Αφηρημένο

Ιστορικό

Κυκλοφορούν ελεύθερα κυττάρων DNA (cfDNA) στο πλάσμα έχει δείξει δυναμικό ως βιοδείκτη σε διάφορες μορφές καρκίνου και θα μπορούσε να αποτελέσει σημαντική πηγή για την ανίχνευση μετάλλαξης του όγκου. Οι στόχοι της μελέτης μας ήταν να καθοριστεί η κανονική σειρά cfDNA σε μια ομάδα υγιών ατόμων και να την συγκρίνει με τέσσερις ομάδες του μεταστατικού καρκίνου του παχέος εντέρου (mCRC) ασθενείς. Ερευνήσαμε επίσης την προγνωστική αξία της cfDNA και ανέλυσε τον όγκο-ειδικό

KRAS

μεταλλάξεις στο πλάσμα.

Μέθοδοι

Η μελέτη ήταν μια προοπτική αξιολόγησης βιοδείκτη σε τέσσερις διαδοχικές Φάση ΙΙ δοκιμές, συμπεριλαμβανομένων 229 ασθενών με χημειοθεραπεία πυρίμαχα mCRC και 100 υγιή άτομα. Το πλάσμα ελήφθη από μια EDTA αίμα-δείγμα, και ο συνολικός αριθμός των αλληλομόρφων DNA και

KRAS

μεταλλαγμένα αλληλόμορφα αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα in-house ΟΠΛΑ-qPCR όπως περιγράφηκε προηγουμένως.

Αποτελέσματα

επίπεδα διάμεση cfDNA ήταν υψηλότερα σε mCRC σε σύγκριση με τους μάρτυρες (p & lt? 0,0001). ROC ανάλυση αποκάλυψε μια AUC των 0,9486 (p & lt? 0,00001). Τα δεδομένα έδειξαν εξασθενημένη OS με την αύξηση των επιπέδων της βασικής γραμμής cfDNA τόσο κατά την κατηγοριοποίηση των ασθενών με τεταρτημόρια της cfDNA και σε χαμηλή ή υψηλή ομάδες cfDNA με βάση το ανώτερο φυσιολογικό εύρος της ομάδας ελέγχου (διάμεση OS 10.2 (08/03 έως 11/07) και 5.2 (4.6 έως 5.9 ) μήνες, αντίστοιχα, HR 1,78, p = 0,0006). Η πολυπαραγοντική ανάλυση επιβεβαίωσε μια ανεξάρτητη προγνωστική αξία της cfDNA (HR 1,5 (95% CI 1,3-1,7) για κάθε αύξηση στο τεταρτημόριο cfDNA). Η συνολική συμφωνία του

KRAS

μεταλλάξεις στο πλάσμα και στους ιστούς ήταν υψηλό (85%).

Συμπεράσματα

Τα στοιχεία αυτά επιβεβαιώνουν την προγνωστική αξία της μέτρησης cfDNA στο πλάσμα και χρησιμότητα για την ανίχνευση μεταλλάξεων με τη μέθοδο που παρουσιάζεται

Παράθεση:. Spindler KLG, Pallisgaard Ν, Andersen RF, Brandslund Ι, Jakobsen Α (2015) Κυκλοφορούν Δωρεάν DNA ως βιοδεικτών και Πηγή Mutation ανίχνευση σε μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 10 (4): e0108247. doi: 10.1371 /journal.pone.0108247

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Libing Song, η Sun Yat-sen University Κέντρο Καρκίνου, ΚΙΝΑ

Ελήφθη: 20 Ιούλη του 2013? Αποδεκτές: 27 Αύγ 2014? Δημοσιεύθηκε: 13, Απρ 2015

Copyright: © 2015 Spindler et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση: Η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από την έρευνα Counsil Vejle Νοσοκομείο και Tryg Fonden. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, συλλογή και ανάλυση δεδομένων, desicion να δημοσιεύει, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

μεταστατικό καρκίνο παχέος εντέρου (mCRC) κατέχει την κακή πρόγνωση και παρά τις πρόσφατες βελτιώσεις αντίσταση στη θεραπεία εξακολουθεί να είναι μια μεγάλη πρόκληση. Η αναζήτηση για την καλύτερη κριτήρια επιλογής για τη θεραπεία μαζί με νέες δυνητικά αποτελεσματικό θεραπευτικά σχήματα για τη χημειοθεραπεία ανθεκτική νόσο επέστησε ιδιαίτερη προσοχή κατά τη διάρκεια της τελευταίας δεκαετίας. Αυτές περιλαμβάνουν την ανάπτυξη νέων μέσων, ο εντοπισμός των γενετικών αλλαγών υπεύθυνη για την αντίσταση και την αναζήτηση για βιοδείκτες για καθοδήγηση κατά τη διάρκεια της θεραπείας.

Η παρουσία κυκλοφορούντων κυττάρων χωρίς DNA (cfDNA) στο αίμα αναφέρθηκε περισσότερα από 60 χρόνια πριν [1]. Είναι ενεργά απελευθερώνεται από την κανονική και θανών κύτταρα, αποπίπτουν και νεκρωτική διαδικασίες, καθώς και από πολύπλοκες αλληλεπιδράσεις μεταξύ του όγκου και των παρακείμενων μη νεοπλασματικά κύτταρα [2-5]. Ελεύθερα κυττάρων DNA μπορεί να ανιχνευθεί σε ορό, πλάσμα και άλλα σωματικά υγρά [6], αλλά οι μηχανισμοί της απελευθερώσεως στην κυκλοφορία του αίματος και την προέλευση του DNA είναι πολύ από πλήρως κατανοητές. Περαιτέρω διευκρινίσεις απαιτείται να γίνει μια αξιόπιστη διάκριση μεταξύ κακοήθους αυξήσεις και μη-καρκινικές μεταβολές σε cfDNA.

Οι μελέτες έχουν δείξει ότι το επίπεδο των cfDNA αυξάνεται σε δύο ασθενείς με καρκίνο [7-8] και σε διάφορες μη κακοήθεις παθολογικές καταστάσεις σε σύγκριση με υγιή άτομα. Ωστόσο, μια πρόσφατη μετα-ανάλυση έδειξε αντιφατικά αποτελέσματα [9]. Την καθιέρωση ενός κανονικού εύρους εκ τούτου, είναι απαραίτητη προϋπόθεση για την περαιτέρω διερεύνηση του πιθανού ρόλου της cfDNA ως διαγνωστικό δείκτη, καθώς και τη χρησιμότητά της στην πρώιμη ανίχνευση των υποτροπών.

