Αφηρημένο

Ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι ο πιο κοινός τύπος καρκίνου στους άνδρες στις Ηνωμένες Πολιτείες, η οποία πλήττει δυσανάλογα αφροαμερικάνων καταβάσεις. Ενώ μετάσταση είναι η πιο κοινή αιτία θανάτου μεταξύ των ασθενών προστάτη, δεν έχουν ειδικούς δείκτες έχουν ανατεθεί σε σοβαρότητα και εθνοτικές biasness της νόσου. Τα microRNAs αντιπροσωπεύουν μια πολλά υποσχόμενη νέα κατηγορία των βιοδεικτών, λόγω των εγγενών σταθερότητα και την αντοχή τους. Στην παρούσα μελέτη, διερευνήθηκε το δυναμικό miRNAs που μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως βιοδείκτες ή /και θεραπευτικούς στόχους και να παρέχουν πληροφορίες για τη σοβαρότητα και την εθνοτική biasness του προστάτη. συστοιχία PCR πραγματοποιήθηκε σε ιστούς FFPE PCa (5 Καυκάσιος Αμερικανός και 5 αφροαμερικάνων) και επιλέγονται διαφορικά εκφρασμένων miRNAs επικυρώθηκαν από qRT-PCR, σε 40 (15 CA και 25 ΑΑ) ζευγαρωμένα PCa και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών. Σημαντικά απελευθερωμένη miRNAs αναλύθηκαν επίσης σε δείγματα ούρων για να εξερευνήσουν τις δυνατότητές τους ως μη επεμβατική βιοδείκτη για την PCA. Από 8 miRNAs που έχουν επιλεγεί για επικύρωση από τα δεδομένα πίνακα PCR, miR-205 (

σ

& lt? 0,0001), mir-214 (

σ

& lt? 0,0001), miR-221 (

σ

& lt? 0.001) και miR-99b (

σ

& lt? 0,0001) ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε ιστούς του προστάτη. καμπύλη ROC δείχνει ότι και οι τέσσερις miRNAs διακρίσεις επιτυχώς μεταξύ του προστάτη και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών. MiR-99b έδειξαν σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω (

σ

& lt? 0,01) σε ιστούς ΑΑ προστάτη σε σύγκριση με CA ιστούς του προστάτη και μπορεί να σχετίζεται με την επιθετικότητα που σχετίζεται με τον πληθυσμό ΑΑ. Στα ούρα, miR-205 (

σ

& lt? 0,05) και miR-214 (

σ

& lt? 0,05) ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε ασθενείς προστάτη και μπορεί να διακρίνει τους ασθενείς του προστάτη από υγιή άτομα με 89 % ευαισθησία και 80% ειδικότητα. Εν κατακλείδι, παρούσα μελέτη έδειξε ότι το miR-205 και miR-214 είναι προς τα κάτω σε προστάτη και μπορεί να χρησιμεύσει ως πιθανή μη-επεμβατική μοριακού βιοδείκτη για την PCA

Παράθεση:. Srivastava Α, Goldberger Η, Dimtchev Α, Ramalinga Μ , Chijioke J, Marian C, et al. (2013) microRNA Profiling στον καρκίνο του προστάτη – Το Διαγνωστικό Δυναμικό του ουροποιητικού miR-205 και miR-214. PLoS ONE 8 (10): e76994. doi: 10.1371 /journal.pone.0076994

Επιμέλεια: Rakesh Κ Srivastava, Το Πανεπιστήμιο του Κάνσας Ιατρικό κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 5 Ιουλ 2013? Αποδεκτές: 4 του Σεπτέμβρη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 22 Οκτώβρη του 2013

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 αφοσίωση δημόσιο τομέα

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από το NIH (CA162264 και CA141935) και το πρόγραμμα PCRP του CDMRP (PC111314). JC υποστηρίζεται από το συμπλήρωμα για CA162264-02S1. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η πιο συχνά διαγιγνώσκεται καρκίνος στους άνδρες και η δεύτερη κύρια αιτία των ογκολογικών θνησιμότητας στους άνδρες στις Ηνωμένες Πολιτείες [1]. Το 2013, οι ~238,590 νέες περιπτώσεις προστάτη εκτιμάται ότι θα διαγνωστεί στις ΗΠΑ η οποία μπορεί να διεκδικήσει ~29,720 θάνατοι [1]. Οι αφροαμερικάνων (AA) άνδρες επηρεάζονται δυσανάλογα με προστάτη με μια συχνότητα εμφάνισης δύο-τρίτα υψηλότερο και το ποσοστό θνησιμότητας δύο φορές υψηλότερο σε σύγκριση με τους Καυκάσιους Αμερικανούς (CA) [2]. Λόγω μη ειδικά συμπτώματα και σταδιακή εξέλιξη, PCA είναι γενικά διαγιγνώσκεται σε προχωρημένο στάδιο. Ωστόσο, αν διαγνωστεί σε πρώιμο στάδιο του προστάτη μπορεί να αντιμετωπιστεί με επιτυχία.

