Αφηρημένο

Ένας από τους σημαντικότερους προγνωστικούς παράγοντες για καρκίνο του ορθού είναι λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες. Ο σχηματισμός των μεταστάσεων λεμφαδένων εξαρτάται από την ύπαρξη ενός προ-μεταστατικούς θέση. Ένας σημαντικός παράγοντας που προηγείται μετάσταση είναι λεμφαγγεία που βρίσκονται στο λεμφαδένα. Ως εκ τούτου, η εμφάνιση του intranodal λεμφαγγειογένεσης θεωρείται ότι υποδεικνύει μακρινό μετάσταση και χειρότερη πρόγνωση. Για να αξιολογηθεί η σημασία των λεμφαδένων λεμφαγγειογένεσης, μελετήσαμε φορμόλη σταθερό, παραφίνη ενσωματωμένα αδενοκαρκινώματα και περιφερειακών λεμφαδένες 203 ασθενείς με καρκίνο του ορθού οι οποίοι υποβλήθηκαν σε θεραπεία με εισαγωγική ακτινοχημειοθεραπεία και διαδοχικές θεραπευτική επέμβαση με καρκίνο δωρεάν χειρουργικά όρια (R0). Περιφερειακών λεμφαδένων λεμφαγγεία ανιχνεύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία για podoplanin (D2-40). Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η παρουσία των λεμφαγγείων στην περιφερειακή λεμφαδένες επηρεάζει σημαντικά την ελεύθερη νόσου επιβίωση σε μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση. Αντίθετα, δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ περινεοπλασματικής ή εντός του όγκου της πυκνότητας λεμφικό αγγείο και την πρόγνωση. Πράγματι, η μελέτη μας καταδεικνύει τη σημασία της λεμφαγγειογένεσης στην περιφερειακή λεμφαδένες μετά την εισαγωγική ακτινοχημειοθεραπεία και διαδοχικές χειρουργική επέμβαση ως ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης. Η χρώση για intranodal λεμφαγγειογένεση και τις μεθόδους ενδοζωικής απεικόνισης της λεμφαγγειογένεσης και λεμφική ροή μπορεί να είναι μια χρήσιμη στρατηγική για την πρόβλεψη μακροχρόνια έκβαση σε ασθενείς με καρκίνο του ορθού. Επιπλέον, η προσθήκη του VEGF-αποκλειστές σε τυποποιημένα συστήματα εισαγωγική θεραπεία μπορεί να αναφέρεται σε προχωρημένο καρκίνο του ορθού

Παράθεση:. Jakob C, Aust DE, Liebscher Β, Baretton GB, Datta Κ, Muders MH (2011) λεμφαγγειογένεση στην περιφερειακή λεμφαδένες είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης στην ορθού Καρκινοπαθών μετά Νεοεπικουρική θεραπεία. PLoS ONE 6 (11): e27402. doi: 10.1371 /journal.pone.0027402

Επιμέλεια: Soumitro Pal, Νοσοκομείο Παίδων της Βοστόνης & amp? Ιατρική Σχολή του Χάρβαρντ, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 20 Σεπτεμβρίου, 2011? Αποδεκτές: 17 Οκτώβρη του 2011? Δημοσιεύθηκε: 7, Νοέμ του 2011

Copyright: © 2011 Jakob et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Δεν υπάρχει τρέχουσα εξωτερικές πηγές χρηματοδοτήσει το συγκεκριμένο μελέτη. Σε γενικές γραμμές, το έργο των ερευνητών υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις σε ΜΗΜ (Wilhelm Sander Stiftung γούνα Krebsforschung) και KD (R01-NIH, CA140432)

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα

Εισαγωγή

η προεγχειρητική (εισαγωγική) ακτινοχημειοθεραπεία ακολούθησε θεραπευτική χειρουργική επέμβαση έχει γίνει καθιερωμένη θεραπεία σε τοπικά προχωρημένο καρκίνο του ορθού [1]. Η ιστοπαθολογική υποχώρηση του όγκου ως συσχετισμός για την αποτελεσματικότητα τοπική θεραπεία ποικίλλει από καμία έως ελάχιστη οπισθοδρομική αλλαγές για να ολοκληρωθεί απάντηση [2], [3]. Η κατάσταση των λεμφαδένων μετά την εισαγωγική ακτινοχημειοθεραπεία, ωστόσο, παραμένει ο πιο σημαντικός ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την επιβίωση ελεύθερη νόσου, οι ασθενείς με μετα-θεραπευτική θετικούς λεμφαδένες (YPN +) έχουν δυσμενή πρόγνωση ανεξαρτήτως της παλινδρόμησης του πρωτοπαθούς όγκου [2], [3], [4], [5], [6]. Έτσι, η αναστολή της περιφερειακής μεταστάσεων λεμφαδένα θα μπορούσε να είναι ένας αποτελεσματικός μέλλον λεωφόρος στη θεραπεία ασθενών με καρκίνο του ορθού. Ως εκ τούτου, έχουν γίνει προσπάθειες για την αποκάλυψη των μηχανισμών της μετάστασης λεμφαδένα. Έχει προταθεί ότι η επαγωγή της λεμφαγγειογένεσης στον πρωτογενή όγκο και σε λεμφαδένες συμβάλλει σημαντικά στην μεταστάσεων όγκων [7], [8]. Σε αυτή τη μελέτη έχουμε επικυρωθεί λεμφαγγειογένεση στην περιφερειακή λεμφαδένες ως προγνωστικός δείκτης για την κακή πρόγνωση και διευκόλυνσης για μακρινή μετάσταση σε μία ομάδα από εισαγωγική θεραπεία ασθενών με προχωρημένο καρκίνο του ορθού. Πρόκειται για μια καλύτερη ικανότητα πρόβλεψης από την περιγεννητική και εντός του όγκου πυκνότητες λεμφικού σκάφος ή τυποποιημένα συστήματα ταξινόμησης υποχώρηση του όγκου για αυτή την ομάδα των ασθενών με καρκίνο του ορθού.

