίο ήταν ορατό με γυμνό μάτι. Ωστόσο, το μπλε χρώμα των φυσιολογικά όργανα, συμπεριλαμβανομένης της καρδιάς, του ήπατος, του σπλήνα, του πνεύμονα και του νεφρού, δεν ήταν προφανές (Σχήμα 2Α και 2Β). Για την περαιτέρω επιβεβαίωση ότι η επίδραση του iRGD ειδικά στην προώθηση της πρόσληψης της χρωστικής Evans Blue σε καρκινικό ιστό, ο Evans Blue στους όγκους και τα όργανα εκχυλίστηκε και αναλύθηκε ποσοτικά με φασματοφωτομετρία. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι, σε γενικές γραμμές, η ποσότητα του Evans Blue στην ομάδα Evans Blue και στην ομάδα Evans Blue + iRGD ήταν υψηλότερη από ότι στο PBS ή iRGD ομάδα (Εικ 2C). Η ποσότητα του Evans Blue στους όγκους από την ομάδα Evans Blue + iRGD ήταν 1,5 φορές υψηλότερη από ότι στην ομάδα Evans Blue (Σχήμα 2C). Όσον αφορά στα άλλα όργανα, δεν παρατηρήθηκε καμία εμφανής διαφορά μεταξύ της ομάδας Evans Blue και την ομάδα Evans Blue + iRGD (Σχήμα 2C). Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι iRGD έχει τη δυνατότητα να προωθήσει συγκεκριμένα την πρόσληψη των φαρμάκων και τους επιτρέπουν να διεισδύσει σε όγκο.

(Α) Οι αντιπροσωπευτικές εικόνες του Evans Blue συσσώρευσης στα φυσιολογικά όργανα και στους όγκους των ποντικών που έλαβαν διαφορετικές θεραπείες. Το μπλε ένταση υποδηλώνει την ποσότητα της συσσωρευμένης Evans Blue. (Β) Οι εικόνες του όγκου σε (Α). (Γ) Ποσοτικοποίηση των Evans Blue εκχυλίζεται από όγκους και τα όργανα στο (Α) με OD600 μέτρησης. n = 3? Οι μπάρες σφάλματος, μέση τιμή ± SEM? ***

σ

& lt? 0.001.

Η

Η θεραπευτική αποτελεσματικότητα των γεμσιταβίνη συγχορηγείται με iRGD

Για να προσδιοριστεί η κατάλληλη συγκέντρωση Γεμσιταβίνη για τα in vivo πειράματα, τέσσερις δόσεις γεμσιταμπίνη (80 mg /kg, 100 mg /kg, 120 mg /kg και 140 mg /kg) χρησιμοποιήθηκαν για την κατεργασία τέσσερα ποντίκια ομάδα του διπλασίου μιας εβδομάδα για δύο εβδομάδες, αντίστοιχα. Δύο εβδομάδες αργότερα, οι ποντικοί των 80 mg /kg και /kg ομάδες 100 mg εμφανίστηκε φυσιολογικό. Ωστόσο, ήταν προφανές ότι τα ποντίκια της ομάδας 120 mg /kg δεν είχε ενέργεια και παρουσίασαν απώλεια της όρεξης. Επιπλέον, τα ποντίκια της ομάδας 140 mg /kg είχε διάρροια. Τη μείωση των επιπτώσεων από τις παρενέργειες, εμείς επιλέξαμε τη δόση των 100 mg /kg για την in vivo πειράματα.

