Αφηρημένο

Το κεντρικό κιρκαδικό ρολόι μέσα στο υπερχιασματικού πυρήνα (SCN) παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην χρονικά οργάνωση και συντονισμό πολλές από τις διαδικασίες που διέπουν τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και ανάπτυξη όγκου σε συγχρονισμό με την /σκότους καθημερινά φως που μπορεί να συμβάλλει στην ενδογενή πρόληψη του καρκίνου. Οι βιοενεργειακό υποστρώματα και μοριακή ενδιάμεσα που απαιτούνται για την κατασκευή της βιομάζας των όγκων κάθε μέρα που προέρχονται τόσο από αερόβια γλυκόλυση (Warburg αποτέλεσμα) και στο μεταβολισμό των λιπιδίων. Χρήση ανθρώπινων ξενομοσχευμάτων καρκίνου του μαστού ιστό απομονώνονται αυξήθηκαν σε γυμνά ποντίκια, διαπιστώσαμε ότι κυκλοφορούν συστημικούς παράγοντες στον ξενιστή και την επίδραση Warburg, δραστηριότητες λινελαϊκό πρόσληψη οξύ /το μεταβολισμό και τη σηματοδότηση της ανάπτυξης στον όγκο δυναμικά ρυθμίζεται, συντονισμένων και ολοκληρωμένων μέσα κιρκαδικό δομή του χρόνου πάνω από ένα κύκλο 24 ωρών φωτός /σκότους με SCN με γνώμονα την παραγωγή νυχτερινό επίφυση της μελατονίνης αντικαρκινικών ορμόνη. Dim φως τη νύχτα (LAN) προκληθείσα μελατονίνη καταστολή διαταράσσει αυτήν κιρκαδιανό-ρυθμιζόμενη ισορροπία ξενιστή /καρκίνου μεταξύ αρκετές σημαντικές καρκίνος μηχανισμούς προληπτικής σηματοδότηση, που οδηγούν σε υπεργλυκαιμία και υπερινσουλιναιμία στον ξενιστή και δραπέτη αερόβια γλυκόλυση, σηματοδότηση λιπιδίων και πολλαπλασιαστική δραστηριότητα στον όγκο.

Παράθεση: Blask DE, Dauchy RT, Dauchy EM, ο Μάο L, Λόφος SM, Greene MW, et al. (2014) Φως έκθεσης at Night Διαταράσσει Host /Καρκίνος του εικοσιτετράωρου Ρυθμιστική Dynamics: Επιπτώσεις στο Φαινόμενο Warburg, λιπιδίων Σηματοδοσίας και Πρόληψης ανάπτυξη του όγκου. PLoS ONE 9 (8): e102776. doi: 10.1371 /journal.pone.0102776

Επιμέλεια: Shin Yamazaki, Πανεπιστήμιο του Τέξας Southwestern Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 25 του Σεπ, 2013? Αποδεκτές: 23 Ιούνη 2014? Δημοσιεύθηκε: 6 Αυγούστου 2014

Copyright: © 2014 Blask et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο γενναιόδωρα υποστηρίζεται από την αμερικανική Ένωση για Laboratory Animal Science Επιχορηγήσεις (www.aalas.org) για Εργαστήριο ζώων Επιστημών (GLAS) Βραβείο για την ΕΤΑ, National Institutes of Health (www.nih.gov) χορηγεί R21CA129875 να DEB, Tulane University School of Ιατρική (www.tulane.edu) και τη Λουιζιάνα Cancer Research Consortium (www.louisianacancercenter.org) Startup επιχορήγησης 631.455 σε DEB και το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας χορηγούν R01CA054152 να SMH. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ανανεωμένο ενδιαφέρον για το μεταβολισμό της ανάπτυξης του καρκίνου [1] – [3] οδήγησε πρόσφατα σε μια εντατική επαναξιολόγηση του ρόλου που διαδραματίζει η αερόβια γλυκόλυση (π.χ., το αποτέλεσμα Warburg) σε κακοήθη ανάπτυξη πρόοδο [4 ]. Προκειμένου να ανταποκριθεί βιοενεργητική ανάγκες τους να υποστηρίξουν τη βιοσύνθεση των μοριακών και κυτταρικών δομικά στοιχεία που απαιτούνται για την ταχεία αύξηση της βιομάζας του όγκου, τα καρκινικά κύτταρα βασίζονται κυρίως στην επίδραση Warburg αντί οξειδωτική φωσφορυλίωση [1] – [4]. Στην πραγματικότητα, το αποτέλεσμα Warburg χαρακτηρίζεται από την ισχυρή κυτταρική πρόσληψη γλυκόζης και μεταβολισμό της σε γαλακτικό μέσω γλυκόλυσης παρά την άφθονη παροχή οξυγόνου [1] – [4]. Μελέτες έχουν επικεντρωθεί στην μεταγωγή σήματος και μεταγραφική δίκτυα, συμπεριλαμβανομένων ΑΚΤ [5], υποξία παράγοντα-1 άλφα (HIF-1α) και c-MYC [6], η οποία οδηγεί το αποτέλεσμα Warburg να ανακατευθύνει βιοενεργητική καρκινικών κυττάρων προς την παραγωγή της μοριακής ενδιάμεσα για την υποστήριξη αδιάκοπο διαίρεση των καρκινικών κυττάρων [1] – [3]. πολλαπλασιασμό των κυττάρων του καρκίνου και την ανάπτυξη του όγκου επικαλούνται επίσης την κυτταρική πρόσληψη λινολεϊκού οξέος (LA), ένα βασικό ωμέγα-6 λιπαρό οξύ (FA), που είναι το πιο διαδεδομένο ΦΑ στην δυτική διατροφή [7] – [9]. Σε πολλούς όγκους, τα καρκινικά κύτταρα αφομοίωση LA μέσω ενός μηχανισμού μεταφοράς cAMP-εξαρτώμενη και μεταβολίζουν το στο μιτογόνο 13-hydroxyoctadecadienoic οξύ (13-ΗΟϋΕ) από το ένζυμο 15-λιποξυγενάση-1 [9] – [12], η δραστηριότητα εκ των οποίων ρυθμίζεται προς τα πάνω με την ενεργοποίηση του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF) και ινσουλινοειδής αυξητικός παράγοντας-1 (IGF-1) υποδοχείς [13], [14]. Σε πολλούς όγκους, συμπεριλαμβανομένων των ανθρώπινων ξενομοσχευμάτων καρκίνου του [9], [11], [12], 13-ΗΟϋΕ ασκεί μία θετική επίδραση ανάδραση σχετικά με EGF και της ανάπτυξης του υποδοχέα IGF-1 μονοπατιών σηματοδότησης για την ενίσχυση της κατάντη φωσφορυλίωση των ERK1 /2 και ΑΚΤ που οδηγεί σε ενισχυμένο κυτταρικό πολλαπλασιασμό και τις αποκρίσεις επιβίωσης [15]. Πρέπει να σημειωθεί, ωστόσο, ότι σε ορισμένα άλλα συστήματα μοντέλο καρκίνου και πειραματική πλαίσια 13-ΗΟϋΕ μπορεί να παίζει έναν ρόλο αντιπολλαπλασιαστική [16].

