Αφηρημένο

Ομοιόσταση σε ευκαρυωτικά ιστούς ρυθμίζεται αυστηρά από ένα περίπλοκο ισορροπία του prosurvival και antisurvival σήματα. Ο καταστολέας όγκων ΡΤΕΝ (φωσφατάση και tensin ομόλογο διαγράφονται στο χρωμόσωμα 10), ένα διπλής ειδικότητας φωσφατάση, παίζει ένα λειτουργικό ρόλο στην διακοπή του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης. ΝΡ-κΒ και κατάντη ρυθμιστές της (όπως VEGF) παίζουν κεντρικό ρόλο στην πρόληψη της απόπτωσης, η προώθηση της φλεγμονής και ανάπτυξης όγκου. Ως εκ τούτου, πιστεύαμε για να εκτιμηθεί η έκφραση του ΡΤΕΝ, Poly-ΑϋΡ-ριβόζη πολυμεράση (PARP), NF-κBp50, NF-κBp65 και VEGF να αξιολογηθεί η επίδραση των συμπληρωμάτων ιχθυελαίου επί αποπτωτικών και φλεγμονώδεις σηματοδότηση σε καρκίνωμα παχέος εντέρου. Αρσενικοί αρουραίοι στην ομάδα Ι έλαβε καθαρισμένο διατροφή ενώ η Ομάδα ΙΙ και ΙΙΙ έλαβε τροποποιημένη δίαιτα συμπληρωμένη με FO:CO (1:01) & amp? FO:CO (2.5:1) αντίστοιχα. Αυτά περαιτέρω υποδιαιρούνται σε ελέγχους που λάμβαναν αιθυλενοδιαμινο-τετρα-οξικό οξύ και υποβλήθηκε σε επεξεργασία των ομάδων έλαβαν διμεθυλυδραζίνη-διυδροχλωρίδιο (DMH) /εβδομάδα για 4 εβδομάδες. Τα ζώα θυσιάζονται 48 ώρες μετά την τελευταία ένεση αποτέλεσε την έναρξη φάση και ότι θυσιάστηκαν μετά από 16 εβδομάδες αποτελούσε μετά την έναρξη φάση. Έχουμε αναλύσει την έκφραση του ΡΤΕΝ, NF-κBp50, NF-κBp65 με flowcytometer και πυρηνικό εντοπισμό του ΝΡ-κΒ με ανοσοφθορισμό. PARP και VEGF αξιολογήθηκε με ανοσοϊστοχημεία. Στην αρχική φάση, τα ζώα που έλαβαν ΩΜΗ έχουν δείξει αυξημένο% των αποπτωτικών κυττάρων, PTEN, PARP, NF-κBp50, NF-κBp65 και VEGF, ωστόσο στην μετα-έναρξη φάσης καμία σημαντική αλλαγή στην απόπτωση με μειωμένη PTEN και αυξημένη PARP, NF-κBp50 , NF-κBp65 και VEGF παρατηρήθηκαν σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου. Σε θεραπεία με αμφότερες τις αναλογίες ιχθυελαίου σε αμφότερες τις φάσεις, αύξηση σε% των αποπτωτικών κυττάρων, μειωμένη ΡΤΕΝ, PARP, NF-κBp50, NF-κBp65 και VEGF τεκμηριώθηκαν σε σχέση με ϋΜΗ αγωγή ζώα με αποτέλεσμα να περισσότερο εξασκείται με υψηλότερο σιτηρέσιο στην μετα-έναρξη φάσης. Ως εκ τούτου, ιχθυέλαιο ενεργοποιεί την απόπτωση, μειώνει βλάβες στο DNA και αναστέλλει φλεγμονώδεις σηματοδότηση σε μια δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο έτσι ώστε να παρεμποδίζει την πρόοδο του καρκίνου του παχέος εντέρου

Παράθεση:. Kansal S, Bhatnagar A, Agnihotri Ν (2014) Fish λάδι καταστέλλει την ανάπτυξη των κυττάρων και μεταστατικό δυναμικό με τη ρύθμιση PTEN και NF-κΒ σηματοδότηση στον Καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 9 (1): e84627. doi: 10.1371 /journal.pone.0084627

Επιμέλεια: Subhash Gautam, Henry Ford Health System, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 30η, Σεπτεμβρίου, 2013? Αποδεκτές: 25 Νοεμ 2013? Δημοσιεύθηκε: 8 Γενάρη του 2014

Copyright: © 2014 Kansal et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση από το Ινδικό Συμβούλιο Ιατρικής Έρευνας (Immuno /18/11/27/2008-ECD-Ι). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα: Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Επιδημιολογικές μελέτες έχουν δείξει ότι η συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου αυξάνεται παγκοσμίως [1]. Ο καρκίνος είναι η ασθένεια στην οποία υπάρχει μια απορρύθμιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και κυτταρικού θανάτου. Σε καρκινικά κύτταρα, η ενδογενής μονοπάτια μεταγωγής σήματος πάρει διαταραχθεί να ανακατευθύνει τα κυτταρικά αποφάσεις από τη διαφοροποίηση και την απόπτωση σε πολλαπλασιασμό και, αργότερα, την εισβολή [2]. Φωσφατιδυλινοσιτόλης-3 κινάση (ΡΙ3Κ) μονοπατιού σηματοδότησης έχει κρίσιμο ρόλο στην προαγωγή της κυτταρικής επιβίωσης μέσω της αναστολής της απόπτωσης. ΡΙ3Κ μετατρέπει την μεμβράνη του πλάσματος των λιπιδίων φωσφατιδυλινοσιτόλης 4,5-διφωσφορικής (ΡΙΡ

2) για να φωσφατιδυλινοσιτόλη 3,4,5-τριφωσφορική (ΡΙΡ

3), η οποία στη συνέχεια προσλαμβάνει πρωτεΐνες που περιέχουν μια ομολογία πλεκστρίνης (ΡΗ) τομέα για να κυτταρικές μεμβράνες [3], όπως εξαρτάται φωσφοϊνοσιτόλης κινάση-1 (ΡϋΚ1) και Akt. Ενεργός Akt είναι το κυρίαρχο και ουσιαστική μεσολαβητής για τη ρύθμιση της απόπτωσης και πολλαπλασιασμού με τη στόχευση διαφορετικών κατάντη υποστρώματα: ΙκΒ κινάση, Bcl-2, το κυτόχρωμα c και άλλοι [4], [5]. Δραστηριότητα του μονοπατιού ΡΙ3Κ /Akt ρυθμίζεται αρνητικά από το ομόλογο φωσφατάσης και tensin διαγράφονται στο χρωμόσωμα 10 (ΡΤΕΝ). ΡΤΕΝ αποφωσφορυλιώνει την ομάδα 3ΌΗ και μετατρέπει PIP

