Αφηρημένο

εισβολή των κυττάρων του καρκίνου και της μετάστασης είναι οι πιο σημαντικές δυσμενείς προγνωστικοί παράγοντες για τον καρκίνο του παγκρέατος. Ταυτοποίηση βιοδεικτών που συνδέονται με την έκβαση του καρκίνου του παγκρέατος μπορεί να παρέχει νέες προσεγγίσεις και στόχους για αντικαρκινική θεραπεία. Ο στόχος αυτής της μελέτης είναι να εξετάσει τη σχέση μεταξύ της έκφρασης των RhoT1, Smad4 και p16 και τη μετάσταση και την επιβίωση σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος. Η ανάλυση έδειξε ότι τα υψηλά κυτταροπλασματικά επίπεδα έκφρασης της RhoT1, Smad4 και p16 σε παγκρεατικά καρκινικούς ιστούς είχαν σημαντικά αρνητική συσχέτιση με λεμφαδένα μετάσταση (LNM) (

P

= 0,017,

P

= 0,032 ,

P

= 0,042, αντίστοιχα). Ωστόσο, δεν παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ περινευρικό εισβολή (ΡΝ) και την έκφραση των παραπάνω τριών πρωτεϊνών (όλα

P

& gt? 0,05). Επιπλέον, η ανάλυση επιβίωσης έδειξε ότι τα χαμηλά επίπεδα έκφρασης του RhoT1 και Smad4 συσχετίστηκε σημαντικά με τον χειρότερο επιβίωση (

P

= 0,034,

P

= 0,047, αντίστοιχα). Συμπερασματικά, τα αποτελέσματα αυτά έδειξαν ότι τα χαμηλά επίπεδα έκφρασης του RhoT1 και Smad4 συσχετίζονταν σημαντικά με LNM και βραχύτερη επιβίωση. RhoT1 μπορεί να θεωρηθεί ως ένα δυναμικό νέο δείκτη για την πρόβλεψη της έκβασης σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος

Παράθεση:. Jiang Η, Ο Γ, Geng S, Sheng Η, Shen Χ, Zhang Χ, et al. (2012) RhoT1 και Smad4 συσχετίζονται με μετάσταση λεμφαδένα και τη συνολική επιβίωση στον καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 7 (7): e42234. doi: 10.1371 /journal.pone.0042234

Επιμέλεια: Fazlul H. Sarkar, Wayne State University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 2η Δεκεμβρίου του 2011? Αποδεκτές: 5 Ιουλ 2012? Δημοσιεύθηκε: 31 Ιούλη 2012

Copyright: © Jiang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. HJ είναι υποστηρίζεται από Key Πειθαρχία Κατασκευή Έργων της Pudong Γραφείο Υγείας της Σαγκάης, η Κίνα (δεν χορηγούν: PWZxkq2010-05). HG υποστηρίζεται από το Ίδρυμα της Κίνας Εθνική 863 Σχέδιο για τον Καρκίνο Genomics (Πάγκρεας Genomics) (Grant No: 1006AA02A302), αντίστοιχα. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. ΕΣ, XS, XZ, SZ, και HG απασχολούνται από το Εθνικό Κέντρο Μηχανικής για βιοτσίπ στη Σαγκάη. Δεν υπάρχουν συμβουλών, διπλώματα ευρεσιτεχνίας, τα προϊόντα στην ανάπτυξη ή την εμπορία των προϊόντων. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα (PDAC) είναι η κυρίαρχη μορφή του καρκίνου του παγκρέατος, η οποία κατέχει την τέταρτη θέση στον καρκίνο σχετίζονται με τις αιτίες θανάτου [1]. Εκτιμάται ότι 43.140 Αμερικανοί είχαν διαγνωστεί και 36800 ασθενείς πέθαναν από καρκίνο του παγκρέατος στις Ηνωμένες Πολιτείες το 2010 [2]. Παρά τις εκτεταμένες κλινικές και επιστημονικές προσπάθειες, η πρόγνωση αυτής της εξαιρετικά θανατηφόρα ασθένεια δεν έχει βελτιωθεί σημαντικά κατά τις τελευταίες δεκαετίες [2], [3]. Η μέση επιβίωση μετά τη διάγνωση είναι 3-6 μήνες χωρίς θεραπεία, και resectional χειρουργική επέμβαση και επικουρική θεραπεία αύξηση μέση επιβίωση περίπου 23 μήνες [4].

