Αφηρημένο

Η αυθόρμητη καρκίνοι είναι κοινές ασθένειες σε σκύλους. Μεταξύ αυτών, μερικοί κακοήθεις καρκίνοι, όπως του στόματος μελάνωμα, οστεοσάρκωμα, hemangiosarcoma και κατάρτι όγκους των κυττάρων είναι συχνά αναγνωρίζονται ως κλινικά προβλήματα, διότι, παρά τις υψηλές συχνότητες τους, οι τρέχουσες θεραπείες για τους καρκίνους αυτούς δεν μπορεί να επιτευχθεί πάντα ικανοποιητική έκβαση. Η απουσία αποτελεσματικών συστηματικών θεραπειών εναντίον αυτών των καρκίνων οδηγεί τους ερευνητές να διερευνήσουν νέες θεραπευτικές μεθόδους, όπως η ανοσοθεραπεία. Προγραμματισμένος θάνατος 1 (PD-1) είναι ένας υποδοχέας συνδιεγερτικό με λειτουργία ανοσοκατασταλτικές. Όταν δεσμεύεται συνδέτες του, PD-συνδετήρα 1 (PD-L1) ή PD-L2, PD-1 σε κύτταρα Τ αρνητικά ρυθμίζει την ενεργοποίηση σήματα από το υποδοχέα Τ κυττάρων, με αποτέλεσμα την αναστολή της λειτουργία τελεστή των κυτταροτοξικών Τ λεμφοκυττάρων. Η ανώμαλη έκφραση PD-L 1 έχει αναφερθεί σε πολλούς ανθρώπινους καρκίνους και θεωρείται μία ανοσολογική μηχανισμός διαφυγής για καρκίνους. Σε κλινικές δοκιμές, τα αντι-PD-1 ή αντισωμάτων αντι-ΡD-L 1 που προκαλείται από την υποχώρηση του όγκου για αρκετές κακοήθειες, συμπεριλαμβανομένου προχωρημένο μελάνωμα, μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα και καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων. Σε αυτή τη μελέτη, για την αξιολόγηση του δυναμικού των 1 PD-/PD-L 1 άξονα ως νέο θεραπευτικό στόχο για κυνικός ανοσοθεραπεία του καρκίνου, διεξήχθη ανοσοϊστοχημική ανάλυση της έκφρασης PD-L 1 σε διάφορες κακοήθεις καρκίνους των σκύλων. Εδώ, δείχνουμε ότι ο σκύλος του στόματος μελάνωμα, οστεοσάρκωμα, αιμαγγειοσάρκωμα, μαστοκύττωμα, αδενοκαρκίνωμα του μαστού, του προστάτη και αδενοκαρκινώματος εκφράζονται PD-L1, ενώ κάποια άλλα είδη καρκίνου δεν το έκανε. Επιπλέον, PD-1 εντόνως εκφρασμένων σε λεμφοκύτταρα που διηθούν όγκο που λαμβάνεται από του στόματος μελάνωμα, δείχνουν ότι τα λεμφοκύτταρα σε αυτόν τον τύπο του καρκίνου θα μπορούσε να έχει λειτουργικά εξαντληθεί. Αυτά τα αποτελέσματα ενθαρρύνει έντονα την κλινική εφαρμογή του PD-1 αναστολείς /PD-L1 ως νέοι θεραπευτικοί παράγοντες εναντίον αυτών των καρκίνων σε σκύλους

Παράθεση:. Maekawa Ν, Konnai S, Okagawa Τ, Nishimori Α, Ikebuchi R, Izumi Y, et al. (2016) ανοσοϊστοχημική ανάλυση του PD-L 1 Έκφραση σε Canine Κακοήθεις καρκίνοι και PD-1 Έκφραση σε λεμφοκύτταρα σε Canine μελάνωμα του στόματος. PLoS ONE 11 (6): e0157176. doi: 10.1371 /journal.pone.0157176

Επιμέλεια: Hiroshi Shiku, Mie Πανεπιστημίου Graduate School of Medicine, Ιαπωνία

Ελήφθη: 24 Δεκ του 2015? Αποδεκτές: 25η Μαΐου 2016? Δημοσιεύθηκε: 8, Ιουνίου του 2016

Copyright: © 2016 Maekawa et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή υποστηρίζεται από μια Grant-in-ενισχύσεις για την Επιστημονική Έρευνα (Grant Αριθμός 16K15042) και Grant-in-βοήθειας για JSPs Fellows (Grant Αριθμός 15J01989) από την Ιαπωνία Εταιρείας για την Προώθηση της Επιστήμης (JSPs). Αυτή η έρευνα είναι (εν μέρει) που υποστηρίζεται από την πλατφόρμα Drug Discovery, Πληροφορικής και Επιστήμης των διαρθρωτικών Ζωής (Πρόταση Νο 2157) από την Ιαπωνία Οργανισμό για την Ιατρική Έρευνα και την Ανάπτυξη (Αμέντ). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Σκύλοι συχνά αναπτύσσουν αυθόρμητη καρκίνοι, η οποία μπορεί να προκαλέσει θάνατο [1] ή να μειώσουν την ποιότητα ζωής των ασθενών. Μεταξύ κακοήθεις καρκίνους, λέμφωμα, μαστοκυττάρων όγκου (MCT), οστεοσάρκωμα (OS), σάρκωμα μαλακών ιστών, και του καρκινώματος του μαστού είναι σχετικά συχνές [2,3] και συχνά αναγνωρίζονται ως θανατηφόρες ασθένειες στην κλινική πράξη. Στοματική μελανώματος και αιμαγγειοσάρκωμα (HSA) είναι επίσης κοινές κακοήθειες σε σκύλους και σκύλους ασθενής με αυτούς τους τύπους καρκίνου έχουν συνήθως φτωχή πρόγνωση [4,5]. Τα πρότυπα της φροντίδας για κάθε τύπο καρκίνου έχουν συσταθεί και βελτίωσε επιτυχώς την πρόγνωση? Ωστόσο, τα αποτελέσματα της θεραπείας δεν είναι πάντα ικανοποιητική λόγω των χαμηλών επιτοκίων έως μέτρια ανταπόκριση ή περιορισμένη επιμήκυνση του χρόνου επιβίωσης.