3 σε PIP

2, που οδηγεί στην ενεργοποίηση της απόπτωσης και ως εκ τούτου λειτουργεί ως καταστολέας όγκου [6]. Οι εκθέσεις έχουν δείξει ότι η έκφραση του

ΡΤΕΝ

έχει μεταγραφικά κατασταλεί μέσω της ενεργοποίησης του ΝΡ-κΒ. Το ΝΡ-κΒ αποτελείται από μετενεργοποίησης υπομονάδας ΚεΙΑ /p65 και το δεσμευόμενο με DNA υπομονάδες ρ50 και ρ52, τα οποία υποβάλλονται σε επεξεργασία από ρ105 και ρ100 ο πρόδρομος αντίστοιχα [7]. ΝΡ-κΒ διαχωρίζεται στο κυτταρόπλασμα από την ΙκΒ αναστολέα να αποτρέπει την ενεργοποίηση της μεταγραφής του σε μη διεγερμένα συνθήκες. Οι φλεγμονώδεις κυτοκίνες προκαλούν τη φωσφορυλίωση του ΙκΒ, που με τη σειρά απελευθερώνει ΝΡ-κΒ, η οποία στη συνέχεια μετατοπίζεται στον πυρήνα και να επηρεάσουν την έκφραση των γονιδίων στόχων που έχουν βασικούς ρόλους στην αναστολή της απόπτωσης, την προώθηση της ανάπτυξης του όγκου, και την ενεργοποίηση των φλεγμονωδών αποκρίσεων οι οποίες προωθεί περαιτέρω την μετάσταση αυξάνοντας την έκφραση του vasucular ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) [8]. Η ομοιοπολική τροποποίηση πρωτεϊνών με πολυ (ADP-ριβοσυλ) ίωση αποτελεί άμεση και δραματική βιοχημική ανταπόκριση στη βλάβη του DNA. Είναι μια πανταχού παρούσα τροποποίηση πρωτεΐνη που βρίσκεται στα κύτταρα των θηλαστικών που ρυθμίζει πολλές κυτταρικές αποκρίσεις, συμπεριλαμβανομένης της επισκευής του DNA. Πολυ-ΑϋΡ-ριβόζη πολυμεράση (PARP) καταλύει τον πολυμερισμό μονάδων ΑϋΡ-ριβόζης από NAD δότη

+ μόρια επί πρωτεϊνών στόχων, με αποτέλεσμα την προσάρτηση γραμμικά ή διακλαδισμένα πολυμερή [9]. PARP εμφανίζουν πλειοτροπική κυτταρικές λειτουργίες που κυμαίνονται από τη συντήρηση των γονιδιωματικών σταθερότητα και επαναμοντελοποίηση χρωματίνης στη ρύθμιση του κυτταρικού θανάτου, εκθέτοντας έτσι το ομόλογα PARP ως μια πολλά υποσχόμενη στόχοι στη θεραπεία του καρκίνου [10].

Επιδημιολογικές μελέτες έχουν δείξει ότι ορθοκολικό καρκίνο ( CRC) είναι η τρίτη πιο κοινή μορφή καρκίνου στους άνδρες (μετά τον καρκίνο του προστάτη και του καρκίνου του πνεύμονα) και γυναίκες (μετά τον καρκίνο του μαστού και καρκίνο του πνεύμονα) [1]. Πειραματικές μελέτες έχουν δείξει ότι μια ποικιλία παραγόντων συνδέονται με την ανάπτυξη του CRC [11]. Τα προηγούμενα πειράματα που έγιναν στο εργαστήριο μας απέδειξαν ότι η χορήγηση ιχθυελαίου (η-3 PUFA) /καλαμποκέλαιο (n-6 PUFA) σε 2,5 /1 αναλογία έχει καλύτερη αποτελεσματικότητα σε σύγκριση με 1/1 για την χημειοπρόληψη του πειραματικά επαγόμενη από καρκίνο του παχέος εντέρου [12]. Μια άλλη μελέτη έδειξε ότι χημειοπροληπτική δράση διαφορετικών αναλογιών ιχθυελαίου και αραβοσιτέλαιο μπορεί να προκαλείται μέσω Ras οδού [13] σηματοδότησης. Ένα από τα άλλης μελέτης από το εργαστήριο μας απέδειξε ότι το ιχθυέλαιο (FO) και αραβοσιτέλαιο (CO) σε αναλογία 2.5:1 τροποποίησε τις παραμέτρους της μιτοχονδριακής μεμβράνης, ROS και Ca

2+ με τέτοιο τρόπο έτσι ώστε να αυξηθεί απόπτωση και στις δύο φάσεις, ενώ FO:CO σε 1:01 αναλογία αυξημένη απόπτωση μόνο μετά την έναρξη της διαδικασίας φάσης [14]. Έχει προγενέστερα δειχθεί ότι EPA και DHA αύξησε το επίπεδο ΡΤΕΝ η οποία με τη σειρά της ανέστειλε την μεταγραφή των αντι-αποπτωτικών γονιδίων, ως εκ τούτου, απέδειξαν τις ευεργετικές επιδράσεις του ιχθυελαίου επί της ανάπτυξης των κυττάρων του όγκου του μαστού [15]. Ως εκ τούτου, η παρούσα μελέτη διεξήχθη για να κατανοήσουμε τον ρόλο των διαφορετικών αναλογιών ιχθυελαίου και αραβοσιτέλαιο επί αποπτωτικών οδών και μεταστατικό δυναμικό που προκαλούνται από ΡΤΕΝ και ΝΡ-κΒ σε πειραματικά επαγόμενη καρκίνου του παχέος εντέρου.