Πολυάριθμες μελέτες έχουν βρει ότι RAS ρυθμίζει την ανάπτυξη και τη μετάσταση του καρκίνου του παγκρέατος κύτταρα. Η οικογένεια Rho του GTPases είναι μια υποοικογένεια των Ras υπεροικογένειας. Rho ΘΤΡάσες έχουν αναφερθεί να συμβάλει στην πιο στάδια της έναρξης και εξέλιξης του καρκίνου, συμπεριλαμβανομένης της απόκτησης απεριόριστες δυνατότητες πολλαπλασιασμό, την επιβίωση και τη φοροδιαφυγή από την απόπτωση, την εισβολή των ιστών και τη δημιουργία μεταστάσεων [5], [6], [7], [8 ], [9], [10], [11], [12]. Η οικογένεια Rho των GTPases περιέχει 20 μέλη. Τα περισσότερα από όσα γνωρίζουμε για τον ρόλο της Rho GTPases σε καρκινικά κύτταρα εισβολής προέρχεται από τις μελέτες των πρωτοτυπικού μέλη RhoA, RhoB και RhoC, Rac1 και Cdc42. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για τους ρόλους των άλλων λιγότερο χαρακτηρισμένων μελών της οικογένειας στον καρκίνο. Ορισμένες προηγούμενες μελέτες έχουν αποκαλύψει ότι RhoA και έκφραση RhoC συχνά αυξημένη σε ανθρώπινους καρκίνους, ενώ RhoB συχνά ρυθμίζεται προς τα κάτω. RhoT1 ανήκει στην οικογένεια των μιτοχονδρίων Rho ΟΤΡάσης [13]. Ωστόσο, RhoT1 πρωτεΐνη έχει ταξινομηθεί ως άτυπα GTPases επειδή δεν ρυθμίζεται με τις άλλες κλασικές GTPases [14], [15]. Μέχρι τώρα λίγα είναι γνωστά για τον ρόλο των RhoT1 στην πρόοδο του καρκίνου. Σε προηγούμενη μελέτη, έχουμε εντοπίσει συνολικά 1.276 γονίδια που εκφράζονται διαφορικά σε PDAC. Μεταξύ αυτών, οι 691 γονίδια ρυθμισμένα προς τα πάνω και 585 γονίδια είναι ρυθμισμένα προς τα κάτω γονιδίων, συμπεριλαμβανομένων RhoT1, Smad4 και p16 [16]. Ως εκ τούτου, μας ενδιαφέρει να μάθει αν η RhoT1 ομοίως εμπλέκονται στην ανάπτυξη του καρκίνου.

Επιπλέον, προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει ότι η μετάλλαξη της Smad4 προσδιορίζεται σε περίπου 50% των παγκρεατικών αδενοκαρκινώματα [17]. Ένας αριθμός από μελέτες έχουν δείξει ότι η απώλεια του Smad4 γενικά παρατηρείται σε παγκρεατικά καρκινογένεση, και αδρανοποίηση του Smad4 σχετίζεται με κακή πρόγνωση σε παγκρεατικού καρκίνου [18], [19]. Παρομοίως, έχει καταδειχθεί ότι η απώλεια της έκφρασης ρ16 παρατηρείται στα περισσότερα παγκρεατικού όγκου [20], [21], και αποτελεί ένα βασικό γεγονός στην κατεργασία πολλαπλών βημάτων του παγκρεατικού πόρου μετασχηματισμού των κυττάρων. Ωστόσο, η σημασία του ρ16 και Smad4 αδρανοποίηση για πολύπλοκες και ιστο-ειδική πτυχές της παγκρεατικής εξέλιξης του καρκίνου, όπως η αγγειογένεση και μετάσταση, είναι λιγότερο κατανοητό [22]. Επίσης, υπάρχουν σχετικά λίγες μελέτες που έχουν εξετάσει τον πιθανό ρόλο των Smad4 και ρ16 στην εξέλιξη της LNM και PNI σε καρκίνο του παγκρέατος.

κύτταρο Καρκίνος εισβολή και μετάσταση είναι κρίσιμα βήματα σε παγκρεατικά εξέλιξης του καρκίνου, και είναι το κύριες αιτίες της κακής επιβίωσης στον καρκίνο του παγκρέατος. Πρόβλεψη εισβολή και μετάσταση για ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος μπορούν να παρέχουν σημαντικές πληροφορίες για την εξέλιξη του καρκίνου του παγκρέατος και πρόγνωση. Ταυτοποίηση βιοδεικτών που συνδέονται με την έκβαση του καρκίνου του παγκρέατος μπορούν να προσφέρουν νέες προσεγγίσεις και στόχους για αντικαρκινική θεραπεία. Ως εκ τούτου, έχουμε πραγματοποιήσει αυτή τη μελέτη για να εξετάσει την έκφραση των RhoT1, Smad4 και p16 στον καρκίνο του παγκρέατος, και να αναλύσει το κατά πόσον οι μορφές έκφρασης των RhoT1, Smad4 και p16 συσχετίζεται με μεταστατικό δυναμικό και είναι προγνωστικά της κλινικής έκβασης σε ασθενείς με παγκρεατική του καρκίνου.

Αποτελέσματα

Χαρακτηριστικά ασθενούς

Όπως φαίνεται στον πίνακα 1, το δείγμα αποτελούνταν από 162 ασθενείς με διάγνωση καρκίνου του παγκρέατος (102 άνδρες και 60 γυναίκες). Η μέση ηλικία κατά τη διάγνωση ήταν 59 ετών (εύρος 34-85 ετών). Το μέσο μέγεθος όγκου ήταν 4 cm (κλίμακα 0,5 έως 14 cm). Οι περισσότεροι όγκοι (117/162, 72%) ήταν καλά διαφοροποιημένα, 8 (8%) ήταν μετρίως διαφοροποιημένες και 31 (19%) ήταν χαμηλή διαφοροποίηση. 80 (49,4%), οι όγκοι χαρακτηρίζονται ως αμερικανική μεικτής επιτροπής για τον Καρκίνο (AJCC) σταδίου Ι, 80 ως (49,4%) το στάδιο ΙΙ, κανένας ως στάδιο ΙΙΙ, και 2 (1,2%) ως το στάδιο IV. 83 (51,2%) των 162 ασθενών που είχαν PNI. 65 (40,1%) από 162 ασθενείς είχαν LNM, ο διάμεσος αριθμός των λεμφαδένων (LNs) εξετάσθηκαν 7. Ο διάμεσος αριθμός των LNs αξιολογήθηκε στους ασθενείς με θετικούς λεμφαδένες ήταν 10 σε σύγκριση με ένα μέσο όρο 6 λεμφαδένων στο λεμφαδένες αρνητικούς ασθενείς (

P

= 0,007).

