Αφηρημένο

Υπάρχουν συσσωρευμένα στοιχεία που απορυθμίζεται JAK σηματοδότηση συμβαίνει σε μια ευρεία ποικιλία τύπων καρκίνου. Συγκεκριμένα, μεταλλάξεις στο JAK2 μπορεί να οδηγήσει στην συστατική ενεργοποίηση των παραγόντων μεταγραφής STAT και να οδηγήσει σε ογκογόνο αύξηση. Τα JAK κινάσες εγκατεστημένοι πρωτεΐνες πελάτη Hsp90 και εδώ δείχνουμε ότι το νέο μικρό μόριο αναστολέα Hsp90 ganetespib (πρώην STA-9090) επιδεικνύει ισχυρός

in vitro

και

in vivo

δραστηριότητα σε μια σειρά των στερεών και αιματολογικές νεοπλασματικών κυττάρων που εξαρτώνται από δραστικότητα JAK2 για την ανάπτυξη και την επιβίωση. Αξίζει να σημειωθεί ότι τα αποτελέσματα της θεραπείας ganetespib σε παρατεταμένη εξάντληση των JAK2, συμπεριλαμβανομένου του ουσιαστικά δραστική JAK2

μετάλλαξη V617F, με επακόλουθη απώλεια της δραστικότητας STAT και μειωμένη έκφραση του γονιδίου STAT-στόχο. Σε αντίθεση, η αγωγή με τα παν-JAK αναστολέα P6 αποτελέσματα μόνο παροδικές επιδράσεις σε αυτές τις διαδικασίες. Περαιτέρω διαφοροποίηση αυτών των τρόπων παρέμβασης, μελέτες έκφρασης RNA και πρωτεϊνών δείχνουν ότι ganetespib διαμορφώνει επιπλέον ρυθμιστικές πρωτεΐνες του κυτταρικού κύκλου, ενώ P6 δεν το κάνει. Η ταυτόχρονη επίδραση των ganetespib τόσο κυτταρική ανάπτυξη και κυτταρική διαίρεση σηματοδότηση μεταφράζεται σε ισχυρή αντικαρκινική αποτελεσματικότητα σε μοντέλα ποντικών με ξενομοσχεύματα και διαδίδονται JAK /STAT γνώμονα λευχαιμία. Συνολικά, τα ευρήματά μας υποστηρίζουν την αναστολή Hsp90 ως νέα θεραπευτική προσέγγιση για την καταπολέμηση ασθενειών που εξαρτώνται από την JAK σηματοδότησης /STAT, με την πολυτροπική δράση της ganetespib αποδεικνύοντας πλεονεκτήματα σε σχέση με JAK-ειδικοί αναστολείς

Παράθεση:. Πρωία DA, Foley KP, Korbut T, Sang J, Smith D, Bates RC, et al. (2011) πολύπλευρη παρέμβαση από την Hsp90 Αναστολέας Ganetespib (STA-9090) σε καρκινικά κύτταρα με ενεργό JAK /STAT Σηματοδοσίας. PLoS ONE 6 (4): e18552. doi: 10.1371 /journal.pone.0018552

Επιμέλεια: Olivier Gires, Πανεπιστήμιο Ludwig-Maximilians, Γερμανία

Ελήφθη: 26 Ιανουαρίου του 2011? Αποδεκτές: 4 Μαρτίου του 2011? Δημοσιεύθηκε: 14, Απριλίου 2011

Copyright: © 2011 Πρωία et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. όλοι οι συγγραφείς είναι ή ήταν υπάλληλοι της Synta Pharmaceuticals, Inc. και όλα εκτός από RC Bates και AF Rosenberg κατέχουν είτε μετοχών ή δικαιωμάτων προαίρεσης σε Synta Pharmaceuticals, Inc. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

JAK2 είναι ένα εκφράζεται παντού μέλος της οικογενείας Janus σχετιζόμενη κινάση (JAK) των κινασών τυροσίνης μη-υποδοχέα που λειτουργούν για να μεσολαβήσει σηματοδότησης καθοδικά των υποδοχέων κυτοκίνης και παράγοντα ανάπτυξης [1]. Ακατάλληλη ενεργοποίηση του JAK σηματοδότησης κρύβεται κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την επιβίωση σε μια ποικιλία στερεών όγκων [2], [3] και αιματολογικές νεοπλασίες [4]. Ειδικότερα, ένα σημείο ενεργοποίησης μετάλλαξη στο JAK2 (JAK2

V617F) έχει περιγραφεί με υψηλή συχνότητα σε χρόνιες μυελοϋπερπλαστικές διαταραχές (MPD) [5], [6], [7], [8], [9], [ ,,,0],10] και ενεργοποίηση συστατική JAK2 προκαλούνται από χρωμοσωμικές μετατοπίσεις έχουν αναφερθεί σε διάφορους τύπους λευχαιμίας [11], [12], [13].

Ενεργοποιημένο σύμπλοκα κυτοκίνη JAK προσλαμβάνουν και φωσφορυλιώνει μόρια τελεστές συμπεριλαμβανομένων Signal Ανιχνευτές και ενεργοποιητές μεταγραφής (STAT) πρωτεΐνες [14]. STAT πρωτεΐνες μεσολαβούν ένα ευρύ φάσμα των βιολογικών διαδικασιών, συμπεριλαμβανομένης της κυτταρικής ανάπτυξης, διαφοροποίησης, της απόπτωσης, της φλεγμονής και ανοσολογικής απόκρισης [15]. Δύο δΤΑΤδ ειδικότερα, STAT3 και STAT5, αποτελούν τα κύρια υποστρώματα για JAK2 που διέπουν myelopoeisis [16], [17] και μπορεί να συμβάλει στην κυτταρική μεταμόρφωση [18], [19]. επίμονη ενεργοποίηση τους έχει συνδεθεί με αυξημένο πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων, την επιβίωση, τη μετάσταση και τη φλεγμονή καρκινογόνο δράση στα δύο στερεά και αιματολογικούς όγκους [20]. Συνεπώς, αναστολή αυτού του άξονα σηματοδότησης με την χρήση ειδικών αναστολέων μικρού μορίου του JAK2 έχει πρόσφατα διερευνηθεί ως σημείο θεραπευτική παρέμβαση σε πολλαπλές ενδείξεις όγκου ανθρώπου [3], [21], [22], [23], [24] .