Υλικά και Μέθοδοι

Χημικά

Ν, Ν ‘

-Dimethylhydrazine διυδροχλωρική (ΩΜΗ), ΠΑΡΑΦΟΡΜΑΛΔΕΫΔΗ (PFA), ιωδιούχου προπιδίου (PI), η Hoechst 33342 (H342) και η λευκωματίνη βόειου ορού (BSA ) ελήφθησαν από την Sigma Chemical Company, St. Louis, USA. Το μονοκλωνικό αντίσωμα έναντι ΡΤΕΝ ήταν προμηθεύονται από genescript, Piscataway, NJ, USA. Τα μονοκλωνικά αντισώματα έναντι PARP, VEGF, ΝΡ-κΒ ρ50 και NF-κΒ ρ65 τα προμηθευτήκαμε από Santacruz, CA, USA και Biosciences BD, MD, USA, αντίστοιχα. Ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC) κατσίκας αντι-IgG ποντικού

1 αγοράστηκε από Bangalore Genei, Bangalore, Ινδία. Maxepa ιχθυέλαιο [περιέχουν 180 mg εικοσιπεντανοϊκό οξύ (ΕΡΑ) και 120 mg δοκοσαεξανοϊκό οξύ (DHA) /ml] ελήφθη από τη Merck Chemicals Limited, Goa, Ινδία και αραβοσιτέλαιο περιέχον 58,8% λινελαϊκό οξύ, 26,4% ελαϊκό, 1.3% λινολενικό και 12,8% κορεσμένο λιπαρό οξύ που προμηθεύονται από την Sigma Chemical Company, St. Louis, USA. Το μίγμα ορυκτών (Agrimin) ελήφθη από την Virbac την υγεία των ζώων India Pvt. Ltd., Mumbai, Ινδία. Όλα τα άλλα χημικά που χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη ήταν αναλυτικής καθαρότητας.

Ζώα και Διατροφή

αρσενικοί αρουραίοι Wistar που ζυγίζουν 100-200 γρ ελήφθησαν από και στεγάζεται στο Κεντρικό ζώων Βουλή, Πανεπιστήμιο Panjab, Chandigarh . Τα πειραματικά πρωτόκολλα εγκρίθηκαν από την «Επιτροπή Θεσμικών Ζωικά Ηθικής, Πανεπιστήμιο Panjab, Chandigarh» (Σχετ. Αριθ. 1-12 /IAEC 3/9/2009) και διεξάγονται σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της «ινδικής Εθνικής Ακαδημίας Επιστημών» για τη χρήση και τη φροντίδα των πειραματόζωων. Τα ζώα στεγάστηκαν σε κλουβιά πολυπροπυλενίου στο σπίτι των ζώων και εγκλιματίστηκαν πριν χρησιμοποιηθούν στην πειραματική μελέτη. Νερό δόθηκε

κατά βούληση

. Μετά από μία εβδομάδα εγκλιματισμού, τα ζώα χωρίστηκαν τυχαία σε διαφορετικές ομάδες και σιτίστηκαν πειραματική δίαιτα για τέσσερις εβδομάδες. Η σύνθεση της πειραματική δίαιτα έχει δοθεί στον πίνακα 1. Τα δίαιτες παρασκευάστηκαν επί τη βάσει του Αμερικανικού Ινστιτούτου Διατροφής διατροφή προτύπου αναφοράς ΑΙΝ-76Α [16]. Η σύνθεση όλων των πειραματικών δίαιτες προσαρμόστηκε έτσι ώστε τα ζώα σε όλες τις ομάδες που θα καταναλώνουν την ίδια ποσότητα θερμίδων [12].

Η

Πειραματικός Σχεδιασμός

Ο πειραματικός σχεδιασμός παριστάνεται στο σχήμα . 1. Αρσενικοί αρουραίοι Wistar (Ν = 96) ήταν εξίσου χωρίζονται στις ακόλουθες πειραματικές ομάδες:

Οι απομονωμένες κολονοκύτταρα επωάστηκαν με Hoechst 342 (H342) βαφής και PI. Μικροφωτογραφίες αποκτήθηκαν χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού (Nikon Eclipse 80

i

) Α- ομάδα ελέγχου, Β ΩΜΗ αντιμετωπίζονται, C) FO + CO (1:01) + ΩΜΗ, D) FO + CO (2.5:1 ) + ΩΜΗ. Σκούρο μπλε χρώμα αντιπροσωπεύει τις κανονικές ζωντανά κύτταρα, αχνό μπλε ή ροζ αντιπροσωπεύει αποπτωτικά κύτταρα (Μεγέθυνση 400 ×). Ε) Γραφική παράσταση της% των ζωντανών και αποπτωτικών κυττάρων σε διαφορετικές ομάδες. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέση τιμή ± Τ.Α. για n = 4 (

** p & lt? 0,01 ελέγχου wrt,

### p & lt? 0.001 wrt ΩΜΗ).

Η

ομάδα ελέγχου)

– Αυτά τα ζώα που ελήφθη καθαρισμένο διατροφή και μια εβδομαδιαία ενδοπεριτοναϊκή ένεση 1 mM αιθυλενοδιάμινο τετρα-οξεικό οξύ (EDTA), ρΗ 6.5, για μία περίοδο 4 εβδομάδων

DMH αντιμετωπίζονται

-. Τα ζώα της ομάδας αυτής δόθηκαν καθαρίστηκαν δίαιτα μαζί με μια εβδομαδιαία ενδοπεριτοναϊκή ένεση ϋΜΗ (20 mg /kg σωματικού βάρους) για 4 εβδομάδες.

FO + CO (1:01) + EDTA

τα ζώα έλαβαν τροποποιημένη δίαιτα συμπληρωμένη με 1:01 αναλογία FO και CO. μια εβδομαδιαία ενδοπεριτοναϊκή ένεση EDTA δόθηκε επίσης για μια περίοδο 4 εβδομάδων.

FO + CO (1:01) + ΩΜΗ

ένα τροποποιημένο δίαιτα συμπληρωμένη με 1:01 αναλογία FO και CO δόθηκε στα ζώα αυτής της ομάδας και μιας εβδομαδιαίας ενδοπεριτοναϊκή ένεση ϋΜΗ για μια περίοδο 4 εβδομάδων.

FO + CO (2,5 :1) + EDTA

τα ζώα της ομάδας αυτής δόθηκαν τροποποιημένη δίαιτα συμπληρωμένη με FO + ΟΟ στον λόγο του 2.5:1 και έλαβε μια εβδομαδιαία ενδοπεριτοναϊκή ένεση EDTA για μία περίοδο 4 εβδομάδων.

FO + CO (2.5:1) + ΩΜΗ

μια τροποποιημένη δίαιτα συμπληρωμένη με FO + ΟΟ στον λόγο του 2.5:1 δόθηκε στα ζώα αυτής της ομάδας και μιας εβδομαδιαίας ενδοπεριτοναϊκή ένεση ϋΜΗ για περίοδο 4 εβδομάδες.

