Αφηρημένο

Σκοπός

Διενέργεια τη χημική σύνθεση και αντιπολλαπλασιαστικά αποτελέσματα εναντίον καρκινικών κυττάρων από διαφορετικά βιολογικά μέρη του

Artemisia herba alba

.

Μέθοδοι

Αιθέρια έλαια μελετήθηκαν με αέρια χρωματογραφία σε συνδυασμό με φασματομετρία μάζας (GC-MS) και αντικαρκινική δράση τους ελέγχθηκε έναντι Ρ815 μαστοκυτώματος και κυτταρικές γραμμές καρκινώματος νεφρού BSR? Επίσης, προκειμένου να αξιολογηθεί η επίδραση επί κανονικών ανθρώπινων κυττάρων, έλαια εξετάστηκαν έναντι μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος PBMCs.

Αποτελέσματα

Αιθέρια έλαια από φύλλα και εναέρια τμήματα (μίγμα capitulum και φύλλα) αποτελούνταν κυρίως από οξυγονωμένο σεσκιτερπένια 39.89% και 46.15% αντίστοιχα? πετρελαίου capitulum περιείχε ουσιαστικά μονοτερπένια (22,86%) και μονοκυκλικά μονοτερπένια (21,48%)? εστέρες αποτελούσε το μεγαλύτερο κλάσμα (62,8%) του λαδιού στελέχους. Αιθέρια έλαια από διαφορετικά βιολογικά μέρη μελετήθηκαν έδειξαν μια απόκλιση αντιπολλαπλασιαστική δραστικότητα έναντι Ρ815 και BSR καρκινικά κύτταρα? Ρ815 κύτταρα είναι τα πιο ευαίσθητα στην κυτταροτοξική δράση. Φύλλα και capitulum αιθέρια έλαια είναι πιο δραστήρια από εναέρια τμήματα. Είναι ενδιαφέρον, καμία κυτταροτοξική επίδραση αυτών των αιθέριων ελαίων παρατηρήθηκε σε μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος.

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματα μας έδειξαν ότι η μεταβλητότητα χημική σύνθεση των αιθέριων ελαίων εξαρτάται από τη φύση της βοτανικής τμημάτων του

Artemisia herba alba

. Επιπλέον, έχουμε αποδείξει ότι η διαφορική κυτταροτοξική δράση δεν εξαρτάται μόνο από την απαραίτητη συγκέντρωση ελαίων, αλλά και στα κύτταρα-στόχους και τους βοτανικούς μέρη των αιθέριων ελαίων που χρησιμοποιούνται

Παράθεση:. Tilaoui Μ, Ait Mouse H, Τζααφάρι Α, Zyad Α (2015) Συγκριτική φυτοχημική ανάλυση των αιθέριων ελαίων από διάφορα βιολογικά μέρη του

Artemisia herba alba

και κυτταροτοξική δράση τους σε καρκινικά κύτταρα. PLoS ONE 10 (7): e0131799. doi: 10.1371 /journal.pone.0131799

Επιμέλεια: Rajesh Agarwal, Πανεπιστήμιο του Κολοράντο, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 4 Αυγ, 2014? Δεκτές: 7 Ιούνη, 2015? Δημοσιεύθηκε: 21 Ιούλη, 2015

Copyright: © 2015 Tilaoui et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. το έργο χρηματοδοτήθηκε από μια επιχορήγηση από το CNRST (PROTARSIII, D61 /07), Ραμπάτ, στο Μαρόκο

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

Artemisia herba-alba

(Asteraceae) είναι μια πρασινωπή-ασημί αιώνιο νάνος θάμνος αυξάνεται σε άνυδρες και ημι-άνυδρα κλίματα. Αυτό συμβαίνει μέσα από την περιοχή της Μεσογείου στη Βόρεια Αφρική, την Ισπανία, τις ερήμους της χερσονήσου του Σινά, τη Μέση Ανατολή, Northwestern Ιμαλαΐων και στην Ινδία.

Artemisia herba alba

Asso (αρτεμισία έρημο, armoise blanche (Fr.), chich (Αραβικά.) Είναι ένας νάνος θάμνος με μια ταχεία ανάπτυξη σε ξηρά και θερμά κλίματα και σε λασπώδεις περιοχές [1] .Τα διάφορα είδη είναι μορφολογικά διαφορετικές μεταξύ τους ανάλογα με τις γεωγραφικές, περιβαλλοντικές και κλιματικές συνθήκες. Το φυτό είναι πράσινο σε ανοιχτό πράσινο, με ισχυρή και ανθεκτικό ρίζες. Ο χρόνος άνθησης και συγκομιδής είναι γύρω στο Μάιο /Ιούνιο και συνεχίζεται μέχρι τον Οκτώβριο σε ορισμένους τομείς [2] . το φυτό αυτό χρησιμοποιείται ως αρωματική ουσία και ως βότανο φάρμακο για τη θεραπεία των κρυολογημάτων, βήχα, εντερικές διαταραχές και ως αντιδιαβητικό παράγοντα [3, 4]. οι έρευνες σχετικά με τις θεραπευτικές ιδιότητες του

Artemisia herba alba

εκχυλίσματα αναφερθεί αντι-διαβητικό, αντιλεϊσμανιακή, αντιβακτηριακές και αντιμυκητιακές ιδιότητες [5, 6]. κατά τη διάρκεια των τελευταίων δεκαετιών, μελέτες για

Artemisia herba alba

επικεντρώθηκαν σε αιθέρια έλαια της. η σύνθεσή τους μέσα από τον κόσμο αποκάλυψαν ένα υψηλό επίπεδο του πολυμορφισμού και οδήγησε στον ορισμό μερικών χημειοτύπων. Λόγω της σημασίας τους στη βιομηχανία αρωμάτων, πολυάριθμες μελέτες για

Artemisia herba alba

αιθέρια έλαια έχουν δημοσιευθεί [7, 8]. Δύο σχόλια είναι επίσης διαθέσιμα [9, 10].