Για να καθοριστεί αν η θεραπευτική αποτελεσματικότητα των γεμσιταβίνη θα ενισχυθεί όταν χορηγείται σε συνδυασμό με iRGD, Τζεμσιταμπίνη και iRGD συγχορηγήθηκαν για τη θεραπεία των ποντικών με ξενομοσχεύματα Α549 όπως περιγράφεται στο τμήμα των Μεθόδων. Όπως φαίνεται στο σχήμα 3Α, οι όγκοι της ομάδας Γεμσιταβίνη + iRGD αυξήθηκε πιο αργά από ό, τι εκείνα της ομάδας γεμσιταβίνη, και αυτή η διαφορά ήταν στατιστικά σημαντική. Αυτή η παρατήρηση επιβεβαιώθηκε επίσης από την ανάλυση του βάρους του όγκου (Σχήμα 3Β). Ο ρυθμός αναστολής της ανάπτυξης των όγκων αναλύθηκε περαιτέρω. Η ομάδα iRGD, η ομάδα Γεμσιταβίνη, και η ομάδα Γεμσιταβίνη + iRGD έδειξε έναν όγκο ποσοστό αναστολής της ανάπτυξης του 8%, 59,8% και 86,9%, αντίστοιχα. Αυτά τα αποτελέσματα κατέδειξαν ότι iRGD θα μπορούσε να ενισχύσει τη θεραπευτική αποτελεσματικότητα της γεμσιταβίνης για ξενομοσχευμάτων ανθρώπινου NSCLC όταν συν-χορηγείται. Η ανάλυση του σώματος μετατόπιση βάρους του πειραματικών ποντικών έδειξαν ότι το βάρος του σώματος των ποντικών τόσο στην ομάδα γεμσιταβίνη και την ομάδα Γεμσιταβίνη + iRGD μειώθηκε περίπου 5% στο τέλος του πειράματος. Ωστόσο, δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ αυτών των δύο ομάδων (Εικ 3C). Αυτά τα αποτελέσματα κατέδειξαν ότι iRGD δεν επιδείνωσε προφανώς τις παρενέργειες της γεμσιταβίνης.

(Α) Η καμπύλη όγκου του όγκου κατά τη διάρκεια της θεραπείας. Τα βέλη δείχνουν την ώρα της ένεσης. Η ημέρα που άρχισε θεραπεία καταγράφηκε ως ημέρα 0. Ο όγκος του όγκου μετρήθηκε μία φορά κάθε τρεις ημέρες μέχρι την ημέρα 30. (Β) Μέσο βάρος όγκου κάθε ομάδας στο τέλος της θεραπείας. (Γ) Η καμπύλη μετατόπιση του βάρους του σώματος των ποντικών κατά τη διάρκεια του πειράματος. n = 6. Οι μπάρες σφάλματος, μέση τιμή ± SD? ns, δεν είναι σημαντική? ***

σ

& lt? 0.001.

Η

Η αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων μετά από θεραπεία με συγχορηγούμενου γεμσιταβίνη και iRGD

Γεμσιταβίνη ασκεί ένα θεραπευτικό αποτέλεσμα κατά του καρκίνου μέσω της αναστολής της σύνθεσης του DNA στα καρκινικά κύτταρα και διακοπή της προόδου τους από την G1 στην S φάση [3, 29, 30]. PCNA, μια πρωτεΐνη 36-kDa, εκφράζεται κυρίως κατά τη φάση S και G2 πρώιμη φάση του κυτταρικού κύκλου σε πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα [31]. Ως εκ τούτου, PCNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως ένας δείκτης του κυτταρικού πολλαπλασιασμού. Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω η λειτουργία του iRGD στην ενίσχυση της επίδρασης κατά του όγκου του γεμσιταβίνη, το επίπεδο έκφρασης της PCNA στους όγκους ανιχνεύθηκε με ανοσοϊστοχημική χρώση. Όπως φαίνεται στο Σχ 4Α, το επίπεδο έκφρασης της PCNA ήταν σημαντικά μειωμένη σε ποντίκια που υποβλήθηκαν σε αγωγή με γεμσιταβίνη (με ή χωρίς iRGD) σε σύγκριση με το επίπεδο έκφρασης σε ποντίκια που έλαβαν PBS ή iRGD? το επίπεδο έκφρασης της PCNA ήταν χαμηλότερη στα ποντίκια που υποβλήθηκαν σε αγωγή με Γεμσιταβίνη + iRGD σύγκριση με ποντίκια που υποβλήθηκαν σε αγωγή με γεμσιταβίνη μόνο. Για την ποσοτική ανάλυση του Σχ 4Α, το επίπεδο έκφρασης της PCNA στην ομάδα Γεμσιταβίνη + iRGD μειώθηκε περίπου 71,5% σε σύγκριση με εκείνη στην ομάδα Γεμσιταβίνη, και αυτή η διαφορά ήταν στατιστικώς σημαντική (Σχήμα 4Β). Επιπλέον, ο ιστός όγκου της ομάδας Γεμσιταβίνη + iRGD έδειξε δομικές ανωμαλίες στις φωλιές καρκίνο και μορφολογικές αλλαγές στις περισσότερες πυρήνες. Οι μορφολογικές αλλαγές στους πυρήνες θα περιγραφεί λεπτομερώς αργότερα στο χειρόγραφο.

