Αφηρημένο

Σκοπός

Για να εκτιμηθεί κατά πόσον χρόνο T

1 χαλάρωση όγκοι μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την εκτίμηση της ανταπόκρισης σε bevacizumab αντι-αγγειογενετική θεραπεία. Διαδικασίες: 12 θηλυκών γυμνών ποντικών που φέρουν υποδόρια SKOV3ip1-LC όγκους των ωοθηκών χορηγήθηκαν bevacizumab (6.25ug /g, η = 6) ή PBS (έλεγχος, η = 6) θεραπεία δύο φορές την εβδομάδα για δύο εβδομάδες. Τ

1 χάρτες των όγκων παρήχθησαν πριν από δύο ημέρες, και 2 εβδομάδες μετά την έναρξη της θεραπείας. Το βάρος του όγκου εκτιμήθηκε με MR και στη νεκροψία. Ιστολογία για πυκνότητα μικροαγγείων, τον πολλαπλασιασμό και την απόπτωση διεξήχθη

Αποτελέσματα

θεραπεία Bevacizumab οδήγησε σε αναστολή της ανάπτυξης του όγκου. (Ρ & lt? 0,04, η = 6), επιβεβαιώνοντας θεραπευτική αποτελεσματικότητα. φορές Tumor T

1 χαλάρωση αυξήθηκε στους ποντικούς που έλαβαν bevacizumab 2 ημέρες και 2 εβδομάδες μετά την έναρξη της θεραπείας (ρ & lt? 0,05, η = 6). μικροαγγειακή πυκνότητα μειώθηκε 59% και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (Ki67 +) μειώθηκε κατά 50% στην ομάδα της bevacizumab θεραπεία (p & lt? 0.001, n = 6), αλλά όχι απόπτωση

Συμπεράσματα

Τα ευρήματα δείχνουν ότι. αυξημένο όγκο χρόνο T

1 χαλάρωση σχετίζεται με την απόκριση σε bevacizumab θεραπεία στο μοντέλο του καρκίνου των ωοθηκών και θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως μια πρώιμη ένδειξη της ανταπόκρισης

Παράθεση:. Ravoori MK, Nishimura M, Singh SP, Lu C, Han L, Hobbs BP, et al. (2015) Tumor Τ

1 Χαλάρωση χρόνος για την εκτίμηση Response to Bevacizumab αντι-αγγειογενετική θεραπεία σε ένα ποντίκι καρκίνου των ωοθηκών μοντέλο. PLoS ONE 10 (6): e0131095. doi: 10.1371 /journal.pone.0131095

Επιμέλεια: Χρύσω Κάνθου, Πανεπιστήμιο του Σέφιλντ, Ηνωμένο Βασίλειο

Ελήφθη: 18 του Ιούλη 2014? Αποδεκτές: 28 Μαΐου, 2015? Δημοσιεύθηκε: 22, Ιουνίου του 2015

Copyright: © 2015 Ravoori et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το NIH (CA109298, CA159042, P50CA083639, U54CA151668, CA016672). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η αγγειογένεση είναι η διαδικασία της ανάπτυξης νέων αιμοφόρων αγγείων από προϋπάρχοντα αγγεία και είναι ζωτικής σημασίας για την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων. Αγγειογονικά αιμοφόρα τείνουν να είναι ανώμαλη, για παράδειγμα, έχουν ετερογενή και αποδιοργανωμένη δομή [1] και αυξημένη διαπερατότητα. Η διαδικασία ρυθμίζεται από την ισορροπία των προ-αγγειογόνος και αντιαγγειογόνο παράγοντες, η οποία, κατά τον διακόπτη των κυττάρων του όγκου σε ένα αγγειογόνο φαινότυπο, οδηγεί σε ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου. Η λογική του αντι-αγγειογενετική θεραπεία βασίζεται στην ιδέα ότι ομαλοποίηση της αγγείωσης του όγκου, το κλάδεμα των παθολογικών αιμοφόρων, και απόφραξη των νέων αγγειογένεσης προκαλεί σταθεροποίηση του όγκου [2,3]. Ο αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) οικογένεια πρωτεϊνών και υποδοχέων παίζουν ρόλους κλειδιά σε αυτή τη διαδικασία.

Bevacizumab (Genentech, Inc., South San Francisco, CA) είναι ένα εξανθρωπισμένο αντίσωμα αντι-VEGF μονοκλωνικό IgG1 που αναστέλλει η οδός VEGF. Ήταν η πρώτη εγκριθεί από την U.S Food and Drug Administration (FDA) το 2004 για τη θεραπεία του προχωρημένου καρκίνου του παχέος εντέρου σε συνδυασμό κλασική χημειοθεραπεία. Στη συνέχεια, είχε εγκριθεί για τη θεραπεία του προχωρημένου μη μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα, καρκίνο του νεφρού και το γλοιοβλάστωμα [4-12].

Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η πιο θανατηφόρα μεταξύ γυναικολογικών κακοηθειών και θεραπειών πέραν χειρουργική επέμβαση δεν είναι πολύ αποτελεσματικά . Θεραπείες που στοχεύουν στο στρώμα, όπως αναστολείς της αγγειογένεσης, αντιπροσωπεύουν νέες προσεγγίσεις. Στον καρκίνο των ωοθηκών, έχουν προοπτικές κλινικές δοκιμές έχουν διεξαχθεί χρησιμοποιώντας Bevacizumab [13-16]. Μεταξύ αυτών, η μεγαλύτερη δίκη μοναδικός παράγοντας, Γυναικολογικής Ογκολογίας του Ομίλου (GOG) 170D δοκιμή, βρήκε ένα ποσοστό ανταπόκρισης 21% σε ασθενείς με υποτροπιάζοντα καρκίνο των ωοθηκών? και 40% των ασθενών ήταν η ελεύθερη εξέλιξης σε 6 μήνες [13]. Πρόβλεψη απάντηση θα ήταν η επιλογή βοηθός του ασθενή για την αποτελεσματικότητα και να αποφευχθεί η ανώφελη θεραπεία και τις επιπλοκές της. Ο μηχανισμός της bevacizumab είναι να δεσμεύσει κυκλοφορούν VEGF, η οποία αναστέλλει τη δέσμευση της στους υποδοχείς του στα ενδοθηλιακά κύτταρα, με τον τρόπο αυτό, μεταβάλλουν τη λειτουργία και την ανάπτυξή τους. Οι λειτουργικές αλλαγές όπως μειωμένη διαπερατότητα των τριχοειδών και μείωση μορφολογικές σε μικρο-αγγειακή αριθμός πρέπει να έχει ως αποτέλεσμα αλλαγμένη χαρακτηριστικά ιστό, όπως σταθερά χρόνου χαλάρωσης spin-πλέγματος (T

1). Μαγνητική τομογραφία (MRI) παρέχει εξαιρετική ανάλυση εικόνας και την αντίθεση χωρίς ιοντίζουσες ακτινοβολίες. Βασίζεται στη μέτρηση της χωρικής κατανομής των πυρήνων υδρογόνου, όπως σταθμίζεται με διεργασίες χαλάρωσης που βασίζονται στις τοπικές και μοριακό περιβάλλον τους σε ένα μαγνητικό πεδίο. Τ

1 χαρακτηρίζει το ποσοστό απόδοσης του διαμήκους σήματος σε ισορροπία. Οι Τ

1-σταθμισμένη εικόνες θεωρούνται συνήθως κλινικά, αλλά συνήθως δεν λαμβάνονται ποσοτικά. Στην εργασία αυτή, χρησιμοποιούμε ποσοτική Τ

1 αξιολόγηση. Οι ιστοί έχουν χαρακτηριστικές σταθερές χρόνου χαλαρώσεως που μπορεί να μεταβληθεί ή φυσιολογικώς από την ασθένεια [17-19]. Έτσι, η θεραπεία έχει επίσης τη δυνατότητα να μεταβάλλει Τ

1. Χρησιμοποιώντας Τ

1 για την πρόβλεψη της ανταπόκρισης στην αγγειογενετική θεραπεία είναι υπό έρευνα [20, 21]. Είτε Τ

1 φορές χαλάρωση των όγκων μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την εκτίμηση της ανταπόκρισης στην αγγειογενετική θεραπεία με bevacizumab δεν είναι γνωστό για τον καρκίνο των ωοθηκών. Έχουμε αξιολογηθεί κατά πόσον η Τ

1-αξία των όγκων θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για την εκτίμηση της ανταπόκρισης στη bevacizumab αντι-αγγειογενετική θεραπεία σε ένα ανθρώπινο μοντέλο ξενομοσχεύματος καρκίνου των ωοθηκών.

Υλικό και Μέθοδοι

καλλιέργειας κυττάρων

Η κυτταρική σειρά καρκίνου των ωοθηκών SKOV3ip1-LC που προέρχεται από αδενοκαρκίνωμα ωοθηκών καλλιεργήθηκε σε RPMI-1640 συμπληρωμένο με 10% FBS και αντιβιοτικά (50 μg /ml θειική γενταμυκίνη, Cellglo, Medlatech, Inc. Manassas νΑ) στους 37 ° C σε ατμόσφαιρα διοξειδίου του άνθρακα 5%.