Συνήθως διεξάγονται δοκιμές για την έγκαιρη ανίχνευση του προστάτη περιλαμβάνουν δακτυλική εξέταση (DREs) και του ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA). δοκιμή PSA είναι μη ειδική, καθώς αυξημένα επίπεδα PSA λόγω καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη (ΒΡΗ), μόλυνση, και /ή χρόνια φλεγμονή μπορεί να οδηγήσει σε σύγχυση αποτελέσματα [3] – [4]. Χαμηλή ειδικότητα (δοκιμή PSA) και χαμηλή ευαισθησία (DRE) των δοκιμών αυτών περιορίζει διαγνωστική σημασία τους [5]. Αν και κλινικές μελέτες υποστηρίζουν ότι η διαλογή PSA διευκολύνει σε μεγάλο βαθμό την έγκαιρη διάγνωση του προστάτη, αν αυτή η διαδικασία διαλογής μειώνει σημαντικά τη θνησιμότητα προστάτη παραμένει ένα θέμα συζήτησης [6] – [7]. Μια πρόσφατη μετα-ανάλυση κατέληξε στο συμπέρασμα ότι η εξέταση ρουτίνας είτε με DRE ή PSA δεν προσφέρει κανένα όφελος και δεν επηρεάζει τη θνησιμότητα προστάτη [8]. Για να ξεπεραστούν αυτά τα μειονεκτήματα, έχουν επιπλέον βιοδείκτες έχουν προταθεί συμπεριλαμβανομένων των παραγώγων PSA όπως η συνολική ταχύτητα του PSA (σύνολο PSAV) και διαφορετικές μοριακές μορφές του PSA όπως δωρεάν PSA, BPSA, προ-PSA, και ακέραια [9] PSA. Άλλες βιοδείκτες βάση το αίμα όπως η ανθρώπινη αδενική καλλικρεΐνη 2 (hK2), ενεργοποιητή πλασμινογόνου ουροκινάσης (υΡΑ) και του υποδοχέα του (uPAR), ο αυξητικός παράγοντας μετασχηματισμού-βήτα 1 (ΤΟΡ-β1)? ιντερλευκίνη-6 (IL-6) και του υποδοχέα του (IL-6R) έχουν μελετηθεί μόνο του ή σε συνδυασμό με PSA και προτείνονται για τη διάγνωση, σταδιοποίηση, προγνωστικά, και παρακολούθηση του καρκίνου του προστάτη [10]. Ωστόσο, λόγω της ετερογενούς φύσης της ασθένειας αυτής, επιπλέον προγνωστικούς βιοδείκτες χρειάζονται επειγόντως για την καλύτερη πρόβλεψη της εξέλιξης της νόσου που μπορεί να βοηθήσει στην κλινική λήψη αποφάσεων σχετικά με το χρονοδιάγραμμα της βιοψίας και την αναγκαιότητα της θεραπείας.

Τα microRNAs (miRNAs) είναι μικρά (18 έως 24 νουκλεοτίδια), εξαιρετικά διατηρημένη, μη κωδικοποιητικού μόρια RNA που ρυθμίζουν την έκφραση του γονιδίου μετα-μεταγραφικά [11] – [12]. Υπολογιστικές μελέτες δείχνουν ότι πάνω από το 60% των μεταγραφών γονιδίων θηλαστικών ρυθμίζονται από miRNAs [13] – [14]. MiRNAs παίζουν σημαντικό ρυθμιστικό ρόλο στην αποκλίνουσα κυτταρικές διαδικασίες, συμπεριλαμβανομένων του κυτταρικού κύκλου, του πολλαπλασιασμού, της διαφοροποίησης και απόπτωσης [15]. Πρόσφατες μελέτες έχουν ενοχοποιήσει διάφορες miRNAs στην ανάπτυξη και την εξέλιξη των πολλαπλών ανθρώπινων καρκίνων και επίσης ως πιθανούς βιοδείκτη σε διάγνωση καρκίνου και πρόγνωση [16] – [19].

Λαμβάνοντας υπόψη την ετερογενή φύση των ιστών του καρκίνου, τη σύλληψη λέιζερ μικρο ανατομή (LCM) προσφέρει μια ελκυστική προσέγγιση για την απομόνωση καθορισμένων κυτταρικών πληθυσμών από FFPE δείγματα [20]. LCM σε συνδυασμό με την τεχνολογία qRT-PCR έχει χρησιμοποιηθεί για την ακριβή μέτρηση της γονιδιακής έκφρασης από δείγματα FFPE. Στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιήσαμε LCM και εκτελούνται miRNA προφίλ στον καρκίνο του προστάτη και των αντίστοιχων παρακείμενων φυσιολογικών ιστών για τον εντοπισμό miRNAs που συνδέονται με την ανάπτυξη του προστάτη. Τα miRNAs προσδιορίζονται περαιτέρω επικυρωθεί σε μεγαλύτερα σύνολα δειγμάτων. Για να ελέγξετε μη επεμβατικές διαγνωστικές δυνατότητές τους, αξιολογήσαμε επίσης την έκφραση των υποψήφιων miRNAs σε ένα ανεξάρτητο σύνολο των δειγμάτων ούρων από τους ασθενείς του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Δείγματα Ασθενών

Όλα τα δείγματα ασθενών που ελήφθησαν ήταν αποχαρακτηριστούν για την προστασία του απορρήτου των ασθενών και είχε Πανεπιστήμιο Georgetown IRB-έγκριση και συγκατάθεση. Όλα τα δείγματα ιστού ελήφθησαν από GU /LCCC Ιστοπαθολογία & amp? Ιστού κοινόχρηστο πόρο (https://lombardi.georgetown.edu/research/sharedresources/htsr/) και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους συμμετέχοντες για το δείγμα των ούρων. Εν συντομία, 40 φορμόλη σταθερό, έχει εμπεδωθεί με παραφίνη μπλοκ (FFPE) δείγμα ιστού από ριζική προστατεκτομή αποτελείται 15 του Καυκάσου Αμερικής (CA) και 25 αφροαμερικάνων (ΑΑ) ελήφθησαν από Lombardi Παθολογικής Ανατομικής και ιστών κοινόχρηστο πόρο (HTSR) μεταξύ 1997-2002. δείγματα ούρων από 36 ασθενείς προστάτη (18 CA και 18 ΑΑ) και 12 ηλικίας και εθνικότητας ταιριάζει υγιείς δότες (6 CA και 6 ΑΑ) ελήφθησαν από το Georgetown University Hospital CyberKnife προστάτη Πρόγραμμα Καρκίνου μεταξύ 2009 έως 2012.

Laser συλλάβετε μικροανατομίας (LCM)

αιματοξυλίνη και ηωσίνη (η & amp? Ε) βάφονται διαφάνειες από αρχειακό μπλοκ FFPE εξετάστηκαν από σκάφους επικυρωμένο παθολόγο, για τον προσδιορισμό της προστάτη εστίες, καθώς και παρακείμενο φυσιολογικό ιστό. LCM διεξήχθη σε Arcturus σύστημα μικροσκοπίου σύλληψη λέιζερ με 5000 έως 6000 παλμούς λέιζερ για κάθε δείγμα για να συλλάβει 30.000 έως 50.000 κύτταρα προστάτη εστίες και γειτονικό φυσιολογικό ιστό. Κατέλαβε κύτταρα καταψύχθηκαν αμέσως στους -80 ° C μέχρι την περαιτέρω χρήση.