(Α) Ανοσοϊστοχημική ανάλυση χρώση. Οι PCNA-θετικών κυττάρων στα τμήματα χρωματίζονται καφέ. Οι πυρήνες χρωματίζονται μπλε. Αντιπροσωπευτικά στοιχεία από κάθε ομάδα φαίνεται? n = 6? Μεγέθυνση, × 400? Ράβδοι κλίμακας = 50 μm. (Β) Τα αντίστοιχα ποσοτικά αποτελέσματα ανάλυσης των PCNA φαίνεται στο (Α). Πέντε πεδία από κάθε τμήμα του ιστού του όγκου επιλέχθηκαν τυχαία για τον υπολογισμό της αξίας IOD της θετικής περιοχής μέσω του λογισμικού ΙΡΡ, η οποία έδειξε την ποσότητα της έκφρασης αντιγόνου. (Γ) ανάλυση κηλίδας Western. Η ολική πρωτεΐνη από τους ιστούς όγκων εκχυλίζεται. PCNA ανιχνεύθηκε με β-ακτίνη ως ένας εσωτερικός έλεγχος. n = 3 (δ) είναι οι ποσοτικά αποτελέσματα ανάλυσης των PCNA φαίνεται στο (D). Η ένταση κάθε λωρίδας αναλύθηκε με λογισμικό ImageJ. Οι μέσες εντάσεις των PCNA τυποποιήθηκαν σε β-ακτίνη. Οι μπάρες σφάλματος, μέση τιμή ± SD? ns, δεν είναι σημαντική? ***

σ

& lt?. 0.001

Η

Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω το επίπεδο έκφρασης του PCNA, εξάγαμε της συνολικής πρωτεΐνης από τους ιστούς του όγκου σε κάθε ομάδα. Τα επίπεδα του PCNA ανιχνεύθηκαν με κηλίδωση Western με β-ακτίνη ως ένας εσωτερικός έλεγχος. Κάθε λωρίδα σαρώθηκε, και μια ποσοτική ανάλυση διεξήχθη με το λογισμικό ImageJ. Το επίπεδο έκφρασης του PCNA στον ιστό του όγκου των ποντικών στην ομάδα Γεμσιταβίνη + iRGD μειώθηκε σημαντικά σε σύγκριση με εκείνη των ποντικών στην ομάδα Γεμσιταβίνη (σχήμα 4Γ και 4Δ).

Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν επίσης ότι η θεραπευτική αποτελεσματικότητα των γεμσιταβίνη ενισχύθηκε όταν συγχορηγείται με το πεπτίδιο όγκο-διεισδυτική iRGD.

επαγωγή απόπτωσης με συγχορηγείται γεμσιταβίνη και iRGD

έχει δειχθεί ότι μπορούν να αναστείλουν την γεμσιταβίνη αντιγραφή του DNA και την επισκευή, η οποία οδηγεί τελικά σε κυτταρικό απόπτωση [3]. Για να επιβεβαιωθεί η αυξημένη θεραπευτική αποτελεσματικότητα του συγχορηγούμενου Γεμσιταβίνη και iRGD, αποπτωτικά κύτταρα σε αγωγή ξενομοσχεύματα ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας δοκιμασία TUNEL. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Α, περισσότερο αποπτωτικών κυττάρων ήταν ορατά σε όγκους από την ομάδα Γεμσιταβίνη + iRGD από ό, τι οι όγκοι από την ομάδα γεμσιταβίνη. Η αποπτωτική δείκτης ορίστηκε ως το ποσοστό των TUNEL θετικών κυττάρων έναντι του συνολικού αριθμού των κυττάρων. Σύμφωνα με την στατιστική ανάλυση που φαίνεται στο Σχήμα 5Β, ο ρυθμός της απόπτωσης της ομάδας Γεμσιταβίνη + iRGD ήταν 2,2 φορά εκείνη της ομάδας γεμσιταβίνη. Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν περαιτέρω ότι iRGD ενίσχυσε την θεραπευτική αποτελεσματικότητα των γεμσιταβίνη στα ξενομοσχεύματα NSCLC.

