Αφηρημένο

Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνήσει συγκεκριμένες μοριακών δεικτών που θα μπορούσαν να οδηγήσουν σε νέες γνώσεις σχετικά με την ταυτοποίηση των καινοτόμων θεραπειών. Ο ρόλος των DNMT3b και προβλεπτική ισχύ της στην πρόγνωση του καρκίνου του στόματος εντοπίστηκαν. Επελέγησαν ανθρώπινη στοματική καρκινικές κυτταρικές σειρές συμπεριλαμβανομένων SCC4 και SCC25 για κυψελοειδή πειράματα. Αλλαγές στην αύξηση του όγκου, την επιθετικότητα και την υπεύθυνη σηματοδοτικό μονοπάτι ερευνήθηκαν

in vitro

και

in vivo

. Επιπλέον, 125 δείγματα καρκινικού ιστού του στόματος αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημική χρώση σε πλακίδια μικροσυστοιχιών ιστό, και συσχετισμοί υπολογίζονται μεταξύ του επιπέδου της DNMT3b και την κλινική έκβαση των ασθενών. Τα δεδομένα μας αποκάλυψαν ότι η αναστολή της DNMT3b οδήγησε σε βραδύτερη ανάπτυξη όγκου, εξασθενημένα ικανότητα εισβολής του όγκου και των επιθηλιακών μετάβαση μεσεγχυματικά, όπως προσδιορίζεται από

in vitro

και

in vivo

πειράματα. Ενεργοποιείται η IL-6 σηματοδότησης μπορεί να ευθύνονται για την πρόκληση DNMT3b υπερέκφραση σε καρκίνο του στόματος. Αναφορικά με τα κλινικά δεδομένα, η συχνότητα εμφάνισης DNMT3b ανοσοαντιδραστικότητας σε στοματική δειγμάτων καρκίνου ήταν σημαντικά υψηλότερη από ότι σε μη-κακοήθη επιθήλιο, και θετικά με την έκφραση της IL-6. Επιπλέον, η έκφραση της DNMT3b ήταν σημαντικά συνδεδεμένη με τον κίνδυνο εμπλοκής λεμφαδένων, υποτροπή της νόσου και βραχύτερη επιβίωση σε ασθενείς με παθολογική σταδίου III-IV καρκίνο του στόματος. Συμπερασματικά, η IL-6 άξονα -DNMT3b θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για να προβλέψουν την πρόγνωση του καρκίνου του στόματος στις κλινικές, και η στόχευση DNMT3b θα μπορούσε να αποτελέσει μια πολλά υποσχόμενη θεραπευτική στρατηγική

Παράθεση:. Chen WC, Τσεν MF, Λιν PY (2014 ) Σημασία της DNMT3b στον καρκίνο του στόματος. PLoS ONE 9 (3): e89956. doi: 10.1371 /journal.pone.0089956

Επιμέλεια: Hiromu Suzuki, Σαπόρο Ιατρικό Πανεπιστήμιο, την Ιαπωνία

Ελήφθη: 30 Οκτωβρίου, 2013? Αποδεκτές: 24η Ιανουαρίου του 2014? Δημοσιεύθηκε: 13 Μαρτίου 2014

Copyright: © 2014 Chen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το έργο ήταν η υποστήριξη από Chang Gung Memorial Hospital, την Ταϊβάν, τη χορήγηση CMRPG6A0222-3. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

οι πιο συχνές μορφές καρκίνου του στόματος είναι από του στόματος ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (OSCC), τα οποία είναι τα πιο κακοήθεις όγκοι της κεφαλής και του τραχήλου. Αυτή η επιθετική επιθηλιακά νεόπλασμα σχετίζεται με σοβαρή νοσηρότητα. Μετεγχειρητική χημειοακτινοθεραπεία (CCRT) έχει ως αποτέλεσμα την καλύτερη τοπική-περιοχική ελέγχου και επιβίωσης για τοπικά προχωρημένο ασθενείς με καρκίνο κεφαλής και τραχήλου με παράγοντες υψηλού κινδύνου [1]. Παρά τις σημαντικές προόδους στη θεραπεία, 40-50% των ασθενών με τοπικά προχωρημένο υποτροπή της νόσου με τοπική ή απομακρυσμένη εξέλιξη της νόσου [2]. Διερεύνηση συγκεκριμένων μοριακών δεικτών που σχετίζονται με την ανισορροπία μεταξύ κυτταρικό θάνατο και τον πολλαπλασιασμό, η ικανότητα για την εισβολή των ιστών και την ευαισθησία της θεραπείας, θα μπορούσε να προσφέρει νέες ιδέες για την ταυτοποίηση καινοτόμων θεραπειών.

OSCC είναι μια πολυπαραγοντική νόσος, η οποία συνδέεται κυρίως με χρόνιο κάπνισμα, το αλκοόλ και betel καρύδι χρήση [3]. Η γενετική προδιάθεση έχει επίσης εμπλακεί σε ογκογένεση του στόματος, και πολλαπλών γενετικών και επιγενετικών εναλλαγές που εμπλέκονται στην ανάπτυξη του καρκίνου [4]. Η ανώμαλη μεθυλίωση του DNA παίζει ένα ρόλο κλειδί στην καρκινογένεση, οδηγώντας σε επιγενετική αποσιώπηση γονιδίων καταστολής όγκων που εμπλέκονται στη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου, απόπτωση και την επιδιόρθωση του DNA [5], [6]. DNA υπερμεθυλίωση συμβαίνει συχνά σε προ-καρκινικά και καρκινικούς ιστούς [7]. Σε OSCC, p14, p16, MGMT, DAP-κινάση και Ε-καδερίνης ήταν συχνά και μελετά διεξοδικά μεθυλιωμένα γονίδια [8] – [12]. Η μεθυλίωση του DNA συνήθως διαμεσολαβείται από μεθυλοτρανσφεράσες DNA (DNMT) και σε γονιδιώματα θηλαστικών υπάρχουν τρεις γονίδια DNMT? Dnmt3a και DNMT3b είναι υπεύθυνοι για την de novo μεθυλίωση και να τροποποιήσουν μη μεθυλιωμένου DNA, και DNMT1 πιστεύεται ότι είναι υπεύθυνος για τη διατήρηση μοτίβα μεθυλίωσης [13] – [15]. DNMT3b έχει αναφερθεί ότι συμμετέχουν στην καρκινογένεση αρκετών τύπων καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του οισοφάγου, του στομάχου και του καρκίνου του πνεύμονα [16] – [18], αλλά ο ρόλος του DNMT3b σε OSCC απαιτεί περαιτέρω διερεύνηση. Αναφέραμε προηγουμένως ότι η ενεργοποιημένη IL-6 σηματοδότηση συνδέθηκε με την επιθετική συμπεριφορά όγκου στον καρκίνο του στόματος [19]. Στην προφορική καρκινικά κύτταρα, η IL-6 έχει αναφερθεί για την προώθηση της ογκογένεσης με alterinig μεθυλίωσης DNA [20]. Κατά συνέπεια, εξετάσαμε την έκφραση του DNMT3b σε OSCC και η σύνδεσή της με την IL-6 σηματοδότησης στην παρούσα μελέτη. Ο ρόλος της DNMT3b σε OSCC

