Αφηρημένο

Τα μέλη των οικογενειών πρωτεϊνών ΒΜΡ και Wnt παίζουν σημαντικό ρόλο στη φυσιολογική και παθολογική οστικού μεταβολισμού. Εξωκυττάρια ανταγωνιστές είναι ζωτικής σημασίας για τη διαμόρφωση της δραστηριότητάς τους. Η έλλειψη της έκφρασης του ανταγωνιστή νογκίνης ΒΜΡ με οστεοεπαγωγική, καρκίνωμα κυτταρικές γραμμές που παράγονται είναι ένας καθοριστικός παράγοντας της απόκρισης των οστεοβλαστών που επάγεται από μεταστάσεις στα οστά τους. Σε αντίθεση, οστεολυτικές, καρκίνωμα προερχόμενο κυτταρικές σειρές εκφράζουν ιδιοσυστατικά νογκίνης. Υποθέσαμε ότι ο καρκίνος των κυττάρων που προέρχονται από νογκίνη μπορεί να συνεισφέρει στην παθογένεση της οστεολυτικές οστών μετάστασης των στερεών καρκίνων με την καταστολή του σχηματισμού οστού. Ενδοστικό ξενομοσχευμάτων PC-3 καρκίνου του προστάτη που προκαλείται από κύτταρα οστεολυτικές βλάβες που χαρακτηρίζεται όχι μόνο από ενισχυμένη οστεοκλαστών επαναρρόφησης οστού, αλλά επίσης και από μειωμένη σχηματισμό οστού οστεοβλαστών μεσολάβηση. Ως εκ τούτου, σε αυτό το μοντέλο, αποσύνδεση της διαδικασίας αναδιαμόρφωσης των οστών συμβάλλει στην οστεόλυσης. Ο σχηματισμός οστού διατηρήθηκε στους οστεολυτικές βλάβες που προκαλούνται από PC-3 κύτταρα νογκίνης-σιγήσει, υποδηλώνοντας ότι ο καρκίνος των κυττάρων που προέρχονται από νογκίνη παρεμβαίνει με φυσιολογική σύζευξη οστού. Επιπλέον, ενδοστικό ανάπτυξη του όγκου του νογκίνης-σιγήσει κύτταρα PC-3 ήταν περιορισμένη, πιθανότατα ως αποτέλεσμα της συνεχιζόμενης δραστηριότητας των οστεοβλαστών. Η έρευνα αυτή παρέχει νέα στοιχεία για ένα μοντέλο οστεολυτικές μετάσταση στα οστά, όπου συστατική έκκριση νογκίνης από καρκινικά κύτταρα μεσολαβεί στην αναστολή του σχηματισμού των οστών, εμποδίζοντας έτσι την επισκευή του οστεολυτικές βλάβες που παράγονται από μια περίσσεια της μεσολαβούμενης από οστεοκλάστες οστική απορρόφηση. Ως εκ τούτου, η καταστολή noggin μπορεί να είναι μια νέα στρατηγική για την αντιμετώπιση της οστεολυτικές μεταστάσεις

Παράθεση:. Secondini C, Wetterwald Α, Schwaninger R, Thalmann GN, Cecchini MG (2011) Ο ρόλος του ΒΜΡ Σηματοδοσίας Ανταγωνιστή Noggin στην ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη οστεολυτικές μετάσταση στα οστά. PLoS ONE 6 (1): e16078. doi: 10.1371 /journal.pone.0016078

Συντάκτης: Τσαντ Creighton, Baylor College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 13 Σεπ 2010? Αποδεκτές: 6 του Δεκέμβρη 2010? Δημοσιεύθηκε: 13 Ιαν 2011

Copyright: © 2011 Secondini et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από την Ευρωπαϊκή Επιτροπή (CANCURE-2.006 με 020.970 και PRIMA-504587) και από το Εθνικό Ίδρυμα Swiss (3200 έως 068.409,02). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

σκελετικών μεταστάσεων είναι μια κοινή κλινική εκδήλωση σε ασθενείς με προχωρημένο στάδιο πάσχουν από καρκίνο του προστάτη (ΚΓΠ) [1], [2] και τον καρκίνο του μαστού (CAM) [3]. μεταστάσεις οστών είναι το πιο σημαντικό αίτιο νοσηρότητας σε αυτούς τους ασθενείς, με πόνο και τις επιπλοκές, συμπεριλαμβανομένης της παθολογικά κατάγματα, το νωτιαίο μυελό και συμπίεσης νεύρων απαιτούν αναλγησία, ακτινοβολία και ορθοπεδική χειρουργική επέμβαση, όλα συνδέονται με σημαντικές δαπάνες [4].

στο μεταστατική εντόπιση, τα καρκινικά κύτταρα διαταράσσουν την ομοιόσταση φυσιολογικών οστών που ελέγχεται από οστεοβλάστες και οστεοκλάστες. CaM οστικές μεταστάσεις τείνουν να εκμαιεύσει οστεολυτικές απόκριση, ενώ CaP μεταστάσεις είναι κατά κύριο λόγο συνδέονται με μια οστεοσκληρωτικό αντίδραση [5], [6]. Και οι δύο τύποι των βλαβών σε κίνδυνο την σκελετική ακεραιότητα και τελικά να οδηγήσει σε παθολογικά κατάγματα.

Οι ακριβείς μηχανισμοί προσδιορισμού της οστεολυτικές και οστεοσκληρωτικό βλάβες σε οστικές μεταστάσεις δεν είναι σαφώς ακόμη οριστεί. Η επικρατούσα ιδέα δείχνει ότι τα καρκινικά κύτταρα εκκρίνουν μία περίσσεια παρακρινείς παράγοντες διέγερσης, άμεσα ή έμμεσα οστεοκλαστών ή οστεοβλαστών πρόσληψη, οδηγώντας έτσι σε μη ισορροπημένη περίσσεια επαναρρόφηση οστού ή σχηματισμό, αντίστοιχα [7], [8].

