Αφηρημένο

Ιστορικό

Καρκίνος του Associated ινοβλάστες (CAFS) πιστεύεται ότι ρυθμίζουν όγκου ανάπτυξη και μετάσταση. Ινοβλαστών πρωτεΐνης ενεργοποίησης 1 (FAP-1) είναι ένας δείκτης για την ενεργοποίηση των ινοβλαστών και από πολλούς αναγνωρίζεται ως η κύρια δείκτης της CAFS. Η Alpha ακτίνη των λείων μυών (α-SMA) είναι ένας γενικός δείκτης μυοϊνοβλάστη, και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον εντοπισμό CAFS. Αυτή η μελέτη ερευνά την προγνωστική επίπτωση των FAP-1 και α-SMA σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) ασθενείς και συσχετίζεται έκφρασή τους σε 105 πρωτεΐνες ερευνηθεί στην ίδια ομάδα.

Μέθοδοι

δείγματα όγκων από 536 ασθενείς με NSCLC και ιστών μικρο-συστοιχίες κατασκευάστηκαν. Η ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει την έκφραση του FAP-1 και α-SMA και να διερευνήσει τις επιπτώσεις τους στην επιβίωση και σύνδεσης με άλλα όγκου μοριακών δεικτών σε ασθενείς με NSCLC.

Αποτελέσματα

Υψηλή έκφραση FAP- 1, αλλά όχι α-SMA, το καρκίνωμα των πλακωδών κυττάρων (SCC, P = 0,043, HR = 0,63 95% CI 0,40 – 0,99) ήταν σημαντικά σχετίζεται με αυξημένη επιβίωση συγκεκριμένες νόσους. FAP-1 και α-SMA δεν συσχετίστηκαν σημαντικά μεταξύ τους. Αναλύσεις FAP-1 και α-SMA που σχετίζονται με άλλες πρωτεΐνες που σχετίζονται με όγκους αποκάλυψαν histotype-ειδικά πρότυπα συσχετισμού.

Συμπέρασμα

Η παρουσία του FAP-1 που εκφράζει CAFS είναι ένας δείκτης της θετικής έκβασης για τους ασθενείς με NSCLC-SCC. Επιπλέον, η συσχέτιση αναλύσεις δείχνουν FAP-1 και α-SMA να ονομάσει διαφορετικά υποσύνολα των ινοβλαστών και των ενώσεών τους με άλλες πρωτεΐνες του όγκου που σχετίζονται με αποκλίνουν ανάλογα με την ιστολογική υπότυπο

Παράθεση:. Kilvaer TK, Khanehkenari MR, Hellevik Τ , al-Saad S, Paulsen EE, Bremnes RM, et al. (2015) Καρκίνος Associated ινοβλάστες στο Στάδιο I-IIIA NSCLC: Προγνωστικοί επιπτώσεων και οι συσχετίσεις τους με Tumor Markers Μοριακή. PLoS ONE 10 (8): e0134965. doi: 10.1371 /journal.pone.0134965

Επιμέλεια: Donald Gullberg, Πανεπιστήμιο του Μπέργκεν, Νορβηγία

Ελήφθη: 27η Απριλίου του 2015? Αποδεκτές: 15 Ιουλ, 2015? Δημοσιεύθηκε: 7, Αυγούστου, 2015

Copyright: © 2015 Kilvaer et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Το πλήρες δεδομένα -Ρύθμιση δεν θα δημοσιευθεί όπως πολλοί ασθενείς είναι ακόμα ζωντανοί και της Βόρειας Νορβηγίας είναι αρκετά μικρό για μεμονωμένους ασθενείς πρέπει να προσδιορίζονται μέσω δεδομένων παραμέτρων τους και σπάζοντας έτσι το απόρρητο του ασθενούς. Κάποια σχετικά στοιχεία είναι διαθέσιμα στο χαρτί και Υποστήριξη αρχείων Πληροφορίες

Χρηματοδότηση:. Αυτοί οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα (NSCLC) είναι μία από τις κύριες αιτίες του καρκίνου που σχετίζονται θανάτου παγκοσμίως, με τόσο υψηλή συχνότητα και τα ποσοστά θνησιμότητας [1]. Τρέχουσες στρατηγικές θεραπείας αποτελούνται από ευρεία εκτομή του όγκου με συμπλήρωμα του ράδιο- και /ή χημειοθεραπεία για υποομάδες ασθενών με κακή πρόγνωση [2]. NSCLC είναι μια ετερογενής νόσος, συμπεριλαμβανομένων πλακώδες καρκίνωμα (SCC) και το αδενοκαρκίνωμα (ADC) αποτελούν τους κυρίαρχους ιστολογικές υποομάδες, οι οποίες χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία σοφό να θεωρείται ως ενιαία οντότητα. Ωστόσο, οι αναδυόμενες αποδείξεις από μοριακό δείκτη αναλύσεις δείχνουν την μοριακή φόντο του NSCLC υποτύπων να διαφέρουν [3]. Εκτεταμένες αναλύσεις των γενετικών αλλοιώσεων έχουν αποκαλύψει διακριτούς υποτύπους NSCLC που μπορούν να στοχεύσουν με τις σύγχρονες θεραπευτικές προσεγγίσεις. Ωστόσο, αυτές οι νέες και συναρπαστικές στρατηγικές έχουν ακόμη εφαρμοστεί σε επικουρική θεραπεία για να βελτιωθεί η συνολική επιβίωση των ασθενών με NSCLC [3].

