Αφηρημένο

Ιστορικό

Η ύπαρξη των κυττάρων Tc17 παρουσιάστηκε πρόσφατα σε διάφορους τύπους μολυσματικών και αυτοάνοσων νοσημάτων, αλλά διανομής και λειτουργίες της μήτρας καρκίνου του τραχήλου της μήτρας (UCC) τους δεν έχουν πλήρως διευκρινιστεί.

Μέθοδοι

Η συχνότητα των κυττάρων Tc17 σε δείγματα περιφερικού αίματος που λαμβάνονται από ασθενείς UCC, τραχηλική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (CIN) ασθενείς και υγιείς μάρτυρες προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής. Εκτός αυτού, η επικράτηση των κυττάρων Tc17 και τις σχέσεις τους με τα κύτταρα Th17 και Foxp3 εκφράζουν Τ κύτταρα καθώς επίσης μικροαγγείων σε δείγματα ιστών από τους ασθενείς εκτιμήθηκαν με χρώση ανοσοϊστοχημείας.

Αποτελέσματα

Σε σύγκριση με ελέγχους, οι ασθενείς με UCC ή CIN είχαν υψηλότερο ποσοστό κυττάρων Tc17 τόσο περιφερικό αίμα και του τραχήλου της μήτρας ιστούς, αλλά το επίπεδο των κυττάρων Tc17 σε UCC ιστούς ήταν σημαντικά υψηλότερη από ότι σε ιστούς CIN. Εκτός αυτού, το αυξημένο επίπεδο των Tc17 στην UCC ασθενείς συνδέθηκε με την ιδιότητα του πυελικού μεταστάσεις στους λεμφαδένες και την αύξηση της πυκνότητας μικροαγγείων. Τέλος, σημαντικές συσχετίσεις της διείσδυσης μεταξύ των κυττάρων Tc17 και κύτταρα Th17 ή Foxp3 εκφράζουν Τ κύτταρα παρατηρήθηκαν στην UCC και CIN ιστούς.

Συμπεράσματα

Αυτή η μελέτη δείχνει ότι Tc17 κυττάρων διείσδυση στους καρκίνους του τραχήλου είναι που συνδέονται με την εξέλιξη του καρκίνου που συνοδεύεται από αυξημένη διείσδυση των κυττάρων Th17 και ρυθμιστικά Τ κύτταρα καθώς και προωθούνται αγγειογένεση του όγκου

Παράθεση:. Zhang Υ, Χου F, Liu Χ, Ma D, Zhang Υ, Κονγκ Β, et al . (2014) Κύτταρα Tc17 σε ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. PLoS ONE 9 (2): e86812. doi: 10.1371 /journal.pone.0086812

Επιμέλεια: Jian-Xin Gao, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, η Κίνα

Ελήφθη: 27 του Μάρτη του 2013? Αποδεκτές: 19η Δεκεμβρίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 11 Φεβρουαρίου 2014

Copyright: © 2014 Zhang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (αρ. 81172486, 81170515, και 81072122) και το Πρόγραμμα Ανάπτυξης Shandong Τεχνολογικής (Νο 2006BS03060). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

μήτρας καρκίνου του τραχήλου (UCC), η δεύτερη πιο διαδεδομένη κακοήθεια στις γυναίκες παγκοσμίως [1], θεωρείται ότι είναι ένα σημαντικό ανοσογόνο όγκου, όπως ιού των ανθρώπινων θηλωμάτων (HPV) υποτύπων υψηλού κινδύνου προκαλούν πολυσταδιακή καρκινογένεση από τραχηλική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (CIN) μέσω καρκίνωμα in situ σε διηθητικό καρκίνο και μεταστατικό καρκίνο. Εν τω μεταξύ, οι απαντήσεις των ανοσοποιητικών συστημάτων ξενιστή, ειδικά της κυτταρικής ανοσολογικής απόκρισης, παίζουν σημαντικό ρόλο στον έλεγχο τόσο των λοιμώξεων από HPV και το σχηματισμό νεοπλασματικών HPV-συνδέονται [2], [3]. Αν και η κυτταρική προσαρμοστική ανοσία είναι ένα σημαντικό συστατικό στον όγκο ανοσολογική επιτήρηση, οι μηχανισμοί που βρίσκονται πίσω ανοσίας όγκου δεν είναι πλήρως κατανοητή [4].

Τα πρωτογενή κύτταρα υπεύθυνα για την κυτταρική ανοσοαπόκριση είναι ένα σύνολο T υποσύνολα, συμπεριλαμβανομένων βοηθητικά Τ κύτταρα (Th), κυτταροτοξικά Τ κύτταρα (Tc), και κατασταλτικά Τ κύτταρα (Ts). Ένα περιγράφηκε πρόσφατα Th υποσύνολο, CD4

+ Τ κυττάρων με IL-17 της παραγωγής (κύτταρα Th17), έχει δειχθεί ότι παίζει σημαντικό ρόλο στις συνθήκες φλεγμονής, της αυτοανοσίας και αλλεργικές αντιδράσεις [5] – [7]. Σε μια πρόσφατη μελέτη, παρατηρήσαμε ότι τα κύτταρα Th17 ήταν πολύ εμπλουτισμένο στο περιφερικό αίμα των ασθενών UCC ανθρώπων, και τα επίπεδά τους ήταν συσχετίζεται θετικά με την κατάσταση των μεταστάσεων λεμφαδένων και vasoinvasion [8]. Ωστόσο, οι υποομάδες της IL-17

+ CD8

+ Τ κύτταρα (κύτταρα Tc17), βρέθηκε πρόσφατα σε διάφορες συνθήκες μόλυνσης και αυτοάνοσων ασθενειών [9] – [12], δεν έχουν πλήρως μελετηθεί και η βιολογική τους λειτουργίες εξακολουθούν να λείπουν.