in vitro

και

in vivo

, και η συσχέτιση με τις κλινικές εκβάσεις των ασθενών με OSCC χρησιμοποιώντας ανοσοχημική ανάλυση χρώσης ερευνήθηκαν επίσης.

Υλικά και Μέθοδοι

δείγματα και τα χαρακτηριστικά των ασθενών

ιστών

το Διοικητικό συμβούλιο Institutional Review (IRB) του Chang Gung Memorial Hospital ενέκρινε την παρούσα μελέτη (Αριθμός άδειας: 98-3546B). Οι γραπτές συγκαταθέσεις υπογράφηκαν από τους ασθενείς για δείγμα και οι πληροφορίες τους να αποθηκεύονται στο νοσοκομείο και να χρησιμοποιηθεί για την έρευνα. Η διαδικασία συναίνεσης εγκρίθηκε από IRB. Δείγματα αναδρομικά συλλέχθηκαν από ασθενείς που διαγιγνώσκονται με τοπικά προχωρημένο OSCC που έλαβαν θεραπευτική αγωγή, και κατασκευάστηκε σε ιστικές μικροσυστοιχίες (ΤΜΑ) στοιχεία για ανοσοχημική ανάλυση. Στη μελέτη, TMA μπλοκ αποτελούνταν από 125 περιπτώσεις OSCC με παθολογική σταδίου III-IV (παρειακή, η = 48? Ούλων, η = 24? Χείλος, η = 10? Γλώσσα, η = 35? Ουρανίσκο, η = 8) με AutoTiss 1000 (Ever βιοτεχνολογία, Καναδάς). Όταν μπλοκ ήταν διαθέσιμα, αιματοξυλίνη και διαφάνειες ηωσίνη-βάφονται είχαν επανεκτιμηθεί από έναν παθολόγο για την αξιολόγηση της ποιότητας της TMA διαφάνειες. Τα δεδομένα που αφορούν την αρχική διάγνωση, σταδιοποίηση, παθολογικοί παράγοντες, υποτροπής και την επιβίωση συλλέχθηκαν (Πίνακας 1). αναλύσεις πιθανότητα επιβίωσης έγιναν χρησιμοποιώντας την μέθοδο Kaplan-Meier. Η σημαντικότητα μεταξύ των διαφορών ομάδα εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας την δοκιμή Sperman-rank. Πολυπαραγοντικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση ενός μοντέλου παλινδρόμησης Cox για τη συνολική επιβίωση. Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο όψεων, με τη σημασία που ορίζεται ως p & lt?. 0.05

Η

Η ανοσοϊστοχημική χρώση (IHC)

τμήματα ιστού από το μπλοκ TMA και φορμόλη σταθερά, ιστούς παραφίνης ήταν κομμένο σε 4-μm τμήματα, τοποθετημένα σε πλάκες, αποπαραφινώθηκαν με ξυλόλιο και αφυδατώνεται χρησιμοποιώντας μία διαβαθμισμένη σειρά αιθανόλης. Antigen ανάκτηση, με τη χρήση του κιτρικού οξέος (ρΗ 6.0) για 30 λεπτά, ακολουθούμενη από κατεργασία με3Η υπεροξείδιο του υδρογόνου%. Οι πλάκες επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με αντισώματα έναντι ειδικών πρωτεϊνών. Αντισώματα ειδικά για ρ-Η2ΑΧ, ΜΜΡ-9, αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF), και CD31 λήφθηκαν από Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA), Chemicon (Temecula, CA), Έρευνα & amp? Diagnostics Systems, Inc. (Minneapolis, ΜΝ USA), και DNMT1 και DNMT3b αγοράστηκαν από Abcam (Cambridge, ΜΑ), αντίστοιχα. Είχαν χρησιμοποιηθεί σε 1:100 αραιώσεις. Μετά από τρεις πλύσεις σε φωσφορικό ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα (PBS), οι τομές επωάστηκαν με βιοτινυλιωμένο δευτερεύον αντίσωμα fOR10 λεπτά και χρωματίστηκαν με υπεροξειδάση αβιδίνη και πλύθηκαν πάλι σε PBS? τότε διάλυμα 3-αμινο-9-αιθυλκαρβαζόλη προστέθηκε. Οι τομές με αιματοξυλίνη. Τα δεδομένα IHC αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Image Pro Plus 6.3 (ΟΠΠ). πυκνότητα μικροαγγειακή (MVD) μετρήσεις χρησιμοποιώντας χρώση CD31 Κάθε ανοσοαντιδραστικό σύμπλεγμα ενδοθηλιακών κυττάρων σε επαφή με το επιλεγμένο πεδίο μετρήθηκε. Τα δεδομένα της IHC εξετάστηκε με καλή ταχύτητα πλατφόρμα σάρωσης slide σάρωσης, και αναλύονται με Image Pro Plus 6.3 (ΟΠΠ). Αυτή η ανάλυση έδειξε ότι τα αντισώματα στοχεύουν πρωτεΐνες που είχαν υψηλή έκφραση σε επιθηλιακά κύτταρα όγκου (Εικ. 1) σε σύγκριση με παρακείμενες μη-καρκινικό ιστό. Για ιστολογική αξιολόγηση των DNMT1 και χρώση DNMT3b, εκτός από την ανάλυση ΙΡΡ, πλακίδια ελέγχεται εκ νέου από ένα μόνο παθολόγο. DNMT1 και DNMT3b ανοσοαντιδραστικότητα ενός δείγματος ιστού μετρήθηκε για τα κύτταρα έδειξαν θετική πυρηνική χρώση, ανεξάρτητα από κυτταροπλασματικές δείγματα staining.The αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας την ημι-ποσοτική ανοσοαντιδραστικά βαθμολογία (IRS). Το IRS υπολογίστηκε πολλαπλασιάζοντας την ένταση χρώσης (βαθμολογήθηκε ως: 0 = όχι, 1 = ασθενής, 2 = μέτρια και 3 = ισχυρή χρώση) και το ποσοστό των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων (0 = λιγότερο από 10% των χρωματισμένων κυττάρων, 1 = 11-50% των χρωματισμένων κυττάρων, 2 = 51-80% των χρωματισμένων κυττάρων και 3 = περισσότερο από 81% των χρωματισμένων κυττάρων). Το κριτήριο για θετική χρώση είναι ένα δείγμα με ένα IRS βαθμό βαθμολόγησης 2.