ελεύθερα κυττάρων του DNA έχει επίσης θεωρηθεί δυναμικό προγνωστικός δείκτης για έκβαση σε διάφορους καρκίνους [10]. Πρόσφατα, αναφέρθηκε ότι cfDNA πραγματοποιήθηκε προγνωστική αξία σε ασθενείς με mCRC [11-13]. Ένας μεγάλος αριθμός των cfDNA αλληλόμορφα στο πλάσμα συσχετίζονται με συνέπεια μια φτωχή συνολική επιβίωση (OS) σε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με μας thirdline χημειοθεραπεία για mCRC, ενώ οι ασθενείς με χαμηλή συγκέντρωση cfDNA πλάσμα είχε μεγαλύτερο διάμεσο OS. Η επαλήθευση των αποτελεσμάτων αυτών σε μεγαλύτερες ομάδες είναι ιδιαίτερα σημαντική για τον καθορισμό της κλινικής δυναμικό της cfDNA.

Εκτός από το δυναμικό του ως ένα διαγνωστικό εργαλείο και προγνωστικός δείκτης, cfDNA είναι επίσης μια πολύτιμη πηγή για την ανίχνευση όγκων-συγκεκριμένες μεταλλάξεις στο περιφερική κυκλοφορία των ασθενών με καρκίνο [14-16]. Σε mCRC, υπάρχει μια υψηλή συχνότητα

KRAS

μεταλλάξεις, οι οποίες είναι υπεύθυνες για την αντίσταση στα ευρέως χρησιμοποιούμενα μονοκλωνικά αντισώματα που στοχεύουν την EGFR [17]. Μοριακή ανάλυση του γενωμικού μεταβολές εκτελούνται κανονικά στην αρχειακή καρκινικό ιστό, αλλά έχουν υπάρξει ανησυχίες ότι αυτή η προσέγγιση δεν αντικατοπτρίζει επαρκώς την βιολογία της νόσου κατά τη στιγμή της έναρξης της στοχευμένης θεραπείας EGFR, η οποία είναι συχνά αρκετά χρόνια από την πρωτογενή διάγνωση και /ή χειρουργική. Επιπλέον, επανέλαβε βιοψίες δεν είναι εφικτό για πρακτικούς και ηθικούς λόγους. Ως εκ τούτου, η χρήση των cfDNA για την ανίχνευση αυτών των μεταλλάξεων όγκου-ειδικά μπορεί να είναι μία ελκυστική προσθήκη για την καλύτερη επιλογή των ασθενών για στοχευμένες θεραπείες στο μέλλον.

Οι μέθοδοι που χρησιμοποιούνται για την ποσοτικοποίηση του DNA έχουν μεταβληθεί με το χρόνο, που κυμαίνονται από απλές qPCR μεθόδους για πολύπλοκες τεχνολογίες ακτινοβολούν και βαθιά αλληλουχίας επόμενης γενιάς [18,5]. Η ευαισθησία και η ειδικότητα της ανάλυσης έχουν βελτιωθεί πολλές πτυχώσεις, δεδομένου ότι οι αρχικές μελέτες, αλλά οι χρήσεις των διαφορετικών υλικών δειγματοληψίας και μεθόδους για την ποσοτικοποίηση cfDNA, εκτός από την ασυνεπή αναφοράς, έχουν περιπλέξει έγκυρη σύγκριση των αποτελεσμάτων από διάφορες μελέτες. Οι πρόσφατες εξελίξεις στην τεχνολογικές μεθόδους μας επέτρεψαν να αναπτύξει μια άκρως ευαίσθητη μέθοδο για την ποσοτικοποίηση qPCR cfDNA σε δείγματα πλάσματος, η οποία είναι επίσης εφικτή στο εργαστήριο. Αυτό μας επέτρεψε να διερευνήσει τις δυνατότητες βιοδείκτη της cfDNA σε μια μεγάλη ομάδα των ασθενών με καρκίνο και των υγιών μαρτύρων.

Οι στόχοι της παρούσας μελέτης ήταν να καθοριστεί η κανονική σειρά cfDNA σε μια ομάδα υγιών ατόμων και να συγκρίνετε αυτό το εύρος cfDNA με εκείνα από τέσσερις διαφορετικές ομάδες των ασθενών που έλαβαν θεραπεία για mCRC. Επιπλέον, έχουμε στόχο να επικυρώσει την προγνωστική αξία των επιπέδων προ-επεξεργασία των cfDNA και να αναλύσει τον όγκο-ειδικό

KRAS

μεταλλάξεις στο πλάσμα.

Υλικά και Μέθοδοι

σχεδιασμός μελέτης

Ένα σύνολο από 100 υγιή άτομα και 229 ασθενείς mCRC ερευνήθηκαν. Η μελέτη διεξήχθη ως προοπτική έρευνα βιοδείκτη σε τέσσερις συνεχόμενες Φάσης ΙΙ και βιοδεικτών μελέτες: τη μελέτη Το cetuximab [11,20], η TIRASMUS (ClinicalTrials.gov αναγνωριστικό? NCT00827684, [12], PG (αναγνωριστικό ClinicalTrials.gov? NCT01109615 [ ,,,0],13] και GemCap (αναγνωριστικό ClinicalTrials.gov? NCT01472770, [32] δοκιμές που πραγματοποιούνται στο Τμήμα Ογκολογίας, Vejle Νοσοκομείο, τη Δανία, από τον Απρίλιο του 2005 έως τον Νοέμβριο του 2012. και οι τέσσερις μελέτες φάσης ΙΙ περιελάμβανε ασθενείς με χημειοθεραπεία ανθεκτική νόσο και τη συλλογή των βιοδεικτών ήταν μελλοντικά διεξαχθεί.

