Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι η τέταρτη κύρια αιτία που σχετίζονται με τον καρκίνο των θανάτων στην Αμερική. Τα μονοκλωνικά αντισώματα είναι μια βιώσιμη επιλογή θεραπείας για την αναστολή της αναπτύξεως του καρκίνου. Tumor ειδική χορήγηση φαρμάκων μπορεί να επιτευχθεί με χρήση αυτών των μονοκλωνικών αντισωμάτων ως παράγοντες στόχευσης. Οι Αυτό το είδος της θεραπευτικής designer εξελίσσεται και με τη χρήση νανοσωματιδίων χρυσού είναι μια πολλά υποσχόμενη προσέγγιση για να παραδώσει επιλεκτικά χημειοθεραπευτικά σε κακοήθη κύτταρα.

Τα νανοσωματίδια χρυσού (ΑΕΠ) που δείχνει ακραία υπόσχεση στην τρέχουσα ιατρική έρευνα. έχουν ΑΕΠ έχει αποδειχθεί για να μη επεμβατικά σκοτώσει τα καρκινικά κύτταρα με υπερθερμία με τη χρήση ραδιοσυχνοτήτων. Έχουν επίσης υλοποιηθεί ως παράγοντες έγκαιρη ανίχνευση λόγω των μοναδικών ιδιοτήτων τους αντίθεσης ακτίνων Χ? επιτυχία αποκαλύφθηκε με σαφή οριοθέτηση των τριχοειδών αγγείων σε ένα προκλινικό μοντέλο με CT (αξονική τομογραφία). Οι θεμελιώδεις παραμέτρους για ευφυή σχεδιασμό των nanoconjugates είναι στην πρώτη γραμμή. Ο στόχος αυτής της μελέτης είναι να καθορίσει τις απαραίτητες παραμέτρους σχεδιασμού με στόχο την επιτυχή παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Οι nanoconjugates που περιγράφονται στην παρούσα μελέτη χαρακτηρίστηκαν με διάφορες φυσικο-χημικές τεχνικές. Έχουμε αποδείξει ότι ο αριθμός των μορίων cetuximab (παράγοντας στόχευσης) επί ενός ΑΕΠ, το υδροδυναμικό μέγεθος των nanoconjugates, διαθέσιμα αντιδραστική επιφάνεια και την ικανότητα των nanoconjugates να απομονώσει EGFR (υποδοχέας επιδερμικού αυξητικού παράγοντα), όλοι παίζουν κρίσιμους ρόλους στην αποτελεσματική στόχευση καρκινικά κύτταρα

in vitro

και

in vivo

σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος.

Συμπέρασμα

τα αποτελέσματά μας δείχνουν η συγκεκριμένη στόχευση των καρκινικών κυττάρων εξαρτάται σε μια σειρά από κρίσιμα στοιχεία 1) παράγοντα αναλογία των νανοσωματιδίων 2) διαθεσιμότητα των αντιδραστικών επιφάνειας στόχευση στο νανοσωματίδιο 3) ικανότητα του nanoconjugate να δεσμεύονται με τον στόχο και 4) υδροδυναμική διάμετρος του nanoconjugate. Πιστεύουμε ότι αυτή η μελέτη θα βοηθήσει να καθορίσει τις παραμέτρους σχεδιασμού για τη διαμόρφωση καλύτερων στρατηγικών για στοχεύουν ειδικά όγκους με συζεύξεις των νανοσωματιδίων

Παράθεση:. Χαν JA, Kudgus RA, Szabolcs Α, Dutta S, Wang Ε, Cao S, et al . (2011) Σχεδιασμός Nanoconjugates να αποτελεσματικά κύτταρα-στόχοι καρκίνο του παγκρέατος

In Vitro

και

In Vivo

. PLoS ONE 6 (6): e20347. doi: 10.1371 /journal.pone.0020347

Επιμέλεια: Λιν Ζανγκ, University of Pennsylvania, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 2 Δεκεμβρίου 2010? Αποδεκτές: 30 του Απρίλη, 2011? Δημοσιεύθηκε: 27 του Ιούνη 2011

Copyright: © 2011 Khan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας CA135011, CA136494, CA150190 και ένα MD Anderson Cancer Center Αναπτυξιακή Grant (UTMD). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος υποστηρίζει σχεδόν το 25% των θανάτων ετησίως. Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι η τέταρτη κύρια αιτία θανάτων που σχετίζονται με τον καρκίνο στην Αμερική, τόσο στους άνδρες όσο και στις γυναίκες. Παρά τις τεράστιες προσπάθειες για τον εντοπισμό και τη θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος, τα ποσοστά εμφάνισης και θνησιμότητας παραμένουν σχεδόν οι ίδιες. Η έγκαιρη διάγνωση και αποτελεσματική παροχή θεραπευτικών παραγόντων σε κακοήθη κύτταρα παραμένουν οι δύο μεγάλες προκλήσεις σε στρατηγικές διαχείρισης του καρκίνου [1].

Τα μονοκλωνικά αντισώματα έναντι υποδοχέων αυξητικού παράγοντα έχει αποδειχθεί ότι είναι βιώσιμες θεραπείες για την αναστολή της ανάπτυξης του καρκίνου [2] . Χρησιμοποιώντας αυτά τα μονοκλωνικά αντισώματα ως παράγοντες στόχευσης για συγκεκριμένες όγκου παράδοση εξελίσσεται ως μια πολλά υποσχόμενη προσέγγιση για να παραδώσει επιλεκτικά χημειοθεραπευτικά [3]. Τα ανόργανα νανοϋλικά μελετάται ως όχημα παράδοσης για στοχευμένη χορήγηση φαρμάκων. Gold νανοϋλικά παρουσιάζουν ιδιαίτερο ενδιαφέρον λόγω της μοναδικής φυσικοχημικές και οπτοηλεκτρονικές ιδιότητες, ευκολία συνθέσεως και επιφανειακών τροποποίηση [1], [4], [5], [6], [7], [8], [9] , [10], [11], [12], [13].