Κατά τη διάρκεια των δύο τελευταίων δεκαετιών, μια αύξηση της ευαισθητοποίησης του καρκίνου ως ένα σύνθετο και ετερογενή ασθένεια έχει αυξηθεί. Το γεγονός αυτό έχει μετατοπιστεί το επίκεντρο της έρευνας για τον καρκίνο από μια απλουστευτική άποψη περιλαμβάνοντας μόνο τα κακοήθη κύτταρα να περιλαμβάνουν επίσης τον υποστηρικτικό ιστό στρωματικά που περιβάλλει τον όγκο. Για παχέος εντέρου, του μαστού και του καρκίνου του πνεύμονα η προγνωστική επίδραση των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος που διηθούν το στρώμα εντός του όγκου πιστεύεται να συμπληρώσει και να ξεπεράσουν ακόμη και τις καθιερωμένες αλγορίθμων ΤΝΜ σταδιοποίηση [4-6]. Μια άλλη θεμελιώδης παίκτης στο διαμέρισμα στρωματικά είναι οι καρκίνου συνδέονται ινοβλάστες (CAFS). Οι ινοβλάστες περιλαμβάνουν ένα πολύ ετερογενές και πολυ-λειτουργικό κυτταρικό πληθυσμό, η οποία παίζει σημαντικό ρυθμιστικό ρόλο στην επούλωση των πληγών, την εμβρυϊκή ανάπτυξη και την έναρξη του καρκίνου και διάδοσης [7]. Στον καρκίνο, πολυάριθμες μελέτες έχουν τεκμηριώσει τη σημασία των αμοιβαίων αλληλεπιδράσεων μεταξύ των κακοήθων κυττάρων και CAFS [7]. Επιπλέον, CAFS ρυθμίζουν σημαντικά στοιχεία στο σχετικό όγκο στρώματος συμπεριλαμβανομένης της ECM, την αγγειογένεση, την πρόσληψη και την ενεργοποίηση των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος και την πρόσληψη των περιφερικών αρχέγονων κυττάρων [7,8]. Η γενική ονομασία «CAF» περιλαμβάνει ένα διαφορετικό σύνολο των κυττάρων που μπορεί να έχουν διαφορετικές προελεύσεις και λειτουργίες. Έτσι, ο όρος «CAFS» μπορεί να αναφέρεται σε ινοβλάστες όγκου κάτοικος, ενεργοποιημένα ινοβλαστών, περινεοπλαστικό ινοβλάστες, μυοϊνοβλάστες, περικύτταρα και άλλα μεσεγχυματικά κύτταρα που προέρχονται από κυκλοφορούντα προγόνους ή μετά επιθηλιακών ή ενδοθηλιακών trans-διαφοροποίηση. Παραδοσιακά, οι CAFS εντοπίστηκαν από ευρεία έκφραση τους άλφα-λείου μυός ακτίνη (α-SMA), ωστόσο, λόγω της αξιοσημείωτη κυτταρική ετερογένεια? α-SMA έκφραση από μόνη της δεν θα εντοπίσει όλα τα CAFS [7,8]. Ως εκ τούτου, άλλοι δείκτες CAF σε χρήση βιμεντίνη, ινωδονεκτίνη, ινοβλαστών-ειδική πρωτεΐνη 1 (FSP-1), πρωτεΐνη ενεργοποίησης 1 ινοβλαστών (FAP-1) και ΡϋΟΡΡ-α /β [8,9]. FAP-1 είναι μια μεμβράνη αγκυρώνεται πρωτεάση σερίνης, η οποία εκφράζεται επιλεκτικά από στρωματικά και μεσεγχυματικά κύτταρα κατά τη διάρκεια της επούλωσης τραύματος, ινωτικές αντιδράσεις, φλεγμονώδεις καταστάσεις και την ανάπτυξη του όγκου [8]. Λόγω της παροδικής έκφρασης αυτού του δείκτη κατά τη διάρκεια της ενεργοποίησης, FAP-1 έχει χρησιμοποιηθεί σε πολλές μελέτες για τον εντοπισμό ενεργοποιημένων ινοβλαστών όγκου [8].

Αρκετές μελέτες έχουν συσχετίσει την παρουσία διαφορετικών λειτουργικών υποσύνολα CAFS στην πρωτοβάθμια NSCLC με δυσμενείς πρόγνωση, συμπεριλαμβανομένων των CAF

α-SMA και CAF

TGF-β σε μια ομάδα μεικτών NSCLC [10] και CAF

Podoplanin στον πνεύμονα ADC [11-13] και SCC [14]. Επιπλέον, η παρουσία του ΚΠΑ

Podoplanin σε μεταστάσεις στους λεμφαδένες του σταδίου 2 ασθενείς κομβικό πνεύμονα SCC έχει συσχετισθεί με υψηλότερο ποσοστό υποτροπής του μεσοθωρακίου [15,16]. Μόνο μία μικρή μελέτη (n = 59) ερεύνησε την παρουσία του ΚΠΑ

FAP σε NSCLC και βρήκε μια σύνδεση με χειρότερη πρόγνωση [17].

Έχουμε προηγουμένως αξιολογηθεί 105 μοριακών όγκων που σχετίζονται με το ομάδα των μη επιλεγμένων ασθενών εκτομή σταδίου I-IIIA NSCLC. Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν η διερεύνηση της προγνωστικής επιπτώσεις του ΚΠΑ

FAP και CAF

α-SMA σε NSCLC, και να συσχετίσει την παρουσία τους με την έκφραση των άλλων μοριακών δεικτών όγκου.