Κάθε ομάδα υποδιαιρείται για μελέτες σχετικά με την έναρξη και μετά την έναρξη φάση και τα ζώα ήταν εξίσου κατανεμημένα μεταξύ των δύο φάσεων. Τα ζώα που θυσιάστηκαν 48 ώρες μετά την τελευταία EDTA /ενέσεις ΩΜΗ αποτέλεσε την εναρκτήρια φάση [17] και τα ζώα που εκτρέφονται για 12 εβδομάδες μετά την θεραπευτική αγωγή αποτελούσε τη μελέτη μετά την έναρξη φάση. Όλα τα ζώα θανατώθηκαν με αυχενική εξάρθρωση.

Απομόνωση των κολονοκύτταρα

Τα κολονοκύτταρα απομονώθηκαν με την μέθοδο του Sanders [18]. Το σύνολο του παχέος εντέρου αποκόπηκε διαμήκως για να εκτεθεί αυλό και τοποθετούνται σε θερμό Ca

+ και Mg2

2+ ρυθμισμένο διάλυμα άλατος ελεύθερου Hank (HBSS), 30 mmol /l EDTA, 5 mmol /l διθειοθρεϊτόλη (DTT) , 0,1% BSA (αλβουμίνη βόειου ορού). Μετά από 15 λεπτά ανακίνησης επώαση στους 37 ° C, το βλεννογόνου πλευρά απαλά ξύνεται για να απομακρυνθούν τα άθικτα κρύπτες. Τα απομονωμένα κύτταρα στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκαν στα 2200 rpm και πλύθηκαν δύο φορές σε θερμό HBSS που περιέχει 1,3 mM ΟαΟ

2, 1 mM θειικό μαγνήσιο

4 και 0,1% BSA. Τα κύτταρα μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα αιμοκυτταρόμετρο και η βιωσιμότητα τους ελέγχθηκε με μέθοδο εξαίρεσης κυανούν τρυπανίου [19].

Εκτίμηση των ζωντανών και αποπτωτικών κυττάρων

Το ποσοστό των ζωντανών και αποπτωτικών κυττάρων αξιολογήθηκαν με ανοσοφθορισμό . Απομονωμένα κολονοκύτταρα (1-2 × 10

6) επαναιωρήθηκαν σε 1 ml PBS και επωάστηκαν με 10 μΙ Hoechst 342 (H342) χρωστική (1 mM) στους 37 ° C για 1 ώρα. Τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές και επαναιωρήθηκαν σε PBS. Στη συνέχεια τα κύτταρα επωάστηκαν με 10 μΐ ΡΙ (1 mg /ml) στους 37 ° C για 10 λεπτά. Τα κύτταρα και πάλι πλύθηκαν και επαναιωρήθηκαν σε PBS. Μικροφωτογραφίες αποκτήθηκαν χρησιμοποιώντας το μικροσκόπιο φθορισμού (Nikon Eclipse 80

i

) και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό Northern Eclipse απεικόνισης Elements-D (NIS-D). Μικροφωτογραφίες των κυττάρων με H342 και PI συγχωνεύθηκαν. Σε νέα μικροφωτογραφίες, κύτταρα με ροζ χρώμα κύτταρα και κύτταρα με σκούρο μπλε χρώμα στην περιφέρεια αντιπροσωπεύουν αποπτωτικών κυττάρων που έχουν συμπυκνωθεί /κατακερματισμένο DNA, ενώ λιποθύμησε μπλε όλο θεωρήθηκαν ότι είναι τα φυσιολογικά κύτταρα.

Ανάλυση της PTEN, ΝΡ κΒ p50 και NF-κΒ p65 από flowcytometer

Οι ενδοκυτταρικές πρωτεΐνες εκτιμήθηκαν από flowcytometer. Οι κολονοκύτταρα μονιμοποιήθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη για 20 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά από πλύση με PBS δύο φορές, οι κολονοκύτταρα κατέστησαν διαπερατές με 100% παγωμένης μεθανόλης (προστέθηκε στάγδην) και αφήνεται για 15 λεπτά στους -20 ° C. Τα κύτταρα πλύθηκαν και πάλι σε κρύο PBS δύο φορές. Περίπου 1 χ 10

6 κύτταρα προστέθηκαν σε ένα σωληνάριο FACS, επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό σαπωνίνης (PBS που περιέχει 0.1% σαπωνίνη και 2% BSA) και επωάστηκαν για 30 λεπτά στους 4 ° C. Τα διαφορετικά κλάσματα του κολονοκύτταρα στη συνέχεια επωάστηκαν με αραιωμένο ΡΤΕΝ, ΝΡ-κΒ ρ50 και NF-κΒ ρ65 (1:100) μονοκλωνικά αντισώματα για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια πλένονται μια φορά με ρυθμιστικό σαπωνίνης. Οι κολονοκύτταρα στη συνέχεια επωάστηκαν με αραιωμένο συζευγμένο με FITC δεύτερο αντίσωμα για 45 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Τα κύτταρα πλύθηκαν μία φορά με ρυθμιστικό σαπωνίνης και στη συνέχεια με PBS. Τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε PBS. Η απόκτηση από κάθε δείγμα πραγματοποιήθηκε σε FACS Canto (BD Biosciences, Η.Π.Α.) και το συλλεγέν δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό BD Diva FACS. Οι επόμενες έλεγχοι για PTEN, NF-κΒ ρ50 και NF-κΒ p65 επίσης τρέχουν ταυτόχρονα. Τα αποτελέσματα του ΡΤΕΝ, ΝΡ-κΒ ρ50 και NF-κΒ ρ65 αντιπροσωπεύθηκαν ως η μέση τιμή της Καθαρής MFI (MFI των κυττάρων σε επεξεργασία με Ab – MFI των κυττάρων μόνο)

