Αφηρημένο

Ιστορικό

Πενήντα τοις εκατό των ασθενών με διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης (MI-BC) πεθαίνουν από τη νόσο τους και την τρέχουσα χημειοθεραπεία μόνο οριακά αυξάνει την επιβίωση. Novel θεραπείες που στοχεύουν κινάσες τυροσίνης υποδοχέα ή ενεργοποιημένα ογκογονίδια μπορεί να βελτιώσει το αποτέλεσμα. Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο να στρωματοποιηθούν οι ασθενείς βασίζονται σε μεταλλάξεις στο σχετικό ογκογονίδια. Ασθενείς με μη-διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης (ΝΜΙ-BC) έχουν εξαιρετική επιβίωση, ωστόσο τα δύο τρίτα αναπτύσσουν υποτροπές. Όγκου συγκεκριμένες μεταλλάξεις μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση των υποτροπών σε αναλύσεις ούρων, παρουσιάζοντας μια διαγνωστική διαδικασία πιο φιλικό προς τον ασθενή από κυστεοσκόπηση.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Για να αντιμετωπιστούν αυτά τα ζητήματα, έχουμε αναπτύξει μια δοκιμή μετάλλαξης για την ταυτόχρονη ανίχνευση 19 πιθανές μεταλλάξεις στα

HRAS

,

KRAS

, και

NRAS

γονίδια. Με αυτή τη δοκιμασία και δοκιμασίες μετάλλαξης για το

FGFR3

και

PIK3CA

ογκογονίδια, που προβλήθηκε πρωτογενείς όγκους της ουροδόχου κύστης των 257 ασθενών και 184 υποτροπές από 54 ασθενείς. Επιπλέον, σε πρωτογενείς όγκους έκφραση ρ53 ελήφθη με ανοσοϊστοχημεία. Των πρωτογενών όγκων 64% ήταν μεταλλαγμένη για

FGFR3

, 11% για το

RAS

, 24% για το

PIK3CA

, και 26% για το p53.

FGFR3

μεταλλάξεις ήταν αμοιβαία αποκλειόμενα με το

RAS

μεταλλάξεις (p = 0,001) και συν-συνέβη με το

PIK3CA

μεταλλάξεις (p

=

0.016). P53 υπερέκφραση ήταν αμοιβαία αποκλειόμενα με το

PIK3CA

και

FGFR3

μεταλλάξεις (p≤0.029). Μεταλλάξεις στο

RAS

και

PIK3CA

γονίδια δεν ήταν προγνωστικοί παράγοντες για την ελεύθερη υποτροπής, χωρίς εξέλιξη και αφορούν συγκεκριμένες νόσους επιβίωσης. Σε ασθενείς που παρουσιάζουν ΕΙΜ-BC βαθμού 3 και ΜΙ-BC, 33 και 36% των πρωτοπαθών όγκων ήταν μεταλλαγμένο. Σε ασθενείς με χαμηλού βαθμού ΕΙΜ-BC, το 88% των πρωτοπαθών όγκων έφερε μια μετάλλαξη και το 88% των υποτροπών ήταν μεταλλαγμένο.

Συμπεράσματα /Σημασία

Οι αναλύσεις μετάλλαξης παρουσιάσει ένα διαγνωστικό τεστ να καθορίσει τους ασθενείς για στοχευμένες θεραπείες. Επιπλέον, οι δοκιμασίες είναι ένας πιθανός βιολογικός δείκτης για την ανίχνευση υποτροπών κατά την επιτήρηση. Δείξαμε ότι το 88% των ασθενών που εμφανίζουν χαμηλού βαθμού ΕΙΜ-BC είναι επιλέξιμες για μια τέτοια παρακολούθηση. Αυτό μπορεί να συμβάλει στη μείωση του αριθμού των cystoscopical εξετάσεων

Παράθεση:. Kompier LC, Lurkin Ι, van der Aa MNM, van Ριν BWG, van der Kwast Θ, Zwarthoff ΕΚ (2010)

FGFR3

,

HRAS

,

KRAS

,

NRAS

και

PIK3CA

Μεταλλάξεις σε καρκίνο της ουροδόχου κύστης και το δυναμικό τους ως βιοδείκτες για την Εποπτεύουσα Αρχή και θεραπεία. PLoS ONE 5 (11): e13821. doi: 10.1371 /journal.pone.0013821

Επιμέλεια: Venugopalan Cheriyath, Cleveland Clinic, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 18 Ιούλη 2010? Αποδεκτές: 13 του Οκτωβρίου του 2010? Δημοσιεύθηκε: 3, Νοεμ του 2010

Copyright: © 2010 Kompier et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το Erasmus MC Breedtestrategie Grant (2002-2006) και ο Οργανισμός Ολλανδία για την Υγεία Έρευνας και Ανάπτυξης (ZON-MW, 945-02-046). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνου της ουροδόχου κύστης είναι η πέμπτη πιο κοινή μορφή καρκίνου στο δυτικό κόσμο [1]. Των όγκων της ουροδόχου κύστης 15-20% παρουσιάζει ο μυς-διεισδυτικής νόσου (MI-π.Χ.), η υπόλοιπη ομάδα ως μη διηθητικό όγκων (ΕΙΜ-BC). ΜΙ-BC είναι μία καταστροφική ασθένεια δεδομένου ότι πάνω από το 50% των ασθενών θα πεθάνουν από μεταστατική νόσο. Πρόσφατα, νέες εξελίξεις σε στοχευμένες θεραπείες που χρησιμοποιούν αναστολείς κινάσης τυροσίνης υποδοχέα και σε άλλους τύπους καρκίνου έχουν εμπνεύσει την πιθανή θεραπεία των ασθενών με ΜΙ-BC με παρόμοια ανοσοενισχυτικό παραγόντων [2]. Για όγκους της ουροδόχου κύστης διηθητικό FGFR3 στοχευμένη θεραπεία εξετάζεται [3], [4], [5], [6] και πρόσφατα μια μελέτη Φάσης II άρχισε να διερευνηθεί η αποτελεσματικότητα του TKI258, ενός αναστολέα FGFR3, σε ασθενείς με προχωρημένο urothelial καρκίνου (www.ClinicalTrials.gov NCT00790426). Ομοίως, ο υποδοχέας του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) είναι συχνά υπερεκφράζεται στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης και θα μπορούσε επομένως να είναι ένα σημαντικό θεραπευτικό στόχο για MI-BC [7], [8], [9]. Επί του παρόντος, EGFR στοχευμένη θεραπεία αποτελεί αντικείμενο έρευνας για τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης σε αρκετές κλινικές μελέτες (CALBG-90102, NCT00088946, NCT00380029). Ωστόσο, έχει πρόσφατα καταστεί σαφές ότι οι θεραπείες που στοχεύουν κινάσες τυροσίνης υποδοχέα μπορεί να μην είναι αποτελεσματική όταν οι όγκοι φιλοξενούν μεταλλάξεις στο RAS-ΜΑΡΚ ή PIK3CA-ΑΚΤ οδών κατάντη των υποδοχέων [10], [11], [12], [13] , [14]. Παρ ‘όλα αυτά, παράγοντες αναστολής στόχους καθοδικά σε αυτά τα μονοπάτια είναι σε κλινικές δοκιμές. Αυτό υποδηλώνει ότι η διαλογή των όγκων της ουροδόχου κύστης για μεταλλάξεις σε γονίδια όπως