Ζώα

Γυναίκα αθυμικά γυμνά ποντίκια (NCr-ηυ) αγοράστηκαν από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Frederick Cancer Research και το Κέντρο Ανάπτυξης (Frederick, MD ) και διατηρήθηκε σε συγκεκριμένες συνθήκες χωρίς παθογόνα. Τα ζώα φροντίζονται σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές που ορίζονται από την Αμερικανική Ένωση για τη Διαπίστευση του Εργαστηρίου Φροντίδα Ζώων και την πολιτική των ΗΠΑ Δημόσιας Υπηρεσίας Υγείας σχετικά με την ανθρώπινη φροντίδα και χρήση των πειραματόζωων. Όλες οι μελέτες του ποντικιού εγκρίθηκαν και εποπτεύεται από το Πανεπιστήμιο του Τέξας-ΜΌ. Επιτροπή Anderson Θεσμικών Ζωικά Φροντίδα και Χρήση (πρωτόκολλο 01-12-01331). Το πρωτόκολλο περιελάμβανε τη θυσία των ζώων που είναι ετοιμοθάνατα ή που έχουν υπερβολική επιβάρυνση του όγκου.

1×10

6 κύτταρα υποδόρια ένεση στο 12 γυναικείο γυμνό ποντίκια στο πλευρό κοντά στη σπονδυλική στήλη για να μετριάσει την κίνηση στις επόμενες MR. Δύο εβδομάδες αργότερα, MR απεικόνιση διεξήχθη για να αξιολογηθεί το μέγεθος του όγκου και για να ληφθούν Τ

1 χαρτογραφεί προ-θεραπεία. Στη συνέχεια, τα ζώα διαιρέθηκαν τυχαία σε δύο ομάδες των έξι εκάστη. Η ομάδα αγωγής έλαβε ενδοπεριτοναϊκή ένεση bevacizumab (6.25ug /g σε 200 μΐ ορού ρυθμισμένου με φωσφορικά, PBS) δύο φορές την εβδομάδα για δύο εβδομάδες. Η ομάδα ελέγχου έλαβε ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις PBS με το ίδιο χρονοδιάγραμμα. MR απεικόνιση επίσης πραγματοποιήθηκε δύο ημέρες και δύο εβδομάδες μετά την έναρξη της θεραπείας. Δύο εβδομάδες μετά την έναρξη της θεραπείας, τα ποντίκια θυσιάστηκαν, το βάρος του όγκου καταγράφηκε, και ιστός διαιρείται για στερέωση με φορμαλίνη ή καταψύχθηκαν σε βέλτιστη θερμοκρασία κοπής μέσα (OCT).

Μαγνητική Τομογραφία

απεικόνιση MR εκτελέστηκε προ-θεραπεία έπειτα από δύο ημέρες και δύο εβδομάδες μετά την αρχική θεραπεία. Όλες οι μελέτες διεξήχθησαν MR χρησιμοποιώντας 4.7T σαρωτή (Bruker Biospec, 47/40 USR, Bruker Biospin, Billerica, ΜΑ) με ένα ένθετο κλίση 60 mm και αντηχείο όγκο με εσωτερική διάμετρο 35 mm. Τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν με 2% ισοφλουράνιο και τοποθετήθηκε κεφάλι πρώτα και επιρρεπής σε ένα έλκηθρο θέσης. Ορθογώνια σαρώνει προσκόπων 3-αεροπλάνο αρχικά αποκτήθηκαν για να επιβεβαιώσετε την τοποθέτηση των ζώων. τοποθέτηση των ζώων και τη θέση του όγκου επιβεβαιώθηκαν χρησιμοποιώντας αξονικές και στεφανιαίες εικόνες T2-weighted (επανάληψη χρόνος = 2750 ms, αποτελεσματική χρόνος ηχούς (ΤΕ) = 50 ms, η ECHO τρένο = 8? οπτικό πεδίο (FOV) = 4 εκατοστά x 3 εκατοστά, πάχος τομής = 1 mm, που μήτρα εικόνα = 128 x128, αριθμός μέσων τιμών σήματος = 2). Ποσοτική Τ διεξήχθη

1 αξιολόγηση. Μια γρήγορη ακολουθία κορεσμού ανάκτησης spin-echo (TR = 110-10,000 ms [110ms, 200ms, 400ms, 600ms, 1,000ms, 2,000ms, 4,000ms, 6,000ms, 10,000ms]? ΤΕ = 50 ms? Echo τρένο = 8 ? οπτικό πεδίο (FOV) = 4 εκατοστά x 3 εκατοστά? Image μήτρας = 128 x128? αριθμός των μέσων όρων σημάτων = 1) χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση της Τ

1 του ιστού του όγκου χρησιμοποιώντας τις περιοχές ενδιαφέροντος (ROI του) που περιλαμβάνει το σύνολο του όγκου. Τ

2-σταθμισμένες εικόνες χρησιμοποιούνται για την ταυτοποίηση βοηθός των περιθωρίων όγκου. Paravision έκδοση 4 χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό του Τ τιμές