Εντοπισμός του ΝΡ-κΒ ρ50 και NF. -κB ρ65 με ανοσοφθορισμό

Τα απομονωμένα σταθερά κολονοκύτταρα πλύθηκαν με παγωμένο PBS δύο φορές. Τα κύτταρα ξηράνθηκαν σε γυάλινα πλακίδια (VWR Scientific, Thane, Maharashtra, Ινδία) και αφέθηκαν να προσκολληθούν για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου αέρα. Τα κύτταρα κατέστησαν διαπερατά με 0,5% Triton Χ-100 και μη-ειδική δέσμευση παρεμποδίστηκε χρησιμοποιώντας 2% (w /v) BSA σε PBS για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, πριν από την επώαση με αραιωμένο μονοκλωνικό αντίσωμα έναντι του ΝΡ-κΒ ρ50 (1 :50) και NF-κΒ ρ65 (1:50) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Τα δείγματα πλύθηκαν με PBS, επωάστηκαν με αραιωμένο συζευγμένο με FITC αντι-ποντικού IgG

1 για 2 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου και πάλι πλύθηκαν με PBS. Οι τομές βάφτηκαν αντίθετα με ΡΙ για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια πλένονται με PBS. Οι τομές τοποθετούνται και σφραγίζονται με τη σαφή βαφής νυχιών. Οι εικόνες αποκτήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φθορισμού (Nikon Eclipse 80

i

) και αναλύθηκαν με τη Βόρεια Eclipse απεικόνισης Στοιχεία-D (NIS-D) λογισμικού. Μικροφωτογραφίες των κυττάρων με NF-κΒ p50 /p65 και PI συγχωνεύθηκαν. Μετά τη συγχώνευση των μικροφωτογραφίες, πράσινο χρώμα υποδεικνύει την έκφραση του ΝΡ-κΒ ρ50 /ρ65 στο κυτταρόπλασμα του κυττάρου, το κόκκινο χρώμα αντιπροσωπεύει πυρηνική χρώση με ΡΙ και κίτρινο χρώμα υποδεικνύει την εντόπιση του ΝΡ-κΒ ρ50 /ρ65 στον πυρήνα του κυττάρου .

Ανοσοϊστοχημική εκτίμηση του VEGF και PARP

τα τμήματα ιστού (πάχους 2-3 μm) τοποθετήθηκαν σε πλάκες επικαλυμμένες με πολυ-L-λυσίνη. Οι πλάκες θερμάνθηκαν στους 65 ° C πριν αποπαραφινώσεως σε ξυλόλιο. Τα πλακίδια επανυδατώθηκαν με διαδοχικές διαλύματα αλκοόλης (100%, 90%, 70%, 50%, 30%). Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποσβέστηκε με επώαση των αντικειμενοφόρων πλακών με 3% Η

2O

2 (σε μεθανόλη) για 20 λεπτά στους 4 ° C. Τα τμήματα αποκλείστηκαν με χρήση 2% BSA σε PBS για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Το αντιγόνο ανάκτηση έγινε με ρυθμιστικό διάλυμα ανάκτησης (ρΗ 6,0) με τη χρήση του μικροκυμάτων (μικροκύματα 5 λεπτά για VEGF και 5 λεπτά × 2 για PARP). Τα πλακίδια αφέθηκαν να κρυώσουν για 20 λεπτά. Μετά ανάκτηση αντιγόνου, οι τομές επωάστηκαν με VEGF (1:100) και PARP (1:50) αντισωμάτων για μία νύχτα σε 4 ° C σε υγρό θάλαμο. Τα πλακίδια πλύθηκαν σε PBS και ακολούθησε επώαση του 2 ώρα με συζευγμένο με HRP αντίσωμα αντι ποντικού (1:100) για τον VEGF και HRP-συζευγμένο αντίσωμα αντι κουνελιού (1:100) για PARP στους 37 ° C σε υγρό θάλαμο. Τα πλακίδια έγιναν ορατά χρησιμοποιώντας DAB και H

2O

2. Οι τομές στη συνέχεια αντιχρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη επί 2 λεπτά, ακολουθούμενο από έκπλυση σε απιονισμένο H

2O. Διαφάνειες ήταν αφυδατωμένο και τοποθετείται με DPX για ανάλυση. Οι εικόνες ελήφθησαν και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το Nikon Eclipse 80

i

μικροσκόπιο (Ιαπωνία) και της Βόρειας Eclipse λογισμικό απεικόνισης Στοιχεία-D (NIS-D).

Στατιστική Ανάλυση

Η αποτελέσματα εκφράζονται ως μέσος όρος ± SD Οι διαφορές μεταξύ των ομάδων εκτιμήθηκαν με ΑΝΟνΑ αφού βεβαιωθεί κανονικότητα με οικόπεδο Q-Q. Το λογισμικό που χρησιμοποιήθηκε για τη στατιστική ανάλυση ήταν το SPSS 18.0 πακέτο λογισμικού για τα παράθυρα. Η στατιστική σημαντικότητα καθορίστηκε με μονόδρομη ANOVA με δοκιμασίες Bonferroni πολλαπλή υστέρων σύγκριση hoc, και οι διαφορές θεωρήθηκαν σημαντικές για την P & lt?. 0.05

Αποτελέσματα

Επίδραση των συμπληρωμάτων των ιχθυελαίων στην απόπτωση /νέκρωση στο πειραματικά προκληθέντα καρκίνο του παχέος εντέρου

στην παρούσα μελέτη,% αποπτωτικών κυττάρων υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας ανοσοφθορισμού και τα αποτελέσματα απεικονίζονται στην εικ. 1 και 2. Στη φάση έναρξης, τα ζώα που λαμβάνουν DMH έχουν δείξει μια σημαντική αύξηση σε% των αποπτωτικών κυττάρων σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου (Σχήμα 1). Ωστόσο, κατά την κατεργασία με FO + CO (1:01) + ΩΜΗ και FO + CO (2.5:1) + ΟΜΗ, σημαντική μείωση σε% των ζωντανών κυττάρων και μια σημαντική αύξηση σε% αποπτωτικών κυττάρων παρατηρήθηκε σε σύγκριση με ϋΜΗ μεταχείρισης των ζώων. Έχει παρατηρηθεί ότι σε μετα-κίνηση φάση, κατά την κατεργασία με DMH, δεν υπήρξε σημαντική μεταβολή της% των αποπτωτικών κυττάρων σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου (Σχήμα 2). Κατά την παραλαβή τόσο τις αναλογίες, ιχθυελαίου και αραβοσιτέλαιο, έχει αποδειχθεί ότι μία σημαντική μείωση σε% των ζωντανών κυττάρων και σημαντική βελτίωση όσον% των αποπτωτικών κυττάρων σε σύγκριση με DMH μεταχείρισης των ζώων.