FGFR3

,

RAS

και

PIK3CA

μπορεί να έχει σημασία για τις μελλοντικές αποφάσεις της θεραπείας. Ως εκ τούτου, ένα εύκολο τεστ που μπορούν να εφαρμοστούν στην κλινική θα είναι επιθυμητή.

Για μη διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης (ΕΙΜ-BC), το μεγαλύτερο πρόβλημα είναι ότι μετά την αρχική διουρηθρική εκτομή της κύστης (TURB) , 50-70% των ασθενών αναπτύσσουν πολλαπλές υποτροπές, με μια πιθανότητα 10-20% που αυτές θα προχωρήσουν έως ΜΙ-BC [15], [16], [17]. Ο κίνδυνος υποτροπής και κίνδυνο εξέλιξης απαιτεί μια δια βίου παρακολούθηση από κυστεοσκόπηση. Το τρέχον πρότυπο είναι να εκτελέσει μια κυστεοσκόπηση μαζί με κυτταρολογική εξέταση ούρων κάθε 3-4 μήνες κατά τα πρώτα δύο χρόνια και δύο φορές το χρόνο στη συνέχεια [18]. Έχουμε δείξει πρόσφατα ότι στις Κάτω Χώρες ασθενείς με ΕΙΜ-BC υποβάλλονται κατά μέσο όρο 20 κυστεοσκοπήσεων κατά τα πρώτα εννέα χρόνια της παρακολούθησης [17], με επανάληψη ανιχνεύεται μόνο σε μία από τις επτά από αυτές τις στιγμές παρακολούθησης. Για τις ΗΠΑ και την Ευρώπη με πληθυσμό 300 και 450 εκατομμύρια, αυτό θα ισοδυναμούσε με 1 και 1,5 εκατ κυστεοσκοπήσεων ετησίως. Μείωση του αριθμού των κυστεοσκοπήσεων, για παράδειγμα, μια εξέταση ούρων που βασίζεται είναι ένας σημαντικός στόχος για την βελτίωση της ποιότητας της ζωής [19], [20], [21]. Επιπλέον, θα μπορούσε να οδηγήσει σε μείωση του κόστους. Επί του παρόντος, καρκίνος της ουροδόχου κύστης είναι το πιο ακριβό τύπος καρκίνου για θεραπεία ανά ασθενή [22], [23]. Ωστόσο, κυτταρολογία και πολλές από τις επί του παρόντος αναπτύσσονται βιοδείκτες ούρα έχουν περιορισμένη ευαισθησία για την ανίχνευση της χαμηλής στάδιο και βαθμό όγκοι που αποτελούν τη κύρια ομάδα που επαναλαμβάνονται (που επισκοπείται στο [24], [25], [26], [27], [28 ]). Ως εκ τούτου, υπάρχει ανάγκη για πιο ευαίσθητες ουροποιητικού βιοδείκτες που μπορούν να εφαρμοστούν σε διαγνωστικά εργαστήρια μοριακής.

ΕΙΜ-BC και MI-BC είναι γενετικά διαφορετικό [29], [30]. Οι όγκοι ΝΜΙ-BC χαρακτηρίζεται από μια υψηλή συχνότητα μεταλλάξεων στο

FGFR3

ογκογονιδίου [31], [32] που οδηγεί στην συστατική ενεργοποίηση της οδού της Ras-ΜΑΡΚ [33], [34], [35] , [36], [37]. Σε MI-BC, μεταλλάξεις στο

TP53

γονίδιο επικρατήσει. Μεταλλάξεις στο

FGFR3

και

TP53

είναι σε μεγάλο βαθμό αμοιβαία αποκλειόμενα γεγονός που υποδηλώνει ότι ΕΙΜ-BC και ΜΙ-BC αναπτυχθούν κατά μήκος διαφορετικών οδών ογκογένεση [38], [39]. Ωστόσο, σε στάδιο ρΤ1 όγκους που εισβάλλουν στο στρώμα συνδετικού ιστού υποκείμενη του ουροθηλίου, συχνά εμφανίζονται μαζί [32], [38], [39]. Πρόσφατα, σωματικές μεταλλάξεις στο

PIK3CA

ογκογονιδίου, το οποίο κωδικοποιεί την καταλυτική υπομονάδα ρ110α κλάσης-IA ΡΙ3-κινάσης, περιγράφηκαν στο 13-27% των όγκων της ουροδόχου κύστης [40], [41]. Αυτές οι μεταλλάξεις συχνά συνέπεσε με

FGFR3

μεταλλάξεις. Μεταλλάξεις στα

RAS

ογκογονίδια (

HRAS

,

KRAS

,

NRAS

) έχουν βρεθεί επίσης στο 13% των όγκων της ουροδόχου κύστης και συνέβη σε όλες τις στάδια και βαθμούς [41], [42]. Ήταν αμοιβαία αποκλειόμενα με το

FGFR3

μεταλλάξεις. Ωστόσο, δεν υπάρχουν δεδομένα σχετικά με τη προγνωστική αξία, από την άποψη του χωρίς υποτροπή, χωρίς εξέλιξη και συγκεκριμένες νόσους επιβίωση, του