CD8

+ κυτταροτοξικά Τ κύτταρα (κύτταρα Tc) παίζουν κρίσιμο ρόλο στην ανοσολογική απόκριση ξενιστή σε ενδοκυτταρικά παθογόνα και τον καρκίνο. Λόγω της απολυμένους έκφραση Eomes μεταγραφικού παράγοντα Τ-box και T-bet, τα κύτταρα Tc μοίρα τους να εξελιχθούν σε κυτταρολυτικά κύτταρα τελεστές που παράγουν IFN-γ και εκφράζουν γράνζυμο Β και περφορίνης για να σκοτώσει τα κύτταρα-στόχους [13], [14] . Ωστόσο, οι μελέτες των επιπτώσεων των κυττάρων Tc17 στις ανοσολογικές αντιδράσεις είναι σπάνιες. Σε αντίθεση με το κλασικό CD8

+ κύτταρα Tc, τα κύτταρα Tc17 είναι αρνητικές για γράνζυμο Β, καθώς και περφορίνη και στερούνται κυτταρολυτική δραστικότητα

in vitro

[9], [12], [15], και η απουσία του Eomes σε λεμφοκύτταρα που διηθούν όγκο συσχετίζεται με αυξημένη λεμφαδένα μετάστασης σε καρκίνους του παχέος [16]. Παρ ‘όλα αυτά, είναι ενδιαφέρον ότι μετά από τη μεταφορά υιοθεσίας υψηλής καθαρότητας, Αγ-ειδική, IL-17 που εκκρίνουν CD8

+ Τ κυττάρων προς Ag εκφράζουν ξενιστές, τα μεταφερόμενα κύτταρα Tc17 θα μπορούσε να μετατρέψει σε ΙΡΝ-γ που παράγουν κύτταρα τελεστές που στερούνται IL-17 έκφρασης, οι οποίες θα μπορούσαν να συσσωρευτούν αξιοσημείωτα και να προκαλέσει σημαντική πνευμονική παθολογική μεταβολές [12] ή την υποχώρηση των μεγάλων εγκατεστημένων όγκων [15], [17]. Τα ευρήματα αυτά μπορεί να εξηγηθεί από την ύπαρξη της πλαστικότητας των κυττάρων Tc17. Ωστόσο, οι ακριβείς επιδράσεις της φυσικά υπήρχε κυττάρων Tc17

in vivo

όπως στον πνεύμονα, στο πεπτικό βλεννογόνο [18], και στα ποντίκια που φέρουν όγκο [19] είναι ακόμη σε μεγάλο βαθμό άγνωστες. κύτταρα Tc17 εντοπίστηκαν πρόσφατα στο ανθρώπινο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [20], αλλά τα δεδομένα που αφορούν τη βιολογική λειτουργία τους, καθώς και των ρυθμιστικών μηχανισμών εξακολουθεί να απουσιάζει. Εδώ, με στόχο να διερευνήσει τα επίπεδα, καθώς και τις πιθανές βιολογικές λειτουργίες των κυττάρων Tc17 σε UCC, η οποία είναι γνωστό ότι είναι ένας τύπος εξαιρετικά ανοσογόνος καρκίνο που ξεκίνησε η επίμονη μόλυνση από HPV υψηλού κινδύνου.

η μελέτη αυτή, επιδιώξαμε να καθορίσει την κατανομή των κυττάρων Tc17 στην bothperipheral αίματος και του τραχήλου της μήτρας ιστούς από υγιείς μάρτυρες, CIN και UCC ασθενείς. Επιπλέον, για τον προσδιορισμό των πιθανών ρόλων των κυττάρων Tc17, η σχέση μεταξύ των κυττάρων Tc17 και κλινικά χαρακτηριστικά της UCC, καθώς και την πυκνότητα μικροαγγείων στην αυχενική ιστούς ερευνήθηκαν. Επιπλέον, σε συνδυασμό με προηγουμένως έκθεση [8], [25], οι συσχετίσεις των επιπέδων των κυττάρων Tc17 με κύτταρα Th17 ή Foxp3 εκφράζουν Τ κύτταρα προσδιορίστηκαν επίσης μας.