RNA Εξόρυξη και miRNA έκφραση Profiling

εκχύλιση RNA από μικροτομή κύτταρα και δείγματα ούρων διεξήχθη χρησιμοποιώντας ανακτήσει όλα ™ Σύνολο νουκλεϊκών οξέων Απομόνωση και mirVana ™ miRNA κιτ απομόνωσης αντίστοιχα (Ambion, Austin, ΤΧ) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Το RNA ποσοτικά με τη χρήση NanoDrop ND-1000 Φασματοφωτόμετρο (Thermo Scientific, Waltham, ΜΑ) και Agilent 2100 Bioanalyzer (Santa Clara, CA).

RNA μετατράπηκε σε cDNA χρησιμοποιώντας Megaplex ™ Primer πισίνες και Taqman miRNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosytems, Grand Island, Νέα Υόρκη). Ένα ολοκληρωμένο προφίλ έκφρασης των miRNAs διεξήχθη χρησιμοποιώντας TaqMan Array v2.0 Ανθρωπίνων microRNA μια κάρτα μετά από τις συστάσεις του κατασκευαστή (Applied Biosytems, Grand Island, Νέα Υόρκη). Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου (qRT-PCR) διεξήχθη για να προβάλει συνολικά 377 μοναδικά ανθρώπινα miRNAs από την Applied Biosystems 7900 HT Fast πραγματικό χρόνο σύστημα ανίχνευσης αλληλουχίας PCR. Τα δεδομένα αναλύθηκαν επί σύστημα ανίχνευσης αλληλουχίας λογισμικού (SDS) (έκδοση 2.3, Applied Biosytems, Grand Island, ΝΥ). Σχετικά επίπεδα έκφρασης των miRNAs ομαλοποιήθηκαν έναντι ενδογενών U6 έλεγχο snRNA.

Επικύρωση από qRT-PCR

Τα επίπεδα έκφρασης των επιλεγμένων miRNAs μετρήθηκαν σε 40 ασθενείς προστάτη χρησιμοποιώντας απογραφεί TaqMan miRNA Αναλύσεις (Applied Biosytems, το Grand Island, Νέα Υόρκη) σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή, σε 7300 Real-Time PCR System (Applied Biosytems, Grand Island, Νέα Υόρκη). Εν συντομία, 10 ng του RNA μεταγράφηκε ανάστροφα χρησιμοποιώντας ειδικούς εκκινητές stem-loop. δείγματα ιστού κανονικοποιούνται με εσωτερικό πρότυπο U6 ελέγχου snRNA ενώ, RNU48 χρησιμοποιήθηκε ως ομαλοποίηση ελέγχου για δείγματα ούρων. Μη ανάστροφης μεταγραφάσης (RT) έλεγχοι χρησιμοποιήθηκαν για να αποκλείσει το ενδεχόμενο πιθανών γενωμικού DNA μόλυνση. Τα microRNAs με τον κύκλο κατωφλίου (Ct) τιμές των ≥38 εξαιρέθηκαν από την ανάλυση. Όλα τα δείγματα υποβλήθηκαν σε αντίστροφη μεταγραφή και qRT-PCR ταυτόχρονα να ελαχιστοποιηθούν τα λάθη που θεσπίστηκε με διακυμάνσεις στην απόδοση της αντίδρασης.

Data Mining, Target Εντοπισμός και Pathway Ανάλυση

Η έκφραση των επιλεγμένων miRNAs αναλύθηκαν στο Gene Expression Omnibus (GEO) βάσης δεδομένων «R» από GEO2R [21]. Οι στόχοι mRNA για διαφορικά εκφραζόμενων miRNAs ταυτοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό online και βάσεις δεδομένων, όπως TargetScan [22], PicTar [23] και miRDB [24] που ακολουθείται από επιπλέον πειραματικά επαληθευτεί στόχων από miRTarBase [25]. Πιθανές αλληλεπιδράσεις γονίδιο-γονιδίου και λειτουργική ομαδοποίηση μεταξύ των στόχων των miRNAs, πραγματοποιήθηκε με τη χρήση της Αριάδνης Pathway Studio 9.0.

Στατιστική Ανάλυση

Τα ανεπεξέργαστα δεδομένα ανθρώπινου microRNA-A v2.0 κάρτα σειρά αναλύθηκαν στατιστικά από Integromics πραγματικό χρόνο StatMinier έκδοση λογισμικού 4.0 και R /Bioconductor έκδοση λογισμικού 2.9.2. Η 2

-ΔΔCt μέθοδο [26] χρησιμοποιήθηκε για προ-επεξεργασία και διπλώστε υπολογισμούς αλλαγής. Διαφορικά εκφραζόμενο miRNAs μεταξύ ιστών ΠΑΠ και παρακείμενο φυσιολογικό ιστό ταυτοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας πακέτο Limma [27] η οποία χρησιμοποιεί τον εμπειρικό μοντέλο Bayesian να ασχοληθεί με το μικρό μέγεθος του δείγματος σε σύγκριση με τον σχετικά πολύ μεγαλύτερο αριθμό miRNAs. Η

ρ

τιμές προσαρμόστηκαν χρησιμοποιώντας Benjamin-Hochberg ποσοστό εσφαλμένης ανακάλυψη (FDR) διόρθωση [28].

Όλα τα πειράματα qRT-PCR διεξήχθησαν σύμφωνα με την MIQE (ελάχιστες πληροφορίες για τη δημοσίευση ποσοτικά πειράματα σε πραγματικό χρόνο PCR) κατευθυντήριες γραμμές [29]. Κάθε αντίδραση ενίσχυσης διεξήχθη εις τριπλούν, και μέση τιμή του ορίου των τριών κύκλων χρησιμοποιήθηκε για περαιτέρω ανάλυση. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SE και Ρ value≤0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. T-test μη παραμετρική Student χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση δύο ομάδες (καρκίνος έναντι μη καρκινικά), και όλα τα στατιστικά στοιχεία προσαρμόστηκαν με τη χρήση της διόρθωσης Holm-Bonferonni για πολλαπλές συγκρίσεις. Όλα τα οικόπεδα κουτί αντιπροσωπεύουν τα επίπεδα των miRNAs σε σχέση με U6 snRNA, μετατρέπεται σε ποσότητες χρησιμοποιώντας τον τύπο 2

-ΔCt [30].