RAS

και

PIK3CA

μεταλλάξεις σε καρκίνο της ουροδόχου κύστης είτε μόνος του ή σε συνδυασμό με άλλες μεταβολές. Σε ορισμένα καρκίνου τύπους

έχουν PIK3CA

μεταλλάξεις έχουν συσχετιστεί με εισβολής και χειρότερη πρόγνωση [11], [43], [44], [45], [46]. Από την άλλη πλευρά, υπάρχουν παραδείγματα σωματικών μεταλλάξεων σε καλοήθεις βλάβες του δέρματος που δεν προχωρούν [47], [48]. έχουν Όσον αφορά μεταβολές στη RAS και πρόγνωση, στο παρελθόν έχουν πραγματοποιηθεί μελέτες για την προγνωστική αξία της έκφρασης των πρωτεϊνών RAS Ρ21, ωστόσο τα αποτελέσματα δεν ήταν σύμφωνη [49], [50], [51]. Μια πρόσφατη μελέτη για την έκφραση

HRAS

σε 48 όγκους της ουροδόχου κύστης pTa έδειξε μια αντίστροφη συσχέτιση της αξίας έκφρασης με υποτροπή και την εξέλιξη [52]. Ωστόσο, δεν υπάρχουν πληροφορίες σχετικά με την προγνωστική αξία των μεταλλάξεων στα τρία

RAS

γονιδίων στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης.

Έχουμε δείξει πρόσφατα ότι με το

FGFR3

ανάλυση μετάλλαξης σε ούρα δείγματα από ασθενείς με καρκίνο της ουροδόχου κύστης ήταν δυνατόν να ανιχνευθούν υποτροπιάζοντα όγκους [53], [54]. Η τεχνική απόδοση του

FGFR3

δοκιμή μετάλλαξης σε αυτές τις μελέτες ήταν εξαιρετική. Εξήντα-τρία τοις εκατό των ασθενών με ΕΙΜ-BC είναι μεταλλαγμένο για

FGFR3

. Ένας επιπλέον στόχος της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνηθεί εάν η προσθήκη

RAS

και

PIK3CA

ανάλυση μετάλλαξης με το

FGFR3

ανίχνευση μεταλλάξεων θα μπορούσε ενδεχομένως να αυξήσει το ποσοστό των ασθενών που μπορούν να παρακολουθείται χρησιμοποιώντας δοκιμασίες ούρων με βάση για αυτές τις μεταλλάξεις. Επιπλέον, αυτές οι δοκιμασίες θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν στην κλινική για να καθορίσουν τους ασθενείς που μπορούν να ωφεληθούν από στοχευμένες θεραπείες. Ως εκ τούτου, έχουμε αναπτύξει μια δοκιμασία πολλαπλής μετάλλαξης για την ανίχνευση της πιο συχνά εμφανιζόμενες

HRAS

,

KRAS

, και

NRAS

μεταλλάξεις στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης. Αυτή η δοκιμασία βασίζεται σε δοκιμασίες ότι μπορούμε προηγουμένως αναπτυχθεί [53], [55], [56]. Σύμφωνα με την εμπειρία μας, αυτές οι δοκιμασίες είναι ευαίσθητες, εύκολη να γίνει και να ερμηνεύσουν, και απαιτούν μόνο λίγα νανογραμμάρια DNA. Οι δοκιμασίες είναι επίσης επιτυχής σε DNA από φορμόλη σταθερά ενσωματωμένα σε παραφίνη (FFPE) ιστού ή ούρα [53], [54], [56].

Στη συνέχεια διερευνήθηκε το φάσμα μετάλλαξη του

FGFR3

,

HRAS

,

KRAS

,

NRAS

και

PIK3CA

σε μια μεγάλη σειρά από πρωτοπαθείς όγκους των 257 ασθενών με ΕΙΜ-BC και MI- Π.Χ. κατάσταση μετάλλαξης συγκρίθηκε επίσης με την έκφραση ρ53. Η κατανομή των μεταβολών σε αυτά τα έξι γονίδια μαζί δεν έχει διερευνηθεί σε όγκους της ουροδόχου κύστης πριν. Θα προβληθεί περαιτέρω 184 υποτροπές των 54 ασθενών για να προσδιοριστεί κατά πόσον το καθεστώς μετάλλαξη είναι συνεπής σε υποτροπές με σκοπό να εξετάσει εάν είναι χρήσιμο να ξεκινήσει μια διαχρονική μελέτη σχετικά με την επιτήρηση με αυτές τις δοκιμασίες μετάλλαξης για την ανίχνευση των επαναλαμβανόμενων καρκίνου της ουροδόχου κύστης σε ακυρώνονται δείγματα ούρων από ασθενείς . Η συχνότητα των μεταλλάξεων στο

RAS

και

PIK3CA

σε διαμήκη ρύθμιση που περιέχει πολλαπλές υποτροπές του ίδιου του ασθενούς έχει επίσης δεν έχει ακόμη διερευνηθεί πριν.

Καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι η μετάλλαξη δοκιμασίες παρουσιάσει ένα διαγνωστικό τεστ για τη διαστρωμάτωση των ασθενών με ΜΙ-BC για στοχευμένες θεραπείες. Επιπλέον, δεδομένου ότι το 88% των πρωτογενών όγκων των ασθενών που εμφανίζουν χαμηλού βαθμού ΝΜΙ-BC έφερε μια μετάλλαξη στο

FGFR3

,

RAS

, και /ή

PIK3CA

γονίδια και το 88% των υποτροπών ήταν μεταλλαγμένο, οι αναλύσεις είναι ένα δυναμικό εργαλείο για την ανίχνευση των υποτροπών σε DNA που λαμβάνεται από δείγματα ούρων κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης, η οποία μπορεί να συμβάλει στη μείωση του αριθμού των cystoscopical εξετάσεων και αξίζει να διερευνηθεί.