Σχεδιασμός και Μέθοδοι

Ηθική δήλωση

Εγγραφή έλαβε χώρα μεταξύ του Μαΐου 2009 έως τον Απρίλιο του 2012 στο Qilu Νοσοκομείο, Πανεπιστήμιο Shandong. Η έρευνά μας εγκρίθηκε από την Ιατρική Επιτροπή Ηθικής της Qilu Νοσοκομείο, Πανεπιστήμιο Shandong. Μια γραπτή ενημέρωσε έγγραφο συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε συμμετέχοντα. Πληροφορημένη συναίνεση δήλωσε ότι απομεινάρια του περιφερικού αίματος του ασθενούς και του τραχήλου της μήτρας ιστών αποκόπηκαν κατά τη διάρκεια χειρουργικής επέμβασης θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για την εξέταση των Τ υποσύνολα. Αυτά τα δείγματα χρησιμοποιήθηκαν για την ταυτοποίηση κυττάρων Tc17 σε UCC και CIN, και το περιφερικό αίμα που αντλήθηκαν από υγιείς εθελοντές για την έρευνα αυτή.

δείγματα ασθενών και έλεγχος

όγκου ή περιφερικού αίματος δείγματα λήφθηκαν από 88 UCC ασθενείς χωρίς θεραπεία (εύρος ηλικίας 34-70 ετών, διάμεση τιμή 44 χρόνια) και 53 ασθενείς χωρίς θεραπεία CIN (28-60 ετών, μέση 42 χρόνια) με παθολογικά επιβεβαίωσε ενεργό νόσο σε Qilu Νοσοκομείο, Πανεπιστήμιο Shandong. Δείγματα από 46 UCC ασθενείς που υποβλήθηκαν σε θεραπευτική εκτομή, και 28 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε CIN του τραχήλου της μήτρας conization χρησιμοποιήθηκαν για ανοσοϊστοχημεία. Δείγματα αίματος από 49 ασθενείς UCC και 25 ασθενείς CIN χρησιμοποιήθηκαν για αναλύσεις κυτταρομετρίας ροής. Τα άτομα με ταυτόχρονη αυτοάνοση ασθένεια, ενεργή ή χρόνια λοίμωξη, καρδιαγγειακές ασθένειες, ασθένειες του συνδετικού ιστού ή ιστορικό κακοήθων όγκων αποκλείστηκαν. Κανένας από τους ασθενείς που είχαν προηγουμένως λάβει ανοσοκατασταλτική, ακτινοθεραπεία ή χημειοθεραπεία. Τα χαρακτηριστικά του πληθυσμού της μελέτης παρουσιάζονται στους Πίνακες 1 και 2. Δείγματα αίματος (η = 28? 26-67 χρόνια, η διάμεση 42 έτη) και ιστολογικά δείγματα του τραχήλους (n = 18? 31-60 χρόνια, η διάμεση 46 έτη) από υγιείς γυναίκες που υποβλήθηκαν σε υστερεκτομή για καλοήθεις παθήσεις της μήτρας χωρίς τραχήλου της μήτρας ανωμαλίες συλλέχθηκαν. Αυτά τα ιστολογικά δείγματα ελήφθησαν ως παραφίνη-ενσωματωμένες τετράγωνα από το Τμήμα Παθολογίας του Qilu Νοσοκομείο, Πανεπιστήμιο Shandong.

Η

Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των κυττάρων Tc17

Για να αναλυθεί η επικράτηση των κυττάρων Tc17, IL-17 που παράγει CD8 (+) λεμφοκυττάρων αξιολογήθηκαν με κυτταρομετρία ροής. Εν συντομία, ηπαρινωμένο περιφερικό ολικό αίμα (200 μΐ) με ίσο όγκο RPMI-1640 μέσο επωάστηκε για 4 ώρες στους 37 ° C σε 5% CO

2 παρουσία 25 ng /ml μυριστική οξική φορβόλη ( PMA), 1 μg /ml ιονομυκίνης, και 1,7 μg /ml μονενσίνη (όλα από την Alexis Biochemicals, San Diego, CA). Στη συνέχεια, τα κύτταρα επωάστηκαν με ΡΕ-Cy5-συζευγμένο αντι-ανθρώπινο CD3 και ΡΙΤΟ-συζευγμένο αντι-ανθρώπινο CD8 μονοκλωνικά αντισώματα (eBioscience, San Diego, CA) σε θερμοκρασία δωματίου στο σκοτάδι για 15 λεπτά για τη χρώση της επιφανείας. Μετά τη στερέωση και διαπερατοποίηση, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, τα κύτταρα χρωματίστηκαν με ένα συζευγμένο με ΡΕ μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-IL-17 για 15 λεπτά. έλεγχοι ισοτύπου χρησιμοποιήθηκαν για να επιτρέψει σωστή αποζημίωση και επιβεβαιώνουν την ειδικότητα των αντισωμάτων. Βαμμένα κύτταρα αναλύθηκαν με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής χρησιμοποιώντας FACScan κυτταρόμετρο εξοπλισμένο με λογισμικό CellQuest (BD Bioscience PharMingen).