Είναι ευρέως αποδεκτό ότι η οστεολυτική αντίδραση στα αποτελέσματα μετάσταση οστού από μια περίσσεια της μεσολαβούμενης από οστεοκλάστες οστική απορρόφηση. Τα καρκινικά κύτταρα απελευθερώνουν παραδειγματική «οστεολυτικές» κυτοκίνες, όπως παραθυρεοειδούς ορμόνης που σχετίζονται με πρωτεΐνη (PTHrP), ενεργοποιητή υποδοχέα του συνδέτη NF-B (RANKL), την ιντερλευκίνη-8 (IL-8) και παράγοντα διέγερσης αποικιών-1 (CSF-1) , άμεσα ή έμμεσα υπεύθυνη για την αύξηση στην πρόσληψη οστεοκλαστών, τη δραστηριότητα και την επιβίωση. Μεταγενέστερες απελευθέρωση αυξητικών παραγόντων από την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων καυσίμων μήτρα οστών, τα οποία με τη σειρά της διεγείρει την περαιτέρω οστική επαναρρόφηση, διαιωνίζοντας έτσι τη διαδικασία και για τη σύσταση «φαύλο κύκλο» [5], [9]. Αυτή η υπόθεση παρέχει τη λογική για την αναστολή της επαναρρόφησης οστού ως θεραπευτικοί παρεμβολή με την εξέλιξη της ανάπτυξης σε οστεολυτική μετάσταση στα οστά. Ωστόσο, φαρμακολογική αναστολή της οστικής επαναρρόφησης έχει μόνο μία ελάχιστη ή καθόλου θετική επίδραση στην επούλωση των οστεολυτικές βλάβες [10]. Αυτό υποδηλώνει έντονα ότι, εκτός από την αύξηση των οστεοκλαστών επαναρρόφησης οστού, άλλο μηχανισμό (ες) να συμβάλλει στην οστεόλυσης.

Η οστεολυτική βλάβη στο πολλαπλό μυέλωμα (ΜΜ) δεν είναι μόνο το αποτέλεσμα μιας οστεοκλαστών αύξηση σε επαναρρόφηση οστού [11], αλλά επίσης και από μια αποσύνδεση της διαδικασίας οστικής ανακατασκευής προσδιορίζεται με μια μείωση στο σχηματισμό οστού οστεοβλαστών μεσολάβηση [12], [13]. Αρκετοί ανταγωνιστές της Απτέρου (Wnt) οδό σηματοδότησης, όπως Dickkopf-1 (DKK-1), που εκκρίνεται frizzled σχετίζονται πρωτεΐνη (sFRP) -1 και -2, οι υπερ-εκφράζονται από τα κύτταρα του ΠΜ και μπορούν να συμβάλλουν στην παρεμπόδιση της Wnt-διαμεσολαβούμενη πρόσληψη των οστεοβλαστών και, ως εκ τούτου, στην καταστολή του σχηματισμού των οστών [11], [14], [15]. Η άποψη αυτή επιβεβαιώνεται και από πειραματικά στοιχεία που αποδεικνύουν ότι ο αποκλεισμός της δραστικότητας DKK-1 διασώζει τον σχηματισμό οστού σε ζωικά μοντέλα MM [16].

Στο παρελθόν, έχουμε αναφερθεί ότι η οστεοεπαγωγική και οστεολυτικές δυναμικό

in vivo

της ΚΓΠ και κυτταρικές σειρές CaM μπορεί να οριστεί

in vitro από

διαφορική έκφραση τους, όχι μόνο από οστεολυτικές κυτοκινών, αλλά και του ανταγωνιστή νογκίνης BMP. Οστεοεπαγωγικό καρκινικές κυτταρικές σειρές δεν έχουν έκφραση νογκίνης, και η λειτουργική σημασία αυτού του ευρήματος τονίστηκε δείχνοντας ότι noggin ανάγκασε την έκφραση σε ένα οστεοεπαγωγικό CaP κυτταρική γραμμή καταργεί την ανταπόκριση των οστεοβλαστών που προκαλούνται από μεταστάσεις στα οστά του

in vivo

. Αντίθετα, συστατική έκφραση νογκίνης

in vitro

φαίνεται να είναι το σήμα κατατεθέν της οστεολυτικές ΚΓΠ και CaM κυτταρικές σειρές [17]. Στη συνέχεια υποστήριξε ότι, κατ ‘αναλογία με ό, τι έχει βρεθεί για DKK-1 σε ΜΜ, συστατική απελευθέρωση νογκίνη από οστεολυτικές καρκινικά κύτταρα θα μπορούσε να συμβάλει, μέσω της αναστολής του σχηματισμού των οστών, με την οστεολυτική βλάβη σε οστικές μεταστάσεις συμπαγών καρκίνων.

Για να ελεγχθεί αυτή η υπόθεση, πρέπει πρώτα να διερευνηθεί κατά πόσον η αναστολή του σχηματισμού των οστών είναι ένα συστατικό του οστεολυτικές βλάβες που προκαλούνται στα οστά ξενομοσχευθέντων με το ανθρώπινο CaP κυτταρική σειρά PC-3. Στη συνέχεια ερευνήθηκε κατά πόσον μικρή φουρκέτα RNA (shRNA) μεσολάβηση καταστολή νογκίνης εις κύτταρα PC-3, συστατικώς εκκρίνουν αυτήν την πρωτεΐνη [17], θα μπορούσε να διατηρήσει τον σχηματισμό οστού στα οστεολυτικές βλάβες.

Οι οστεολυτικές βλάβες στα οστά ξενομοσχευμένο με PC-3 κύτταρα έδειξαν μορφολογικές και ιστομορφομετρικές παραμέτρους της ενισχυμένης οστεοκλαστών οστικής επαναρρόφησης και μειωμένο σχηματισμό οστού οστεοβλαστών μεσολάβηση. Σε αντίθεση, τα οστά ξενομοσχεύτηκε με νογκίνη-σιγήσει κύτταρα PC-3 χαρακτηρίζονται από δομικές και ιστολογικές αλλαγές ενδεικτικές της δραστικότητας οστού σχηματισμού /επισκευής. Ως εκ τούτου, η καταστολή νογκίνη στο οστεολυτικές κυτταρική γραμμή PC-3 φαίνεται να διατηρηθεί η σχηματισμό οστού που ακολουθεί κανονικά επαναρρόφηση οστού, ως αποτέλεσμα της «φαινομένου σύζευξης». Αντιστρόφως, καρκινικού κυττάρου-εκκρίνεται νογκίνης εμποδίζει την επισκευή των βλαβών από οστεολυτικές απόζευξη σχηματισμό οστού από το οστεοκλαστών επαναρρόφησης οστού, η οποία διεγείρεται από καρκινικά κύτταρα που προέρχονται από κυτοκίνες οστεολυτική.