Μέθοδοι

τα χαρακτηριστικά των ασθενών και την ηθική δήλωση

φορμόλη-σταθερά ενσωματωμένα σε παραφίνη (FFPE) δείγματα των πρωτογενών όγκων μιας μη επιλεγμένων ομάδα 257 ασθενών ελήφθησαν από το Erasmus MC και του Αγίου Franciscus Gasthuis, Ρότερνταμ, Ολλανδία. Τα δείγματα όγκων αντιπροσωπεύουν μια υποομάδα των 286 δειγμάτων που περιγράφηκε προηγουμένως [32]. Δεν ιστού ήταν πλέον διαθέσιμα για τους 29 που λείπουν δείγματα. Η μέση ηλικία αυτής της ομάδας των ασθενών κατά τη διάγνωση ήταν 65,7 χρόνια και θηλέων αρρένων /ήταν 3/1. Οι όγκοι οργανώθηκαν σύμφωνα με το Tumor Κόμβος Μετάσταση κατάταξη του 1997 [57] και των ποιοτήτων που ταξινομούνται σύμφωνα με τα κριτήρια της Παγκόσμιας Οργάνωσης Υγείας του 1973 [58]. Μεταξύ των πρωτογενών όγκων, υπήρχαν 166 πεσετών, 57 ρΤ1, και 34 όγκους pT2-4. Η κατανομή της βαθμολογίας ήταν 84 βαθμού 1, 117 βαθμού 2 και 56 βαθμού 3 όγκους. 54 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με το Erasmus MC και είχε αναπτύξει μία ή περισσότερες υποτροπές, φορμόλη σταθερά ενσωματωμένα σε παραφίνη ιστού συλλέχθηκαν από 184 διαδοχικές υποτροπές. Τα κλινικά δεδομένα των όγκων ελήφθησαν από το ιστορικό περίπτωση ασθενούς. Τα δεδομένα αναλύθηκαν ανώνυμα. δείγματα FFPE χρησιμοποιήθηκαν σύμφωνα με τα πρότυπα που παρουσιάζονται στο «Κώδικα για την ορθή Δευτεροβάθμιας χρήση ανθρώπινων ιστών στις Κάτω Χώρες» (https://www.federa.org/). Ως εκ τούτου, δεν ήταν απαραίτητη συγκατάθεση κατόπιν ενημέρωσης που πρέπει να ληφθούν. Αυτό εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review μας. Μια επανάληψη ορίστηκε ως όγκος αφαιρέθηκε σε διουρηθρική εκτομή η οποία στη συνέχεια επιβεβαιώθηκε ότι ήταν καρκινικό ιστό από έναν παθολόγο. Οι όγκοι αφαιρέθηκαν εντός τριών μηνών μετά την διουρηθρική εκτομή δεν θεωρείται υποτροπή. Πρόοδος ορίστηκε ως εξέλιξης σε στάδιο ή /και στον βαθμό 3. Ασθένεια-ειδική επιβίωση ορίστηκε ως χρόνος από τη διάγνωση έως το θάνατο του καρκίνου της ουροδόχου κύστης. περιόδου παρακολούθησης ήταν υπολογίζονται από την ημερομηνία της διάγνωσης. Λογοκρισία των ασθενών σημειώθηκαν κατά την τελευταία κλινική επίσκεψή τους ή όταν ο ασθενής πέθανε. Σε γενικές γραμμές, οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν και αντιμετωπίζονται σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της Ευρωπαϊκής Ουρολογικής [18]. Η ιατρική-επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημίου Erasmus και το Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Ρότερνταμ ενέκρινε τη μελέτη (metC 168.922 /1998/55).

απομόνωσης DNA και μετάλλαξης ανάλυση

χρησιμοποιήθηκαν αιματοξυλίνη-Eosin βάφονται διαφάνειες για ιστολογική διάγνωση και υπηρέτησε ως μήτρες για χειροκίνητη μικρο ανατομή από τις αντίστοιχες μπλοκ ιστού. Τα δείγματα όγκου αποκόπηκαν περιείχε ένα ελάχιστο των κυττάρων του όγκου 70%. δείγματα όγκων εξήχθησαν από φορμαλίνη σταθερά ενσωματωμένα σε παραφίνη ιστό όγκου από τον de-αποτρίχωση με ξυλόλιο και αιθανόλη. DNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ Tissue DNeasy (Qiagen, Hilden, Γερμανία), σύμφωνα με το πρωτόκολλο. Ρ53, ΜΙΒ-1 και ρ27

Kip1 ανοσοχρώση ελήφθη από van Ριν

et al.

[32].

Εκκινητές για την δοκιμασία multiplex RAS-BC σχεδιάστηκαν με τέτοιο τρόπο, ότι οι μονές έλικες των PCR προϊόντων που περιέχονται τόσο λίγο πιθανή δευτερογενή δομή όσο το δυνατόν, ώστε να διευκολύνεται η αποτελεσματική ανόπτηση των ανιχνευτών ανίχνευσης μετάλλαξης. Primer σχέδιο αποσκοπούσε στην επίτευξη περαιτέρω ταυτόσημες θερμοκρασίες ανόπτησης για να επιτρέψει την ταυτόχρονη ενίσχυση των σχετικών εξονίων των τριών

RAS

γονιδίων σε μία αντίδραση PCR. Επιπλέον, οι περιοχές που πρόκειται να ενισχυθεί επιθεωρήθηκαν για την παρουσία πολυμορφισμών στη βάση δεδομένων του National Center for Biotechnology Information. Δεν παρατηρήθηκαν πολυμορφισμών σε αυτές τις περιοχές. ανιχνευτές ανίχνευση μετάλλαξης για πολλαπλή ανίχνευση

HRAS

,

KRAS

και

NRAS

μεταλλάξεις σχεδιάστηκαν να επανατήκονται είτε στην προς τα εμπρός είτε το ανάστροφο κλώνο που γειτνιάζουν άμεσα με το δυναμικό θέσης μετάλλαξης . Με την δοκιμασία, 19 πιθανές μεταλλάξεις σε 10 κωδικόνια στις 3

RAS

μπορούν να ανιχνευθούν γονίδια. Μαζί αντιπροσωπεύουν το 96% όλων των σωματικών

HRAS

,

KRAS

και

NRAS

μεταλλάξεις βρέθηκαν σε ουροθηλιακά καρκινώματα από το Ινστιτούτο Sanger (www.sanger.ac.uk /γενετική /ΑΕΔ /κοσμική). Για να μπορέσει να γίνει διάκριση μεταξύ των ιχνηλατών με το μέγεθος, προστέθηκαν πολυ (άΤ) ουρές διαφορετικών μηκών. Όλες οι ανιχνευτές σχεδιάστηκαν ώστε να έχουν παρόμοιες θερμοκρασίες αναδιάταξης και επελέγησαν για την απουσία δευτερογενούς δομών και ζευγάρωμα βάσεων με άλλους καθετήρες. αλληλουχίες εκκινητών και ανιχνευτών και συγκεντρώσεις για τις τρεις multiplex δοκιμασίες μετάλλαξης για

FGFR3, ΕΡΑ, HRAS, KRAS

και

PIK3CA

απεικονίζονται στο Σχήμα 1 και 2.