Το απομονωμένο κολονοκύτταρα επωάστηκαν με Hoechst 342 (H342) βαφής και PI. Μικροφωτογραφίες αποκτήθηκαν χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού (Nikon Eclipse 80

i

) Α- ομάδα ελέγχου, Β ΩΜΗ αντιμετωπίζονται, C) FO + CO (1:01) + ΩΜΗ, D) FO + CO (2.5:1 ) + ΩΜΗ. Σκούρο μπλε χρώμα αντιπροσωπεύει τις κανονικές ζωντανά κύτταρα, αχνό μπλε ή ροζ αντιπροσωπεύει αποπτωτικά κύτταρα (Μεγέθυνση 400 ×). Ε) Γραφική παράσταση της% των ζωντανών και αποπτωτικών κυττάρων σε διαφορετικές ομάδες. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέση τιμή ± Τ.Α. για n = 4 (

### p & lt? 0.001 wrt ΩΜΗ).

Η

Τροποποίηση στην έκφραση της ΡΤΕΝ σε θεραπεία με διαφορετικές αναλογίες ιχθυελαίου

Μετά την αξιολόγηση των αλλαγών σε% των αποπτωτικών κυττάρων σε λήψη αυτών των PUFAs, εμείς τότε σκέφτηκε να εξετάσει την έκφραση του ρυθμιστή της απόπτωσης. Ο καταστολέας όγκων ΡΤΕΝ (φωσφατάση και tensin ομόλογο) είναι η πιο σημαντικός ρυθμιστής αποπτωτικό μονοπάτι σηματοδότησης. Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, η έκφραση του ΡΤΕΝ υπολογίστηκε και τα αποτελέσματα της ΡΤΕΝ δίνονται στον Πίνακα 1. Κατά την κίνηση φάση, ο κυτταρομετρίας ροής δεδομένων που απεικονίζεται ότι η έκφραση του ΡΤΕΝ ήταν σημαντικά αυξημένα σε ΩΜΗ αγωγή ζώα σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου, ενώ για αγωγή των ζώων με διαφορετικές αναλογίες FO + CO, ΡΤΕΝ αυξήθηκε σημαντικά σε σχέση με τα ζώα ελέγχου, αλλά η αύξηση ήταν μικρότερη σε σύγκριση με DMH μεταχείρισης των ζώων. Τα μετα-δεδομένα έναρξη φάσης έδειξε ότι η έκφραση ΡΤΕΝ μειώθηκε σημαντικά σε θεραπεία με ΩΜΗ σε σχέση με τον έλεγχο των ζώων. Ωστόσο, κατά την κατεργασία τόσο με τις αναλογίες του ιχθυελαίου και το αραβοσιτέλαιο, η έκφραση ΡΤΕΝ αυξήθηκε σημαντικά. Η αύξηση ήταν πιο σημαντική με FO + CO (2.5:1) + ΩΜΗ στην μετα-έναρξη φάσης.

Επίδραση των συμπληρωμάτων ιχθυελαίου και αραβοσιτέλαιο σχετικά με τη δραστηριότητα της PARP

PARP είναι ένα άφθονο ένζυμο δέσμευσης του DNA που ανιχνεύει τα διαλείμματα σκέλος του DNA. ένζυμο PARP παίζει ένα σημαντικό ρόλο σε διάφορες κυτταρικές λειτουργίες, καθιστώντας έτσι PARP ως μια πολλά υποσχόμενη στόχος στη θεραπεία του καρκίνου [10]. Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, η δραστηριότητα του PARP αναλύθηκε να εξετάσει την επίδραση διαφορετικών αναλογιών ιχθυελαίου και αραβοσιτέλαιο σε ένζυμο επιδιόρθωσης του DNA. Τα αποτελέσματα της ανοσοϊστοχημική χρώση της PARP φαίνεται στο σχ. 3. Η κολονικό βλεννογόνο των ζώων ελέγχου έχει απεικονίζονται πολύ μέτρια ή ασθενή έκφραση της PARP. Σε θεραπεία με DMH, έκφραση ΡΑΚΡ επαυξήθηκε και στις δύο φάσεις, σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου. Τα κύτταρα ήταν έντονα θετικά για την PARP στη μετά την έναρξη της διαδικασίας φάσης σε σύγκριση με την φάση έναρξης. Ωστόσο, για την παραλαβή των διαφορετικές αναλογίες ιχθυελαίου και αραβοσιτέλαιο, η έκφραση της PARP απορρίφθηκε σε σύγκριση με ΩΜΗ ζώων που έλαβαν θεραπεία με την επίδραση που προφέρεται με FO + CO (2.5:1) + ΩΜΗ στην μετα-έναρξη φάσης.

Η ανοσοϊστοχημική χρώση της PARP σε φορμόλη σταθερά ενσωματωμένα σε παραφίνη τμήματα του ιστού του παχέος εντέρου. Α-Δ απεικονίζει τις αντιπροσωπευτικές μικροφωτογραφίες την έναρξη της διαδικασίας φάσης και E-H αντιπροσωπεύει την μετα-έναρξη φάσης ( «βέλος» απεικονίζει την έκφραση του PARP). (Α και Ε) Έλεγχος, (Β και F) ΩΜΗ θεραπεία, (C και G) FO + CO (1:01) + ΩΜΗ, (D και H) FO + CO (2.5:1) + ΩΜΗ (Μεγέθυνση 400Χ) .

Η

ρύθμιση προς τα κάτω του ΝΡ-κΒ υπομονάδες για συμπλήρωση ιχθυελαίου

Η ενεργοποίηση του NF-κΒ μονοπάτι είναι ένα κρίσιμο γεγονός στην ανάπτυξη του όγκου φλεγμονή που προκαλείται και την εξέλιξη [20]. ΝΡ-κΒ είναι ένας μεταγραφικός παράγοντας πανταχού παρούσα, που παίζει κεντρικό ρόλο στην επιβίωση των κυττάρων και θάνατο των κυττάρων [21]. ΝΡ-κΒ υπάρχει στο κυτταρόπλασμα σε δεσμευμένη μορφή με την ΙκΒ. Η φωσφορυλίωση της σερίνης της ΙκΒ πρωτεϊνών από ΙκΒ κινάσες (IKKS), στοχεύει το ΙκΒ για την υποβάθμιση του πρωτεασώματος. Οι ελεύθερες υπομονάδες ΝΡ-κΒ (ρ50 και ρ65) που μεταφέρονται στον πυρήνα σαν ένα διμερές και στόχευση των υποκινητών που οδηγούν στην ενεργοποίηση των γονιδίων που εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την εισβολή και κυτταρικό θάνατο. NF-κΒ ρυθμίζεται αρνητικά από ΡΤΕΝ και περαιτέρω στόχους πολλές αντι-αποπτωτικά γονίδια όπως Bcl-2 και Bcl-XL [15]. Ως εκ τούτου, μετά την αξιολόγηση της έκφρασης του ΡΤΕΝ, μπορούμε τότε σκέφτηκε να αναλυθεί η έκφραση καθώς και εντοπισμός των δύο υπομονάδων του ΝΡ-κΒ σε πειραματικά επαγόμενη καρκίνου του παχέος εντέρου.