Δέκτης που λειτουργούν χαρακτηριστικό (ROC) καμπύλες κατασκευάστηκαν και την περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) εκτιμήθηκε να μελετήσει τη σκοπιμότητα της χρήσης των ιδιαίτερα miRNA να διακρίνει τους ασθενείς του προστάτη από υγιείς μάρτυρες. Λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκε για να κατασκευαστούν οι καμπύλες ROC χρησιμοποιώντας επίπεδα έκφρασης των miRNAs. Όλη η στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση GraphPad Prism v6 (La Jolla, CA).

Αποτελέσματα

Έκφραση προφίλ των miRNAs σε καρκίνο του προστάτη ιστοί

Η αξιολόγηση αλλαγές στην έκφραση των miRNAs στην προστάτη τους ιστούς και τα βιο-υγρών προσφέρουν ένα πολλά υποσχόμενο εργαλείο για τον εντοπισμό συγκεκριμένων βιοδεικτών που μπορεί να βοηθήσει στη διάγνωση και πρόγνωση του προστάτη. Αρχικά, χρησιμοποιήθηκαν λέιζερ κατέλαβε μικροδιατομής (LCM) για να συλλάβει την περιοχή των ιστών του καρκίνου και των αντίστοιχων γειτονικών κανονική τους ομολόγους από δείγματα FFPE των ασθενών ριζική προστατεκτομή. προφίλ έκφραση microRNA πραγματοποιήθηκε σε 10 ασθενείς προστάτη με Gleason (GS) 6-7 (5 ΑΑ και 5 CA). Ο καρκίνος και τις παρακείμενες περιοχές κανονικής εντοπίστηκαν από το BVSK παθολογοανατόμο. Κατέλαβε κύτταρα από διάφορες περιοχές του καρκίνου από τον κάθε ασθενή συνενώθηκαν για να αντανακλούν ετερογένεια της ΣΕΣΣ και τον πληθυσμό ασθενών? παρακείμενο φυσιολογικό ιστό ομολόγους χρησίμευσαν ως έλεγχος μη-καρκίνου. Πραγματοποιήσαμε miRNA προφίλ ανάλυση και διαπίστωσε ότι η πλειοψηφία των miRNAs ήταν προς τα κάτω σε ιστούς του καρκίνου, με την εξαίρεση του miR-367, miR-758 και miR-190 που βρέθηκαν να ρυθμίζεται προς τα πάνω (Πίνακας 1). Για την επικύρωση, έχουμε επιλέξει τα 3 υπερεκφράζεται miRNAs (miR-367, miR-758 και miR-190) και 5 μειωτικά miRNAs (miR-205, miR-214, miR-212, miR-221 και miR-99b) με βάση τους που δημοσιεύθηκε ρόλο στη βιολογία του καρκίνου. Προφίλ δεδομένων για όλους τους 10 ασθενείς (5 CA και 5 AA) έχει υποβληθεί στη βάση δεδομένων GEO (αριθμός ένταξης GSE48430).

Η

Εκκαθάριση των miRNAs από ποσοτική RT-PCR

Η επιλεγμένα 8 miRNAs επικυρώθηκαν στο LCM-αποσυντίθενται όγκου και παρακείμενο φυσιολογικό ιστό από 40 ασθενείς, συμπεριλαμβανομένων των 10 ασθενών που χρησιμοποιούνται για miRNA προφίλ. Ο Πίνακας 2 δείχνει κλινικο-παθολογική χαρακτηριστικά των ασθενών. Τα αποτελέσματα qRT-PCR των 40 δειγμάτων του ασθενούς (15 CA και 25 ΑΑ) δείγματα που αποκάλυψε μειωμένη έκφραση του miR-205 (

σ

& lt? 0,0001), miR-214 (

σ

& lt? 0.0001), miR-221 (

σ

& lt? 0.001) και miR-99b (

σ

& lt?. 0.0001) σε καρκινικό ιστό σε σύγκριση με το παρακείμενο ιστό μη-καρκίνου (Σχήμα 1Α) . Αν και miR-212 έδειξε μια τάση προς τα κάτω ρύθμιση σε προστάτη σε σύγκριση με το παρακείμενο φυσιολογικό ιστό, η διαφορά δεν ήταν στατιστικά σημαντική (

σ

= 0,061). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην σχετική έκφραση του miR-758, και miR-190 σε καρκινικό ιστό σε σύγκριση με παρακείμενες κανονικές αντίστοιχά τους και τα επίπεδα του miR-367 δεν μπορούσε να ανιχνευθεί μετά από 38 κύκλους (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ως εκ τούτου, miR-212, miR-758, miR-190 και miR-367 αποκλείστηκαν από περαιτέρω μελέτη

(Α) Επικύρωση των miRNAs από qRT-PCR:. Box οικόπεδα που αντιπροσωπεύει το επίπεδο έκφρασης των ιστών από τέσσερις miRNAs σε 40 ιστούς FFPE προστάτη και σε συνδυασμό παρακείμενων φυσιολογικών ιστών τους. Τα επίπεδα έκφρασης των miRNAs κανονικοποιείται στη U6 snRNA ως ενδογενή έλεγχο. Στατιστικά σημαντικές διαφορές προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας T-test unpaired Student. Διαπιστώσαμε σημαντική μείωση στην έκφραση του miR-205 (

σ

& lt? 0,0001), miR-214 (

σ

& lt? 0,0001), miR-221 (

p

& lt? 0.001) και miR-99b (

σ

& lt? 0,0001) σε ιστούς του προστάτη σε σύγκριση με γειτονικά φυσιολογικούς ιστούς. * Υποδηλώνει

σ

& lt? 0,0001 και ** υποδηλώνει

σ

& lt? 0.001. χαρακτηριστικό λειτουργίας (Β) δέκτη (ROC) ανάλυση καμπύλης: Καμπύλη ROC για τέσσερις miRNAs έγιναν για τη διαφοροποίηση του προστάτη από υγιείς ιστούς. Η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC (AUC) για κάθε miRNA μεταφέρει την ακρίβεια της για τη διαφοροποίηση των ιστών προστάτη και φυσιολογικούς ιστούς όσον αφορά την ευαισθησία και την ειδικότητα.