ανοσοθεραπείες έχουν δυνατότητες, όπως νέες επιλογές θεραπείας για τον καρκίνο. Μεταξύ αυτών, το ανοσοποιητικό αναστολείς σημείο ελέγχου, όπως αντι-προγραμματισμένος θάνατος 1 (PD-1) και αντι-PD-συνδετήρα 1 (PD-L1) αντισώματα έδειξαν ελπιδοφόρα αποτελέσματα σε διάφορες κακοήθειες στον άνθρωπο [6,7]. Το ανοσοποιητικό μόριο οδοφράγματος PD-1 είναι ένα CD28-οικογένειας υποδοχέων, η οποία καταστέλλει ανοσοαποκρίσεις. PD-1 επί Τ κυττάρων ρυθμίζει αρνητικά τη σηματοδότηση του υποδοχέα Τ κυττάρου και αναστέλλει την επαγωγή των κυτοκινών όπως γ-ιντερφερόνη (IFN-γ), ιντερλευκίνη 2, και παράγοντα νέκρωσης όγκων άλφα, καθώς και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, που επιτρέπει τη διατήρηση της περιφερικής ανοχής ή η επιμονή ορισμένων παθογόνων στον ξενιστή [8]. Δύο συνδετήρες για PD-1 έχουν αναφερθεί: PD-συνδετήρα 1 (PD-L1) και PD-L2. έκφραση PD-L2 περιορίζεται σε ορισμένους τύπους κυττάρων ή ιστών, όπως είναι τα μακροφάγα και τα δενδριτικά κύτταρα, ενώ η έκφραση PD-L 1 μπορεί να προκληθεί σε μία μεγάλη ποικιλία τύπων κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των μη-αιμοποιητικών κυττάρων. έκφραση PD-L 1 δεν βρίσκεται στους περισσότερους φυσιολογικούς ιστούς? Ωστόσο, η έκφραση του αναφέρεται σε διάφορα κύτταρα όγκου [9,10] και ως εκ τούτου θεωρείται ως ένας από τους ανοσολογικούς μηχανισμούς διαφυγή για τον καρκίνο. Σε καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων, καρκίνο του στομάχου, και άλλους ασθενείς ο καρκίνος, η έκφραση PD-L 1 είναι γνωστό ότι σχετίζεται με φτωχή πρόγνωση [10-12], υποδεικνύοντας ότι PD-L 1 μπορεί να είναι ένας σημαντικός ρυθμιστής του ανοσοποιητικού συστήματος όταν καταπολεμά τον καρκίνο . Αντίσωμα φάρμακα που στοχεύουν αυτή την οδό αλληλεπιδρούν με σύνδεση του PD-L 1 προς PD-1 και μπορεί να ενισχύσει ειδικές ανοσοαποκρίσεις σε κύτταρα όγκου [13,14], στη συνέχεια με αποτέλεσμα την υποχώρηση του καρκίνου [15]. Ένας αριθμός κλινικών δοκιμών έχουν δείξει ότι αντικειμενικές αποκρίσεις μπορούν να ληφθούν με αντι-PD-1 ή αντι-PD-L 1 αντισώματα σε ασθενείς με κακοήθη καρκίνους, συμπεριλαμβανομένων προχωρημένο μελάνωμα, μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα και καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων [6, 7], και τη συσσώρευση αποδείξεων αποδεικνύει τη δυνατότητα του ανοσοποιητικού αναστολείς σημείο ελέγχου στη θεραπεία του καρκίνου.

Ωστόσο, υπάρχουν μόνο λίγες αναφορές σχετικά με την PD-1 /PD-L1 άξονα σε σκύλους, και η σύνδεσή της με τις ασθένειες παραμένει σε να διασαφηνιστεί. Προηγουμένως, έχουμε αναφέρει ότι PD-L1 εκφράζεται σε μελάνωμα σκύλος, MCT, και καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων και ότι ο αποκλεισμός PD-L 1 από ένα αντίσωμα αντι-PD-L 1 ενισχύει ΙΡΝ-γ παραγωγή από τα καρκινικά κύτταρα που διηθούν [16]. Αυτά τα αποτελέσματα προτείνουν ότι η αντι-ΡD-L 1 αντισώματα μπορεί να έχουν θεραπευτικά αποτελέσματα σε καρκίνους σε σκύλους. Σε αυτή τη μελέτη, να εκτιμήσει ποια είδη καρκίνου θα μπορούσαν να έχουν ως στόχο, την έκφραση PD-L1 στο σκυλί κακοήθεις καρκίνους ερευνήθηκε περαιτέρω. Εδώ, δείχνουμε ότι ο σκύλος του στόματος μελάνωμα, OS, HSA, MCT, αδενοκαρκίνωμα του μαστού, του προστάτη και αδενοκαρκινώματος εκφράζουν PD-L 1, γεγονός που υποδηλώνει ότι το PD-1 /PD-L1 άξονας θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως ένα ανοσοποιητικό μηχανισμό διαφυγή σε αυτούς τους καρκίνους. Σε υποστήριξη αυτής της υπόθεσης, PD-1 έκφραση ρυθμίζεται αυξητικά σε λεμφοκύτταρα που διηθούν όγκο που λαμβάνεται από του στόματος μελάνωμα και ηπατικών όγκων. Τουλάχιστον, θεραπευτικές δυνατότητες του PD-1 /PD-L1 αποκλειστές σε προφορική μελάνωμα και άλλες PD-L1-θετικών καρκίνων χρήζουν περαιτέρω διερεύνησης.

Υλικά και Μέθοδοι

Canine δείγματα

η χρήση ζώων σε όλη αυτή τη μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Φροντίδας και χρήσης Θεσμικών ζώων (ο αύξων αριθμός της έγκρισης ήταν # 15-0149), του Πανεπιστημίου Χοκάιντο. Κανένα ζώο θυσιάστηκε για τους σκοπούς της παρούσας μελέτης. Κλινικά δείγματα ιστών όγκου σκύλου χειρουργικά με εκτομή της Κτηνιατρικής Διδασκαλία Νοσοκομείο, Πτυχιούχος της Κτηνιατρικής Σχολής του Πανεπιστημίου Χοκάιντο και σε κτηνιατρεία στην πόλη Sapporo το 2014-2015. Κατά τη χρήση για την παρούσα μελέτη, ενημερωμένη συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ιδιοκτήτες των σκύλων. Περιφερική δείγματα αίματος κλινικά υγιών σκύλων συλλέχθηκαν από λαγωνικά στην ηλικία των 12-15 ετών φυλάσσονται στο Μηχανισμό Πειραματική Ζώων, Πτυχιούχος της Κτηνιατρικής Σχολής του Πανεπιστημίου Χοκάιντο.