τα νανοσωματίδια χρυσού (ΑΕΠ) έχουν πρόσφατα χρησιμοποιούνται για να σκοτώσουν τα καρκινικά κύτταρα με υπερθερμία χρησιμοποιώντας μη επεμβατική ραδιοσυχνότητας [14]. χρησιμότητά τους ως ένας παράγοντας αντίθεσης έχει επίσης καταδειχθεί με σαφής οριοθέτηση των τριχοειδών αγγείων του αίματος σε ένα προκλινικό μοντέλο με CT (αξονική τομογραφία) σε σύγκριση με τα συμβατικά μέσα ιώδιο βασίζεται αντίθεσης [15]. Και οι δύο μελέτες είναι αισιόδοξοι και η χρησιμότητά τους είναι να ενθαρρυνθεί περαιτέρω από το προφίλ ασφάλειας [16], [17].

υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) είναι ένας σημαντικός στόχος στην έρευνα για τον καρκίνο. Είναι υπερεκφράζεται σε έναν αριθμό ανθρώπινων κακοηθειών, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του παγκρέατος. Ανθρώπινο EGFR είναι μια διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη [3], [18], [19], [20]. Αποτελείται από μια εξωκυτταρική περιοχή σύνδεσης συνδετήρα, ένα υδρόφοβο διαμεμβρανική περιοχή και μια ενδοκυτταρική περιοχή κινάσης τυροσίνης. σύνδεση με EGFR συνδέτη διεγείρει ομο υποδοχέα /ετεροδιμερισμό που οδηγεί στην φωσφορυλίωση των υπολειμμάτων τυροσίνης. Η φωσφορυλίωση του EGFR ενεργοποιεί συμπλόκου κάτω από το ρεύμα γεγονότων που οδηγούν σε πολλαπλασιασμό, μετανάστευση, εισβολή σηματοδότησης, και η αναστολή της απόπτωσης των καρκινικών κυττάρων [21], [22], [23].

Το μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-ΕΟΡΚ, Cetuximab (C225), είναι ένα μοναδικό μέσο στόχευσης για στόχευση του EGFR-θετικά καρκινικά κύτταρα. Το cetuximab εγκρίθηκε από το FDA για τη θεραπεία ασθενών με EGFR θετικό καρκίνο του παχέως εντέρου (CRC) [21], [22], [23]. Έχει επίσης εγκριθεί ή να είναι σε διαφορετικές φάσεις των κλινικών δοκιμών σε πολλές άλλες κακοήθειες όπως NSCLC (μη μικροκυτταρικό καρκίνωμα του πνεύμονα), SCCHN (πλακώδες καρκίνωμα της κεφαλής και του τραχήλου) και παγκρεατικού καρκίνου [24], [25] , [26]. Το cetuximab είναι ένα χιμαιρικό G1 human:murine ανοσοσφαιρίνης (IgG 1) μονοκλωνικό αντίσωμα (MoAb). Η δέσμευση του C225 στο EGFR οδηγεί σε εσωτερίκευση και την υποβάθμιση των υποδοχέων χωρίς φωσφορυλίωση του υποδοχέα, αναστέλλοντας έτσι EGFR που σχετίζονται με οδούς [24], [25], [26].

Παρά την αναδυόμενη χρησιμότητα του ΑΕΠ στη στοχευμένη χορήγηση των θεμελιωδών ερωτήματα παραμένουν αναπάντητα. Ποια είναι τα κριτήρια σχεδιασμού για την κατασκευή nanoconjugates που θα εξασφαλίζουν τη μέγιστη απορρόφηση στα καρκινικά κύτταρα; Εδώ, χρησιμοποιούμε cetuximab (C225) ως παράγοντας στόχευσης και ΑΕΠ ως πρότυπο σύστημα. Έχουμε αποδείξει ότι ο αριθμός των C225 αντισωμάτων σε ένα ΑΕΠ (αναλογία C225:GNP), το υδροδυναμικό μέγεθος, το διαθέσιμο αντιδραστική επιφάνεια και την ικανότητα του να απομονώσει nanoconjugate EGFR, όλα παίζουν κρίσιμους ρόλους στη στόχευση αποτελεσματικά κύτταρα όγκου

σε vitro

και

in vivo

σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος. Η πρόσληψη μελέτες με τον έλεγχο ισοτόπου, το ΑΕΠ-IgG, δείχνουν ότι η εξειδίκευση της στόχευσης των καρκινικών κυττάρων εξαρτάται από την κάλυψη της επιφάνειας των νανοσωματιδίων με C225. Η μη ειδική πρόσληψη μειώνεται όταν τα C225 με το ΑΕΠ αναλογία αυξάνεται. Οι μελέτες αυτές είναι ζωτικής σημασίας για την ανάπτυξη ενός αποτελεσματικού συστήματος στοχευμένη παράδοση για μελλοντική κλινική χρήση.

Το έργο παρουσιάζεται εδώ δείχνει ότι η συστηματική χαρακτηρισμό του ΑΕΠ-C225 nanoconjugates. Το συγκεκριμένο δυναμικό που στοχεύουν ερευνήθηκε, τόσο

in vitro

και

in vivo

σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος. Τα αποτελέσματά μας αποδεικνύουν ότι η υδροδυναμική ακτίνα, προσιτή αντιδραστική επιφάνεια και φόρτωση ικανότητα του C225 επί ΑΕΠ παίζουν κρίσιμους ρόλους για την αποτελεσματική στόχευση των καρκινικών κυττάρων. Τα ευρήματα αυτά τονίζουν οι βασικές παράμετροι που πρέπει να εξεταστούν για ένα πολλά υποσχόμενο σύστημα χορήγησης φαρμάκων νανοσωματιδίων με βάση για τη μελλοντική κλινική εφαρμογή.

Αποτελέσματα

Χαρακτηρισμός των nanoconjugates με μεταβλητό αντίσωμα σε αναλογίες νανοσωματιδίων

για να κατανοήσουμε τις παραμέτρους που απαιτούνται για την ειδική στόχευση nanoconjugates σε κύτταρα όγκου, επιλέξαμε cetuximab (C225) ως παράγοντα στόχευσης. C225 είναι ένα χιμαιρικό μονοκλωνικό αντίσωμα ανθρώπου-ποντικού που δεσμεύεται με την εξωκυτταρική περιοχή του EGFR [3]. EGFR υπερεκφράζεται σε έναν αριθμό ανθρώπινων κακοηθειών, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του παγκρέατος, καθιστώντας την έναν ελκυστικό στόχο [18]. Για τον προσδιορισμό της βέλτιστης σθένος του C225 στο ΑΕΠ (τον αριθμό των C225 μόρια ανά ΑΕΠ και ως εκ τούτου λόγος C225:GNP) για ενδοκυτταρική πρόσληψη, συνθέσαμε διάφορες nanoconjugates με πολλαπλές αναλογίες C225:GNP. Ο χαρακτηρισμός αυτών των nanoconjugates διεξήχθη χρησιμοποιώντας διάφορες φυσικοχημικές τεχνικές: υπεριώδους-ορατού (UV-Vis) φασματοσκοπία, μικροσκοπία μετάδοσης ηλεκτρονίου (ΤΕΜ), δυναμική σκέδαση φωτός (DLS) και ραδιοϊωδίωση του C225 με