Αποτελέσματα

κατασιγάσει νογκίνης mRNA και της έκφρασης πρωτεΐνης στο PC-3 /F

luc

κυττάρων κλώνου με shRNA

το ανθρώπινο οστεολυτικές CaP κυτταρική γραμμή PC-3, συστατικώς εκφράζουν τον ανταγωνιστή νογκίνης ΒΜΡ [17], αρχικά διαμολυσμένα με φορέα που κωδικοποιεί λουσιφεράση να δημιουργήσει

luc

-θετικό κλώνους. Ένα κύτταρο κλώνος, PC-3 /F

Luc

, επιλέχθηκε με βάση την σταθερή

Luc

έκφρασης και στο προφίλ της γονιδιακής έκφρασης

in vitro

, όγκου αναλάβει και την αντίδραση των οστών μετά από ενδοστικό ενοφθαλμισμό

in vivo

ισοδύναμα με εκείνα των γονικών PC-3 κύτταρα (Σχήμα S1).

Το PC-3 /F

luc

κλώνος στην συνέχεια επιμολύνονται με ένα συνδυασμό τριών διαφορετικών νογκίνης ειδικό shRNA ή με ένα μη-στόχευσης shRNA να αντλήσει νογκίνης knock-down (Nog-KD) και αρνητικού ελέγχου (mock) κλώνους, αντίστοιχα. επιλέγεται Δύο Nog KD κλώνοι (Nog-KD 14 και Nog-KD 17) έγιναν με βάση την ουσιαστική μείωση στην έκφραση του mRNA νογκίνης, σε σύγκριση με PC-3 /F

luc

κύτταρα (Σχήμα 1Α). Ανοσοστύπωμα ανάλυση των πρωτεϊνών νογκίνης έκκριση στο υπερκείμενο της καλλιέργειας από τους κλώνους Nog-KD 14 και 17 έδειξαν μία μείωση του 93% και 98%, αντίστοιχα (Εικόνα 1Β). Mock 5 κλώνος έδειξε αύξηση στην έκφραση του mRNA νογκίνης. Ωστόσο, η έκφραση της πρωτεΐνης noggin σε αυτόν τον κλώνο και σε ψευδο 4 δεν επηρεάστηκε.

A. έκφραση νογκίνης mRNA σε PC-3 /F

luc

κύτταρα, μη-στόχευση φορέα-επιμολυσμένων κλώνων (mock 4 και 5) και οι κλώνοι νογκίνη-KD (Nog-KD 14 και 17). Τα επίπεδα έκφρασης του mRNA (+/- SD) ποσοτικοποιούνται με πραγματικού χρόνου RT-PCR και ομαλοποιήθηκε ως προς β-ακτίνη ως ενδογενής έλεγχος? επίπεδο mRNA σε PC-3 /F

luc

κυττάρων ορίζεται ως 100%? ο μέσος όρος των 2 έως 3 ανεξάρτητα πειράματα δείχνεται. ***

P

& lt? 0.001, Nog-KD κλώνους

έναντι

PC-3 /F

Luc

και εικονικές κλώνους. Β Noggin πρωτεΐνη που εκκρίνεται στο ρυθμισμένο μέσο (CM) από το PC-3 /F

Luc

, μακέτα και Nog-KD κλώνους. Ισοδύναμες ποσότητες πρωτεϊνών από συμπυκνωμένο CM ανοσοστυπώθηκαν με αντι-νογκίνη αντίσωμα. Ισοδύναμο φορτίο πρωτεΐνης επαληθεύθηκε με χρώση με Coomassie blue τη συνολική περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες του ΚΕ.

Η

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων και την έκφραση των παραγόντων osteotropic της νογκίνης-σιγήσει PC-3 /F

Luc

κύτταρα

in vitro

η

ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων

in vitro

των παρωδία και Nog-KD κλώνους δεν επηρεάστηκε, σε σύγκριση με τη γονική PC-3 /F

Luc

(Εικόνα 2Α).

Α.

In vitro

πολλαπλασιασμό των ψευδο και Nog-KD κλώνους μετρήθηκε με ενσωμάτωση BrdU για 4 ημέρες και συγκρίθηκε με PC-3 /F

luc

κύτταρα. Μέσες τιμές από 3 ανεξάρτητα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τετραπλούν φρεάτια (+/- SD). B. Έκφραση DKK-1, PTHrP, RANKL, CSF-1 και IL-8 mRNA. τα επίπεδα έκφρασης του mRNA (+/- SD) ποσοτικοποιούνται με πραγματικού χρόνου RT-PCR και ομαλοποιήθηκε ως προς β-ακτίνη ως ενδογενή έλεγχο. Το επίπεδο έκφρασης mRNA σε PC-3 /F

luc

κυττάρων ορίζεται ως 100%? ο μέσος όρος των 2 έως 3 ανεξάρτητα πειράματα δείχνεται. *** P & lt? 0.001, μακέτα και Nog-KD 17 κλώνους

έναντι

PC-3 /F

Luc

και Nog-KD 14 κλώνους

Η

. προκειμένου να ελέγξει αν νογκίνης αποσιώπηση θα μπορούσε να επηρεάσει την έκφραση του mRNA των σχετικών παραγόντων osteotropic, την έκφραση της DKK-1, PTHrP, RANKL, CSF-1 και IL-8 ερευνήθηκε επίσης (Σχήμα 2Β). Η έκφραση του DKK-1 και PTHrP δεν τροποποιήθηκε σε όλες επιμολυσμένα κλώνους, σε σύγκριση με το PC-3 /F

luc

. Για λόγους συμβατότητας με προηγούμενες έρευνες σε γονικά κύτταρα PC-3 [17], η έκφραση RANKL ήταν μη ανιχνεύσιμη σε PC-3 /F

Luc

, μακέτα και Nog-KD κλώνους. CSF-1 ήταν μετρίως πάνω ρυθμισμένα σε όλες τις εικονικές και Nog-KD κλώνους, αν και η ανύψωση δεν έφθασε σημασία. IL-8 έκφραση ήταν σημαντικά υψηλότερη στα mock κλώνους και, ιδιαίτερα, σε Nog-KD 17.