θερμικού σοκ πρωτεΐνη 90 (Hsp90) είναι ένας μοριακός συνοδός που απαιτούνται για τη μετα-μεταφραστική σταθερότητα των πρωτεϊνικών υποστρωμάτων της ή «πρωτεΐνες πελάτες». Τα καρκινικά κύτταρα περιέχουν αυξημένα επίπεδα του δραστικού Hsp90 [25] και, επειδή πολλές πρωτεΐνες πελάτης παίζουν κρίσιμους ρόλους ογκογόνο, τα καρκινικά κύτταρα είναι ιδιαίτερα ευαίσθητα σε αναστολή της HSP90. Επιπλέον, ένα μοναδικό χαρακτηριστικό της στόχευσης Hsp90 είναι ότι τα αποτελέσματα αναστολή στην ταυτόχρονη δέσμευση των πολλαπλών ογκογόνο καταρρακτών σηματοδότησης, ξεπερνώντας δυναμικό απολύσεις οδού, και ευαισθητοποίηση καρκινικών κυττάρων σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες [26], [27], [28], [29]. Έτσι, Hsp90 αντιπροσωπεύει ένα ελκυστικό μοριακός στόχος για την ανάπτυξη νέων θεραπευτικών του καρκίνου [28], [30], [31]. Από ενδιαφέρον εδώ, οι JAK κινάσες πελάτες εγκατεστημένους Hsp90 υποδηλώνοντας ότι η αναστολή Hsp90 μπορεί να είναι αποτελεσματική στη θεραπεία της JAK-σκηνοθεσία νεοπλασματικές διαταραχές [32], [33].

Για να ελεγχθεί αυτή η υπόθεση, έχουμε χρησιμοποιήσει το συνθετικό μικρό μόριο ganetespib αναστολέα (STA-9090), μια ένωση που περιέχει ρεσορκινόλης-άσχετη με γκελνταναμυκίνη, που δεσμεύεται στον τομέα σύνδεσης ΑΤΡ της Hsp90. Σε προκλινικές μελέτες, το φάρμακο έδειξε χαμηλή δραστηριότητα νανομοριακή

in vitro

έναντι μιας ποικιλίας ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών σειρών και ισχυρή αντικαρκινική αποτελεσματικότητα έναντι ανθρώπινων μοντέλων ξενομοσχεύματος [34], [35]. Ganetespib είναι επί του παρόντος σε κλινικές δοκιμές τόσο για συμπαγή όγκο και αιματολογικές κακοήθειες. Εδώ μπορούμε να δείξουμε ότι ganetespib επάγει ισχυρά απόπτωση σε μία ποικιλία γραμμών όγκου που εξαρτώνται από την επίμονη JAK /STAT σηματοδότηση για την ανάπτυξη και την επιβίωση. Έχουμε αποδείξει περαιτέρω ότι το φάρμακο μεταβάλλει επίσης πολλά στοιχεία της ρύθμισης του κυτταρικού κύκλου στα καρκινικά κύτταρα, μια δραστηριότητα απουσιάζει από ένα JAK-ειδικού αναστολέα.

In vivo

, ganetespib συντεταγμένη επιπτώσεις και στις δύο κυτταρική ανάπτυξη και διαίρεση των κυττάρων οδηγεί σε ισχυρή αντικαρκινική δράση σε JAK /STAT μοντέλα με γνώμονα της ανθρώπινης λευχαιμίας. Έτσι, η αναστολή της δραστικότητας Hsp90 αντιπροσωπεύει μια υποσχόμενη προσέγγιση για την καταπολέμηση ασθενειών που εξαρτώνται από την συστατική σηματοδότηση JAK /STAT, με ganetespib καταδεικνύοντας πιθανή θεραπευτική πλεονεκτήματα έναντι JAK-ειδικοί αναστολείς.

Αποτελέσματα

Ganetespib αναστέλλει JAK2- μεσολαβούμενη μεταγωγή σήματος και πολλαπλασιασμό σε αιματολογικών καρκίνων

Με χαμηλή δραστικότητα νανομοριακή, ganetespib μειωμένη κυτταρική βιωσιμότητα σε μία ομάδα ανθρώπινων αιματολογικών και στερεών καρκινικές κυτταρικές σειρές που επιλέγονται για την εξάρτησή τους από JAK /STAT σηματοδότησης και μεταβάλλοντας τον τύπο του καρκίνου (Σχ. 1Α). Σε κάθε μία από τις γραμμές που εξετάστηκαν, ganetespib ήταν πιο ισχυρό από ό, τι η ανσαμυκίνη Hsp90 αναστολέα 17-AAG. Αξίζει να σημειωθεί, ganetespib ήταν μεγαλύτερη από 100 φορές πιο ισχυρό από 17-ΑΑΟ στο σετ-2 και HEL92.1.7 λευχαιμικά κύτταρα, κυτταρικές σειρές που φιλοξενούν μόνιμα ενεργό JAK2

μεταλλάξεις V617F που δρουν ως ογκογόνο τους οδηγούς τους.

(Α) SET-2, HEL92.1.7, MV4-11, NCI-H1975 και DU145 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ganetespib ή 17-AAG σε μία ευρεία περιοχή δόσεων (0.0001 να 1 μΜ) για 72 ώρες και η βιωσιμότητα των κυττάρων αξιολογείται με Alamar μπλε χρώση. (Β) Ganetespib παρουσιάζει πιο ανθεκτικό αναστολή της JAK σηματοδότησης /STAT σε σύγκριση με το P6. κύτταρα HEL92.1.7 καλλιεργήθηκαν σε παρουσία 250 ηΜ ganetespib ή 1000 ηΜ Ρ6 και συλλέχθηκαν μεταξύ 0 και 48 ώρες. Τα επίπεδα έκφρασης των υποδεικνυόμενων πρωτεϊνών προσδιορίσθηκαν με στύπωμα Western. (Γ) Ganetespib είναι σημαντικά πιο ισχυρές από 17-AAG. SET-2 κύτταρα δοσολογήθηκαν με τις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις ganetespib ή 17-ΑΑΟ για 24 ώρες και αναλύθηκαν για να καθοριστούν τα επίπεδα JAK /STAT πρωτεΐνης και του στόχου χρησιμοποιώντας τα αντισώματα υποδεικνύονται.