Α. Επίπεδα DNMT1 και DNMT3b εξετάστηκαν σε καρκίνο (CA) και μη-κακοήθους ιστού (ΝΤ) με ανάλυση Western blotting. B. Επίπεδα DNMT1 και DNMT3b εξετάστηκαν σε έξι δείγματα (ζεύγη καρκίνου (CA) και των παρακείμενων μη-κακοήθεις ιστούς (ΝΤ)?. Με RT-PCR Το γ-άξονας δείχνει την αναλογία πρωτεΐνης-στόχου σε καρκινικό ιστό διαιρείται με ότι σε . οι μη-κακοήθεις δείγμα Στήλες, σημαίνει από τρία ξεχωριστά πειράματα? Μπαρ, τυπική απόκλιση (SD)? *, Ρ & lt?. 0.05 οι Γ Εκπρόσωπος διαφάνειες της IHC θετική χρώση με DNMT1 και DNMT3b αντισώματα φαίνεται από τις εικόνες χρησιμοποιώντας IPP (NT, παρακείμενες μη κακοήθεις επιθηλίου?. CA, τον καρκίνο του στόματος ιστού) Εικόνες του εκπροσώπου διαφάνειες παρουσιάζονται σε μεγεθύνσεις × 100 (πάνω σειρά) και × 200 (κάτω σειρά) * (+) σημαίνει θετική χρώση σε καρκίνο & gt?.. παρακείμενο NT

κυτταρική καλλιέργεια και αντιδραστήρια

Οι ανθρώπινη στοματική καρκινικές κυτταρικές σειρές, SCC4 και SCC25, ελήφθησαν από Bioresource Συλλογή και Research Center (BCRC). Η ανθρώπινη ανασυνδυασμένη IL-6 αντίσωμα ελήφθη από την R & amp ?.. D (Minneapolis, ΜΝ) Η DNMT αναστολέας της 5-αζα-2′-δεοξυκυτιδίνης ελήφθη από την Sigma (St. Louis, ΜΟ) Η DNMT3b-GFP σίγησης (φορέας psiRNA-h7SK εκφράζουν siRNA που στοχεύει ανθρώπινο DNMT3B από το ανθρώπινο 7SK RNA πολυμεράση III υποκινητή, και το γονίδιο σύντηξης GFP:Zeo οποίο προσδίδει τόσο ρεπόρτερ και δραστηριότητες αντοχής στα αντιβιοτικά) και φορέα GFP-μάρτυρα (μη-αποτελεσματικές κωδικοποιημένα siRNA σε φορέα GFP) αγοράστηκαν από InvivoGen. Σταθερό DNMT3b-σιγήσει καρκινικά κύτταρα δημιουργήθηκαν με επιμόλυνση κυττάρων SCC4 και SCC25 με τη φίμωση φορέα DNMT3b και επιλέγονται με καλλιέργεια σε μέσο που περιέχει Zeomycin για 4 εβδομάδες.

Η ανάπτυξη των κυττάρων και κλωνογονική δοκιμασία

Οι επιδράσεις της DNMT3b στο ρυθμό ανάπτυξης των κυττάρων αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας κύτταρα επιμολυσμένα με ένα DNMT3b φίμωση φορέα ή φορέα ελέγχου. Για τη μέτρηση της ανάπτυξης των κυττάρων, 1 × 10

4 κύτταρα ανά φρεάτιο απλώθηκαν σε δίσκους των 6 φρεατίων. Στα ενδεικνυόμενα χρονικά σημεία, τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν, συλλέγεται και επιζώντα κύτταρα μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας αποκλεισμό μπλε Τρυπάνης, από το οποίο καθορίστηκαν οι καμπύλες επιβίωσης για SCC επιμολυντές. Επιπλέον, χρησιμοποιήθηκε κλωνογονική δοκιμασία. Εκθετικά αναπτυσσόμενα κύτταρα επωάστηκαν στους 37 ° C για 10 ημέρες, και οι πλάκες βάφτηκαν με κρυσταλλικό ιώδες (Sigma) για να βοηθήσει καταμέτρηση των αποικιών. Αποικίες που περιέχουν & gt?. 50 κύτταρα βαθμολογήθηκαν για τον προσδιορισμό της αποτελεσματικότητας και της επιμετάλλωσης επιβιώνουν κλάσματα για κάθε κυτταρική σειρά

ανοσοαποτύπωσης

Για στύπωση Western των ολικών κυττάρων και τα εκχυλίσματα του στόματος ιστού, δείγματα ομογενοποιήθηκαν και /ή υποβάλλεται σε επεξεργασία με ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (Calbiochem, La Jolla, CA). Τα δείγματα στοματικού ιστού που αποτελείται από έξι δείγματα καρκινικού ιστού και έξι μη κακοήθεις δείγματα επιθηλίου. Ένα NE-PER kit (Pierce, Rockford, IL) χρησιμοποιήθηκε για να διαχωρίσει τα πυρηνικά και κυτταροπλασματικών πρωτεϊνών. Για να προσδιοριστεί η

in vitro

επιδράσεις της IL-6 ΑΒ, και ενός αναστολέα DNMT, πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν από κύτταρα παρουσία ή απουσία /ml IL-6 αντισώματα εξουδετέρωσης 5 μg για 24 ώρες ή 5 μΜ 5- αζα-2′-δεοξυκυτιδίνης για 36 h, αντίστοιχα. Η ίση ποσότητα πρωτεΐνης φορτώθηκε σε μια 4-20% γέλη βαθμίδωσης SDS-PAGE, η πρωτεΐνη μεταφέρθηκε σε φίλτρα νιτροκυτταρίνης μετά διαχωρίστηκε στην πηκτή. Οι κηλίδες μπλοκαρίστηκαν σε 2% BSA σε TBST για 1 ώρα, οι μεμβράνες επωάστηκαν όλη τη νύκτα (4 ° C) με αντισώματα έναντι DNMT1, DNMT3b, VEGF, E-cadherin, STAT3, pSTAT3