125Ι. Οι ΑΕΠ που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη συντέθηκαν με αναγωγή βορυδριδίου του νατρίου τετραχλωροχρυσικού [27], [28]. Όπως έχει ήδη αναφερθεί, η παρουσία μιας ζώνης συντονισμού επιφανειακών πλασμονίων σε περίπου 510 nm επιβεβαιώνει το σχηματισμό σφαιρικών νανοσωματιδίων χρυσού (Εικόνα S1). Ο σχηματισμός σφαιρικών ΑΕΠ και η διάμετρος τους μέγεθος 5 nm επιβεβαιώθηκε περαιτέρω με ΤΕΜ (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Τα συζυγή ΑΕΠ-C225 κατόπιν συντέθηκαν χρησιμοποιώντας αυτή γυμνός διάλυμα ΑΕΠ και καθαρίστηκε όπως περιγράφεται στα υλικά και τις μεθόδους τμήμα. Το αντίσωμα δεσμεύεται αυθόρμητα στους ΑΕΠ μέσω Au-S και Au-Ν συγκόλλησης [19]. Η παραγωγή του ΑΕΠ-C225 παρακολουθήθηκε με φασματοσκοπία UV-Vis. Είναι προφανές ότι με την προσθήκη του C225 υπάρχει μια σταδιακή μετατόπιση προς το ερυθρό στη ζώνη SPR του γυμνού χρυσού, από 510 nm έως 519 nm (Σχήμα 1α). Μια τέτοια κόκκινη μετατόπιση στην SPR ζώνη του ΑΕΠ προτείνει την διατάραξη του ηλεκτρικού διπλού στρώματος από το αντίσωμα που περιβάλλει τις ΑΕΠ και έτσι δείχνει πρόσδεση του αντισώματος στα νανοσωματίδια [29], [30].

α . Αλλαγή σε μέγιστα απορρόφησης ως συνάρτηση της αυξανόμενης συγκέντρωσης του C225 σε απουσία (σφαίρες) και παρουσία NaCl (τρίγωνα). σι. Συγκέντρωση του C225 συνδέεται προς το ΑΕΠ ως συνάρτηση της αυξανόμενης συγκέντρωσης του C225, προσδιορίζεται με μέτρηση της συγκέντρωσης του ελεύθερου C225 επισημανθεί με I125 στο υπερκείμενο, μετά σύμπηξη καθορισμό των συζυγών ΑΕΠ-C225 με υπερφυγοκέντρηση.

Η

Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω η σύζευξη ΑΕΠ-C225 εμείς αμφισβήτησε τις nanoconjugates κατά της επαγόμενης από το αλάτι συσσωμάτωσης (κρίσιμη συγκέντρωση πήξης). Η προσθήκη 140 mM NaCl έχει αναφερθεί να έχει ως αποτέλεσμα τη συσσωμάτωση των γυμνών ή μερικώς καλυμμένο σωματίδια, όπως συσσωμάτωση οδηγεί σε δραματική κόκκινη μετατόπιση στη ζώνη SPR. Τα φάσματα απορρόφησης των nanoconjugates καταγράφηκαν 15 λεπτά μετά την επώαση με 140 mM χλωριούχου νατρίου (NaCl). Όπως ήταν αναμενόμενο, οι γυμνές ΑΕΠ έδειξαν μια δραστική μετατόπιση προς το ερυθρό στο SPR μπάντα από 510 nm έως περίπου 600 nm (Σχήμα 1α), επιβεβαιώνοντας τη συσσωμάτωση των ακάλυπτων νανοσωματιδίων [31]. Αλάτι προκαλούμενη συνάθροιση ήταν άμεσα συνδεδεμένη με την αυξημένη φόρτωση C225 στην επιφάνεια του ΑΕΠ, ως εκ τούτου, η μπάντα SPR εξαφανιστεί εντελώς σε C225 αναλογία του ΑΕΠ από 3 (τρία C225 μόρια ανά ΑΕΠ) να υποδηλώνει την απουσία των διαθέσιμων αντιδραστική επιφάνεια σε συσσωμάτωση που προκαλείται από το αλάτι.

Η ποσοτικοποίηση της δέσμευσης C225 με νανοσωματίδια χρυσού από ραδιοϊωδίωση

Η σύνδεση του C225 στο ΑΕΠ ήταν ποσοτικά με τη χρήση ραδιοσημανθεί

125Ι-C225. Ένα σταθερό συγκέντρωση του ΑΕΠ επωάστηκε με

125Ι-C225 σε διάφορες αναλογίες C225:GNP. Τα προϊόντα σύζευξης φυγοκεντρήθηκαν σε υψηλή ταχύτητα (45.000 g) επί 1 ώρα για το διαχωρισμό του μη δεσμευμένου αντισώματος από τα nanoconjugates. Η απόδοση του ΑΕΠ-C225-I

125 σύνδεση διαπιστούται τότε με μέτρηση της εκπομπής των ακτίνων γάμμα που προέρχεται από το ελεύθερο και το δεσμευμένο

125Ι-C225 στο υπερκείμενο και τα κλάσματα ιζήματος, αντίστοιχα. Όπως φαίνεται στην Εικόνα 1β και το Σχήμα S2, υπήρχε ένα πολύ υψηλό ποσοστό δέσμευσης του C225 (-90%) για να ΑΕΠ μέχρι αναλογία 3 (3 C225 μόρια ανά ΑΕΠ). Ωστόσο, μια ελάχιστη αύξηση στην πρόσδεση παρατηρείται πάνω από μια αναλογία 3. Αυτή η μικρή αύξηση σε υψηλές συγκεντρώσεις αντισωμάτων μπορεί να οφείλεται σε ασθενείς αλληλεπιδράσεις μη ειδικής πρωτεΐνης-πρωτεΐνης μεταξύ του δεσμευμένου και ελεύθερου αντισώματος. Αυτά τα δεδομένα περαιτέρω επιβεβαιώνουν τις παρατηρήσεις που έγιναν από UV-Vis φασματοσκοπία συζητήθηκε παραπάνω? όπου η έκταση της άλας που προκαλείται συσσωμάτωση βρέθηκε να είναι ελάχιστη σε αναλογία 3.