Στην Ισπανία, το αιθέριο έλαιο από

Artemisia herba alba

[8, 11] έδειξε ότι υδρογονανθράκων μονοτερπενίου και οξυγονωμένο μονοτερπένια είναι τα πιο άφθονα σκελετοί, αλλά μεγάλες ποσότητες σεσκιτερπένια επίσης βρέθηκαν σε ορισμένους πληθυσμούς. Καμφορά, 1,8-κινεόλη,

σ

κυμένιο και davanone βρέθηκαν οι μεγάλες χημικές ενώσεις. Δύο τύποι πετρελαίου αποτελέσματα για φυτά που καλλιεργούνται στο Ισραήλ και Σινά εκείνων των κινεόλη-thujane τύπου βορνανοσουλτάμη και το είδος πινανίου με σκελετούς μονοτερπενικών [8].

Στην Ιορδανία, η τακτική μονοτερπένια ήταν κυρίαρχη και τα κύρια συστατικά ήταν α- και β-thujones, χαρακτηρίζοντας την

Artemisia herba alba

ως ένα thujone χημειότυπος [12]. Στο Μαρόκο, δεκαέξι χημειοτύπων βρέθηκαν και δώδεκα από αυτά έχουν μονοτερπένια ως κύρια συστατικά των αιθέριων ελαίων. Τα υπόλοιπα τέσσερα χημειοτύπων, έχουν σκελετούς σεσκιτερπένιο ως το κύριο κλάσμα. Έρευνες αναφερθεί καμία συσχέτιση μεταξύ χημειοτύπων και η γεωγραφική κατανομή [13].

Σε Αλγερίας αιθέριο έλαιο, μονοτερπένια ήταν τα κύρια συστατικά, κατ ‘ουσίαν, καμφορά, α- και β-thujones, 1,8-κινεόλη και παράγωγα chrysanthenyl [2 , 14]. Σε Τυνησίας πετρελαίου, οξυγονωμένο μονοτερπένια βρέθηκαν να είναι τα κύρια συστατικά του

Artemisia herba alba

έλαιο που εξάγεται από εναέρια τμήματα [15, 16].

Αυτό το έγγραφο αναφέρει τη χημική σύνθεση και τη βιολογική δραστηριότητα κατά του καρκίνου κυτταρικές σειρές των αιθέριων ελαίων, που προέρχονται από διάφορα βιολογικά μέρη του

Artemisia herba alba

συλλέγονται σε Er-Rachidiya (κεντρικής και ανατολική περιοχή του Μαρόκου).

Υλικά και Μέθοδοι

δήλωση Ηθικής

Artemisia herba alba

φυτό Asso συλλέχθηκε σε Imilchil, περιοχή Ερατσίντια κεντρική ανατολική του Μαρόκου (W 5 ° 39’25.43 «- N 32 ° 12’15.059») τον Ιούνιο του 2007 (δεν υπάρχουν ειδικές άδειες που απαιτούνται για τις περιγραφόμενες μελέτες πεδίου ή για τη συλλογή φυτικού υλικού) .Οι μελέτες πεδίο δεν περιλαμβάνουν απειλούμενα ή προστατευόμενα είδη

Ανθρώπινα μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs):. η συλλέχθηκαν δείγματα αίματος από τους συγγραφείς αυτού του χειρογράφου (Mounir Tilaoui, Χασάν Ait ποντίκι? Αμπντεσλάμ Τζααφάρι και Abdelmajid Zyad) κάτω από ιατρική παρακολούθηση. Εγκρίθηκε από την επιτροπή Σουλτάνο Moulay Slimane Πανεπιστήμιο, διαπίστευσης, δεν 2008 /01-2014. λαμβάνουν οι συγγραφείς γραπτή συγκατάθεση από τους αιμοδότες.

Το φυτικό υλικό

Artemisia herba alba

φυτό Asso συλλέχθηκε σε Imilchil, περιοχή Ερατσίντια, κεντρική ανατολική περιοχή του Μαρόκου ( W 5 ° 39 ‘25.43 «- N 32 ° 12’ 15.059») τον Ιούνιο του 2007 (Δεν υπάρχουν ειδικές άδειες που απαιτούνται για τις περιγραφόμενες μελέτες πεδίου ή για τη συλλογή φυτικού υλικού). Ολόκληρο εναέρια τμήματα (μίγμα capitulum και τα φύλλα) σε απομονωμένα φύλλα, capitulum (λουλούδι κεφάλι) ή μίσχους ήταν σκιά-ξηραίνονται σε θερμοκρασία δωματίου με εξαερισμό. Το ληφθέν ξηρή ύλη απομονώθηκε χωριστά από το φυτό, κιμά και αμέσως hydrodistilled να ληφθούν τα αιθέρια έλαια.

αερίου χρωματογραφίας και φασματογραφίας μάζης (GC-MS)

Αναλυτική χρωματογραφία αερίου πραγματοποιήθηκε με τη χρήση ένα σύστημα GC ίχνος ULTRA αέριο χρωματογραφία εξοπλισμένη με VB-5 (μεθυλοπολυσιλοξάνη με 5% φαινυλο) στήλη (30 μ Χ 0.25 mm, πάχος φιλμ 0.25 μm). Φέρον αέριο ήταν ήλιο με ρυθμό ροής 1,4 κ.εκ. /λεπτό. Η θερμοκρασία της στήλης αρχικά διατηρείται στους 40 ° C για 2min, και κατόπιν βαθμιαία αυξήθηκε στους 300 ° C με ρυθμό 20 ° C /min. Δείγματα (1 μλ, κατάλληλα αραιωμένα σε οξικό αιθυλεστέρα) εγχύθηκαν στους 220 ° C.

μάζης ανάλυση φασματομετρίας διεξήχθη επί ένα

Polaris Q MS

συζευγμένο με GC ULTRA με λειτουργικό ανιχνευτή μάζας ιοντικής παγίδας στη λειτουργία ΕΙ (70 eV). ταυτοποίηση συστατικά έγινε με GC και GC-MS (σύμφωνα με τα πρότυπα του κατακερματισμού) και με τη χρήση NIST (Εθνικό Ινστιτούτο Προτύπων και Τεχνολογίας) της βάσης δεδομένων MS αναζήτησης.