Η

Κάθε πολλαπλή αντίδραση PCR διεξήχθη σε ένα συνολικό όγκο 15 μΐ που περιέχει 0.17 mM dNTPs (Roche, Βασιλεία, Ελβετία), 1,5 mM MgCl2, 5% γλυκερόλη (Fluka, Buchs SG, Ελβετία), 0,3-1,2 μΜ ο κατάλληλος συνδυασμός εναρκτήρα (Invitrogen, Carlsbad, CA), 1 × ρυθμιστικό PCR, και 0.5 μονάδες Taq Go DNA πολυμεράση (Promega, Madison, WI), χρησιμοποιώντας 5 ng γονιδιωματικού DNA ως μήτρα. Ο θερμικός κύκλος συνίστατο από αρχική μετουσίωση στους 95 ° C για 5 λεπτά, ακολουθούμενη από 35 κύκλους κάθε 95 ° C για 45 δευτερόλεπτα, 55 ° C για 45 sec, και 72 ° C για 45 sec. Το τελικό βήμα επιμήκυνσης 72 ° C για 10 λεπτά. Ασυγχώνευτος εκκινητές και dNTPs απομακρύνθηκαν από τα προϊόντα της PCR με την προσθήκη 2 μονάδων εξωνουκλεάσης Ι (ΕχοΙ) και 3 μονάδες αλκαλική φωσφατάση γαρίδας (SAP, USB, Cleveland, Ohio USA).

PCR προϊόντα στη συνέχεια αναλύθηκαν ως προς μεταλλάξεις με χρήση ανιχνευτών για κάθε μια από τις πιθανές θέσεις μετάλλαξης και της SNaPshot® Multiplex Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA). Οι αντιδράσεις ανίχνευσης μετάλλαξης διεξήχθησαν σε ένα συνολικό όγκο 10 μΐ που περιείχε 2,5 μΙ στιγμιότυπο Multiplex Ready Mix Αντίδρασης, 2 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος προσδιορισμού αλληλουχίας BigDye, 1 μΐ μείγματος ανιχνευτή και 1 μΙ SAP /ΕχοΙ κατεργασμένου προϊόντος PCR. αντιδράσεις επέκτασης που αποτελείται από 25 κύκλους μετουσίωσης στους 96 ° C για 10 δευτερόλεπτα και ανασύνδεσης /επέκτασης στους 58,5 ° C για 40 sec, διεξήχθησαν σε ένα θερμικό κυκλοποιητή. Μετά την επέκταση, η περίσσεια του επισημασμένου τριφωσφορικών διδεοξυνουκλεοτιδίων απομακρύνθηκε με επεξεργασία με 1 μονάδα αλκαλικής φωσφατάσης γαρίδας στους 37 ° C για 60 λεπτά και 72 ° C για 15 λεπτά. Επέκταση εκκινητές μετουσιώθηκαν στους 95 ° C για 5 λεπτά και διαχωρίζονται με τριχοειδή ηλεκτροφόρηση σε ένα αυτόματο αλληλουχητή (ΑΒΙ PRISM 3130 XL Genetic Analyzer, Applied Biosystems, Foster City, CA), και η παρουσία ή απουσία μιας μετάλλαξης που υποδεικνύεται από τη φθορίζουσα ετικέτα στο ενσωματώνονται νουκλεοτιδίων. Οι λεπτομέρειες των χρωμάτων των κορυφών μεταλλαγμένων και άγριου τύπου δίδονται στο σχήμα 2. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό GeneScan Ανάλυση έκδοση 3.7 (Applied Biosystems) και GeneMarker έκδοση λογισμικού 1.7 (SoftGenetics LLC, State College, USA).

Η στατιστική ανάλυση

οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση SPSS στατιστικό πακέτο (έκδοση 15.0, SPSS Inc., Chicago, IL, 2003). Οι διαφορές θεωρήθηκαν σημαντικές εάν ρ

& lt?

0.05. Οι σχέσεις μεταξύ της κατάστασης μετάλλαξης και παθολογικών και κλινικές μεταβλητές αναλύθηκαν με t-test του Student, Chi-square test και δύο όψεων Fisher ακριβής δοκιμές. Χωρίς υποτροπή, χωρίς εξέλιξη, και για συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωσης κατάστασης μεταλλάξεων αναλύθηκε χρησιμοποιώντας καμπύλες Kaplan-Meier. Οι δύο όψεων δοκιμασία log-rank διεξήχθη για να συγκρίνει τις καμπύλες.

Αποτελέσματα

καρκίνου της ουροδόχου κύστης συγκεκριμένες RAS-BC δοκιμή μετάλλαξης

Σωματικές μεταλλάξεις στο

HRAS

,

KRAS

και

NRAS

γονιδίων στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης επηρεάζει κωδικόνια 12, 13 και 61. για να διευκολυνθεί η ανίχνευση του

RAS

μεταλλάξεις έχουμε αναπτύξει ένα multiplex RAS-BC δοκιμή μετάλλαξης που οθόνες για 19 μεταλλάξεις ταυτόχρονα, αντιπροσωπεύουν το 96% όλων των πιθανών γνωστές μεταλλάξεις στα 3

RAS

γονιδίων στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης (www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic). Η δοκιμασία απαιτεί μόνο λίγες νανογραμμάρια του DNA και λειτουργεί καλά σε DNA από φορμαλίνη ιστού. Το Σχήμα 3 δείχνει παραδείγματα της δοκιμασίας RAS-BC με πάνελ Α αντιπροσωπεύει την κατάσταση άγριου τύπου και με συγκεκριμένες μεταλλάξεις που απεικονίζεται στο πάνελ Β-ϋ

Πίνακας Α:. Δείγμα άγριου τύπου, πάνελ Β-ϋ: Δείγματα με μεταλλάξεις. Θέση των ανακρίθηκε κωδικόνια, νουκλεοτίδια και τα γονίδια απεικονίζεται στο κάτω μέρος.