Υλικό και μέθοδοι

1. Οι ασθενείς και οι Κλινικές δείγματα

Πρωτοβάθμια καρκινικού ιστού από 536 ασθενείς με διάγνωση και χειρουργική εκτομή για στάδιο I-IIIA NSCLC στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Βόρειας Νορβηγίας και της Nordland Κεντρικό Νοσοκομείο από το 1990 έως το 2010 συμπεριλήφθηκαν στην παρούσα μελέτη. Αυτό αντιπροσωπεύει μια επέκταση και επικαιροποίηση ενός προϋπάρχουσα ομάδα συμπεριλαμβανομένων των ασθενών με τα ίδια κριτήρια από το 1990 έως το 2004 [18]. Τα περιλαμβάνονται ασθενείς οργάνωσε σύμφωνα με την 7η έκδοση της ταξινόμησης UICC ΤΝΜ και ταξινομούνται σύμφωνα με τη νέα παθολογική κατάταξη του καρκίνου του πνεύμονα [19]. Συνολικά 633 ασθενείς είχαν εγγραφεί από τις βάσεις δεδομένων του νοσοκομείου. Από αυτές 97 εξαιρέθηκαν από τη μελέτη λόγω: ακτινοθεραπεία ή χημειοθεραπεία πριν από τη χειρουργική επέμβαση (n = 15), άλλα κακοήθεια εντός πέντε χρόνια πριν από NSCLC διάγνωση (n = 39), ανεπαρκής μπλοκ σταθερού ιστού εγκλεισμένα σε παραφίνη (n = 25) και αδενοκαρκίνωμα

in situ

(AIS), πριν από το 2011 που ταξινομούνται ως καρκίνωμα βρογχοκυψελιδικό

in situ

(BAC) & lt? 3 εκατοστά σε αναθεώρηση (n = 18). Έτσι, 536 με πλήρη ιατρικά αρχεία και είναι διαθέσιμη (FFPE) τμήματα ιστού σε παραφίνη ενσωματωμένο φορμόλη-σταθερής ήταν επιλέξιμες.

Αυτή η έκθεση περιλαμβάνει δεδομένα παρακολούθησης από την 1η Οκτωβρίου

ου 2013. Η μέση παρακολούθηση των επιζώντων ήταν 73 μήνες (εύρος 0-267).

2. Μικρο-συστοιχία Κατασκευή

Όλα τα δείγματα ασθενών εξετάστηκαν ανεξάρτητα από δύο παθολόγους. Οι πιο αντιπροσωπευτικές περιοχές, που περιέχει τόσο του όγκου και εντός του όγκου στρώμα, σημαδεύτηκαν στις αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η /Ε) διαφάνειες και δειγματοληψία για τον ιστό μικρο-array (ΤΜΑ) μπλοκ. Η TMAs συναρμολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα όργανο ιστό-παράταξη (Beecher Instruments, Silver Springs, MD, USA). Η λεπτομερής μεθοδολογία έχει αναφερθεί προηγουμένως [20]. Εν συντομία, χρησιμοποιήσαμε ένα 0,6 χιλιοστά στιλέτου να δοκιμάσετε τέσσερα πανομοιότυπα πυρήνες από κάθε ένα από τα δείγματα της μελέτης.

Για να συμπεριλάβετε όλα τα δείγματα πυρήνα, 12 μπλοκ TMA κατασκευάστηκαν. Πολλαπλές 4-μm τομές κόπηκαν με μικροτόμο Micron (HM355S) και βάφτηκαν με ειδικά αντισώματα για ανοσοϊστοχημεία ανάλυση (IHC).

3. Ανοσοϊστοχημεία

ανοσοϊστοχημεία (IHC) δοκιμασίες για FAP-1were πραγματοποιηθεί στο Ventana Discovery-Ultra αυτοματοποιημένη ανοσοκηλιδωτή (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ). Αποπαραφίνωση και εποχούμενης ανάκτηση αντιγόνου εκτελέστηκαν για 24 λεπτά σε περίπου 100 ° C με αντιδραστήριο CC1, το οποίο είναι ένα EDTA που βασίζεται ιδιόκτητο διάλυμα Ventana (ρΗ 8.0-8.5). FAP-1anti-κουνελιού πολυκλωνικό αντίσωμα (Ab53066, Abcam, αραίωση 1/50) εφαρμόστηκε και επωάστηκε για 32 λεπτά. Διαφάνειες αναπτύχθηκαν χρησιμοποιώντας Ultramap HRP αντι-κουνελιού (Cat # 760-4315, Ventana) και ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ChromoMap DAB (Cat # 760 έως 159, Ventana).

IHC αναλύσεις για την α-SMA βάφτηκαν για Ventana Benchmark-ultra (Ventana Medical Systems Inc.). Επιτόπου ανάκτηση επιτεύχθηκε με διάλυμα CC1 για 8 λεπτά. Το μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού α-SMA (cat # 760 έως 2833, Ventana, κλώνος 1Α4) επωάστηκε στους 37 ° C για 32 λεπτά και ανιχνεύονται με χρήση του κιτ Ανίχνευσης Ultraview DAB. Τέλος, για να απεικονίσει τους πυρήνες, τα πλακίδια αντίθετα με αντιδραστήριο Ventana αιματοξυλίνης II για 8 λεπτά, που ακολουθείται από ένα αντιδραστήριο Bluing για 4 λεπτά.