Η

Χρησιμοποιώντας τα κύτταρα HEL92.1.7 , συγκρίναμε το ανασταλτική δράση /STAT JAK της ganetespib στην ένωση πυριδόνης 6 (P6) [36], μια αναστρέψιμη, ΑΤΡ-ανταγωνιστικός αναστολέας τηγάνι των JAKs (Εικ. 1Β). Ganetespib και Ρ6 κάθε μπλοκάρει JAK2 εξαρτώνται από τη σηματοδότηση, όπως αποδεικνύεται από την απώλεια φωσφο-STAT3 και φωσφο-STAT5 και σηματοδότησης ΕΚΚ. Ωστόσο, ganetespib ήταν τουλάχιστον τέσσερις φορές περισσότερο ισχυρές και κατέστειλε STAT σηματοδότησης περισσότερο σε σύγκριση με P6. θεραπεία Ganetespib μόνος οδήγησαν στις στοχευμένες, πρωτεοσώματος-εξαρτώμενο (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται) απώλεια της JAK2 και φωσφο-ΑΚΤ επίπεδα πρωτεΐνης (Εικ. 1Β), και οι δύο πρωτεΐνες πελάτης Hsp90. Έτσι, ganetespib θεραπεία οδηγεί σε παρατεταμένη αναστολή των πολλαπλών ογκογόνων στόχων σε αυτά τα κυτταρικά μοντέλα της JAK2 με γνώμονα την κακοήθεια. Παρόμοια αποτελέσματα επί JAK σηματοδότηση /STAT παρατηρήθηκαν με SET-2 κύτταρα, όπου το 50 ηΜ ganetespib ήταν σε θέση να αποσταθεροποιήσει JAK2 επαρκώς ώστε να οδηγήσει σε απώλεια των ενεργοποιημένων (

δηλαδή

, φωσφορυλιωμένη) STAT3 και έκφραση STAT5 (Σχ. 1C ). 17-AAG έδειξε συγκρίσιμα αποτελέσματα με ganetespib αλλά ήταν 200 φορές λιγότερο ισχυρή, σύμφωνα με τα δεδομένα της βιωσιμότητας που περιγράφονται παραπάνω. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα καταδεικνύουν ότι ganetespib διαθέτει ανασταλτική δραστικότητα ανώτερη JAK /STAT τόσο Ρ6 και 17-AAG από την άποψη της δραστικότητας ή διάρκεια απόκρισης.

Ganetespib καταργεί σηματοδότηση ϋΑΚ /δΤΑΤ σε στερεούς όγκους

Εκτός από τη συχνότητά του σε αιματολογικές κακοήθειες, ογκογόνος ενεργοποίηση STAT είναι επίσης διαδεδομένη σε μια σειρά των συμπαγών όγκων. Για παράδειγμα, ενεργοποιούνται διαρκώς STAT3 βρίσκεται στο 50% των αδενοκαρκινωμάτων του πνεύμονα και παρατηρείται κυρίως σε όγκους που φέρουν μεταλλάξεις στον υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) [37], [38]. Η κυτταρική γραμμή NCI-H1975 μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) εκφράζει τον πελάτη Hsp90 EGFR

L858R /Τ790Μ, ένας καταστατικά ενεργοποιημένος και ερλοτινίμπη ανθεκτική μορφή του EGFR, και θεραπεία ganetespib οδήγησε σε μια δοσο-εξαρτώμενη μείωση στην EGFR έκφραση σε αυτά τα κύτταρα (Σχ. 2Α). Επιπλέον, ganetespib επάγεται επίσης ισχυρός υποβάθμιση των JAK2 και απώλεια φωσφορυλιώνεται STAT3 με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Η αδρανοποίηση του ΑΚΤ και ΟδΚ3β, πρωτεΐνες σημαντικά στη ρύθμιση της απόπτωσης, παρατηρήθηκε με μια παρόμοια απόκριση δόσης με εκείνη του JAK2 σηματοδότησης /STAT3. Πρόσφατα δείχθηκε ότι JAK2 μπορούν να διαμορφώσουν τη δραστηριότητα των πρόσθετων αποπτωτικών ρυθμιστών όπως BAD και BCL-XL να προωθήσει την επιβίωση των κυττάρων [21]. Σε συμφωνία με αυτό, εντοπίσαμε μια ταυτόχρονη μείωση των επιπέδων της φωσφορυλιωμένης BAD (Εικ. 2Α), μειώνοντας έτσι το προ-αποπτωτική δραστηριότητα αυτής της πρωτεΐνης. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν πιθανή μηχανισμός να λογοδοτήσει για την κυτταροτοξική απόκριση που παρατηρείται με τη θεραπεία ganetespib (Εικ. 1Α).

(Α) προς τα κάτω ρύθμιση πρωτεΐνης Πελάτη NSCLC. κύτταρα NCI-H1975 δοσολογήθηκαν με τις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις ganetespib για 24 ώρες και κυτταρολύματα τους αναλύεται για να προσδιοριστεί JAK /STAT και Hsp90 τα επίπεδα πρωτεΐνης-πελάτη χρησιμοποιώντας τα αντισώματα υποδεικνύονται. (Β) Ganetespib μπλοκ IL-6 που επάγεται και συστατική δραστικότητα STAT3 σε κύτταρα NSCLC. HCC827 πνεύμονα καρκινικά κύτταρα υποβλήθηκαν σε θεραπεία με αυξανόμενες συγκεντρώσεις ganetespib ή Ρ6 για 24 ώρες ακολουθούμενη από 15 λεπτά διέγερση με ή χωρίς 50 ng /ml ανθρώπινης ανασυνδυασμένης IL-6. Τα επίπεδα του JAK2, ολική και φωσφο-STAT3, και PIM2 αναλύθηκαν με western blot. GAPDH περιλαμβάνεται ως μάρτυρας φόρτωσης. (Γ) αποδόμηση πρωτεΐνης Πελάτη κύτταρα καρκίνου του προστάτη. κύτταρα DU145 δοσολογήθηκαν με διαβαθμισμένες συγκεντρώσεις ganetespib για 24 ώρες και κυτταρολύματα που υπόκεινται σε κηλίδα western για να προσδιοριστεί JAK /STAT και τελικά επίπεδα πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας τα αντισώματα υποδεικνύονται. (D) Λειτουργικό Hsp90 απαιτείται για JAK2, αλλά όχι JAK1, η σταθερότητα σε κύτταρα DU145. κύτταρα DU145 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με DMSO (έλεγχος, C), 15 nM, 60 nM ή 240 nM ganetespib είτε για 24 ή 48 ώρες και λύματα ανιχνεύθηκαν με western blot με τα υποδεικνυόμενα αντισώματα.