Κυτταρική καλλιέργεια

Το κύτταρο μαστοκύτωμα ποντικού γραμμή (Ρ815, ATCC: TIB64) και οι κυτταρικές σειρές καρκινώματος νεφρού χάμστερ (BSR, ATCC: CCL10) ευγενική δωρεά από το εργαστήριο του Δρ Michel Lepoivre, 841 Ινστιτούτο Βιοχημείας, Πανεπιστήμιο Paris XI, Γαλλία. Οι κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν σε ϋΜΕΜ (τροποποιημένο μέσο Eagle κατά Dulbecco) συμπληρωμένο με 10% θερμο-απενεργοποιημένο ορό εμβρύου μόσχου (Gibco BRL, Cergy Pontoise, France), πενικιλλίνη G- στρεπτομυκίνη (1%), και 0,2% όξινο ανθρακικό νάτριο (Sigma) στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα που περιέχει 5% CO

2.

δοκιμασία κυτταροτοξικότητας

Οι αρχικές εμβόλια 2 x 10

5 Ρ815 κύτταρα /mL και 4,8 χ 10

4 κύτταρα BSR /mL χρησιμοποιήθηκαν στην εκθετική φάση ανάπτυξης. Cellular βιωσιμότητα προσδιορίστηκε με τη δοκιμασία ΜΤΤ αναγωγή χρησιμοποιώντας (3- [4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ] -2,5-διφαινυλ τετραζόλιο, ΜΤΤ) [17]. κυτταρικές γραμμές BSR και Ρ815 συλλέχθηκαν από καλλιέργειες αρχίζουν σε εκθετική φάση ανάπτυξης. Μετά από ένα φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα (PBS) πλύση, τα συλλεγέντα κύτταρα χύθηκαν σε πλάκες μικροτίτλου επίπεδου πυθμένα των 96 φρεατίων που περιέχουν 100 μΐ πλήρους μέσου ανά φρεάτιο. Στη συνέχεια, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με αιθέρια έλαια διαλύονται σε διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) με τις κατάλληλες συγκεντρώσεις (όλα τα αιθέρια έλαια που μελετήθηκαν εδώ που διαλύονται σε DMSO, είναι διαλυτά σε μέσα καλλιέργειας). Κύτταρα ελέγχου υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με DMSO, σε μια τελική συγκέντρωση 0, 5% (ν /ν). Μετά από 48-ώρες επώασης σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα στους 37 ° C, 5% CO

2, 20 μL διάλυμα ΜΤΤ (5 mg /ml PBS) προστέθηκε. Μετά από 4-h επώαση υπό τις ίδιες συνθήκες, η διάσπαση του ΜΤΤ προς φορμαζάνη από μεταβολικά ενεργά κύτταρα ποσοτικοποιήθηκε με σάρωση των πλακών στα 540 και 630 nm με χρήση συσκευής Multiskan EX. Η βιωσιμότητα των κυττάρων υπολογίσθηκε από τον τύπο: Όπου, OD: Οπτική Πυκνότητα, Ελεγχόμενη κύτταρα: DMSO + κύτταρα, OD των αιθέριων ελαίων:. Κατεργασμένα κύτταρα

επίδραση στην ανθρώπινη μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs)

Αυτή η δοκιμή πραγματοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η επίδραση των αιθέριων ελαίων σε ανθρώπινα φυσιολογικά κύτταρα με τη χρήση της χρωματομετρικής δοκιμασίας ΜΤΤ που περιγράφεται παραπάνω. Η βιωσιμότητα των κυττάρων PBMCs αξιολογήθηκε με trypan bleu αποκλεισμό χρωστικής χρησιμοποιώντας Malassez Εγιναν αιμοκυτταρομετρικές. Οι συγκεντρώσεις των κυττάρων προσδιορίστηκαν όπως τα κύτταρα αναμίχθηκαν με 0,2% trypan blue και μετρήθηκαν μικροσκοπικά με ένα αιμοκυτταρόμετρο Malasez χρησιμοποιώντας την ακόλουθη διαδικασία: 10 μL κυτταρικού εναιωρήματος αναμειγνύονται με 40 μΐ 0,2% κυανού τρυπάνης και 10 μL από το ίδιο μίγμα μεταφέρθηκε σε Malassez αιματοκυτταρόμετρο. Το ποσοστό της κυτταρικής βιωσιμότητας υπολογίστηκε με τον εξής τύπο:. Η βιωσιμότητα των κυττάρων% = βιώσιμα κύτταρα (μη χρωσμένα) /συνολικό αριθμό των κυττάρων χ 100. Η βιωσιμότητα των κυττάρων πριν από το πείραμα κυτταροτοξικότητα ήταν πάνω από 98%

Για την απομόνωση του PBMCs, δείγματα αίματος συλλέχθηκαν από υγιείς δότες σε σωλήνες με ηπαρίνη. Το δείγμα αίματος αραιώθηκε με τον ίδιο όγκο του PBS. Μετά από αυτό, το αραιωμένο δείγμα αίματος ήταν προσεκτικά σε στρώσεις επί Ficoll-hypaque (Amersham Pharmacia Biotech ΑΒ). Το μίγμα φυγοκεντρήθηκε υπό κατά 2000tr /mn για 30 εκ. Η ανενόχλητοι στρώμα λεμφοκυττάρων μεταφέρθηκε προσεκτικά έξω. Τα λεμφοκύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με διάλυμα ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS) και επαναιωρήθηκαν σε DMEM μέσα ενημέρωσης. Αιθέρια έλαια προστέθηκαν στις ίδιες συγκεντρώσεις σε θέση να επάγουν μια κυτταροτοξική δραστικότητα εναντίον καρκινικών κυττάρων (Ρ815 και BSR). Τα PBMCs σπάρθηκαν σε πυκνότητα (1 × 10

5 κύτταρα /mL) σε πλάκες 96 φρεατίων.