Η

Μεταλλάξεις σε πρωτογενείς όγκους

Με το RAS-BC αναλύσεις προσδιορισμού και μετάλλαξης για

FGFR3

και

PIK3CA

, εμείς διαλογή πρωτογενείς όγκους της ουροδόχου κύστης από 257 ασθενών για μεταλλάξεις (Εικόνα 4Α). Συνολικά, 64% (164/257) των όγκων που περιέχονται ένας

FGFR3

μετάλλαξη, συνολικά 28 (11%) δείγματα ήταν μεταλλαγμένα για ένα από τα

RAS

γονίδια και 61 (24 %) έτρεφε μια

PIK3CA

μετάλλαξη. Ο Πίνακας 1 δείχνει τον τύπο των προσδιορισμένων μεταλλάξεων. Η πιο συχνή

RAS

μεταλλάξεις ήταν

KRAS

G12D και

HRAS

Q61R.

KRAS

και

HRAS

μεταλλάξεις εμφανίστηκαν με την ίδια συχνότητα, ενώ

NRAS

μεταλλάξεις δεν ήταν συχνές στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης. Στο

PIK3CA

γονιδίων, οι μεταλλάξεις συνέβησαν κυρίως στα ελικοειδή κωδικόνια τομέα E545K και E542K. Συνολικά, 18% (11/62) του

PIK3CA

μεταλλάξεις είχε συμβεί στους τομείς της κινάσης και 82% στους ελικοειδείς περιοχές. Δεν εντοπίσαμε το E545A αλλοίωση ενδεικτικό για ένα πολυμορφισμό στο

PIK3CA

ψευδογονίδιο των οποίων η λειτουργία είναι άγνωστη [59]. Σε τρεις πρωτογενείς όγκους, δύο διαφορετικές

FGFR3

μεταλλάξεις ήταν παρούσες (S249C μαζί με A393E, G372C ή R248C). Ένα πρωτοπαθούς όγκου περιέχονται δύο διαφορετικές

PIK3CA

μεταλλάξεις στα ελικοειδείς περιοχές (E542K και E545K). Δεν υπήρχε προφανής συν-εμφάνισης ή αμοιβαία αποκλειστικότητα μεταξύ των διαφόρων τύπων του

RAS

και

PIK3CA

μεταλλάξεις.

Οι συχνότητες σε όλους τους πρωτογενείς όγκους της ουροδόχου κύστης (Α) (n = 257) και σε συγκεκριμένα στάδια του όγκου:. pTa /T1-G1 /G2 (Β) (n = 194), ΡΤ /T1G3 (C) (n = 29) και διηθητικό όγκων (D) (n = 34)

Η

Οι πρωτογενείς όγκοι στη συνέχεια κατηγοριοποιήθηκαν σε τρεις υποομάδες με βάση το στάδιο και βαθμό? χαμηλού βαθμού όγκους ΕΙΜ-BC (pTaG1-2 και pT1G2), υψηλής ποιότητας ΕΙΜ-BC (pTaG3 και pT1G3), και διηθητικό όγκων (≥pT2). Στο Σχήμα 4Β-D, οι κατανομές των

FGFR3

,

PIK3CA

και

RAS

μεταλλάξεις σε αυτές τις υποομάδες απεικονίζονται. Στην ομάδα ΡΤΑ-T1G1-2 88% των πρωτοπαθών όγκων φέρουν μετάλλαξη σε τουλάχιστον ένα από τα πέντε ογκογονιδίων που ερευνήθηκαν. Έλεγχος για

PIK3CA

και οι τρεις

RAS

γονίδια αυξήθηκε το ποσοστό όγκους μεταλλαγμένου με 10% σε σύγκριση με το

FGFR3

μόνο. Στα βαθμού 3 και διηθητικό ομάδες όγκου, το συνολικό ποσοστό των μεταλλάξεων στα ογκογονίδια είναι πολύ χαμηλότερη με 33% και 36%, αντίστοιχα. Στον βαθμό 3 όγκους, το ποσοστό των

RAS

μεταλλάξεις είναι σχετικά μεγάλο, ενώ

PIK3CA

μεταλλάξεις είναι πιο εμφανείς στις διηθητικό όγκων. Η προσθήκη του

PIK3CA

και

RAS

δοκιμασίες ως αποτέλεσμα την ανίχνευση του 13% επιπλέον μεταλλαγμένο πρωτογενών όγκων στην ομάδα βαθμού 3 και 15% στην διηθητικό ομάδα.

Co-εμφάνιση μεταλλάξεων

από τις 257 πρωτογενείς όγκους, 26% είχαν υπερέκφραση της ρ53, η οποία είναι ενδεικτική του εσφαλμένου νοήματος μεταλλάξεις. Όταν συνδυάζουμε τις ογκογονίδιο μεταλλάξεις με αυτά στο

TP53

ογκοκατασταλτικό γονίδιο (Πίνακας 2), φαίνεται ότι μόνο το 27 όγκους (11%) ήταν άγριου τύπου για όλες τις εξετάστηκαν τα γονίδια. Υπήρχαν 9 πρωτοπαθών όγκων με συν-ύπαρξη της 3 αλλαγές. Υπήρξε θετική συσχέτιση των μεταλλαγμένων

FGFR3

με

PIK3CA

μεταλλάξεις (p

=

0.016), με το 77% του

PIK3CA

μεταλλάξεις συνεργάζονται συμβαίνει με το

FGFR3

(Σχήμα 5).

FGFR3

μεταλλάξεις ήταν έντονα αμοιβαία αποκλειόμενες με το

RAS

μεταλλάξεις (p

=

0.001). Μόνο το 3,5% των πρωτογενών όγκων περιείχε μια μετάλλαξη και στα δύο γονίδια. Είναι ενδιαφέρον ότι η αμοιβαία αποκλειστικότητα του

FGFR3

και

RAS

μεταλλάξεις παρέμεινε σημαντική στην υποομάδα του PTA /T1 G1 /2 πρωτοπαθείς όγκους, ενώ

PIK3CA

και

FGFR3

μεταλλάξεις είναι σημαντικά συν-συμβαίνων βαθμού 3 όγκους. Τόσο

FGFR3

και

PIK3CA

μεταλλάξεις ήταν αμοιβαία αποκλειόμενα με p53 υπερέκφραση (p

& lt?