Tyr705, και ΜΜΡ-9. Οι μεμβράνες επωάστηκαν με συζευγμένο με HRP δευτερογενούς αντι-κατσίκας, αντι-ποντικού, ή αντισώματα αντι-κουνελιού (αραίωση 1:1,000-1:2,000), αντιστοίχως, για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Οι πρωτεΐνες έγιναν ορατές με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια. Οι μεμβράνες ανιχνεύθηκαν και πάλι με ένα αντίσωμα έναντι r-τουμπουλίνης ή πυρηνικών λαμίνη να ομαλοποιήσει πρωτεΐνη φόρτωση.

σε πραγματικό χρόνο αλύσου πολυμεράσης ανάστροφης μεταγραφής αντίδραση (RT-PCR)

σε πραγματικό χρόνο RT-PCR πραγματοποιήθηκε σε RNA που εκχυλίζεται από τα κύτταρα και δείγματα ιστών (δείγματα ιστών έξι καρκίνου και έξι μη κακοήθεις ιστούς του στόματος? δύο δείγματα τρέχουν σε κάθε λωρίδα). RNA (2 μα) μεταγράφηκε αντίστροφα με ένα τυχαίο αρχικό τεμάχιο να ληφθεί το πρώτο κλώνο cDNA. Οι αλληλουχίες των εκκινητών για DNMT3b ήταν 5′- GACTCGAAGACGCACAGCTG -3 ‘/5’- CTCGGTCTTTGCCGTTGTTATAG ». Για τον έλεγχο για διαφορές φόρτωσης, με β-ακτίνης εκκινητής χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος. Η βελτιστοποιημένη PCR πραγματοποιήθηκε σε ένα πολύχρωμο σύστημα ανίχνευσης PCR πραγματικού χρόνου iCycler Iq. Σημαντικές σήματα φθορισμού PCR από ιστούς καρκινώματος κανονικοποιήθηκαν στη μέση τιμή των σημάτων που λαμβάνονται από τα μη-κακοήθη ιστών και κυττάρων υπό συνθήκες ελέγχου.

χρώση ανοσοφθορισμού (IF)

Cells αποδεικνύοντας εκθετική αύξηση σπάρθηκαν επάνω σε καλυπτρίδες για χρώση ανοσοφθορισμού με ή χωρίς θεραπεία. Στους χρόνους που υποδεικνύονται μετά την αγωγή, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν, διαπερατά με 2% παραφορμαλδεΰδη για 5 λεπτά και πλύθηκαν με PBST. Οι πλάκες επωάστηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου με αντισώματα έναντι Ε-καδερίνης, DNMT3b, VEGF και ΜΜΡ-9 για 1 ώρα με Texas Red συζευγμένο με δευτερογενές αντίσωμα. Τα πλακίδια επιχρωματίστηκαν με DAPI για να απεικονίσει πυρήνες. Μετά από δύο πλύσεις με PBST, ειδικές πρωτεΐνες-στόχοι οπτικοποιούνται χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φθορισμού.

μετανάστευση κυττάρου και κυττάρου εισβολή δοκιμασία

Δοχεία κύτταρο εισβολή προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας μία κυτταρική διείσδυση Δοκιμασία (Trevigen, Gaithersburg, MD). Μετά από επώαση για 24 ώρες, ο αριθμός των κυττάρων στον κάτω θάλαμο προσδιορίστηκε με μέτρηση του φθορισμού calcein ανιόν, που απελευθερώνεται από ενδοκυτταρικές καλσεΐνης ακετοξυμεθυλεστέρα. Για την επικύρωση των πειραμάτων σχετικά με τη μετανάστευση των κυττάρων, δοκιμασίες μηδέν πραγματοποιήθηκαν. Μια μεγάλη γρατσουνιά 2 χιλιοστά συντάχθηκε σε όλη κάθε κυτταρικό στρώμα χρησιμοποιώντας ένα ρύγχος πιπέτας. Οι πλάκες φωτογραφήθηκαν στους χρόνους που υποδεικνύονται.

όγκων μοντέλο ξενομοσχεύματος

Αυτή η μελέτη πραγματοποιήθηκε σε αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις στον Οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου, όπως ψηφίστηκε από το ινστιτούτα Εργαστήριο ζώων Πόρων, Εθνικό Συμβούλιο Έρευνας, ΗΠΑ το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας των πειραμάτων σε ζώα των Chang Gung Memorial Hospital (Αριθμός άδειας: 2012080902). Οκτώ εβδομάδων θηλυκούς αθυμικούς γυμνούς ποντικούς χρησιμοποιήθηκαν ως μοντέλο εμφύτευσης ξενομοσχεύματος όγκου. Στο έκτοπη μοντέλο εμφύτευση του όγκου, τα κύτταρα (1 χ 10

6 καρκινικά κύτταρα εγχύθηκαν υποδόρια ανά εμφύτευση, πέντε ζώα ανά ομάδα) εμφυτεύθηκαν εντός του διμερούς ραχιαία περιοχή των γλουτών. Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε κάθε τρεις ημέρες μετά την εμφύτευση (ημέρα 0). Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε υποθέτοντας ένα ελλειψοειδές σχήμα.