Έκφραση και εντοπισμός του ΝΡ-κΒ ρ65

η έκφραση του ΝΡ-κΒ ρ65 έχει μετρηθεί με flowcytometer και ο εντοπισμός εξετάστηκε χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού. Τα αποτελέσματα της κυτταρομετρίας ροής για την έναρξη φάσης που απεικονίζεται ότι η έκφραση του ΝΡ-κΒ ρ65 έχει αυξηθεί σημαντικά κατά την επεξεργασία με ϋΜΗ σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου. Σχετικά με τη θεραπεία με FO + CO (1:01) + ΟΜΗ, NF-κΒ p65 περαιτέρω επαυξημένης σημαντικά, ωστόσο, σχετικά με τη λήψη FO + CO (2.5:1) + ΩΜΗ, η έκφραση του NF-κΒ ρ65 μειώθηκε σημαντικά σε σύγκριση με ΩΜΗ αγωγή ζώα (Πίνακας 2). Τα δεδομένα μετά την έναρξη φάση έχει αποκαλύψει ότι σχετικά με τη χορήγηση DMH, η έκφραση του ΝΡ-κΒ ρ65 αυξήθηκε σημαντικά σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου. Σε θεραπεία τόσο με τις αναλογίες του FO + CO + DMH, η έκφραση ήταν σημαντικά μειωμένη σε σχέση με την ομάδα που έλαβε αγωγή DMH. Η μείωση ήταν πιο σημαντική με FO + CO (2.5:1) + ΩΜΗ σε σύγκριση με FO + CO (1:01) + ΩΜΗ.

Η

Όπως τα ενεργοποιημένα υπομονάδες NF-κΒ μετατοπίζονται από το κυτταρόπλασμα προς πυρήνας, ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, πυρηνικό εντοπισμό του ΝΡ-κΒ αξιολογήθηκε επίσης. Τα αποτελέσματα του εντοπισμού του ΝΡ-κΒ ρ65 συνοψίζονται στο Σχ. 4. Τα δεδομένα ανοσοφθορισμού αποκάλυψε ότι κατά την επεξεργασία με ϋΜΗ, το% των κυττάρων που έχουν ΝΡ-κΒ ρ65 στον πυρήνα και στο κυτταρόπλασμα αυξήθηκε σημαντικά σε αμφότερες τις φάσεις σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου (Εικόνα 4Β & amp?. 4F). Ωστόσο, κατά την κατεργασία με διαφορετικές αναλογίες ιχθυελαίου και αραβοσιτέλαιο, εντοπισμός του ΝΡ-κΒ ρ65 από κυτταρόπλασμα στον πυρήνα μειώθηκε με την επίδραση είναι πιο αισθητή με FO + CO (2.5:1) + ΩΜΗ στην μετα-κίνηση φάση .

Οι απομονωμένες σταθερό κολονοκύτταρα ήταν διαπερατά και επωάστηκαν με μονοκλωνικό αντίσωμα έναντι του NF-κΒ p65 και των αντίστοιχων FITC δευτερογενές αντίσωμα συζευγμένο Τα τμήματα βάφτηκαν αντίθετα με PI να απεικονίσει πυρηνικού εντοπισμού. Red φθορισμός παριστά την πυρηνική χρώση με ΡΙ χωρίς έκφραση του NF-κΒ (απεικονίζεται με «διακεκομμένη βέλος») και πράσινο φθορισμό υποδηλώνει την έκφραση του ΝΡ-κΒ ρ65. Κίτρινο χρώμα δείχνει την εντόπιση του NF-κΒ p65 από το κυτταρόπλασμα στον πυρήνα (που αντιπροσωπεύεται από το «βέλος»). Α-Δ απεικονίζει τη φάση έναρξης και E-H αντιπροσωπεύει την μετα-έναρξη φάσης. (Α και Ε) Έλεγχος, (Β και F) ΩΜΗ θεραπεία, (C και G) FO + CO (1:01) + ΩΜΗ, (D και H) FO + CO (2.5:1) + ΩΜΗ (Μεγέθυνση 400Χ) .

η

έκφραση και εντοπισμός του NF-κΒ p50

Flow-κυτταρομετρίας ανάλυση έδειξε ότι η θεραπεία με καρκινογόνο, έκφραση του NF-κΒ ρ50 αυξήθηκε σημαντικά (p & lt? 0.001) σε αμφότερες τις φάσεις σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου (πίνακας 3). Ωστόσο, κατά την κατεργασία με FO + CO (1:01) + ΩΜΗ και FO + CO (2.5:1) + DMH, η έκφραση του ΝΡ-κΒ ρ50 μειώθηκε σημαντικά (ρ & lt? 0.001) σε σύγκριση με ϋΜΗ αγωγή ζώα σε αμφότερες την έναρξη καθώς και μετά την έναρξη φάση.

η

στην παρούσα μελέτη, ο εντοπισμός του NF-κΒ p50 από το κυτταρόπλασμα στον πυρήνα έγινε από διπλή επισήμανση. δεδομένα ανοσοφθορισμού αποκάλυψε ότι κατά την επεξεργασία με ϋΜΗ, το% των κυττάρων με ΝΡ-κΒ ρ50

+ στον πυρήνα και το κυτταρόπλασμα είχαν αυξηθεί σημαντικά και στις δύο φάσεις, σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου (Σχήμα 5Β & amp?. 5F). Ωστόσο, σε θεραπεία με διαφορετικές αναλογίες ιχθυελαίου και αραβοσιτέλαιο, ο εντοπισμός του NF-κΒ p50 από το κυτταρόπλασμα στον πυρήνα απορρίφθηκε με το αποτέλεσμα να είναι πιο έντονη με FO + CO (2.5:1) + ΩΜΗ στη μετά την έναρξη της διαδικασίας φάση.