Η

Δέκτης που λειτουργούν χαρακτηριστικά (ROC) καμπύλη ήταν κατασκευάστηκε για να διερευνήσει την ευαισθησία και την ειδικότητα του miR-205, miR-214, miR-221 και miR-99b και να αξιολογήσει το δυναμικό τους για να χρησιμοποιηθεί ως βιολογικός δείκτης για τη διάκριση μεταξύ του προστάτη και απαλλαγμένα από ασθένειες άτομα (Εικ. 1Β). Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι οι τέσσερις miRNAs μπορεί να διακρίνει μεταξύ των δύο ομάδων με μεγάλη ακρίβεια? miR-205, AUC = 0.83 (95% CI = 0,74 – 0,91)? miR-214 AUC = 0,92 (95% CI = 0,86 – 0,99)? miR-221 AUC = 0.75 (95% CI = 0,63 – 0,84) miR-99b AUC = 0.86 (95% CI = 0,78 – 0,95) (Εικ. 1Β).

Η έκφραση των miRNAs στο GEO Σύνολα Δεδομένων

η εξόρυξη δεδομένων πραγματοποιήθηκε με τη χρήση GEO2R για να ελέγξετε την κατάσταση των διαφορικά εκφρασμένων miRNAs σε δημόσια διαθέσιμα σύνολα δεδομένων GEO. σύνολα δεδομένων μικροσυστοιχιών GSE21036 (Taylor et al.) [31] και GSE36802 (Lin et al.) [32] είχαν ερωτηθεί για την έκφραση των επιλεγμένων τέσσερις miRNAs (miR-205, miR-214, miR-221 και miR-99b) της ενδιαφέρον. Υποστηρικτικά δεδομένα ιστός μας, σε GSE21036, όλα τα τέσσερα miRNAs επίσης ρυθμίζεται προς τα κάτω σε πρωτογενείς όγκους του προστάτη (n = 99) σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς προστάτη (n = 28) (MIR-221,

ρ

& lt? 0,0001 ? miR-205,

σ

& lt? 0,0001? miR-99b,

σ

& lt? 0,0001? miR-214,

σ

& lt? 0,05). Ομοίως, στην GSE36802, παρατηρήσαμε αρνητική ρύθμιση όλων των τεσσάρων miRNAs σε κλινικά εντοπισμένο πρωτογενή όγκο (n = 21) σε σύγκριση με καλοήθη προστάτη (n = 21) (MIR-221,

ρ

& lt? 0,0001? MiR -205,

σ

& lt? 0,0001? miR-99b,

σ

& lt? 0,0001? miR-214,

σ

& lt?. 0,05) (Σχήμα 2).

δεδομένα επικύρωσης microRNA για (Α) 99 πρωτογενείς ασθενείς του προστάτη και 28 φυσιολογικούς μάρτυρες και (Β) 21 ασθενείς η κάθε μία με κλινικά εντοπισμένο πρωτοβάθμια προστάτη και καλοήθη προστάτη ελήφθησαν από τη βάση δεδομένων NCBI GEO (GEO ένταξη αρ. GSE21036 και GSE36802, αντίστοιχα). Εμφανίζονται είναι τα διαγράμματα διασποράς των επιπέδων έκφρασης των miR-205, miR-214, miR-221 και miR-99b στα σύνολα δεδομένων που λαμβάνονται από τη βάση δεδομένων GEO.

Η

Διαδρομή Ανάλυση Δίκτυο διαφορικά Διαμορφωμένη miRNAs

για να αποκτήσουν λειτουργικές γνώσεις σχετικά με το ρόλο των miRNA στη ΣΕΣΣ και να διερευνήσει τις πιθανές αλληλεπιδράσεις γονίδιο-γονιδίου μεταξύ των στόχων των τεσσάρων miRNAs, κατασκευάσαμε ένα δίκτυο αλληλεπίδρασης χρησιμοποιώντας Pathway Studio 9.0. Ένα σύνολο των 98 στόχων mRNA εντοπίστηκαν από (α) κοινούς στόχους που προέρχονται από τρία λογισμικά (TargetScan, PicTar και miRDB) για όλες τις 4 miRNAs και (β) επικυρωμένο στόχους για τις 4 miRNAs ελήφθησαν από miRTarBase. Προσθέσαμε κοινή ρυθμιστές μαζί με άμεσες αλληλεπιδράσεις-άμεση ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης, δέσμευσης πρωτεΐνης-πρωτεΐνης, ή δεσμευτικό υποκινητή. Μια σύνθετη σηματοδότηση εξελίχθηκε από 62 από τους στόχους 98 αποκάλυψε VEGFA, ICAM1, p53, ESR1, Sele και FOS ως κοινοί κόμβοι /πλήμνες των πολλών αλληλεπιδράσεων που υποδηλώνει συνήθως καθοδηγείται μονοπάτια από τα συνδεδεμένα γονίδια και τις υποψήφιες για το μέλλον πειραματική επαλήθευση και λειτουργικές μελέτες (Εικ. 3). Οι υπόλοιποι 36 στόχους αποκλείστηκαν από το λογισμικό, λόγω της έλλειψης κοινών συνδέσμων. Ένα δεύτερο μονοπάτι, κατασκευάστηκε για να προσδιορίσει τους στόχους των miRNAs με άμεσες αλληλεπιδράσεις, προτείνεται παρόμοια κόμβοι /κόμβους (Εικ. 3).

δίκτυο Διαδρομή κατασκευάστηκε για κοινώς προέβλεψε mRNAs στόχος της διαφορικά διαμορφωμένο miRNAs (miR-205, ΜΙΚ 214, miR-221 και miR99b), με τη χρήση Pathway Studio 9.0 (Α) Κοινώς προέβλεψε στόχους miRNA με κοινές ρυθμιστικές αρχές. (Β) Απευθείας αλληλεπιδρούν στόχους.