εφαρμόσθηκαν δύο διαφορετικές έλεγχοι για τη μέθοδο χρώσης μας. Πρώτον, ελέγχουν χρώση των τομών με ένα αντίσωμα ελέγχου ταιριαστού ισότυπου χωρίς το πρωτεύον αντίσωμα. Δεύτερον, πολλαπλού ιστού όργανο μικρο-συστοιχία ως θετικοί και αρνητικοί έλεγχοι ιστού χρησιμοποιήθηκαν για να επαληθευθεί η εξειδίκευση της χρώσης σε κάθε διαδικασία χρώσης. Οι θετικοί μάρτυρες ιστών αποτελείται φυσιολογικό ήπαρ και το καρκίνωμα του μαστού για FAP-1 και του παραρτήματος και του τοιχώματος του αγγείου για α-SMA? Οι αρνητικοί έλεγχοι ιστός ήταν δείγματα φυσιολογικού παγκρέατος, του πνεύμονα, του μαστού, του νεφρού και των αμυγδαλών και για τις δύο FAP και α-SMA.

4. Αντισώματος επικύρωση

Mouse-μονοκλωνικό αντι-ανθρώπινης α-SMA αντίσωμα αγοράστηκε από την Ventana (cat # 760 έως 2.833, Ventana, κλώνος 1Α4). Αυτό το αντίσωμα έχει υποβληθεί σε εκτεταμένες διαδικασίες ποιοτικού ελέγχου και επικύρωσης από τον κατασκευαστή η οποία εξασφαλίζει σωστή και ειδική χρώση του αντιγόνου σε εγκλεισμένο σε παραφίνη ιστό. Πολυκλωνικά κουνελιού αντι-ανθρώπινο αντίσωμα FAP-1 αγοράστηκε από την Abcam (Cat #:. Ab53066). δοκιμή ειδικότητα του αντισώματος αυτού έγινε σε σπίτι με κηλίδα western. Αντίσωμα ελέγχθηκε έναντι εκχυλίσματα ολόκληρων κυττάρων από διάφορες κυτταρικές σειρές CAF και από τον πνεύμονα όγκου κυτταρικής σειράς Α549. Western blots έδειξε μία μονή ζώνη των περίπου 70 kDa σε εκχυλίσματα πρωτεΐνης από CAFS (Σχήμα 1 D). Το αντίσωμα αυτό έχει ήδη δοκιμαστεί σε απομονωμένες CAFS με IHC [21].

Α) IHC ανάλυση της TMA πυρήνων από ασθενείς με NSCLC που εκπροσωπούν διαφορετικές βαθμολογίες στρωματικών κυττάρων για την έκφραση των FAP-1 και α-SMA. Ι) Χαμηλή στρωματικά FAP-1? II) υψηλής στρωματικά FAP-1? III) Χαμηλή στρωματικά α-SMA? IV) Υψηλής στρωματικά α-SMA. Β) τον έλεγχο TMA του υγιούς πνευμονικού ιστού που δείχνει ισχυρή FAP-1 θετικότητα στην κανονική μακροφάγα πνεύμονα, C) TMA έλεγχο του υγιούς πνευμονικού ιστού που δείχνει κάποια αδύναμα για ενδιάμεση βαφή α-SMA, D) κηλίδα Western για FAP-1 δείχνει μία σαφή 70 kDa ζώνη. Συντομογραφίες: FAP-1, ινοβλαστών ενεργοποίηση πρωτεϊνών? α-SMA, α-ακτίνη των λείων μυών.

Η

5. Βαθμολόγησης της ανοσοϊστοχημείας

Εκπρόσωπος και τα τμήματα βιώσιμο ιστό εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας ένα (Leica DM 2500 «Leica Microsystems Ltd, CH9435 Heerbrugg, Ελβετία). Με βάση την αρχική αξιολόγηση, συγγραφέας Al-Saad δημιουργήσει μια ημι-ποσοτική βαθμολογία για την κάθε δείκτη. Οι πλάκες σκόραρε για FAP-1 στο συνολικό υλικό και α-SMA στο επικαιροποιημένο υλικό (περιπτώσεις από το 2005 έως το 2010) από συγγραφείς Rakaee Khanehkenari και Martinez. α-SMA είχε ήδη σκοράρει για τις περιπτώσεις από το 1990 έως το 2004 . Η κυρίαρχη ένταση χρώσης σε ποσοστό των θετικών κυττάρων στην ενδοεπιθηλιακή διαμέρισμα στρωματικών βαθμολογήθηκε ως εξής: α. 0 = καμία χρώση, 1 = 1-10%, 2 = 11-50% και 3 = & gt? 50% Όταν αξιολογείται μια δεδομένη πυρήνα, οι παρατηρητές δεν γνώριζαν τα αποτελέσματα των άλλων μεταβλητών και να το αποτέλεσμα. Εμείς δεν τήρησε καμία χρώση των επιθηλιακών κυττάρων του όγκου είτε α-SMA ούτε FAP-1. Αυτό είναι παρόμοιο με αναφορές από άλλες μελέτες [22].