Τα απομονωμένα σταθερά κολονοκύτταρα έγιναν διαπερατά και επωάστηκαν με μονοκλωνικό αντίσωμα έναντι του ΝΡ-κΒ ρ65 και τις αντίστοιχες FITC δευτερογενές αντίσωμα συζευγμένο Οι τομές βάφτηκαν αντίθετα με ΡΙ για να απεικονίσει τον πυρηνικό εντοπισμό. Red φθορισμός παριστά την πυρηνική χρώση με ΡΙ χωρίς έκφραση του NF-κΒ (απεικονίζεται με «διακεκομμένη βέλος») και πράσινο φθορισμό υποδηλώνει την έκφραση του ΝΡ-κΒ ρ65. Κίτρινο χρώμα δείχνει την εντόπιση του NF-κΒ p65 από το κυτταρόπλασμα στον πυρήνα (που αντιπροσωπεύεται από το «βέλος»). Α-Δ απεικονίζει τη φάση έναρξης και E-H αντιπροσωπεύει την μετα-έναρξη φάσης. (Α και Ε) Έλεγχος, (Β και F) ΩΜΗ θεραπεία, (C και G) FO + CO (1:01) + ΩΜΗ, (D και H) FO + CO (2.5:1) + ΩΜΗ (Μεγέθυνση 400Χ) .

η

Επίδραση των ιχθυελαίων για VEGF τόσο στην έναρξη και μετά την έναρξη φάση του καρκίνου του παχέος εντέρου

η αγγειογένεση είναι ένα βασικό συστατικό της φυσιολογικής εμβρυϊκής ανάπτυξης, που απαιτούν πολύπλοκες αλληλεπιδράσεις μεταξύ των ενδοθηλιακών κυττάρων και κύτταρα στον περιβάλλοντα ιστό. Σηματοδότηση από τον VEGF και των υποδοχέων VEGFRs τους παίζουν σημαντικό ρόλο σε αυτές τις αλληλεπιδράσεις [22]. VEGF δεσμεύεται με αυτούς τους υποδοχείς και διεγείρει πολλαπλασιασμό των ενδοθηλιακών κυττάρων, μετανάστευση και την επιβίωση. Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη, η επίδραση των συμπληρωμάτων ιχθυελαίου και αραβοσιτέλαιο για την έκφραση του VEGF υπολογίστηκε. Τα αποτελέσματα της ανοσοϊστοχημική χρώση του VEGF για την τρέχουσα μελέτη που απεικονίζεται στην εικ. 6. Η κολονικό βλεννογόνο των ζώων ελέγχου έχει απεικονίζεται ένα αδύναμο έκφραση του VEGF στα ενδοθηλιακά κύτταρα. Σε θεραπεία με DMH, η έκφραση του VEGF ήταν αυξημένη στα ενδοθηλιακά κύτταρα του παχέος εντέρου και στα δύο φάσεις σε σύγκριση με τα ζώα ελέγχου. Η αύξηση στην έκφραση του VEGF ήταν εντονότερη στην μετα-μύηση φάση σε σύγκριση με την φάση έναρξης. Κατά τη λήψη της FO + CO (1:01) + ΟΜΗ, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην έκφραση του VEGF στη φάση έναρξης, σε σύγκριση με το ϋΜΗ αγωγή ζώα, ωστόσο, η θεραπεία με FO + CO (1:01) + ΩΜΗ στην μετα-έναρξη φάσης, η έκφραση του VEGF μειώθηκε. Κατά την παραλαβή FO + CO (2.5:1) + DMH, η έκφραση του VEGF μειώθηκε σε αμφότερες τις φάσεις σε σύγκριση με DMH μεταχείρισης των ζώων.

Η έκφραση του VEGF αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία σε σταθεροποιημένα με φορμαλίνη τομές εμβαπτισμένες σε παραφίνη του ιστού του παχέος εντέρου. Α-D απεικονίζει τα αντιπροσωπευτικές μικροφωτογραφίες φάσης έναρξης και Ε-Η παριστάνει την μετα-κίνηση φάσης (→ απεικονίζει την έκφραση του VEGF). (Α και Ε) Έλεγχος, (Β και F) ΩΜΗ θεραπεία, (C και G) FO + CO (1:01) + ΩΜΗ, (D και H) FO + CO (2.5:1) + ΩΜΗ (Μεγέθυνση 400Χ) .

η

Συζήτηση

έχει αποδειχθεί από τις προηγούμενες εκθέσεις ότι το DHA και EPA, δύο δραστικά συστατικά του ιχθυελαίου, εμποδίζουν τη μεταγραφή του εξαρτάται από NF-κΒ γονίδια και αυξάνει την έκφραση του ΡΤΕΝ σε κύτταρα του παγκρέατος, του μαστού και του καρκίνου του παχέος εντέρου. Οι προηγούμενες μελέτες που διεξήχθησαν στο εργαστήριο μας απέδειξαν ότι FO + CO (2.5:1) έχει καλύτερη αποτελεσματικότητα χημειοπροληπτική σε σύγκριση με FO + CO (1:01) σε πειραματικά επαγόμενη καρκίνου του παχέος εντέρου [12]. Ως εκ τούτου, η τρέχουσα μελέτη διεξήχθη για να κατανοήσουμε τον μηχανισμό της χημειοπροληπτική δράση αυτών των διατροφικών ΡΙΙΡΑδ σχετικά με τα αποπτωτικά μονοπάτια. Τα αποτελέσματα της μελέτης μας έχουν αποδείξει ότι η προσθήκη ιχθυελαίου και αραβοσιτέλαιο στη διατροφή ασκεί διαφορικό chemopreventive αποτέλεσμα με την αύξηση της απόπτωσης που μπορεί να προκαλείται μέσω μεταβολή στην έκφραση του ΡΤΕΝ και σηματοδότησης ΝΡ-κΒ.

Α κύριος ρυθμιστής της απόπτωσης είναι η οδός ΡΤΕΝ. ΡΤΕΝ ανταγωνίζεται δραστικότητα ΡΙ3Κ μετατρέποντας ΡΙΡ3 πίσω στο ΡΙΡ2, και με αυτόν τον τρόπο, μειώνοντας την κυτταρική πισίνα του ΡΙΡ3 [23], [24]. Η απώλεια της λειτουργίας του γονιδίου καταστολής όγκου ΡΤΕΝ, είναι η πιο κοινή γενετική ανωμαλία στον καρκίνο [25].