Έχει δειχθεί σε οστεοβλάστες

in vitro

εν λόγω έκφραση της νογκίνης είναι ΒΜΡ-εξαρτώμενη, υποδεικνύοντας ότι ένας πιθανός μηχανισμός ανάδρασης είναι απαραίτητο να διατηρηθεί μια ισορροπία BMP /noggin, περιορίζοντας έτσι τη δράση BMP σε αυτά τα κύτταρα [23]. Μια παρόμοια ανατροφοδότηση έχει επίσης αναφερθεί σε κάποιες λαμβάνεται από καρκίνο του προστάτη κυτταρικές γραμμές [17], [24]. Η έκφραση του mRNA της ΒΜΡ-2, -3, -6 και -7 δεν ήταν τροποποιημένα σε δύο κλώνους Nog-KD σε σύγκριση με τη γονική PC-3, ενώ η ΒΜΡ-4 mRNA ήταν μη ανιχνεύσιμο σε δύο γονικών και Nog-KD κύτταρα (όχι απεικονίζεται). Ως εκ τούτου, η νογκίνη φίμωση στα κύτταρα PC-3 δεν μεταβάλλει ούτε το επίπεδο ή το φάσμα της έκφρασης τους ΒΜΡ.

Επίδραση στην οστική

in vivo

της νογκίνης-σιγήσει PC-3 /F

Luc

κύτταρα

ένα πρώτο πείραμα τερματίστηκε την ημέρα 25 μετά την ένεση για όλες τις ομάδες των ζώων, ενώ σε ένα πείραμα που ακολουθεί η περίοδος παρατήρησης για τους κλώνους Nog-KD παρατάθηκε σε 33 ημέρες. Και στα δύο πειράματα η ακτινογραφική ανάλυση ανιχνεύεται η έναρξη μιας ισοδύναμης οστεολυτική αντίδραση σε όλες τις ομάδες των οστών των καρκινικών κυττάρων που φέρουν το συντομότερο ημέρα 14 μετά των καρκινικών κυττάρων ξενομεταμόσχευση (δεν φαίνεται). Κατά την ημέρα 21 όλα ξενομοσχεύτηκε κνήμες ακόμη έδειξαν παρόμοιο αριθμό και την επέκταση των οστεολυτικές βλάβες, και μία μεγέθυνση του άξονα του οστού, σε σύγκριση με εικονικά χειρουργημένα κνημών. Ωστόσο, σε κνήμες ξενομοσχευμένο με Nog-KD κλώνους ο εναπομείναν οστό που παρεμβάλλεται μεταξύ των περιοχών της οστεόλυσης έδειξαν κάποια απόδειξη μιας πιο ραδιο-πυκνά πτυχή (Εικόνα S2). Στο πρώτο πείραμα, τόσο η ακτινογραφία και η ανοικοδόμηση μ-CT που εκτελούνται κατά την ολοκλήρωση του πειράματος (ημέρα 25) έδειξε την περαιτέρω ανάπτυξη του κυρίως οστεολυτικές εστίες σε PC-3 /F

luc-

και εικονικές clone- φέρουν κνήμες (Εικόνα 3Α και Β). Σε αντίθεση, στο ξενομοσχεύτηκε κνήμες με τους κλώνους Nog-KD μια εμφανής αύξηση ραδιοπυκνότητα του εναπομείναντος οστού και, επιπλέον, η ανάπτυξη των οστών spiculae προεξέχουν έξω ο φλοιός πάντοτε παρατηρήθηκε (Σχήμα 3Α και Β). Στο δεύτερο πείραμα η περίοδος παρατήρησης ήταν παρατεταμένη προκειμένου να καταστεί δυνατή εξέλιξη της απόκρισης των οστών. Τα ζώα εμβολιάστηκαν με το PC-3 /F

luc

κλώνος έπρεπε να θυσιαστούν την ημέρα 23 λόγω σοβαρής οστεόλυσης των ξενομοσχευθέντος οστά και πρήξιμο του άκρου, και σε σημεία του πόνου και της δυσφορίας. Σε αντίθεση, τα οστά ξενομοσχεύτηκε με τους κλώνους Nog-KD εμφάνισε περισσότερο διατηρημένα δομική ακεραιότητα και λιγότερο έντονη διόγκωση των άκρων, χωρίς σημάδια του πόνου και της δυσφορίας. Κατά συνέπεια, τα ζώα ξενο-μεταμόσχευσις Nog-KD 17 και Nog-KD 14 κλώνοι κρατήθηκαν για μια περίοδο 30 και 33 ημέρες, αντίστοιχα. Σύμφωνα με την εξέλιξη της απόκρισης των οστών που παρατηρήθηκε στο πρώτο πείραμα, κνήμες ξενομοσχεύτηκε με Nog-KD κλώνοι έδειξαν αυξημένη ραδιοπυκνότητα του εναπομείναντος οστού και έντονη οστών spiculae προεξέχει έξω από το φλοιό (Σχήμα S3A και Β).

Α . Αντιπροσωπευτικές εικόνες ακτινογραφίας και Β ανοικοδόμηση 3-D (μ-CT) του κνημών (επάνω) και του πάχους 1 mm εγκάρσιες τομές (κάτω) του ψευδο-λειτουργούν και καρκινικό κύτταρο-ξενομόσχευμα κνήμες κατά την ημέρα 25 μετά ενδοστικό εμβολιασμό.

η

Τροποποίηση των διαρθρωτικών παραμέτρων των οστών που προκαλείται

in vivo από

Noggin-σιγήσει PC-3 /F

Luc

κύτταρα

Ποσοτική μ-CT ανάλυση επιβεβαίωσε ότι η κνημών ξενομοσχεύτηκε με το PC-3 /F

Luc

και κοροϊδεύει τους κλώνους είχαν σημαντικά χαμηλότερη αναλογία /TV BV από τα ψευδο-λειτουργούν αυτά. Αντιθέτως, ο κνήμες εμβολιάζεται με τους κλώνους Nog-KD είχαν υψηλότερη αναλογία BV /TV από ότι με PC-3 /F

luc

και ψευδο κλώνους και δεν ήταν διαφορετικά από τα εικονικά χειρουργημένα αυτά (Σχήμα 4Α) .

Α. Η αναλογία του όγκου του οστού επί συνολικού όγκου (BV /TV, +/- SD) προσδιορίστηκε με μ-CT την ημέρα 25 μετά τον ενοφθαλμισμό των νεοπλασματικών κυττάρων?

n

= 6-7 ζώα για κάθε πειραματική ομάδα. ***

P

& lt? 0.001, μακέτα 5

έναντι

Nog-KD κλώνους και εικονική? **

P

& lt? 0,01, Nog-KD 14

έναντι

PC-3 /F

Luc

και εικονικές 4? *

P

& lt? 0,05, ψευδή και Nog-KD 17

έναντι

PC-3 /F

Luc

και εικονικές 4. Β Σύνολο οστική περιεκτικότητα (TBMC? mg /mm +/- SD) μετρήθηκε με pQCT την ημέρα 25 μετά τον ενοφθαλμισμό των νεοπλασματικών κυττάρων?

n

= 6-7 ζώα για κάθε πειραματική ομάδα. ***

P

& lt? 0.001, μακέτα 5

έναντι

Nog-KD 14? *

P

& lt? 0,05, ψευδή και Nog-KD 17

έναντι

κοροϊδεύει 5, και Nog-KD 14

έναντι

παρωδία 4.