Η

Η JAK /STAT άξονας σηματοδότησης αποτελεί βασικό ρυθμιστή της σηματοδότησης κυτοκίνης και ένα προτεινόμενο μηχανισμό για ανώμαλη ενεργοποίηση STAT3 στον καρκίνο του πνεύμονα περιλαμβάνει την προς τα πάνω ρύθμιση του αυτοκρινούς ή /και παρακρινή IL-6 σηματοδότηση [2]. Ως εκ τούτου, ερευνήσαμε αν ganetespib θα μπορούσε να αναστείλει αυτό το σηματοδότηση στα κύτταρα NSCLC. Εν απουσία εξωτερικών συνδετήρα, HCC827 κύτταρα κατεργασμένα με ganetespib εμφάνισε μια δοσο-εξαρτώμενη μείωση στην έκφραση JAK2, οδηγώντας σε απώλεια δραστικότητας STAT3 και την έκφραση του προς τα κάτω στόχος STAT PIM2 (Εικ. 2Β). Βιοχημική αναστολή JAK2 με Ρ6, αν και σε υψηλότερες συγκεντρώσεις, ομοίως κάτω ρυθμισμένα συστατική δραστικότητα STAT3 αλλά δεν επηρέασε τα συνολικά επίπεδα πρωτεΐνης JAK2. Ομοίως, και οι δύο ενώσεις μπλοκάρει JAK διέγερση σηματοδότηση /STAT όταν η οδός έχει ενεργοποιηθεί με εξωγενή IL-6 θεραπείες (Σχ. 2Β).

Η κακή ρύθμιση της IL-6 /JAK2 σηματοδότηση έχει επίσης ενοχοποιηθεί στην ογκογένεση του καρκίνου του προστάτη [39 ], [40]. Η DU145 καρκίνου του προστάτη κυτταρική γραμμή εκφράζει ένα αυτοκρινή IL-6 βρόχος σηματοδότηση [41] και αναφέρθηκε πρόσφατα ότι είναι ευαίσθητα στις επιδράσεις ενός νέου αναστολέα μικρού μορίου JAK2

in vitro

και

in vivo

[3], [41]. Ganetespib ήταν ένας ισχυρός επαγωγέας κυτταρικού θανάτου σε αυτή τη γραμμή (Εικ. 1Α). Βιοχημικός χαρακτηρισμός των κυττάρων DU145 αποκάλυψε παρόμοια ανασταλτικά αποτελέσματα επί σηματοδότηση JAK2 μετά από θεραπεία ganetespib (Σχ. 2C). Απώλεια JAK2, φωσφο-STAT3 και φωσφο-SHP2, ένα JAK2 αλληλεπιδρώντας φωσφατάση σημαντική για μεταγωγή σήματος JAK2, παρατηρήθηκε μετά την προσθήκη του ganetespib. Είναι ενδιαφέρον ότι, η σχετική κινάση JAK1 που εκφράζονται σε αυτή την κυτταρική γραμμή δεν είχε ως στόχο για την υποβάθμιση αλλά αντίθετα φάνηκε να αυξάνει την ακόλουθη ganetespib έκθεσης (Σχ. 2D). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν για τον προστάτη καρκινική κυτταρική σειρά PC-3 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι η επιλεκτική αποδόμηση του JAK2 σε κύτταρα προστάτη DU145 ήταν επαρκής για την κατάργηση επακόλουθη ενεργοποίηση της σηματοδότησης STAT3.

αναστολή της HSP90 ρυθμίζει προς τα κάτω την μεταγραφή των στόχων σηματοδότησης /STAT JAK και γονιδίων του κυτταρικού κύκλου

HEL92 .1.7 κύτταρα ερυθρολευχαιμίας, βιοχημικές αναστολή JAK2 με κατεργασία P6 ως αποτέλεσμα την απώλεια της κυτταρικής βιωσιμότητας, αλλά με 30 φορές μικρότερη ισχύ από ganetespib (IC

50 τιμές 600 έναντι 20 ηΜ) (Σχ. 3Α). Για να συγκρίνετε την κυτταρική επίδραση του κάθε αναστολέα, που εντοπίστηκε για πρώτη φορά τις συνθήκες υπό τις οποίες δραστηριότητα JAK2 μειώθηκε σε ισοδύναμα επίπεδα από κάθε φάρμακο με βάση την κινητική και την ισχύ διαφορές τους. Όπως απεικονίζεται στο Σχήμα 3Β, το Ρ6 4 ωρών (1000 ηΜ) και 24ωρο ganetespib επιλέχθηκαν (250 ηΜ) θεραπείες, λόγω της συγκρίσιμα αποτελέσματα επί STAT3 /5 σηματοδότηση. έκφραση RNA προφίλ σε αυτά τα χρονικά σημεία έδειξε, όπως ήταν αναμενόμενο, ότι πολλά γονίδια JAK /STAT-στόχο (όπως τα μέλη της οικογένειας SOCS και PIM) ρυθμίστηκαν προς τα κάτω και από τα δύο φάρμακα (Εικ. S1, Πίνακας S1). Ωστόσο, επιπρόσθετα γονίδια τροποποιήθηκαν με κατεργασία ganetespib που δεν επηρεάστηκαν στις P6-κατεργασμένων κυττάρων (Σχ. 3 C, D). Εκτός οδηγεί στην αναμενόμενη αυξορρύθμιση πολλών γονιδίων πρωτεΐνης θερμικού σοκ, κατεργασία ganetespib επίσης επιλεκτικά μετέβαλε την έκφραση ενός μεγάλου συνόλου γονιδίων που εμπλέκονται σε δραστηριότητες συνδέονται με τον κύκλο των κυττάρων, συμπεριλαμβανομένης της αντιγραφής του DNA και επιδιόρθωση (BRCA1 /2), ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου (CDC2 , CDC25), δραστηριότητες κεντροσωμάτων /ατράκτου (BUB1 /3, CENPE /M, KIF14, FAM33A), συμπύκνωση χρωμοσώματος (TOP2A, NCAPG), και αντιγραφής (RFC3 /4, MCM οικογένεια) (Εικ. S1). Πράγματι, η ανάλυση των γονιδίων μεταβάλλεται από ιεραρχική ομαδοποίηση και τον εμπλουτισμό βαθμολογίας αποκάλυψε ότι οι ρυθμιστές της κυτταρικής διαίρεσης ήταν οι πιο σημαντικές διεργασίες μειώνονται με επεξεργασία ganetespib (Πίνακας 1).

(Α) Συγκριτική αποτελέσματα των ganetespib και P6 για HEL92 .1.7 καρκινικών κυττάρων βιωσιμότητας. κύτταρα HEL92.1.7 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ganetespib ή Ρ6 σε ένα ευρύ φάσμα δόσεων (0.0001 να 10 μΜ) για 72 ώρες και η βιωσιμότητα των κυττάρων αξιολογείται με Alamar blue. (Β) Χρονική και δοσο-εξαρτώμενη συνέπειες για τους στόχους JAK /STAT από ganetespib και Ρ6. κύτταρα HEL92.1.7 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ganetespib ή P6 για 4 και 24 ώρες και προϊόντα κυτταρικής λύσης υπόκεινται σε κηλίδα western για τον προσδιορισμό των επιπέδων JAK2 /STAT και της πρωτεΐνης-στόχου χρησιμοποιώντας τα υποδεικνυόμενα αντισώματα. (Γ) Affymetrix GeneChip ανάλυση των κυττάρων σε επεξεργασία με ganetespib και Ρ6. κύτταρα HEL92.1.7 σε επεξεργασία με 250 ηΜ ganetespib για 24 ώρες ή 1000 ηΜ P6 για 4 ώρες. Τα επίπεδα έκφρασης γονιδίων σε DMSO αγωγή (δηλαδή έλεγχος οχήματος) κύτταρα (Χ-άξονας) σε γράφημα έναντι εκείνων των κυττάρων που έλαβαν το φάρμακο (Υ-άξονας). (D) Venn διάγραμμα του αριθμού των γονιδίων διαφορικά ρυθμίζονται από ganetespib και Ρ6.