Ομοιοστατική διαδικασίες που ρυθμίζουν τη φυσιολογία των θηλαστικών και μεταβολισμού στα κύτταρα, ιστούς, και όργανα έκθεμα κιρκαδικούς ρυθμούς που συγχρονίζονται από το φως /σκοτάδι κύκλο καλύπτοντας κάθε μέρα 24 ώρες. Αυτό επιτυγχάνεται μέσω της ενδογενούς ταλαντωτικής δραστηριότητα χρονομέτρηση του SCN στον υποθάλαμο που λαμβάνει πληροφορίες για το σκοτάδι κύκλο φωτός /από τα μάτια πρωτίστως μέσω ενδογενώς φωτοευαίσθητα, melanopsin-θετικά κύτταρα γαγγλίων αμφιβληστροειδούς με επιπλέον είσοδο από ραβδία και κωνία. Φωτική πληροφορίες στη συνέχεια υποβάλλονται σε επεξεργασία από τον SCN και μετάγονται σε μια σειρά ορμονικών και νευρικών εξόδους στους περιφερικούς ιστούς-στόχους [17]. Στους ανθρώπους, η διατάραξη του κιρκαδικού ρύθμιση των μεταβολικών διεργασιών, συμπεριλαμβανομένης της γλυκόζης και των λιπιδίων του μεταβολισμού που προκαλείται μέσω της ανώμαλης χρονισμό του φωτός μπορεί να οδηγήσει σε αυξημένο κίνδυνο για διαβήτη τύπου 2, παχυσαρκία [18], [19] και διάφορες κακοήθειες, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού, όπως έχει έχουν αναφερθεί σε εργαζομένους νυχτερινή βάρδια [20], [21]. Το σήμα εξόδου του SCN που αντανακλά πιο αξιόπιστα κιρκάδιου δραστηριότητα είναι η νυχτερινή επίφυση παραγωγή μελατονίνης που καταστέλλεται από LAN. Το κιρκαδικό σήμα μελατονίνης έχει συνδεθεί με τη χρονική οργάνωση και το συγχρονισμό των πολλών φυσιολογικών και μεταβολικών δραστηριοτήτων, συμπεριλαμβανομένων του μεταβολισμού των λιπιδίων [19] γλυκόζης και, [22], [23].

Έξοδοι από το SCN πιστεύεται ότι συντονίζει η βιολογική χρονική στιγμή της, και στην περίπτωση της μελατονίνης, διαμορφώνουν τις διαδικασίες που διέπουν την έναρξη του όγκου, την προώθηση και την εξέλιξη που συμπεριλαμβάνουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, τη σύνθεση του DNA, την κυτταρική επιβίωση /απόπτωση, ώθηση του κυτταρικού κύκλου, βλάβη του DNA /μηχανισμούς επιδιόρθωσης, δραστηριότητες ογκοκατασταλτικό και των καρκινικών κυττάρων εισβολή /μετάσταση [24] – [27]. Έχουμε προηγουμένως αποδειχθεί ότι η μελατονίνη, σε φυσιολογικές νυκτερινές συγκεντρώσεις στο αίμα, αναστέλλει άμεσα τη σύνθεση του DNA και την ανάπτυξη όγκων καταστέλλοντας την πρόσληψη από τον όγκο που εξαρτάται από cAMP του LA και του μεταβολισμού της στην μιτογόνο μόριο 13-ΗΟϋΕ [10], [12] μέσω ενός υποδοχέα μελατονίνης μεσολάβηση μηχανισμό. Ωστόσο, η πιθανή εμπλοκή του κιρκαδιανού ρύθμιση και οι συνέπειες της διακοπής της στο μεταβολισμό του καρκίνου, ιδιαίτερα το φαινόμενο Warburg, δεν έχουν αντιμετωπιστεί δεδομένου ότι οι έρευνες σε αυτόν τον τομέα έχουν βάση, σχεδόν αποκλειστικά, στο

in vitro μελέτες σε

το οποίο η επιρροή της υποδοχής του καρκίνου του κεντρικού κιρκαδιανού κανονισμού είναι απούσα. Εμείς διατυπωθεί η άποψη ότι η καθημερινή βιοενεργειακό, μεταβολική σηματοδότηση, και πολλαπλασιαστικές δραστηριότητες που απαιτούνται για την κατασκευή του όγκου των υποδομών εμφανίζουν δυναμική κιρκαδικούς ρυθμούς τόσο στο ξενιστή και τον όγκο που συμβάλλουν στην πρόληψη της ανάπτυξης του όγκου. Αυτές οι ρυθμοί, που εξαρτώνται από την νυχτερινή παραγωγή μελατονίνης, μιας κιρκαδικό σήμα πρόληψη της ανάπτυξης του όγκου, διασπώνται με έκθεση του ξενιστή σε LAN με αποτέλεσμα την αύξηση του μεταβολισμού του όγκου και την ανάπτυξη.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Αυτή η μελέτη πραγματοποιήθηκε σε αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις στον οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των ζώων Εργαστηρίου των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από το Πανεπιστήμιο Tulane Θεσμικών φροντίδα των ζώων και την Επιτροπή Χρήση (ΝΙΗ Διασφάλισης # A4499-01). Όλα τα ζώα διατηρήθηκαν σε εγκατάσταση διαπιστευμένο από την Ένωση για την αξιολόγηση και διαπίστευση του εργαστηρίου φροντίδας ζώων, International. Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις πραγματοποιήθηκε υπό κεταμίνη /ξυλαζίνη αναισθησία, και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.