1 χαλάρωσης με γεωμετρική πρόοδο την τοποθέτηση του σήματος ως συνάρτηση του TR. Το χέρι που τις περιοχές ενδιαφέροντος σε κάθε εικόνα που περιέχουν όγκο Τ2 χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό του βάρους του όγκου, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [22]. Εν συντομία, με τη χρήση του λογισμικού J εικόνας (National Institutes of Health, USA), σε κάθε εικόνα που περιέχει έναν όγκο, η περιφέρεια της μάζας εντοπίστηκε και η περιοχή της σχεδιασμένης περιοχής υπολογίστηκε. Οι περιοχές στη συνέχεια πολλαπλασιάζεται με το πάχος τομής συν skip για να ληφθεί ο όγκος του όγκου σε κάθε φέτα και αυτοί οι όγκοι που προστίθενται. Εάν υποτεθεί ότι η πυκνότητα των ιστών του 1 g /ml, για να αντλήσει το βάρος, όγκο σε mm

3 πολλαπλασιάστηκε με 0.001 g ιστού /mm

3.

Η ανοσοϊστοχημεία

Ανοσοϊστοχημική χρώση για Ki67 και CD31 έγινε. Για τη χρώση Ki67, δείγματα ιστού εγκλεισμένα σε παραφίνη σταθεροποιημένα με φορμαλίνη κόπηκαν σε τομές 5-μm. Μετά αποπαραφίνωση, ανάκτηση αντιγόνου διεξήχθη με θέρμανση του ολισθητήρα σε μία βραστήρα ατμού για 10 λεπτά σε 0.2 Μ Tris ρυθμιστικό, ρΗ 9.0. CD31 βάφτηκε [23] χρησιμοποιώντας κατεψυγμένο διαφάνειες. Η ενδογενής υπεροξείδιο μπλοκαρίστηκε με 3% Η

2O

2 σε μεθανόλη για 12 λεπτά. Μετά μπλοκ πρωτεΐνη με φυσιολογικό άλογο και ορό κατσίκας, slides επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα σε Κί67 (Thermo επιστημονικές, Fremont, CA) ή CD31 (PECAM-1, 1: 800 IgG αρουραίου, Pharmingen, San Diego, CA) σε διάλυμα αποκλεισμού επί μία νύκτα στους 4 ° C. Μετά από πλύση με PBS τρεις φορές, η HRP-συζευγμένο δευτερεύον αντίσωμα αντι-ποντικού (ϋΑΚΟ, Carpinteria, CA) σε διάλυμα αποκλεισμού προστέθηκε για μία ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Τα πλακίδια χρωματίστηκαν με υπόστρωμα ϋΑΒ (Phoenix Biotechnologies, Huntsville, AL) και αντίθετα με Gils Νο 3 αιματοξυλίνη (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ). Για να ποσοτικοποιηθεί η πυκνότητα μικρο-δοχείο (MVD), οι μικρο-σκάφη εντός πέντε επιλέγονται τυχαία 0.159 χιλ

2 πεδία σε 100Χ μετρήθηκαν. Μια ενιαία μικρο-δοχείο ορίστηκε ως ένα διακριτό σύμπλεγμα ή τουλάχιστον τρία κύτταρα βάφονται θετικά για CD31. Η παρουσία ενός αυλού απαιτήθηκε για βαθμολόγηση ως μικρο-αγγείο. Ο δείκτης σήμανσης Κί67 προσδιορίστηκε μετρώντας τουλάχιστον 1.000 κύτταρα του όγκου και το δείκτης υπολογίστηκε ως ποσοστό. δοκιμασία TUNEL εκτελέστηκε όπως περιγράφεται [23].

Η στατιστική ανάλυση

Για τη σύγκριση των ομάδων, 2 tailed t-τεστ πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό υπολογιστικών φύλλων (Microsoft Office Excel 2003, Microsoft, Seattle, WA) . Ελαχίστων τετραγώνων γραμμική παλινδρόμηση χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση της έκτασης της γραμμική εξάρτηση μεταξύ MR προέρχονται βάρος του όγκου και αποκόπηκε βάρος του όγκου. Επαναλαμβανόμενες μετρήσεις ΑΝΟνΑ χρησιμοποιήθηκαν για να συγκριθεί η έκταση της σχετικής μεταβολής σε Τ