Αποτελέσματα

Επίπεδα DNMT3b στην προφορική καρκινικούς ιστούς

Η έκφραση των DNMT3b στα δείγματα ιστών (κακοήθη έναντι γειτονικών μη κακοήθη ) εξετάσθηκε δια κηλιδώσεως Western, ενώ το mRNA αποδείχθηκε με πραγματικού χρόνου RT-PCR (Σχ. 1Α-Β). Με τα δεδομένα, ο καρκίνος επέδειξε σημαντικά υψηλότερο επίπεδο από ό, τι DNMT3b μη κακοήθη δείγμα. Τα δεδομένα IHC της TMA διαφάνειες επιβεβαίωσε αυτό το εύρημα που DNMT3b ήταν υπερεκφράζεται σε ιστούς όγκων από τις παρακείμενες μη κακοήθη επιθηλιακά ιστών (Εικ. 1Γ). Από τους 125 του στόματος καρκινικούς ιστούς προσδιορίστηκαν για DNMT3b και DNMT1 χρησιμοποιώντας ανάλυση IHC, 76 (61%) έδωσε DNMT3b θετική ανοσοδραστικότητα αλλά μόνο το 36% (45/125) με DNMT1 θετική χρώση. Επιπλέον, ο ρόλος του DNMT3b στην κλινική έκβαση της ανθρώπινης OSCC αξιολογήθηκε περαιτέρω χρησιμοποιώντας χρώση IHC. Οι ασθενείς περαιτέρω χαρακτηριστεί ως DNMT3b (+) ή DNMT3b (-) με βάση τα αποτελέσματα IHC. Υπήρχε θετική συσχέτιση μεταξύ της επίπτωσης της λεμφαδένα μετάστασης, υποτροπή της νόσου και DNMT3b θετική χρώση (Πίνακας 1). Ογδόντα τρία τοις εκατό (40/46) των ασθενών με υποτροπή της νόσου (συμπεριλαμβανομένων των τοπικών-περιφερειακών ανεπάρκεια και απομακρυσμένες μεταστάσεις) έδειξε θετική χρώση για DNMT3b. Αντίθετα, το 46% (36/79) των ασθενών που χαρακτηρίζονται ως έχοντες καθεστώς απαλλαγής από ασθένειες που εκφράζονται DNMT3b. Τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι η χρώση DNMT3b θα μπορούσε να έχει την προγνωστική αξία στην πρόγνωση του καρκίνου του στόματος.

Ο ρόλος της DNMT3b στην ανάπτυξη όγκου

Για να διερευνηθεί εάν εναλλασσόμενο έκφραση DNMT3b έπαιξε ρόλο στην επιθετική ανάπτυξη του όγκου, του στόματος καρκινικά κύτταρα επιμολύνθηκαν με ένα DNMT3b-GFP σίγησης φορέα. Όπως καταδεικνύεται στο Σχήμα 2Α, η DNMT3b φίμωση φορέα ανέστειλε σημαντικά την έκφραση DNMT3b σε καρκινικά κύτταρα με κηλίδωση Western και ανοσοχημική ανάλυση χρώσης. Η επίδραση της DNMT3b στην κυτταρική ανάπτυξη του όγκου προσδιορίστηκε με μέτρηση των ζωντανών κυττάρων επί έξι ημέρες και το σχηματισμό αποικιών. Τα δεδομένα από την κυτταρική πειράματα έδειξαν DNMT3b φίμωση φορείς ανέστειλε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων

in vitro

(Εικ. 2Β). Η μεταβολή στην κατανομή του κυτταρικού κύκλου περαιτέρω μετρηθεί. Η φίμωση διάνυσμα DNMT3b οδήγησε σε διακοπή του κυτταρικού κύκλου (σχ. 2C). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Δ με παρατήρηση του ξενομοσχεύματος όγκων, την αναστολή της DNMT3b χρησιμοποιώντας φίμωση φορείς μειώθηκε σημαντικά ρυθμού ανάπτυξης του όγκου.

A. Επιπτώσεις της DNMT3b φίμωση φορέα σχετικά με το επίπεδο των DNMT3b στην SCC4 και SCC25 αποδεικνύεται από κηλίδωση Western και ανοσοχημική χρώση

in vitro

. Οι εικόνες των αντιπροσωπευτικών διαφάνειες δείξει και το βέλος δείχνει θετική χρώση των DNMT3b στα κύτταρα. (C-V, τα κύτταρα με τον φορέα ελέγχου? DNMT3b-SV, κύτταρα σταθερώς επιμολυσμένα με φορέα DNMT3b σίγησης? DNMT-Ι, κύτταρα κατεργασμένα με αναστολέα DNMT). B. Επίδραση της DNMT3b επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων καρκίνο του στόματος, όπως προσδιορίστηκε με βιώσιμη απαρίθμηση των κυττάρων και του σχηματισμού αποικιών. Ο ίδιος αριθμός κυττάρων (10

4) τοποθετήθηκαν σε κάθε πλάκα την ημέρα 0 και αφέθηκαν να αναπτυχθούν σε αντίστοιχες καλλιέργειες τους. Μετρήσαμε τον αριθμό των βιώσιμων κυττάρων μετά από επώαση για 2, 4 και 6 ημέρες. Ο άξονας Υ αντιπροσωπεύει τον αριθμό βιώσιμων κυττάρων. Point, σημαίνει τριών ξεχωριστών πειραμάτων? μπαρ, SD. *,

σ

& lt? 0,05. C. Τα κύτταρα αναλύθηκαν με FACS για την περιεκτικότητα σε DNA υπό συνθήκες ελέγχου ή με την αναστολή DNMT3b. Τα δεδομένα αποδεικνύεται από αντιπροσωπεύεται εικόνες. Δ Επιπτώσεις της DBMT3b φίμωση φορέα σχετικά με τα επίπεδα των DNMT1 και DNMT3b αξιολογούνται από την IHC και την ανάπτυξη ξενομοσχεύματος όγκου. Κάθε σημείο αντιπροσωπεύει το μέσο όρο τριών ξεχωριστών πειραμάτων? μπαρ, SD? *,

P

& lt? 0,05. Αντιπροσωπευτικά εικόνες που παρουσιάζονται.