Η

Ethnic Διακύμανση του miRNA έκφραση

αφροαμερικάνων (AA), οι άνδρες έχουν μεγαλύτερη συχνότητα εμφάνισης προστάτη σε σύγκριση με τους Καυκάσιους Αμερικής (CA) άνδρες. Ρωτήσαμε αν τα επίπεδα έκφρασης του miR-205, miR-214, miR-221 και miR-99b ήταν διαφορετική μεταξύ των δύο πληθυσμών (n = 15 CA? N = 25 ΑΑ). Για να δοκιμάσετε αυτό συγκρίναμε τις φορές διαφορές του κάθε miRNA στον καρκίνο του ιστού σε σχέση με το παρακείμενο φυσιολογικό ιστό τους σε ΑΑ και τα δείγματα CA. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στα πρότυπα έκφρασης του miR-205, miR-214 και miR-221 μεταξύ CA και του πληθυσμού ΑΑ. Ωστόσο, μια σημαντικά μειωμένη έκφραση (

ρ

& lt? 0,01) (Εικ. 4). Του miR-99b παρατηρήθηκε σε ιστό καρκίνου από ασθενείς ΑΑ PCa σε σύγκριση με τους ασθενείς CA PCa

Box οικόπεδα αντιπροσωπεύουν το πλάσια διαφορά στα επίπεδα έκφρασης των τεσσάρων miRNAs σε ιστούς προστάτη σε σύγκριση με φυσιολογικό γειτονικό ομόλογό τους. Δεδομένα για 15 Καυκάσιοι Αμερικής (CA) και 25 αφροαμερικάνων (ΑΑ) των ασθενών όπως αξιολογήθηκε με qRT-PCR παρουσιάζεται. Τα επίπεδα έκφρασης των miRNAs κανονικοποιήθηκαν προς U6 snRNA ως ενδογενή έλεγχο. Στατιστικά σημαντικές διαφορές προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας T-test unpaired Student.

Η

Ανίχνευση των miRNAs σε δείγματα ούρων

βιοψίες ιστών είναι επεμβατικές και δεν είναι η προτιμώμενη πηγή για βιοδείκτες. Είμαστε δίπλα διερευνηθεί το ενδεχόμενο, αν miR-205, miR-214, miR-221 και miR-99b θα μπορούσε να ανιχνευθεί με μη επεμβατικό τρόπο από την ανάλυση δειγμάτων ούρων από τους ασθενείς του προστάτη. Από μια συνεχιζόμενη μελέτη, επιλέξαμε 36 ασθενείς του προστάτη και 12 ηλικίας και εθνικότητας ταιριάζει υγιείς δότες ως ομάδα ελέγχου μη-καρκίνου. Ο Πίνακας 3 δείχνει τα χαρακτηριστικά των ασθενών προστάτη και υγιή άτομα που προσλαμβάνονται στη μελέτη για δείγματα ούρων. Δεδομένου ότι για miRNA προφίλ που χρησιμοποιούνται δείγματα ιστού με GS6 και GS7, πήραμε δείγματα ούρων από ασθενείς με GS6 και GS7 ως αντανάκλαση των δειγμάτων ιστού. Όλες οι τέσσερις miRNAs (miR-205, miR-214, miR-221 και miR-99b) ήταν παρούσα σε ανιχνεύσιμη συγκέντρωση σε δείγματα ούρων. Βρήκαμε ότι η ακράτεια miR-205 (

σ

& lt? 0,05) και miR-214 (

σ

& lt? 0.05) επίπεδα ήταν σημαντικά χαμηλότερες στην ομάδα του καρκίνου σε σύγκριση με υγιή ομάδα ελέγχου ( Σχ. 5Α). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στα επίπεδα έκφρασης του miR-221 και miR-99b. Για την αξιολόγηση της διαγνωστικής σημασίας, ROC καμπύλες για όλες τις 4 miRNAs αναλύονται στα δείγματα ούρων κατασκευάστηκαν. Η καμπύλη ROC έδειξε ότι το miR-205 και miR-214 μπορεί να διακρίνει τους ασθενείς του προστάτη από τον κανονικό έλεγχο με AUC: 0,7083 (95% CI = 0,54 – 0,86) και 0,7431 (95% CI = 0,58 – 0,90), αντίστοιχα (Εικ. 5Β) . Επίσης, miR-205 και miR-214, εφόσον χρησιμοποιείται από κοινού μπορεί να διακρίνει τους ασθενείς του προστάτη από υγιή άτομα με 89% ευαισθησία και 80% ειδικότητα (Εικ. 6). Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι το miR-205 και miR-214 είναι παρόν σε δύο ιστούς και στα ούρα των ασθενών προστάτη, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα ούρα θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση μεταβολών στα επίπεδα έκφρασης των miRNAs.

(Α) οικόπεδα κουτί αντιπροσωπεύει το επίπεδο έκφρασης των ούρων των τεσσάρων miRNAs (miR-205, miR-214, miR-221 και miR-99b) στα ούρα από 36 ασθενείς του προστάτη και 12 υγιή άτομα, όπως εκτιμάται από qRT-PCR. Τα επίπεδα έκφρασης των miRNAs κανονικοποιείται στη RNU48 ως ενδογενή έλεγχο. Στατιστικά σημαντικές διαφορές προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας Τ-τεστ Student. Διαπιστώσαμε σημαντική μειωμένη έκφραση του miR-205 (

σ

& lt? 0.05), miR-214 (

σ

& lt? 0,05) στα ούρα των ασθενών προστάτη σε σύγκριση με τους υγιείς μάρτυρες. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στα επίπεδα έκφρασης του miR-221 και miR-99b. * Υποδηλώνει

σ

& lt? 0,05. χαρακτηριστικό λειτουργίας (Β) δέκτη (ROC) καμπύλη ανάλυση των τεσσάρων miRNAs χρησιμοποιήθηκε για να διαφοροποιήσει τους ασθενείς του προστάτη από υγιή άτομα. Η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC (AUC) για κάθε miRNA μεταφέρει την ακρίβεια της για τη διαφοροποίηση των ασθενών προστάτη και υγιή άτομα όσον αφορά την ευαισθησία και την ειδικότητα.

Η

Η ποσοτικοποίηση του miR-205 και miR-214 μαζί μπορεί να ενισχύσει τη διαγνωστική αξία και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη διάκριση των ασθενών προστάτη από υγιή άτομα με 89% ευαισθησία και 80% ειδικότητα.