1 χρόνος χαλάρωσης (προ-επεξεργασία για την παρακολούθηση σαρώσεις σε 48 ώρες και 2 εβδομάδες) μεταξύ μπεβασιζουμάμπη και ελέγχου ποντικούς. Τυχαία παρακολουθήσεις χρησιμοποιήθηκαν για να ρυθμίσετε το συμπέρασμα για την ετερογένεια μεταξύ ποντίκι από αντιπροσωπεύοντας αλληλεξάρτηση μεταξύ των τριών επαναλαμβανόμενες σαρώσεις ενδο-ποντίκι. Δύο όψεων Wald τεστ χρησιμοποιώντας την ισχυρή μέθοδο εκτίμησης που περιγράφεται από Koller και Stahel [24] εφαρμόστηκαν σε σταθερές επιδράσεις που χαρακτηρίζουν τη μέση διαφορά μεταξύ Bevacizumab και ελέγχου ως προς την έκταση της σχετικής αλλαγής σε Τ

1 χρόνος χαλάρωσης σε κάθε ένα από τα δύο παρακολούθηση σαρώσεις. Η δοκιμή αυτή δεν αναλαμβάνει μία κατανομή Gauss που επιτρέπει την αξιολόγηση των δεδομένων, ακόμη και με μη-φυσιολογική, ασύμμετρη κατανομή. Bonferroni διόρθωση χρησιμοποιείται για τον έλεγχο του ποσοστού σφάλματος τύπου Ι familywise στο επίπεδο 0,05 σημασίας μεταξύ των δύο δοκιμών για τις διαφορές στην έκταση της σχετικής μεταβολής σε κάθε σάρωση παρακολούθηση, επάγοντας ένα όριο σημαντικότητας 0.025 για κάθε δοκιμή. ANOVA υλοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το στατιστικό λογισμικό Ε (R Ανάπτυξης πυρήνα της ομάδας, https://www.r-project.org) έκδοση 3.0 χρησιμοποιώντας το

robustlmm

πακέτο.

Αποτελέσματα

όγκων μέγεθος

Είμαστε αξιολόγησε την επίδραση της bevacizumab στην ανάπτυξη του όγκου. θεραπεία Bevacizumab ανάπτυξη ανέστειλε όγκου σε σύγκριση με τον έλεγχο, όπως φαίνεται από τον κ απεικόνισης (Σχήμα 1). Πριν από τη θεραπεία, δεν υπήρχε στατιστικά σημαντική διαφορά στο βάρος του όγκου μεταξύ των δύο ομάδων, όπως μετράται στις εικόνες MR. Δύο ημέρες και δύο εβδομάδες μετά τη θεραπεία, οι ποντικοί που έλαβαν θεραπεία με bevacizumab είχαν σημαντικά μικρότερους όγκους από ό, τι τα ποντίκια ελέγχου (ρ & lt? 0,04, η = 6) τόσο in vivo μέτρηση MR και ex vivo σε νεκροψία (Σχήμα 2). Δεν παρατηρήθηκε διαφορά στο βάρος των όγκων στις ομάδες θεραπείας προ-θεραπεία έναντι 2 ημέρες ή 2 εβδομάδες μετά την έναρξη της θεραπείας με bevacizumab. Τα βάρη των όγκων που προέρχονται από την in vivo απεικόνιση MR συσχετίζεται πολύ με τα βάρη του αποκόπηκε όγκων (R

2 = 0,99, ρ & lt? 0,001, η = 12, Σχήμα 3).

Αντιπροσωπευτικά αξονικές εικόνες MR των ποντικών προ -therapy (Α, Β) ή δύο εβδομάδες μετά την έναρξη της θεραπείας (C, D) με όχημα (A, C) ή bevacizumab (Β, D). χάρτες Αξονική T1 των ίδιων όγκων (Ε, F, G, H). Εκπρόσωπος αξονικές εικόνες MR των ποντικών προ-θεραπεία (E, F) ή δύο εβδομάδες μετά την έναρξη της θεραπείας (G, H) με όχημα (Ε, Ζ) ή bevacizumab (F, H).

Η

Το βάρος του όγκου που προέρχονται από τις εικόνες MR πριν και δύο εβδομάδες μετά την έναρξη της θεραπείας, και, με νεκροψία δύο εβδομάδες μετά την έναρξη της θεραπείας. *, P & lt? .05. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν την τυπική απόκλιση.

Η

Τ

1 αξίες

Το T

1 χρόνος χαλάρωσης ήταν σημαντικά αυξημένη στην ομάδα αγωγής bevacizumab σε σύγκριση με τους μάρτυρες, τόσο δύο ημέρες (2302 ± 567, μέση ± τυπική απόκλιση, vs 1729 ± 209) και δύο εβδομάδες (2146 ± 276 έναντι 1847 ± 112) μετά την έναρξη της θεραπείας (ρ & lt? 0,05, η = 6, Σχήμα 4). Υπήρχε διακύμανση των

1 τιμές Τ (S1 σχήμα)? Ως εκ τούτου, για την προσαρμογή για πιθανούς ασυμμετρίας σε αυτές τις συγκρίσεις, δύο όψεων Wald δοκιμές χρησιμοποιώντας την ισχυρή μέθοδο εκτίμησης που περιγράφεται από Koller και Stahel [24] εφαρμόστηκαν. Σημαντικές διαφορές ως προς την έκταση της Τ