Η

Ρύθμιση της έκφρασης της πρωτεΐνης του κυτταρικού κύκλου από ganetespib προκαλεί διακοπή της ανάπτυξης

Για την επέκταση αυτών των ευρημάτων, εξετάσαμε πειραματικά τις επιπτώσεις επί του κυτταρικού κύκλου. Ganetespib που προκαλείται από μια χρονική G

1 και G

2 /M σύλληψης σε κύτταρα HEL92.1.7, με ταυτόχρονη απώλεια της φάσης S (Σχ. 4Α). Αντίθετα, η θεραπεία P6 επαγόμενη συσσώρευση του G

1 μόνο φάση, χωρίς την απώλεια φάσης S ή G

2 /M σύλληψης. Εξετάσαμε επίσης τις στοχευμένες επιπτώσεις της ganetespib σε κρίσιμες μεσολαβητές της κυτταρικής διαίρεσης του κύκλου στο επίπεδο της πρωτεΐνης. Παρατηρήσαμε μειωμένα επίπεδα πρωτεΐνης των εξαρτώμενων από κυκλίνη κινάση 1 (Cdk-1), ένας ρυθμιστής κλειδί της G

2 /M σημείο ελέγχου, μετά από έκθεση 24 ωρών σε ganetespib, μια επίδραση που συνεχίστηκε μέχρι τουλάχιστον 48 ώρες (Σχ. 4Β). Σε αντίθεση, Ρ6 δεν είχε καμία επίδραση στην έκφραση Cdk1. Περαιτέρω, το επίπεδο φωσφο-Chk2, ένα άλλο αναπόσπαστο σημείο ελέγχου κινάσης, μειώθηκε με κατεργασία ganetespib. Παρόμοια αποτελέσματα βρέθηκαν για φωσφο-Chk1 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Όπως φαίνεται στην Εικόνα 4C, η αποσταθεροποίηση των κινασών κυκλίνης συσχετίστηκε επίσης με μια χρονική συσσώρευση των κυκλινών Α1 και Β1 σε απόκριση προς την προσθήκη φαρμάκου. Επιπλέον, παρατηρήθηκαν οι επιδράσεις αυτές του ganetespib τόσο ρύθμιση JAK2 /STAT σηματοδότησης και του κυτταρικού κύκλου σε πρόσθετους τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του μαστού (MCF-7), γαστρεντερική στρωματική (GIST882), του παγκρέατος (ΗΡΑΡ) και του προστάτη (DU145) κυτταρικές γραμμές όγκου ( Εικ. 4D). Συνολικά, αυτές οι επιπλέον επιδράσεις επί των μηχανημάτων της κυτταρικής διαίρεσης δείχνουν ότι ganetespib κατέχει αποφάσισε πλεονεκτήματα σε σχέση με JAK-ειδικών αναστολέων για τον έλεγχο της STAT-οδηγείται κακοήθειες.

(Α) κύτταρα HEL92.1.7 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 250 nM ganetespib ή 1000 nM P6 (ή DMSO ως μάρτυρας) και την κατανομή του κυτταρικού κύκλου καθορίστηκε με κυτταρομετρία ροής σε 3, 5, 9 και 24 ώρες μετά τη θεραπεία. (Β) κύτταρα HEL92.1.7 δοσολογήθηκαν με ganetespib (250 ηΜ) ή Ρ6 (1000 ηΜ) για 48 ώρες. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν στα δεικνυόμενα χρονικά σημεία και τα επίπεδα ολικής και φωσφο-Cdk1, φωσφο-Chk2 και GAPDH αναλύθηκαν με western blot. (C) Κινητική επιπτώσεις ganetespib για JAK /STAT και την έκφραση της πρωτεΐνης του κυτταρικού κύκλου. κύτταρα HEL92.1.7 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 100 nM ganetespib, που συγκομίζονται σε ωριαία διαστήματα κατά τη διάρκεια μιας χρονικής πορείας 11 ώρες, και με την επιφύλαξη κηλίδα western με τα υποδεικνυόμενα αντισώματα. (D) MCF-7, GIST882, ΗΡΑΡ και DU145 κύτταρα δοσολογήθηκαν με διαβαθμισμένες συγκεντρώσεις ganetespib για 24 ώρες και αναλύθηκε με στύπωμα western, χρησιμοποιώντας τα υποδεικνυόμενα αντισώματα.

Η

Ganetespib παρατείνει την επιβίωση σε ένα JAK2

V617F-μεταλλαγμένο μοντέλο ποντικού της ανθρώπινης λευχαιμίας

για να προσδιοριστεί εάν αυτές οι διπλές δραστηριότητες ganetespib για JAK2 /σηματοδότησης STAT και εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου που παρατηρείται

in vitro

μεταφράζονται σε αντικαρκινική αποτελεσματικότητα

in vivo

, ιδρύσαμε ένα ορθοτοπικό μοντέλο λευχαιμίας χρησιμοποιώντας HEL92.1.7 κύτταρα. Αυτό είχε ως αποτέλεσμα η Διάχυτη με νοσηρότητα τυπικά προκύπτουν από παράλυση οπίσθιου άκρου που προκαλείται από σπονδυλικής στήλης μεταστάσεις (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Για να μελετηθεί η επίδραση της ganetespib στην επιβίωση, αρχίζοντας μία ημέρα μετά την εμφύτευση των κυττάρων του όγκου, το φάρμακο χορηγήθηκε ενδοφλεβίως σε υψηλότερη μη τοξική δόση σοβαρά της (HNSTD) 25 mg /kg σε ένα χρονοδιάγραμμα 5 × /εβδομάδα έως την ημέρα 19. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Α, θεραπεία ganetespib υπερδιπλασιάστηκε διάμεση συνολική επιβίωση (. 76,5 ημερών

vs

34 ημερών,

P

& lt? 0,0001). Η θεραπεία ganetespib ήταν καλά ανεκτή, χωρίς σημαντική απώλεια σωματικού βάρους που βρέθηκαν μετά από 3 εβδομάδες χορήγησης (Εικ. S2). Η αυξημένη επιβίωση των ζώων που έλαβαν θεραπεία συσχετίζονται με μειωμένη δραματικά φορτίο των καρκινικών κυττάρων στον μυελό των οστών τους και το νωτιαίο μυελό, όπως προσδιορίζεται με ιστολογική ανάλυση (Σχ. 5Β).