ανίχνευση Ανοσοϊστοχημεία των κυττάρων Tc17 και της πυκνότητας μικροαγγείων (MVD)

εγκλεισμένα σε παραφίνη τμήματα ιστών αποπαραφινοποιήθηκαν και επανυδατώθηκαν, που ακολουθείται από ανάκτηση αντιγόνου με μικροκύματα σε EDTA (ρΗ 9.1). Για ανοσοϊστοχημική διπλή χρώση των κυττάρων Tc17, τα τμήματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με το σύστημα Doublestain (kit-9999), και χρησιμοποιήθηκαν οι ακόλουθες αντισώματα: IL-17 αντίσωμα κουνελιού αντι-ανθρώπου (1:700 ν /ν? Abcam, USA) και αντι-ανθρώπινο αντίσωμα CD8 ποντικού (1:30 ν /ν? Abcam, USA). Για ανοσοϊστοχημική ανάλυση της πυκνότητας μικροαγγείων, οι τομές δεσμεύτηκαν με διάλυμα αποκλεισμού (αλβουμίνη ορού) αραιωμένο σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS) 3 φορές για 5 λεπτά. Στη συνέχεια, οι τομές επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα σε υγρό θάλαμο στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Το μονοκλωνικό αντίσωμα CD34 (Abcam, USA) χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη. Μετά από πλύση 3 φορές με PBS για 5 λεπτά, ένα υπεροξειδάση (HRP) δευτερογενές αντίσωμα πολυμερές-συνδεδεμένο προστέθηκε και επωάστηκε για 15 λεπτά στους 37 ° C. Οι τομές στη συνέχεια οπτικοποιήθηκαν με διαμινοβενζαδίνης (DAB) και με αιματοξυλίνη. χρώση Αρνητικός έλεγχος διεξήχθη με ένα στοιχείο ελέγχου ισοτύπου και PBS αντί του πρωτογενούς αντισώματος.

Στατιστική ανάλυση

Οι τιμές εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± SD. Τα δεδομένα αξιολογήθηκαν από μία ANOVA. Συγκρίσεις μεταξύ των δύο ομάδων αξιολογήθηκαν από

t

τεστ μαθητή. Οι συσχετίσεις μεταξύ των μεταβλητών προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης. Όλες οι δοκιμές πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του συστήματος SPSS 13.0.

P

& lt?. 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Αυξημένα κυκλοφορούντα κύτταρα Tc17 σε ανεπεξέργαστα UCC και οι ασθενείς CIN

Αναλύσαμε η έκφραση της IL -17 επί CD8

+ Τ κύτταρα (κύτταρα Tc17) στο περιφερικό αίμα χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής. Η έκφραση των τυπικών κυττάρων Tc17 σε αντιπροσωπευτικές ασθενών και μαρτύρων δείχθηκε στο Σχ. 1. Εκτός αυτού, το ποσοστό των κυττάρων Tc17 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ασθενείς UCC (0,49 ± 0,37%,

P

= 0,0076) και οι ασθενείς CIN (0,51 ± 0,39%,

P

= 0,0149) , σε σύγκριση με αυτόν των υγιών μαρτύρων (0,27 ± 0,27%) (Σχ. 2α). Δεν βρέθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ του επιπέδου των κυττάρων Tc17 σε CIN και ότι σε UCC ασθενείς (

P

& gt? 0,05). Για να ερευνηθεί ο πιθανός ρόλος των αυξημένων κυττάρων Tc17, εμείς δίπλα προσπάθησαν να προσδιορίσουν εάν αυτή η λοξοδρόμηση Tc17 συσχετίστηκε με κλινικά χαρακτηριστικά της νόσου. Αξίζει να σημειωθεί ότι, παρατηρήσαμε μια σημαντική αύξηση στη συχνότητα των κυττάρων Tc17 σε UCC ασθενείς με μετάσταση λεμφαδένα (0,77 ± 0,43%?

P

= 0.0026), όταν συγκρίθηκε με εκείνη σε ασθενείς χωρίς μεταστάσεις λεμφαδένα (0,36 ± 0,26%) (Σχ. 2β). Δεν διαπιστώθηκε καμία συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων των κυττάρων Tc17 και άλλα κλινικά χαρακτηριστικά όπως το κλινικό στάδιο, το βάθος της διείσδυσης, vasoinvasion, ιστολογικό τύπο του όγκου, ή πρωτογενές μέγεθος του όγκου σε ασθενείς UCC (

P

& gt? 0.05).

Επάνω δεξιά τεταρτημόρια είναι οι τομείς της Tc17 (CD8

+ IL-17

+) κύτταρα και τα ποσοστά από αυτά που φαίνεται σε κάθε πίνακα.

η

(α) συχνότητες Tc17 στις τρεις ομάδες. Σημαντικά αυξημένα κύτταρα Tc17 βρέθηκαν σε ασθενείς χωρίς θεραπεία UCC (

P

= 0,0076, η = 49) και ασθενείς CIN (

P

= 0,0149, η = 25) σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες (n = 28). (Β) τη συχνότητα Tc17 σε θετική ή αρνητική μεταστάσεις λεμφαδένα σε UCC ασθενείς. Σε σύγκριση με τους ασθενείς χωρίς μεταστάσεις λεμφαδένα (n = 15), αύξησε σημαντικά τη συχνότητα Tc17 (

P

= 0.0026) βρέθηκε σε λεμφαδένα μεταστάσεων ασθενείς (n = 35). t-test του Student χρησιμοποιήθηκε και ράβδοι αντιπροσωπεύουν SD, *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt?. 0.01