Στατιστική ανάλυση

Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν σε τρεις επαναληπτικές. Τα δεδομένα αναφέρονται ως μέσος όρος ± S.D. n = 3. Η σημαντικότητα των διαφορών εκτιμήθηκε με χρήση paired t-test του Student. Η διαφορά θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική όταν η τιμή Ρ ήταν μικρότερη από 0,05. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του λογισμικού STATISTICA.

Αποτελέσματα και Συζήτηση

Χημική σύνθεση του αιθέριου ελαίου

Η χημική σύνθεση του αιθέριου ελαίου ερευνήθηκε χρησιμοποιώντας τόσο GC και GC -MS τεχνικές (Σχήμα 1). Ο Πίνακας 1 παραθέτει τα στοιχεία που προσδιορίζονται στο αιθέριο έλαιο των διαφόρων τμημάτων του

Artemisia herba alba

(capitulum, φύλλα, εναέρια τμήματα και μίσχοι). Ο Πίνακας 2 δείχνει ότι το αιθέριο έλαιο των φύλλων αποτελείται κυρίως από οξυγονωμένο σεσκιτερπένια (39,89%), σεσκιτερπένια (29,04%) και εστέρες (23,97%). Τα μονοτερπένια με thujone σκελετό (1,24%) και μονοτερπένια με πινανίου σκελετό (4,48%) που αντιπροσωπεύεται από τον χαμηλό περιεχόμενο. Οι ενώσεις αυτές αντιπροσωπεύονται από μεταβλητές συγκεντρώσεις σε άλλα μέρη του φυτού που μελετήθηκαν: β- thujone (1,24%) σε φύλλα και (6.14%) σε εναέρια μέρος, οξείδιο bisabolon (17,55) σε εναέρια τμήματα και 10,27% στα φύλλα. Παρ ‘όλα αυτά, (+) 2,3,6,7-τετραμεθυλ-, 4,4aα, 5,8,8aβ, 9β, 9αα, 10,10aα-decahydroanthracen-9-όλης και β-Guaiene απουσιάζουν σε άλλα μέρη του φυτό. Σε στελέχη αιθέριο έλαιο, εστέρες αποτελούν το μείζον κλάσμα με 62,8%. Από την άλλη πλευρά, το αιθέριο έλαιο του capitulum είναι σχετικά πλούσιο σε τερπενοειδή σε σύγκριση με άλλα βιολογικά μέρη του φυτού? οξυγονωμένο μονοτερπένια και μονοκυκλικών μονοτερπένια είναι το πιο άφθονο με 22,86% και 21,48% αντίστοιχα. Άλλες σημαντικές ενώσεις που αντιπροσωπεύονται από τα σεσκιτερπένια (12,92%), τα μονοτερπένια με thujane σκελετό (10,91%), και τα μονοτερπένια με πινανίου σκελετό (9,24%), ενώ μονοτερπένια με βορνανοσουλτάμη σκελετό βρέθηκαν με χαμηλό ποσοστό (3,31%).

Α: φύλλα, Β: capitulum, C: μίσχους, D:. εναέρια τμήματα (Μείγμα από φύλλα και capitulum)

Η

Η

Το αιθέριο έλαιο που εξάγεται από εναέρια μέρη (μίγμα capitulum και φύλλα) είναι πολύ πλούσια σε οξυγονωμένο sesquiterpenes (46,15%) και πινανίου σκελετό (26.02%), άλλα συστατικά είναι αντιπροσωπευτικά από μονοτερπενικών σκελετός με thujane (10,78%), μονοτερπένια με βορνανοσουλτάμη σκελετό (8,98%) και μονοκυκλικά μονοτερπένια (6,59%). Σε Τυνησίας

Artemisia herba alba

αιθέριο έλαιο, οξυγονωμένο μονοτερπένια και οξυγονωμένο sesquiterpenes αντιπροσωπεύουν το μεγαλύτερο μέρος του πετρελαίου [18].

Θουιόνη αναφέρθηκε ως το κύριο συστατικό του αιθέριου ελαίου από την Τυνησία ( 64%), ενώ ήταν απούσα στην Ισπανία για όλα τα αιθέρια έλαια που μελετήθηκαν [8, 11]. Σε αυτή τη μελέτη, η συγκέντρωση thujone ήταν 1,04%. Σε προηγούμενες μελέτες, Benjilali και Richard εντοπίστηκαν επτά χημειοτύπων με υψηλή συγκέντρωση που κυμαίνεται μεταξύ 34% και 94% των α και β thujone στο

Artemisia herba alba

αιθέρια έλαια που συλλέγονται από διάφορες περιοχές του Μαρόκου [19, 21]. Επίσης, στην Αλγερία, α thujone και β thujone χαρακτηρίστηκαν ως τα κύρια συστατικά του μελέτησαν πετρελαίου [22,23]. Στην έρευνά μας, β συγκέντρωση thujone ήταν 6,14%, αλλά thujone α δεν ανιχνεύτηκε σε εναέρια πετρελαίου μέρη. Με βάση τα αποτελέσματα που προέκυψαν από Ouyahya et al [10] για τρεις μαροκινή έλαια Αρτεμισία (

Artemisia Negri

,

Αρτεμισία mesatlantica

και

Artemisia herba alba

) φαίνεται ότι η ποσοστιαία σύνθεση των α και β thujone ποικίλλουν ανάλογα με τη γεωγραφική θέση ανάπτυξης, η εποχή, περιβαλλοντικές και κλιματικές συνθήκες.

έχει αναφερθεί σε όλα σχεδόν τα δείγματα που περιγράφονται στη βιβλιογραφία που κινεόλη είναι ένα από τα πιο κοινά συστατικών σε

Artemisia herba alba

αιθέριο έλαιο. Έχει βρεθεί ως ένα σημαντικό συστατικό στο αιθέριο έλαιο από την Ισπανία (Ανατολική και κεντρική Ισπανία) [8, 11], του Ισραήλ [8], την Αίγυπτο [24], καθώς και σε άλλες περιοχές του Μαρόκου [13]. συγκέντρωση της φτάνει υψηλές τιμές (ανώτερη από 40%), στην Ισπανία και το Ισραήλ [11, 8]. Στην Τυνησία καμία ή πολύ χαμηλές τιμές αποτελέσματα για 1,8-κινεόλη συγκέντρωση [15,16], όπως αιθέρια έλαια από την Αλγερία και την Ιορδανία [12, 14]. Σε αυτή τη μελέτη η συγκέντρωση 1,8-κινεόλη κυμάνθηκε μεταξύ 1,49% στην εναέρια τμήματα και 20.37% στα φύλλα.