Η

Ο ρόλος της DNMT3b στον όγκο εισβολή

Υπήρξε μια θετική σχέση μεταξύ χρώση DNMT3b και LN μετάσταση και την αποτυχία της νόσου σε ασθενείς με καρκίνο του στόματος (Πίνακας 1). Όπως αποδεικνύεται χρησιμοποιώντας μετανάστευση μηδέν και προσδιορισμούς εισβολής, DNMT3b φίμωση φορείς εξασθένησε την ικανότητα εισβολής των καρκινικών κυττάρων του στόματος

in vitro

(Σχ. 3Α-Β). Επιθηλιακά μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT) είναι ένα βασικό γεγονός στην εισβολής ενός όγκου [21]. Ως εκ τούτου, προσδιορίστηκε αν αυτό ήταν ο μηχανισμός που διέπει τις επιδράσεις της DNMT3b στην από του στόματος διεισδυτικότητα του καρκίνου. Η φίμωση διάνυσμα DNMT3b επαγόμενη από το στόμα των καρκινικών κυττάρων για την αύξηση των επιθηλιακών χαρακτηριστικά τους όπως προσδιορίζεται από μεταβολές στην έκφραση της Ε-καδερίνης, ένα σήμα κατατεθέν της ΕΜΤ [22] και βιμεντίνη (Σχ. 3C-D). EMT έχει αναφερθεί ότι συνδέεται με έναν αριθμό παραγόντων που σχετίζονται με την εισβολή συμπεριλαμβανομένων VEGF και ΜΜΡ-9. Τα δεδομένα μας αποκάλυψαν ότι η αναστολή της DNMT3b από τον φορέα σίγηση οδήγησε σε χαμηλότερη έκφραση του VEGF και ΜΜΡ-9. Η αγγειογένεση είναι ένας από τους μηχανισμούς που προωθούν την εξέλιξη του όγκου, και τα CD31 μεσολάβηση αλληλεπιδράσεων ενδοθηλιακού κυττάρου-κυττάρου που εμπλέκονται στην αγγειογένεση [23]. Ως εκ τούτου, το αγγειακό δίκτυο εντός του όγκου μετρήθηκε με χρώση VEGF και ανάλυση πυκνότητας μικροαγγειακή (MVD) μετά από χρώση CD31. Όταν στόματος καρκινικά κύτταρα με φορείς ελέγχου και εκείνων με DNMT3b φίμωση φορείς εμφυτεύθηκαν υποδορίως σε ποντικούς, βρήκαμε ότι η αναστολή ανάπτυξης που προκαλείται από επίδραση DNMT3b σίγησης συνδέεται με χαμηλότερα επίπεδα έκφρασης του EMT- και παράγοντα που σχετίζεται με αγγειογένεση (Σχ. 3Ε). Ως εκ τούτου, προτείναμε ότι DNMT3b υπερέκφραση παίζει ρόλο στην προώθηση του όγκου, και την επαγωγή της αγγειογένεσης και EMT μπορεί να είναι οι μηχανισμοί υποτακτικός.

Α. Η επεμβατική ικανότητα των καρκινικών κυττάρων από το στόμα με ή χωρίς τον φορέα σίγηση DNMT3b αξιολογήθηκε με δοκιμασίες μετανάστευσης μηδέν. Τα αποτελέσματα από αντιπροσωπευτικά διαφάνειες απεικονίζεται. Στήλη, μέση τριών ξεχωριστών πειραμάτων. Μπαρ, SD. *, P & lt? 0,05. B. Οι επεμβατικές δυνατότητες του στόματος καρκινικά κύτταρα με ή χωρίς ρύθμιση DNMT3b αξιολογήθηκαν με τη δοκιμασία εισβολή στην SCC4 και SCC25 καρκίνο του στόματος κύτταρα. Τα αποτελέσματα φαίνονται από την αντιπροσωπευτική διαφάνειες και ποσοτικά δεδομένα. *,

P

& lt? 0,05. Οι C. Οι αλλαγές του Ε-καδερίνης σε κύτταρα αξιολογούνται και τα αποτελέσματα φαίνονται από τον εκπρόσωπο διαφάνειες (άνω σειρά, εικόνα ανοσοφθορισμού χρωματίστηκαν με Ab για DNMT3b και DAPI για πυρήνα? κατώτερη σειρά, εικόνα ανοσοφθορισμού χρωματίστηκαν με Ab για Ε-καδερίνης και ϋΑΡΙ για πυρήνα)? (Μπλε: DAPI? Πράσινο: GFP-φορέα? Κόκκινο: πρωτεΐνη-στόχο). D. Οι αλλαγές σε συνδεδεμένη ΕΜΤ πρωτεϊνών σε κύτταρα με τη ρύθμιση DNMT3b αξιολογήθηκαν με ανάλυση στυπώματος Western (C-V, τα κύτταρα με τον φορέα ελέγχου? DNMT3b-SV, κύτταρα με DNMT3b σίγησης φορέα). Ε IHC χρησιμοποιώντας ΜΜΡ-9, χρώση CD31, και VEGF σε σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, εγκλεισμένους σε παραφίνη ιστούς από ξενομοσχεύματος όγκους. DNMT3b φίμωση φορείς είχαν μειωθεί σημαντικά από την αγγειογένεση και EMT που σχετίζονται με αλλαγές σε σύγκριση με τον φορέα ελέγχου.

Η

DNMT3b και IL-6 συνδέονται με την κλινική έκβαση των OSCC

Προηγουμένως, αναφέραμε ότι η ενεργοποίηση της IL-6 /σηματοδότηση STAT3 επαγόμενη επιθετική συμπεριφορά όγκου και EMT αλλαγές στον καρκίνο του στόματος [19]. Ως εκ τούτου, η συσχέτιση μεταξύ DNMT3b και IL-6 στην κλινική έκβαση του σταδίου III-IV ανθρώπινη OSCC περαιτέρω εκτιμάται χρησιμοποιώντας IHC για TMAs που αποτελείται από 125 δείγματα. Από τα 125 δείγματα ιστών προσδιορίστηκαν για DNMT3b και IL-6, και οι δύο 59 (61%) ήταν θετικές. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Α, μία σημαντική θετική συσχέτιση παρατηρήθηκε στο δείγμα καρκίνου που χρωματίζονται θετικά για DNMT3b και IL-6. Χρησιμοποιώντας μονοπαραγοντική ανάλυση, υποτροπή της νόσου και θετική χρώση για DNMT3b και IL-6 ήταν σημαντικά συνδεδεμένη με μικρότερη επιβίωση (Πίνακας 2 και Σχήμα 4Β). Χρησιμοποιώντας πολυπαραγοντική ανάλυση, η έκφραση της DNMT3b και της νόσου υποτροπής ήταν σημαντικοί προγνωστικοί για τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς καρκίνο του στόματος 125 (Πίνακας 3). Τα ευρήματα υπογραμμίζουν τη συμβολή της χρώσης DNMT3b με κακή πρόγνωση στον καρκίνο του στόματος. Με ανάλυση πρωτεΐνης, η αναστολή της IL-6 σηματοδότηση οδήγησε σε μειωμένη DNMT3b και EMT σχετίζονται έκφραση παραγόντων, που συνδέονται με εξασθενημένο STAT3 και ενεργοποίηση Akt (Σχ. 5Α-Β). Επιπλέον, το Σχήμα 5C απέδειξαν ότι μειώθηκε DNMT3b από την IL-6 αντίσωμα αυξημένη βλάβη του DNA και τον κυτταρικό θάνατο. Ως εκ τούτου, προτείνεται ότι η ενεργοποίηση της IL-6 σηματοδότησης μπορεί να είναι υπεύθυνη για την αυξημένη DNMT3b σε μορφές καρκίνου του στόματος.