Η

Κατανομή των κυττάρων Tc17 και την πυκνότητα μικροαγγείων (MVD) σε δείγματα ιστού του UCC και CIN ασθενείς

προηγουμένως βρεθεί ότι η IL-17

+ κύτταρα εμπλουτίστηκαν σε ανθρώπινο UCC, και το μεγαλύτερο μέρος του κυκλοφορούντος IL-17

+ κύτταρα ήταν CD4

+ πληθυσμό κυττάρων (κύτταρα Th17) [8]. Ωστόσο, σε ιστούς όγκων, μια πιο αφθονία των κυττάρων ήταν CD8

+ Τ κύτταρα (κύτταρα Tc17). Για τη μελέτη της κατανομής των κυττάρων Tc17 σε τοπική κλίμακα, εξετάσαμε την επικράτηση των κυττάρων Tc17 σε ιστούς όγκων από 46 ασθενείς UCC και του τραχήλου της μήτρας ιστών από 28 ασθενείς CIN χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημική διπλή χρώση (Εικ. 3). Όπως φαίνεται στο Σχ. 4α, το επίπεδο των κυττάρων Tc17 αυξήθηκε σημαντικά σε ιστούς των ασθενών UCC (142,50 ± 28,24 κύτταρα /HPF) και ασθενείς CIN (23,42 ± 7,65 κύτταρα /HPF), σε σύγκριση με ότι σε ιστούς των υγιών μαρτύρων (5,52 ± 2,25 κύτταρα /HPF ?

P

UCC = 0.0007,

P

CIN = 0,026). Μια σημαντική διαφορά βρέθηκε επίσης μεταξύ CIN και UCC ασθενείς (

P

= 0,0086). Και πάλι, το επίπεδο των κυττάρων Tc17 σε ιστούς του UCC ασθενών συσχετίστηκε θετικά με το καθεστώς των μεταστάσεων λεμφαδένων, αφού παρατηρήθηκε σημαντικά υψηλότερο επίπεδο των κυττάρων Tc17 σε ιστούς από UCC ασθενείς με μεταστάσεις λεμφαδένα (178,20 ± 35,47 κύτταρα /HPF) σε σύγκριση με εκείνη στο UCC ασθενών χωρίς μεταστάσεις λεμφαδένα (116,59 ± 25,57 κύτταρα /HPF,

P

= 0.035) (Εικ. 4β). Δεν βρέθηκε συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου των κυττάρων Tc17 με τα άλλα κλινικά χαρακτηριστικά όπως το κλινικό στάδιο, το βάθος της διείσδυσης, vasoinvasion, το μέγεθος του όγκου και το ιστολογικό τύπο του όγκου του UCC ασθενείς (

P

& gt? 0,05).

(α) Ανοσοϊστοχημική διπλή χρώση για κύτταρα Tc17 στην ομάδα ελέγχου (α και δ), η ομάδα CIN (β και ε) και UCC ομάδα (c και f). Εκπρόσωπος περιοχές με χαμηλή (200 ×, άνω πάνελ) και υψηλή (400 ×, κάτω πάνελ) μεγέθυνση έδειξαν. (Β) κύτταρα IL-17 που παράγουν βάφτηκαν κόκκινα (στο κυτταρόπλασμα) και CD8 + κύτταρα

βάφτηκαν μαύρα (στη μεμβράνη). Η συν-έκφραση του CD8 και IL-17 επιβεβαίωσε ότι μια αναλογία των κυττάρων Tc17.

Η

(α) Σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες (n = 30), αύξησε σημαντικά τον αριθμό των κυττάρων που Tc17 βρέθηκαν σε τόσο ιστούς των ασθενών UCC (

P

= 0.0007, n = 46) και οι ασθενείς CIN (

P

= 0.026, n = 28). Σημαντική διαφορά βρέθηκε επίσης μεταξύ CIN και UCC ιστούς (

P

= 0,0086). (Β) Στην περιοχή του όγκου, οι εν λόγω UCC ασθενείς με μεταστάσεις λεμφαδένα (n = 30) ανιχνεύθηκαν σημαντικά στατιστικά υψηλότερη συχνότητα Tc17 κύτταρα από τους ασθενείς χωρίς μεταστάσεις λεμφαδένα (

P

= 0.035, η = 16). *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01, ****

P

& lt?. 0.001

Η

Επόμενο , η πυκνότητα των μικροαγγείων σε τραχηλικούς ιστούς προσδιορίστηκε με χρώση ανοσοϊστοχημείας με αντίσωμα έναντι αγγειογενετική marker- CD34. Όπως φαίνεται στο Σχ. 5β, MVD παρατηρήθηκε συχνότερα στο UCC (38.37 ± 7.04 /HPF,

P

& lt? 0,0001) και τους ιστούς CIN (23.36 ± 5.34 /HPF,

P

& lt? 0.0001) από ότι στους ιστούς ελέγχου (11,81 ± 2,47 /HPF). Επίσης, σημαντικά υψηλότερο επίπεδο της MVD βρέθηκε στην ομάδα UCC, σε σύγκριση με την ομάδα CIN (