κυτταρομετρία ροής

Για να αξιολογηθεί η εξειδίκευση δέσμευσης πρόσφατα εγκατεστημένος μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-PD-L 1 (mAb) [17], η ροή αναλύσεις κυτταρομετρίας διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16], με κάποιες τροποποιήσεις. Εν συντομία, κυνικός κυτταρικές σειρές μελανώματος, CMEC και CMM-1, τα οποία είναι PD-L1-αρνητικών υπό κανονικές συνθήκες [16], επιμολύνθηκαν με τον φορέα pEGFP-N2 ή τον φορέα pEGFP-N2-CPD-L1 [16] χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Μία ημέρα μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και χρωματίστηκαν με αντι-PD-L 1 mAb 6G7-Ε1 ή ένα αντίσωμα ελέγχου ισότυπο (αρουραίος IgM) (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) σε μια τελική συγκέντρωση 10 μg /mL. Μετά την πλύση, τα κύτταρα επωάστηκαν με ένα αλλοφυκοκυανίνη-συζευγμένο αντι-αρουραίου Ig αντισώματος (Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA). Ο φθορισμός αναλύθηκε με ένα FACSVerse κυτταρόμετρο ροής (BD Biosciences) και το λογισμικό FCS Express 4 (de novo Λογισμικό, Glendale, CA, USA). Για τα επιμολυσμένα κύτταρα, ενισχυμένη πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (EGFP) -θετικό κύτταρα περιφραγμένη και χρησιμοποιήθηκαν για ανάλυση.

Για να εκτιμηθεί κατά πόσον PD-1 έκφραση ρυθμίζεται αυξητικά στο πλαίσιο του σκύλου καρκίνων, ανάλυση κυτταρομετρίας ροής πραγματοποιήθηκε με σταυρό -αντιδρώσας αντίσωμα αντι-ανθρώπινου PD-1 [18]. Μονοπυρηνικά κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) και TILs από προσφάτως αφαιρεθέντες ιστοί όγκου σκύλου ελήφθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16]. Όλα τα εναιωρήματα μονών κυττάρων παρασκευάστηκαν από τη μηχανική μέθοδο. Τα κύτταρα βάφτηκαν με τις βέλτιστες συγκεντρώσεις FITC-συζευγμένο αντι-CD4 /ΡΕ-συζευγμένα αντι-CD8 κοκτέιλ αντισωμάτων (Abd Serotec, Oxford, UK) και βιοτινυλιωμένο αντι-ανθρώπινο αντίσωμα PD-1 (R &? D Systems, Minneapolis, ΜΝ, USA) για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (RT). Μετά την πλύση, τα κύτταρα επωάστηκαν με στρεπταβιδίνη APC-eFluor 780 (eBioscience, San Diego, CA, USA) για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Ο φθορισμός των κυττάρων αναλύθηκαν με FACS στίχου και FACS Express 4 λογισμικού. Βιοτινυλιωμένο κανονική IgG κατσίκας (Κ & amp? Συστήματα D) χρησιμοποιήθηκε ως ένα αντίσωμα ελέγχου ισότυπο. Για την ανάλυση, τα λεμφοκύτταρα του πληθυσμού ήταν περιφραγμένη από FSC και SSC και στο εσωτερικό τους PD-1 έκφρασης CD4

+ κύτταρα ή CD8

+ κυττάρων εκτιμήθηκε.

Δείγματα

Δείγματα επιλέχθηκαν τυχαία από σταθεροποιημένο με φορμαλίνη και εγκλεισμένοι σε παραφίνη ιστοί του σκύλου κακοήθων όγκων (110 δείγματα συνολικά), η οποία είχε υποβληθεί για ιστολογική διάγνωση και φυλάσσονται σε ένα εμπορικό εργαστήριο παθολογίας (North Lab, Hokkaido, Japan). Όλα τα δείγματα μελανώματος (

n

= 40) που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη προήλθαν από τη στοματική κοιλότητα. Τα δείγματα MCT (

n

= 5) ήταν όλα κατατάσσονται σε Patnaik βαθμού ΙΙΙ [19]. Για μαστικό δείγμα αδενοκαρκινώματος (

n

= 5) ανάλυση, συμπεριλήφθηκαν δεν δειγμάτων καρκινώματος του μαστού φλεγμονώδη. Εκτός από τα προαναφερθέντα δείγματα, OS (

n

= 10), HSA (

n

= 10), αδενοκαρκίνωμα του προστάτη (

n

= 5), το δέρμα ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (

n

= 5), διάχυτο λέμφωμα μεγάλων Β-κυττάρων (

n

= 5), ρινική αδενοκαρκινώματος (

n

= 5), σάρκωμα μαλακών μορίων (

n

= 5), ιστιοκυτταρικά σάρκωμα (

n

= 5), μεταβατικό καρκίνωμα (

n

= 5), και καρκίνωμα του πρωκτού σάκο αδένα με μεταστατική νόσο (

n

= 5) δείγματα μελετήθηκαν με ανοσοϊστοχημεία.