Αποτελέσματα

κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηρισμό του αξιολογούμενου ομάδα

Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε ορθό εκτομή με συνολικό mesorectal εκτομή μετά την εισαγωγική ακτινοχημειοθεραπεία. Σε όλους τους ασθενείς η τοπική θεραπευτική εκτομή επιτεύχθηκε (R0-κατάσταση). Παθολογική στάσης αναφέρεται στον Πίνακα 1. Πλήρης υποχώρηση του όγκου [9] παρατηρήθηκε σε 10 περιπτώσεις (5%). 57 ασθενείς έμπειρους βαθμού υποχώρηση του όγκου 3 (28%). 85 ασθενείς έδειξαν υποχώρηση του όγκου βαθμού 2 (42%) και 48 ασθενείς είχαν βαθμού υποχώρηση του όγκου 1 (23%). Δεν παρατηρήθηκε υποχώρησις όγκου σε 3 ασθενείς (1,5%). Σε διάμεση παρακολούθηση από 223 εβδομάδες (95% διάστημα εμπιστοσύνης 216,9 έως 247,3 εβδομάδες) 38 ασθενείς είχαν υποτροπή της νόσου, 32 ανέπτυξαν μακρινή μετάσταση και 6 τοπικές υποτροπές. Απομακρυσμένες μεταστάσεις ανιχνεύθηκαν στα ακόλουθα όργανα: ηπατική 15 (HEP), πνευμονική 6 (PUL), μακρινό μη περιφερειακών λεμφαδένες 3 (Lym), του υπεζωκότα 1 (PLE), το δέρμα 1 (δέρμα), περιτόναιο 1 (PER), οστών 2 (OSS), ηπατική και πνευμονική 2 (HEP και PUL) και άλλοι 1 (OTH). Σε αυτές τις περιπτώσεις υποτροπής της νόσου και απομακρυσμένες μεταστάσεις επιβεβαιώθηκαν από παθολογική αξιολόγηση και εξέταση. Σε οκτώ περιπτώσεις κλινικών πληροφοριών (πρόσβαση από ένα βοηθό τεκμηρίωση) χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση υποτροπής της νόσου.

Η

Για την ανίχνευση μεταστατικών καρκινικών κυττάρων στους λεμφαδένες που χρησιμοποιούνται τυποποιημένες HE χρώση καθώς και Pan-Cytokeratin χρώση χρησιμοποιώντας ένα εμπορικά διαθέσιμο μονοκλωνικό αντίσωμα (Dako Inc) σε τουλάχιστον τρεις διαδοχικές τομές του λεμφαδένα. Ένας μέσος όρος των 14 περιφερειακών λεμφαδένων κατά περίπτωση μελετήθηκε. Η παρουσία θετικών καρκινικών κυττάρων Pancytokeratin υποδεικνύεται μετάσταση λεμφαδένα (Σχ. 1Α).

A. Ανοσοϊστοχημεία για Pancytokeratin για την ανίχνευση μικρομεταστάσεων λεμφαδένα. Β Podoplanin χρώση με D2-40 σε ένα λεμφαδένα με μετάσταση. Το κόκκινο έως καφέ σημάδια χρώσης λεμφαγγεία. χρώση Γ Podoplanin με D2-40 σε ένα λεμφαδένα χωρίς μετάσταση.

Η

Σύλλογος υποχώρηση του πρωτοπαθούς όγκου και των μεταστάσεων λεμφαδένα με κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους και προγνωστικές παραμέτρους

Μια σημαντική συσχέτιση ήταν βρέθηκε μεταξύ των βαθμών υποχώρηση του όγκου (Εικ. 2) και την επιβίωση χωρίς εξέλιξη, όταν διαχωρίστηκαν μεταξύ τους για την υψηλή και χαμηλή υποχώρηση του όγκου (p = 0,0033 Log-Rank) (Εικ. 3Α) στο Kaplan Meier ανάλυση. Η πολυπαραγοντική ανάλυση αποκάλυψε μια στατιστικά σημαντική διαφορά κατά τη σύγκριση TRG 1 και TRG 3 (Πίνακας 2). Όπως και στην προηγουμένως δημοσιευμένες αναφορές [2], [3], [4], [5], [6], αποδείξαμε επίσης ότι λεμφαδένα μετάσταση αποτελεί σημαντικό ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα σε ομάδα μας (p = 0,0017 Log-Rank) ( Εικ. 3Β).