το κύριο τελικό σημείο ήταν η συσχέτιση της cfDNA να OS, δευτεροβάθμια ελεύθερη εξέλιξης επιβίωση (PFS) και την αξιολόγηση της διαφοράς μεταξύ υγιών μαρτύρων και των ασθενών mCRC, εκτός από τη συσχέτιση μεταξύ του όγκου του KRAS (tKRAS) και . πλάσμα KRAS (pKRAS) ανίχνευσης στοιχεία παρουσιάζονται σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΗ

ασθενείς

τα κριτήρια ένταξης στις δοκιμές ήταν παρόμοια:. ιστοπαθολογικά επαληθεύεται στάδιο IV mCRC, αποτυχία της θεραπείας μετά από έκθεση σε flouropyrimidine, οξαλιπλατίνη και ιρινοτεκάνη, ένδειξη για το τρίτο ή τέταρτο γραμμής θεραπεία, την κατάσταση ECOG (PS) 0-2, και επαρκή λειτουργία των οργάνων.

KRAS

και

BRAF

καθεστώς καθορίζεται ένταξη στις δοκιμές TIRASMUS και PG, αλλά όχι στις μελέτες Το cetuximab ή GemCap.

RECIST έκδοση 1.1 και NCI-CTCAE έκδοση 4.0 ήταν χρησιμοποιείται για να εξετάσει τα τελικά σημεία σε μελέτες GemCap και PG, ενώ σε προηγούμενες μελέτες, χρησιμοποιήθηκαν RECIST έκδοση 1.0 και NCI-CTCAE έκδοση 3.0.

Όλοι οι ασθενείς που παρέχονται υπέγραψε συγκατάθεση πριν από την έναρξη της μελέτης και το σχετικό νομοθετικό και ηθική επιτροπές (Οργανισμός Φαρμάκων της Δανίας και η Επιτροπή Ηθικής Περιφερειακής επιστημονική για τη Νότια Δανία) εγκρίθηκαν οι μελέτες πριν την έναρξή του. Οι κλινικές δοκιμές που διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές για την ορθή κλινική πρακτική όπως αυτά έχουν εκδοθεί από τη Διεθνή Διάσκεψη για την εναρμόνιση και τη Διακήρυξη του Ελσίνκι.

Θεραπεία

Η Μελέτη Το cetuximab.

Η θεραπεία αποτελείται ιρινοτεκάνη (350 mg /m

2) κάθε τρεις εβδομάδες, με εβδομαδιαία 250 mg /m

2 του cetuximab (αρχική δόση εφόδου ήταν 400 mg /m

2), μέχρι την πρόοδο ή μη αποδεκτή τοξικότητα. αξιολόγηση απάντηση έγινε κάθε τρεις κύκλους θεραπείας.

TIRASMUS.

Οι ασθενείς έλαβαν θεραπεία με τον αναστολέα temsirolimus mTOR 25 mg κάθε εβδομάδα μέχρι την εξέλιξη. Στη συνέχεια, οι ασθενείς που έλαβαν θεραπεία συνδυασμού περιλαμβάνει δεκαπενθήμερη ιρινοτεκάνη (180 mg /m

2) και εβδομαδιαίες temsirolimus μέχρι την πρόοδο ή μη αποδεκτή τοξικότητα. αξιολόγηση απάντηση έγινε κάθε 6 εβδομάδες.

PG.

Οι ασθενείς έλαβαν πεμετρεξίδη (αρχικά 500 mg /m

2 q3w) + γεμσιταβίνης (1250 mg /m

2, ημέρες 1 και 8) μέχρι την πρόοδο ή μη αποδεκτή τοξικότητα. αξιολόγηση απάντηση έγινε κάθε τρεις κύκλους θεραπείας.

GemCap.

Οι ασθενείς έλαβαν καπεσιταβίνη (2000 mg /m

2, ημέρα 1-7, q2w) σε συνδυασμό με γεμσιταβίνη (1000 mg /m

2, 1η ημέρα) μέχρι την πρόοδο ή μη αποδεκτή τοξικότητα και την ανταπόκριση αξιολογήθηκε κάθε 12 εβδομάδες.

υγιή ομάδα ελέγχου

το υγιές άτομο ομάδα επιλέχθηκε από τον διαβήτη Βιοτράπεζας Vejle (που εγκρίθηκε από την Υπηρεσία Προστασίας δεδομένων της Δανίας (Εφημερίδα αριθ. 2006-53-1385) και η επιστημονική Επιτροπή της Δανίας (ID έργου S-20080097)).

επιλεγμένα άτομα βασίστηκαν σε ηλικιακές ομάδες, και η Εθνική της Δανίας Εγγραφή ασθενής πρόσβαση για το ICD-10 κωδικοί για να εξασφαλιστεί η έλλειψη σημαντικής συννοσηρότητας (ICD-10 C, D, εγώ και οι κωδικοί Μ). Ενημερωμένη συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε ατόμου για τη χρήση των δειγμάτων αίματος, και η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Περιφερειακής Επιστημονικής Ηθικής για τη νότια Δανία για την πρόσθετη αυτή ανάλυση δείκτη.

Δειγματοληψία για μεταγραφική έρευνα μελέτες

η συλλογή των δειγμάτων πρωτογενούς όγκου των ιστών και του αίματος για την μεταγραφική έρευνα είναι μια τυπική διαδικασία σε δίκες που διεξάγονται στο τμήμα μας. Μετά ενημερωμένη συγκατάθεση, τα δείγματα αίματος προ της θεραπείας λήφθηκαν πριν τον πρώτο κύκλο θεραπείας. Οι μέθοδοι για την ποσοτικοποίηση των cfDNA και μεταλλαγμένων

KRAS

αλληλόμορφα στο πλάσμα έχουν περιγραφεί προηγουμένως [11], και την ενημέρωση των εκκινητών και ανιχνευτών είναι διαθέσιμα στο διαδίκτυο. Το πλάσμα ελήφθη από δείγματα αίματος που συλλέχθηκαν σε EDTA σωλήνες και φυγοκεντρείται σε 2000

g

για 10 λεπτά εντός 2 ωρών από τη συλλογή, πριν από την αποθήκευση στους -80 ° C μέχρι τη χρήση. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν, τύφλωσε με τα τελικά σημεία της μελέτης.

καθαρισμού DNA

DNA καθαρίστηκε από 1 ml πλάσματος χρησιμοποιώντας έναν ιό QIAsymphony /βακτήρια midi-kit σε ένα ρομπότ QIAsymphony (Qiagen), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. DNA εκλούστηκε σε 110 ul. ρυθμιστικό AVE οποίο παρέχεται με το κιτ.