1 χαλάρωσης τροποποίηση φορά ήταν εμφανή μεταξύ bevacizumab και να ελέγχουν ομάδες σε κάθε σάρωση παρακολούθηση μετά την προσαρμογή για την πολλαπλότητα. Στατιστικά, στιβαρό συμπέρασμα εκτιμά ότι η έκταση της σχετικής μεταβολής στο χρόνο Τ

1 χαλάρωσης ήταν 16,1% (p≤0.011) μεγαλύτερο κατά μέσο όρο για ποντικούς που υπέστησαν αγωγή bevacizumab σε σύγκριση με τους ποντικούς ελέγχου μετά από 48 ώρες. Το αποτέλεσμα διατηρείται στατιστική σημαντικότητα μετά από 2 εβδομάδες, όπου ο χρόνος Τ

1 χαλάρωσης αυξήθηκε κατά 14,5% (p-value≤0.021) κατά μέσο όρο για τα ποντίκια έλαβαν bevacizumab. Πριν από τη θεραπεία, ο χρόνος Τ

1 χαλάρωσης ήταν 1877 ± 60 για τους όγκους από τα ποντίκια που στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε θεραπεία με bevacizumab. Σε σύγκριση, ο Τ

1 τιμή δεν μεταβλήθηκε από τα επίπεδα προ της θεραπείας (1875 ± 57) στην ομάδα ελέγχου, παρά την αύξηση του μεγέθους του όγκου.

τιμές Τ1 όγκων προ 48 ωρών, και δύο εβδομάδες μετά τη θεραπεία. *, P & lt? .05. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν την τυπική απόκλιση.

Η

Ιστολογίας

Μέση πυκνότητα σκάφος, τον πολλαπλασιασμό και την απόπτωση αξιολογήθηκαν ως ιστολογική βιοδείκτες των επιπτώσεων της bevacizumab σε δύο εβδομάδες μετά την έναρξη της θεραπείας. χρώση CD31 χρησιμοποιήθηκε για να σηματοδοτήσει σκάφη. Η μέση μέση πυκνότητα αγγείου μειώθηκε κατά 59% στην ομάδα bevacizumab θεραπεία σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (ρ & lt? 0.001, η = 6, Σχήμα 5Α). Κί67 χρησιμοποιήθηκε ως ένας δείκτης του κυτταρικού πολλαπλασιασμού. δείκτης σήμανσης Κί67 μειώθηκε κατά 50% στην ομάδα θεραπείας bevacizumab (ρ & lt? 0,0001, Σχήμα 5Β) συγκριτικά με την ομάδα ελέγχου. Από την άλλη πλευρά, αποπτωτικό δείκτη, αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας χρώση TUNEL, δεν ήταν διαφορετική μεταξύ των δύο ομάδων (Εικ 5C).

Α) Η ανοσοϊστοχημική χρώση για CD31 (αριστερά) και την πυκνότητα μικροαγγείων (δεξιά). Β) Η ανοσοϊστοχημική χρώση για Ki67 (αριστερά) και δείκτης σήμανσης Ki67 (δεξιά). χρώση C) TUNEL (αριστερά) και αποπτωτικό δείκτη (δεξιά). Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν την τυπική απόκλιση.

Η

Συζήτηση

Anti-αγγειογενετική θεραπεία με bevacizumab αποτελέσματα στην ανταπόκριση στη θεραπεία σε ένα υποσύνολο των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών. Οι δείκτες ανταπόκρισης που απαιτούνται για να αναλύσει αυτές τις ασθενείς, οι οποίοι μπορεί να ωφεληθούν από τη θεραπεία έναντι μάταιη θεραπεία για τους ασθενείς οι οποίοι θα είναι σε κίνδυνο επιπλοκών, χωρίς θεραπευτικό όφελος. Αντι-αγγειογόνες θεραπεία μεταβάλλει τη λειτουργία και τη μορφολογία των αιμοφόρων αγγείων εντός του ιστού του όγκου. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η αυξημένη Τ

1 φορά χαλάρωση του ιστού του όγκου παρέχει μια πρώιμη ένδειξη της ανταπόκρισης στη bevacizumab αντι-αγγειογενετική θεραπεία. Αυτή είναι η πρώτη έκθεση που γνωρίζουμε ότι αξιολογεί Τ

1 χρόνο χαλάρωσης στο πλαίσιο της αντι-αγγειογενετική θεραπεία των ωοθηκών όγκου.