Αντιδραστήρια

υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης (HPLC) -grade χλωροφόρμιο, αιθυλαιθέρα, μεθανόλη, κρυσταλλικό οξικό οξύ, επτάνιο, εξάνιο, και Sep-Pak C18 φύσιγγες για εκχύλιση HPLC των δειγμάτων αγοράστηκαν από την Fisher Chemical (Pittsburgh, ΡΑ). Ελεύθερα λιπαρά οξέα, χοληστερόλη εστέρα, τριγλυκερίδια, φωσφολιπίδια, τα πρότυπα ελαιοκράμβης μεθυλ εστέρας ελαίου, όπως επίσης και τριφθοριούχο βόριο-μεθανόλη, χλωριούχο κάλιο, χλωριούχο νάτριο, υπερχλωρικό και τριχλωροξεικό οξέα αγοράσθηκαν από την Sigma Scientific (St. Louis, ΜΟ). Τα πρότυπα HPLC, (+/-) 5-ΗΕΤΕ και 13 (S) -HODE), καθώς και υπερκαθαρό νερό αγοράσθηκαν από την Cayman Chemical Co. (Αηη Arbor, Michigan).

Ζώα, συνθήκες φωτισμού , την εμφύτευση του όγκου, και την ανάπτυξη

απογαλακτιζόμενων γυναικείο γυμνό αρουραίους (HSD: Rh-

Foxn1 [rnu]

) μεταξύ 35 και 50 g στεγάστηκαν σε σαφή κλουβιά από πολυανθρακικό (2 ποντίκια /κλουβί) σε οι θάλαμοι έκθεση στο φως εργαστηριακή εγκατάσταση σε 12 ώρες φως /12 ώρες σκοτάδι (LD, 12:12) κύκλου (φώτα 0600-1800 ώρες ή χρόνο Zeitgeber ZT0-ZT12 στους 23 ° C και 45-50% υγρασία και επέτρεψε για να εγκλιματιστούν στις συνθήκες αυτές για δύο εβδομάδες. οι αρουραίοι που παρέχονται νερό και τροφή (Purina Prolab RMH 1000) ad libitum καθ ‘όλη τη διάρκεια των μελετών. Μετά την περίοδο εγκλιματισμού, τα ζώα χωρίστηκαν τυχαία σε μια ομάδα ελέγχου από 36 αρουραίους που παρέμειναν για την LD, 12:12 σχήμα φωτισμού (πλήρες σκοτάδι κατά τη διάρκεια της σκοτεινής φάσης) και μια άλλη ομάδα 36 αρουραίων διατηρήθηκε επί LD, 12:12 με έκθεση σε αμυδρό LAN κατά τη διάρκεια της σκοτεινής φάσης. η ένταση του φωτός κατά τη διάρκεια της φάσης φωτός 12 ωρών και στα δύο ομάδων που παρέχονται από ένα σύστημα ενός έρματος /λυχνία (GE Watt Φιλάργυρος, F34CW-RS-WM, 34-W λάμπα) σε κάθε θάλαμο που παρείχε ένα σταθερό φως ερέθισμα στο επίπεδο των ματιών των ζώων των 141 μW /cm

2 ( 345 lux). Στο θάλαμο παροχή αμυδρό LAN, υπήρχε ένα δεύτερο σύστημα έρματος /λυχνία (GE Starcoat, F32T8-SP-11, 32-W λάμπα) που εκπέμπεται σταθερά αμυδρό φως ερέθισμα στο επίπεδο των ματιών των ζώων 0,08 μW /cm

2 ( 0,2 lux) κατά τη διάρκεια της σκοτεινής φάσης 12-ώρες [12]. Έξι εβδομάδες αργότερα, τα ζώα εμφυτεύθηκαν με στεροειδές αρνητικό υποδοχέα (SR-) MCF-7 ξενομοσχευμάτων ανθρώπινου καρκίνου του μαστού κατά τρόπο ιστού-απομονώθηκαν, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12]. Αυτοί οι όγκοι είχαν εξελιχθεί με την πάροδο αρκετών αποσπάσματα από ένα υποσύνολο του SR + ξενομοσχευμάτων που είχε χάσει την έκφραση των υποδοχέων οιστρογόνων και προγεστερόνης και οιστρογόνων έγινε αδιάφορη. Αυτά τα ξενομοσχεύματα ιστοπαθολογικά χαρακτηρίζονται ως φτωχά διαφοροποιημένα, βαθμού 3, διηθητικά πορογενή αδενοκαρκίνωμα όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12]. Κατά τη διάρκεια της μελέτης ανάπτυξης κιρκαδικού /όγκου, όταν οι όγκοι έφθασαν ένα επαρκές μέγεθος για αρουραίους μέτρηση υποβλήθηκαν σε φως CO

2 νάρκωση, και οι διαστάσεις του όγκου μετρήθηκαν μέσω του δέρματος με παχύμετρο κάθε δύο ημέρες? διαστάσεις του όγκου μετατράπηκαν σε εκτιμώμενη βάρη όγκου χρησιμοποιώντας έναν τύπο γραμμικής παλινδρόμησης και οι ρυθμοί ανάπτυξης υπολογίστηκε όπως περιγράφεται προηγουμένως [9], [12]. Το τελικό βάρος του όγκου στην μελέτη της ανάπτυξης του όγκου προσδιορίστηκε με ζύγιση στο τέλος του πειράματος. Στο τέλος καθεμιάς από τις περιόδους ανάπτυξης του όγκου, όταν οι όγκοι έφθασαν περίπου 5-6 g τόσο για τον έλεγχο και την LAN-εκτεθειμένες ομάδες, υποσύνολα των 6 ζώων τυχαίως θανατώθηκαν και οι όγκοι τους αντιστοιχούν συλλέχθηκαν κάθε 4 ώρες κατά τη διάρκεια μιας και μόνο 24 ώρες περίοδο στο 6 διαφορετικά κιρκαδικούς χρονικά σημεία (π.χ., 0800 ώρες = ZT2, 1200 ώρες = ZT6, 1600 ώρες = ZT10, 2000 ώρες = ZT14, 2400 ώρες = ZT18, και 0400 ώρες = ZT22) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [28]. Λόγω των πολύ πιο γρήγορο ρυθμό ανάπτυξης του όγκου στην ομάδα LAN, ξενομοσχεύματα (η = 36) έφθασαν το μέγεθος στόχευσης συγκομιδή των 5-6 g περίπου δύο εβδομάδες πριν από εκείνη των ξενομοσχευμάτων (n = 36) για τον έλεγχο LD 12:12 ομάδα.