0,001 και p

=

0,029, αντίστοιχα).

RAS

μεταλλάξεις δεν ήταν αμοιβαία αποκλειόμενα με το

PIK3CA

και ρ53 μεταλλάξεις στη συνολική ομάδα, ούτε σε διαφορετικές υποομάδες στάδιο του όγκου και της ποιότητας.

Η

συσχετίσεις των μεταλλάξεων με το στάδιο, βαθμός

Στη συνέχεια διερευνήθηκε η σχέση μεταξύ σταδίου και του βαθμού και τις διαφορετικές μεταλλάξεις (Εικόνα 6). Σε πρωτοπαθείς όγκους υπήρχε σημαντική συσχέτιση του

FGFR3

με χαμηλό στάδιο και βαθμό και συσχέτιση της ρ53 υπερέκφραση με υψηλό στάδιο και βαθμό, όπως φαίνεται στο παρελθόν [39]. Ωστόσο, δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ

RAS

κατάσταση μετάλλαξης και το στάδιο ή βαθμό. Η κατανομή σύμφωνα με το στάδιο ήταν 10% pTa (16 166), 18% ρΤ1 (10, 57), και 6% διηθητικό όγκων (2 από 34). Όσον αφορά

PIK3CA

, ο επιπολασμός των μεταλλάξεων ήταν υψηλότερη σε όγκους χαμηλής ποιότητας: 30% Βαθμός 1 (25 από 84), 23% βαθμού 2 (27 117), και το 16% βαθμού 3 (9 από 56 ), ωστόσο η συσχέτιση αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική (p = 0,061). Δεν παρατηρήθηκε συσχέτιση με το στάδιο.

Η συσχέτιση αυτών των μεταβολών σε πρωτογενείς όγκους της ουροδόχου κύστης από 257 ασθενείς με σταδίου (Α) ή Βαθμός (Β) υποδεικνύεται από p-τιμές (χ

2).

Προγνωστική αξία

Πενήντα-εννέα τοις εκατό (154/257) των ασθενών στη μελέτη μας αναπτύχθηκε μία ή περισσότερες υποτροπές, το 10% είχαν εξέλιξη στο στάδιο ή /και στον βαθμό 3, 19% πέθανε από ασθένεια. Καμία από τις αλλαγές διερευνηθεί σε

FGFR3

,

RAS

,

PIK3CA

και p53 στον πρωτογενή όγκο ήταν ένα προγνωστικό παράγοντα για την ανάπτυξη της επανάληψης (επιβίωση χωρίς υποτροπή p & gt? 0.05). συχνότητα μετάλλαξης του

PIK3CA

σε ασθενείς με υποτροπές ήταν παρόμοια σε σύγκριση με ασθενείς χωρίς υποτροπές κατά 24% (37/154) έναντι 23% (24/103). Για

RAS

μεταλλάξεις, αυτές οι συχνότητες ήταν 12% και 10%. Επίσης δεν υπήρχε σχέση μεταξύ της κατάστασης μετάλλαξης του

RAS

και

PIK3CA

και ποσοστό υποτροπής. Όπως δείξαμε προηγουμένως, ασθενείς με

FGFR3

μεταλλαγμένο πρωτοπαθούς όγκου έχουν χαμηλότερο κίνδυνο εξέλιξης και μια καλύτερη συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωσης, ενώ οι ασθενείς με p53 υπερέκφραση έχουν υψηλό κίνδυνο εξέλιξης και χαμηλής συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωσης [32 ], [39]. Ωστόσο,

PIK3CA

ή

RAS

μεταλλάξεις δεν σχετίζεται σημαντικά με την πρόοδο (p

=

0,129, p

=

0.694) ή συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωσης (p

=

0.205, p

=

0,447) σε ολόκληρη την ομάδα, ούτε σε διαφορετικές υποομάδες στάδιο του όγκου και της ποιότητας. Συνδυάζοντας

RAS

και

PIK3CA

κατάσταση μετάλλαξης προβλέπεται παρόμοια αποτελέσματα. Επιπλέον, προσθέτοντας

RAS

ή

PIK3CA

κατάσταση μετάλλαξης στο

FGFR3

ή p53 δεν είχε ως αποτέλεσμα μια καλύτερη πρόβλεψη της χωρίς υποτροπή, χωρίς εξέλιξη ή συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωσης σε σύγκριση με το

FGFR3

ή ρ53 μόνο. Υπήρχαν επίσης καμία σημαντική συσχέτιση των μεμονωμένων

RAS

ισομορφές και

PIK3CA

μεταλλάξεις σε ελικοειδή ή κινάσης πεδία με το στάδιο, το βαθμό ή recurrence-, εξέλιξης, και συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωσης. Επιπλέον, δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση βρέθηκε μεταξύ

RAS

ή

PIK3CA

μεταλλάξεις και να μεταβληθεί Ki-67 (p = 0,413, p = 0,227) ή p27

Kip1 (p = 0,126 και p = 0.580) έκφρασης, δείκτες ενδεικτικό για μια χειρότερη πρόγνωση για τον καρκίνο της ουροδόχου κύστης [60], [61].