η

Σύλλογοι μεταξύ των διαφόρων κλινικοπαθολογοανατομικών παράγοντες και η παρουσία της LNM και PNI

Σύλλογοι μεταξύ των διαφόρων κλινικοπαθολογοανατομικών παραγόντων και η παρουσία LNM και PNI αναλύθηκαν για τον προσδιορισμό των παραγόντων κινδύνου της LNM και PNI (Πίνακας 2). Αυτοί οι παράγοντες περιλαμβάνονται: το φύλο, η ηλικία (& lt? 60 ετών ή ≧ 60 ετών), τη θέση του όγκου (κεφάλι ή το σώμα και πίσω), μεγάλη διάμετρος του όγκου (& lt? 4,0 εκατοστά ή ≧ 4,0 εκατοστά), η διαφοροποίηση του όγκου (κακή ή μέτρια /Λοιπόν). Τοποθεσία του όγκου ήταν σημαντικά σχετίζεται με LNM (

P

= 0,03). Δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ LNM και την ηλικία, το φύλο, μεγάλη διάμετρος του όγκου και του όγκου της διαφοροποίησης (

P

& gt? 0,05 για κάθε μία). Επιπλέον, δεν παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ ΡΝ και την ηλικία, το φύλο, τη θέση του όγκου, μεγάλη διάμετρο του όγκου και της διαφοροποίησης του όγκου (όλα

P

& gt? 0,05)

Η

Έκφραση. του RhoT1, Smad4 και ρ16 σε καρκίνο του παγκρέατος ιστοί και Paracancerous ιστοί

RhoT1 και χρώση p16 ήταν εντοπισμένες στο κυτταρόπλασμα (Εικόνα 1). Παρά το γεγονός ότι, Smad4 εκφράστηκε κυρίως στο κυτταρόπλασμα (Εικόνα 1), ορισμένες Smad4 παρατηρήθηκε στον πυρήνα. Τα κυτταροπλασματικά επίπεδα έκφρασης της RhoT1, Smad4 και p16 ήταν χαμηλότερες σε καρκινικούς ιστούς από paracancerous ιστούς (

P

& lt? 0,0001,

P

& lt? 0,0001,

P

= 0,002 , αντίστοιχα). Υπήρξε μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ κυτταροπλασματικών και πυρηνικών Smad4 έκφρασης (Spearman συντελεστής συσχέτισης = 0.321?

P

& lt? 0,0001). Ωστόσο, δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στην πυρηνική Smad4 έκφρασης μεταξύ των ιστών του καρκίνου και paracancerous ιστούς (

P

& gt? 0,05).

Πίνακες Δ, Ε και ΣΤ δείχνουν αντίστοιχα τη θετική έκφραση της RhoT1, Smad4 και p16 στα paracancerous ιστούς. Όλες οι εικόνες ελήφθησαν σε 200 × μεγέθυνση.

Η

Σύλλογοι μεταξύ των επιπέδων έκφρασης των RhoT1, Smad4 και Ρ16 και τις κλινικοπαθολογοανατομικές Χαρακτηριστικά

Η ανάλυση έδειξε ότι η υψηλή κυτταροπλασματική επίπεδο έκφρασης της RhoT1 ήταν σημαντικά αρνητική συσχέτιση με LNM σε καρκινικούς ιστούς (

P

= 0,003). Η διαφορά παρέμεινε σημαντική ακόμα και μετά την προσαρμογή για την ηλικία, το φύλο, την τοποθεσία του καρκίνου και μεγάλη διάμετρο όγκου (

P

= 0,017). Ομοίως, τα επίπεδα κυτταροπλασματικής έκφρασης Smad4 και ρ16 σε καρκινικούς ιστούς ήταν επίσης αρνητική συσχέτιση με LNM (

P

= 0.032,

P

= 0.042, αντίστοιχα). Ωστόσο, δεν υπήρξαν σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ ΡΝ, και τα επίπεδα έκφρασης των τριών πρωτεϊνών (όλα

P

& gt? 0,05? Πίνακας 3). Επειδή δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ των ιστών του καρκίνου και paracancerous ιστούς, η πυρηνική έκφραση της Smad4 αποκλείστηκε από την περαιτέρω δοκιμή της σύνδεσης με τα κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά. Η ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης έδειξε ότι η κυτταροπλασματική επίπεδο έκφρασης των RhoT1 σε ιστούς του καρκίνου έχει λειτουργήσει ως ανεξάρτητος παράγοντας κινδύνου για LNM (

P =

0,042). Ωστόσο, σύμφωνα με την ανάλυση, τα κυτταροπλασματικά επίπεδα έκφρασης Smad4 και ρ16 δεν θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως ανεξάρτητους παράγοντες κινδύνου για LNM (