αρτηριακή συλλογή αίματος από Host όγκο αρουραίους

Μετά από δύο εβδομάδες τα σχήματα φωτισμού που περιγράφονται παραπάνω, τα ζώα υποβλήθηκαν σε μια σειρά από έξι αίματος χαμηλού όγκου αντλεί μέσω καρδιοκέντηση να συλλέγουν αριστερής κοιλίας αρτηριακού αίματος, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9], [10], [12], [28] για μία περίοδο 30 ημερών πριν από την εμφύτευση του όγκου (βλέπε παραπάνω). Εν συντομία, συλλογές αίμα εκτελέστηκαν σε καθορισμένα διαστήματα 4 ωρών κατά τη διάρκεια μιας περιόδου 24 ωρών ξεκινώντας από ZT2 (0800 οι ώρες) με κάθε ζώο να υποστεί καρδιοκέντηση μόνο μια φορά κάθε 5 ημέρες κατά τη διάρκεια της περιόδου των 30 ημερών πριν από την εμφύτευση του όγκου. Αυτό έγινε προκειμένου τα ζώα να αποκατασταθεί η μικρή απώλεια του όγκου του αίματος τους και να ελαχιστοποιήσουμε το άγχος και να μειώσει τις πιθανές επιπτώσεις της διαδικασίας για τη διατροφή και τη νοσηρότητα /θνησιμότητα. Τα ζώα υποβλήθηκαν σε ελαφρά αναισθησία με

2 εισπνοής (70% CO

2/30% αέρα) CO? 1-ml δείγματα λήφθηκαν από την αριστερή κοιλία με καρδιακή παρακέντηση (λιγότερο από 5% συνολικού όγκου του αίματος) μέσω σύριγγας φυματίνης (25 gauge, 3/8 in? Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ) που έχει υγρανθεί με ηπαρίνη νατρίου (1000 U /ml? Elkin-Sinn, Cherry Hill, NJ), όπως περιγράφηκε προηγουμένως. δειγματοληψία αίματος κατά τη διάρκεια της σκοτεινής φάσης (δηλαδή, 2000, 2400, 0400 ώρες) πραγματοποιήθηκε στο πλαίσιο μιας safelight κόκκινη λυχνία (Kodak 1Α, μοντέλο Β, Κατάλογος # 152 1517? 120 V, 15 W, Rochester, NY), προκειμένου να διατηρηθεί η νυκτερινή κύμα μελατονίνης [9], [10], [12], [28]. Ζώο κόκκινο έκθεσης λάμπα στο ύψος των ματιών κατά τη διάρκεια της σύντομης διαδικασίας καρδιοκέντηση 45 sec δεν ήταν μεγαλύτερη από 0,48 ± 0,01 lux (1,16 ± 0,04 μW /cm

2). Δεν υπήρχαν επιπλοκές που οφείλονται σε αναισθησία ή καρδιοκέντηση κατά τη διάρκεια της περιόδου δειγματοληψίας αίματος? επιβίωση ήταν 100% και τα ζώα ήταν αμέσως ενεργό μετά τη διαδικασία. Τα δείγματα πλάσματος φυλάχθηκαν στους -20 ° C έως ότου προσδιοριστούν για μελατονίνη, ινσουλίνη, γλυκόζη, γαλακτικό και συνολικά λιπαρά οξέα.

Συλλογή του αρτηριακού αίματος από Tumor Perfusion Δότη Rats

Πριν από την έναρξη της διαχύσεις όγκου, 3-4 ενήλικων θηλυκών αρουραίων nude διατηρήθηκαν σε LD 12:12 αναισθητοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας διάλυμα κεταμίνης-ξυλαζίνης (89,1 mg /kg και 9,9 mg /kg, ΙΡ). Τα ζώα με ηπαρίνη μέσω σφαγίτιδα ένεση ηπαρίνης νατρίου (25 mg /kg? Sargent Pharmaceuticals, Schaumburg, IL). Σαράντα έως 50 mls αρτηριακό αίμα συλλέχθηκε μεταξύ 0600 και 0900 ώρες (χαμηλά επίπεδα μελατονίνης) από την δεξιά καρωτιδική αρτηρία αρουραίων δότη μέσω καθετήρα για τα πειράματα διάχυσης όγκου (3 έως 4 διαχύσεις ανά ομάδα), συνενώθηκαν, διηθήθηκαν μέσω 2 «× 2 «μαξιλάρι τουλπάνι (Kendall λεια γάζες σφουγγάρι? Tyco Healthcare, Mansfield, ΜΑ), αποθηκεύονται σε μια δεξαμενή κάτω από ορυκτέλαιο (Cat # M1180-500 ML?. Sigma Scientific, St. Louis, ΜΟ) και ψύχονται στους 4 ° C σε μια δεξαμενή σε πάγο και αναμίχθηκε ήπια μέσω μηχανικού αναδευτήρα (Model # 6975-171? Corning, ΝΥ) [9], [10], [12], [28]

Tissue-απομονωμένο όγκο διάχυσης

Σε Situ

Η

Όταν (SR-) MCF-7 ξενομοσχευμάτων ανθρώπινου καρκίνου του μαστού κατέληξε 5-6 gm εκτιμώμενο βάρος όγκου, τα ζώα προετοιμάστηκαν για τις μετρήσεις διαφορά αρτηριακού-φλεβικού των ολικών λιπαρών οξέων (TFAs), LA, 13-ΗΟϋΕ, γλυκόζη, γαλακτικό, Τ.Θ.

2, CO

2 και pH μεταξύ 0600 και 1000 ώρες, όταν τα ενδογενή επίπεδα μελατονίνης ήταν χαμηλή. Tissue-απομονώθηκαν ξενομοσχεύματα διαχύθηκαν

in situ

με δότη αρουραίου πλήρους αίματος στην οποία είτε συνθετικές μελατονίνης (Sigma, St. Louis, ΜΟ) και /ή 13 (S) -HODE (Cayman Chemicals, Αηη Arbor, ΜΙ), ή ΜΤ

1 /MT ανταγωνιστής των υποδοχέων

2 μελατονίνης S20928 (μια γενναιόδωρη δωρεά από το Ινστιτούτο de Recherches Internationales Servier, Courbevoie Cedex, France) προστέθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9], [10], [12 ], [28]. Σετ (3 ή 4 όγκων /αιμάτωσης) του ιστού που απομονώνονται ανθρώπινου μαστού ξενομοσχεύματα καρκίνου διαχύθηκαν

in situ

για 1 ώρα όπως περιγράφεται προηγουμένως [9], [10], [12], [28] με ολόκληρο -αίμα που συλλέγονται από αρουραίους δότη. Ενσωμάτωση [

3Η] θυμιδίνης εντός του DNA του όγκου άρχισε 20 λεπτά πριν από το τέλος κάθε διάχυσης με έγχυση 20 μΐ φυσιολογικού αλατούχου διαλύματος που περιέχει 2 μCi [μεθυλ-

3Η] θυμιδίνης /gm (New England Nuclear, Perkin Elmer, Boston, ΜΑ) εκτιμώμενο βάρος του όγκου στο αρτηριακό καθετήρα. Κατά την ολοκλήρωση της κάθε διάχυσης, οι όγκοι είχαν κατάψυξη συσφίγγονται κάτω από υγρό άζωτο, ζυγίστηκαν και αποθήκευση στους -85 ° C μέχρι την ανάλυση.