(Α) Kaplan-Meier ανάλυση της συνολικής επιβίωσης σε ένα μοντέλο λευχαιμίας ιδρύθηκε από iv ένεση HEL92.1.7 κυττάρων σε SCID ποντίκια, τα οποία είχαν ως αποτέλεσμα την ανάπτυξη της διάχυτης νόσου. Αρχίζοντας μία ημέρα μετά την εμφύτευση των κυττάρων του όγκου, ganetespib ήταν ε.φ. σε δόση HNSTD της (25 mg /kg) σε ένα πέντε-φορές ανά πρόγραμμα εβδομάδα για 3 εβδομάδες έως την ημέρα 19 (η = 10 /ομάδα). *

P

& lt? 0,0001? 2-sided δοκιμασία log-rank. (Β) Ganetespib αναστέλλει δραματικά βάρος των καρκινικών κυττάρων στο νωτιαίο μυελό και τις παρακείμενες του μυελού των οστών. Immunohistochemistical χρώση (H & amp? Ε) της οσφυϊκής μοίρας της σπονδυλικής στήλης τμήματα σέντρα του ελέγχου του οχήματος (αριστερό πάνελ) ή ganetespib αγωγή (δεξιά πάνελ) ζώα. Τα ένθετα διευρυνθεί στα κάτω πάνελ. Αρχική μεγέθυνση: 40 × στο πάνω πάνελ? 200 × στα κάτω πάνελ.

Η

Ganetespib παρουσιάζει ισχυρή

in vivo

αποτελεσματικότητα σε STAT5 οδηγείται AML ξενομοσχευμάτων

MV 4-11 οξείας μυελοειδούς λευχαιμίας εκφράζουν συστατική δραστηριότητα STAT5 ως συνέπεια μίας μετάλλαξης εσωτερικός δίδυμος διπλασιασμός (ITD) στην υποδοχέα FLT3 τυροσινικής κινάσης, μια άλλη πρωτεΐνη Hsp90 client [42] και, ως τέτοια, αντιπροσωπεύει ένα εναλλακτικό μοντέλο του STAT με γνώμονα την ογκογένεση. Αυτά τα κύτταρα είναι πολύ ευαίσθητα σε ganetespib

in vitro

(Εικ. 1Α) και αξιολογήσαμε δόσης-απόκρισης τους να ganetespib θεραπείες σε ξενομοσχεύματα. Ganetespib χορηγήθηκε ενδοφλεβίως σε ποντίκια που φέρουν όγκους SCID είτε στο ημερήσια ή εβδομαδιαία HNSTD 25 mg /kg ή 150 mg /kg, αντίστοιχα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 6Α, το εβδομαδιαίο πρόγραμμα θεραπείας οδήγησε σε σημαντική και εξαρτώμενη από τη δόση αναστολή της ανάπτυξης του όγκου, ενώ η ημερήσια δοσολογία (25 mg /kg 5 × /εβδομάδα, όπως χρησιμοποιείται στην ορθοτοπικό μοντέλο παραπάνω) είχε σαν αποτέλεσμα σημαντική υποχώρηση του όγκου ( 84%). Σε αμφότερα τα δοσολογικά σχήματα, η ανάπτυξη του όγκου κατεστάλη για μέχρι μια εβδομάδα ή περισσότερο μόλις διακοπεί η αγωγή. Πέρα από αυτή την περίοδο, όπως αποδεικνύεται από την ομάδα θεραπείας μία φορά ανά εβδομάδα, η ανάπτυξη του όγκου θα μπορούσε να εκκινήσει εκ νέου.

(Α) SCID ποντίκια εμφυτεύτηκαν υποδορίως με MV4-11 οξείας μυελοειδούς λευχαιμίας. Ποντικοί φέροντες εγκατεστημένους MV4-11 ξενομοσχεύματα (100-200 mm

3, η = 8 ποντικοί /ομάδα) εγχύθηκαν ί.ν. υπολογίζεται η δοσολογία (κεφαλές βελών) με ganetespib είτε 25 ή 150 mg /kg μία φορά την εβδομάδα για 3 εβδομάδες, ή στο HNSTD των 25 mg /kg πέντε φορές την εβδομάδα, όπως υποδεικνύεται. % T /C οι τιμές που αναφέρονται στο δικαίωμα του κάθε καμπύλη ανάπτυξης και οι ράβδοι σφάλματος είναι η s.e.m. (Β) ganetespib αναστέλλει STAT-5 φωσφορυλίωσης και έκφραση Cdk1 σε ξενομοσχεύματα όγκου σε SCID ποντικούς. SCID ποντίκια που έφεραν όγκους MV4-11 (η = 4 ποντικοί /ομάδα) υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα ή ganetespib είτε 25 mg /kg ή 150 mg /kg στα δεικνυόμενα χρονικά σημεία μεταξύ 6 h και 144 h (6 ημέρες). Όγκοι αποκόπηκαν και τα επίπεδα του p-STAT5, Cdk1, Hsp70 και GAPDH προσδιορίστηκαν με κηλίδα western.

Η

Για να προσδιοριστεί αν αυτές οι απαντήσεις όγκου συσχετίζεται με ρύθμιση στόχου

in vivo

, επιπλέον ποντικών που φέρουν ξενομοσχεύματα MV 4-11 υποβλήθηκαν σε αγωγή με μία μόνο δόση μόνο όχημα ή ganetespib σε 25 ή 150 mg /kg. Οι όγκοι συλλέχθηκαν μεταξύ 6 και 144 ώρες αργότερα και φαρμακοδυναμικές ανάλυση πραγματοποιήθηκε με εξέταση των επιπέδων έκφρασης της φωσφο-STAT5, Cdk1 και Hsp70 (Εικ. 6Β). Σε συμφωνία με το