υψηλή έκφραση ορίστηκε ως το βέλτιστο σημείο αποκοπής διακρίσεις τα υψηλά /χαμηλά ομάδες ανάλογα με την επιβίωση. Υψηλή έκφραση ορίστηκε ως βαθμολογία & gt? 0.5 (FAP-1) και & gt?. 2 (α-SMA)

6. Στατιστικές Μέθοδοι

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση RStudio 0.98.1091 με R έκδοση 3.1.1.1 [23] και οι βιβλιοθήκες «επιβίωσης» [24], «αυτοκίνητο» [25], «ggplot2» [26], «gridExtra» [27], «Hmisc» [28] και «ΔΕΑ» [29].

Τα IHC βαθμολογίες από κάθε παρατηρητή συγκρίθηκαν για την αξιοπιστία μεταξύ παρατηρητών χρησιμοποιώντας μια αμφίδρομη τυχαίες επιδράσεις μοντέλο με απόλυτη ορισμό συμφωνίας και Cohens κάπα-στατιστικά στοιχεία με ίσα βάρη. Ο εσωτερικός συντελεστής συσχέτισης (συντελεστής αξιοπιστίας) και κάπα του Cohen ελήφθησαν από αυτά τα αποτελέσματα.

Η Chi-square και ακριβής δοκιμές Φίσερ χρησιμοποιήθηκαν για να εξεταστεί η σχέση μεταξύ της έκφρασης μοριακών δεικτών και clinipathological μεταβλητές και να ελέγξει αν υπήρχαν διαφορές στην έκφραση δείκτη στο πρωτότυπο και ενημερωμένο κοόρτης του ασθενούς. Spearman`s βαθμό συσχέτισης χρησιμοποιήθηκε για να εξετάσει τις ενώσεις μεταξύ των εκφράσεων δείκτη. Λόγω αναλύσεις του μεγάλου αριθμού των συσχέτισης, Bonferroni διορθώσεων για Ρ-τιμές διεξήχθησαν για αυτές τις αναλύσεις.

μονοπαραγοντική επιβίωση αναλύσεις έγιναν χρησιμοποιώντας την μέθοδο Kaplan-Meier. Στατιστικές διαφορές μεταξύ των καμπυλών επιβίωσης εκτιμήθηκαν με τη δοκιμασία log-rank. Νόσος-ειδική επιβίωση (DSS) ορίστηκε ως ο χρόνος από τη χειρουργική επέμβαση στο θάνατο σχετίζονται με τον καρκίνο του πνεύμονα. Η πολυπαραγοντική ανάλυση, χρησιμοποιώντας το μοντέλο Cox αναλογικών κινδύνων, διεξήχθη για να αξιολογηθεί η ανεξάρτητη τιμή των μεταβλητών προεπεξεργασίας με την παρουσία άλλων μεταβλητών. Μόνο μεταβλητές με την P & lt? . 0.25 από τις μονοδιάστατες αναλύσεις ή με άλλο τρόπο πιστεύεται ότι είναι σημαντικό διερευνήθηκαν στην ανάλυση Cox παλινδρόμησης

Το επίπεδο σημαντικότητας που χρησιμοποιείται για την επιβίωση αναλύσεις

Ήταν P & lt? 0.05

7. Ηθικές Εκκαθάριση

Η μελέτη εγκρίθηκε από την περιφερειακή επιτροπή για την ιατρική και την υγεία Δεοντολογίας (Βόρεια Νορβηγία, UNN: ID πρωτοκόλλου: 2011/2503) και η ανάγκη για συγκατάθεση παραιτήθηκε περιττά. Η συλλογή και αποθήκευση των κλινικών δεδομένων εγκρίθηκε από το Εθνικό Συμβούλιο Ελέγχου Δεδομένων. Η αναφορά του κλινικοπαθολογοανατομικών μεταβλητές, τα δεδομένα επιβίωσης και της έκφρασης βιοδείκτη διεξήχθη σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΗ.

Αποτελέσματα

1. Κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές

Οι κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Η μέση ηλικία κατά τη στιγμή της διάγνωσης ήταν 67,2 χρόνια και το 32% των ασθενών ήταν γυναίκες. Η ιστολογική κατανομή των 536 υποθέσεων ήταν 289 ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (SCC), 201 αδενοκαρκινώματα (ADC) και 46 αδιαφοροποίητα καρκινώματα (NOS). Εκτός από την χειρουργική εκτομή, 64, 89 και 12 ασθενείς έλαβαν επικουρική ακτινοθεραπεία, χημειοθεραπεία και ακτινοχημειοθεραπεία, αντίστοιχα.

Η

2. Η αξιοπιστία και δοκιμές για διαφορές στην έκφραση

ο εντός των συντελεστών συσχέτισης και κάπα του Cohen ήταν 0.759 (Ρ & lt? 0.001) και 0.598 (P & lt? 0.001) για FAP-1 και 0.790 (P & lt? 0.001) και 0.657 (P & lt? 0.001) για την α-SMA. Δεν παρατηρήθηκε διαφορά στην έκφραση για FAP-1 (Ρ = 0,284) ή α-SMA (Ρ = 1,000) παρατηρήθηκε ανάλογα με την περίοδο του χρόνου (πρωτότυπο vs ενημερωμένο κοόρτη).