Αρτηριακή Γλυκόζη, Γαλακτικό και Acid Μετρήσεις /Αερίου

Κατά τη διάρκεια της πορείας αυτής της μελέτης αρτηριακά δείγματα ολικού αίματος πάρθηκαν για μετρήσεις του pH, ΡΟ

2, pCO

2, τα επίπεδα γλυκόζης και γαλακτικού, και του αιματοκρίτη χρησιμοποιώντας ένα iSTAT1 Analyzer και ΒΚ4 + και CG8 + (Abbott Laboratories, East Windsor, NJ). Οι τιμές για τη γλυκόζη και γαλακτικό αναφέρονται ως mg /dL και mmol /L, και για ΔΠ

2 και pCO

2 όπως mm Hg. Ελάχιστα επίπεδα ανίχνευσης για το pH, ΡΟ

2 και pCO

2, οι τιμές της γλυκόζης και γαλακτικού ήταν, αντίστοιχα, 0,01, 0,1 mm Hg, 0,1 mm Hg, 0,2 mg /dL και 0,01 mmol /L.

η μελατονίνη και ινσουλίνη αναλύει

επίπεδα μελατονίνης Αρτηριακή πλάσμα μετρήθηκαν μέσω ραδιοανοσοπροσδιορισμού χρησιμοποιώντας τον αρουραίο μελατονίνης

125I – ραδιοανοσολογική κιτ (Labor Diagnostika Nord, Nordham, Γερμανία) και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Packard Cobra 5005 Αυτοματοποιημένη Gamma Counter (Palo Alto, CA), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [10], [12]. επίπεδα ινσουλίνης Αρτηριακή πλάσμα μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ ELISA (Diagnostic Systems Labs., Webster, ΤΧ).

εκχύλιση των λιπαρών οξέων και την ανάλυση

Αρτηριακή πλάσματος των ελεύθερων λιπαρών οξέων (FFA), τα τριγλυκερίδια (TGA ), φωσφολιπίδια (PL), και εστέρες χοληστερόλης (CE) εκχυλίστηκαν από 0.1 ml δειγμάτων, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9] – [10], [12], [28]. Πριν από την εκχύλιση επταδεκανοϊκό οξύ (100 μg), το οποίο είχε διαλυθεί σε χλωροφόρμιο (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ), χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικό πρότυπο. Μεθυλεστέρες λιπαρών οξέων (FAS) αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Hewlett Packard (Ραίο Alto, CA) μοντέλο 5890Α Αέριου Χρωματογράφου εφοδιασμένο με ανιχνευτή ιονισμού φλόγας (μοντέλο # 7673 Α) αυτόματης έγχυσης (μοντέλο # 7673 S), και ολοκληρωτή (μοντέλο # 3396A). Όλοι οι διαχωρισμοί διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας ένα χ 30 m τριχοειδή στήλη 0,25-mm (μοντέλο # 2380? Supelco, Inc., Bellefonte, ΡΑ) στους 190 ° C, με ήλιο ως αέριο φορέα (γραμμική ταχύτητα 20 cm /s? Διάσπαση 100:1). θύρα έγχυσης και τον ανιχνευτή ρυθμίστηκαν σε 220 ° C. Όλες οι μεθυλεστέρες ταυτοποιήθηκαν επί τη βάσει του χρόνου κατακράτησης τους, σε σύγκριση με εκείνη των γνωστών προτύπων. Ελάχιστο ανιχνεύσιμο όριο για τη δοκιμασία ήταν 0,05 μg /ml.

εκχύλιση Tumor λύματος, εκχύλιση πρωτεϊνών και ανάλυση Western blot

Κατεψυγμένα όγκοι κονιοποιούνται και με το χέρι ομογενοποιείται σε 50 mM Hepes, ρΗ 7.5, 150 mM NaCl, 1% ΝΡ-40, 0.1% SDS, 0.1% δεοξυχολικό νάτριο, 1 mM Na3VO4, 100 ηΜ οκαδαϊκό οξύ, και 1 χ κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης Σετ I (Calbiochem /EMD Biosciences, Billerica, ΜΑ). Προϊόντα λύσης όγκου υποβλήθηκαν σε φυγοκέντρηση σε 15,300 χ g για 20 λεπτά. Τα υπερκείμενα δειγματίστηκε και φυλάχθηκε στους -80 ° C. Οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης των υπερκειμένων προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ δοκιμασίας πρωτεΐνης (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA). Η συνολική πρωτεΐνη (80 μg ανά δείγμα) διαχωρίζεται ηλεκτροφορητικώς επί 10% SDS-πολυακρυλαμιδίου και ηλεκτροστυπώθηκαν σε μεμβράνη Hybond. Μετά από επώαση με 5% άπαχο γάλα σε αλατόνερο ρυθμισμένο με Tris που περιέχει 0.1% Tween, τα ανοσοαποτυπώματα ανιχνεύθηκαν με αντισώματα προς φωσφο-ΑΚΤ (Ser

473), c-MYC (Cell Signaling Tech., Inc., Danvers , ΜΑ) ή HIF-1α (BD Biosciences, San Jose, CA). Τα ίδια στυπώματα απογυμνώθηκαν και επανα-διερευνήθηκαν με αντισώματα κατά της ΑΚΤ (Cell Signaling Technology, Inc.), τουμπουλίνης ή GAPDH (αφυδρογονάση 3-φωσφορικής αφυδρογονάσης) (Millipore Corp., Billerica, ΜΑ).