P

& gt? 0,05). Επιπλέον, τα αποτελέσματα έδειξαν ότι δεν παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ των κυτταροπλασματικά επίπεδα έκφρασης της RhoT1, Smad4, p16 και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά, τα οποία όπως η ηλικία, το φύλο, τη θέση του όγκου, το μέγεθος, τη διαφοροποίηση του όγκου, και το στάδιο AJCC (όλα

P

& gt? 0,05?. πίνακα 4)

η

Επιπλέον, οι καμπύλες ROC δημιουργήθηκαν για να αξιολογήσουν την πιθανή διαγνωστική αξία αυτών των πρωτεϊνών για την πρόβλεψη των δειγμάτων με LNM και δείγματα χωρίς LNM. Η ανάλυση ανακάλυψε ότι η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC (AUC) για RhoT1 ήταν 0.629 [95%

διάστημα εμπιστοσύνης

(

CI

) 0,541 – 0,718], η AUC για την Smad4 ήταν 0.551 (95 %

CI

0.461 έως 0,640) και η AUC για p16 ήταν 0.480 (95% διάστημα εμπιστοσύνης 0,388 έως 0,572). Η στατιστική ανάλυση έδειξε ότι μόνο AUC αξία για RhoT1 ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από 0,5 (

P =

0.005). Στην αποκοπή του 75% (σε σχέση με την έκφραση θετικής-rate), η ευαισθησία της RhoT1 ήταν 69,2% και η ειδικότητα ήταν 55,7% (Σχήμα 2-Α).

Η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC (AUC) για RhoT1 , Smad4 και p16 ήταν 0.629, 0.551 και 0.480 αντίστοιχα. Β δείχνει την ανάλυση της καμπύλης ROC της έκφρασης RhoT1, Smad4 και p16 για τη συνολική επιβίωση (

n =

70). Οι τιμές AUC για τρεις πρωτεΐνες ήταν 0,667, 0,643 και 0,469, αντίστοιχα.

Η

Ανάλυση Επιβίωσης

Η ανάλυση επιβίωσης έδειξε ότι τα ποσοστά επιβίωσης μετά από 5 χρόνια ήταν 28,6%, η διάμεση επιβίωση ήταν 14 μήνες. Η ανάλυση επιβίωσης έδειξε LNM, της διαφοροποίησης του όγκου και το στάδιο (Ι

ν

ΙΙ) ως αρνητικά σημαντικοί προγνωστικοί του παγκρέατος OS καρκίνου (

P =

0.01,

P =

0.003,

P =

0,036, αντίστοιχα), και ασθενείς με αναλογία λεμφαδένων (LNR) & gt? 0 έως & lt? 50% είχαν μια μεγαλύτερη μέση επιβίωση (11 μήνες) σε σύγκριση με τους ασθενείς που είχαν LNR ≧ 50% (8 μήνες) (

P

= 0,035) (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αντίθετα, η αξιολόγηση του OS από την ηλικία, την ομάδα, το φύλο, τη θέση του όγκου, το μέγεθος του όγκου, και PNI δεν έδειξαν σημαντικές διαφορές (

P

& gt? 0,05 για όλους). Δύο ασθενείς με σταδίου IV εξαιρέθηκαν από την ανάλυση επιβίωσης, επειδή το μέγεθος του δείγματος ήταν πολύ μικρό.

Επιπλέον, τα ποσοστά επιβίωσης 5-ετών ήταν 23,4%, 27,1% και 50%, 48,5% σε ασθενείς με χαμηλό -έκφραση και υψηλής έκφρασης της RhoT1 και Smad4 αντίστοιχα. Οι ασθενείς με υψηλά κυτταροπλασματικά επίπεδα έκφρασης RhoT1 και Smad4 επιτευχθεί καλύτερη επιβίωση από τους ασθενείς με χαμηλά επίπεδα έκφρασης του RhoT1 και Smad4 (

Ρ = 0.034

,

Ρ = 0,047

, αντίστοιχα? Σχήμα 3) . Ωστόσο, δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική σχέση σε λειτουργικό σύστημα μεταξύ των ασθενών με υψηλή ή χαμηλή έκφραση του p16 (

P =

0.148). Οι τιμές AUC για RhoT1, Smad4 και p16 ήταν 0.667 (95%

CI

0,532 – 0,802), 0,643 (95%

CI

0,509 – 0,777), και 0,469 (95%

CI

0,328 – 0,610), αντίστοιχα. Επιπλέον, η ανάλυση έδειξε ότι η AUC τιμή για RhoT1 ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από 0,5 (

P =

0.022). Ωστόσο, δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ των περιοχών της Smad4 και ρ16 σε ανάλυση ROC (

Ρ = 0,051

,

Ρ = 0,674

, αντιστοίχως) (Σχήμα 2-Β).

Υψηλή έκφραση RhoT1 και Smad4 σχετίζεται με καλύτερη επιβίωση (

P

= 0,034,

P =

0.047, αντίστοιχα? συνδεθείτε τεστ rank), δεν παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου έκφρασης της p16 και τη συνολική επιβίωση (

P

& gt? 0,05).