καμφορά βρέθηκε σε υψηλές συγκεντρώσεις σε βασικά δείγματα πετρελαίου από τη νότια Τυνησία [18] και της Αλγερίας (19.14%) [14]. Στο Μαρόκο, μια προηγούμενη μελέτη έδειξε ότι η καμφορά είναι ένα από τα πιο αντιμετώπισε συστατικά

Artemisia herba alba

αιθέριο έλαιο. Πέντε χημειοτύπων ορίστηκαν ως έλαια τύπου καμφορά [20]. Στην εργασία μας, βρήκαμε 5,12% καμφορά.

Chrysanthenone είναι μια κοινή ένωση σε έλαια από το Ισραήλ, την Ισπανία (28,2% -36,4%), την Τυνησία (17%) και την Αλγερία (22,5% του δείγματος από το Sidi Aissa ) [2], και ακόμη και από άλλα του Μαρόκου δείγματα (77%). Εδώ δεν ανιχνεύθηκε σε εναέρια τμήματα από το

Artemisia herba alba

? ήταν μάλλον παρόν σαν μια μικρή συγκέντρωση σε capitulum (1,2%). Μεταξύ των ενώσεων που προσδιορίζονται σε άλλα

Artemisia herba alba

έλαια, και δεν ανιχνεύεται σε αυτή τη μελέτη, η απουσία davanon Αξίζει να σημειωθεί? έχει βρεθεί να είναι το κύριο συστατικό σε ορισμένους πληθυσμούς του

Artemisia herba alba

από άλλες περιοχές του Μαρόκου [21, 25] και ως δευτερεύον συστατικό σε δείγματα από ισραηλινές [8, 26] και την έρημο του Σινά και το περιβάλλον [8, 27]. Στην Ισπανία, η συγκέντρωση της φτάνει υψηλές τιμές (ανώτερη από 39,1%), αλλά είναι απούσα σε άλλα βασικά δείγματα ελαίων [11].

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι τα αιθέρια έλαια από διάφορα μέρη της βοτανικής

Artemisia Herba alba

μελετήθηκαν δεν περιέχουν καμφορά, thujone, και 1,8 κινεόλη ως τα κύρια συστατικά όπως άλλες μαροκινή [22], της Αλγερίας [2] και το ισραηλινό τύπους των αιθέριων ελαίων. Επιπλέον, η μελέτη μας προσδιορίζει νέα μόρια που δεν έχουν αναφερθεί και σε άλλες μελέτες και την πιθανή χαρακτηρισμό ενός νέου chemothypes (verbenol, trans δισαμπολόνη α, φαρνεσένιου επόξυ) του

Artemisia herba alba

αιθέρια έλαια (Σχήμα 2). Trans δισαμπολόνη α και φαρνεσένιου εποξείδιο, έχουν αναφερθεί να παρουσιάζουν δυναμικό δραστηριότητες κατά του όγκου [28, 29].

Η

Μέσα από τη μελέτη των αιθέριων ελαίων με GC-MS, ήμασταν σε θέση να προσδιορίσει και να ποσοτικοποιήσει η σύνθεση των αιθέριων ελαίων του

Artemisia herba alba

, η οποία διαφέρει σε διαφορετικά μέρη των φυτών. Αυτές οι ποιοτικές και ποσοτικές διαφορές στη χημική σύνθεση των αιθέριων ελαίων μπορεί να αποδοθεί σε διάφορους παράγοντες όπως η γεωγραφική παράγοντες (τοποθεσία), κλιματολογικές επιδράσεις των φυτών, την εποχή της συγκομιδής, η φύση του εδάφους, την ηλικία του φυτού μέρη (νεαρά ή ενήλικα) , η κατάσταση του φυτικού υλικού που χρησιμοποιείται (αποξηραμένα ή φρέσκα), το μέρος του φυτού που χρησιμοποιείται, ο χρόνος της συλλογής, τη διαδικασία εξόρυξης, η γενετική μεταβλητότητα (χημειότυπος), [30] κλπ

τα αποτελέσματα μας είναι σε συμφωνία με άλλες αναφορές που έδειξε πώς ανάπτυξη των φυτών επηρεάζονται από γενετικούς και περιβαλλοντικούς παράγοντες, και πώς αυτοί οι παράγοντες συμβάλλουν σε διαφορές στη χημική μεταβολή των αιθέριων ελαίων των φυτών με διαφορετικές χημειοτύπων [31, 32]. Η χημική μεταβολή των αιθέριων ελαίων των διαφορετικών χημειοτύπων του

Thymus

είδη από διαφορετικές τοποθεσίες ή αυξάνεται με τον ίδιο βιότοπο έχουν αποδοθεί στη διαφορά των περιβαλλοντικών και γενετικών παραγόντων [31, 33, 34, 35]. Επιπλέον, οικολογικών παραγόντων, κλιματικά χαρακτηριστικά, ιδίως, το φως και η θερμοκρασία, έχουν επίσης αναφερθεί να επηρεάζει την παραγωγή αιθέριων ελαίων καθώς επίσης και άλλους δραστικούς παράγοντες σε φυτά [32, 36, 37, 38, 39].