Α. HE βάφονται αδενοκαρκίνωμα του ορθού με την υποχώρηση του όγκου βαθμού 1 (40x). Β HE βάφονται ορθού καρκινικού ιστού με βαθμό υποχώρηση του όγκου 1 (100x) καρκίνωμα Γ ορθού με την υποχώρηση του όγκου βαθμού 2 (40x) αδενοκαρκίνωμα του ορθού Δ με το βαθμό υποχώρηση του όγκου 2 (100x). Ε βαθμού υποχώρηση του όγκου 3 (100x) στον καρκίνο του ορθού με τη συσσώρευση εξωκυττάριου βλεννίνη. ΣΤ μετάσταση λεμφαδένα παλινδρόμησης βαθμού 2 (40x). Γ μετάσταση λεμφαδένα παλινδρόμησης βαθμού 3 (40x). Η Περιφερειακή μετάσταση στους λεμφαδένες (400x) στο πρότυπο χρώσης HE.

Η

Α. Χρόνος έως την εξέλιξη σε εβδομάδες σε σχέση με την πιθανότητα επιβίωση χωρίς εξέλιξη στρωματοποιημένη για την ταξινόμηση διχοτομήθηκε υποχώρηση του όγκου (TRG 0/1/2 = καμία υποχώρηση ή κυρίαρχη μάζα του όγκου με εμφανή ίνωση ή βλεννίνη ή δεσπόζει ινωτικών ή βλεννώδες αλλαγές, με καρκινικά κύτταρα ή ομάδες? TRG 3/4 = πολύ λίγα κύτταρα όγκου σε ινωτική ή βλεννώδες ιστό ή καθόλου καρκινικά κύτταρα, μόνο ινωτικών ή βλεννώδες μάζα /συνολικό παλινδρόμησης?., σύμφωνα με Dworak et al 1997). B. Ο χρόνος μέχρι την πρόοδο σ εβδομάδες σε σχέση με την πιθανότητα επιβίωση χωρίς εξέλιξη στρωματοποιημένη για λεμφαδένα μετάσταση (ypN0 και YPN +).

Η

Σύλλογος περινεοπλασματικής και εντός του όγκου της πυκνότητας λεμφαδένες σκάφος με λεμφαδένων μετάσταση, στάδιο UICC, και προγνωστικές παραμέτρους

σε ένα επόμενο βήμα θα αξιολογούνται περινεοπλαστικό και εντός του όγκου λεμφαγγειογένεση (pLVD και ilvD) και τη σχέση του με μετάσταση σε ομάδα μας. Λεμφαγγειογένεση αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας ένα εμπορικά διαθέσιμο αντίσωμα που ανιχνεύει podoplanin (D2-40, Dako) (Εικ. 1Β και 1Γ). Η χρώση είναι ειδική για λεμφικό ενδοθήλιο και δεν λεκιάζει καμία αιμοφόρα αγγεία με ανιχνεύσιμο ενδοαυλικό ερυθροκύτταρα. pLVD δεν συσχετιζόταν σημαντικά με μεταστάσεις στους λεμφαδένες (p = 0,08 χ

2). Δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση της pLVD και ypUICC στάδιο ή επιβίωσης χωρίς νόσο. Επιπλέον, ilvD δεν συσχετίζονται με την πρόγνωση, τη λέμφο μετάσταση στους λεμφαδένες, ή το στάδιο ypUICC.

Σύλλογος intranodal lymphangiogensis στην περιφερειακή λεμφαδένες με το στάδιο UICC, η επιβίωση χωρίς εξέλιξη, και το είδος της υποτροπής

τραπέζι -1-captionIn παράλληλα, αξιολογήσαμε intranodal λεμφαγγειογένεση με χρώση περιφερειακές mesorectal λεμφαδένες με D2-40 όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Ένας λεμφαδένας ταξινομείται ως θετικό για intranodal λεμφαγγειογένεση όταν τουλάχιστον ένα λεμφικό αγγείο μπορεί να ανιχνευθεί στο θυλακιώδη ή /και ενδοφολιδωτά περιοχή τουλάχιστον ενός mesorectal λεμφαδένα (που ορίζεται ως NLV +). Στην ουσία, σε 102 ασθενείς με όλα λεμφαδένες ήταν αρνητικοί για λεμφαδένων λεμφαγγειογένεση, ενώ σε 43 ασθενείς σε μία μόνο λεμφαδένας θα μπορούσε να θεωρηθεί ανιχνεύσιμη λεμφαγγειογένεση. Σε 58 ασθενείς περισσότερες από μία περιφερειακές λεμφαδένων έχει ανιχνεύσιμη λεμφαγγειογένεσης.