η

Ο Πίνακας 5 δείχνει τα αποτελέσματα της μονοπαραγοντική Cox ανάλυση αναλογικών κινδύνων για τις μεγάλες κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά και για την κυτταροπλασματική έκφραση της RhoT1 , Smad4 και p16 σε παγκρεατικά καρκινικούς ιστούς. Η ανάλυση έδειξε ότι οι μεταβλητές με την αύξηση του κινδύνου θανάτου περιλαμβάνονται η κακή διαφοροποίηση [

αναλογία κινδύνου

(

HR

), 2.484? 95%

CI

, 1,329 έως 4,642?

P =

0.004], ανώτερο στάδιο (

HR

, 1,82? 95%

CI

, 01.01 – 03.28?

P =

0,044) και LNM (

HR

, 2,09? 95%

CI

, 1,16 – 3,77?

P =

0.014) και η χαμηλή έκφραση του RhoT1 (

HR

, 1,92? 95%

CI

, 1,02 – 3,61?

P =

0,042). Η πολυπαραγοντική ανάλυση Cox παλινδρόμησης και της διόρθωσης για όλα τα ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά και την έκφραση RhoT1 αποκάλυψε ότι η διαφοροποίηση του όγκου ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας (

P =

0,01), ενώ το στάδιο του όγκου, LNM και η έκφραση RhoT1 δεν ήταν στατιστικά σημαντική (

P = 0,623

,

P =

0.101,

P =

0,3, αντίστοιχα) (Πίνακας 5).

Η

Συζήτηση

Τρέχουσες μελέτες έχουν αναφέρει ότι μοριακών δεικτών μπορούν να παρέχουν ζωτικής σημασίας πληροφορίες για την κατανόηση της εξέλιξης του καρκίνου του παγκρέατος καλύτερα. Συγκρίνοντας την πρωτεΐνη έκφραση των δειγμάτων καρκίνου με διαφορετικό καθεστώς εισβολή και τη μετάσταση μπορεί να παρέχει μια ένδειξη για το μυθιστόρημά της μετάστασης που σχετίζονται με παράγοντες. Στην παρούσα μελέτη, διαπιστώσαμε ότι υπήρχαν σημαντικές διαφορές της κυτταροπλασματικής έκφρασης RhoT1, Smad4 και p16 μεταξύ καρκίνου και paracancerous ιστούς. Αυτά τα αποτελέσματα υπονοείται ότι RhoT1, Smad4 και ρ16 εμπλέκονται στην εξέλιξη του καρκίνου του παγκρέατος. Επιπλέον, η χαμηλή κυτταροπλασματική εκφράσεις RhoT1 και Smad4 συνδέθηκαν με LNM και χειρότερη επιβίωση σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος.

RhoT1 ανήκει στην οικογένεια των μιτοχονδρίων Rho ΟΤΡάσης και αναφέρθηκε για πρώτη φορά από Fransson

κ.ά.

το 2003 [23]. Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι η Rho-ΘΤΡάσες συμμετείχαν στην ρύθμιση μιας ευρείας ποικιλίας κυτταρικών διεργασιών, και έπαιξε σημαντικό ρόλο στην καρκινογένεση, τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων, εισβολή και μετάσταση. Για παράδειγμα, η έκφραση του RhoA και RhoC συχνά αυξημένη σε ανθρώπινους όγκους, υπερ-έκφραση του RhoA και RhoC σε όγκους που σχετίζεται με μετάσταση και εισβολή [24]. Σε αντίθεση, RhoB συχνά ρυθμίζεται προς τα κάτω, χαμηλής-έκφραση της RhoB ήταν αντιστρόφως ανάλογη με την επιθετικότητα του όγκου [25], [26], [27], [28]. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι δεν υπήρχαν διαφορές στα πρότυπα έκφρασης των μελών της οικογένειας Rho στον καρκίνο του ανθρώπου. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι η κυτταροπλασματική επίπεδο έκφρασης των RhoT1 σε καρκινικούς ιστούς ήταν χαμηλότερη από ότι στην paracancerous ιστούς, και μειώθηκε σημαντικά σε ασθενείς με LNM σε σύγκριση με εκείνους που δεν έχουν LNM (

P =

0,017) μετά την προσαρμογή για την ηλικία, το φύλο, την τοποθεσία του καρκίνου και μεγάλη διάμετρο του όγκου. Όπως RhoB, υψηλής έκφρασης RhoT1 σχετίστηκε αρνητικά με την επιθετικότητα του όγκου. Ωστόσο, η ακριβής μοριακός μηχανισμός του είναι σε μεγάλο βαθμό άγνωστη. Αρκετές προηγούμενες μελετήθηκαν έδειξαν ότι RhoT1 εμπλέκεται στην ρύθμιση της μιτοχονδριακής ομοιόστασης και απόπτωση [15], [23], ένας πιθανός μηχανισμός θα μπορούσε να είναι ότι ο καρκίνος των κυττάρων είναι ανθεκτικό σε RhoT1 απόπτωση που διαμεσολαβείται και επιτρέπει την αποφυγή αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο, η οποία οδηγεί σε η έναρξη και εξέλιξη του καρκίνου. Απ ‘όσο γνωρίζουμε, αυτή είναι η πρώτη μελέτη που αποδεικνύει ότι η κυτταροπλασματική έκφραση του RhoT1 εμπλέκεται στην εξέλιξη του καρκίνου του παγκρέατος. Συλλογικά, αυτά τα αποτελέσματα προτείνουν ότι RhoT1 μπορεί να είναι ένα νέο γονίδιο καταστολέα όγκου του καρκίνου του παγκρέατος, και η χαμηλή κυτταροπλασματική έκφραση του RhoT1 μπορεί να χρησιμεύσει ως πιθανή προγνωστικός για την τάση να κάνουν μετάσταση. Ωστόσο, δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση μεταξύ RhoT1 και PNI βρέθηκε στην παρούσα μελέτη. Αυτό υποδεικνύει ότι μπορεί να υπάρχουν διαφορές στους μηχανισμούς μεταξύ LNM και PNI. Περαιτέρω μελέτες Είναι σαφές ότι απαιτούνται για τη διαλεύκανση του μηχανισμού RhoT1 εμπλέκονται σε καρκίνο του παγκρέατος.