αντικαρκινική δράση του

Artemisia herba alba

αιθέρια έλαια

η χημειοθεραπεία δεν δίνει σημαντικά οφέλη και συχνά συνδέεται με τη συστημική τοξικότητα και ανθεκτικότητα στα φάρμακα. Ετσι, η αναζήτηση νέων θεραπευτικών παραγόντων που είναι σε θέση να παρακάμψουν τις παρενέργειες της χημειοθεραπείας, παραμένει μια πιο αποτελεσματική για τη μείωση της τοξικότητας και να αυξήσουν την αποτελεσματικότητά τους κατά του καρκίνου. Ως εκ τούτου, θα πραγματοποιηθεί το

in vitro

αντικαρκινική δράση των αιθέριων ελαίων που λαμβάνονται από διάφορα βιολογικά μέρη του

Artemisia herba alba

ανάπτυξη στο Μαρόκο.

Artemisia herba alba

είναι ένα συχνό συστατικό των φυτικών μειγμάτων που χρησιμοποιούνται στην παραδοσιακή ιατρική [40, 3, 4].

In vitro δοκιμασίες κυτταροτοξικότητας

αντι-όγκου των

Artemisia herba alba

έλαια έγιναν εναντίον κυτταρικών σειρών Ρ815 και BSR. Αυτά τα έλαια περιλαμβάνουν: τα αιθέρια έλαια των φύλλων, capitulum και εναέρια τμήματα. Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται αναφέρονται στα σχήματα 3 και 4? φαίνεται ότι όλα τα αιθέρια έλαια έχουν σημαντική δοσοεξαρτώμενη κυτταροτοξική δράση κατά των κυτταρικών σειρών Ρ815 και BSR. Ωστόσο, σε Ρ815 κυτταρική γραμμή (σχήμα 3), η κυτταροτοξικότητα μειώθηκε με την ακόλουθη σειρά: αιθέριο έλαιο από φύλλα & gt? Το αιθέριο έλαιο του capitulum & gt? αιθέριο έλαιο εναέρια τμήματα. Η συγκέντρωση που οδηγεί σε 50% κυτταροτοξικότητα (IC

50) ήταν περίπου 15 μg /mL (P & lt? 0,05) για φύλλα πετρελαίου και 36μg /ml για capitulum αιθέριο έλαιο, ωστόσο? Το αιθέριο έλαιο του υπέργεια μέρη δεν έδειξε σημαντική κυτταροτοξικότητα και δεν φτάνουν IC

50 (P & lt? 0,05). Σε BSR κυτταρική γραμμή (Σχήμα 4), η κυτταροτοξικότητα που επάγεται από τα αιθέρια έλαια που μελετήθηκαν δείχνει ότι capitulum έλαιο (IC

50 = 20 μg /mL, P & lt? 0,05)) είναι ελαφρώς ευαίσθητο σε φύλλα έλαιο (IC

50 = 26μg /mL, P & lt? 0,05) και πιο ευαίσθητη από εναέρια τμήματα έλαια (IC

50 = 50 μg /mL) (P & lt? 0,05). Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η επίδραση κυτταροτοξικότητα μπορεί να αποδοθεί στη φύση της ένωσης περιεχομένου χημικών στα αιθέρια έλαια που προέρχονται από διάφορα μέρη βοτανική του

Artemisia herba alba

και σε κυτταρικές σειρές καρκίνου στοχεύουν.

Ρ815 κύτταρα αντιμετωπίζονται με διαφορετικές συγκεντρώσεις των αιθέριων ελαίων από τα εναέρια τμήματα (EOAP), φύλλα (EOL) και capitulum (EOC). Μπαρ δείχνουν το μέσο ποσοστό ± SD. * P & lt?. 0.05

Η

BSR κύτταρα υποβάλλονται σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις των αιθέριων ελαίων από τα εναέρια τμήματα (EOAP), φύλλα (EOL) και capitulum (ΕΓΚ) του

Artemisia herba alba

για 48h. γράφημα Bar δείχνει το μέσο ποσοστό ± SD. * P & lt? 0.05.

Η

Με βάση τα δεδομένα της βιβλιογραφίας, είναι δυνατόν να υποθέσουμε ότι τα κυτταροτοξικά αποτελέσματα που εμφανίζεται από τα αιθέρια έλαια, υπό αυτές τις πειραματικές συνθήκες, θα μπορούσε να σχετίζεται με τη συνολική δράση των ενώσεων που υπάρχουν σε έλαια, ιδιαίτερα να σεσκιτερπενική ενώσεων [41, 42]. Το αιθέριο έλαιο των φύλλων, η οποία παρουσιάζει μια υψηλότερη συγκέντρωση των σεσκιτερπενίων (68,93%) και ιδιαίτερα οξυγονωμένο sesquiterpenes (39,89%), έχει αποδειχθεί ότι είναι πιο δραστήρια από ό, τι άλλα αιθέρια έλαια που προέρχονται από το

Artemisia herba alba

. Στην πραγματικότητα, οι αντικαρκινικές δραστηριότητες του σεσκιτερπένια έχουν αναφερθεί στη βιβλιογραφία. Έχει βρεθεί ότι α-humulene είναι δραστικό έναντι Α-549, κυτταρικές σειρές LNCaP [43, 44, 45] DLD-1 και. Επίσης, καρυοφυλλένιο επέδειξε αντιπολλαπλασιαστική δραστικότητα έναντι Κ562 κυττάρων [46]. Ως εκ τούτου, τα αποτελέσματά μας σε κυτταρικές γραμμές όγκου δείχνουν ότι η αντικαρκινική δράση των αιθέριων ελαίων από διάφορα βιολογικά μέρη του

Artemisia herba alba

μπορεί να σχετίζεται με τα ενεργά σεσκιτερπένια συνδέεται με την συνέργεια των άλλων φυσικών προϊόντων που υπάρχουν στο αιθέριο έλαιο σύνθεση.