3. Αναλύσεις επιβίωσης

Ο Πίνακας 1 συνοψίζει τις επιπτώσεις των κλινικοπαθολογοανατομικών μεταβλητών και διερευνήθηκαν οι δείκτες στο σύνολο της ομάδας και στρωματοποιημένη σε ιστολογικές υποομάδες. Σχήμα 2 πάνελ Α-F δείχνει τις καμπύλες επιβίωσης των FAP-1 και α-SMA χαμηλή

vs

υψηλή έκφραση στη συνολική ομάδα και στρωματοποιημένη σε SCC και ADC υποομάδες. Υψηλή έκφραση του FAP-1 ήταν ένα σημαντικό θετικό δείκτη για την επιβίωση στην υποομάδα SCC (P = 0,043). Ούτε FAP-1, ούτε η έκφραση α-SMA στην στρώματος του όγκου ήταν σημαντικές ανεξάρτητες μεταβλητές σε πολυπαραγοντικές αναλύσεις

Συντομογραφίες:. SCC, ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα? ADC, αδενοκαρκίνωμα? FAP-1, ινοβλαστών ενεργοποίηση πρωτεϊνών? α-SMA, α-ακτίνη των λείων μυών.

Η

4. Η έκφραση του FAP-1 και α-SMA και συσχετίσεις τους

FAP-1 και την έκφραση α-SMA εντοπίστηκε στο κυτταρόπλασμα των στρωματικών κυττάρων (Σχήμα 1Α). Αξίζει να σημειωθεί, FAP-1 έκφρασης δεν περιορίστηκε σε ινοβλάστες σαν κύτταρα ως ενδοογκική και υγιή μακροφάγα πνευμονικό ιστό έντονα χρωματισμένο από το αντίσωμα (Σχήμα 1Β). Ωστόσο, κατά την αξιολόγηση των πυρήνων, μακροφάγων έκφραση της FAP-1 δεν λαμβάνονται υπόψη. S1 πίνακας συνοψίζει τις ενώσεις των FAP-1 και α-SMA με κλινικοπαθολογοανατομικές δείκτες. Μετά από διορθώσεις για πολλαπλές δοκιμές δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές ενώσεις.

Ο Πίνακας 2 συνοψίζει τις σημαντικές συσχετίσεις των FAP-1 και α-SMA με πρωτεΐνες του όγκου που σχετίζονται με προηγουμένως αναλυθεί στην ομάδα αυτή των ασθενών. S2 ονόματα Πίνακας όλα δείκτες που περιλαμβάνονται στον αναλύσεις συσχέτισης (n = 105). Μετά διορθώσεις για πολλαπλές δοκιμές, σημαντικές συσχετίσεις παρατηρήθηκαν μεταξύ FAP-1 και των ακόλουθων δεικτών: στρωματικά έκφραση του HIF2 (r = 0.26), LDH5 (r = 0.25), FoxP3 (r = 0.23), CSF1R (r = 0.26) και miR21 (r = 0,27) και την έκφραση των καρκινικών κυττάρων του p21 (r = 0,30) στο σύνολο κοόρτη? στρωματική έκφραση του CSF1R (r = 0,29) και mir21 (r = 0,31) στην υποομάδα SCC? έκφραση στρωματικά του HIF2 (r = 0,42) και την έκφραση των καρκινικών κυττάρων του MCT3 (r = -0,42) στην υποομάδα ADC. α-SMA δεν έδειξε σημαντικές συσχετίσεις, ούτε σε ολόκληρο το υλικό, ούτε σε υποομάδες, μετά από τις διορθώσεις για πολλαπλές δοκιμές διεξήχθη.

Η

Συζήτηση

Η παρούσα μελέτη ξεκίνησε για να εξερευνήσετε το δυνητική προγνωστική επίπτωση των CAFS σε NSCLC, και οι υπάρχουσες συσχετίσεις αυτών των κυττάρων με άλλες συναφείς όγκου βιολογικών δεικτών. Σε μια πρόσφατη ανασκόπηση, Cortez et al. τονίζεται τέσσερα λειτουργικά υποσύνολα CAF σύμφωνα με την έκφραση των μορίων τελεστών και υποδοχέων? ΚΠΑ

FAP, CAF

FSP1, CAF

PDGFR-α και CAF

PDGFR-β [8]. Σημαντικές προσπάθειες έχουν αφιερωθεί στην διερεύνηση του ρόλου των ΚΠΑ υποτύπων στον NSCLC. Η πιο μελέτησε υπότυπο, CAF

Podoplanin, έχει συσχετιστεί με μικρότερη συνολική επιβίωση τόσο για ADC και ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα SCC [11-14] και η παρουσία τους στην μεσοθωρακίου μεταστάσεις λεμφαδένων αυξάνει τον κίνδυνο του μεσοθωρακίου υποτροπής [15,16 ]. Λόγω της CAF ετερογένεια και την έλλειψη μιας ενιαίας καθολικής δείκτη, επιλέξαμε να εντοπίσει CAFS από δύο από τα πιο ευρέως χρησιμοποιούμενα δείκτες που αποκλείουν αδρανείς ινοβλάστες από CAFS, δηλαδή FAP-1 και α-SMA. Σε αντίθεση με προηγούμενες εκθέσεις για CAFS και NSCLC, διαπιστώνουμε ότι το ΚΠΑ

FAP είναι προάγγελοι των ευνοϊκή πρόγνωση στην υποομάδα SCC. Περιέργως, στη μελέτη μας FAP-1 και την έκφραση α-SMA δεν συσχετίζονται μεταξύ τους, υποδεικνύοντας ότι αυτοί οι δείκτες προσδιορίζουν διαφορετικές CAFS υποτύπους. Τέλος, η μελέτη μας αποκαλύπτει ενδιαφέρουσες συσχετίσεις μεταξύ των ΚΠΑ

FAP και άλλων μοριακών δεικτών όγκου που βοηθούν στην κατανόηση των μηχανισμών πίσω από την παρατηρούμενη επίδραση στην πρόγνωση. Για τις γνώσεις μας, η μελέτη αυτή αποτελεί τη μεγαλύτερη αξιολόγησης του ΚΠΑ

FAP και CAF

α-SMA σε NSCLC.