in vivo

δεδομένα ανάπτυξης του όγκου, παρατηρήθηκαν δοσοεξαρτώμενη επιπτώσεις στην διάρκεια της αναστολής στόχου εντός των όγκων. Μια ενιαία kg δόση 150 mg /του ganetespib κατασταλεί ενεργοποίηση STAT5 και κατέστειλε την έκφραση του Cdk1 για περισσότερες από τρεις ημέρες, σύμφωνα με την αποτελεσματικότητά του στη δοσολογία μια φορά ανά εβδομάδα. Στα 25 mg /kg, ισχυρή αναστολή της δραστικότητας STAT5 επιτεύχθηκε εντός 6 ωρών, όπως ήταν η απώλεια Cdk1 στις 24 ώρες μετά τη χορήγηση ganetespib. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η δραστηριότητα STAT5 ανακτάται σε αυτούς τους όγκους από 24 ώρες, ενώ η έκφραση Cdk1 παρέμεινε καταστέλλεται μέσω τουλάχιστον 48 ώρες, ακόμα και με αυτήν την χαμηλή δόση (Εικ. 6Β). Ενώ η σχετικά γρήγορη ανάκτηση της ενεργοποίησης STAT5 έπρεπε να επιτρέψουν ο όγκος να γίνει επανεκκίνηση της ανάπτυξης, η πιο ανθεκτικό καταστολή των ρυθμιστών κυτταρικού κύκλου φαίνεται να έχουν διατηρήσει την ανάπτυξη των όγκων που συνελήφθησαν μέχρι την επόμενη χορήγηση του φαρμάκου. Αυτά τα ευρήματα παρέχουν ισχυρές ενδείξεις ότι η απώλεια των σημάτων κυτταρική ανάπτυξη και διαίρεση των κυττάρων ενορχηστρωμένη από το λογαριασμό ganetespib για την ισχυρή αντικαρκινική δράση του φαρμάκου σε αυτό το μοντέλο συντεταγμένων.

Συζήτηση

Η επίμονη ενεργοποίηση JAK /STAT είναι ογκογόνο και χαρακτηριστικό πολλών ανθρώπινων κακοηθειών και έτσι παρέχει ένα ελκυστικό σημείο της παρέμβασης για μοριακά στοχευμένη θεραπευτική. Σε αυτή τη μελέτη, δείχνουμε ότι ganetespib έχει βαθιές αντικαρκινική δράση σε μια σειρά από JAK /STAT καρκίνων με γνώμονα και, το σημαντικότερο, να καταργήσει ανώμαλης σηματοδότησης μέσω πολλαπλών μηχανισμών. Ganetespib στοχεύει αποτελεσματικά την ανάντη ρυθμιστή JAK2, συμπεριλαμβανομένου του ουσιαστικά δραστική JAK2

μεταλλαγμένο V617F, για την αποικοδόμηση σε μια σειρά αιματολογικών και στερεών όγκων τύπους με επακόλουθη παρατεταμένη απώλεια της STAT3 και σηματοδότηση STAT5. Τα ευρήματα όχι μόνο υπογραμμίζουν την παθογόνο ρόλο των STAT σηματοδότηση στην ογκογένεση, αλλά υποστηρίζουν την πιθανή θεραπευτική χρησιμότητα των ganetespib για μια ποικιλία ανθρώπινων καρκίνων. Από την άποψη αυτή, η παρατεταμένη αναστολή του άξονα σηματοδότησης JAK2 /STAT επιτευχθεί με ganetespib ήταν πιο αποτελεσματική από εκείνη που παρατηρείται με τον αναστολέα P6 παν-JAK, και ganetespib ήταν ομοιόμορφα πιο ισχυρό από το ανσαμυκίνης βασίζεται Hsp90 αναστολέα 17-AAG σε δοκιμασίες μας.

Ενώ JAK2 μετάλλαξη αποτελεί κοινό μέσο για την τόνωση ογκογόνο δραστικότητα STAT, διαταραχές σε άλλα δίκτυα σηματοδοσίας, όπως αυτές που προκαλούνται από EGFR, IL-6 /IL-6R ή FLT3, μπορεί επίσης να συμβάλει σε ενεργοποιημένα σηματοδότηση STAT σε καρκινικά κύτταρα [2], [43]. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η αναστολή Hsp90 διαταράσσει αποτελεσματικά αυτά, καθώς, με ganetespib ισχυρά εξευτελιστική EGFR και μπλοκάρει τόσο IL-6 και FLT3 μεσολάβηση της ενεργοποίησης των πρωτεϊνών STAT. Έτσι, ενώ ganetespib επιβάλλει άμεσα φαρμακολογικές επιδράσεις της στην Hsp90, οι μεταγενέστεροι συνέπειες συνεπάγονται σαφώς ένα σημαντικό φάσμα των πρωτεϊνών πελάτη και βιοχημικά μονοπάτια. Με αυτόν τον τρόπο, η αναστολή Hsp90 από ganetespib μπορεί να θεωρηθεί ως ένα πολυ-κομβικών τροπικότητα αντί για ένα στόχο-ειδική θεραπευτική προσέγγιση, όπως αυτή που δημιουργείται από μια JAK2 ή άλλο αναστολέα κινάσης (Σχήμα 7).

Ganetespib εξασκεί ισχυρές αντικαρκινικές δράσεις μέσω διαταραχή πολλαπλών καταρράκτες σηματοδότησης, συμπεριλαμβανομένων του άξονα σηματοδότησης JAK /STAT και μεσολαβητών του κυτταρικού κύκλου. (Α) Το μονοπάτι ϋΑΚ /δΤΑΤ είναι ένας κύριος μηχανισμός σηματοδότησης για ένα ευρύ φάσμα των κυτοκινών και αυξητικών παραγόντων. Υπερενεργοποίηση αυτής της οδού, μέσω ενεργοποιημένων πρόσδεμα υποδοχέα κινασών τυροσίνης (EGFR ή FLT3), υποδοχέα κυτοκίνης διαμεσολαβούμενη ενεργοποίηση της JAK2, ή ενεργοποίηση μεταλλάξεων όπως JAK2

V617F, συνδέεται συχνά με την ογκογένεση. Ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου περιλαμβάνει μια σειρά από εξαιρετικά συντονισμένη και ουσιαστική διαδικασίες, συμπεριλαμβανομένου του ελέγχου σημείο ελέγχου και ανίχνευσης /επισκευή γενετικής βλάβης, κρίσιμη για τη σωστή εξέλιξη και την κυτταρική διαίρεση. (Β) Η απενεργοποίηση του Hsp90 από ganetespib αποτελέσματα πρωτεασώματος μεσολάβηση αποικοδόμηση των ανάντη συστατικών σηματοδότησης (που υποδεικνύεται σε γκρι) κρίσιμες για STAT, ΜΑΡΚ και ενεργοποίηση ΑΚΤ, οδηγώντας έτσι σε αναστολή της ανάπτυξης. Επιπλέον, η ταυτόχρονη ρύθμιση προς τα κάτω των βασικών ρυθμιστικών γονιδίων του κυτταρικού κύκλου που επάγεται από ganetespib (όπως φαίνεται στον Πίνακα 1) οδηγεί σε διακοπή του κυτταρικού κύκλου στην G

1 και G

2 /M φάσεις του κυτταρικού κύκλου, και την επακόλουθη απώλεια της φάσης S.