η ανοσοϊστοχημεία

η ανοσοϊστοχημική χρώση εξετάστηκε από τη διαδικασία αβιδίνης-βιοτίνης υπεροξειδάσης (ABC). Τμήματα (4 μm) αποκηρώθηκαν σε ξυλόλιο και ενυδατώθηκαν διαμέσου βαθμονομημένων αλκοολών. Για να αφαιρέσετε ενδογενούς υπεροξειδάσης, οι τομές βυθίστηκαν σε ένα διάλυμα υπεροξειδίου του υδρογόνου 3% σε θερμοκρασία δωματίου για 10 λεπτά. Μετά από αυτό, οι τομές επωάστηκαν με αντι-ΡD-L 1 αντίσωμα 6G7-E1 (10 μg /mL). Μετά από πλύση με ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού, οι τομές επωάστηκαν σε ένα δευτερεύον διάλυμα αντισώματος (επισημασμένο με βιοτίνη κατσίκας αντι-αρουραίου IgM) (Jackson ImmnunoResearch Laboratories, West Grove, ΡΑ, USA) σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά. Μετά την επώαση, οι τομές αντέδρασαν με τη χρήση του ABC στο Vectastain Elite ABC Kit (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά. Οπτικοποίηση επιτεύχθηκε χρησιμοποιώντας 0,05% διάλυμα 3,3′-διαμινοβενζιδίνη. αιματοξυλίνη λεκέ Μάγιερ χρησιμοποιήθηκε ως επίχρωση. Για τον αρνητικό έλεγχο, οι τομές υποβλήθηκαν στις ίδιες διαδικασίες χωρίς το πρωτογενές αντίσωμα ή με τον αρουραίο IgM αντίσωμα ελέγχου ισοτύπου (Acris Antibodies, Herford, Γερμανία). Το δείγμα θεωρείται θετικό για PD-L1 αν υπήρχε ιστολογική απόδειξη της χρώσης των κυττάρων. Δεν προφανής χρώση παρατηρήθηκε στα τμήματα αρνητικό έλεγχο (S1 Εικ). Για την προετοιμασία των δειγμάτων OS, απασβέστωση διεξήχθη χρησιμοποιώντας ένα τυπικό πρωτόκολλο με διάλυμα Plank-Rychlo του. μπλε χρώση Βερολίνο διεξήχθη για να διακρίνει τις καταθέσεις αιμοσιδηρίνη από θετική χρώση στα δείγματα HSA, όταν απαιτείται.

Στατιστική ανάλυση

Κατά την ανάλυση κυτταρομετρίας ροής του PD-1 έκφρασης, Mann-Whitney U test διεξήχθη και

σ

& lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

Anti-PD-L1 αντισώματος 6G7-E1 συνδέεται ειδικά με το σκύλο PD-L1

Τα αντισώματα αντι-PD-L1 ότι μπορεί να συνδεθεί με το σκύλο PD-L1 καθορίστηκαν προηγουμένως [16,17]. Μεταξύ αυτών, 6G7-E1 έδειξε επαρκή πρόσδεσης όπως προσδιορίζεται με ανοσοϊστοχημεία του μονιμοποιηθεί με φορμαλίνη και έχει εμπεδωθεί με παραφίνη όγκου σκύλου τμήματα. Για να ελεγχθεί η ειδικότητα των 6G7-Ε1 στην ανίχνευση του σκύλου PD-L1, προσπαθήσαμε πρώτα κηλίδωση Western ανάλυση του σκύλου PD-L 1-κουνελιού IgG πρωτεΐνη σύντηξης Fc [16] ως θετικός έλεγχος. Ωστόσο, δεν παρατηρήθηκε σύνδεση όταν 6G7-E1 χρησιμοποιήθηκε ως το πρωτογενές αντίσωμα, ενώ ένα αντι-κουνελιού IgG Fc αντίσωμα ανιχνεύεται η ειδική ταινία (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Επειδή αυτό το αποτέλεσμα υποδηλώνει ότι 6G7-E1 αναγνωρίζει ένα ειδικό διαμόρφωση του σκύλου PD-L1, ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των σκύλων κυτταρικών γραμμών μελανώματος CMEC και CMM-1 πραγματοποιήθηκε. Δεν δέσμευσης παρατηρήθηκε με το μη-επιμολυσμένα ή ψευδο (EGFP μόνο) -επιμολυσμένα σκύλου κύτταρα μελανώματος, ενώ 6G7-E1 συνδέθηκε με τα κύτταρα επιμολυσμένα με κυνικός PD-L1-EGFP (Σχήμα 1), υποδεικνύοντας ειδική πρόσδεση 6G7-Ε1 στο σκυλί PD-L1.

Canine κυτταρικές σειρές μελανώματος, CMEC και CMM-1, επιμολύνθηκαν με τον φορέα pEGFP-N2 (mock) ή pEGFP-N2-CPD-L1, και η δέσμευση του αντισώματος αναλύθηκε με ένα κυτταρομετρητή ροής. Η σκιασμένη περιοχή, μαύρη γραμμή, και κόκκινη γραμμή αντιπροσωπεύει τα αποτελέσματα για τα κύτταρα χωρίς θεραπεία, ψευδο-επιμολυσμένα κύτταρα, και CPD-L1-EGFP-επιμολυσμένα κύτταρα, αντίστοιχα. (Α) Η δέσμευση του αντισώματος ισοτυπικού ελέγχου να CMEC? (Β) δέσμευσης του 6G7-E1 σε CMEC? (C) δέσμευση του αντισώματος ισοτυπικού ελέγχου να CMM-1? και (Δ) σύνδεση του 6G7-E1 να CMM-1 δείχνονται στα ιστογράμματα. Αριθ σύνδεση του 6G7-Ε1 παρατηρήθηκε στα ψευδο-επιμολυσμένα ή μη επιμολυσμένα κύτταρα, ενώ ειδική σύνδεση παρατηρήθηκε στα CPD-L1-EGFP-επιμολυσμένα κύτταρα.