Βρήκαμε μια στατιστικά σημαντική συσχέτιση μεταξύ NLV + (λεμφαγγειογένεση σε τουλάχιστον ένα mesorectal /περιφερειακών λεμφαδένων) και υποτροπή του όγκου, καθώς και το στάδιο ypUICC (Πίνακας 1 ). Kaplan Meier ανάλυση αποκάλυψε μια σημαντική συσχέτιση της NLV + με ελεύθερη εξέλιξης χρόνο επιβίωσης (p = 0,0071 logrank) σε όλη την ομάδα (Σχ. 4Α). Επιπλέον, NLV + ήταν ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας, όπως μελετήθηκε από το μοντέλο παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου του Cox με τους συμπαράγοντες ypUICC σταδίου, την ηλικία, το φύλο, την υποχώρηση του όγκου, εντός του όγκου της πυκνότητας σκάφος της λέμφου, περιογκική πυκνότητα αγγείων λέμφου και των λεμφαδένων πυκνότητα λεμφαδένες σκάφος (Πίνακας 2 ). Κατά συνέπεια, η ανάλυση υποομάδας των ασθενών με αρνητικούς λεμφαδένες παρουσίασε σημαντική συσχέτιση μεταξύ NLV + και ελεύθερη νόσου επιβίωση (Σχ. 4Β) χρησιμοποιώντας ανάλυση Kaplan-Meier. Κατά τη σύγκριση της συχνότητας της ηπατικής μετάστασης σε ασθενείς με και χωρίς mesorectal intranodal λεμφαγγειογένεση (NLV +), βρήκαμε περισσότερο ηπατικών μεταστάσεων σε ασθενείς με κομβικά λεμφαγγειογένεση (13 ηπατική μετάσταση σε ασθενείς με intranodal λεμφαγγειογένεση έναντι 2 ηπατικών μεταστάσεων σε ασθενείς χωρίς intranodal λεμφαγγειογένεση). Αξιολογήσαμε επίσης τον αριθμό των λεμφικών αγγείων (πυκνότητα λεμφαδένες σκάφος, nLVD) ανιχνεύθηκε σε τοπικούς λεμφαδένες. Εδώ, ο μέγιστος αριθμός λεμφικών αγγείων ανιχνεύεται σε λεμφαδένα με λεμφαγγειογένεση συσχετίζεται σημαντικά με την κατάσταση του κόμβου (ypN0 ή YPN +? Ρ = 0,01 χ

2) (Σχήμα 5Β).. Αντίθετα, δεν υπήρχε συσχέτιση της μέγιστης αριθμού των λεμφικών αγγείων με μακρινή μετάσταση. Όταν διχοτομηθεί σύμφωνα με τη μέση της μέγιστης λεμφαδένα πυκνότητα λεμφαδένες σκάφος, δεν μπορέσαμε να ανιχνεύσει οποιαδήποτε σημαντική συσχέτιση με το χρόνο έως την εξέλιξη. Επίσης, ο αριθμός των λεμφαδένων με λεμφαγγειογένεση δεν σχετίζεται με το στάδιο ypUICC ή υποτροπή του όγκου στην υποομάδα των ασθενών με NLV +. Εν ολίγοις, η παρουσία των περιφερειακών λεμφαδένων λεμφικών αγγείων αποτελεί ένα ανεξάρτητο προγνωστικό παράμετρο, ενώ το κομβικό λεμφαδένες πυκνότητα σκάφους καθώς και ο αριθμός των λεμφαδένων με ανιχνεύσιμη κομβικά λεμφαγγειογένεση μπορεί να είναι ήσσονος σημασίας για τη συνολική πρόγνωση.

«με λεμφαδένα λεμφαγγειογένεση» ορίζεται ως τουλάχιστον ένα περιφερειακό /mesorectal λεμφαδένα με ανιχνεύσιμα λεμφαγγειογένεση στη θυλακιώδη ή ενδοφολιδωτά περιοχή. A. Ο χρόνος έως την εξέλιξη σε εβδομάδες σε σχέση με την πιθανότητα ελεύθερης νόσου επιβίωση στρωματοποιημένη για την παρουσία του λεμφαδένα λεμφαγγειογένεσης σε όλους τους ασθενείς. B. Ο χρόνος μέχρι την πρόοδο σ εβδομάδες σε σχέση με την πιθανότητα ελεύθερης νόσου επιβίωσης στρωματοποιημένη για την παρουσία των λεμφαδένων λεμφαγγειογένεσης σε αρνητικούς ασθενείς κόμβο.

Η

Α. οικόπεδα Box συγκρίνοντας τον αριθμό των λεμφικών αγγείων στον περινεοπλαστικό περιοχή με την παρουσία ή απουσία μετάστασης λεμφαδένα. Β Box οικόπεδα συγκρίνοντας τον αριθμό των περιφερειακών λεμφαδένων λεμφικών αγγείων σε σχέση με την παρουσία ή την απουσία της λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες σε ασθενείς με ανιχνεύσιμα λεμφαγγεία στους τοπικούς λεμφαδένες.