Α. επίπεδο DNMT3b συσχετίστηκε θετικά με IL-6 έκφραση σε ανθρώπινα καρκίνο του στόματος δείγματα (Ρ & lt? 0,0001). Αντιπροσωπευτικά διαφάνειες ενός επιλεγμένου δείγμα όγκου θετικά χρώση τόσο για IL-6 και DNMT3b δείχνεται στο × 100 και 400 μεγέθυνση. διαφορές Β Επιβίωση σύμφωνα με αναπτυσσόμενες αποτυχία ασθένεια ή όχι, η θετική χρώση DNMT3b και θετική χρώση για αμφότερα DNMT3b και IL-6. Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan-συνολική Meier καταδεικνύει ότι οι θετικές ομάδες συνδέονταν με μικρότερη επιβίωση σε σύγκριση με εκείνη των αντίστοιχων αρνητική ομάδα.

Η

A. Επίδραση της IL-6 στα επίπεδα DNMT3b και ΕΜΤ-συναφείς πρωτείνες αξιολογούνται με ανάλυση ανοσοφθορισμού

in vitro

και τα αποτελέσματα φαίνονται από τον εκπρόσωπο διαφάνειες. B. Επίδραση του αποκλεισμού IL-6 στο επίπεδο της DNMT3b, ενεργοποίηση STAT3 /ΑΚΤ και ΕΜΤ-συναφείς πρωτείνες αξιολογούνται με ανάλυση Western blotting. Γ Επιπτώσεις της IL-6 στο επίπεδο των DNMT3b και των πρωτεϊνών του κυτταρικού θανάτου σε SCC4 και SCC25 αποδεικνύεται από ανοσοχημική χρώση

in vitro

.

Η

Η

Συζήτηση

έχει αναφερθεί ότι η στροφή προς τη συσσώρευση του DNA υπερμεθυλίωση θα μπορούσε να προκληθεί από την υπερβολική έκφραση των μεθυλοτρανσφεράσες DNA [15]. Επιγενετικές γονιδιακή σίγηση, που προωθείται από DNMTs, έχει παρατηρηθεί σε διάφορες κακοήθειες, που υποστηρίζει την αξίωση ότι τα γονίδια DNMT είναι υπερ-εκφράζεται σε καρκίνους του ανθρώπου και κατά τη διάρκεια του κυτταρικού μετασχηματισμού [24] – [26]. Στην παρούσα μελέτη, IHC του ΤΜΑ διαφάνειες αποκάλυψε ότι το επίπεδο της έκφρασης DNMT3b ήταν υψηλότερη σε 76 δείγματα (61%) από ό, τι ο καρκίνος σε παρακείμενες μη κακοήθη στοματικό επιθήλιο. Αξιολογήσαμε περαιτέρω εάν DNMT1 ήταν υπερεκφράζεται σε OSCC χρησιμοποιώντας IHC της TMA διαφάνειες. Τα στοιχεία έδειξαν ότι μόνο το 45 (36%) δείγμα καρκίνο είχαν υψηλότερο DNMT1 σε σύγκριση με παρακείμενες μη κακοήθεις επιθηλιακών ιστών. Προσδιορισμός, ανάπτυξη και επιλογή μοριακών στόχων είναι σημαντικά στη θεραπεία του καρκίνου. Τα προγνωστικά εξουσίες του DNMT3b εξετάστηκαν περαιτέρω όσον αφορά την κλινική έκβαση του καρκίνου του στόματος. Χρησιμοποιώντας μονοπαραγοντική ανάλυση, ενισχυμένη εκφράσεις DNMT3b συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης των μεταστάσεων λεμφαδένα, ένα υψηλότερο ποσοστό υποτροπής μετά τη θεραπεία και μικρότερη επιβίωση. Χρησιμοποιώντας πολυπαραγοντική ανάλυση, η αποτυχία της νόσου και ενισχυμένη έκφραση DNMT3b σχετίζονταν σημαντικά με μικρότερη συνολική επιβίωση. Για να διερευνηθεί περαιτέρω η DNMT3b ήταν υπεύθυνος για την επιθετική ανάπτυξη του όγκου των OSCC, θα κατασταλεί DNMT3b στην προφορική καρκινικά κύτταρα χρησιμοποιώντας έναν φορέα αποσιώπηση. Τα δεδομένα που λαμβάνονται από την κυτταρική πειράματα και πειράματα ανάπτυξης όγκου ξενομοσχεύματος αποκάλυψε ότι η αναστολή της DNMT3b οδήγησε σε βραδύτερη ανάπτυξη όγκου. Επιπροσθέτως, η αναστολή της DNMT3b συνδέθηκε με εξασθενημένο διεισδυτικότητα. Τα μοριακά και φαινοτυπικές αλλαγές που εμπλέκονται στην μετατροπή του ενός επιθηλιακού κυττάρου σε έναν μεσεγχυματικά κυτταρικό τύπο φαίνονται να είναι λειτουργικώς συναφείς προς τις επεμβατικές χαρακτηριστικά των επιθηλιακών όγκων [21]. Έχει αναφερθεί ότι EMT σχετίζεται με την εξέλιξη OSCC [27], [28]. Στο επίπεδο μοριακό δείκτη, ΕΜΤ χαρακτηρίζεται από την απώλεια της Ε-καδερίνης και αυξημένη έκφραση του βιμεντίνη και παραγόντων εισβολή σχετίζονται. Οι φίμωση φορείς DNMT3b προκάλεσε μια αύξηση σε Ε-καδερίνης και μειώσεις στο VEGF και ΜΜΡ-9 σε καρκίνο του στόματος κύτταρα. Επιπλέον, η αγγειογένεση είναι ένας από τους μηχανισμούς που προωθούν την εξέλιξη του όγκου, και CD31 μεσολάβηση αλληλεπιδράσεων κυττάρου-κυττάρου ενδοθηλιακών εμπλέκονται στην αγγειογένεση. Με τα δεδομένα μας, η αναστολή της DNMT3b εξασθενημένων ανάπτυξης του όγκου, που σχετίζονται με μειωμένη CD31 και VEGF εκφράσεις σε όγκους. Αυτά τα ευρήματα έδειξαν ότι DNMT3b μπορούσε μεσολαβούν την επιθετική ανάπτυξη του όγκου στον καρκίνο του στόματος, και την προώθηση της ΕΜΤ και την αγγειογένεση είναι ένας από τους υποκείμενους μηχανισμούς.