οι συχνότητες των μεταλλάξεων σε υποτροπές

από 54 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με το Erasmus MC και είχε αναπτύχθηκε μία ή περισσότερες υποτροπές, ο ιστός ήταν διαθέσιμο από 184 υποτροπές (συμπεριλαμβανομένων των υποτροπών πολυεστιακή). Εδώ, θελήσαμε να διερευνήσουμε εάν η κατάσταση μετάλλαξης επιμένει σε πολλαπλές υποτροπές των ίδιων των ασθενών με σκοπό να εξετάσει εάν είναι πολύτιμη για να ξεκινήσει μια μελλοντική διαχρονική μελέτη σχετικά με την επιτήρηση με τις αναλύσεις μετάλλαξης από την ανάλυση δειγμάτων ούρων. Εξετάσαμε μόνο κατάσταση της μετάλλαξης των γονιδίων για τα οποία έχουμε αναπτύξει την ανάλυση μετάλλαξης στιγμιότυπο βάση (δηλαδή

FGFR3

,

PIK3CA

και

RAS

). P53 υπερέκφραση δεν προσδιορίστηκε σε υποτροπές. Η συχνότητα των p53 υπερέκφραση ήταν επίσης χαμηλή (6/54) στις πρωτογενείς όγκους του αυτή την ομάδα ασθενών που αποτελείται κυρίως από όγκους NMI-BC. Μια λεπτομερής επισκόπηση του σταδίου, το βαθμό και την κατάσταση μετάλλαξης των όγκων αυτών παρουσιάζονται στο Σχήμα 7. Σε ασθενείς με άγριου τύπου πρωτοπαθούς όγκου, υποτροπές ήταν ως επί το πλείστον άγριου τύπου (49/54 υποτροπές), ενώ 5 έτρεφε μια

FGFR3

μετάλλαξη. Ένα υποτροπιάζοντα όγκο περιείχε δύο διαφορετικές

PIK3CA

μεταλλάξεις (E542K και E545K). Είναι ενδιαφέρον ότι, σε υποτροπές

PIK3CA

μεταλλάξεις εκτός από μια

FGFR3

μετάλλαξη σχετίζεται με υψηλότερο βαθμό σε σύγκριση με υποτροπές που φιλοξενούν ένα

FGFR3

μετάλλαξη μόνη (p = 0,012). Αν διαστρωμάτωση των ασθενών με ένα μεταλλαγμένο πρωτοπαθή όγκο, το 81% των υποτροπών ήταν επίσης μεταλλαγμένο και οι επιμέρους συχνότητες ήταν 75% (98/130) για

FGFR3

, 23% (30/130) για

PIK3CA

, και 10% (13/130) για

RAS

. Είναι ενδιαφέρον, υπήρχε ένα 100% συνοχή στο είδος της μετάλλαξης για

RAS

και

PIK3CA

μεταξύ διαφορετικών όγκων του ίδιου ασθενούς. Εμείς νωρίτερα παρατήρησε ότι ορισμένες υποτροπές ήταν άγριου τύπου, όταν ο πρωτογενής όγκος ήταν μεταλλαγμένη για

FGFR3

[17]. Στην παρούσα μελέτη, υπήρχαν 20 130 υποτροπές (15%) στην υποομάδα των ασθενών με ένα μεταλλαγμένο πρωτογενούς όγκου που είχε προχωρήσει σε βαθμό 3, CIS ή διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης (Σχήμα 7). Από αυτούς, το 90% (18/20) ήταν μεταλλαγμένο και ως εκ τούτου θα μπορούσαν να ανιχνευθούν με την δοκιμασία μετάλλαξης. Οι υποτροπές άγριου τύπου σε αυτή την ομάδα ασθενών δεν προχωρούν πιο συχνά από ό, τι τα μεταλλαγμένα υποτροπές? 8% (2/25) των υποτροπών άγριου τύπου είχε προχωρήσει σε CIS και βαθμού 3 (Σχήμα 7), σε σύγκριση με το 17% μεταλλαγμένο υποτροπές. Μία από αυτές τις υποτροπές άγριου τύπου συν-συνέβη μαζί με δύο όγκους μεταλλαγμένου. Έχουμε καθορίζεται περαιτέρω το χρονικό σημείο κατά το οποίο οι υποτροπές άγριου τύπου κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης. Οι περισσότερες από τις υποτροπές άγριου τύπου (18 από 25) συν-συνέβη μαζί με ένα μεταλλαγμένο υποτροπή ή αργότερα που ακολουθείται από ένα μεταλλαγμένο επανάληψη, ενώ 7 εμφανίστηκαν ως άγριου τύπου και μόνο στο τέλος της περιόδου παρακολούθησης όταν δεν περαιτέρω στοιχεία ήταν διαθέσιμο

Α:. μεταλλαγμένο πρωτοπαθείς όγκους και υποτροπές τους? Β: άγριου τύπου πρωτογενείς όγκους και υποτροπές τους. Η πρώτη στήλη δείχνει τον πρωτογενή όγκο. Οι διαδοχικές πλαίσια δείχνουν χρονικά διαδοχική υποτροπές απομακρύνθηκε υπό διαφορετικές διουρηθρική εκτομές (υποδεικνύεται από ένα αριθμό ακολουθίας στην κορυφή). Οι πολυεστιακή όγκοι αφαιρούνται κατά την ίδια διουρηθρική εκτομή τοποθετημένη κάτω από το άλλο. Το στάδιο και το βαθμό των όγκων, την κατάσταση μετάλλαξης (υποδεικνύεται από ένα χρώμα) και η ταυτότητα των 54 ασθενών ασθενή ενδείκνυται.

Η

Ένας από τους σκοπούς της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνηθεί εάν οι αναλύσεις μετάλλαξης είναι ένα δυναμικό εργαλείο για τον εντοπισμό των υποτροπών, προκειμένου να μειωθεί ο αριθμός των cystoscopical εξετάσεων και εάν είναι χρήσιμο να ξεκινήσει μια μεγάλη διαχρονική μελέτη με αυτές τις δοκιμασίες μετάλλαξης για την ανίχνευση της υποτροπιάζουσας όγκων της ουροδόχου κύστης με χρήση DNA που εξάγεται από ουρική κύτταρα. Οι ασθενείς που είναι επιλέξιμες για μια τέτοια παρακολούθηση είναι εκείνα που παρουσιάζουν με ένα μεταλλαγμένο pTaG1-2 ή pT1G2 πρωτοπαθούς όγκου. Για αυτήν την υποομάδα ασθενών η συχνότητα των μεταλλάξεων στο

FGFR3

,

PIK3CA

και

RAS

γονίδια όταν υπολογίζονται ανά περίπτωση υποτροπής (δηλαδή σε περίπτωση πολλαπλών όγκων αφαιρούνται σε διουρηθρική εκτομή, τα δεδομένα μετάλλαξη συνενώθηκαν) απεικονίζεται στο Σχήμα 8. Το σχήμα δείχνει ότι σε αυτή την ομάδα ασθενών μια μετάλλαξη είναι παρούσα σε 88% των συμβάντων υποτροπής.