Η

Canine κακοήθεις καρκίνοι εκφράζουν PD-L 1

η ανοσοϊστοχημική ανάλυση εκτελέστηκε για την ανίχνευση της έκφρασης PD-L 1 σε διάφορες κακοήθεις καρκίνους. Συνολικά, 110 δείγματα ελέγχθηκαν, μεταξύ των οποίων 36 από το στόμα μελάνωμα, 7 OS, 6 HSA, 3 βαθμού III MCT, 4 μαστικό αδενοκαρκίνωμα, και 3 δείγματα αδενοκαρκινώματος του προστάτη ήταν PD-L 1 θετικά (Σχήματα 2 και 3, και Πίνακας 1). Τόσο παρατηρήθηκαν κυτταροπλασματική χρώση και χρώση κυτταρικής επιφάνειας. Τα ποσοστά της έκφρασης PD-L 1 ήταν 90% (36/40) για από του στόματος μελάνωμα, 70% (7/10) για το OS, 60% (6/10) για HSA, 60% (3/5) για τον βαθμό MCT III , το 80% (4/5) για αδενοκαρκίνωμα του μαστού, και το 60% (3/5) για αδενοκαρκίνωμα του προστάτη (Πίνακας 1). Τα άλλα 7 τύπους όγκων, δηλαδή καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων, διάχυτο μεγάλου λέμφωμα Β-κυττάρου, ρινική αδενοκαρκίνωμα, σάρκωμα μαλακών ιστών, ιστιοκυτταρικό σάρκωμα, καρκίνωμα από μεταβατικό επιθήλιο, και καρκίνωμα του πρωκτού sac αδένας δεν εκφράζουν PD-L 1, αν και η δοκιμή μέγεθος δείγματος ήταν σημαντικά περιορισμένη (5 περιπτώσεις για κάθε τύπο όγκου).

φορμόλη-σταθερές και ιστούς όγκων παραφίνη-ενσωματωμένες εξετάστηκαν ανοσοϊστοχημικά. Οι τομές χρωματίστηκαν με αντι-PD-L 1 mAb 6G7-E1. Αντιπροσωπευτικά θετικές χρώσεις του (Α, Β) από του στόματος μελάνωμα, (C, D) οστεοσαρκώματος, και (Ε, F) hemangiosarcoma απεικονίζεται. Αρχική μεγέθυνση: (A, C, E) 200 ×? (Β, D, F) 400 ×.

Η

φορμαλίνη σταθερών και εγκλεισμένοι σε παραφίνη ιστούς όγκων εξετάστηκαν ανοσοϊστοχημικά. Οι τομές χρωματίστηκαν με αντι-PD-L 1 mAb 6G7-E1. Αντιπροσωπευτικά θετικές χρώσεις του μαστικού αδενοκαρκινώματος (Α, Β) του όγκου των μαστοκυττάρων, (C, D), και (Ε, F) αδενοκαρκίνωμα του προστάτη δείχνεται. Αρχική μεγέθυνση: (A, D, E) 200 ×? (Β) 400 ×? (C) 100 ×.

Η

PD-1 εκφράζεται έντονα σε ογκο-διηθητικά λεμφοκύτταρα (TILs) σε κυνικός μελάνωμα του στόματος

Για να εκτιμηθεί το επίπεδο έκφρασης PD-1 σε λεμφοκύτταρα σχετίζονται με όγκους, TILs ελήφθησαν από χειρουργικά καρκινικούς ιστούς, και η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής πραγματοποιήθηκε. Σε σύγκριση με τα λεμφοκύτταρα περιφερικού αίματος από υγιείς σκύλους, PD-1 εκφράζεται έντονα τόσο CD8

+ και CD4

+ TILs από του στόματος μελάνωμα (σχήμα 4,

ρ

& lt? 0,05). Το θετικό ρυθμό PD-1 έκφρασης σε CD8

+ ή CD4

+ TILs ήταν 70,9 – 96,6% ή 80,2 έως 96,8%, αντίστοιχα (Πίνακας 2). Στην περίπτωση των ηπατικών όγκων, πιο βέλτιστο κύτταρα ελέγχου ήταν διαθέσιμα? Χρησιμοποιήθηκαν φυσιολογικά λεμφοκύτταρα ιστού-διηθητικά (Nils) από τα ίδια άτομα. Τόσο στην ηπατοκυτταρικού αδενώματος και σε ηπατοκυτταρικό αδενοκαρκίνωμα, TILs είχαν υψηλότερη έκφραση του PD-1 από Nils (S2 Σχήμα), υποδεικνύοντας ότι προς τα πάνω ρύθμιση του PD-1 έκφραση μπορεί να είναι μια κοινή φαινότυπο για TILs.

TILs συλλέχθηκαν από χειρουργικά στοματικών ιστών μελάνωμα και το επίπεδο έκφρασης του PD-1 αξιολογήθηκε με κυτταρομετρία ροής. Αριστερό πάνελ, PD-1 έκφρασης σε CD8

+ λεμφοκύτταρα. Δεξιό πίνακα, PD-1 έκφρασης CD4

+ λεμφοκύτταρα. Μονοπυρηνικά κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMC) ελήφθησαν από υγιείς σκύλους χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχος (υγιείς έλεγχος, HC).

σ

& lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική (Mann-Whitney τεστ U).

Η

Συζήτηση

Το μελάνωμα είναι ένας σχετικά κοινός τύπος του όγκου, η οποία αντιπροσωπεύει το 7% όλων των κακοήθων καρκίνων και είναι η πιο συχνή κακοήθεια του στόματος σε σκύλους [20]. Canine κακόηθες μελάνωμα μπορεί να εμφανιστεί στο δέρμα μαλλιά, στοματική κοιλότητα, νυχιού, των πελμάτων, των ματιών, ή βλεννογονοδερματικές διασταύρωση [20]. Μεταξύ αυτών των μορφών, από του στόματος μελάνωμα θεωρείται ως εξαιρετικά κακοήθης καρκίνος επειδή συχνά προκαλεί σοβαρή τοπική εισβολή και μεταστατική νόσο. Δυστυχώς, από του στόματος μελάνωμα είναι γενικά ανθεκτικά στη χημειοθεραπεία, γεγονός που καθιστά δύσκολο να αντιμετωπιστεί μεταστατικών βλαβών, οι οποίες σκοτώνουν τελικά άρρωστα σκυλιά [21]. Η απουσία αποτελεσματικών συστημική θεραπεία ενθαρρύνει την ανάπτυξη νέων θεραπευτικών μεθόδων, συμπεριλαμβανομένων των ανοσοθεραπεία. Στους ανθρώπους, το ανοσοποιητικό αναστολείς οδοφράγματος όπως αντι-PD-1 και αντισώματα αντι-ΡD-L 1 έχουν χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία του προχωρημένου μελανώματος, δείχνοντας πολλά υποσχόμενη αποτελεσματικότητες, με τα αντικειμενικά ποσοστά ανταπόκρισης 28% και 18%, αντίστοιχα [6, 7]. Σε αυτή τη μελέτη, ανοσοϊστοχημική ανάλυση έδειξε ότι όσο το 90% (36/40) του σκύλου του στόματος μελάνωμα εκφράζονται PD-L1, γεγονός που υποδηλώνει ότι το PD-1 /PD-L1 άξονας είναι ένας σημαντικός μηχανισμός της ανοσολογικής διαφυγή για αυτή τη μορφή καρκίνου . Το αποτέλεσμα αυτό είναι επίσης σύμφωνο με προηγούμενη αναφορά μας, η οποία έδειξε ότι το 100% (8/8) των από του στόματος μελάνωμα εκφράζονται PD-L1, ενώ τα περισσότερα μελάνωμα αποκόπηκε από το μάτι ή δέρμα δεν εκφράζουν PD-L1 [16]. Επιπλέον, σε συμφωνία με τα αποτελέσματα αυτά, PD-1 εκφράζεται έντονα τόσο CD8