P

& lt? 0,0001). Εφόσον η IL-17 είναι γνωστό ότι είναι σε θέση να προωθήσει την εξέλιξη του όγκου μέσω της προώθησης της αγγειογένεσης [21], [22], αναλύσαμε την σχέση μεταξύ του επιπέδου των κυττάρων Tc17 και το ποσό της μικροαγγείων. Όπως φαίνεται στο Σχ. 5α, τα επίπεδα των κυττάρων Tc17 βρέθηκαν να συσχετίζονται θετικά με την πυκνότητα μικροαγγείων στην τραχηλική CIN και UCC ιστούς (r = 0.923,

P

& lt? 0.001 σε CIN? Και r = 0.938,

P

& lt? 0,0001 στο UCC, αντίστοιχα)

(Α) ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης μεταξύ των επιπέδων των κυττάρων Tc17 και MVD (Σύνολο:. r = 0.987,

P

& lt? 0,0001, n = 65? έλεγχος: r = 0.814,

P

& lt? 0.001, n = 18, CIN: r = 0.923,

P

& lt? 0.001, n = 17? UCC: r = 0.938 ,

P

& lt? 0,0001, n = 30). MVD από κάθε δείγμα χαράσσεται έναντι κυττάρων Tc17 επιπέδου από το ίδιο πρόσωπο. (Β) Εκπρόσωπος ανοσοϊστοχημική χρώση των MVD στην αυχενική ιστούς των τριών ομάδων. Αντιπροσωπευτικά περιοχές με χαμηλή (100 Χ, άνω πάνελ) και υψηλή (400 ×, κατώτερο πάνελ) μεγέθυνση δείχθηκε.

Η

συσχετίσεις μεταξύ των επιπέδων των κυττάρων Tc17 και κυττάρων Th17, καθώς και έκφραση Foxp3 T κύτταρα

Δεδομένου ότι τα κύτταρα Tc17 είναι παρόμοια με τα κύτταρα Th17 όσον αφορά το σεβασμό της αναπτυξιακής πορείας και των πιθανών επιπτώσεων [23], [24], είναι λογικό να διερευνήσει τη σχέση μεταξύ τους. Τα πρωτογενή δεδομένα και οι μέθοδοι για την ανίχνευση Th17 κύτταρα στις ίδιες τρεις ομάδες (UCC, CIN και οι ομάδες ελέγχου) εμφανίζεται στις δύο προηγούμενες δημοσιευμένες εργασίες μας [8], [25]. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα επίπεδα των κυττάρων Th17 και τα κύτταρα Tc17 σχετίστηκαν θετικά στην CIN και UCC ομάδες τόσο του περιφερικού αίματος (r

CIN = 0,435,

P

= 0,042? R

UCC = 0.403,

P

= 0,016) (σχήμα 6 α και β) και του τραχήλου της μήτρας ιστών (r

CIN = 0.441,

P

= 0.039?. r

UCC = 0.693,

P

= 0,026) (Εικ. 6 γ και δ).

(a, b) η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης μεταξύ συχνότητες Tc17 κυττάρων και κυττάρων Th17 στο αίμα (r

CIN = 0,435,

P

= 0,042, n = 22? r

UCC = 0,403,

P

= 0.016, n = 36). (C, d) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης μεταξύ των επιπέδων των κυττάρων και κυττάρων Tc17 Th17 στην αυχενική ιστούς (r

CIN = 0.441,

P

= 0,039, η = 17? R

UCC = 0.693,

P

= 0,026, η = 30).

Η

Εκτός αυτού, αφού Foxp3 εκφράζουν Τ κύτταρα είναι καλά γνωστό ότι είναι ανοσο-κατασταλτικό για τις απαντήσεις των Τ κυττάρων [25] , [26], η σχέση μεταξύ των επιπέδων Tc17 και Foxp3 εκφράζουν τα Τ κύτταρα στην τραχηλική ιστούς του ασθενούς (CIN και UCC) αναλύθηκαν επίσης. Τα πρωτογενή δεδομένα και οι μέθοδοι Foxp3 εκφράζουν ανίχνευση Τ κυττάρων ήταν στην παραπομπή 38. Όπως φαίνεται στο Σχ. 7, τα επίπεδα των κυττάρων Tc17 και Foxp3 εκφράζουν τα Τ κύτταρα στην τραχηλική ιστούς του ασθενούς σχετίστηκαν θετικά (r = 0.841,

P

& lt? 0.001).

(r = 0.713,

P

& lt? 0.001, n = 47)

Η

Συζήτηση

Το ανοσοποιητικό σύστημα παίζει ένα σύνθετο ρόλο στην ογκογένεση.. Είχε προηγουμένως Πιστεύεται ότι CD8

+ T περιλαμβάνει κυρίως CD8

+ κυτταροτοξικά Τ κύτταρα, κύτταρα Tc, οι οποίες παίζουν κρίσιμο ρόλο στην άνοσο αποκρίσεις ξενιστή ενδοκυτταρικών παθογόνων και σχηματισμό όγκου μέσω της έκφρασης IFN-γ, γράνζυμο Β και περφορίνης [13], [14]. Ωστόσο, ένα υποσύνολο των CD8

+ Τ κυττάρων με ανοσοκατασταλτικές ιδιότητες έχουν περιγραφεί [27], [28]. Roberts et al. [29] διαπιστώθηκε ότι τα CD8