κυττάρων χωρίς ποσοτικό προσδιορισμό του DNA

Για να καθοριστεί το επίπεδο της cfDNA, το ποσό του γονιδίου πεπτιδυλπρολύλ ισομεράσης Α (κυκλοφιλίνη Α) (γονίδιο gCYC, HUGO συντομογραφία PPIA) μετρήθηκε με προσδιορισμό qPCR in-house όπως περιγράφεται στο [11]. Οι δοκιμασίες τρέχουν σε dublicates ή τριπλούν και 5 υΙ DNA χρησιμοποιήθηκε σε κάθε αντίδραση 25 ul PCR. Για κάθε PCR μια πισίνα γονιδιωματικού DNA συμπεριλήφθηκε ως θετικός έλεγχος και νερό ως αρνητικός έλεγχος. Το βιογραφικό του προσδιορισμού gCYC βασίζεται στη θετική πισίνα ελέγχου προσδιορίστηκε να είναι 19%. οι έλεγχοι του νερού ήταν πάντα αρνητική.

Αστάρια και ανιχνευτές για την in-house gCYC σχεδιάστηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό OLIGO 7 (Molecular Biology Insights Inc, Cascade, CO) (διαθέσιμη στο διαδίκτυο, την ένταξη ακολουθία αριθμών NG_029697.1). Το έναυσμα βρίσκεται στο ιντρόνιο 1-2, ο καθετήρας στο εξόνιο 2 και το αντίστροφο εκκινητή στο ιντρόνιο 2-3 (Forward ACATGGGTACTAAGCAACAAAATAAG, Αντίστροφη CACAATTGGAACATCTTTGTTAAAC, Probe Fam-TTGCAGACAAGGTCCCAAAGACAGCA-Tamra). αναζήτηση BLAST έγινε και δεν απροσδιόριστα στόχοι είχαν προβλεφθεί. Η ανάλυση των δεδομένων qPCR έγινε χρησιμοποιώντας SDS ver λογισμικού. 2.2.2 και Cq τιμές προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας την αυτόματη ρύθμιση βασικής γραμμής και σταθερό όριο στο 0,2. Ποσοτικοποίηση των cfDNA είχε γίνει με τον υπολογισμό του αριθμού αντιγράφων του

gCYC

αλληλόμορφα ως 10

y-τομής (gCYC) -mean Cq (gCYC) /κλίση (gCYC) και ομαλοποίηση αυτό με τον όγκο του πλάσματος.

ανίχνευση μεταλλάξεων KRAS και ποσοτικοποίηση

KRAS

ανάλυση των αρχειακών ιστού όγκου από FFPE διεξήχθη στη μελέτη το cetuximab με την εγκεκριμένη από την FDA

KRAS

κιτ DxS (Qiagen), όπως έχει ήδη αναφερθεί. δείγματα όγκων από τις δοκιμές TIRASMUS, PG και GemCap αναλύθηκαν με επικυρωμένη δοκιμασία in-house. Οι δοκιμασίες in-house βασίζεται στην Amplification Refractory Mutation System-ποσοτική PCR (ΟΠΛΑ-qPCR) μεθοδολογία και ανιχνεύει 6 μεταλλάξεις στο

KRAS

κωδικόνιο 12 (Gly12Ala, Gly12Arg, Gly12Asp, Gly12Cys, Gly12Ser και Gly12Val) και μία μετάλλαξη στο κωδικόνιο 13 (Gly13Asp). Εκκινητές και ανιχνευτές για το in-house

KRAS

αναλύσεις, καθώς και

KRAS

θραύσματα PCR ελέγχου μετάλλαξη, σχεδιάστηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό OLIGO 7 (Molecular Biology Insights Inc, Cascade, CO) ( διαθέσιμα στο διαδίκτυο, ακολουθία αριθμών ένταξη NW_001838052.1). Η δοκιμασία βρίσκεται στο εξόνιο 2 του γονιδίου KRAS. Η ανάλυση διεξήχθη όπως περιγράφεται ανωτέρω. Η σύγκριση των δύο μεθόδων για την ανίχνευση μετάλλαξης στον ιστό του όγκου έχει δημοσιευθεί προηγουμένως και έδειξε πλήρη συμφωνία [19] και οι πρότυπες καμπύλες είναι διαθέσιμες και online υλικό [11]. Η ευαισθησία ανίχνευσης κυμαινόταν μεταξύ 0,03% -0,001%, ανάλογα με τον τύπο της μετάλλαξης ανιχνεύεται, ανάλυση 12ASP (1/200000, 0,0005%), 12Cys (1/200000, 0,0005%), 12ser 1/7000, 0,0143%), 13asp 1 /3000, 0.0333%), 12ALA (1/100000, 0,0010%), 12Val (1/200000, 0,0005%), 12arg (1/200000, 0,0005%), αντίστοιχα). Ένα μίγμα από θραύσματα ελέγχου μετάλλαξης θετική και γενωμικό DNA δότη συμπεριλήφθηκε σε κάθε εκτέλεση PCR και νερό ως αρνητικός έλεγχος. Ένα δείγμα του καθαρού γονιδιωματικού DNA δότη συμπεριλήφθηκε για να προσδιοριστεί η ειδικότητα των δοκιμασιών (δεδομένα που παρουσιάζονται στο [11]). CV για κάθε ανάλυση μετάλλαξης KRAS και για τη δοκιμασία gCYC προσδιορίστηκε με βάση τα στοιχεία από την PCR αναλύσεις σε χρονική περίοδο 20 μηνών και ήταν μεταξύ 18% και 32%. οι έλεγχοι του νερού ήταν πάντα αρνητική. Ποσοτικοποίηση των

KRAS

είχε γίνει με τον υπολογισμό του αριθμού αντιγράφων του μεταλλαγμένου

KRAS

αλληλόμορφα ως 10

y-τομής (KRAS) -mean Cq (KRAS) /κλίση (KRAS) και για την εξομάλυνση αυτό με τον όγκο του πλάσματος.