Η στοχευμένη παράδοση των νανοσωματιδίων χρυσού σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα in vitro

Για να κατανοήσουμε τον ρόλο του πολλαπλό σθένος στην ενδοκυτταρική πρόσληψη από ανθρώπινο καρκίνο του παγκρέατος κυτταρικές σειρές με μεταβλητή έκφραση EGFR, που αντιμετωπίζονται AsPC-1, PANC-1 και ΜΙΑΡΑΟΑ-2 κυττάρων με το ΑΕΠ-C225 ή ελέγχου μη ειδικού ισοτόπου ΑΕΠ-IgG σε διαφορετικό αντίσωμα με το ΑΕΠ αναλογίες (Ab:GNP). έκφραση EGFR σε αυτά τα κύτταρα ακολουθεί τη σειρά AsPC-1≥PANC-1 & gt? MIAPaCa-2 [19]. Η ποσότητα της κυτταρικής πρόσληψης για ΑΕΠ-C225 και ΑΕΠ IgG από τις διάφορες κυτταρικές σειρές ποσοτικοποιήθηκε με προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε χρυσό στα κύτταρα μέσω ανάλυσης ρόλο ενεργοποίησης νετρονίων (INAA). Τα Σχήματα 2α, 2β και 2γ αντιπροσωπεύουν την περιεκτικότητα σε χρυσό των AsPC-1, PANC-1 και MIAPaCa-2 κύτταρα, αντίστοιχα. Είναι προφανές από τα στοιχεία ότι η πρόσληψη των nanoconjugates και στις τρεις κυτταρικές σειρές αυξάνεται σταδιακά με την αύξηση του δείκτη C225:GNP (αυξημένο σθένος). Η μέγιστη πρόσληψη παρατηρήθηκε με την αναλογία 1.5 (μαύρες ράβδοι)? πέρα από αυτό το λόγο η πρόσληψη των nanoconjugates μειώθηκε σταδιακά. Η τάση πρόσληψη των nanoconjugates ακολουθεί ένα παρόμοιο μοτίβο σε όλες τις τρεις κυτταρικές σειρές. Είναι επίσης σημαντικό να σημειωθεί ότι η έκταση της πρόσληψης ήταν πολύ λιγότερο για τις αντίστοιχες αναλογίες για τους ελέγχους ισοτύπου, ΑΕΠ-IgG (γκρι ράβδοι). Είναι ενδιαφέρον ότι η μη-ειδική πρόσληψη του ΑΕΠ IgG σταδιακά μειώθηκε με την αύξηση της αναλογίας IgG:GNP όπου παρατηρήθηκε ελάχιστη πρόσληψη σε αναλογία 3. Είναι πιθανό ότι κατά τη χαμηλότερη αναλογία Ab:GNP, το διαθέσιμο ελεύθερο αντιδραστικό επιφάνεια για την ΑΕΠ μπορεί μη-ειδικά δεσμεύονται είτε με τις πρωτεΐνες του ορού ή κυτταρικές μεμβράνες ή και τα δύο? που με τη σειρά θα μπορούσε να προωθήσει τη μη ειδική πρόσληψη των nanoconjugates. Η προσρόφηση των συστατικών του ορού είναι γνωστό ότι επηρεάζουν την απορρόφηση του ΑΕΠ [32]. Αύξηση αναλογίες Ab:GNP πρέπει να αυξήσει την κάλυψη αντίσωμα της επιφάνειας των νανοσωματιδίων, παρέχοντας έτσι διαθέσιμες λιγότερο ανοικτή επιφάνεια για μη-ειδικές αλληλεπιδράσεις. Μείωση αυτών των μη ειδικές αλληλεπιδράσεις μπορεί να εξηγήσει μειωμένη πρόσληψη των συζυγών ΑΕΠ-IgG που παρατηρήθηκε σε υψηλότερες αναλογίες (Σχήμα 2).

α. AsPC-1 κύτταρα, b. κύτταρα PANC-1, c. κύτταρα MIAPaCa-2, που έλαβαν θεραπεία με το ΑΕΠ-C225 (μαύρες μπάρες) ή το ΑΕΠ-IgG (γκρι ράβδοι) που παρασκευάζεται σε διαφορετικές αναλογίες Ab:GNP. άξονας Υ αντιπροσωπεύει Χρυσό συγκέντρωση σε ppm της συνολικής ξηρής μάζας των κυττάρων.

Η

Η εσωτερίκευση των nanoconjugates από παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα in vitro

Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω η ενδοκυτταρική πρόσληψη και τον εντοπισμό του ΑΕΠ, ανάλυση ΤΕΜ πραγματοποιήθηκε μετά από κατεργασία των κυττάρων με τις ίδιες nanoconjugates χρησιμοποιούνται για τις μελέτες πρόσληψης. Εικόνα μικρογραφίες 3 δείχνει TEM κυττάρων AsPC-1 μετά από θεραπεία με το ΑΕΠ-C225 σε ποικίλες αναλογίες C225:GNP. Τα χαμηλής, μέσης και υψηλής εικόνες μεγέθυνση εκπροσωπείται για C225:GNPs αναλογίες των 0,38, 1,5 και 3,0 (Σχήμα 3). Οι nanoconjugates φαίνονται εντός των φυσαλιδώδους δομές των κυττάρων, επιβεβαιώνοντας ενδοκυτταρική πρόσληψη των nanoconjugates. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν επίσης με κύτταρα MIAPaCa-2 (Σχήματα S3, S4) PANC-1 και. Η διαφορική πρόσληψη των ΑΕΠ από τα καρκινικά κύτταρα που έχουν διαφορετικές αναλογίες C225:GNP μπορεί επίσης να οφείλεται στην διαφορική συγγένεια των nanoconjugates να δεσμεύουν EGFR, ή το μέγεθος των nanoconjugates. Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν οι ίδιες κυτταρικές γραμμές υποβλήθηκαν σε θεραπεία με το ΑΕΠ-IgG, με τον έλεγχο ισότυπο, τα περισσότερα από τα ΑΕΠ βρίσκονται στην περιφέρεια της κυτταρικής μεμβράνης με ελάχιστη ενδοκυττάρωση (Σχήμα S5). Αυτό είναι σύμφωνο με μια πρόσφατη έκθεση που περιγράφει την στόχευση ενός στερεού όγκου με τρανσφερίνης επικάλυψη ΑΕΠ [33].