+ Τ κύτταρα θα μπορούσαν επίσης να προωθήσει τη δερματική καρκινογένεση χρησιμοποιώντας ένα πρωτόκολλο χημικών έναρξη δύο σταδίων /προώθηση (DMBA και ΤΡΑ). Ένα ϋΜΒΑ /ΤΡΑ καρκινογόνες αγωγή θα μπορούσε πλειορύθμιση της έκφρασης του TGF-β και IL-6, με αποτέλεσμα Tc17 κύτταρο λοξότητα [30], [31]. Εκτός αυτού, βρήκαν επίσης ότι ένα υποσύνολο του όγκου που προάγουν την IL-17

+ CD8

+ μπορεί να υπάρχουν πληθυσμού κυττάρων σε αυτό το μοντέλο.

Τα κύτταρα Tc17 ορίζεται πρόσφατα ως IL-17 στην παραγωγή CD8

+ T υποσύνολο που είναι διαφορετική από κύτταρα Tc1 και Tc2. Μολονότι κάποιες πρόοδοι στην κατανόηση της διαφοροποίησης και της λειτουργίας των κυττάρων Tc17 σε ορισμένους τύπους ανθρώπινων ασθενειών και στην ομοιοστατική κανονισμών [9], [10], [32], λίγα είναι γνωστά σχετικά με την βιολογική λειτουργία και μηχανισμός υποκείμενων η ρύθμιση των κυττάρων Tc17 σε ανθρώπινους όγκους. Η μελέτη μας έδειξε ότι τα επίπεδα των κυττάρων και των κυττάρων Tc17 Th17 εμφανώς αυξημένη σε αμφότερες περιφερικού αίματος και καρκινικών ιστών του UCC ασθενών. Εκτός αυτού, βρήκαμε ότι η συχνότητα των κυττάρων Tc17 συσχετίστηκε θετικά με εκείνη των κυττάρων Th17 τόσο του περιφερικού αίματος και του τραχήλου της μήτρας ιστούς, σε ασθενείς CIN και UCC. Μια άλλη μελέτη έδειξε επίσης μια αφθονία των κυττάρων Tc17 σε ποντίκια που φέρουν όγκους, παρόμοιο με αυτόν του φλεγμονώδης κατάσταση [18]. Επίσης, Kuang et al. [20] βρήκαν ότι η IL-17 + κύτταρα

(συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων και κυττάρων Th17 Tc17) συσσωρεύεται στο ανθρώπινο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) και τα κύτταρα Tc17 εμπλουτίστηκαν στην άκρη εισβολή του HCCs. Έτσι, τα κύτταρα Tc17 εμπλουτισμένο σε UCC ασθενείς μπορεί να παίξει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη αυτού του τύπου καρκίνου.

Έχει αναφερθεί ότι τα κύτταρα και τα κύτταρα Tc17 Th17 μοιράστηκε τα παρόμοια αναπτυξιακές πορείες όσον αφορά τη διαδικασία διαφοροποίησης [10 ]. Για παράδειγμα, ο ΤΟΡ-β, IL-6 και IL-21 θα μπορούσε να διεγείρει την διαφοροποίηση των δύο Tc17 και Th17 κυττάρων [10], [19], [24]. Εκτός αυτού, οι μελέτες έχουν δείξει ότι τα κύτταρα Tc17 μπορεί εμφανίζουν κατασταλεί κυτταροτοξική λειτουργία παρόμοια με τη λειτουργία των κυττάρων Th17 σε αυτοάνοσες νόσους [23], [33], λοίμωξη [9], [23] και κατά του όγκου ανοσία [15]. Επιπλέον, η IL-17 είναι μία προ-φλεγμονώδης κυτοκίνη, η οποία παράγεται από τα δύο κύτταρα και τα κύτταρα Th17 Tc17. IL-17 Τ κύτταρα που παράγουν είναι οι τελεστές που συμμετέχουν στην επαγωγή της φλεγμονής και της ζημίας του ιστού αυτοάνοσες [34]. Έτσι, εικάζουν ότι η παραγωγή της IL-17 μπορεί να μεσολαβήσει τις πιθανές ρόλοι των κυττάρων Tc17 στην πρόοδο του καρκίνου. Ωστόσο, η αναγκαστική έκτοπη υπερέκφραση της IL-17 στα κύτταρα του όγκου κατέδειξε αλληλοσυγκρουόμενα αποτελέσματα επί της ανάπτυξης όγκου: αναστολή όγκου [35], [36] έναντι του όγκου προώθηση [21], [37]. Αξίζει να σημειωθεί ότι, Nam et al. [31] ανέφεραν ότι η IL-17 κατέστειλε την απόπτωση σε αρκετές κυτταρικές σειρές όγκου

in vitro

, και knockdown του υποδοχέα της IL-17 σε καρκινικά κύτταρα του μαστού 4Τ1 ποντικού ενισχυμένη απόπτωση και μειωμένη ανάπτυξη του όγκου

in vivo

. Επίσης, παρατηρήσαμε τα αυξημένα επίπεδα του ΤΟΡ-β, IL-6, IL-17 και IL-21 στους καρκίνους του τραχήλου (αδημοσίευτες παρατηρήσεις). Αυτές οι παρατηρήσεις υποδεικνύουν ότι η UCC μπορεί να εκκρίνει ενεργά μεγάλες ποσότητες του ΤΟΡ-βwhich μπορεί να επάγει την διαφοροποίηση των IL-17

+ Τ κύτταρα, και το τελευταίο μπορεί με τη σειρά του προωθεί την ανάπτυξη και επιβίωση των καρκίνων σε ένα IL-17-εξαρτώμενο τρόπο [31], αν και απαιτούνται περαιτέρω μελέτες εξακολουθούν να χρειάζονται.