η στατιστική ανάλυση

Μια περιγραφική σύγκριση των επιπέδων cfDNA πραγματοποιήθηκε με δύο όψεων t-test και Wilcoxon τεστ rank sum. Το ανώτερο φυσιολογικό όριο, όπως ορίζεται από τη μέση + 2SD στην ομάδα ελέγχου, χρησιμοποιήθηκε για την διερευνητική τιμή αποκοπής για την ανάλυση επιβίωσης. Η μέθοδος Kaplan-Meier εφαρμόστηκε για την εκτίμηση PFS και OS. Μια πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox εκτελέστηκε για να εξεταστεί κατά πόσον οι διάφορες μεταβλητές που σχετίζονται με μειωμένη επιβίωση, συμπεριλαμβανομένων των επιπέδων cfDNA και δοκιμών για τα χαρακτηριστικά βάσης (ηλικία, φύλο και PS) με δυνητικά επιρροή (γνωστό προγνωστικούς παράγοντες ή σημαντική ή οριακά παραμέτρους π.χ. p & lt? 0,02 ) στην επιβίωση. Μια ανάλυση καμπύλη λειτουργίας δέκτη (ROC) χρησιμοποιήθηκε για να περιγράψει την απόδοση των cfDNA και pKRAS. P-αξίες που αναφέρονται σε δύο-ουρά δοκιμές και θεωρήθηκαν σημαντικές όταν p ≤ 0.05. Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του στατιστικού λογισμικού ΕΚΚΑ 2007 v.07.1.5 (ΕΚΚΑ στατιστικό λογισμικό, Utah 84037, USA, www.ncss.com).

Αποτελέσματα

Τα χαρακτηριστικά των ασθενών

η ασθένεια και η προ-επεξεργασία χαρακτηριστικά των ασθενών παρουσιάζονται στον πίνακα 1. η μέση ηλικία στο συνολικό πληθυσμό ασθενών ήταν 63 έτη (εύρος 35-82) και η πλειοψηφία ήταν άνδρες, ως επί το πλείστον στην καλή κατάσταση απόδοσης. Δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές στην ηλικία, το φύλο ή την κατάσταση απόδοσης μεταξύ των 5 ομάδες.

Η

Το υγιές άτομο ομάδα περιελάμβανε 10 άνδρες και 10 γυναίκες ηλικίας 25-44 ετών, 20 άνδρες και 20 γυναίκες ηλικίας 45- 59 και 60-75.

Η πλειοψηφία των ασθενών που συμμετείχαν στις δοκιμές ήταν διαθέσιμα δείγματα αίματος. Έτσι, ένα σύνολο από 229 ασθενείς συμπεριλήφθηκαν από τις τέσσερις δοκιμές, και 223 διέθετε ιστό όγκου και 211 μια αντιστοιχία δείγμα βασικής γραμμής στο πλάσμα. Τα ελλείποντα αποτελέσματα ήταν λόγω της κακής ποιότητας του DNA του όγκου ή οφείλονται σε ανεπαρκή ποσότητα του πλάσματος στα δείγματα.

DNA και προ-επεξεργασία χαρακτηριστικά των κυττάρων-δωρεάν download

Τα μεσαία επίπεδα cfDNA στις επιμέρους ομάδες δίνονται στον πίνακα 1. ελεύθερα κυττάρων επίπεδα DNA αναλύθηκαν για συσχέτιση με τα χαρακτηριστικά της νόσου και προ-θεραπεία. Δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές στα μεσαία επίπεδα cfDNA ανάλογα με την ηλικία ή το φύλο, αλλά σημαντικά υψηλότερες συγκεντρώσεις cfDNA με την αύξηση του PS (Πίνακας 1).

ελεύθερα κυττάρων του DNA σε ασθενείς με καρκίνο σε σύγκριση με υγιή άτομα

Η μέση και διάμεση συγκεντρώσεις cfDNA στην ομάδα ελέγχου ήταν 2,800 και 2,400 αλληλόμορφα ανά ml πλάσματος, αντιστοίχως, εντός ενός εύρους από 800 έως 14000 αλληλόμορφα ανά ml πλάσματος. Το μεσαίο επίπεδο cfDNA σε ολόκληρη την ομάδα των ασθενών με καρκίνο ήταν 17900 αλληλόμορφα ανά ml πλάσματος (εύρος 800 με 4618400). Το σχήμα 1Α απεικονίζει τις διαφορές στις συγκεντρώσεις cfDNA στο πλάσμα υγιών ελέγχων και τις βασικής γραμμής δείγματα από τις διάφορες ομάδες των ασθενών με καρκίνο. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως οικόπεδο κουτί τιμές σε λογαριθμική κλίμακα, και τα επίπεδα σε ασθενείς με καρκίνο ήταν σημαντικά υψηλότερα σε σχέση με την υγιή ομάδα ελέγχου. Τα επίπεδα του cfDNA ήταν παρόμοια μεταξύ των ομάδες ασθενών με καρκίνο. Οι διαφορές στην cfDNA ήταν πολύ σημαντική μεταξύ της ομάδας ελέγχου και όλες τις μεμονωμένες ομάδες των ασθενών με καρκίνο (όλες οι τιμές ρ ήταν & lt? 0,0001). Η δύναμη για τη διάκριση μεταξύ υγιών ατόμων και ασθενών με καρκίνο ελέγχθηκε με εκτίμηση της ROC και της περιοχής κάτω από την καμπύλη (AUC) όπως επιδεικνύεται στο Σχήμα 1Β. Η AUC ήταν 0,9486 (95% CI 0,9182 – 0,9679, p & lt? 0.00001).

Α απεικονίζει Box και μουστακιού οικόπεδα με 25%, 50%, 75% τοις εκατό, άνω και κάτω γειτονικών τιμών και των ακραίων τιμών (τελείες) . Οριζόντια οι τέσσερις ομάδες κλινική δοκιμή και την ομάδα ελέγχου, κάθετα η συγκέντρωση cfDNA σε λογαριθμική κλίμακα. Γ μελέτη cetuximab, GemCap GemCap ομάδα, PG PG ομάδα μελέτης, Τ κοόρτης μελέτη TIRASMUS, Controls υγιή ομάδα ελέγχου. Β δείχνει μία καμπύλη λειτουργίας δέκτη (ROC) εκτίμηση της απόδοσης των cfDNA να διακρίνει μεταξύ ασθενών και μαρτύρων ορθοκολικό καρκίνο. Η AUC ήταν 0,9486, (95% CI 0,9182 – 0,9679, p & lt? 0.00001).