Η

Σύλλογος λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες ταξινόμησης παλινδρόμηση και την πρόγνωση

στην ομάδα μας, δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική συσχέτιση μεταξύ της κατάταξης παλινδρόμησης λεμφαδένα μετάσταση και υποτροπής του όγκου /επιβίωσης χωρίς νόσο στο μοντέλο Kaplan Meier σε όλους τους ασθενείς και σε αναλύσεις υποομάδων. Στην πολυπαραγοντική ανάλυση στατιστικά σχετική συσχέτιση θα μπορούσε να βρεθεί.

Συζήτηση

Ανεξάρτητα από το μέγεθος του όγκου και η έκταση της εισβολής, περιφερειακών λεμφαδένα μετάσταση (YPN +) είναι ένας σημαντικός προγνωστικός παράγοντας σε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με εισαγωγική ακτινοχημειοθεραπεία [2], [3], [4], [5], [6]. Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό για τη διαλεύκανση των μηχανισμών της λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες, καθώς και πώς λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες θα μπορούσαν να επηρεάσουν τη συνολική επιβίωση των ασθενών. Αν και οι αμφιλεγόμενες, περιογκική λεμφαγγεία αναφέρθηκε από κάποιους να παίζουν ένα ρόλο στην προώθηση της λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες σε ορθοκολικό καρκίνωμα [10], [11], [12], [13] [12], [14], [15]. Χρησιμοποιήσαμε D2-40 αντίσωμα (Podoplanin, στην κυτταρική επιφάνεια σιαλυλιωμένη γλυκοπρωτεΐνη) [16], [17] για τη χρώση των λεμφικών αγγείων στον πρωτογενή αδενοκαρκινώματα και mesorectal λεμφαδένες των 203 ασθενών με καρκίνο του ορθού. Αυτοί οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε θεραπεία με προεγχειρητική ακτινοχημειοθεραπεία ακολουθούμενη από πλήρη χειρουργική αφαίρεση του όγκου (R0). Τα αποτελέσματά μας δείχνουν καμία σημαντική συσχέτιση μεταξύ περινεοπλασματικής και εντός του όγκου λεμφαγγειογένεση και την πρόγνωση των ασθενών. Είναι ενδιαφέρον, παρατηρήσαμε λεμφαδένας λεμφαγγειογένεση ήταν ένα σημαντικό προγνωστικό παράμετρος σε αυτή την ομάδα ασθενών. Όπως έχει ήδη αναφερθεί, lymphangiogenic αυξητικούς παράγοντες όπως VEGF-C και VEGF-A μπορούν να μεταναστεύσουν στις περιφερειακές λεμφαδένες από πρωτογενείς όγκους και προώθηση λεμφαγγειογένεση [7], [18]. Μπορούμε να προβλέψουμε ένα παρόμοιο φαινόμενο σε καρκίνο του παχέος εντέρου, όπως το επίπεδο της VEGF-C δείχθηκε ότι είναι αυξημένα στον ορό του αίματος των ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου [19]. Έχει υποτεθεί ότι λεμφαδένων λεμφαγγεία μπορεί να λειτουργήσει ως μία μεταστατική θέση για τα καρκινικά κύτταρα [7], [8], [20], [21] και διευκολύνει την περαιτέρω μεταστατικό μετασχηματισμό των κυττάρων του όγκου. Αυτό μπορεί να οδηγήσει σε μεταστατικό καρκίνο θεραπεία ανθεκτική και είναι επομένως υπεύθυνος για την κακή πρόγνωση των ασθενών. Μελέτες σε άλλους καρκίνους δείχνουν επίσης μια παρόμοια προγνωστική σημασία των λεμφαδένων λεμφαγγειογένεσης. Σε ένα μοντέλο ποντικού Β16 μελανώματος αποδείχθηκε ότι λεμφαδένα λεμφαγγειογένεση είναι ένα πρώιμο απόκριση σε ανάπτυξη όγκου και μετάσταση όγκου προηγείται [22]. Η σημασία του φρουρού λεμφαδένα λεμφαγγειογένεσης σε μεταστατική εξάπλωση του καρκίνου του μαστού σε μη λεμφαδένα φρουρού έχει δειχθεί σε ασθενείς ανθρώπους. [23]. Παρόμοια αποτελέσματα δείχνουν τη σημασία των λεμφαδένων λεμφαγγειογένεσης αναφέρθηκαν σε παγκρεατικού καρκίνου [8], πλακώδους καρκίνου κεφαλής και τραχήλου [21], και η νόσος του Paget εξωμαστική [20].