TEM εικόνες σε διαφορετικές μεγεθύνσεις, δείχνοντας εσωτερίκευση του ΑΕΠ-C225. Παρακαλώ δείτε τα σχήματα S3 και S4 για TEM εικόνες που απεικονίζουν ΑΕΠ-C225 εσωτερίκευση από PANC-1 και ΜΙΑΡΑΟΑ-2 κύτταρα.

Η

υδροδυναμική διάμετρος των nanoconjugates και την ικανότητά τους να δεσμεύουν EGFR

σε μια προσπάθεια να αποσπάσει το μηχανισμό για διαφορική προσρόφηση ΑΕΠ C225, υποθέσαμε ότι οι διαφορετικές αναλογίες C225:GNP κατέχουν διαφορική ικανότητα να δεσμεύουν EGFR. Για την επικύρωση αυτή η υπόθεση, πραγματοποιήσαμε ανάλυση στυπώματος western. Τα διάφορα προϊόντα σύζευξης ΑΕΠ C225 και ΑΕΠ IgG επωάστηκαν με προϊόντα λύσης AsPC-1 κύτταρο για 2 ώρες, στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκε σε υψηλή ταχύτητα. Το σφαιρίδιο πλύθηκε μία φορά και στη συνέχεια το υπερκείμενο και στο ίζημα υποβλήθηκαν σε ανάλυση κηλίδος western για την ανίχνευση της σχετικής παρουσίας EGFR στα διάφορα κλάσματα. Τα αποτελέσματα φαίνονται στο σχήμα 4α. Αυτό καταδεικνύει σαφώς υπάρχει μια προοδευτική εξάντληση του EGFR στο υπερκείμενο με μία αυξανόμενη αναλογία C225:GNP (μεσαίο πλαίσιο). Επίσης ενδιαφέρον να σημειωθεί έναν εμπλουτισμό του EGFR στο κλάσμα ιζήματος (άνω πάνελ) φθάνοντας ένα πλατώ σε αναλογία 01/05 έως 02/29, πιθανότατα μια λειτουργία του C225 φόρτωσης στην επιφάνεια σφαιριδίου. β-ακτίνη επίπεδα χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχοι φόρτωση αποδεικνύοντας ίση φόρτωση πρωτεϊνών σε διαφορετικές λωρίδες. Είναι επίσης σημαντικό να σημειωθεί ότι όταν τα ίδια προϊόντα λύσης υποβλήθηκαν σε θεραπεία με το ΑΕΠ-IgG, σχεδόν καμία ανιχνεύσιμη EGFR βρέθηκε στο κλάσμα σφαιριδίου, ως επί το πλείστον βρέθηκε στο υπερκείμενο κλάσμα, επιβεβαιώνοντας περαιτέρω την εξειδίκευση δέσμευσης ΑΕΠ C225 με το EGFR. Μαζί, αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι τα προϊόντα σύζευξης ΑΕΠ C225 μπορεί να απομονώσει ειδικά EGFR από τα προϊόντα λύσης κυττάρου και η ικανότητα εγκλεισμού αυξάνει με την αύξηση του αριθμού των μορίων C225 στην επιφάνεια ΑΕΠ.

α. Η σύνδεση του ΑΕΠ-C225 και ΑΕΠ-IgG με EGFR επιβεβαιώθηκε με ανάλυση Western Blot. Κυτταρολύματα από κύτταρα AsPC-1 επωάστηκαν για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου με ΑΕΠ C225 και ΑΕΠ IgG προϊόντα σύζευξης με διάφορες αναλογίες αντισώματος στην επιφάνεια του σωματιδίου. Μετά την επώαση τα δείγματα περιστράφηκαν σε υψηλή ταχύτητα και το υπερκείμενο συλλέχθηκε και το σφαιρίδιο πλύθηκε μία φορά και φυγοκεντρήθηκε εκ νέου? Το κλάσμα nanoconjugate ήταν 20 φορές η συγκέντρωση του υπερκειμένου. Το σφαιρίδιο και το υπερκείμενο κλάσματα φορτώθηκαν σε ένα 7,5% πήκτωμα SDS-PAGE και αναλύθηκαν για EGFR. σι. Υδροδυναμική διάμετρος του ΑΕΠ-C225 μετριέται με Δυναμική Σκέδαση Φωτός Φασματοσκοπία

Η

Η ικανότητα των nanoconjugates να απομονώσει EGFR με αναλογία C225:GNP από 1,5 έως 3 είναι παρόμοια.? Ωστόσο, η

in vitro

ενδοκυτταρική πρόσληψη μειώνεται καθώς η αναλογία αλλάζει από 1,5 έως 3. Για να εξηγήσει την μείωση πρόσληψης των nanoconjugates με αυξανόμενο αναλογία C225:GNP, διερευνήσαμε το ρόλο της υδροδυναμικής διαμέτρου των nanoconjugates . Η υδροδυναμική διάμετρος (HD) των συζυγών προσδιορίζεται μέσω δυναμικής φασματοσκοπίας σκέδαση φωτός (DLS) μετρήσεις (Σχήμα 4β). Πρόσφατα, HD έχει δειχθεί ότι είναι κρίσιμη για την στόχευση όγκων των κβαντικών κουκίδων [34]. Περαιτέρω, έχει επίσης αποδειχθεί ότι η