Η ιστολογική εξέταση του ιστού του όγκου έδειξε μείωση στην μικροαγγειακή πυκνότητα και τον πολλαπλασιασμό της bevacizumab ομάδα θεραπείας. Η ανάπτυξη του όγκου αναστέλλεται επίσης. Αυτά τα ευρήματα είναι συνεπή με αλλοιωμένη αρχιτεκτονική του όγκου και λειτουργική αλλαγή στην ανάπτυξη του όγκου. Αντίθετα, ο ρυθμός της απόπτωσης δεν άλλαξε. Αυτά αποτέλεσμα είναι σύμφωνο με τα δεδομένα της Rapisarda et al. [25], ο οποίος ανέφερε ότι η μικροαγγειακή πυκνότητα μειώθηκε και η έκφραση υποξία επαγώγιμου παράγοντα-1 (HIF-1) εξαρτάται από το γονίδιο αυξήθηκε μετά τη θεραπεία των U251 (γλοιοβλαστώματος) όγκους με bevacizumab, αλλά απόπτωση δεν προκλήθηκε.

Ανώμαλη αίμα και λεμφαγγείων, συμπεριλαμβανομένης της κακής εκλεκτικότητα διαπερατότητας οφείλεται στην υψηλή αγγειακή διαπερατότητα αποτέλεσμα σε αυξημένη πίεση ενδιάμεσου υγρού νεοπλασίας (IFP) [26]. Αντι-αγγειογόνες αποτελέσματα της θεραπείας σε μια μείωση στην πυκνότητα των μικροαγγείων, αγγειακή διαπερατότητα και την πίεση διάμεσο υγρό (IFP) [27]. Σε ασθενείς με καρκίνο του ορθού, η συνολική μέση IFP μειώθηκε 15,0 mm Hg μετά από θεραπεία με bevacizumab [28]. Αυτό μπορεί να επηρεάσει υγρό ευαίσθητο παράμετρος Τ 1 [26] από το IFP σχετίζεται με ρευστό στον εξωκυτταρικό-εξωαγγειακό χώρο.

θεραπεία αντι-αγγειογένεσης έχει αξιολογηθεί σε έναν αριθμό κλινικών δοκιμών με χρήση δυναμικής αντίθεσης ενισχυμένης

MR απεικόνιση και αυτά έχουν καταδείξει συνήθως μείωση της προς τα εμπρός κατεύθυνσης συντελεστή μεταφοράς, k

trans, και την αρχική περιοχή κάτω από την καμπύλη, iAUC, και σε ορισμένες μελέτες, η μονόδρομη εισροή σταθερά Κ

i, αλλά λίγοι έχουν συνδεθεί να αυξηθεί η ελεύθερη εξέλιξης ή τη συνολική επιβίωση [29]. Για bevacizumab, μειώθηκε k

trans έχει σημειωθεί [30] και αν και αυτό είναι μια σύνθετη παράμετρο, το εύρημα αυτό υποδηλώνει μειωμένη διαπερατότητα. Αυτό φαίνεται να είναι ένα κοινό εύρημα και έχει επίσης προταθεί σε διάφορα μοντέλα όγκων [31-33].

Έτσι, μπεβασιζουμάμπη θεραπεία έχει αποτελέσματα σε διάφορες αγγειακές παραμέτρους που δομή επίδραση του όγκου και τη συμπεριφορά. Αυτό μπορεί να επηρεάσει τα χαρακτηριστικά απεικόνισης των όγκων. Για παράδειγμα, σε ασθενείς που λαμβάνουν κυτταροτοξική θεραπεία με bevacizumab για 2-3 μήνες, όγκου αλλαγή της μορφολογίας από CT, συμπεριλαμβανομένων ομοιογενές χαμηλή εξασθένηση και αιχμηρά σύνορα του παχέος ηπατικές μεταστάσεις αντιστοιχούσε με μειωμένη υπολειμματική όγκου [34]. MR έχει μεγαλύτερη αντίθεση μαλακών ιστών από τη CT. Οι περισσότεροι όγκοι που περιλαμβάνουν το ήπαρ έχουν μεγαλύτερη T

1 από το φυσιολογικό ήπαρ, έτσι, οι περισσότερες μεταστάσεις εμφανίζονται να είναι χαμηλότερης σήματος σε Τ

1-σταθμισμένη MR. Πρότυπο Τ

1 σταθμισμένη απεικόνισης είναι ποιοτική και μπορεί να επηρεαστεί από μια σειρά παραμέτρων, όπως επιδράσεις που σχετίζονται με το υλικό, τις παραμέτρους φόρτωση του πηνίου και την ακολουθία, εξάλλου, η αντίληψη της αλλαγής εξαρτάται παραθύρων και ισοπέδωση των εικόνων? σε σύγκριση, Τ

1 relaxometry δίνει περισσότερο ποσοτικά αποτελέσματα και μπορεί να οδηγήσει σε βελτίωση της ευαισθησίας στον ιστό βιοχημικές και δομικές αλλαγές με την παθολογία [35]. Τ

1 χαρτογράφηση αξιολογεί ιστό Τ

1 αποτελέσματα, αφαιρώντας μόλυνσης, όπως η πυκνότητα πρωτονίων, Τ

2, και την ευαισθησία του πηνίου που επηρεάζουν πρότυπο Τ

1 σταθμισμένη απεικόνισης [35].