ανάπτυξη OSCC εν μέρει διευκολύνεται από χρόνιες επιθηλιακά ερεθισμούς και αυτό όγκου είναι περισσότερο συχνή σε καπνιστής ή που καταναλώνουν υπερβολική ποσότητα αλκοόλ. IL-6, είναι μια προφλεγμονώδης κυτοκίνη που μεσολαβεί χρόνιας φλεγμονής και έχει αναφερθεί ότι παίζει σημαντικό ρόλο στη φλεγμονή καθοδηγείται από το στόμα καρκινογένεση [29], [30]. Έχουμε αναφερθεί στο παρελθόν ότι ενεργοποιείται IL-6 οδών θα μπορούσε να είναι υπεύθυνο για την πιο επιθετική ανάπτυξη του όγκου σημειώνεται στο καρκίνο του στόματος, και την υψηλή ενεργοποιημένα STAT3 και ρ-ΑΚΤ επίπεδο προκλήθηκε από την IL-6 και τη σύνδεση IL-6 σε ογκογένεση [19]. Έχει αναφερθεί ότι τα επίπεδα IL-6 είναι αυξημένα σε αυτό το νεόπλασμα και IL-6 θεωρείται μια κακή προγνωστικός παράγοντας για τον καρκίνο του στόματος. Έκκριση IL-6 σε από του στόματος καρκίνο πλακωδών διευκολύνεται από μικροπεριβάλλον, ιδίως με προερχόμενο στρωματικά παράγοντα-1 [29]. Επιπλέον, πολυάριθμα έργα έχουν αποδείξει ότι η IL-6 που προκαλείται από υπερμεθυλίωσης και γονιδιακή σίγηση μπορεί να προκαλείται από DNMTs [18], [20], [31] – [33]. Στο σύνολό τους, προτείναμε ότι η χρόνια φλεγμονή στρες στη στοματική κοιλότητα μπορεί να προάγει την ογκογένεση που προκαλείται από αυξημένη παραγωγή IL-6 για να επάγει παρεκκλίνουσα μεθυλίωση του DNA μέσω της αυξημένης δραστηριότητας DNMT3b. Στην παρούσα μελέτη, τα δεδομένα που λαμβάνονται από IHC κλινικά δείγματα έδειξαν ότι η έκφραση DNMT3b συσχετίστηκε σημαντικά με την IL-6 χρώση. Η επιθετικότητα του όγκου σημειώνεται στην IL-6 θετικές OSCC μπορεί να είναι εν μέρει μέσω της υπερέκφρασης του DNMT3b. Για να ελεγχθεί η υπόθεση, η σχέση μεταξύ της IL-6 σηματοδότησης και DNMT3b σε OSCC εξετάστηκε περαιτέρω στην παρούσα μελέτη για να δούμε αν ρύθμιση των αποτελεσμάτων της IL-6 σηματοδότησης σε αλλαγές της έκφρασης DNMT3b. Με τα πειράματα στα οποία η IL-6 σηματοδότηση κατεστάλη από την IL-6 αντίσωμα, βρήκαμε ότι ενεργοποιημένα IL-6 σηματοδότηση παίζει σημαντικό ρόλο στην ενεργοποίηση DNMT3b συνδέονται με ενεργοποιημένα STAT3 και ΡΙ3Κ σε στοματική καρκινικά κύτταρα. Τα δεδομένα που ελήφθησαν από την παρούσα μελέτη αποκάλυψε ότι η αυξημένη DNMT3b προκαλείται από IL-6, η οποία μπορεί να προκαλείται από την ενεργοποίηση των STAT3 και σηματοδότηση ΡΙ3Κ, είναι κρίσιμη σε επιθετικότητα του όγκου και την πρόγνωση του καρκίνου του στόματος. Ως εκ τούτου, παρουσιάζει τα κυριότερα μονοπάτια σηματοδότησης που πιστεύεται ότι συνδέει την IL-6 και DNMT3b για τον καρκίνο του στόματος (Εικ. 6).

Η

Εν κατακλείδι, η φλεγμονή και η μεθυλίωση και οι δύο πιστεύεται ότι παίζουν σημαντικό ρόλο στη στοματική ογκογένεση, ωστόσο, φλεγμονή γνώμονα επιπτώσεις στην μεθυλίωση χρειάζεται περαιτέρω έρευνα σε αυτή τη νόσο. Το έργο αυτό ιδρύθηκε άξονα IL-6-DNMT3b είναι πιθανό να είναι σημαντική για την πρόγνωση του OSCC. Προσδιορισμός, ανάπτυξη και επιλογή μοριακών στόχων είναι σημαντικά στη θεραπεία του καρκίνου. Τα δεδομένα που υποστηρίζουν την αναδυόμενη υπόθεση ότι ο άξονας της IL-6-DNMT3b αποτελεί σημαντικό προγνωστικό παράγοντα, και η στόχευση DNMT3b μπορεί να αντιπροσωπεύει μια πολλά υποσχόμενη θεραπευτική στρατηγική για OSCC.