Η

Η προγνωστική αξία της cfDNA σε ασθενείς με καρκίνο

Η ανάλυση επιβίωσης ανάλογα με τα επίπεδα cfDNA έχουν παρουσιάζονται χωριστά για τις επιμέρους ομάδες του καρκίνου με τα αποτελέσματα πρωτογενή δοκιμή [11-13]. Μια συγκεντρωτική ανάλυση όλων των ασθενών επιβεβαίωσε μια μικρότερη συνολική επιβίωση με την αύξηση των επιπέδων της βασικής γραμμής cfDNA. Το σχήμα 2Α απεικονίζει τις καμπύλες Kaplan-Meier του OS σε ασθενείς χωρίζονται σε τέσσερις ομάδες ανάλογα με τεταρτημόρια των επιπέδων cfDNA. Το λειτουργικό σύστημα των ασθενών κατηγοριοποιούνται σε χαμηλή ή υψηλή συγκέντρωση ομάδων cfDNA με βάση το ανώτερο φυσιολογικό εύρος της ομάδας ελέγχου (που ορίζεται ως μέση cfDNA + 2SD = 7100 αλληλόμορφα ανά ml) φαίνεται στο σχήμα 2Β. Cox παλινδρόμησης πολυπαραγοντική ανάλυση, συμπεριλαμβανομένης της ηλικίας (& gt? /& Lt? 63 χρόνια), το φύλο, PS και cfDNA τεταρτημόρια (αντιμετωπίζεται ως συνεχής μεταβλητή) επιβεβαίωσε μια ανεξάρτητη προγνωστική αξία της cfDNA σε ολόκληρη την ομάδα. Ως συνεχής μεταβλητή, υπήρχε ένα Λόγος OS κινδύνου της τάξης του 1,5 (95% CI 1,3-1,7) για κάθε αύξηση του επιπέδου τεταρτημόριο cfDNA (Πίνακας 2).

Α. Οι ασθενείς που ομαδοποιούνται ανά τεταρτημόρια του cfDNA (από δεξιά) χαμηλότερο, δεύτερο χαμηλότερο, δεύτερο υψηλότερο και υψηλότερο τεταρτημόριο των cfDNA. Η διάμεση OS σύμφωνα με cfDNA τεταρτημόρια ήταν? 10,2 μήνες (95% CI 8.9 έως 12.8), 7,8 μήνες (05/07 – 09/03), 5,0 μήνες (4,3 έως 6,0) 3,5 μήνες (3,0 έως 3,9), αντίστοιχα. B. Οι ασθενείς ομαδοποιούνται από το ανώτερο φυσιολογικό εύρος όπως ορίζεται από την μέση cfDNA + 2SD στην ομάδα ελέγχου (7100 αλληλόμορφα ανά ml.) Ομάδα χαμηλού κινδύνου (πλήρης γραμμή), διάμεση OS, 10,2 μήνες (08/03 – 11/07). ομάδα υψηλού κινδύνου (διακεκομμένη γραμμή) Διάμεση OS, 5,2 μήνες (04.06 – 05.09). HR 1,78, p = 0,0006.

Η

Ανίχνευση KRAS μεταλλάξεις σε δείγματα όγκων και πλάσματος

Ένα σύνολο 211 ασθενών που είχαν τα δύο δείγματα όγκων και πλάσματος που διατίθενται για την αξιόπιστη ανίχνευση του

KRAS

μεταλλάξεις. Δείγματα πλάσματος με χαμηλό αριθμό cfDNA αλληλόμορφα δεν εξαιρέθηκαν από την ανάλυση. Όγκου-ειδικά

KRAS

μεταλλάξεις εντοπίστηκαν σε σύνολο 119 δειγμάτων πλάσματος. Η συνολική συμφωνία μεταξύ της κατάστασης μετάλλαξης στον όγκο και στο πλάσμα ήταν υψηλή: (180/211 = 85%) και 112 των δειγμάτων 140 όγκων με μεταλλάξεις αποδεικνύεται

KRAS

μεταλλάξεις στα δείγματα πλάσματος πάρα πολύ, ενώ μόνο τρεις περιπτώσεις παρατηρήθηκαν όπου οι ασθενείς είχαν ανιχνεύσιμη μετάλλαξη στο πλάσμα, αλλά όχι στον πρωτογενή όγκο.

ελεύθερα κυττάρων DNA και συσχέτιση με όγκο-ειδικών μεταλλάξεων KRAS

Η συσχέτιση μεταξύ του αριθμού των συνολικού κύτταρο δωρεάν αλληλόμορφα του DNA και ο αριθμός των μεταλλαγμένα αλληλόμορφα KRAS στα μεταλλαγμένα ασθενείς KRAS αναλύθηκε με Spearman συσχέτιση βαθμό. Λόγω του ευρέος φάσματος ποσοτικά επίπεδα χρησιμοποιήθηκε λογαριθμική κλίμακα. Όπως φαίνεται από το Σχήμα 3, το οποίο απεικονίζει το ελεύθερο DNA των κυττάρων κατακόρυφα και ο αριθμός των μεταλλαγμένων αλληλομόρφων KRAS οριζόντια αυτά είχαν συσχετίζεται έντονα Σχήμα 3 (r

2 = 0,97, Spearman rank = 0,86, p & lt? 0.000). Αυτό επιβεβαιώνει τα προκαταρκτικά στοιχεία από τη μελέτη cetuximab [11), και αναφέρει ότι ένα σημαντικό τμήμα της προέλευσης cfDNA από το DNA του όγκου (όπως εκπροσωπείται από το DNA με συγκεκριμένο όγκο μεταλλάξεις KRAS)

Το οικόπεδο αυτό απεικονίζει την ισχυρή συσχέτιση μεταξύ του συνολικού αριθμού των αλληλομόρφων DNA και ο αριθμός των μεταλλαγμένα αλληλόμορφα σε ασθενείς με μεταλλάξεις KRAS ανιχνευθεί. Η Spearman συσχέτιση κατάταξη υπολογίστηκε σε 0,86 και r

2 = 0.97 (

σ

& lt? 0.0000). Τα διαφορετικά σύμβολα αντιπροσωπεύουν τις επιμέρους ομάδες των ασθενών με καρκίνο. (Πλατεία PG συσχέτισης = 0,9, κύκλος cetuximab συσχέτισης = 0.88, τρίγωνο GemCap συσχέτισης = 86, πενταγώνου TIRASMUS συσχέτισης = 0.67).

Η

Συζήτηση

Μεγαλύτερη έμφαση στη μεταγραφική έρευνα και τις πρόσφατες τεχνολογικές πρόοδοι έχουν δώσει νέα εικόνα της κλινικής σημασίας του cfDNA στον καρκίνο και τις δυνατότητές της για την ανίχνευση μεταλλάξεων όγκου-ειδικά σε περιφερική κυκλοφορία.