Η διαφορά στην κυτταροτοξική δράση των αιθέριων ελαίων που προέρχονται από διάφορα βιολογικά μέρη, δείχνουν ότι ο καρκίνος κυτταρικές σειρές που μελετήθηκαν διαφέρουν ως προς την ευαισθησία τους στις ουσίες που περιέχονται στα αιθέρια έλαια των

Artemisia herba alba

και τα μοριακά χαρακτηριστικά των κυττάρων, καθώς και. Μια μελέτη της κυτταροτοξικότητας που επάγεται από διάφορα αιθέρια έλαια σε

Saccharomyces cerevisiae

δείχνει ότι αυτά τα κύτταρα είναι πιο ευαίσθητα σε

Artemisia herba Alba

, αυτό κυτταροτοξικότητα συνοδεύεται από την επαγωγή των κυτταροπλασματικών μετάλλαξης, υποδεικνύοντας μιτοχονδριακή βλάβη και την απομείωση του οξειδωτικού μεταβολισμού του [47]. Στη μελέτη μας, αν και τα αιθέρια έλαια ορισμένα μέρη του φυτού που δεν έχει δειχθεί κυτταροτοξική δράση κατά της PBMCs (EOC, και EOL), ορισμένες από αυτές επιδεικνύουν κυτταροτοξική δράση επί PBMCs (EOAP). Από την άλλη πλευρά, η μικροσκοπική σύγκριση των βιώσιμων καρκινικών κυττάρων και τα PBMCs σε επεξεργασία με 50 μg /ml με την αιθέρια έλαια από φύλλα και capitulum (EOC και EOL), που παρουσιάζεται μετά από 24 ώρες λύση των κυτταρικών γραμμών όγκου (70%) με τη χρήση του bleu trypan μέθοδο του αποκλεισμού. Ότι, τα PBMCs δεν αποδεικνύουν τον χρωματισμό bleu αντανακλώντας τη βιωσιμότητά τους, η παρατήρηση αυτή δεν αποδείχθηκε μετά τη θεραπεία με το EOAP που επιδεικνύουν επίδραση λύσεως προς το PBMCs (Σχήμα 5). Επιπλέον, Tilaoui et al, (2011) ανέφεραν την κυτταροτοξική δράση των εναέριων μέρος αιθέριο έλαιο του

Artemisia herba alba

σε καρκινικές κυτταρικές σειρές CEM με IC

50 = 6 μg /mL [40]. Η κυτταροτοξικότητα του

Artemisia herba alba

αιθέρια έλαια θα μπορούσαν να σχετίζονται με την παραγωγή δραστικών ειδών οξυγόνου (ROS). Έχει αναφερθεί ότι η έκθεση σε αιθέρια έλαια επηρεάζει έντονα το κυτταρικό τοίχωμα και τις μεμβράνες και τις ζημίες μιτοχόνδρια. Αυτό μπορεί να οδηγήσει σε δυσλειτουργία των μιτοχονδρίων και σε μία ρίζα έκρηξη της αντιδραστικά είδη οξυγόνου που προκαλεί επαγωγή του γονιδίου και αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο [48, 49]. Στην πραγματικότητα, μιτοχονδριακή δυσλειτουργία είναι γνωστό ότι αυξάνει ενδοκυτταρικές συγκεντρώσεις των ειδών DNA που βλάπτουν όπως ιόντα υπεροξειδίου και υπεροξείδιο συνδέονται με αποπτωτικό θάνατο [50, 51].

PBMC παρασκευάστηκαν από την ανθρώπινη φυσιολογικούς δότες με φυγοκέντρηση Ficoll-hypaque πυκνότητα φυγοκέντρηση. Τα κύτταρα επωάστηκαν σε πλάκες μικροτιτλοδότησης 96 φρεατίων σε παρουσία διαφόρων αιθέριων ελαίων (αιθέριο έλαιο των φύλλων: EOL, αιθέρια έλαια capitulum: EOC και αιθέρια έλαια εναέριων μερών: EOAP) σε διαφορετικές συγκεντρώσεις (0, 4 μg /κ.εκ- 50 μg /ml). Μετά από 48 ώρες επώασης, η βιωσιμότητα προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ΜΤΤ δοκιμασία όπως περιγράφεται στα υλικά και μεθόδους. γράφημα Bar δείχνει το μέσο ποσοστό ± SD. * P & lt? 0.05.

Η

Προγενέστερες μελέτες έχουν δείξει ότι τα φυτά είναι γνωστό ότι παρουσιάζουν διακύμανση στην συγκέντρωση των βιοδραστικών φυτοχημικών ανάλογα με εγγενείς παράγοντες όπως η ηλικία του φυτού, και σε εξωγενείς παράγοντες όπως η γεωγραφική κλίμα, κιρκάδιου ρυθμός, η φύση του εδάφους, και η εποχή. Η κυτταροτοξική δράση των αιθέριων ελαίων μπορεί να οφείλεται στις συνεργικά αποτελέσματα όλων των τερπενίων στο αιθέριο έλαιο, ή ίσως υπάρχουν κάποιες άλλες δραστικές ενώσεις που είναι υπεύθυνες για την αντιπολλαπλασιαστική δραστικότητα του αιθέριου ελαίου, το οποίο αξίζει την προσοχή σε οποιαδήποτε μελλοντική μελέτη [52, 53]. Ωστόσο, πρέπει να έχουμε κατά νου ότι τα αιθέρια έλαια είναι πολύπλοκα μίγματα πολλών μορίων, και θα μπορούσε κανείς να αναρωτηθεί εάν βιολογικές επιδράσεις τους είναι το αποτέλεσμα της συνεργίας μεταξύ όλων των μορίων ή αντανακλούν μόνο τις δραστηριότητες των βασικών μορίων που υπάρχουν στις υψηλότερες συγκεντρώσεις, σύμφωνα με η αέρια χρωματογραφική ανάλυση. Γενικά, τα βασικά συστατικά που βρέθηκαν να αντανακλά αρκετά καλά τις βιοφυσικές και βιολογικά χαρακτηριστικά των αιθέριων ελαίων από τα οποία απομονώθηκαν, με τα πλάτη των συνεπειών τους εξαρτάται από τη συγκέντρωση τους, όταν δοκιμάζονται μόνοι τους ή σε αιθέρια έλαια [54 ]. Επίσης, οι διαφορικές επιδράσεις που παρατηρούνται μεταξύ καρκινικές κυτταρικές γραμμές θα μπορούσαν να σχετίζονται με το στόχο αυτών των κυττάρων, όπως Ρ815 είναι ένα κυτταρικό εναιώρημα γραμμή και BSR είναι μια προσκολλημένη κυτταρικές γραμμές. Το αποτέλεσμά μας είναι σύμφωνο με Kumura et al, (2004), οι οποίοι αποδεικνύουν ότι η αναστολή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού με μεθοτρεξάτη είναι διαφορετικός σε κύτταρα εναιώρημα (FM3A, 2Β4 και ΤΗΡ-1) και προσκολλημένα (ΝΙΗ3Τ3 και V79) [55].