Επιπλέον, Smad4 είναι ένα από τα πιο συχνά αδρανοποιούνται τα γονίδια στον καρκίνο του παγκρέατος, και η απώλεια της έκφρασης ρ16 παρατηρείται στον καρκίνο του παγκρέατος πιο [20 ], [21]. Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι η χαμηλή έκφραση του Smad4 συσχετίστηκε με LNM, η οποία ήταν σύμφωνη με τα αποτελέσματα μερικών προηγούμενων μελετών [29], [30], [31]. Tanaka

et al

[32] ανέφεραν ότι η απώλεια της έκφρασης της πρωτεΐνης Smad4 και τη διαγραφή του χρωμοσώματος 18q ήταν σαφώς συνδέεται με τη μετάσταση. Σε μια άλλη μελέτη, Tanaka

et al

διαπίστωσε επίσης ότι η έκφραση της Smad4 ήταν ασθενέστερη στον λεμφαδένα θετική ομάδα σε σύγκριση με την αρνητική ομάδα (

P = 0,00075

) [33]. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η αδρανοποίηση Smad4 ήταν ένα ουσιαστικό μοριακό γεγονός στη διαδικασία της LNM. Επιπλέον, βρήκαμε ότι η χαμηλή έκφραση του ρ16 επίσης συσχετίζεται με LNM, η οποία ήταν σύμφωνη με τα ακόλουθα δύο μελέτες. Zhi-Jie Fu

et al

[34] ανέφεραν ότι η έκφραση p16 στον λάρυγγα καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (LSCC) ήταν κάτω-ρυθμίζονται με καρκίνο του τραχήλου LNM (

P

& lt? 0.05), η καθοδική έκφραση του p16 μπορεί να είναι ένας σημαντικός προγνωστικός παράγοντας για την αυχενική LNM σε ασθενείς LSCC. Daniela

κ.ά.

[35] πρότειναν ότι θετική χρώση κυτταροπλασματική ρ16 μπορεί να σχετίζεται με ένα χαμηλότερο μεταστατικό δυναμικό του πρωτογενούς κακοήθους μελανώματος. Έτσι, η μελέτη μας επιβεβαίωσε επίσης ότι Smad4 και p16 έπαιξε σημαντικό ρόλο στη διαδικασία της LNM στον καρκίνο του παγκρέατος.

Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε περαιτέρω την συσχέτιση μεταξύ των κυτταροπλασματικά επίπεδα έκφρασης της RhoT1, Smad4 και p16 και OS . Βρήκαμε ότι οι ασθενείς των οποίων ο καρκίνος είχε χαμηλή κυτταροπλασματική επίπεδο έκφρασης της Smad4 είχαν σημαντικά χειρότερη επιβίωση από τους ασθενείς με υψηλή κυτταροπλασματική έκφραση της Smad4 (

P =

0.047). Αυτό το εύρημα ήταν συνεπές με κάποια προηγούμενη έρευνα [36], [37]. Επιπλέον, η πιθανή συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ορισμένων μελών της Rho GTPases και της κλινικής έκβασης έχει περιγραφεί προηγουμένως. Για παράδειγμα, Takao

et al

[38] πρότεινε ότι Rac1 εμπλέκεται στην LNM καρκινώματος ουροφόρων του ανώτερου ουροποιητικού συστήματος, και σχετίζεται με μικρότερο χρόνο επιβίωσης ελεύθερης νόσου (

P

& lt ? 0,01) και μικρότερη OS (

P

& lt? 0.001). Ομοίως, μια άλλη μελέτη [28] ανέφερε ότι η υψηλή έκφραση των RhoA και RhoC συνδέθηκαν όχι μόνο με την μυϊκή εισβολή και LNM (

P

& lt? 0.001,

P

& lt? 0,05, αντίστοιχα ), αλλά και με τις φτωχότερες επιβίωση στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης (

P

& lt? 0,0001). Αντιστρόφως, υψηλή έκφραση των RhoB συσχετίστηκε με καλύτερη συνολική επιβίωση (

P

& lt? 0,05). Ωστόσο, μέχρι στιγμής λίγες μελέτες έχουν διερευνήσει τη σχέση μεταξύ της έκφρασης RhoT1 και το αποτέλεσμα ή την πρόγνωση για τους ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι η υψηλή έκφραση RhoT1 ήταν αντιστρόφως ανάλογη με την επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος (

P =

0,034). Επιπλέον, τα αποτελέσματα της μονομεταβλητών αναλογικών κινδύνων κατά Cox ανάλυση για την κυτταροπλασματική έκφραση του RhoT1, Smad4 και ρ16 σε παγκρεατικά καρκινικούς ιστούς έδειξαν ότι η χαμηλή έκφραση του RhoT1 συσχετίστηκε με αύξηση του κινδύνου θανάτου (

Ρ =

0.042). Στο σύνολό τους, η παρούσα μελέτη δείχνει ότι RhoT1 μπορεί να θεωρηθεί ως μια πιθανή προγνωστική βιοδείκτη για τη συνολική επιβίωση, και ως δυνητικό θεραπευτικό στόχο για την παρέμβαση σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος.