Στατιστική ανάλυση

η παρουσία σημαντικών ρυθμών όγκου κατά την περίοδο 24 ωρών και ο βαθμός της ευρωστίας τους είτε στο κιρκαδιανό-ρυθμίζονται έλεγχο ή -disrupted ΛΑΝ-εκτεθειμένες ομάδες προσδιορίστηκαν με ανάλυση cosinor χρησιμοποιώντας περιοδογραμμικού (VBScript), το λογισμικό . Πρώτες ατομικά στοιχεία του όγκου που συλλέγονται κατά τη διάρκεια μιας μόνο περίοδο 24 ωρών αναλύθηκαν με τη μέθοδο αυτή με ένα σταθερό χρονικό διάστημα 24 ωρών. Οι στατιστικές διαφορές μεταξύ των μέσων τιμών στο LAN-εκτεθειμένη ομάδα έναντι της ομάδας ελέγχου σε κάθε χρονικό σημείο κιρκαδικούς αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας δοκιμασία t ένα ασύζευκτο Student. Οι στατιστικές διαφορές μεταξύ ομάδα σημαίνει στις μελέτες διαπότισης όγκου προσδιορίστηκαν με ANOVA μονόδρομη που ακολουθείται από εξέταση πολλαπλού Σύγκριση Bonferroni για να κάνει τις ακόλουθες πολλαπλές συγκρίσεις μεταξύ όλων των ομάδων: έλεγχος έναντι μελατονίνης? ελέγχου έναντι μελατονίνης + 13-ΗΟϋΕ? ελέγχου έναντι 13-ΗΟϋΕ? μελατονίνη έναντι μελατονίνης + 13-ΗΟϋΕ? μελατονίνης + 13-ΗΟϋΕ έναντι 13-ΗΟϋΕ? και μελατονίνη έναντι 13-ΗΟϋΕ. Οι διαφορές στις πλαγιές των γραμμών παλινδρόμησης (δηλαδή, τα ποσοστά αύξησης του όγκου) μεταξύ των ομάδων προσδιορίστηκαν με αναλύσεις παλινδρόμησης και οι δοκιμές για τον παραλληλισμό (δοκιμασία t του Student). Οι διαφορές θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές σε ρ & lt? 0.05. t-test του Student, μονόδρομη ANOVA ακολουθούμενη από δοκιμή hoc μετά Bonferroni, καθώς και αναλύσεις γραμμικής παλινδρόμησης ήταν όλοι πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας GraphPad Prism 5 λογισμικού.

Αποτελέσματα

εικοσιτετράωρου ρύθμιση και διακοπή των παραγόντων υποδοχής που κυκλοφορεί

Εξετάσαμε πρώτα δυναμικό κιρκαδικού δυναμική και αναστάτωση τους με LAN σε έναν αριθμό παραγόντων συμπεριλαμβανομένης της υποδοχής επίπεδα της μελατονίνης στο πλάσμα, η συνολική ΕΧΟ (TFAs), LA, γλυκόζη, γαλακτικό και ινσουλίνης σε αρουραίους που φέρουν τον ιστό απομονωμένο, στεροειδές αρνητικός υποδοχέας (SR-) MCF-7 ανθρώπινου καρκίνου του μαστού ξενομοσχεύματα σε φως /σκοτάδι (LD) 12:12 κύκλος [12]. επίπεδα μελατονίνης στο πλάσμα ήταν χαμηλά σε όλη την ελαφρά φάση και σημαντικά αυξήθηκε σε κορυφή πλάτος στη μέση της σκοτεινής φάσης (Σχ. 1Α). Η έκθεση των ζώων σε αμυδρό LAN προκάλεσε καταστολή 88% του πλάτους νυκτερινή μελατονίνη χωρίς να επηρεάζει κιρκαδικό φάση του (Εικ. 1Α). TFA πλάσματος (Εικ. 1Β) και LA (Εικ. 1C) ρυθμούς σε ελέγχους LD, οι οποίες εξαρτώνται από κιρκαδιανό SCN καθοδηγείται νυκτερινή δραστηριότητα σίτισης, διατηρήθηκαν σε LAN-εκτεθειμένα ποντίκια δεικνύοντας ότι κιρκαδικού αναστάτωση περιορίστηκε στην καταστολή της νυκτερινής μελατονίνης σήμα. Η κιρκαδική έλεγχος των επιπέδων τόσο της γλυκόζης στο αίμα και την ινσουλίνη ανεξάρτητα από τις επιδράσεις της πρόσληψης τροφής έχει αναφερθεί σε αρουραίους [29]. τα επίπεδα της γλυκόζης του πλάσματος αυξήθηκε μετά τα φώτα για να κορυφωθεί κατά τη φάση μέσα φως που ακολουθείται από μια πτώση μέχρι τα φώτα ανοικτά (Εικ. 1D). Μετά φώτα, οι συγκεντρώσεις γλυκόζης αυξήθηκαν αρχικά, στη συνέχεια μειώθηκε σε ένα ναδίρ στη φάση μέσα σκοτάδι ακολουθείται από μια δεύτερη αύξηση κατά την λήξη της σκοτεινής περιόδου. Οι συγκεντρώσεις γαλακτικού οξέος στο πλάσμα σε ζώα διατηρούνται σε LD 12:12 ήταν γενικά χαμηλή καθ ‘όλη τη φάση φωτός που ακολουθείται από μια αύξηση κατά τη διάρκεια της σκοτεινής περιόδου για να κορυφωθούν δύο ώρες πριν φώτα (Εικ. 1 Ε). Κάτω από συνθήκες χαμηλού LAN, αρουραίους έγινε υπεργλυκαιμίας με αρρυθμίας τα επίπεδα της γλυκόζης στο αίμα παραμένοντας σημαντικά αυξημένα κατά 50% πάνω από τα επίπεδα ελέγχου (Σχ. 1Δ), ενώ αρρυθμίας επίπεδα γαλακτικού οξέος στο αίμα παρέμειναν σταθερά χαμηλότερες από ό, τι οι έλεγχοι καθ ‘όλη τη διάρκεια της περιόδου 24 ωρών (Σχ. 1Ε). Τα κυκλοφορούντα επίπεδα ινσουλίνης παρουσίασαν μια ημερήσια ταλάντωση υπό LD 12:12 (Εικ. 1 F) που γενικά αντικατοπτρίζεται το μοτίβο του κυκλοφορούντος IGF-1 οι συγκεντρώσεις που έχουν αναφερθεί προηγουμένως [28]. LAN-εκτεθειμένα ποντίκια έγινε αξιοσημείωτα υπερινσουλιναιμικής με τα επίπεδα ινσουλίνης διατηρώντας ένα πρότυπο ταλάντωσης παρόμοια με αυτή που παρατηρήθηκε στα LD 12:12 ελέγχους (Σχ 1F.)? κυκλοφορούντος IGF-1 επίπεδα ήταν επίσης κιρκαδικού διαρρηγμένης και αυξημένα υπό συνθήκες LAN [28].