η

Συζήτηση

Οι μεταβολές στα επίπεδα έκφρασης των miRNAs, με αποτέλεσμα την διαμόρφωση των πολλαπλών οδών σηματοδότησης, έχουν συνδεθεί με έναρξη και την πρόοδο του προστάτη. Στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιώντας παγκόσμιο προφίλ miRNA που ακολουθείται από μελέτες επικύρωσης, δείξαμε ότι το miR-205, miR-214, miR-221 και miR-99b ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε ιστούς του προστάτη σε σύγκριση με το παρακείμενο φυσιολογικό ιστό ομολόγους.

Ένα από τα πιο μελετηθεί microRNA, του miR-205 το οποίο φαίνεται να ρυθμίζεται προς τα κάτω σε διάφορους καρκίνους συμπεριλαμβανομένου του προστάτη [33] – [34], αναγνωρίστηκε επίσης ως μειωτικά miRNA στον προστάτη στη μελέτη μας. miR-205 έχει δειχθεί ότι είναι επιγενετικώς καταπιεσμένη ογκοκατασταλτικών σε PCa [35] το οποίο ασκεί όγκο κατασταλτικής λειτουργίες του στον ανθρώπινο προστάτη μέσω προς τα κάτω ρύθμιση των πολλαπλών στόχων, όπως η BCL2 [36], πρωτεΐνη κινάση C έψιλον [34] και υποδοχέα ανδρογόνου (AR) [37]. Η απώλεια του miR-205 έχει επίσης συσχετιστεί με φτωχή πρόγνωση, αντοχή σε απόπτωση PCa και προτείνεται να είναι ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα του επιθηλίου-μεσεγχύματος μετάβασης [37] – [41]. Άλλες μελέτες συστοιχία έκφρασης έχουν επίσης εντοπιστεί miR-205 που καταστέλλονται σε προστάτη [33] – [34], [42] – [43]. χαμηλού επιπέδου έκφραση του miR-205 είναι επίσης ένας προγνωστικός δείκτης της ανθρώπινης κεφαλής και λαιμού καρκίνωμα από πλακώδες επιθήλιο [44] και ο τόπος έχει αναφερθεί να σιγήσει υπερμεθυλίωση προαγωγού σε επεμβατικές όγκους της ουροδόχου κύστης [45]. Παρούσα μελέτη, καθώς και προηγούμενη βιβλιογραφία επιβεβαιώνει σημαντικό ρόλο του miR-205.

Το επόμενο εκφράζονται ανώμαλα miRNA στη μελέτη μας ήταν miR-214 το οποίο έχει αποδειχθεί ότι είναι μειωτικά συχνά στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας [46], των ωοθηκών καρκίνος [47] – [48], ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [49] – [51] και χολαγγειοκαρκίνωμα [52]. Σε αντίθεση, η υψηλή έκφραση του miR-214 έχει συνδεθεί με τον καρκίνο του παγκρέατος [53] και με δυσμενείς αποτέλεσμα στη συνολική επιβίωση σε γαστρικό καρκίνωμα [54]. MiR-214 απορρύθμιση δεν έχει προηγουμένως αναφερθεί σε καρκίνο του προστάτη. Αυτή είναι η πρώτη μελέτη που δείχνει ότι miR-214 παρεκκλίνοντα εκφράζεται σε PCa. Η σημαντική υπορύθμιση σε βιοψίες ιστών, καθώς και δείγματα ούρων από ασθενείς προστάτη εισάγει miR-214 ως νέου παίκτη στην ΣΕΣΣ, η οποία χρειάζεται περαιτέρω διερεύνηση.

Μια άλλη μειωτικά miRNA στη μελέτη μας ήταν miR-221. Είναι σημαντικό, miR-221 αναγνωρίστηκε ως η πιο σημαντική διαμορφωμένο miRNA σε δύο σύνολα δεδομένων του προστάτη GEO. MiR-221 είναι απορυθμισμένη σε ποικιλία καρκίνων, κυρίως ως υπερ-εκφράζεται miRNA [55] – [59]

Στο προστάτη, προς τα κάτω ρύθμιση των miR-221 έχει αναφερθεί στην TMPRSS2:. ERG σύντηξη, θετική προστάτη και είναι σημαντικά συνδέεται με τη μετάσταση και βιοχημικής υποτροπής [58], [60]. Λίγες μελέτες έχουν επίσης αναφέρει μια ογκογόνο ρόλο του miR-221 σε PCa [61] – [62] και την ανάπτυξη και συντήρηση του φαινοτύπου αντίστασης ευνουχισμού [63] – [64]. Το αποτέλεσμά μας είναι ένα από τα λίγα αναφοράς κάτω ρύθμιση του miR-221 σε ιστούς προστάτη και δικαιολογούν την περαιτέρω μελέτες.

Μια άλλη πολύ σημαντική miRNA εντοπίζονται στη μελέτη μας ήταν miR-99b. Η οικογένεια miR-99, συμπεριλαμβανομένων miR-99b έχει συνδεθεί με καταστολή προστάτη και την πρόγνωση [63]. Κάτω ρύθμιση του miR-99b έχει επίσης παρατηρηθεί σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα [65]. Mir-99b έχει επίσης αποδειχθεί ότι υπερ-εκφράζεται σε αρθρικό σάρκωμα [66] και σχετίζεται με την παρουσία της μετάστασης λεμφαδένα σε καρκίνο του οισοφάγου [67]. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι κάτω ρύθμιση των miR-99b είναι πιο έντονη στους ιστούς του προστάτη ΑΑ σε σύγκριση με ιστούς CA προστάτη (Εικ. 4). Οι λειτουργικές μελέτες σχετικά με miR-99b είναι περιορισμένες και αυτές οι νέες παρατηρήσεις απαιτούν περαιτέρω έρευνες σχετικά με το ρόλο των στόχων miR-99b. Στο σύνολό τους, τα σημερινά δεδομένα δείχνουν ότι, μαζί με διάφορους άλλους παράγοντες, η διακύμανση της έκφρασης των miRNAs, όπως miR-99b μπορεί να εξηγήσει την εθνική επιθετικότητα της νόσου.