Η

Συνολική περιεκτικότητα ανοργάνου οστού μετρήθηκε με pQCT ήταν χαμηλότερη στην ξενομοσχεύτηκε κνήμες με το PC-3 /F

luc

και ψευδο κλώνους, σε σύγκριση με τα εικονικά χειρουργημένα αυτά, αλλά δεν επιτεύχθηκε σημασία μόνο για mock 5 -xenografted οστά. Σε αντίθεση με συνολική περιεκτικότητα σε ανόργανα άλατα των οστών στην Nog-KD κλώνους-ξενομοσχεύτηκε κνήμες ήταν υψηλότερη από ό, τι στο PC-3 /F

Luc

και εικονικές κλώνους-ξενομοσχεύτηκε αυτά, αλλά έφτασε σημασία μόνο όταν συγκρίνεται με τις εικονικές κλώνους (Σχήμα 4Β).

Ιστομορφομετρία

στο ξενομοσχεύτηκε κνήμες με PC-3 /F

Luc

και εικονικές κλώνους υπήρξε μια σημαντική αύξηση στον αριθμό των οστεοκλαστών και το ποσοστό της επιφάνειας που καλύπτεται από οστεοκλαστών, σε σύγκριση με την εικονική λειτουργούν κνήμες (Σχήμα 5Α και C). Αυτό συνοδεύτηκε από μια σημαντική μείωση στον αριθμό των οστεοβλαστών και το ποσοστό της επιφάνειας που καλύπτεται από την ενεργό οστεοβλάστες (σχήμα 5Β και D).

Α. Αριθμός οστεοκλαστών (N.Oc /BS? /Mm, +/- SD) για την ενδοστική επιφάνεια σε δοκιδωτό και φλοιώδες οστό του ψευδο-λειτουργούν κνήμες ή επί εναπομείναν οστό γειτονικά κύτταρα καρκίνου του κνημών ξενομοσχευθέντος με PC-3 /F

Luc

, μακέτα και Nog-KD κλώνους.

n

= 6-7 ζώα για κάθε πειραματική ομάδα. ***

P

& lt? 0.001, PC-3 /F

Luc

και εικονικές κλώνους

έναντι

φενάκη, και εικονικές κλώνοι

έναντι

Nog- KD 17? **

P

& lt? 0,01, Nog-KD 17

έναντι

PC-3 /F

Luc,

και Nog-KD 14

έναντι

PC -3 /F

Luc

και εικονικές κλώνους. B. Αριθμός των οστεοβλαστών (N.Ob /BS? /Mm, +/- SD) για την ενδοστική επιφάνεια σε δοκιδωτό και φλοιώδες οστό του ψευδο-λειτουργούν κνήμες ή επί εναπομείναν οστό γειτονικά κύτταρα καρκίνου του κνημών ξενομοσχευθέντος με PC-3 /F

Luc

, μακέτα και Nog-KD κλώνους.

n

= 6-7 ζώα για κάθε πειραματική ομάδα. ***

P

& lt? 0.001, PC-3 /F

Luc

και εικονικές κλώνους

έναντι

Nog-KD κλώνους, και εικονικές 4

έναντι

εικονική? **

P

& lt? 0,01, ψευδή

έναντι

PC-3 /F

Luc

και εικονικές 5? *

P

& lt? 0,05, Nog-KD 14

έναντι

απάτη. Γ Ποσοστό ενδοστική επιφάνεια σε φλοιώδες και δοκιδωτό οστό που καταλαμβάνεται από οστεοκλάστες (Oc.S /BS?%, +/- SD) σε εικονικά χειρουργημένα και καρκινικό κύτταρο-ξενομόσχευμα κνημών.

n

= 6-7 ζώα για κάθε πειραματική ομάδα. ***

P

& lt? 0.001, μακέτα κλώνοι

έναντι

επίφαση και οι κλώνοι Nog-KD, και PC-3 /F

Luc έναντι

επίφαση και Nog-KD 17 ? **

P

& lt? 0,01, Nog-KD 14

έναντι

PC-3 /F

Luc

. Δ Ποσοστό ενδοστική επιφάνεια σε φλοιώδες και δοκιδωτό οστό που καταλαμβάνεται από οστεοβλάστες (Ob.S /BS?%, +/- SD) σε εικονικά χειρουργημένα και καρκινικό κύτταρο-ξενομόσχευμα κνημών.

n

= 6-7 ζώα για κάθε πειραματική ομάδα. ***

P

& lt?. 0.001, PC-3 /F

Luc

και εικονικές κλώνους

έναντι

επίφαση και Nog-KD κλώνους

Η

κνήμες ξενομοσχεύτηκε με τους κλώνους Nog-KD έδειξαν σημαντικά χαμηλότερο αριθμό των οστεοκλαστών και ποσοστό της επιφάνειας που καλύπτεται από οστεοκλάστες από εκείνους ξενομοσχεύτηκε με PC-3 /F

luc

και ψευδο κλώνους (Σχήμα 5Α και C). Αντιθέτως, έδειξαν σημαντικά υψηλότερο αριθμό των ενεργών οστεοβλαστών και το ποσοστό της επιφάνειας που καλύπτεται από οστεοβλάστες από εκείνα που εμβολιάστηκαν με το PC-3 /F

Luc

και εικονικές κλώνους. Σε Nog-KD-κλώνους ξενομόσχευμα κνημών ο αριθμός των οστεοβλαστών ήταν υψηλότερη από ό, τι στην εικονικά χειρουργημένα κνήμες, αλλά αυτή η αύξηση ήταν σημαντική μόνο για Nog-KD 14 (Σχήμα 5Β και D). Παρά το γεγονός ότι η έκφραση του mRNA της IL-8, που είναι γνωστή για την τόνωση συγκέντρωση των οστεοκλαστών, ήταν σημαντικά επάνω ρυθμισμένη

in vitro

στην Nog-KD 17 κλώνος, σε σύγκριση με το Nog-KD 14 κλώνος, εκεί δεν ήταν εμφανής διαφορά στον αριθμό των οστεοκλαστών μεταξύ των οστών ξενομοσχεύτηκε με τους δύο κλώνους Nog-KD. Αυτό υποδηλώνει ότι η διαφορά στην έκφραση του mRNA της IL-8 ήταν λειτουργικά άσχετο.