Πρόσφατα, έχει δειχθεί ότι τόσο Th17 και Tc17 κύτταρα είναι παρόντα στα μικροπεριβάλλοντα όγκων διαφόρων τύπων ανθρώπου και ποντικού όγκους [19], υποδηλώνοντας ότι αυτή η μπορεί να είναι ένα σχετικά συνηθισμένο φαινόμενο στην ογκογένεση. Εκτός αυτού, έχουμε αναφερθεί στο παρελθόν ότι τα κύτταρα Th17 θα μπορούσε να προκαλέσει κακοήθη εξέλιξη και την κακή επιβίωση σε ασθενείς UCC [8]. Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήσαμε επίσης ότι η θετική συσχέτιση μεταξύ των κυττάρων Tc17 και κύτταρα Th17 αυξάνεται σταδιακά με την εξέλιξη από CIN στο UCC. Επιπλέον, η επικράτηση των κυττάρων Tc17 επίσης συσχετίζεται με μεταστάσεις στους λεμφαδένες του UCC. Ως εκ τούτου, είναι πιθανό ότι ο εμπλουτισμός των κυττάρων Tc17 προωθεί την πρόοδο της UCC σε συνεννόηση με κύτταρα Th17.

Παρά το γεγονός ότι τα κύτταρα Tc17 είναι δραστικά κύτταρα δεν μπορούν να σκοτώνουν τα κύτταρα στόχους με τον τρόπο ότι η κλασική CD8

+ Τ κύτταρα κάνει [24]. Επιδημιολογικές μελέτες έχουν αποδείξει ότι η φλεγμονή συνδέεται με την εξέλιξη του όγκου [38]. Η φλεγμονή οδηγεί στην παραγωγή των αυξητικών παραγόντων, αγγειογονικούς παράγοντες, και πρωτεάσες μήτρας αποικοδόμησης από λευκοκύτταρα, τα οποία διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στην προαγωγή όγκων και προόδου [4], [38]. Kuang et al. [20] βρήκαν ότι τα κύτταρα είχαν Tc17 κυρίως εμπλουτισμένο σε εισβάλλουν άκρο του ανθρώπινο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC). Αυτά τα διηθητικά κύτταρα Tc17 εξέφρασαν υψηλά επίπεδα προφλεγμονωδών κυτοκινών, οι οποίες προωθούν την επέκταση του όγκου μέσω φλεγμονώδη αντίδραση. Η νεοαγγείωση είναι ένα άλλο σημαντικό χαρακτηριστικό γνώρισμα της εξέλιξης του καρκίνου. Προφλεγμονώδεις κυτταροκίνες όπως IL-17 θα μπορούσε επίσης να προωθήσει την ανάπτυξη του όγκου με την προώθηση της αγγειογένεσης [21], [22]. Στη μελέτη μας, βρήκαμε επίσης μια θετική συσχέτιση μεταξύ της συχνότητας του Tc17 κυττάρων και της πυκνότητας μικροαγγείων, υποστηρίζοντας την προφλεγμονωδών ιδιότητα του IL-17-κύτταρα που παράγουν. Επιπλέον, παρατηρήσαμε επίσης τη συσχέτιση των κυττάρων Tc17 με Foxp3 εκφράζουν τα Τ κύτταρα του τραχήλου της μήτρας καρκινικούς ιστούς, Foxp3 εκφράζουν κύτταρα Τ μεσολαβούν ισχυρή ανοσο-κατασταλτική δραστικότητα επί Τ κυτταρικές αποκρίσεις [39], [40]. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι τα κύτταρα Tc17 μπορεί να προωθήσει την εξέλιξη του όγκου, αλλά η ακριβής λειτουργία των κυττάρων Tc17 σε UCC χρειάζεται περαιτέρω διερεύνηση.

Συνοπτικά, δείξαμε για πρώτη φορά ότι η συχνότητα των κυττάρων Tc17 αυξήθηκε προφανώς σε CIN και UCC ασθενείς, και η αυξημένη επικράτηση των κυττάρων Tc17 σχετίστηκε με μεταστάσεις στους λεμφαδένες και την πυκνότητα μικροαγγείων, υποδεικνύοντας ένα σημαντικό ρόλο για τα κύτταρα Tc17 στην έναρξη και την εξέλιξη της UCC. Μια καλύτερη κατανόηση της υποκείμενης μηχανισμού της IL-17 ρυθμίζει κατά του όγκου ανοσοαποκρίσεων μπορεί να οδηγήσει στην ανάπτυξη νέων θεραπευτικών στρατηγική για τους ασθενείς UCC.