+ και CD4

+ TILs που λαμβάνονται από το στόμα του μελανώματος. Αυτές TILs φάνηκε λειτουργικά εξαντληθεί επειδή ανοσοκατασταλτική μοτίβα, τα οποία καταστέλλουν λειτουργίες τελεστή των κυττάρων Τ στον άνθρωπο και τα ποντίκια, είναι εξαιρετικά διατηρημένη σε σκύλο PD-1 [16]. Λαμβάνοντας υπόψη ότι ο σκύλος κακοήθεις μετοχές μελάνωμα κάποιες ομοιότητες με το ανθρώπινο μελάνωμα, αναστολείς του PD-1 άξονα /PD-L1 θα μπορούσε επίσης να παρέχει θεραπευτικά αποτελέσματα ενάντια σκύλο του στόματος μελάνωμα, και τα σκυλιά θα μπορούσε να είναι ένα καλό ζωικό μοντέλο για τη διερεύνηση θεραπευτικές πτυχές του PD-1 /PD-L1 αναστολείς έναντι του μελανώματος σε κλινικές μελέτες.

OS είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου των οστών σε σκύλους, που είναι γνωστή για πολύ μεταστατικός χαρακτηριστικά του. Μόνο με ακρωτηριασμό, MST για τα σκυλιά με το OS είναι μόλις 19 εβδομάδες και περίπου το 90% των σκύλων αναπτύσσουν μεταστατικές βλάβες [22,23]. Ως εκ τούτου, η επιθετική χειρουργική επέμβαση σε συνδυασμό με συστηματική χημειοθεραπεία έχει μια τυπική θεραπεία για κυνικός OS, και νέες συστηματικές θεραπείες πρέπει να διερευνηθούν. Στους ανθρώπους, οι αντι-ΡD-L 1 αντισώματα αναμένεται να έχουν θεραπευτικά αποτελέσματα σε OS επειδή περίπου το 75% (12/16) των μεταστατικών OS έδειξαν έκφραση PD-L1. Σε ένα μοντέλο ποντικού, ένα αντίσωμα αντι-ΡD-L 1 βελτίωσε τη λειτουργία των κυτταροτοξικών Τ λεμφοκυττάρων και αύξησε την επιβίωση των ποντικών που φέρουν όγκο [24]. Επειδή το 70% (7/10) των πρωτογενών OS σε σκύλους βρέθηκαν να εκφράζουν PD-L 1, μπλοκάροντας αντισώματα μπορεί επίσης να έχει θεραπευτική αποτελεσματικότητα έναντι κυνικός OS. Ωστόσο, μπορεί να είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι, σε αντίθεση με μεταστατικών βλαβών του, όχι ανθρώπινα πρωτογενή OS εκφράζεται PD-L 1 [24], ενώ ο σκύλος πρωταρχικός OS εκφράζεται PD-L 1 σε ένα υψηλό ποσοστό. θα πρέπει να λαμβάνεται η διαφορά στην έκφραση PD-L1 προσεκτικά υπόψη κατά την παρέκταση ευρήματα από μελέτες της ανθρώπινης OS για σκύλων OS ή το αντίστροφο.

Τα σκυλιά έχουν ένα σχετικά υψηλό κίνδυνο για την ανάπτυξη HSA [25], το οποίο είναι ένας κακοήθης καρκίνος που προέρχονται από αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα. Λαμβάνοντας υπόψη ότι το σκυλί HSA είναι ιδιαίτερα μεταστατικό, επικουρική χημειοθεραπεία παραμένει σημαντική, αν και μπορεί να προσφέρει μόνο ένα μικρό όφελος σε χρόνους επιβίωσης [26]. Επειδή αγγειοσάρκωμα είναι μια σπάνια ασθένεια στον άνθρωπο, οι εκθέσεις σχετικά με την έκφραση PD-L1 στο αγγειοσάρκωμα έχει περιοριστεί [27,28], και θεραπευτικές επιπτώσεις της δεν έχει μελετηθεί καλά. Επειδή έκφραση PD-L 1 βρέθηκε σε 60% (6/10) των δειγμάτων HSA σκύλος, αξίζει να ερευνά το θεραπευτικό δυναμικό του PD-1 αναστολείς /PD-L 1 ως νέα συστημική ανοσοθεραπείες για το σκύλο HSA. έκφραση PD-L 1 σε HSA μπορεί να μοιραστεί τα χαρακτηριστικά της καταγωγής αγγειακών ενδοθηλιακών κυττάρων, διότι αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα εκφράζουν PD-L1 ως απόκριση σε διάφορες κυτταροκίνες όπως ΙΡΝ [29,30]. Μπορεί να είναι λογικό να υποθέσουμε ότι HSA χρησιμοποιεί το PD-1 /PD-L 1 άξονα ως μία ανοσολογική μηχανισμός διαφυγή επειδή PD-L 1 σε αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα έχει αναφερθεί ότι ρυθμίζουν αρνητικά CD8

+ Τ-κυττάρων αποκρίσεις όπως ΙΡΝ γ παραγωγή και κυτταρολυτική δραστικότητα [30].