Χαρακτηριστικά

Ανάπτυξη

in vivo

της νογκίνης-σιγήσει PC-3 /F

Luc

κύτταρα

όγκου take ήταν 100% για όλες τις ξενομοσχεύτηκε κλώνους. Εβδομαδιαία παρακολούθηση και ποσοτικοποίηση της ανάπτυξης ενδοστικού όγκου από BLI αποκάλυψε ότι, και στα δύο πειράματα, η καταστολή νογκίνη σε καρκινικά κύτταρα είχαν μέτρια επίδραση επί του πολλαπλασιασμού τους

in vivo

. Αρχικά, οι κλώνοι Nog-KD αυξήθηκαν ομοίως σε PC-3 /F

Luc

και εικονικές κλώνους. Ωστόσο, η ανάπτυξή τους σταδιακά επιβραδύνεται και δεν θα μπορούσε να φθάσει το ίδιο φορτίο όγκου, όπως για PC-3 /F

Luc

και εικονικές κλώνους (Σχήμα 6). Στο δεύτερο πείραμα, όπου η ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε για μεγαλύτερες χρονικές περιόδους, μια διακοπή της ανάπτυξης ήταν καν παρατηρήθηκε (Σχήμα S3C).

βιο-φωσφορισμού σήματος (φωτόνια +/- SD) που εκπέμπεται από το καρκινικό κύτταρο-ξενομόσχευμα κνήμες ποσοτικοποιήθηκε κατά την ημέρα 7, 14, 21 και 25 μετά ενδοστικό ενοφθαλμισμό των καρκινικών κυττάρων?

n

= 6-7 ζώα για κάθε πειραματική ομάδα. ***

P

& lt? 0.001, Nog-KD κλώνους

έναντι

PC-3 /F

Luc

την ημέρα 25? *

P

& lt? 0,05, Nog-KD 14

έναντι

PC-3 /F

Luc

την ημέρα 21.

Η

μεταστατικό δυναμικό της νογκίνης-σιγήσει PC-3 /F

Luc

κύτταρα

για να διερευνηθεί αν νογκίνης αποσιώπηση επηρεάζει την μεταστατική ικανότητα των PC-3 κύτταρα, συστημικές μεταστάσεις προκλήθηκαν με ένεση στον αριστερό καρδιακό κοιλία.

η κινητική της ανάπτυξης και ο αριθμός των μεταστάσεων στα οστά ανά ποντικό 28 ημερών μετά την ενδο-καρδιακή έγχυση του Nog-KD 17 κύτταρα δεν διέφερε από εκείνο που προκαλείται από PC-3 /F

luc

και πλαστή κλώνοι (δεν φαίνεται). Μετά την ενδο-καρδιακή έγχυση του PC-3 /F

Luc

κύτταρα μεταστάσεις συστηματική οστική αναπτύξει ασύγχρονα σε μεταβλητές περιοχές των οστών, καθιστώντας δύσκολη την άμεση σύγκριση των ακτινογραφικών πτυχή και την ανάπτυξη της εξέλιξης των μεταστατικών αλλοιώσεων στον ίδιο τόπο των οστών μεταξύ διαφορετικά ζώα. Επιπλέον, PC-3 /F

luc

κύτταρα, όπως και η γονική PC-3, σχεδόν αμετάβλητα μεταστάσεις στο σαγόνι, αλλοιώνοντας έτσι τη διατροφική κατάσταση των ζώων και, κατά συνέπεια, περιορίζοντας τη διάρκεια της πειραματικής παρατήρησης. Αυτά τα μειονεκτήματα μας εμπόδισε να επαληθεύσει εάν σε αυτό το μοντέλο της ανταπόκρισης των οστών και την ανάπτυξη του όγκου που προκαλείται από τον κλώνο πρόοδο Nog-KD εξίσου με εκείνα που παρατηρήθηκαν στο ενδοοτικού μοντέλο.

Συζήτηση

Εδώ δείχνουμε για πρώτη φορά ότι στο μοντέλο PC-3 ξενομοσχεύματος του οστεολυτικές μετάσταση στα οστά η αύξηση του αριθμού οστεοκλαστών σχετίζεται με δυσλειτουργία σε αριθμό οστεοβλαστών και δραστηριότητα. Αυτό δείχνει ότι η οστεολυτική βλάβη δεν είναι μόνο το αποτέλεσμα της αυξημένης επαναρρόφησης των οστών, αλλά επίσης και από μια πρόσθετη αναστολή του σχηματισμού των οστών. Έχουμε αποδείξει επίσης ότι shRNA μεσολάβηση καταστολή της συστατική έκφραση του ανταγωνιστή νογκίνης ΒΜΡ σε PC-3 κύτταρα, χωρίς να παρεμβαίνει με τον ξενιστή μικροπεριβάλλον προερχόμενο νογκίνης, αποκαθιστά τον αριθμό των οστεοβλαστών και του σχηματισμού οστού σε βλάβες των οστών που προκαλείται από αυτά τα κύτταρα. Κατά συνέπεια, η απόκριση του οστού μετατρέπεται από καθαρά οστεολυτικές σε ένα μεικτό οστεοβλαστικά /οστεολυτικές ένα. Συλλογικά, αυτά τα αποτελέσματα παρέχουν νέες ενδείξεις που υποδηλώνουν έντονα ότι η νογκίνη έκκριση από κύτταρα CaP μεσολαβεί στην αναστολή της πρόσληψης οστεοβλαστών /δραστικότητα. Η προκύπτουσα αναστολή του σχηματισμού οστού προλαμβάνει την επισκευή της βλάβης οστεολυτικές που παράγεται από διεγερμένα από κυτοκίνη, οστεοκλαστών επαναρρόφησης οστού. Σταθερά με αυτήν την έννοια, η νογκίνη μπορεί να αντιπροσωπεύει ένα πιθανό θεραπευτικό στόχο σε οστεολυτική μετάσταση στα οστά της ΚΓΠ.