Εν κατακλείδι, τα ευρήματά μας υπογραμμίζουν ότι η χαμηλή κυτταροπλασματική επίπεδα έκφρασης RhoT1 και Smad4 σχετίζονταν σημαντικά με την αύξηση του κινδύνου της LNM και των φτωχότερων επιβίωσης. Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η πρώτη έκθεση που αποδεικνύει ότι η έκφραση της RhoT1 μπορεί δυνητικά να χρησιμοποιηθεί για να προβλέψει την έκβαση των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος. Περισσότερες μελέτες με μεγαλύτερο αριθμό περιπτώσεων είναι απαραίτητες για να επικυρωθούν τα συμπεράσματά μας.

Υλικά και Μέθοδοι

Πληθυσμός Ασθενών

Η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας της Βιοτράπεζας Κέντρο σχετίζονται νοσοκομεία. Δείγματα με ενημερωμένη συγκατάθεση συλλέχθηκαν μεταξύ 1995 και 2009, από 162 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση στο πάγκρεας, και αποθηκεύτηκαν σε Βιοτράπεζα Κέντρο του Εθνικού Engineering Center για Biochip στη Σαγκάη. 162 ασθενείς με τόσο κλινικά δεδομένα και επαρκή ιστού για να συμπεριληφθούν στην παρούσα μελέτη εντοπίστηκαν. Κλινικές πληροφορίες, περιλαμβάνονται η ηλικία, το φύλο, την παρουσίαση και παθολογικών ευρημάτων περιλαμβάνονται το μέγεθος του όγκου, το στάδιο, διαφοροποίηση, περινευρικό εισβολή και την κατάσταση των λεμφαδένων, ελήφθησαν από την αρχική εκθέσεις παθολογίας. Παθολογική στάσης ενημερώθηκε σύμφωνα με την ισχύουσα αμερικανική μεικτής επιτροπής σχετικά με τις κατευθυντήριες γραμμές του καρκίνου. Από τη στιγμή που συλλέγονται και αναλύονται τα δεδομένα αναδρομικά, τα δεδομένα παρακολούθησης δεν ήταν διαθέσιμα σε όλες τις περιπτώσεις. Με καταληκτική ημερομηνία τον Δεκέμβριο του 2011, 92 ασθενείς στη μελέτη μας χάθηκαν κατά την παρακολούθηση, 70 ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος συμπεριλήφθηκαν στην τελική ανάλυση την επιβίωσή μας. Η συνολική επιβίωση μετρήθηκε από το χρόνο της οριστικής λειτουργίας σε θάνατο από καρκίνο του παγκρέατος. Μέχρι σήμερα, 46 από τους 70 ασθενείς πέθαναν.

Ιστός μικροσυστοιχιών Κατασκευή

Original, δείγματα παραφίνη-ενσωματωμένες φορμόλη σταθερό χρησιμοποιήθηκαν για την κατασκευή ενός PDAC μικροσυστοιχίες ιστού (FFPE TMA). Αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η & amp? Ε) -stained πρότυπο διαφάνειες από κάθε δείγμα όγκου εξετάστηκαν από ένα μόνο παθολόγο (MR), που τυφλώθηκε σε δείγμα καθεστώς έκφραση της πρωτεΐνης. Αντιπροσωπευτικές περιοχές όγκου και paracancerous μη κακοήθη παγκρεατικά δείγματα του (ΝΜΡ) επιλέχθηκαν από κάθε μπλοκ ιστού και 2 πυρήνες ιστού (0,6 mm σε διάμετρο) ελήφθησαν από κάθε περιοχή χρησιμοποιώντας ένα αυτοματοποιημένο arrayer ιστού (Beecher Instruments, Sun Prarie, WI). Πυρήνες μεταφέρθηκαν σε μεμονωμένα μπλοκ δέκτη. Σε όλες τις περιπτώσεις, ελήφθησαν πυρήνες φυσιολογικό γειτονικό πάγκρεας χρησιμοποιήθηκαν επίσης ως εσωτερικοί έλεγχοι. τμήματα των πέντε μικρών κόπηκαν από κάθε ομάδα αποδέκτη. Οι τομές χρωματίστηκαν με Η & amp? Ε για να επιβεβαιώσει την παρουσία του όγκου μέσα σε κάθε πυρήνα