MCT είναι η πιο κοινή δερματική καρκίνου σε σκύλους, που αντιστοιχεί στο 21% του συνόλου των σκύλων νεοπλάσματα του δέρματος [31]. Αν και η κλινική συμπεριφορά του MCT μπορεί να ποικίλει, ιστολογική διαβάθμιση [19] χρησιμοποιείται ευρέως και θεωρείται ότι είναι ένας αξιόπιστος προγνωστικός παράγοντας για σκύλους MCT. Σύμφωνα με Bostock

et al

., Για υψηλής ποιότητας ή αδιαφοροποίητα MCT, MST είναι μόνο 13 εβδομάδες [32] και το μεταστατικό ποσοστό είναι τόσο υψηλό όπως 56 – 96%. Σε αυτή τη μελέτη, υψηλής ποιότητας (Patnaik βαθμός III) MCT αναλύθηκε για έκφραση PD-L 1, και το 60% (3/5) των δειγμάτων θετική χρώση. Το αποτέλεσμα αυτό είναι επίσης συνεπής με τις προηγούμενες έκθεσή μας, στην οποία το 66,7% (4/6) του βαθμού ΙΙΙ MCTs έδειξαν έκφραση PD-L1 [16]. Αν και ορισμένα φάρμακα κυτταροτοξική χημειοθεραπεία και αναστολείς κινάσης ΚΙΤ τυροσίνης όπως imatinib και toceranib χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία MCT συστημικά, το ανοσοποιητικό αναστολείς σημείο ελέγχου που στοχεύουν το PD-1 /PD-L1 άξονας επίσης έχουν τη δυνατότητα να συμπεριληφθούν στην θεραπεία του MCT, επειδή η εμφάνισης αντοχής φαρμάκου μερικές φορές παρατηρείται κατά τη διάρκεια της χημειοθεραπείας, συμπεριλαμβανομένου ότι με αναστολείς ΚΙΤ. Αν και η έκφραση PD-L 1 σε βαθμό Ι ή MCT II παραμένει να διερευνηθεί, η έκφραση PD-L 1 μπορεί να σχετίζεται με τη βιολογική συμπεριφορά του MCT, διότι οδηγεί CD8

καταστολή + Τ-κυττάρων και διευκολύνει τη μετάσταση σε μοντέλα καρκίνου του ποντικού [33 ]. απαιτούνται περαιτέρω έρευνες για να αξιολογήσει κατά πόσον η έκφραση PD-L1 θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικός δείκτης για αυτή την πολύπλοκη και ετερογενής καρκίνο.

μαστικών όγκων αδένα είναι τα πιο κοινά νεοπλάσματα σε σεξουαλικά άθικτα θηλυκά σκυλιά, αντιπροσωπεύοντας το 70% των όλες οι περιπτώσεις καρκίνου σε αυτόν τον υποπληθυσμό [34]. Μεταξύ των κακοήθων όγκων του μαστού, αδενοκαρκίνωμα του μαστού αντιπροσωπεύει μια κοινή ιστοπαθολογική εξέταση, και τα σκυλιά με αδενοκαρκίνωμα του μαστού αντιμετωπίζεται με χειρουργική επέμβαση και μόνο μερικές φορές πάσχουν από υποτροπή ή /και μεταστάσεων. Η χημειοθεραπεία έχει κάποια οφέλη για τους μαστικούς κακοήθειες? Ωστόσο, σε πολλές περιπτώσεις δεν είναι θεραπευτική, και εναλλακτικές ή συμπληρωματικές συστηματικές θεραπείες πρέπει να διερευνηθούν. Στους ανθρώπους, η έκφραση PD-L 1 σε κύτταρα όγκου παρατηρήθηκε σε 34% (15/44) των ασθενών με καρκίνο του μαστού, και η έκφρασή της συσχετίστηκε σημαντικά με ορισμένους σημαντικούς προγνωστικούς παράγοντες, όπως η έκφραση των υποδοχέων ορμόνης [35]. Στους σκύλους, 80% (4/5) των μαστικών δείγματα αδενοκαρκινώματος εκφράζεται PD-L1, αν και η σύνδεσή της με την πρόγνωση παραμένει ασαφής. Μια περαιτέρω διερεύνηση της σχέσης μεταξύ της κατάστασης έκφρασης του PD-L 1 και την πρόγνωση σε περίπτωση σκύλου μαστικών όγκων πρέπει να διεξάγονται, και αξίζει να τουλάχιστον να αξιολογήσει το θεραπευτικό δυναμικό του PD-1 αναστολείς /PD-L 1 ως νέων συστηματικές θεραπείες κατά του καρκίνου αυτού.

προστάτη αδενοκαρκινώματος είναι μια σχετικά σπάνια ασθένεια στα αρσενικά σκυλιά. Αν και η συχνότητα εμφάνισης είναι χαμηλή, αδενοκαρκίνωμα του προστάτη προκύπτει συχνά ως ένα κλινικό πρόβλημα επειδή οι τοπικές εξέλιξης και μεταστάσεις είναι η κοινή επακόλουθα. Κατά τη στιγμή της διάγνωσης, περιφερειακών και απομακρυσμένες μεταστάσεις μπορεί να βρεθεί στις περισσότερες περιπτώσεις, και οι MSTS για σκύλους χωρίς θεραπεία θεωρείται ότι είναι λιγότερο από ένα μήνα [36]. Μέχρι σήμερα, δεν υπάρχει συναίνεση για το πρότυπο της περίθαλψης έχει επιτευχθεί, καθώς και συμβατικές θεραπείες όπως η χειρουργική επέμβαση, ακτινοθεραπεία, χημειοθεραπεία και είναι παρηγορητική στα περισσότερα σκυλιά. Στον άνθρωπο, το 50% (8/16) του ευνουχισμού ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη (CRPC) περιπτώσεις έχουν αναφερθεί να εκφράσουν PD-L1 [37]? Ωστόσο, κανένας από τους CRPC ασθενείς που έλαβαν ένα αντίσωμα αντι-Ρϋ-1 είχε μία αντικειμενική απόκριση σε μια κλινική δοκιμή [6]. Καμία απόκριση στα CRPC τους ασθενείς είναι πιθανόν να οφείλεται στην απουσία της έκφρασης PD-L 1 στους ιστούς όγκου, αν και εξετάστηκαν μόνο μερικά δείγματα από εγγεγραμμένων ασθενών και βρέθηκαν να είναι PD-L 1-αρνητικών [6,38]. Σε αυτή τη μελέτη, PD-L 1 εκφράστηκε σε 60% (3/5) των δειγμάτων αδενοκαρκινώματος προστάτη σκύλου, αλλά θεραπευτικές επιπτώσεις της παραμένουν ασαφή. Περαιτέρω μελέτες της ένωσης της έκφρασης PD-L 1 με την έκβαση της θεραπείας θα πρέπει να διεξάγεται, και τα σκυλιά θα μπορούσαν να είναι ένα ισχυρό ζωικό μοντέλο για ανθρώπινο καρκίνο του προστάτη επειδή μερίδια αδενοκαρκινώματος του προστάτη σκύλου κάποια χαρακτηριστικά με ανθρώπινο καρκίνο του προστάτη από την άποψη της αυθόρμητης εμφάνισής της, μεταστατικό ροπή και PD-L1 έκφρασης.