(Α-Ρ) τα επίπεδα της μελατονίνης (Α), TFAs (Β), LA (C), γλυκόζη πλάσματος ( D), γαλακτικό (Ε) και ινσουλίνη (F) μετρήθηκαν σε γυμνούς θηλυκούς αρουραίους ξενιστή που φέρει τον ιστό απομονώνονται SR- MCF-7 ξενομοσχευμάτων ανθρώπινου καρκίνου του μαστού υπό LD, 12:12 (συμπαγείς μαύροι κύκλοι) ή LD, 12:12 + LAN (0,2 lux) (κόκκινοι κύκλοι). Αρτηριακού δείγματα αίματος ελήφθησαν μέσω καρδιακής παρακέντησης σε έξι διαφορετικές κιρκαδικούς χρονικά σημεία κατά τη διάρκεια μιας περιόδου 24 ωρών. Το ίδιο και μοναδικό μοντέλο 24 ωρών για κάθε αναλυτή πλάσμα εμφανίζεται δύο φορές για να τονίσει τη συνέχεια ρυθμό. Zeitgeber χρόνο (ZT) αντιπροσωπεύει ώρες μετά φώτα (ZT0 ή 0.600 ώρες)? τα φώτα στο ZT12 (1800 ώρες). Μαύρες γραμμές στο κάτω μέρος του στοιχεία δείχνουν τη σκοτεινή φάση και κόκκινες γραμμές δείχνουν LAN. Συμπαγές μαύρο ή κόκκινο κύκλοι είναι μέση τιμή ± SD? n = 6 σε κάθε χρονικό σημείο. Σημαντικές ρυθμικά σχήματα υπό LD, 12:12 στο Α – F, σ & lt? 0.001? σημαντική αλλά διαταράσσεται ρυθμικά σχήματα υπό αμυδρό LAN συνθήκες Α – Γ και F μόνο, ρ & lt? 0.001 (μονόδρομη ΑΝΟνΑ). * P & lt? 0,01? ** P & lt?. 0.05 LAN vs LD, 12:12 (

t

test του Student)

Η

εικοσιτετράωρου ρύθμιση και διαταραχή της γλυκόζης του όγκου και του μεταβολισμού λινολεϊκού οξέος

Είμαστε δίπλα ελεγχθεί αν όγκου ξενομοσχεύματα ίδιοι εκτίθενται κιρκαδικούς ρυθμούς σε επίπεδα cAMP όγκου, πρόσληψη LA, σχηματισμός 13-ΗΟϋΕ και το αποτέλεσμα Warburg που θα μπορούσε να διαταραχθεί από το LAN-επαγόμενη καταστολή της μελατονίνης. Στην παρούσα μελέτη, η επίδραση Warburg προσδιορίζεται ως πρόσληψη όγκου της γλυκόζης του αρτηριακού αίματος σε συνδυασμό με την απελευθέρωση του γαλακτικού εντός του όγκου φλεβικό αίμα [1] – [4]. Σύμφωνα με LD, 12:12, τα επίπεδα cAMP όγκου (Σχ. 2Α), η πρόσληψη ΤΡΑ (Σχ. 2Β), LA (Σχ. 2C) πρόσληψη, και το σχηματισμό 13-ΗΟϋΕ (Σχ. 2D), αυξήθηκαν κατά την ελαφρά φάση να κορυφωθούν δύο ώρες πριν από φώτα που ακολουθείται από μια μείωση κατά τη διάρκεια της σκοτεινής φάσης για να φτάσει στο ναδίρ δύο ώρες πριν από φώτα. γλυκόζη όγκου πρόσληψης (Σχ. 2Ε) και γαλακτικό παραγωγής (Σχ. 2F) ακολούθησε παρόμοια καθημερινά ρυθμικό μοτίβο με την αύξηση κατά τη διάρκεια της φάσης φωτός να φθάσει μια κορυφή δύο ώρες πριν να σβήσουν τα φώτα. Κατά τη διάρκεια της σκοτεινής περιόδου υπήρξε μια προοδευτική μείωση σε αυτές τις παραμέτρους με την πρόσληψη γλυκόζης επίτευξη ναδίρ στο τέλος της σκοτεινής φάσης και παραγωγή γαλακτικού μειώνεται σε ένα κοίλωμα κατά την περίοδο μέσα σκοτάδι που ακολουθείται από μια άνοδο μέχρι δύο ώρες πριν σβήσουν τα φώτα. Υπό συνθήκες LAN, ωστόσο, δεν ήταν μόνο αυτοί οι ρυθμοί εντελώς απούσα, αλλά τα επίπεδα του καθενός από αυτά παράμετροι παρέμειναν σημαντικά αυξημένα κατά την περίοδο των 24 ωρών.

(Α-Η) επίπεδα όγκου του cAMP (Α) , πρόσληψη TFA (Β), η πρόσληψη LA (C), ο σχηματισμός 13-ΗΟϋΕ (D), η πρόσληψη γλυκόζης (Ε), γαλακτικό σχηματισμός (F), [

3Η] θυμιδίνης στο DNA (G), και το DNA περιεχόμενο μετρήθηκαν υπό LD, 12:12 ή LD, 12:12 + LAN? βλέπε λεζάντα για το Σχήμα 1 για περαιτέρω πειραματικές συνθήκες. (Ι) Η ανάπτυξη του όγκου και στις δύο ομάδες μετρήθηκε κατά τη διάρκεια του πειράματος. Συμπαγές μαύρο ή κόκκινο κύκλοι είναι μέση τιμή ± SD εκτιμώμενο βάρος του όγκου? n = 6 για εκτιμώμενο βάρος του όγκου. ανάλυση Cosinor αποκάλυψε ισχυρή και άκρως σημαντική ρυθμικά σχήματα υπό LD, 12:12 στην αναλυτών όγκου? δεν υπάρχουν σημαντικές καθημερινές ρυθμικά σχήματα εντοπίστηκαν κάτω από αμυδρό LAN (βλέπε συνοπτικό πίνακα 3). * P & lt? 0,01? ** P & lt? 0,05 LEN vs LD, 12:12 (

t

test του Student). καμπύλες ανάπτυξης όγκου σε I, σ & lt?. 0.01 κλίση της ανάπτυξης του όγκου στην ομάδα LAN vs LD, 12:12 ομάδας (γραμμική παλινδρόμηση)

Η

εικοσιτετράωρου ρύθμιση και διακοπή της έκφρασης του όγκου της σηματοδότησης και μεταγραφικών παραγόντων

Θα απευθύνεται επίσης αν ΑΚΤ, c-myc και /ή HIF-1α, βασικό μεταγραφικό ρυθμιστές της επίδρασης Warburg, παρουσιάζουν κιρκάδιο ρυθμικότητα που διαταράσσεται από dim LAN. Ως κεντρικό διεγερτικό σήμα για καρκινικό κύτταρο επιβίωσης /πολλαπλασιασμού, και μεταβολισμό της γλυκόζης και LA, ενεργοποίηση ΑΚΤ [π.χ., φωσφορυλίωσης στη σερίνη 473 (S473)] ήταν υψηλότερα κατά τη διάρκεια της φάσης φωτός και στη συνέχεια μειώθηκε σε ναδίρ κατά τα μέσα του σκοτεινή φάση. επίπεδα έκφρασης HIF-1α ήταν χαμηλές κατά τη διάρκεια της φάσης φωτός που ακολουθείται από μια αύξηση να κορυφωθεί έκφραση κατά τη διάρκεια της σκοτεινής φάσης (Σχήμα 3 Ε & amp?. F). Ωστόσο, σύμφωνα με αμυδρό έκθεση LAN, η ρυθμική έκφραση τόσο φωσφο-ΑΚΤ (ρΑΚΤ