κύτταρα (Α) Τα αποπτωτικά στους ιστούς του όγκου ανιχνεύθηκαν με δοκιμασία TUNEL. Οι TUNEL θετικών πυρήνων χρωματίζονται καφέ, και TUNEL-αρνητικών πυρήνες χρωματίζονται μπλε. Τα στοιχεία που παρουσιάζονται εδώ είναι αντιπροσωπευτικά των έξι όγκους σε κάθε ομάδα. Τα βέλη δείχνουν τα αποπτωτικά σώματα. Μεγέθυνση, × 400? Ράβδοι κλίμακας = 50 μm. (Β) Ποσοτική ανάλυση του δείκτη απόπτωσης σε κάθε ομάδα. Το ποσοστό των TUNEL-θετικών κυττάρων μετρήθηκε από 100 τυχαία επιλεγμένα κύτταρα όγκου ανά τμήμα. Πέντε τομές μετρήθηκαν ανά όγκο. n = 6? Οι μπάρες σφάλματος, μέση τιμή ± SD? ***

σ

& lt? 0.001.

Η

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη είχε σκοπό να επαναξιολογήσει η χρήση του πεπτιδίου iRGD, απέδειξε ότι ενισχύεται η συγκέντρωση και η θεραπευτική αποτελεσματικότητα των φαρμάκων στο ξενομόσχευμα NSCLC ιδρύθηκε με κυτταρική Α549 γραμμή που έδειξε υψηλή έκφραση της ανβ3, ανβ5 και ΕΠΜ-1. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι iRGD ήταν σε θέση να ενισχύσει σημαντικά τον όγκο-διείσδυση του Evans Blue, καθώς και την θεραπευτική αποτελεσματικότητα του γεμσιταβίνη στο ανθρώπινο ξενομόσχευμα NSCLC. Η περαιτέρω αξιολόγηση έδειξε ότι το πολλαπλασιασμό και την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων στην ομάδα iRGD + Γεμσιταβίνη ήταν πιο ανέστειλε σημαντικά από εκείνη στις ομάδες ελέγχου.

Το 2009, Teesalu ΕΤΑΛ. αναφέρθηκε για πρώτη φορά το πεπτίδιο C-άκρο κανόνα (iRGD), και απέδειξαν ότι το πεπτίδιο έχει την δραστικότητα του κυττάρου, αγγειακά, και διείσδυση NRP-1-εξαρτώμενη ιστού [32]. Οι επόμενες εκθέσεις έδειξαν ότι iRGD θα μπορούσε να ενισχύσει την εντός του όγκου διάδοση και την αντικαρκινική αποτελεσματικότητα της δοξορουβικίνη [33-35], πακλιταξέλη [36, 37] και ενδοστατίνη [38] με σύζευξη με αυτά τα φάρμακα ή τα οχήματα φορτωμένα με φάρμακο σε πειράματα με ζώα. Οι άλλες εκθέσεις έδειξαν ότι iRGD επίσης θα μπορούσε να ενισχύσει την ενδοογκική συσσώρευσης και αντικαρκινική αποτελεσματικότητα του Paclitaxel, Doxorubicin, Transtuzumab [24, 39], σισπλατίνη [40], με τη συγχορήγηση με αυτά τα φάρμακα. Το 2014, Akashi ΕΤΑΛ. ανέφερε ότι γεμσιταμπίνη είχε coadministrated με iRGD για τη θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος σε μοντέλα ποντικών [41]. Απ ‘όσο γνωρίζουμε, αυτή η μελέτη απέδειξε πρώτον την αποτελεσματικότητα του συν-χορηγούνται iRGD και gemcitabine στο ανθρώπινο NSCLC ξενομόσχευμα συσταθεί με Α549 κυτταρική γραμμή.

έκθεση Akashi έδειξε ότι η παγκρεατική μοντέλα καρκίνος υπερεκφράζουν ΕΠΜ-1 είναι ευαίσθητες σε iRGD συγχορήγηση. Η θεραπεία με γεμσιταβίνη συν iRGD πεπτίδιο είχε σαν αποτέλεσμα σημαντική μείωση όγκου σε σύγκριση με τη μονοθεραπεία Γεμσιταβίνη των παγκρεατικών μοντέλα καρκίνου του εγκατεστημένος με κυτταρικές γραμμές [41]. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι ανβ3, ανβ5 και NRP-1, που διαμεσολαβούν στην δραστικότητα όγκου-διείσδυση iRGD, είχαν υπερεκφράζεται σε ανθρώπινο NSCLC Α549 κυτταρική γραμμή και ξενομοσχεύματος καθοριστεί με αυτή την κυτταρική γραμμή. Η θεραπευτική αποτελεσματικότητα του γεμσιταβίνη ενισχύθηκε σημαντικά με την συγχορήγηση iRGD σε μοντέλο ποντικού καρκίνου του NSCLC. Μαζί, αυτές οι μελέτες επιβεβαίωσαν τα αποτελέσματα των iRGD για την ενίσχυση της εντός του όγκου διάδοση και την αντικαρκινική αποτελεσματικότητα στην ΕΠΜ-1-υπερεκφράζεται μοντέλα καρκίνου.