in vitro

κυτταρική πρόσληψη και απόκριση εξαρτάται από το μέγεθος των nanoconjugates. Κατά την σύζευξη με μια αναλογία 0,38 C225:GNP το HD των ΑΕΠ αυξάνει αμέσως από 7 nm έως 21 nm, επιβεβαιώνοντας περαιτέρω η σύνδεση του C225 στην επιφάνεια ΑΕΠ [35]. Το HD παραμένει περίπου 21 nm μέχρι ένα λόγο 2,29 τότε απότομα αυξάνεται σε αναλογία 3. Θα πρέπει να σημειωθεί από τα Σχήματα 1 b και S2 που σχεδόν όλα τα μόρια αντισωμάτων παραμένουν δεσμευμένα στο ΑΕΠ επιφάνειας έως μία αναλογία 3. Ωστόσο, υπάρχουν είναι μόνο μια σταδιακή αύξηση στην πρόσδεση πάνω από αυτό το λόγο, πιθανότατα αποδίδεται σε μη ειδική σύνδεση. Αυτή η μη ειδική δέσμευση των μορίων αντισώματος μπορεί να προκαλούν το σχηματισμό ενός χαλαρού δευτεροβάθμιας στρώμα γύρω από το ΑΕΠ-C225 με αποτέλεσμα την απότομη αύξηση του HD σε υψηλότερες αναλογίες C225:GNP. Μια τέτοια απότομη αύξηση HD θα μπορούσε επίσης να οφείλεται στην ετερογένεια του δείγματος. Η απόκτηση ενός διακριτού αριθμού μορίων αντισώματος ανά ΑΕΠ είναι πολύ δύσκολο να επιτευχθεί πειραματικά. Η σχέση μεταξύ του πολλαπλό σθένος των νανοσωματιδίων των υδροδυναμικών διαμέτρους τους πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω. ανάλυση TEM επιβεβαίωσε ότι η απότομη αύξηση του HD δεν οφείλεται σε συσσωμάτωση των νανοσωματιδίων. Οι μικρογραφίες ΤΕΜ δεν έδειξε καμία σημαντική συσσωμάτωση των νανοσωματιδίων με διαφορετικές αναλογίες C225:GNP (Σχήμα S6).

Παράδοση του ΑΕΠ-C225 σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος

Για να διερευνήσουν περαιτέρω η ικανότητα αυτών των nanoconjugates να στοχεύουν ειδικά κύτταρα όγκου

in vivo

, χρησιμοποιήσαμε ένα ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος. Το μοντέλο δημιουργήθηκε μετά χειρουργική εμφύτευση κυττάρων AsPC-1 που εκφράζουν λουσιφεράση σε πάγκρεας γυμνών ποντικών και αφέθηκαν να αναπτυχθούν για 12 ημέρες. Κάθε τρίτη ημέρα τα ποντίκια ενέθηκαν με 200 μΐ της κεταμίνης και 100 μΙ λουσιφερίνης και απεικονίζεται για την εξέλιξη της ανάπτυξης του όγκου με μετρήσεις bioluminiscence. Αυτό ορθοτοπικό μοντέλο προσπαθεί να μιμηθεί την ανθρώπινη παθογένεση του καρκίνου του παγκρέατος [36] και επιτρέπει στα κύτταρα του όγκου να βιώσουν τις συνέπειες του μικροπεριβάλλοντος στο πάγκρεας. Την ημέρα 12, το ΑΕΠ-C225 και το ΑΕΠ-IgG χορηγήθηκαν ε.π. να μελετήσει την πρόσληψη και την κατανομή των nanoconjugates έχουν διαφορετικές αναλογίες Ab:GNP όγκου. Οι ποντικοί θυσιάστηκαν 24 ώρες μετά την ένεση nanoconjugate και οι όγκοι και άλλα ζωτικά όργανα συλλέχθηκαν για τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε χρυσό από INAA. Το σχήμα 5α δείχνει ένα αντιπροσωπευτικό παράδειγμα μιας βιοφωτισμός εικόνα των ποντικών 12 ημέρες μετά την ορθοτοπική εμφύτευση των κυττάρων του όγκου στο πάγκρεας (άνω πάνελ). Ισχυρή βιοφωταύγεια υποδηλώνει το σχηματισμό και την ανάπτυξη ενός όγκου στο πάγκρεας. Η ανάπτυξη του όγκου επιβεβαιώθηκε περαιτέρω μετρώντας το μέγεθος του όγκου στο τέλος των πειραμάτων μετά θυσιάζεται η ποντικούς (κάτω πάνελ). Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε με τη χρήση του τύπου ΑΒ

2/2 (α = μήκος, b = πλάτος) ήταν ~62 mm

3 όταν nanoconjugates χορηγήθηκαν για μελέτες βιοκατανομής. Σχήμα 5β δείχνει την πρόσληψη του όγκου του ΑΕΠ-C225 και ΑΕΠ-IgG σε ποικίλες αναλογίες Ab:GNP ως συνάρτηση της περιεκτικότητας σε χρυσό που καθορίζεται από INAA. Η

in vivo

και

in vitro

πρόσληψη του όγκου των nanoconjugates ακολούθησε παρόμοια τάση. Η στατιστική ανάλυση με τη χρήση της δίπλευρη φοιτητές t-test έδειξαν ότι η πρόσληψη του ΑΕΠ-C225 με αναλογία 0,76 και 1,5 ήταν σημαντικά υψηλότερη από την αναλογία 3 (ρ & lt? 0,05). Επιπλέον, η πρόσληψη των συζυγών ΑΕΠ-C225 ήταν σημαντικά υψηλότερη (p & lt? 0,05) από τον έλεγχο ισοτόπου, το ΑΕΠ-IgG σε όλες τις αναλογίες με εξαίρεση 3. Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, το HD του ΑΕΠ-C225 παρέμεινε σταθερή από την αναλογία 0,38 έως 2.29 (περίπου 21 nm), αλλά αυξήθηκε δραματικά σε αναλογία 3 (134 nm). Θεωρητικά, το μεγαλύτερο HD των nanoconjugates σε αναλογία 3 θα μπορούσε να συμβάλει σε χαμηλότερες διάχυση και μείωση στην πρόσληψη στροφή [37]. Αυτό δείχνει ότι η HD είναι ένας κρίσιμος παράγοντας για

in vivo

πρόσληψη και, κατά συνέπεια, βασικό παράγοντα για την ενεργό στόχευση. Για να διερευνηθεί περαιτέρω η ενδοογκική (μέσα στα κύτταρα? Ή στο αγγειακό σύστημα ή στην κάψουλα έξω του καρκινικού ιστού) θέση των nanoconjugates, πραγματοποιήσαμε ΤΕΜ στους ιστούς του όγκου που δείχνεται στο σχήμα 5α, τα οποία ελήφθησαν μετά θυσιάζεται η ποντικών 24 ώρες μετά την ενδοπεριτοναϊκή χορήγηση διαφορετικών nanoconjugates. Το Σχήμα 6 δείχνει τη θέση των ΑΕΠ σε διαφορετικές περιοχές των καρκινικών ιστών σε περίπτωση ΑΕΠ C225 (C225:GNP 3.0 (Σχήμα 6α και β) και 1.5 (Σχήμα 6γ) αγωγή ομάδες. Είναι προφανές ότι ΑΕΠ είναι στο εσωτερικό των κυττάρων ( Εικόνα 6α, αριστερά και δεξιά πάνελ είναι εικόνες της ίδιας περιοχής, διαφορετικά μεγέθυνση), καθώς και την κάψουλα που καλύπτει τον ιστό του όγκου (Σχήμα 6β, αριστερά και δεξιά πάνελ είναι εικόνες της ίδιας περιοχής, διαφορετικά μεγέθυνση). Ωστόσο, οι nanoconjugates είναι κυρίως εντοπισμένη εκτός του ιστού του όγκου σε περίπτωση ομάδα που θεραπεύτηκε ΑΕΠ-IgG (IgG:GNP 1,5) (Σχήμα S7).