Η ανοσοϊστοχημεία και Scoring

Αυτή είναι η πρώτη χειρόγραφο με βάση παγκρέατος μας TMA.. TMA πλάκες αποπαραφινοποιήθηκαν, επανυδατώθηκαν μέσω διαβαθμισμένης αλκοόλης, πλύθηκε με Tris ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα, και υποβάλλονται σε επεξεργασία χρησιμοποιώντας μια στρεπταβιδίνη πολύπλοκη μέθοδο βιοτίνης-υπεροξειδάσης. Το αντιγόνο ανάκτηση διεξήχθη με microwaveheating τμήματα σε 10 mM ρυθμιστικού διαλύματος κιτρικού νατρίου (ρΗ 6) για 10 λεπτά. Μετά την απόσβεση της ενδογενούς δραστικότητας υπεροξειδάσης και μπλοκάρισμα της μη ειδικής δέσμευσης, 3 αντισώματα (RhoT1, Σάντα εταιρείας, το αντίσωμα polyclone, έκφραση στο κυτταρόπλασμα? Smad4, Abcam εταιρείας, το αντίσωμα monoclone, έκφραση στο κυτταρόπλασμα και τον πυρήνα? P16, BD εταιρείας, το αντίσωμα monoclone, έκφραση σε κυτταρόπλασμα) προστέθηκαν σε μια ειδική αραίωση, 1:15, 1:15,1:300 αντίστοιχα, μετά από το οποίο ολισθαίνει επωάστηκαν στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Το αντίστοιχο δευτερεύον αντίσωμα βιοτινυλιωμένο κουνελιού χρησιμοποιήθηκε σε μια ειδική αραίωση για 30 λεπτά στους 37 ° C. Μετά από περαιτέρω πλύση με Tris ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα, οι τομές επωάστηκαν με υπεροξειδάση StrepABComplex /χρένο (1:100, ϋΑΚΟ) επί 30 λεπτά στους 37 ° C. Χρωμογόνο ανοσοεντοπισμού διεξήχθη με έκθεση σε 0.05% 3,3-διαμινοβενζιδίνη τετραϋδροχλωρική. Άλλες πυρήνες που περιέχουν PDAC χρησίμευσαν ως θετικοί μάρτυρες για τα έκφραση γονιδίων. Ο φυσιολογικός ορός χρησιμοποιήθηκε στην θέση του πρωτογενούς αντισώματος ως αρνητικός έλεγχος. Τα πλακίδια με αιματοξυλίνη πριν από την αφυδάτωση και την τοποθέτηση

Ανοσοϊστοχημική λεκέδες βαθμολογήθηκαν ημι-ποσοτικά, σύμφωνα με το ποσοστό και την ένταση των κυττάρων επιθηλίου επιβαλλόμενης χρώσης (κυτταροπλασματική και πυρηνική χρώση των κυττάρων επιθηλίου βαθμολογήθηκαν ανεξάρτητα):. 1, 0 σημεία χωρίς χρώση? 2, 1 πόντος για & lt? 20%? 3, 2 βαθμούς για 20-75%? 4, 3 βαθμούς για & gt? 75%, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [39]. Στη συνέχεια, η μέση ένταση του ανοσοαντιδραστικότητα βαθμολογήθηκε σε μία κλίμακα από 0 έως 3 (0, κανένας? 1, αδύναμο, 2, ενδιάμεσα? Και 3 ισχυρά). Η συνολική βαθμολογία ήταν το προϊόν των βαθμολογιών για την ένταση και τη θετική ποσοστό της χρώσης (χρώση του δείκτη = ένταση × θετικό ρυθμό? Απουσιάζει, 0? Ήπια, 1-3? Μέτρια, 4-6? Και ισχυρή, 7-9). Για την ανάλυση των δεδομένων, χρώση δείκτης σημείωσε είτε απουσιάζει ή ήπια θεωρήθηκαν χαμηλή έκφραση, είτε μέτρια ή ισχυρή θεωρήθηκαν υψηλής έκφρασης. Διαφάνειες εξετάστηκαν από 2 ανεξάρτητους παρατηρητές τυφλωμένοι από την κλινική και παθολογική δεδομένα. Σε περιπτώσεις διαφωνίας, συναίνεση επιτεύχθηκε από κοινού επανεξέταση.

Στατιστική Ανάλυση

Η σχέση μεταξύ των επιμέρους κλινικοπαθολογοανατομικών μεταβλητών και LNM, μεταξύ αυτών των πρωτεϊνών έκφρασης και LNM αναλύθηκαν στατιστικά χρησιμοποιώντας το χ

2-τεστ. Ανεξάρτητους παράγοντες κινδύνου για LNM προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης για να εντοπιστούν οι μεταβλητές ανεξάρτητα συνδέεται με τη μετάσταση. Η βέλτιστη ευαισθησία και ειδικότητα των επιπέδων έκφρασης των τριών πρωτεϊνών εκτιμήθηκαν με δέκτη ανάλυση καμπύλης λειτουργίας χαρακτηριστικό (ROC). Η μέθοδος Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί η λειτουργία επιβίωσης, και η δοκιμή log-rank χρησιμοποιήθηκε για την εξέταση στατιστική σημαντικότητα. Cox μοντέλο αναλογικών κινδύνων διεξήχθη για την εκτίμηση δεικτών επικινδυνότητας για το OS και για τη δοκιμή για ανεξάρτητους προγνωστικούς παράγοντες. Όλα τα στατιστικά στοιχεία ήταν αμφίδρομες με

P

αξία & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το πακέτο λογισμικού SPSS (έκδοση 17.0).