Πολυτροπική προεπεξεργασία του τοπικά προχωρημένου καρκίνου του ορθού έχει δείξει θεραπευτικά οφέλη για τους ασθενείς [24]. Προηγουμένως, έχει δειχθεί ότι lymphangiogenic αυξητικούς παράγοντες, π.χ. VEGF-C απορυθμίζεται από τα καρκινικά κύτταρα κατά τη διάρκεια του στρες και να προωθηθεί η ικανότητα άγχος αντοχή τους, [25] ,, [26]. Ως εκ τούτου, είναι πιθανό ότι η θεραπευτική πίεση κατά τη διάρκεια της νέο-επικουρική θεραπεία του καρκίνου του ορθού ενισχύει το επίπεδο σύνθεσης των lymphangiogenic αυξητικών παραγόντων και αυξάνει το σχηματισμό των λεμφικών αγγείων στον περιφερειακούς λεμφαδένες. Αυτό οδηγεί τελικά σε επανεμφάνιση του όγκου και την μετάσταση. Μπλόκο της lymphangiogenic άξονα κατά τη διάρκεια εισαγωγική θεραπεία θα πρέπει ως εκ τούτου να βελτιώσει την έκβαση των σημερινών τρόπων θεραπείας για προχωρημένο στάδιο καρκίνου του ορθού. Η ένωση των λεμφαδένων λεμφαγγειογένεση και χειρότερη πρόγνωση περαιτέρω υποδηλώνει τη ρουτίνα ανίχνευσης των λεμφαδένων λεμφαγγειογένεσης ως σημαντική παράμετρος για την πρόβλεψη υποτροπής του καρκίνου και ως δείκτης για μια πιο επιθετική επικουρική θεραπεία.

Εν κατακλείδι, η μελέτη μας αποδεικνύει ότι η παρουσία της intranodal λεμφαγγειογένεση αποτελεί ένα ανεξάρτητο προγνωστικό δείκτη που σχετίζεται με μικρότερη επιβίωση χωρίς εξέλιξη σε ασθενείς με τοπικά προχωρημένο καρκίνο του ορθού, οι οποίοι αντιμετωπίζονται με εισαγωγική ακτινοχημειοθεραπεία. Ως εκ τούτου, οι στρατηγικές για την ανίχνευση των λεμφαδένων λεμφαγγειογένεσης σε κλινικό περιβάλλον μπορεί να βοηθήσει στην αναγνώριση των ασθενών που θα επωφεληθούν από την πιο επιθετική επιλογές θεραπείας. Επίσης, η συμπερίληψη μιας θεραπευτικής προσέγγισης για να εμποδίσει λεμφαγγειογένεση θα ήταν επωφελής για neoadjuvantly αντιμετωπίζονται ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο του ορθού.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενής υλικό

Το υλικό που χρησιμοποιείται στην παρούσα μελέτη είναι καλύπτεται από την έγκριση της επιτροπής ηθικής της του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου «ο Carl Gustav Carus», Τυϋ-Ιατρική Σχολή, για τη χρήση στην έρευνα (EK59032007? «Feingewebliche und molekularpathologische Untersuchung σε langzeit-archiviertem Gewebsmaterial des Ιδρυμάτων fuer Pathologie des Universitaetsklinikum Δρέσδη /Medizinische Fakultaet Ο carl Gustav Carus, TU Dresden «? Πρόεδρος της Επιτροπής: W. Kirch, MD). Η απόφαση της επιτροπής της ηθικής ενέκρινε συγκεκριμένα τη χρήση του υλικού ιστού για αυτήν την ελάχιστα επεμβατική και αναδρομική μελέτη που χρησιμοποιεί το υλικό του ασθενούς που έχει αποθηκευτεί για περισσότερο από τρία χρόνια. Όλοι οι ασθενείς συναινέσει στη χρήση του υλικού ιστού για την έρευνα (όπως σημειώνεται στα αρχεία των ασθενών). Σύμφωνα με την επιτροπή προφορική συγκατάθεση του ηθική είναι επαρκής σε αυτή την περίπτωση (αυτή η διαδικασία συναίνεσης έχει εγκριθεί από την επιτροπή ηθικής του) επειδή το υλικό που χρησιμοποιείται εδώ δεν συνδέεται με το όνομα του ασθενούς και είναι κωδικοποιημένο. Διακόσια τρεις ασθενείς (αρσενικό: n = 152, θηλυκό: n = 51, μέση ηλικία = 70 έτη) με τοπικά προχωρημένο ορθού αδενοκαρκίνωμα (UICC στάδιο II /III) μεταξύ των ετών 2001 και 2008 συμπεριλήφθηκαν στην παρούσα μελέτη (Σχήμα 1). Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε προεγχειρητική (εισαγωγική) 5-φθοριοουρακίλη (5-FU) με βάση ακτινοχημειοθεραπεία και θεραπευτική χειρουργική επέμβαση R0 κατ ‘αναλογία με την τυχαιοποιημένη μελέτη φάσης ΙΙΙ γερμανική ορθού Δοκιμές Καρκίνου CAO /ARO /AIO-94 [1]. Τα στοιχεία για τις υποτροπές της νόσου (μακρινή μετάσταση ή τοπικές υποτροπές), καθώς και άλλα σχετικά δεδομένα ανακτήθηκαν από τη βάση δεδομένων του Ινστιτούτου Παθολογίας, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο «Ο Carl Gustav Carus», Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου της Δρέσδης, της Γερμανίας.