α. εικόνες βιοφωταύγεια την ημέρα 12 απεικονίζουν παρουσία όγκου (άνω πλαίσιο) και την ψηφιακή φωτογραφική μηχανή εικόνες (κάτω πίνακας) των καρκινικών μαζών αποκοπεί μετά τη λήξη των ανωτέρω ποντίκια. τα ποντίκια θυσιάστηκαν κατά την ημέρα 13, 24 ώρες μετά τις θεραπείες nanoconjugate. β.

In vivo όγκου

πρόσληψη του ΑΕΠ-C225 και ΑΕΠ-IgG συζεύγνυται σε ποικίλες αναλογίες αντισώματος? 24 ώρες μετά την ενδοπεριτοναϊκή ένεση των προϊόντων σύζευξης σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος. Η πρόσληψη προσδιορίστηκε με μέτρηση της συγκέντρωσης του χρυσού στους όγκους με INAA. άξονας Υ αντιπροσωπεύει τη συγκέντρωση χρυσού ως ppm.

Η

α και β. ΑΕΠ-C225 με την αναλογία 3.0 Ab:GNP φαίνονται στο αριστερό σε μια μικρή μεγέθυνση για να δείξει ένα μεγάλο εμβαδόν επιφανείας του ιστού του όγκου και στα δεξιά η μεγέθυνση αυξάνεται για να αποσαφηνιστεί η εσωτερίκευση των ίδιων των συζυγών. ντο. ΑΕΠ-C225 με την αναλογία 1.5 του Ab:GNP φαίνονται στα αριστερά σε μικρή μεγέθυνση για να δείξει μια μεγάλη επιφάνεια του ιστού του όγκου και στη δεξιά η μεγέθυνση αυξάνεται για να αποκαλύψει τα συζυγή τους εαυτούς τους μέσα στο κυτταρικό χώρο.

Η παρουσία ένεση συζυγών σε άλλα σημαντικά όργανα προσδιορίστηκε επίσης με INAA (Σχήμα S8). πρόσληψη χρυσού βρέθηκε επίσης σε άλλα όργανα, όπως η σπλήνα, το συκώτι, τους πνεύμονες, τα νεφρά και τον εγκέφαλο [38], [39].

Συζήτηση

Στοχευμένες παράδοσης των ανόργανων νανοϋλικών είναι ένα ουσιαστικό περιοχή της έρευνας για νανοϊατρικής. Μοναδικές φυσικοχημικές ιδιότητες ανόργανων νανοϋλικά μπορούν να χρησιμοποιηθούν για διάφορες βιοϊατρικές εφαρμογές όπως η ανίχνευση /διάγνωση, θεραπεία και απεικόνισης. Έτσι, είναι σημαντικό να ορίσει τις παραμέτρους σχεδιασμού για να παραδώσει ειδικά nanoconjugates στα κύτταρα που ενδιαφέρουν. Υπάρχουν αρκετοί βασικοί παράγοντες που μπορούν να καθορίσουν την επιτυχία των στοχευμένων παράδοση? (I) επιλογή ενός κατάλληλου μοντέλου για να μελετήσει την προσέγγιση παράδοσης? (Ii) επιλογή ενός αποτελεσματικού παράγοντα στόχευσης? (Iii) τη βελτιστοποίηση του αριθμού των παραγόντων στόχευσης ανά νανοσωματίδιο? (Iv) τη διαθεσιμότητα των ελεύθερων αντιδραστικών περιοχής στην επιφάνεια του σωματιδίου που μπορεί να κινήσει μη ειδική δέσμευση? (V) ικανότητα του παράγοντα στόχευσης για να απομονώσει το στόχο και (vi) υδροδυναμικό μέγεθος των nanoconjugates.

Οι περισσότερες από τις στρατηγικές διανομής έχουν δοκιμαστεί σε μη ορθοτοπική μοντέλα όπου οι όγκοι που δημιουργούνται από την αρχική τοποθεσία. Ένα σημαντικό πλεονέκτημα για αυτό το μοντέλο είναι όγκοι είναι εύκολο να αναπτυχθούν και ανάπτυξης μπορεί να παρακολουθηθεί με χειροκίνητη μέτρηση με παχύμετρο διαφανειών. Ένα μειονέκτημα αυτού του μοντέλου είναι ότι τα καρκινικά κύτταρα δεν βιώνουν μια πραγματική μικροπεριβάλλον του όγκου. Αντίθετα, το ορθοτοπικό μοντέλο εμφυτεύει τα καρκινικά κύτταρα στο όργανο προέλευσης όγκου, καθιστώντας το ένα πιο ρεαλιστικό μοντέλο. Έτσι, έχουμε επιλέξει το ορθοτοπικό μοντέλο για τη μελέτη απαραίτητο οι παράμετροι σχεδιασμού για nanoconjugates με επιτυχία και συγκεκριμένα στοχεύει έναν όγκο.