1. ΚΠΑ

FAP σε NSCLC

Liao et al. διερευνηθεί ο ρόλος των ΚΠΑ

FAP σε μια μικρή σειρά 59 ασθενών με NSCLC και βρέθηκαν υψηλότερα επίπεδα της FAP εκφράζουν στρωματικά κύτταρα να είναι ένας ανεξάρτητος δείκτης κακής συνολικής επιβίωσης [17]. Αντίθετα, βρήκαμε, σε μια μεγαλύτερη ομάδα ασθενών, η παρουσία του CAF

FAP να προβλεφθεί αυξημένη νόσου επιβίωση συγκεκριμένο στο SCC, αλλά όχι σε ασθενείς ADC. Το καθορισμένο ρόλο των ΚΠΑ

FAP είναι ελάχιστα κατανοητή και η παρουσία τους έχει διερευνηθεί σε άλλες ομάδες όγκου με διαφορετικά αποτελέσματα. Σε επεμβατική πορογενές καρκίνωμα του μαστού, CAF

FAP σχετίζονται με την αυξημένη επιβίωση, ενώ στην ADC του παγκρέατος και του ορθού που σχετίζονται με μειωμένη επιβίωση [30-32]. Τα αποτελέσματα αυτά, σύμφωνα με τη μελέτη μας, δείχνουν ότι η ΚΠΑ

FAP αλληλεπιδρούν με τα κύτταρα του όγκου και άλλους παίκτες στον όγκο μικρο-περιβάλλον στη διαφορική τρόπους, ανάλογα με το πλαίσιο, το στάδιο του όγκου και τον ιστό προέλευσης. Η διαφορά μεταξύ της μελέτης μας και τη μελέτη Liao θα μπορούσε να εξηγηθεί από την κατώτερη σειρά τους περιελάμβαναν ασθενείς, η χρήση των εξετάσεων σε ολόκληρο το slide

vs

δείγματα πυρήνα TMA, ή διαφορές στις ομάδες ασθενών με άλλο τρόπο να αγνοούνται.

Προφανώς, η μελέτη μας TMA βάση δεν μπορεί να εξηγήσει άμεσα τους μηχανισμούς αυτών των παρατηρούμενων επιδράσεων. Παρ ‘όλα αυτά, εκτεταμένες αναλύσεις συσχέτισης (Πίνακας 2) στην ομάδα μας ασθενή αποκαλύπτουν ισχυρή θετική συσχέτιση μεταξύ ΚΠΑ

FAP και στρωματικά έκφραση του υποδοχέα παράγοντας διέγερσης αποικίας 1 (CSF1R) και μικρο-RNA 21 (miR21) στην SCC και στρωματικά έκφραση υποξία που προκαλείται από παράγοντα 2 (HIF2) στο ADC και ισχυρή αρνητική συσχέτιση με το καρκινικό κύτταρο έκφραση μονοκαρβοξυλικά μεταφορέα 3 (MCT3) στο ADC. Στρωματικά CSF1R θα μπορούσε να εκφραστεί τόσο σε μακροφάγα και σε μυελοειδή δενδριτικά κύτταρα (DC) [33]. Η παρουσία του τύπου Μ1 κυτταροτοξικών μακροφάγα θα μπορούσε να εξηγήσει το όφελος επιβίωσης που παρατηρούμε στο ΚΠΑ

FAP ασθενείς SCC, από τα μακροφάγα που στοχεύουν άμεσα τα καρκινικά κύτταρα. CSF1R θετική ΑΧ είναι σε θέση να αναλάβουν το αντιγόνο και η παρουσία τους μπορεί να υποδεικνύει μια τοπική ανοσολογική απόκριση [33]. miR21 περιγράφεται γενικά ως ένα ογκο-miR και εκφράζεται στους περισσότερους καρκίνους στερεού [34]. Μια πρόσφατη μελέτη έχει δημιουργήσει μια σύνδεση μεταξύ της έκφρασης και CAF σχηματισμούς miR21 και θα μπορούσε να εξηγήσει τη θετική συσχέτιση παρατηρείται στην ομάδα μας SCC ασθενών [35]. Έχουμε εντοπίσει προηγουμένως έκφραση miR21 υψηλή στρωματικά να προβλέψουμε κακή επιβίωση για ένα υποσύνολο ασθενών με NSCLC [36]. Σε αυτή τη μελέτη οι χαμηλές miR21 εκφράζοντας την ομάδα που αποτελείται μόνο 21 ασθενείς που θα μπορούσε ενδεχομένως να εξηγήσει την παρατηρούμενη αυξημένη επιβίωση στην υποομάδα SCC, ακόμη και αν παρατηρείται μια μέτρια ισχυρή συσχέτιση με miR21.

Προηγούμενα αποτελέσματα έδειξαν υψηλά στρωματικά έκφραση HIF2 να είναι μια ευνοϊκή ένδειξη της πρόγνωσης της SCC, αλλά δεν ADC, ενώ καρκινικών κυττάρων έκφραση MCT3 ήταν άσχετη με την πρόγνωση, ανεξάρτητα από ιστολογικές υποομάδες [37,38].