S473) και HIF-1α διαταράχθηκε τελείως (Σχήμα 3 Α & amp?. Β και Ε & amp? F). Tumor c-myc έκφραση σημαντικά αυξημένα κατά την διάρκεια όλης της φάσης φωτός που ακολουθείται από μια αξιοσημείωτη μείωση σε ένα ναδίρ κατά το δεύτερο ήμισυ της σκοτεινής φάσης (Σχήμα 3 C & amp?. D). Σε απάντηση LAN που προκαλείται από την καταστολή της μελατονίνης, ωστόσο, μια σημαντική, αλλά λιγότερο ισχυρή ρυθμική έκφραση του c-myc συνεχίστηκε κατά την περίοδο 24 ωρών (Σχήματα 3 Γ Ε & amp?. F).

(Α-F ) επίπεδα όγκου της φωσφο-ΑΚΤ

Ser473 (Α & amp? Β), cMyc (C & amp? Α), και HIF-1α (Ε & amp? F) μετρήθηκαν κάτω LD, 12:12 ή LD, 12:12 + LAN? βλέπε λεζάντα για το Σχήμα 1 για περαιτέρω πειραματικές συνθήκες. Συμπαγές μαύρο ή κόκκινο κύκλοι αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD σχετική έκφραση (που προέρχεται από την πυκνομετρική ποσοτικοποίηση των ανοσοκηλίδων) είτε ρΑΚΤ

Ser473, c-myc και HIF-1α σε κάθε χρονικό σημείο κιρκαδικούς? n = 3 αντιπροσωπευτικά δείγματα όγκων σε κάθε χρονικό σημείο. Σχετική έκφραση ρΑΚΤ

Ser473 αντιπροσωπεύει την αναλογία της ρΑΚΤ

Ser473 πρωτεΐνη σε σύνολο (t) πρωτεΐνη ΑΚΤ? σχετική έκφραση του c-myc και HIF-1α αντιπροσωπεύει την αναλογία αυτών των πρωτεϊνών να τουμπουλίνης και GAPDH, αντίστοιχα. ανάλυση Cosinor αποκάλυψε ισχυρή και άκρως σημαντική ρυθμικά σχήματα υπό LD, 12:12 στην αναλυτών όγκου? εκτός από c-myc, δεν υπάρχουν σημαντικές καθημερινές ρυθμικά σχήματα εντοπίστηκαν κάτω από αμυδρό LAN (βλέπε συνοπτικό πίνακα 4). Στατιστικές συγκρίσεις δεν ήταν σε θέση να γίνει μεταξύ των αντίστοιχων χρονικών σημείων μεταξύ της LD, 12:12 και ομάδες LAN από το άνοσο πραγματοποιήθηκαν για τις δύο ομάδες σε ξεχωριστές εκτελέσεις. Μόνο ένα κύκλο 24 ωρών από ανοσοστυπώματα τρέξει και να εμφανίζεται, ενώ η πυκνομετρική αναπαράσταση των ίδιων των ανοσοστυπωμάτων είχε εμφανιστεί δύο φορές για να τονίσει τη συνέχεια ρυθμό, όπως αναφέρεται στο υπόμνημα της Εικ. 1.

Η

εικοσιτετράωρου ρύθμιση και διακοπή του όγκου πολλαπλασιαστική δραστηριότητα

Με βάση τις ανωτέρω διαπιστώσεις, εμείς ως αίτημα την εμφάνιση των αντίστοιχων κιρκαδιανό αλλαγές στον όγκο πολλαπλασιαστική δραστηριότητα και το περιεχόμενο του DNA. Βρήκαμε ότι ο όγκος [

3Η] θυμιδίνης στο DNA (Σχ. 2G), καθώς και το περιεχόμενο του DNA (Σχ. 2Η) αυξήθηκε κατά τη διάρκεια της φάσης φωτός λίγο μετά τα φώτα για να κορυφωθούν δύο ώρες πριν να σβήσουν τα φώτα. Κατά τη διάρκεια της σκοτεινής φάσης, όμως, και οι δύο [

3Η] θυμιδίνης και του DNA περιεχομένου μειώθηκε σε ναδίρ δύο ώρες πριν φώτα (Σχήματα 2 G & amp?. Η). Οι κιρκαδικού ταλαντώσεις σε [

3Η] θυμιδίνης και το περιεχόμενο του DNA δείχνουν ότι ο αριθμός των καρκινικών κυττάρων αυξηθεί κατά τη διάρκεια της φάσης φωτός που οφείλεται στην αυξημένη πολλαπλασιαστική δραστηριότητα, ενώ κατά τη διάρκεια του αριθμού σκοτεινό κελί φάση μειώθηκε υποδηλώνοντας ότι τα αποπτωτικά απώλεια κυττάρων που συμβαίνουν παράλληλα με μειωμένη κυτταρική πολλαπλασιασμός. Τα αποτελέσματά μας συμφωνούν με προηγούμενες μελέτες για τον καρκίνο του μαστού μεταφυτεύσιμων ποντίκι που δείχνει ότι ακαθάριστα μεγέθη του όγκου και των ρυθμών ανάπτυξης στην πραγματικότητα κυμαίνονται σε ένα κιρκαδιανό τρόπο σε όλη κάθε ημέρα της περιόδου της καθαρής αύξησης του όγκου [30]. Σε απάντηση LAN, η ημερήσια ταλάντωση σε πολλαπλασιαστικές περιεχόμενο δραστηριότητα και το DNA εξουδετερωθεί καθώς αυτές οι παράμετροι παρέμειναν συνεχώς αυξημένα καθ ‘όλη τη διάρκεια της περιόδου 24 ωρών (Σχήμα 2 G & amp?. Η). Υπό κιρκάδιου ρυθμίζονται συνθήκες, η αύξηση του όγκου αυξήθηκε σταθερά κατά τη διάρκεια μιας περιόδου δύο εβδομάδων, ενώ στο πλαίσιο του κιρκαδιανού-διαταραχθεί συνθήκες ο ρυθμός ανάπτυξης αυξήθηκε κατά δύο φορές κατά τη διάρκεια των ελέγχων (Εικ. 2Θ).

Πιθανές ρύθμιση μελατονίνης του