Για να εξερευνήσετε τα δίκτυα σηματοδότησης που ρυθμίζονται από αυτές τις τέσσερις miRNAs, εμείς κατασκεύασε ένα μονοπάτι των κοινών προβλέψει τους στόχους χρησιμοποιώντας τα διαθέσιμα εργαλεία βιοπληροφορικής και να επικυρωθούν οι στόχοι από τη βιβλιογραφία. Η προσθήκη των κοινών ρυθμιστών, εντοπίσαμε κεντρικούς κόμβους σηματοδοσίας που έχουν αναφερθεί ότι παίζουν σημαντικό ρόλο στη σηματοδότηση των καρκινικών κυττάρων υποδηλώνοντας ένα σημαντικό ρόλο αυτών των τεσσάρων miRNAs σε PCa (Εικ. 3). Στη συνέχεια, κατασκευάσαμε μια άμεση αλληλεπιδρούν δίκτυο των στόχων των miRNAs χωρίς κοινούς ρυθμιστές. VEGFA, p53, ESR1, FOS και ICAM1 παρέμεινε ως κεντρικούς κόμβους [68] – [72]. Η mTOR ήταν ο μόνος στόχος του miR-99b, που συμπεριλήφθηκε στο κοινό δίκτυο. Εντοπίσαμε miR-99b ως διαφορικά διαμορφωμένο miRNA σε ΑΑ ΣΕΣΣ. οδός mTOR παίζει σημαντικό ρόλο στην ΠΑΠ και έχει συσχετιστεί με μια επιθετική νόσο, αντίσταση στην θεραπεία και την ανάπτυξη του ευνουχισμού ανθεκτικών προστάτη [73]. αναστολείς mTOR έχουν επίσης αξιολογηθεί ως θεραπεία για CRPC [74]. Σύλλογος miR-99b με ΑΑ προστάτη είναι εξαιρετικά σημαντική και απαιτούνται περαιτέρω μελέτες στο εργαστήριο μας κατευθύνεται προς τον χαρακτηρισμό miR-99b και τους στόχους της στην παροχή επιθετικό φαινότυπο του προστάτη.

Η έννοια της χρήσης των ούρων για την ανίχνευση των διαφορικά εκφρασμένων miRNAs ως βιοδείκτη είναι σχετικά νέα. Λαμβάνοντας υπόψη την ιδέα ότι τα πρότυπα έκφρασης που προέρχονται ιστό των miRNAs μπορεί να μας βοηθήσει να αξιολογήσει κυκλοφορούν miRNAs ως βιοδείκτες για διάφορους τύπους καρκίνων, πιο ελπιδοφόρα miRNAs που παρατηρήθηκαν στη μελέτη μας μελετήθηκαν στα ούρα των ασθενών προστάτη για την αξιολόγηση διαγνωστική ή προγνωστική δυναμικό τους. Συνεπής με τα ευρήματά μας σε δείγματα ιστών, ήμασταν επίσης σε θέση να ανιχνεύσει miR-205, miR-214, miR-99b και miR-221 σε δείγματα ούρων των ασθενών προστάτη. Τα επίπεδα του miR-205 και miR-214 ήταν σημαντικά χαμηλότερο στους ασθενείς του προστάτη και μπορεί να εξετασθεί ως μια μη επεμβατική διαγνωστική βιοδείκτη για την PCA. Αν και η ευαισθησία και η εξειδίκευση είναι μεγαλύτερη στον ιστό, ακράτεια miR-205 και τα επίπεδα miR-214 μαζί μπορεί να διακρίνει τους ασθενείς από υγιή άτομα με υψηλή ακρίβεια. Για τις γνώσεις μας, η μελέτη μας αποκαλύπτει για πρώτη φορά ότι το miR-205 και miR-214 μπορεί να προσφέρει μια εναλλακτική μη επεμβατική τροπικότητα να γίνει διάκριση μεταξύ του προστάτη και υγιή άτομα και μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα αξιόπιστο βιοδείκτη για την PCA.

Η χρήση των ούρων ως δείγμα για δείκτη όγκου παραμένει πρόκληση ενόψει του γεγονότος ότι τα ούρα περιέχουν μια ευρεία ποικιλία των βιομορίων, συμπεριλαμβανομένων υψηλή ποσότητα νουκλεάσες και ριβονουκλεάσες. Ωστόσο, λόγω του μικρού μεγέθους, miRNAs είναι πιο σταθερά κατά της υποβάθμισης της RNase που υποστηρίζει την αξία τους ως βιοδείκτες [75]. Λίγες μελέτες έχουν εξετάσει τις δυνατότητες της ουροδόχου miRNAs ως διαγνωστικοί και προγνωστικοί δείκτες του καρκίνου της ουροδόχου κύστης, νεφρική νόσο, καρκίνο ουροθηλιακό, ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα και καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων [76] – [80]. Αν και έχουν επίπεδα miRNA μελετηθεί σε διάφορες ασθένειες, δεν υπάρχει μια ολοκληρωμένη μελέτη για την κυκλοφορία miRNA στα ούρα για την PCA έχει αναφερθεί μέχρι τώρα, με την εξαίρεση του Bryant et al [81] – [82]. Σημαντικά υψηλότερη συγκέντρωση του miR-107 και miR-574-3p ήταν ποσοτικά στα ούρα των ανδρών με προστάτη σε σύγκριση με τους μάρτυρες [82]. Για το καλύτερο της γνώσης μας, έχουμε αποδείξει για πρώτη φορά, ότι το miR-205 και miR-214 είναι προς τα κάτω σε προστάτη ιστών, καθώς και στα ούρα από ασθενείς του προστάτη. Αναγνωρίζουμε τον περιορισμό της μελέτης μας, που οι ιστοί και τα ούρα που λαμβάνονται δεν ήταν από τους ίδιους τους ασθενείς και το μικρό μέγεθος του δείγματος μας. Παρ ‘όλα αυτά, η μελέτη μας παρέχει απόδειξη της έννοιας που απελευθερωμένης miRNAs σε ιστούς μπορεί να διερευνηθεί ως μη επεμβατική βιοδείκτες των ούρων στην ΣΕΣΣ. Η καμπύλη ROC αποδεικνύει ότι το miR-205 και miR-214 έχουν μαζί μια ικανότητα να διακρίνουν μεταξύ υγιών ατόμων και ασθενών προστάτη με 89% ευαισθησία και 80% ειδικότητα.