έχουν

οι στρατηγικές έχουν αναπτυχθεί για να αξιοποιήσει το FAP παρουσία εκφράζοντα στρωματικά κύτταρα στη θεραπεία του καρκίνου. Αυτές μπορούν να χωριστούν σε δύο κατηγορίες i) εκείνα τα οποία στόχων και εξουδετερώνει ΚΠΑ

FAP άμεσα και ii) εκείνες που χρησιμοποιούν την έκφραση FAP στα στρωματικά κύτταρα του όγκου να παραδώσει ένα φάρμακο στην θέση του όγκου [39-43]. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι για τους ασθενείς με NSCLC, και ειδικά στην SCC υποομάδα, η πρώτη προσέγγιση θα μπορούσε να αποδειχθεί επιζήμια.

2. ΚΠΑ

α-SMA σε NSCLC

α-SMA είναι γενικά αποδεκτό ως δείκτη μυοϊνοβλαστών, αν και η επισήμανση είναι απροσδιόριστα και άλλους κυτταρικούς τύπους, όπως περικύτταρα μπορεί επίσης να βάφονται [8]. Chen et al. διερεύνησε το ρόλο των ΚΠΑ

α-SMA και CAF

TGF-β σε μια μικρή ομάδα των 78 ασθενών με NSCLC από όλα τα στάδια και ιστολογίες χρησιμοποιώντας διαφάνειες ιστού ολόκληρη όγκου. Βρήκαν ΚΠΑ

α-SMA για να είναι ένας ανεξάρτητος δείκτης των δυσμενών αποτελεσμάτων [10]. Στη μελέτη μας, η παρουσία του ΚΠΑ

α-SMA δεν δείχνουν καμία προγνωστικές πληροφορίες, ούτε στο γενικό πληθυσμό, ούτε σε υποπληθυσμούς σύμφωνα με ιστολογία. Η διαφορά στο αποτέλεσμα θα μπορούσε να εξηγηθεί από τις διαφορετικές προσεγγίσεις που χρησιμοποιούνται (όλο το slide vs TMA) ή από τους διαφορετικούς αριθμούς των ασθενών στις ομάδες. Επιπλέον, η αιτιολογία των περιπτώσεων καρκίνου του πνεύμονα θα μπορούσε επίσης να είναι διαφορετική. Υποθέτοντας ότι Chen et al. περιελάμβανε κυρίως ασθενείς από την περιοχή της Suzhou, το οποίο είναι μια πυκνοκατοικημένη και ιδιαίτερα βιομηχανοποιημένη περιοχή, είναι κατανοητό ότι η μελέτη περιελάμβανε ένα μεγαλύτερο αριθμό ασθενών με το κάπνισμα, άσχετα καρκίνο του πνεύμονα. Δυστυχώς, η μελέτη Τσεν δεν περιλαμβάνουν πληροφορίες σχετικά με την κατάσταση καπνίσματος. Αντίθετα, η μελέτη μας προσλαμβάνονται οι ασθενείς από τη Βόρεια-Νορβηγία, μια αραιοκατοικημένη περιοχή με σχεδόν καθόλου ρυπογόνα βιομηχανία, και μόνο 18 από 536 από τους περιελάμβανε ασθενείς δεν είχαν καπνίσει ποτέ. Θα ήταν ενδιαφέρον να διερευνήσει πώς ΚΠΑ

α-SMA αντιδρά σε διαφορετικά ερεθίσματα (π.χ.. Καπνίσματος

vs

βιομηχανική ρύπανση).

Από ενδιαφέρον, δεν υπάρχουν σημαντικές συσχετίσεις (μετά από διόρθωση για πολλαπλές δοκιμή) παρατηρήθηκαν μεταξύ της παρουσίας του ΚΠΑ

α-SMA και άλλων πρωτεϊνών όγκων που σχετίζονται με διερευνηθεί προηγουμένως στην ομάδα μας ασθενή.

Συμπέρασμα

στο NSCLC, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η παρουσία και προγνωστική σημασία της CAF υποτύπων διαφέρουν μεταξύ των ιστολογικών υποομάδων και ότι η παρουσία του ΚΠΑ

FAP μπορεί να είναι ευεργετική για την επιβίωση των ασθενών με NSCLC SCC. Τα αποτελέσματα αυτά έρχονται σε αντίθεση με μια άλλη μικρή μελέτη του ΚΠΑ

FAP σε NSCLC. Η διαφορά αυτή είναι σημαντική, καθώς αναπτύσσονται ΚΠΑ

στρατηγικές FAPtargeting. Η χρησιμοποίηση τέτοιων στρατηγικών σε ασθενείς με NSCLC, ειδικά στην υποομάδα SCC, θα πρέπει να προσεγγιστεί με επιμέλεια μέχρι αυτά τα αποτελέσματα περαιτέρω επικυρωθεί και να διερευνηθούν στο

in-vitro

και

in-vivo

όγκου μοντέλα και των δύο SCC και ADC NSCLC.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Αρχείο. Συμπιεσμένη έκδοση του S1 και S2 Πίνακες

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134965.s001

(Τ.Κ.)

S1 πίνακα. Συσχετίσεις μεταξύ FAP-1 και α-SMA και κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134965.s002

(DOCX)

S2 πίνακα. Κατάλογος των δεικτών διερευνηθεί σε ομάδα μας

doi:. 10.1371 /journal.pone.0134965.s003

(ODS)