Ως μέτρο του συνολικού ποσού του cfDNA, αυτή η μελέτη ερεύνησε τον αριθμό των αλληλίων το γονίδιο κυκλοφιλίνη, και επιβεβαίωσε ένα υψηλότερο επίπεδο σε ασθενείς με mCRC από ό, τι στους υγιείς μάρτυρες. Μια αναζήτηση για παρόμοιες μελέτες αποκαλύπτει αντιφατικά αποτελέσματα? Ωστόσο, οι διαφορές στα δοκιμαζόμενα μεθοδολογίες κάνουν άμεσες συγκρίσεις δύσκολη. Σε γενικές γραμμές, υπάρχουν παραλλαγές στη μέθοδο που εφαρμόζεται για τον καθαρισμό του DNA, το γονίδιο αναφοράς, μετρούμενη, και οι ομάδες των ατόμων της έρευνας. Παρ ‘όλα αυτά, μερικές μελέτες σε ασθενείς CRC υποστηρίζουν τα δεδομένα μας [21-24]. Μια πολύ πρόσφατη μελέτη διερεύνησε το πολλαπλών χρήσεων χρησιμότητα των κυκλοφορούντων DNA στο πλάσμα σε ασθενείς με προχωρημένους καρκίνους χρησιμοποιώντας διαφορετική μεθοδολογική προσέγγιση, δείχνοντας γενικά υψηλότερα επίπεδα cfDNA σε CRC, του μαστού, του προστάτη και άλλων καρκίνων ό, τι σε υγιείς [8] ελέγχους. Ωστόσο, το μέγεθος του δείγματος της μελέτης δεν επιτρέπει την δημιουργία ενός φυσιολογικού εύρους (n = 20), αλλά τα αποτελέσματά της να κάνει υποστηρίξει τις παρούσες δεδομένων. Μια πρόσφατη παρατήρηση σε τοπικά προχωρημένο καρκίνο του ορθού, παρά τη χρήση μιας διαφορετικής μεθόδου για τη μέτρηση cfDNA, αποκάλυψε επίσης μια σημαντική διαφορά στα επίπεδα cfDNA μεταξύ των ελέγχων και του καρκίνου του ορθού πρώιμο στάδιο [25]. Η ικανότητα να διακρίνουν τα επίπεδα cfDNA μεταξύ των ασθενών μας ορθοκολικό καρκίνο και υγιείς μάρτυρες ήταν εξαιρετική, υποστηρίζοντας την ανάγκη για περαιτέρω μελέτες των cfDNA σε προηγούμενα στάδια του όγκου και προκαρκινικές αλλοιώσεις. Επιπλέον, η διακύμανση του cfDNAin άτομα με μη-καρκινικές συν-νοσηρότητα πρέπει να διαλευκανθεί περαιτέρω, να αντιπροσωπεύουν πιθανή προκατάληψη. Η παρούσα μελέτη υπογραμμίζει επίσης το σημαντικό βιολογικό ρόλο της cfDNA σε αυτή τη νόσο. Η αυξημένη συγκέντρωση του cfDNA σε ασθενείς με καρκίνο και συσχέτιση με μια σειρά από μεταλλαγμένα αλληλόμορφα δείχνουν επίσης ότι η cfDNA είναι σε μεγάλο βαθμό όγκου προερχόμενα, αν και η προέλευση παραμένει απροσδιόριστη.

Υπάρχει ανάγκη για πρόσθετα εργαλεία για την καλύτερη επιλογή ασθενών για θεραπεία σε μεγάλο βαθμό προ-επεξεργασία mCRC. Σε τέσσερις διαδοχικά διεξαχθεί κλινικές μελέτες φάσης ΙΙ έχουμε επιβεβαιώσει ένα ομοιόμορφο επίπεδο cfDNA και σαφή προγνωστική αξία.

Μια δημοσίευσε πρόσφατα μελέτη από την ομάδα μας έχει δείξει ότι η cfDNA δεν είναι απλώς ένα μέτρο του βάρους του όγκου [ ,,,0],26]. Αντ ‘αυτού, προτείνουμε ότι η συνολική cfDNA είναι πιο πιθανό να αντανακλούν τόσο το φορτίο του όγκου και των βιολογικών μηχανισμών και, συνεπώς, μια πιο σύνθετη εικόνα της νόσου σε κάποιο στάδιο. Η ομοιότητα των αρχικών επιπέδων μεταξύ των τεσσάρων μελετών φάσης ΙΙ παρατηρήσαμε απεικονίζει την ομοιογένεια ομάδες των ασθενών. Οι ασθενείς ήταν όλοι επιλέγονται με βάση την πραγματική χημειοθεραπεία πυρίμαχα κατάσταση παρά τις γραμμές της θεραπείας, τα οποία μπορεί να διαφέρουν ανάλογα με τους ορισμούς και τις προηγούμενες στρατηγικές θεραπείας, και έτσι είναι λιγότερο ακριβή ορισμό της προχωρημένο στάδιο της νόσου. Μια σύγκριση μεταξύ ομάδων μας και η επακόλουθη συγκέντρωση των δεδομένων δικαιολογείται, επομένως, όπως υποστηρίζεται, επίσης, από την πολυπαραγοντική ανάλυση. Έρευνα σε ασθενείς χωρίς προηγούμενη θεραπεία χημειοθεραπεία θα πρέπει να είναι το επίκεντρο των μελλοντικών μελετών.

Τα υψηλότερα επίπεδα βασικής γραμμής έδειξαν ισχυρή συσχέτιση με κακή πρόγνωση, την πρώτη όταν αναλύεται στα επιμέρους μελέτες φάσης ΙΙ, δεύτερο, όταν αξιολογούνται σύμφωνα με τεταρτημόρια των επιπέδων cfDNA σε η συνολική ομάδα CRC, και τελικά όταν διαιρεθεί σε υψηλές και χαμηλές ομάδες συγκέντρωσης με βάση το μέγιστο επίπεδο cfDNA σε υγιή άτομα. Επιπλέον, η συνδυασμένη ανάλυση επιτρέπεται για μια αξιόπιστη ανάλυση πολλαπλών μεταβλητών, η οποία επιβεβαίωσε μια ισχυρή προγνωστική επίπτωση της cfDNA ως μια συνεχής παράμετρος. Η προγνωστική αξία της cfDNA έχει περιγραφεί σε διάφορους καρκίνους, αλλά λίγες μόνο σε σχέση με τη χημειοθεραπεία [15-16, 27]. Η πρόσφατα δημοσιευμένη έκθεση του Perkins et al είναι σε συμφωνία με τα δεδομένα μας και είναι μία από τις λίγες μελέτες που διερευνούν cfDNA σε ασθενείς που υποβάλλονται σε θεραπεία για τον προχωρημένο καρκίνο [8].

