HuR είναι γνωστό ότι εντοπίζεται σε πολυσωμάτων και σε κόκκους στρες μετά από ορισμένα είδη των παιχνιδιών και των κυτταρικών βλαβών. Έχουμε παρατηρήσει μια τεράστια μετατόπιση της πρωτεΐνης σε βαρύτερα κλάσματα πολυσωματικού παρακάτω δοξο θεραπεία, υποδεικνύοντας ότι η πρωτεΐνη συμμετέχει ενεργά στην κυτταρική αντίδραση στο φάρμακο ίσως ρύθμιση της άσκησης της μετάφρασης του δεσμευμένου mRNA. Χρησιμοποιήσαμε μια δοκιμασία RIP τσιπ για να διαπιστωθεί ποια mRNAs συνδέονται με HuR μετά από θεραπεία δοξο, για να διερευνηθεί η ανταπόκριση HuR να ΟΟΧΟ από την άποψη των στόχων HuR.

Μετά την ανοσοκατακρήμνιση και υβριδοποίηση σε συστοιχίες Agilent, μέσα από μια φορές την ανοχή εμπλουτισμός, μπορούμε φιλτράρεται εκείνα ποικιλία mRNA ιδιαίτερα δεσμεύεται να HuR. Ανακαλύψαμε mRNAs που αντιστοιχούν σε 822 HGNC σχολιασμένα γονίδια τα οποία μπορούν να συνδεθούν με HuR και αναλογικά εμπλουτισμένο μέσα στο προϊόν. Εμείς υπέβαλε την δεσμεύεται ρεκόρ γονίδιο 721 HuR την αξιολόγηση της λειτουργικής μοτίβα γύρω από το 3UTR, να κρίνουν τη σταθερότητα της διαδικασίας μας εμπλουτισμού mRNA. Από HuR είναι καλά γνωστό ότι συνδέεται με Άρη, που περιμέναμε να δούμε για μια σταθερή υπερεκπροσώπηση της γνώμης είναι δεσμευτικές στα 3UTRs αυτών των γονιδίων.

Ο εμπλουτισμός της ARE ήταν μεγάλη και η σημασία διατηρείται ακόμη και αν αφαιρέσετε σταθερά γονίδια με χαμηλότερο εμπλουτισμό φορές. Τα πρώτα 50 γονίδια τα μέγιστα εμπλουτισμένα σε ARE. Από τον κατάλογο αυτό επιλέξαμε τρία γονίδια για να επαληθεύσει την συνέπεια της ευρείας ανάλυση του γονιδιώματος, ελέγχοντας το σχετικό ποσό για τη λύση ανοσοκατακρήμνιση μέσω ημιποσοτική PCR του c fos, c myc και SOCS3. Όλα τα mRNAs καθιερωμένη σχέση τους με HuR μετά κυβέρνηση DOXO, όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Β.

Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν μία εμπλοκή HuR στη διαδικασία ενεργοποίησης απόπτωσης που προκαλείται από DOXO σε μας σύστημα κυτταρικό μοντέλο που δεν μπορεί να εξηγηθεί από το σχηματισμό του apoptogenic κόλουρου τύπο του HuR, και ότι ως εναλλακτική HuR είναι δεσμευμένο σε συγκεκριμένα mRNAs και relocalizes σε πολυσώματα μετά τη θεραπεία δοξο. Από HuR κάτω ρύθμιση προωθεί μια ελάττωση της αποπτωτική απόκριση που επάγεται από DOXO και δεδομένου ότι rottlerin ανταγωνίζεται DOXO στην επαγωγή απώλεια βιωσιμότητας, αναρωτηθήκαμε εάν HuR θα μπορούσε να εμπλέκεται στην έναρξη της αντίστασης DOXO.

Δίνουμε MCF 7 κύτταρα κάτω από ΟΟΧΟ συλλογή με τη συνεχή αύξηση της συγκέντρωσης του φαρμάκου 0-100 nM σε μια χρονική κλίμακα μήνα. Λάβαμε ένα κύτταρο πολιτών, που ονομάζεται MCF 7 /doxoR, η οποία έδειξε περίπου 250 φορές ανθεκτικότητα στο DOXO, σε σύγκριση με τον άγριο τύπο MCF 7 κύτταρα, όπως παρατηρείται από την αύξηση IC50 περίπου 10 μΜ. Περαιτέρω επιβεβαίωση της αποκτηθείσας φαινοτύπου αντίστασης προέρχεται από την έκφραση πάνω-σε MCF 7 /doxoR του μεταφορέα ABCG2, κατά μέσο όρο σήμα και είναι γνωστή αιτία για DOXO φαρμακοανθεκτικότητας, καθώς η permissivity σε απόπτωση ανακαλύφθηκε από κασπάση 7 φράση. OG-l002

Παρατηρήσαμε μια ισχυρή ρύθμιση προς τα κάτω του HuR ενώ τα κύτταρα προσαρμόζονται στην παρουσία DOXO. Επαναλάβαμε τη διαδικασία της ϋΟΧΟ συλλογής 3 x συχνά αποκτούν το ίδιο προφανές HuR ρύθμιση προς τα κάτω, γιατί ήμασταν εστιάζοντας σε πληθυσμούς, εγγενώς τεθεί μέσω μεταβλητότητας. Πιο πάνω, τοποθετούμε κάτω από την επιλογή διαφορετικές κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού δύο με διαφορετικές charachteristics από MCF 7 κύτταρα: MDA ΜΒ 231, τρίκλινα κακά κύτταρα, και SK BR 3, HER2 θετικό κύτταρα.

Έχουμε αποκτήσει έναν πληθυσμό ΜϋΑΜΒ 231 κύτταρα ανθεκτικά σε ΟΟΧΟ αλλά όχι ένας πληθυσμός SK BR 3 σύμφωνα με τις τιμές που υπολογίστηκαν. Είναι ενδιαφέρον, γίναμε μάρτυρες HuR ρύθμιση προς τα κάτω στο ΜϋΑΜΒ 231 /doxoR αλλά όχι σε SK BR 3 /NOdoxoR, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα καρκινικά κύτταρα του μαστού ρυθμίζουν προς τα κάτω HuR έκφραση μόνο αν μια βαθιά γενετικό επαναπρογραμματισμό προς φαρμακοανθεκτικότητας συμβαίνει και όχι ως αποτέλεσμα της απλής παρουσίας δοξο.