Οι μοριακοί μηχανισμοί που διέπουν την οστεοβλαστική και οστεολυτική αντίδραση σε οστικές μεταστάσεις από συμπαγείς καρκίνους είναι αντικείμενο εντατικής έρευνας. Στην οστεολυτικές απάντηση, η προσοχή έχει επικεντρωθεί κυρίως στην εξωκυτταρική παράγοντες και οδούς σηματοδότησης που μεσολαβούν τη στιχομυθία μεταξύ καρκινικών κυττάρων και μικροπεριβάλλοντος των οστών που οδηγεί στο φαύλο κύκλο του πολλαπλασιασμού των όγκων και την επαναρρόφηση οστού [25]. Αυτή η υπόθεση θέτει ως αίτημα ότι οι παράγοντες όπως PTHrP [26], RANKL [27] και IL-8 [28] που εκκρίνεται από τα καρκινικά κύτταρα και διεγείρουν την πρόσληψη και τη δραστηριότητα των οστεοκλαστών. Η επακόλουθη αύξηση της οστικής επαναρρόφησης απελευθερώνει μήτρα-embedded αυξητικούς παράγοντες, όπως η ινσουλίνη αυξητικός παράγοντας (IGF) και ο παράγοντας μετασχηματισμού ανάπτυξης βήτα (TGF-β), η οποία, με τη σειρά του, την περαιτέρω προώθηση της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων.

Η επιρροή των καρκινικών κυττάρων κατά την πρόσληψη και τη δραστηριότητα των οστεοβλαστών έχει μελετηθεί σχεδόν αποκλειστικά σε mm. Παραδειγματικό μόρια επάγουν άμεσα οστεοβλαστών πρόσληψης και, κατά συνέπεια, το σχηματισμό οστού, είναι μέλη των οικογενειών πρωτεϊνών ΒΜΡ και Wnt. Εξωκυττάρια ανταγωνιστές είναι ζωτικής σημασίας για τη διαμόρφωση των δραστηριοτήτων τους [29]. Σε μια δημιουργική μελέτη έχει αποδειχθεί ότι σε ΜΜ έκκριση του Wnt ανταγωνιστή DKK-1 από τα νεοπλασματικά κύτταρα αναστέλλει την πρόσληψη και τη δραστηριότητα των οστεοβλαστών. Κατά συνέπεια, η οστεολυτική βλάβη σε ΜΜ δεν είναι μόνο το αποτέλεσμα της αυξημένης επαναρρόφησης των οστών, αλλά και του σχηματισμού των οστών καταπιεσμένη [30]. Επιπλέον, προς τα κάτω ρύθμιση των DKK-1 έκφραση φαίνεται να μεσολαβούν την οστεοεπαγωγική δραστικότητα της ενδοθηλίνης-1 (ΕΤ-1) [31]. Ένα άλλο εξωκυτταρικό ανταγωνιστής του μονοπατιού Wnt, sFRP-2, μπορεί επίσης να συμβάλει σε αυτόν τον μηχανισμό αναστολής του σχηματισμού των οστών [32].

Η διαμόρφωση του οστεοβλαστών προσλήψεων /δραστηριότητα και την πιθανή συμβολή της αναστολής του σχηματισμού των οστών σε οστεολυτικές οστικές μεταστάσεις από συμπαγείς καρκίνους έχουν λάβει λίγη προσοχή. Ένας περιορισμένος αριθμός ποσοτικών ιστομορφομετρικές μελέτες σε οστεολυτικές μεταστάσεις από μια ποικιλία επιθηλιακών καρκίνων έχουν δείξει ότι, εκτός από την αύξηση της οστικής επαναρρόφησης, υπάρχει επίσης ανεπάρκεια στο σχηματισμό των οστών, ιδίως στις προχωρημένες βλάβες [33], [34], [35] . Έχει προταθεί ότι σε αυτές τις βλάβες επαναρρόφηση οστού αποσυνδέεται από τη μεταγενέστερη φάση σχηματισμού των οστών, η οποία ακολουθεί συνήθως σε κανονική ανάπλαση οστού [36]. Το φαινόμενο αυτό μπορεί να προκαλείται από μια άμεση, αρνητική επίδραση των καρκινικών κυττάρων κατά την πρόσληψη των οστεοβλαστών, την επιβίωση και δραστικότητα, όπως δείχνεται

in vitro

για οστεολυτικές CaM και κυτταρικές σειρές CaP [37], [38], [39] . Η παρούσα έρευνα, που δείχνει ότι οι δείκτες οστικού σχηματισμού απομειωθεί σε κνήμες ξενομοσχεύτηκε με κύτταρα PC-3, υποστηρίζει περαιτέρω τα κλινικά ευρήματα παραπάνω και έντονα υποδηλώνει ότι ένας μηχανισμός σχηματισμού αποσύνδεση των οστών από επαναρρόφηση επίσης λειτουργεί σε αυτό το μοντέλο. Ωστόσο, η ταυτότητα των μορίων που μεσολαβούν αυτό ανασταλτικό αποτέλεσμα επί των οστεοβλαστών είναι ακόμη άγνωστη.

ανταγωνισμό της δράσης της ΒΜΡ από νογκίνη είναι κρίσιμης σημασίας για τα εμβρυϊκά χονδρο-οστεογένεσης και κοινές σχηματισμός [40]. Οστεοβλαστών στόχευση υπερ-έκφραση των αποτελεσμάτων νογκίνης σε οστεοπενία ως αποτέλεσμα μειωμένη πρόσληψη των οστεοβλαστών [41], [42], υποδεικνύοντας ότι η εξωκυτταρική ρύθμιση της συγκέντρωσης BMP είναι επίσης απαραίτητη στην ενήλικη ζωή για τον έλεγχο του σχηματισμού των οστών κατά τη διάρκεια της οστικής ανακατασκευής . ΒΜΡ και noggin προκαλέσουν αμοιβαία την έκφρασή τους σε οστεοβλάστες [23], που δείχνει ότι μια θετική ανατροφοδότηση είναι απαραίτητη για τη διατήρηση της βέλτιστης ισορροπίας μεταξύ BMP και συγκεντρώσεις noggin στο μικροπεριβάλλον των οστών. Οστών μεταστατικά καρκινικά κύτταρα μπορεί να αλληλεπιδράσει με αυτή την ισορροπία με την έκκριση περίσσεια είτε ΒΜΡ ή νογκίνης. Έχει αναφερθεί ότι η ΒΜΡ-6 έκφραση συσχετίζεται θετικά με CaP εξέλιξη [43], [44] και ότι η ΒΜΡ-6 είναι η ΒΜΡ κυρίως υπεύθυνη για την επαγωγή μιας απόκρισης των οστεοβλαστών σε μοντέλα ποντικών με CaP μετάσταση στα οστά [17], [45] . Ωστόσο, σε μία από αυτές τις εκθέσεις που έδειξαν ότι, επιπλέον, οστεοεπαγωγική καρκινικά κύτταρα στερούνται έκκριση του αναστολέα νογκίνης ΒΜΡ και ότι η νογκίνη αναγκαστική έκφραση σε αυτά τα κύτταρα καταργεί οστεοεπαγωγική δραστικότητα τους