Έχουμε επιλέξει το cetuximab ως στόχευση νανοσωματιδίων παράγοντα και το χρυσό ως το ικρίωμα για τη στόχευση παράδοση. Ένα από τα σημαντικότερα πλεονεκτήματα να χρησιμοποιούν νανοσωματίδια χρυσού είναι ο σχηματισμός τους σταθερών δεσμών με βιομόρια όπως organothiols, organoamines, πρωτεΐνες, και αντισώματα [5]. Έχουμε αποδείξει την σημαντική δέσμευση του cetuximab στην ΑΕΠ μέχρι αναλογία 3 (C225:GNP = 3), πέρα ​​από το οποίο παρατηρείται μόνο μια οριακή αύξηση της δέσμευσης. Αυτή η οριακή αύξηση θα μπορούσε να οφείλεται στην έλλειψη ελεύθερου αντιδραστικού επιφάνειας παραμένει επί των ΑΕΠ. Η φύση της σύνδεσης μεταξύ του χρυσού και πρωτεϊνών έχει αποτελέσει αντικείμενο έντονης έρευνας κατά τη διάρκεια των τελευταίων δεκαετιών. Είναι πλέον γενικά αποδεκτό ότι υπάρχουν τρεις βασικοί τύποι αλληλεπιδράσεων που συμβαίνουν μεταξύ μιας πρωτεΐνης /αντισώματος και νανοσωματίδια χρυσού? (I) ηλεκτροστατικές αλληλεπιδράσεις των αρνητικά φορτισμένων ΑΕΠ με θετικά φορτισμένα πρωτεΐνες? (Ii) ομοιοπολικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των ομάδων θειόλης /αμίνης που υπάρχουν εντός των υπολειμμάτων αμινοξέων σε αντισώματα και τα ΑΕΠ? και (iii) υδρόφοβες αλληλεπιδράσεις μεταξύ πρωτεϊνών και ΑΕΠ [19], [40]. Χρησιμοποιώντας φασματοσκοπία φωτοηλεκτρονίων ακτίνων Χ και θερμοσταθμική ανάλυση εμείς στο παρελθόν απέδειξε ότι cetuximab χρησιμοποιεί θειόλης και αμίνης να συνδεθεί στην επιφάνεια του χρυσού νανοσωματίδια [19], [40].

Επίσης, είναι επιτακτική ανάγκη για την επικύρωση των παραμέτρων σχεδιασμού για διαφορετικές κυτταρικές σειρές με μεταβλητή έκφραση του υποδοχέα-στόχου. Αυτό είναι ιδιαίτερα σημαντικό λαμβάνοντας υπόψη την ετερογενή φύση των όγκων. Σε αυτές τις μελέτες χρησιμοποιήσαμε τρία διαφορετικά παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές με μεταβλητό έκφραση του EGFR. Δείξαμε επίσης ότι ενδοκυτταρική πρόσληψη του ΑΕΠ-C225 δεν εξαρτάται μόνο από τον αριθμό των cetuximab μορίων, αλλά εξαρτάται επίσης από την ικανότητά τους να δεσμεύουν EGFR, όπως επίσης και το υδροδυναμικό μέγεθος των nanoconjugates. Είναι επίσης προφανές ότι η μη ειδική πρόσληψη μπορεί να ελαχιστοποιηθεί

in vitro

με τη βελτιστοποίηση της κάλυψης του παράγοντα στόχευσης στην επιφάνεια των νανοσωματιδίων. Η μέγιστη ειδική πρόσληψη του ΑΕΠ-C225 παρατηρείται όταν υπάρχουν τρία C225 μόρια σε ΑΕΠ, ακόμη και αν η συνολική πρόσληψη μειώνεται. Αυτά τα δεδομένα περαιτέρω αποδεικνύουν το συνδυασμένο σημασία του αριθμού των παραγόντων στόχευσης ανά σωματίδιο και το υδροδυναμικό μέγεθος των nanoconjugates. Αυτό αντικατοπτρίζεται και στη διαφορά μεταξύ της ειδικής πρόσληψης του ΑΕΠ-C225 και τη μη ειδική πρόσληψη του ΑΕΠ-IgG.

Πρόσφατα, αρκετές ομάδες έχουν έμφαση στην κατανόηση των παραμέτρων σχεδιασμού για την αποτελεσματική στόχευση όγκων με nanoconjugates σε προκλινικό μοντέλο. Έχει επίσης αναφερθεί ότι ένας nanoconjugate με μέγεθος & lt? 100 nm αποτελεσματικά στόχευση κύτταρα όγκου [41]. έχουν λιποσώματα αντίσωμα που στοχεύει έχουν βρεθεί να ασκούν ενισχυμένη αποτελεσματικότητα έναντι των μη-στοχευμένων αντίστοιχά τους [42]. Επιπλέον, η παράδοση των siRNA χρησιμοποιώντας τη μεταφορά στοχευμένες πολυμερικά νανοσωματίδια έδειξαν καλύτερη αποτελεσματικότητα, ακόμη και αν κινητική, βιοκατανομή και όγκου πρόσληψη τους ήταν παρόμοιο [43]. Παρόμοιες παρατηρήσεις έγιναν και σε μια μελέτη της τρανσφερίνης επικαλυμμένα νανοσωματίδια χρυσού? καταδείχθηκε ότι το περιεχόμενο συνδέτη για τα νανοσωματίδια είναι σημαντικά για τη στόχευση [33]. Εδώ, θα διερευνήσει ένα ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος και με τη σειρά, καταδεικνύουν τις κρίσιμους ρόλους ότι ο αριθμός των μορίων αντισώματος επί της ΑΕΠ, την ικανότητα των nanoconjugates να δεσμεύει τον υποδοχέα-στόχο, τη διαθεσιμότητα του αντιδραστική επιφάνεια για μη-ειδική αλληλεπίδραση . και το υδροδυναμικό μέγεθος των nanoconjugates όλοι παίζουν στην αποτελεσματική σχεδίαση

όλα μαζί τα δεδομένα μας δείχνουν ότι η συγκεκριμένη στόχευση των καρκινικών κυττάρων εξαρτάται από μια σειρά από σημαντικούς παράγοντες? 1) με στόχο παράγοντα για την αναλογία των νανοσωματιδίων? 2) διαθεσιμότητα του δραστικού εμβαδού επιφανείας για το νανοσωματίδιο? 3) την ικανότητά του να δεσμεύει nanoconjugate τον στόχο και 4) υδροδυναμική διάμετρος του nanoconjugate. Έτσι, ευφυή σχεδιασμό για την επιτυχή στόχευση των καρκινικών κυττάρων απαιτεί βελτιστοποίηση αυτών των κρίσιμων παραγόντων. Πιστεύουμε ότι αυτή η μελέτη θα βοηθήσει να καθορίσει τις παραμέτρους σχεδιασμού για τη διαμόρφωση καλύτερων στρατηγικών για στοχεύουν ειδικά όγκους με συζεύξεις των νανοσωματιδίων.

Υλικά και Μέθοδοι

Σύνθεση και χαρακτηρισμός του ΑΕΠ-αντισώματος συζυγών