Επίδραση του

Artemisia herba alba

αιθέρια έλαια κατά PBMCs

Η πλειοψηφία των κλινικά εγκεκριμένα αντικαρκινικά φάρμακα χαρακτηρίζονται από ένα στενό θεραπευτικό παράθυρο που προκύπτει κυρίως από την υψηλή συστημική τοξικότητα των φαρμάκων σε συνδυασμό με καταφανή έλλειψη επιλεκτικότητας του όγκου [56]. Σε σχέση με αυτό, εξετάσαμε τα αιθέρια έλαια μας ενάντια στα ανθρώπινα μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMC), προκειμένου να προσδιοριστεί η επίδρασή τους έναντι των φυσιολογικών κυττάρων. Τα αποτελέσματα που ελήφθησαν αντιπροσωπεύονται στο σχήμα 5. απεικονίζεται σε αυτό το σχήμα ότι το αιθέριο έλαιο του εναέριων μερών προκαλεί περίπου το 50% της κυτταροτοξικότητα σε PBMC. Ωστόσο, τα αιθέρια έλαια από φύλλα και capitulum παρουσιάστηκαν σε μια συγκέντρωση όπως είναι σε θέση να επάγουν μια κυτταροτοξική δραστικότητα εναντίον καρκινικών κυττάρων (Ρ815 και BSR)? καμία επίδραση κυτταροτοξικότητα παρατηρήθηκε (Σχήμα 6), αλλά, αντί αυτού, τα φύλλα και τα έλαια capitulum παρήγαγε μια μικρή πολλαπλασιαστική επίδραση σε φυσιολογικά PBMC με 105% και 102% της βιωσιμότητας (Ρ & lt? 0,05) μετά από 48 ώρες θεραπείας για τα φύλλα και capitulum αντίστοιχα . (Σχήμα 5). Η διαφορική κυτταροτοξική δράση προς PBMCs και καρκινικά κύτταρα (Σχήμα 6) θα μπορούσε να εξηγηθεί από τη διαφορά του μεταβολισμού του κάθε τύπου κυτταρικής γραμμής. Επίσης, θα μπορούσε να οφείλεται στην διαφορική έκφραση των γονιδίων και κατά συνέπεια τη διαμόρφωση της δραστικότητας των αιθέριων ελαίων. Παρόμοιες παρατηρήσεις

in vivo

είναι επίσης γνωστές, όπου έχει διαπιστωθεί ότι ένα φυτικό εκχύλισμα εκθέματα αντιυπεροξειδωτικού και προ-οξειδωτική δράση για καρδιακά και τους ιστούς στο ήπαρ αντίστοιχα [57]

EOC:. Αιθέριων ελαίων της capitulum? EOL: αιθέρια έλαια από φύλλα? EOAP: αιθέρια έλαια των εναέριων μερών (μείγμα από φύλλα και capitulum). γράφημα Bar δείχνει το μέσο ποσοστό ± SD. * P & lt? 0.05.

Η

Συμπέρασμα

Εν κατακλείδι, η παρούσα εργασία επιβεβαιώνει την πολύ σημαντική χημική μεταβλητότητα στο

Artemisia herba alba

αιθέρια έλαια. Σε ό, τι θα μπορούσαμε να διερευνήσουμε, τέτοια μελέτη μπορεί να θεωρηθεί ως το βαθύ λεπτομερή έκθεση σχετικά με τη χημική σύνθεση και το

in vitro

αντικαρκινική δράση των αιθέριων ελαίων που προέρχονται από μίσχους, φύλλα, capitulum και μίγμα capitulum και τα φύλλα του

Artemisia herba alba

. Επιπλέον, η μελέτη αυτή εντοπίζει νέα μόρια που δεν έχουν αναφερθεί και σε άλλες μελέτες και την πιθανή χαρακτηρισμό νέων χημειοτύπων του

Artemisia herba alba

αιθέρια έλαια. Η αντικαρκινική δράση των αιθέριων ελαίων από διάφορα βιολογικά μέρη του

Artemisia herba alba

έχει προσδιορισθεί πλήρως κατά δύο γραμμές καρκινικών κυττάρων Ρ815 και BSR. Συνολικά, κυτταρικές σειρές Ρ815 είναι πιο ευαίσθητα από κυτταρικές σειρές BSR στις βασικές επιπτώσεις έλαια? Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι τα φύλλα και capitulum αιθέρια έλαια είναι πιο κυτταροτοξικά από εναέρια τμήματα που μελετήθηκαν. Ωστόσο, καμία κυτταροτοξική επίδραση αυτών των αιθέριων ελαίων παρατηρήθηκε στα ανθρώπινα φυσιολογικά κύτταρα, εκτός από μια μικρή πολλαπλασιαστική επίδραση. Φαίνεται πιθανό ότι

Artemisia herba alba

θα μπορούσε να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην καταπολέμηση του καρκίνου. Σαφώς, τον καθορισμό της βιοδραστικών ένωση (s) στο

Artemisia herba alba

αιθέρια έλαια που αναστέλλουν κυτταρικές σειρές καρκίνου του πολλαπλασιασμού θα χρειαστεί περαιτέρω έρευνα, να αποσαφηνίσει το μηχανισμό δράσης και η τυχόν χρήση τους.

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς θα ήθελα να ευχαριστήσω τον καθηγητή Khalid Chaouch (Τμήμα αγγλικής, Σχολή Λογοτεχνίας και Επιστημών του Ανθρώπου) για την αναθεώρηση του χειρογράφου.