η

σε περαιτέρω υποστήριξη αυτού, ενώ τόσο ganetespib και P6 αλλάξει ένα κοινό σύνολο στόχων JAK /STAT, μόνο θεραπεία ganetespib ασκείται ταυτόχρονη επιπτώσεις στο κανονιστικό μηχανήματα κυτταρικού κύκλου. Στα δεδομένα λευχαιμικών κυττάρων που παρουσιάζονται, η έκθεση σε ganetespib οδήγησε σε G

1 και G

2 /Μ σύλληψη, εν μέρει μέσω της υποβάθμισης των Cdk1 και άτυπα συσσώρευση των κυκλινών Α1 και Β1. Περαιτέρω, S φάση καταργήθηκε. Εκτός από τα γονίδια που συνδέονται με την αντιγραφή του DNA και του κυτταρικού κύκλου, διάφορα συστατικά του κεντροσώματος και ατράκτου επηρεάστηκαν στο μεταγραφικό επίπεδο από ganetespib, σε συμφωνία με προηγούμενα ευρήματα ότι τα συστατικά αυτά συντίθενται σε φάση S και ότι Hsp90 είναι απαραίτητη για κεντρόσωμα συναρμολόγηση [44], [45]. Σημαντικά, αυτό ήταν ένα γενικό απόκριση σε όλα τα κύτταρα που μελετήθηκαν, όπως παρατηρήσαμε παρόμοια συνδυαστικές επιδράσεις στην JAK αναστολής /STAT με απώλεια της δραστικότητας κινάσης εξαρτώμενης από κυκλίνη σε AML, του μαστού, του γαστρεντερικού στρωματικά, του παγκρέατος και του προστάτη τύπων όγκων.

Ganetespib έδειξε επίσης ισχυρή

in vivo

δραστηριότητα. Σε ποντίκια με καθιερωμένα MV4-11 (STAT5 γνώμονα) ξενομοσχεύματα, εβδομαδιαία χορήγηση του ganetespib αναστέλλει σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου σε ένα δοσο-εξαρτώμενο τρόπο. Επιπλέον, ένα καθημερινό πρόγραμμα δοσολόγησης ganetespib ήταν επίσης ιδιαίτερα αποτελεσματική και οδήγησε σε σημαντική υποχώρηση του όγκου κατά τη διάρκεια της χορήγησης του φαρμάκου. Σε αυτό το μοντέλο, η ανάπτυξη του όγκου επανεμφανίζεται περίπου μία εβδομάδα μετά την φαρμακευτική αγωγή διεκόπη (για την υψηλή δόση, 1 χ /εβδομάδα κοόρτη). Είναι σημαντικό, φαρμακοδυναμικές ανάλυσή μας έδειξε ότι αυτές οι απαντήσεις όγκου συσχετίζεται με το βαθμό και τη διάρκεια της STAT5 και Cdk1 απώλεια πρωτεΐνης που προκαλείται από τις ποικίλες δοσολογικά σχήματα. Η στενή σύνδεση των STAT5 ρύθμιση προς τα κάτω με την αναστολή της ανάπτυξης του όγκου έξι ώρες μετά τη χορήγηση του φαρμάκου είτε σε δόση υποδεικνύει την γρήγορη ανταπόκριση αυτού του μονοπατιού σηματοδότησης για τη χορήγηση του φαρμάκου. Στη δόση των 150 mg /kg, σηματοδότηση STAT5, αλλά όχι Cdk1 έκφραση, επιστρέφεται από έξι ημέρες. Η παρατεταμένη απώλεια Cdk1 και άλλων πρωτεϊνών του κυτταρικού κύκλου διατηρεί προφανώς τη σύλληψη κυτταρικού κύκλου και εμποδίζει την ανάπτυξη από την επανάληψη μεταξύ των δόσεων στο εβδομαδιαίο πρόγραμμα, ακόμα και με την παρουσία της δραστηριότητας STAT5 νέου αναδυόμενη. Ομοίως, η έκφραση Cdk1 κατεστάλη πλέον σε σύγκριση με STAT5 στη δόση των 25 mg /kg, και είναι πιθανό να εξηγήσει την ισχυρή δραστικότητα του ganetespib στην συχνότερη 5 αγωγή × /εβδομάδα. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν έντονα ότι η χορήγηση ganetespib σε κάθε πρόγραμμα ήταν επαρκής για την κατάργηση δύο σήματα επιβίωσης και ανάπτυξης των κυττάρων αρκετό καιρό για να αποτρέψει την ανάπτυξη του όγκου. Επειδή ganetespib πιθανώς οδηγεί στην απώλεια του ακόμη περισσότερες πρωτεΐνες πελάτη, ισχυρή αντικαρκινική δραστηριότητα του πιθανότατα αντικατοπτρίζει συνδυασμένη επίδραση της επί αυτών των επιπλέον πρωτεϊνών στόχων, καθώς και.

Σε ένα σύστημα που μιμείται με μεγαλύτερη ακρίβεια την παθολογία των λευχαιμικών ασθενειών, ο αποτελεσματικότητα του ganetespib αξιολογήθηκε επίσης σε ένα μοντέλο διαδίδονται ασθένεια χρησιμοποιώντας HEL92.1.7 κύτταρα. Ganetespib αυξημένη αποτελεσματικά επιβίωση σε αυτό το ορθοτοπικό μοντέλο, περισσότερο από τον διπλασιασμό του μέσου χρόνου επιβίωσης των ποντικών. Η παρατεταμένη επιβίωση συσχετίστηκε με δραματική μείωση του φορτίου του όγκου στον μυελό των οστών, όπως αποδεικνύεται από την σημαντικά μειωμένη διήθηση των ανθρώπινων λευχαιμικών κυττάρων και μειωμένη σπονδυλικής στήλης μεταστάσεις. Συλλογικά, αυτά τα δεδομένα είναι συνεπή με άμεσο αποτέλεσμα ganetespib για λευχαιμικών ανάπτυξη των κυττάρων

in vivo

και καταδεικνύουν την πιθανή θεραπευτική χρησιμότητα αυτής της ένωσης για JAK2

κακοήθειες V617F-οδηγείται.

Η αιτιώδης σχέση μεταξύ συστατική δραστικότητα JAK2 και νεοπλασία έχει οδηγήσει στην ανάπτυξη μιας ποικιλίας ισχυρός και εκλεκτικός αναστολείς μικρού μορίου JAK2 [46].