Η θεραπεία για CRC είναι βέβαιο ότι θα συνεχίσει να αναπτύσσεται προς την κατεύθυνση στοχεύουν μεμονωμένους μοριακά χαρακτηριστικά της νόσου. Ωστόσο, η ετερογένεια των όγκων, γονιδιωματική αστάθεια και κλωνική μοριακή μέρος εξέλιξη υψηλές απαιτήσεις σε ακριβή και έγκαιρη χαρακτηρισμό. Εκτελεί επαναλαμβανόμενες βιοψίες όγκων έχει γίνει, αλλά είναι άβολο και περιλαμβάνει ένα κίνδυνο για τον ασθενή. Χρησιμοποιώντας το πλάσμα ως υγρό βιοψία για μεταλλακτική ανίχνευση έχει πολλά πλεονεκτήματα και θα μπορούσε να ξεπεράσει τα προβλήματα που σχετίζονται με την επαναλαμβανόμενη βιοψίες όγκων. Επαναλαμβανόμενες δοκιμές κατά τη διάρκεια της θεραπείας γίνεται εύκολα και η παρούσα μέθοδος που αναπτύχθηκε για την ανίχνευση

KRAS

μεταλλάξεις είναι εφικτή, σχετικά φθηνή, γρήγορη και μπορεί να εκτελεστεί σε μια βάση μεγάλης κλίμακας. Πάντως, η παρούσα τεχνολογία qPCR θα επιτρέπει μόνο έναν περιορισμένο αριθμό αντιδράσεων PCR εκτελείται ανά δείγμα. Δεδομένου ότι

KRAS

έχει κυρίαρχο κλινικό αντίκτυπο και υψηλή συχνότητα σε mCRC αυτή η προσέγγιση είναι ακόμη εφικτή, ενώ μέθοδοι όπως αλληλούχισης επόμενης γενιάς μπορεί να έχει σημασία αν οι πολλαπλές μεταλλάξεις με πιθανή κλινική σημασία και είναι διαθέσιμη στόχους αποκάλυψε. Ωστόσο, αυτή τη στιγμή, μια απλή και εφικτή μέθοδος για αυτές τις έρευνες φαίνεται ότι η πιο ορθολογική προσέγγιση, ιδίως αν ληφθεί υπόψη το γεγονός ότι η επαρκής μεγέθη δείγματος για αξιόπιστες κλινικές έρευνες είναι υψίστης σημασίας.

Το ποσοστό ανίχνευσης των ογκο-ειδικών μεταλλάξεις στο πλάσμα εξαρτάται από την ειδικότητα και την ευαισθησία της δοκιμασίας, η οποία μπορεί να αυξηθεί κατά στάδια ενίσχυσης προ-ανάλυση, καθώς και σχετικά με το ποσό της cfDNA στο δείγμα. Το τελευταίο μπορεί να ξεπεραστεί με την αύξηση του αρχικού όγκου του πλάσματος αναλύθηκαν. Οι πτυχές αυτές πρέπει να λαμβάνονται υπόψη κατά την εξέταση της αντιστοιχίας μεταξύ της πρωτοπαθούς όγκου και την κατάσταση της μετάλλαξης του πλάσματος, το οποίο ήταν υψηλό με τη μέθοδο μας σε σύγκριση με τις λίγες σχετικές μελέτες στη βιβλιογραφία [28-30]. Λόγοι για την ασυμφωνία περιλαμβάνουν την πιθανή κακή ποιότητα του DNA που εξάγεται από παραφίνη ενσωματωμένο αρχειακό ιστό του όγκου, ή πραγματική ετερογένεια της νόσου και κλωνική μοριακής εξέλιξης κατά τη διάρκεια πολλών γραμμών της θεραπείας.

Είναι κλινικά σχετική να ερευνήσει αν p

KRAS

μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως κριτήριο επιλογής για τη θεραπεία με αναστολείς του EGFR, αντί του t

KRAS

ανίχνευσης. Τα παρόντα δεδομένα και μια παρόμοια προηγούμενη έκθεση [31] δείχνουν ότι p

KRAS

καθεστώς κατέχει ισχυρή προγνωστική αξία σε αυτή τη ρύθμιση. Αυτό ισχύει επίσης για τις ομάδες ασθενών μας που δεν υποβλήθηκαν σε θεραπεία με αναστολείς του EGFR. Ωστόσο, τα αποτελέσματα από τις μικρές μη τυχαιοποιημένες μελέτες μας θα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή και περαιτέρω έρευνες σε μεγαλύτερα μεγέθη δειγμάτων, κατά προτίμηση σε τυχαιοποιημένες μελέτες, οι δικαιολογημένη.

Έχουμε παρέχονται ομάδες δοκιμής και επικύρωσης με επαρκή μεγέθη δείγματος για πολυμεταβλητή ανάλυση του προγνωστική αξία και για τον ορισμό του φυσιολογικού εύρους των cfDNA. Η παρούσα μελέτη επιβεβαιώνει την προγνωστική χρησιμότητα των cfDNA στο πλάσμα και της σκοπιμότητας για την μεταλλάξεων δοκιμές με τη μέθοδο που παρουσιάζεται. Καλούμε για συνδυασμένες προσπάθειες για να συγκρίνουν, να επικυρώσει και προοπτικά διερεύνηση του ρόλου των cfDNA ποσοτικοποίηση στον καρκίνο, με τη συνολική προοπτική της μετάφρασης αποτελέσματα στην κλινική φροντίδα των ασθενών με προχωρημένο καρκίνο ασθένειες.

Ευχαριστίες

ευχαριστούμε θερμά την έρευνα του Συμβουλίου, Lillebælt Νοσοκομείο, Asta og Peter Gotz-Petersens Fundation, και το Ίδρυμα Novo Nordisk για τη χρηματοδότηση της μελέτης.