Παθολογική εξέταση του δείγματος καρκίνου μετά από εισαγωγική θεραπεία

τουλάχιστον τέσσερα δείγματα ελήφθησαν και αξιολογήθηκαν από τον πρωτοπαθή καρκίνο του ορθού. Στην περίπτωση των απόκρυφων υπολειμματικού καρκίνου κατά τη γενική εξέταση, η πλήρης πρώην περιοχή του καρκίνου ήταν ενσωματωμένο και μελετήθηκε από ιστολογία. Σε περίπτωση απουσίας του υπολειμματικού καρκινικών κυττάρων στα χρώση HE ζώντων επιθηλιακών καρκινικών κυττάρων ανιχνεύθηκαν με κυτοκερατίνης χρώση. Η διαδικασία αυτή εξασφαλίζει ότι προκαλείται από τη θεραπεία ίνωση ιστού, καθώς και εξωκυττάριο βλεννίνη συσσωρεύσεις δεν θεωρήθηκαν ως υπολειμματική καρκινικό ιστό και incuded στην κατάταξη υποχώρηση του όγκου. Mesorectal περιφερειακή λεμφαδένες αποκόπηκαν σύμφωνα με την «Ένωση Internationale καρκίνο contre» (UICC). Σε περίπτωση εξέτασης λιγότερο από δώδεκα περιφερειακές mesorectal λεμφαδένες perirectal λιπώδη ιστό (ελάχιστο δέκα μπλοκ παραφίνης) ενσωματώθηκαν και εκτιμήθηκαν για την παρουσία του περαιτέρω λεμφαδένων που δεν ήταν ανιχνεύσιμη με χονδρική εξέταση. Για την ανίχνευση υπολειμματικής καρκινικών κυττάρων Pancytokeratin χρώση έγινε όπως περιγράφεται.

όγκου και των λεμφαδένων ταξινόμησης μετάσταση παλινδρόμησης

Η ιστοπαθολογική υποχώρηση του όγκου (TRG) στο πλαίσιο του πρωτογενούς όγκου βαθμολογήθηκε σύμφωνα με την ημιποσοτική σύστημα που θεσπίστηκε με Dworak et al. [9]: TRG 0 = καμία υποχώρηση? TRG 1 = κυρίαρχη μάζα όγκου με εμφανή ίνωση ή βλεννίνη? TRG 2 = δεσπόζει ινωτικών ή βλεννώδες αλλαγές, με λίγα καρκινικά κύτταρα ή ομάδες? TRG 3 = πολύ λίγα καρκινικά κύτταρα σε ινωτική ή βλεννώδες ιστό? TRG 4 = καμία καρκινικά κύτταρα, μόνο ινωτικών ή βλεννώδες μάζα /συνολικός παλινδρόμησης [2] (Εικ. 2).

Απόδειξη της ανταπόκρισης του όγκου σε προεγχειρητική ακτινοχημειοθεραπεία εντός των λεμφαδένων perirectal ορίστηκε ως η παρουσία του κομβικού ίνωσης ή βλεννίνης πισίνες (με ή χωρίς υπολειπόμενα κύτταρα όγκου), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27], [28]. Μετάσταση λεμφαδένα παλινδρόμησης (LRG) εκτιμήθηκε με τις ίδιες παραμέτρους, όπως το πρωτογενές υποχώρηση του όγκου την εξέταση της κάθε μεταστατικό λεμφαδένα: LRG 0 = καμία υποχώρηση? LRG 1 = κυρίαρχη μάζα όγκου με εμφανή ίνωση ή βλεννίνη? LRG 2 = δεσπόζει ινωτικών ή βλεννώδες αλλαγές, με λίγα καρκινικά κύτταρα ή ομάδες? LRG 3 = πολύ λίγα καρκινικά κύτταρα σε ινωτική ή βλεννώδες ιστό? LRG 4 = δεν υπάρχουν καρκινικά κύτταρα, μόνο ινωτικών ή βλεννώδες μάζας /συνολική οπισθοδρόμηση. Μη μεταστατικό λεμφαδένες διακρίνονται από εκείνα με συνολική μεταστατικό παλινδρόμησης (LRG 4) με απουσία ίνωσης ή βλεννίνης (Σχ. 2). Όταν διάφορα LRGs βρέθηκαν σε έναν ασθενή, θεωρήθηκε μόνο ο λεμφαδένας με τη χειρότερη παλινδρόμησης.