Οι άλλοι καρκίνοι δοκιμάζονται σε αυτή τη μελέτη δεν έδειξε καμία έκφραση PD-L1. Η απουσία έκφρασης PD-L 1 σε αυτούς τους όγκους μπορεί να οφείλονται σε διαφορές στην προέλευση των κυττάρων του όγκου, θέση του όγκου, και /ή ανοσολογική κατάσταση του κάθε καρκίνου. Επειδή το μέγεθος του δείγματος δοκιμάζεται σε αυτή τη μελέτη ήταν πολύ μικρό, περαιτέρω ανάλυση θα πρέπει να πραγματοποιείται πριν από τη λήψη σε ένα συμπέρασμα σχετικά με το καθεστώς έκφραση του PD-L1 σε αυτές τις μορφές καρκίνου. Πρόσφατα, οι ρυθμιστικοί μηχανισμοί της έκφρασης PD-L 1 σε ανθρώπους έχουν ερευνηθεί εκτενώς. Ένα από το μηχανισμό για την επαγωγή της έκφρασης PD-L 1 σε κύτταρα όγκου είναι σε απόκριση στην ΙΡΝ-γ [9], η οποία είναι πιθανό παράγεται από κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος στο μικροπεριβάλλον του όγκου κατά τη διάρκεια της κατά του όγκου ανοσοαποκρίσεων. Επειδή έκφραση PD-L 1 σε κυνικός καρκινικές κυτταρικές σειρές επάχθηκε ή ενισχύεται από κυνικός ΙΡΝ-γ θεραπεία [16], ο μηχανισμός αυτός είναι επίσης πιθανό να εμπλέκονται στη ρύθμιση της PD-L 1 σε σκύλους. Ένας άλλος μηχανισμός συνδέεται με ογκογόνο σηματοδότηση? η απώλεια της λειτουργίας φωσφατάσης και tensin ομόλογο (ΡΤΕΝ) έχει αναφερθεί ότι απορυθμίζει την έκφραση PD-L 1 σε γλοίωμα και τριπλά αρνητικά κύτταρα καρκίνου του μαστού [39,40]. Στους σκύλους, μετάλλαξη και /ή απώλεια του ΡΤΕΝ αναφέρθηκαν επίσης σε μελάνωμα, OS, HSA, και κακοήθεις όγκους του μαστικού αδένα [41-44]. Αυτό μπορεί να συμβάλει, τουλάχιστον εν μέρει, με την παρεκκλίνουσα έκφραση PD-L 1 σε αυτούς τους καρκίνους σε σκύλους.

Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή είναι η πρώτη έκθεση της έκφρασης PD-L 1 σε διάφορες κυνικός κακοήθεις καρκίνους . ανάλυση Έκφραση PD-L 1 έχει σημαντικές συνέπειες σε μια κλινική εφαρμογή του PD-1 αναστολείς /PD-L 1 σε σκύλους επειδή, σε κλινικές δοκιμές σε ανθρώπους με ένα αντι-Ρϋ-1 αντίσωμα, η έκφραση PD-L 1 έχει αναφερθεί ότι συνδέεται με την έκβαση της θεραπείας. Οι ασθενείς με PD-L1-θετικούς όγκους είχαν ποσοστό αντικειμενικής ανταπόκρισης του 36%, ενώ κανένας από τους ασθενείς με PD-L1-αρνητικούς όγκους είχαν αντικειμενική ανταπόκριση [6]. Τα στοιχεία μας παρέχουν βασικές πληροφορίες σχετικά με τη συμμετοχή του PD-1 άξονα /PD-L1 στο κυνικός ανοσολογία του καρκίνου και έντονα ενθαρρύνει την ανάπτυξη νέων ανοσοθεραπειών για τη στόχευση του PD-1 /PD-L1 οδού σε σκύλους. Επειδή αντι-ΡD-L 1 αντισώματα έδειξαν να έχουν θεραπευτικό δυναμικό για κυνικός καρκίνων [16], κλινικές εφαρμογές των αντισωμάτων αντι-ΡD-L 1 αξίζουν περαιτέρω διερεύνηση.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Σχ. Εκπρόσωπος ανοσοϊστοχημεία με το αντίσωμα ελέγχου ισότυπο.

Προφορική δείγμα μελάνωμα βάφτηκε με αντίσωμα αρουραίου IgM έλεγχο ισοτόπου. Δεν παρατηρήθηκε χρώση. Αρχική μεγέθυνση, 200 ×

doi:. 10.1371 /journal.pone.0157176.s001

(ΔΕΘ)

S2 Εικ. PD-1 επί TILs λαμβάνεται από ηπατικών όγκων.

TILs που λαμβάνεται από (Α) ηπατοκυτταρικό αδένωμα και (Β) ηπατοκυτταρικό αδενοκαρκινώματος αναλύθηκαν για PD-1 έκφραση με κυτταρομετρία ροής (κόκκινη γραμμή). Κανονική λεμφοκύτταρα ιστού-διηθητικά (Nils) που λαμβάνεται από γειτονικά υγιή ιστό ήπατος από τα ίδια άτομα (μπλε γραμμή) χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχος. Μαύρη γραμμή, έλεγχος ισοτόπου για TILs. Σκιασμένη περιοχή, ο έλεγχος ισοτόπου για Nils

doi:. 10.1371 /journal.pone.0157176.s002

(ΔΕΘ)