in vivo

. Ως εκ τούτου, ένας ομόφωνα επίδραση μιας περίσσειας της ΒΜΡ-6 απελευθερώνεται τοπικά από τα καρκινικά κύτταρα είναι επίσης ένας καθοριστικός παράγοντας της απόκρισης των οστεοβλαστών τόσο στο καπάκι και το CaM οστών μετάσταση [17]. Ομοίως, χαμηλή έκφραση της Wnt ανταγωνιστή DKK-1 φαίνεται να ευνοεί την Wnt-προκαλούμενη απόκριση οστεοβλαστών στην Cap οστών μετάσταση [46]. Αυτές οι δύο μελέτες απέδειξαν για πρώτη φορά ότι σε οστεοβλαστική οστικές μεταστάσεις τη φυσιολογική, λεπτή ισορροπία μεταξύ οστεοεπαγωγική ΒΜΡ-6 και /ή Wnt πρωτεΐνες και οι ανταγωνιστές τους έχει κλίση προς τον πρώτο και, ως εκ τούτου, ευνοεί μια ανώμαλη απόκριση οστεοβλαστών. Σε αντίθεση, οστεολυτικές κυτταρικές σειρές CaM εκφράζουν ΒΜΡ-2 και -4, ενώ η κυτταρική σειρά οστεολυτικές CaP PC-3 εκφράζει ΒΜΡ-3 [17], [47]. Ωστόσο, και οι δύο κυτταρικές σειρές ΚΓΠ και CaM οστεολυτικές εκφράζουν χαμηλά ή καθόλου ΒΜΡ-6 [17], [45] και ΒΜΡ-7 [48], [49] και, το σημαντικότερο, εκκρίνουν ιδιοσυστατικά σχετική υψηλές ποσότητες νογκίνης [17]. Έτσι, σε οστεολυτικές οστικές μεταστάσεις η ισορροπία μεταξύ BMPs και νογκίνη φαίνεται να μεταβάλλεται σε μία κατεύθυνση αντίθετη προς εκείνη της οστεοβλαστικής οστικές μεταστάσεις. Η παρούσα μελέτη αποδεικνύει ότι η νογκίνη-γέρνει ισορροπία είναι υπεύθυνος για την καταστολή του σχηματισμού των οστών και, ως εκ τούτου, εμποδίζει την επισκευή της βλάβης οστεολυτική. Επιπλέον, η απόδειξη ότι η συγκεκριμένη στόχευση των καρκινικών κυττάρων που προέρχονται από νογκίνη διατηρεί το σχηματισμό των οστών /επισκευής υποδηλώνει έντονα νογκίνη ως «μείζον παράγοντας un-σύζευξη» σε οστεολυτική μετάσταση στα οστά και επιπλέον υπογραμμίζει τη σημασία της ΒΜΡ ανταγωνισμού στην παθολογική ανάπλαση οστού.

Εδώ μπορούμε να δείξουμε σαφώς ότι η νογκίνη φίμωση σε οστεολυτικές κύτταρα PC-3, αν και δεν τη διόρθωση της αρχιτεκτονικής των οστών, αποκαθιστά την οστική μάζα των ξενομοσχεύτηκε κνήμες, όπως εκτιμήθηκε από την ακτινογραφία, μ-CT και pQCT. Αυτή η επίδραση στην οστική μάζα είναι το αποτέλεσμα της κανονικοποίησης ή ακόμη και βελτίωση του σχηματισμού των οστών, όπως υποδεικνύεται από ιστομορφομετρικές παραμέτρους του αριθμού των οστεοβλαστών και δραστηριότητα. Noggin φίμωση στα κύτταρα PC-3 δεν μεταβάλλει ούτε το επίπεδο ή το φάσμα της έκφρασής τους ΒΜΡ. Ως αποτέλεσμα, η φυσιολογική ισορροπία BMP /νογκίνης σε οστό μπορεί να κλίνει υπέρ της πρώτης από μια περίσσεια του καρκίνου που προέρχεται από κύτταρα BMPs, η οποία μπορεί να εξηγήσει την τάση προς αύξηση του σχηματισμού οστών που παρατηρείται σε οστό ξενομοσχευμένο με Nog-KD PC-3 κύτταρα.

Η επισκευή των οστών είναι εμφανής σε προχωρημένες βλάβες των οστών, γεγονός που υποδηλώνει ότι ένα χρονικό διάστημα είναι αναγκαίο για να αποκατασταθεί το σχηματισμό των οστών, με συνέπεια τη χρονική οργάνωση της φυσιολογικής οστικής αναδιαμόρφωσης (σύζευξη των οστών). Ένας παρόμοιος μηχανισμός αποκατάστασης ζεύξης των οστών έχει προταθεί για να εξηγήσει την επιδιορθωτικό σχηματισμό οστού στην μετάσταση οστού από συμπαγείς καρκίνους, ως αποτέλεσμα της θεραπείας κατά του καρκίνου [33], [36], [50].

Η θετική επίδραση της νογκίνης φίμωση για σχηματισμό οστού στηρίζει την αρχική μας υπόθεση και προτείνει νογκίνη ως ένα από τα προέρχεται από κύτταρα αναστολείς ουσιώδη καρκίνος του οστεοβλαστών πρόσληψης /δραστηριότητα που συμβάλλουν στις οστεολυτικές βλάβες στο Cap οστικές μεταστάσεις. Έχουμε επιλέξει ένα μοντέλο της ΚΓΠ του οστεολυτική μετάσταση στα οστά να είναι συνεπής με την προηγούμενη μελέτη μας αποδεικνύει ότι, αντιθέτως, η έλλειψη νογκίνη έχει ένα σημαντικό ρόλο στην οστεοβλαστική απόκριση σε Cap οστικές μεταστάσεις [17]. Ωστόσο, ένα κυρίως οστεολυτικές φαινότυπος παρατηρείται μόνο σε ένα μικρό ποσοστό του καπακιού οστικών μεταστάσεων, ενώ αντιπροσωπεύει την πλειοψηφία των μεταστάσεων CaM [5], [6].