Γεμσιταβίνη είναι νουκλεοσιδικό ανάλογο χρησιμοποιείται ευρέως ως η χημειοθεραπεία πρώτης γραμμής του προχωρημένου NSCLC [42 ]. Gridelli ΕΤΑΛ. ανέφερε ότι το ποσοστό ανταπόκρισης (RR) μεταξύ των 233 ασθενών που έλαβαν Γεμσιταβίνη ήταν 16%, ενώ ο διάμεσος χρόνος έως την εξέλιξη της νόσου και τη συνολική επιβίωση (OS) ήταν 17 εβδομάδες και 28 εβδομάδες, αντίστοιχα [43]. Η μελέτη Φάσης 2 MILES-2G της μονοθεραπείας Γεμσιταβίνη σε προχωρημένο ηλικιωμένους ασθενείς με NSCLC έδειξαν RR 17,6%, μια διάμεσος χρόνος έως την εξέλιξη της νόσου του 16,1 εβδομάδες και η διάμεση OS των 41,3 εβδομάδες [44]. Αρκετές άλλες μελέτες που χρησιμοποιούν Γεμσιταβίνη μόνη έδειξε ίδια δραστηριότητα με RR και διάμεση PFS και OS κυμαίνονται 16 έως 38,5%, 3 με 5,4 και 6.6 έως 7.7 μήνες, αντίστοιχα [45-48]. Ως εκ τούτου, η θεραπευτική αποτελεσματικότητα της γεμσιταβίνης για NSCLC έχει το χώρο να βελτιωθεί περαιτέρω. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι iRGD πεπτίδιο ενισχύει τις επιδράσεις των συγχορηγούμενων Γεμσιταβίνη στο ξενομόσχευμα NSCLC. Αυτά τα αποτελέσματα κατέδειξαν την πιθανότητα ότι iRGD βελτιώνει την επίδραση της γεμσιταβίνης σε ασθενείς με NSCLC.

Ωστόσο, η αποτελεσματικότητα της iRGD είναι αισθητός μόνο στην χρησιμοποίηση κυτταρική γραμμή. Η κλινική εφαρμογή πρέπει να δοθεί ιδιαίτερη προσοχή. Η τρέχουσα κατανόηση του μηχανισμού με τον οποίο iRGD ενισχύει την θεραπευτική αποτελεσματικότητα της γεμσιταβίνης για NSCLC είναι περιορισμένη. Παρά το γεγονός ότι δεν παρατηρήθηκαν εμφανείς παρενέργειες στη μελέτη μας, η ασφάλεια αυτού του συνδυασμού θεραπείας εξακολουθεί να χρειάζεται περαιτέρω αξιολόγηση. Το μοτίβο CendR του iRGD μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί από τους ιούς και μικροβιακών τοξινών προκειμένου να κερδίσει είσοδο στα κύτταρα και να εξαπλωθεί μέσα στους ιστούς του σώματος [49, 50]. iRGD επίσης να προωθήσει την πρόσληψη γεμσιταβίνη σε φυσιολογικούς ιστούς που έχουν υποστεί ζημιά, και την επισκευή των ιστών που ακολουθεί μπορεί να προκαλέσει περαιτέρω ζημιά στο σώμα.

Συμπέρασμα

Εν κατακλείδι, μέσα από μια ανθρώπινη Α549 NSCLC γυμνό μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού, επιβεβαιώθηκε ότι iRGD μπορεί να προωθήσει την αναστολή του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων και την επαγωγή απόπτωσης με γεμσιταβίνη και ως εκ τούτου να ενισχυθεί η θεραπευτική αποτελεσματικότητα της γεμσιταβίνη in vivo. Η συγχορήγηση της γεμσιταβίνη και iRGD μπορεί να είναι μια νέα στρατηγική για την ενίσχυση της κλινικής θεραπευτικής αποτελεσματικότητας της γεμσιταβίνης σε ασθενείς με NSCLC.