Ανοσοϊστοχημεία

Η ανοσοϊστοχημεία πραγματοποιήθηκε επί 2 μm τομές των μπλοκ παραφίνης-embedded από τον πρωτογενή όγκο και περιφερειακών λεμφαδένες. Αποπαραφίνωση, ενυδάτωση, και το αντιγόνο ανάκτηση διεξήχθησαν με μαγειρέματος με ατμό (98 ° C, 45 min) σε ρυθμιστικό PT Module (ρΗ 8,0) (Thermo επιστημονικές, Medac, Αμβούργο, Γερμανία). Οι ιστοί πλύθηκαν σε αλατόνερο ρυθμισμένο με Tris (TBS) (Thermo επιστημονικές, Medac, Hamburg, Germany) και επωάστηκαν με αντι ανθρώπινο μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού podoplanin ανίχνευση D2-40-αντίσωμα (ϋΑΚΟ, Αμβούργο, Γερμανία, 1:400 αραίωση) για 30 min σε θερμοκρασία δωματίου. Στη συνέχεια, η ενδογενής δράση υπεροξειδάσης ανεστάλη με επώαση τα πλακίδια σε 3% Η

2O

2 για 10 λεπτά. Μετά από έκπλυση σε TBS, Ultravision LP μεγάλο σύστημα ανίχνευσης όγκος HRP Polymer (Thermo επιστημονικές, Medac, Αμβούργο, Γερμανία) χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή. Οι τομές χρωματίστηκαν με 0,5 mg /ml diaminobenzidin tetrahydrochlorid (DAB) και αντι-βάφτηκαν με αιματοξυλίνη. Σε όλα τα πειράματα, περιελήφθησαν θετικά και αρνητικά δείγματα αναφοράς.

Αξιολόγηση της ανοσοϊστοχημείας

πυκνότητα σκάφος λεμφικού εκτιμήθηκε με τη μέθοδο της «hot-spot» όπως περιγράφηκε προηγουμένως και επίσης αναφέρεται ως Chalkley μέθοδος σημείο σταυρόνημα [29]. Εν συντομία, όλες οι διαφάνειες σαρώθηκαν σε χαμηλή μεγέθυνση (x40) και προσδιορίστηκαν οι περιοχές με την υψηλότερη πυκνότητα των D2-40 θετική σκαφών. Στη συνέχεια, ο αριθμός των D2-40 θετική σκάφη μετρήθηκε σε αυτούς τους τομείς σε πέντε πεδία υψηλής ισχύος (HPF, χ400) από δύο ανεξάρτητους παθολόγους (CJ και ΜΗΜ) χωρίς τη γνώση των κλινικοπαθολογοανατομικών ευρήματα, και η μέση τιμή των μετρήσεων σκάφος ήταν υπολογιστεί. Η ενδονεοπλασματική (λεμφικών αγγείων εντός της μάζας του όγκου) και περιογκική (λεμφικών αγγείων εκτός του όγκου, αλλά εντός 2 mm από την εμπρόσθια εισβολή όγκου) LVD προσδιορίστηκε ξεχωριστά. Σκάφη κοντά σε ελκωτική περιοχές δεν μετρήθηκαν. LVD αξιολογήθηκε σε όλους τους αποκόπηκαν mesorectal λεμφαδένων συμπεριλαμβανομένων κομβικά μεταστάσεων, υπολειμματικό λεμφικό ιστό των μεταστατικών λεμφαδένων (αν υπάρχει), και όλα τα μη-μεταστατικούς λεμφαδένες. Η προϋπάρχουσα intranodal σκαφών (ενδιάμεσο όπως επίσης και το περιθωριακό κόλπων) δεν μετρήθηκαν. Κατά τη διάρκεια της αξιολόγησης συμφωνίας υψηλή μεταξύ παρατηρητών επιβεβαιώθηκε με τη χρήση συντελεστή Κάππα του Cohen (κ = 0,8? P & lt? 0.001). Σε περίπτωση διαφορών μεταξύ παρατηρητών, η υπόθεση επαναξιολογηθεί με ταυτόχρονη επανεκτίμηση του δείγματος.

Η στατιστική ανάλυση

Όλες οι δοκιμές πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας SAS JMP Έκδοση 9. Ενώσεις μεταξύ διαφορετικών κατηγορικές μεταβλητές αξιολογήθηκαν με τη χρήση του χ

2 τεστ. Συνεχείς μεταβλητές συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας U-τεστ ή ANOVA Mann-Whitney. Ώρα να ρυθμοί εξέλιξης συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας την μονοπαραγοντική ανάλυση Kaplan-Meier, πολυπαραγοντική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του μοντέλου παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου του Cox με τους συμπαράγοντες ypUICC σταδίου, την ηλικία, το φύλο, την υποχώρηση του όγκου, εντός του όγκου της πυκνότητας σκάφος της λέμφου, περιογκική πυκνότητα αγγείων λέμφου, λεμφαδένας πυκνότητα λεμφαδένες σκάφος. P-τιμές μικρότερες από 0.05 θεωρήθηκαν στατιστικώς σημαντικά.

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω Marissa J Stanton, Πανεπιστήμιο της Νεμπράσκα Ιατρικό Κέντρο, για την κριτική εξέταση του χειρογράφου.