Η διαφορά σε Τ

1 χαλαρώσεως ιστού επιτρέπει τη διαφοροποίηση των διαφορετικών τύπων ιστού. Νόσος ενός ιστού μπορεί να αλλάξει Τ ώρα

1 χαλάρωση, για παράδειγμα, είναι αυξημένη σε ασθενείς με κίρρωση σε σύγκριση με το φυσιολογικό ήπαρ ή χρόνια ηπατίτιδα [36], υποδηλώνοντας ότι η ινωτική αρχιτεκτονικό μεταβολή στο ήπαρ μακραίνει αυτήν την τιμή. Τ

1 ώρα χαλάρωσης έχει χρησιμοποιηθεί σε ασθενείς για την εξαγωγή του περιεχομένου νερού στον εγκέφαλο [19] και την αύξηση της Τ

1 ώρα χαλάρωση βρέθηκε να αντιστοιχεί με αυξημένη οίδημα στο μυοκάρδιο [37], δηλαδή αυξήθηκε ρευστό στην εξωαγγειακό-εξωκυττάριο χώρο. Θεωρητικά, με τη μείωση ενδιάμεση πίεση, η ποσότητα του υγρού στον εξωαγγειακό-εξωκυτταρικό χώρο θα πρέπει να μειώνεται με bevacizumab θεραπεία με αποτέλεσμα την μειωμένη Τ

1 ώρα χαλάρωσης. Ωστόσο, bevacizumab έχει πολλαπλές άλλες επιπτώσεις, όπως το κλάδεμα των πλοίων και εξομάλυνση, και, όπως σημείωσε, μειωμένο πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων. Σημειώσαμε μια αύξηση του χρόνου Τ

1 χαλάρωσης σε δύο ημέρες και δύο εβδομάδες μετά την θεραπεία, γεγονός που υποδηλώνει ότι άλλες επιπτώσεις της bevacizumab στις παραμέτρους του ιστού, όπως στη ροή του αίματος, κυτταροβρίθεια, την αρχιτεκτονική, και λεμφική παροχέτευση μπορεί να συνέβαλε στην αύξηση της Τ

1 χρόνος χαλάρωσης, που συγκλόνισε την θεωρητική μείωση των Τ χρόνο

1 χαλάρωσης που αναμένονται από την αναστολή της αγγειακής διαπερατότητας και μόνο. ​​

Τ

1 χρόνος χαλάρωσης έχει αξιολογηθεί σε προγενέστερες μελέτες του ποντικιού στη ρύθμιση της χημειοθεραπείας. McSheehy et al. αξιολογήθηκαν αρκετές χημειοθεραπευτικά που προκαλούν συρρίκνωση των όγκων και διαπίστωσαν μείωση των Τ

1 χρόνο χαλάρωσης με απόκριση, συμπεριλαμβανομένου και ενός αναστολέα αγγειογένεσης ΡΤΚ /ZK για ποντικού Β16 /όγκους μελανώματος BL6 [38]. Weidensteiner et al. από την ίδια ομάδα διαπίστωσε επίσης μείωση στα Τ

1 ώρα χαλάρωσης σε απόκριση προς έναν αναστολέα mTOR σε όγκους RIF-1 ινοσαρκώματος και μείωση στην Ki67, αλλά δεν σημαίνει πυκνότητα σκάφος [39]. Παλαιότερες μελέτες έχουν σημειωθεί αύξηση ή μείωση του Τ

1 χρόνο χαλάρωσης με τη θεραπεία [40-43]. Οι διαφορές μπορεί να οφείλεται στη θεραπευτική, ζωικό μοντέλο, και διαφορετικές μέθοδοι υπολογισμού Τ

1 ώρα χαλάρωσης. Επιπλέον, η αυξημένη κλασματική όγκου αποτελέσματα περιεκτικότητας σε ύδωρ του πλέον T

1, και αν και οι συσχετισμοί δεν είναι πολύ ισχυρή, νέκρωση μπορεί να οδηγήσει σε μικρότερη Τ

1 πιστεύεται ότι οφείλεται στην απελευθέρωση συμπλοκοποιημένων παραμαγνητικά ιόντα /πρωτεΐνες με την ανάπτυξη του νέκρωση [43,44]. Σημειώσαμε καμία διαφορά στο μέγεθος του όγκου ή χρόνους Τ

1 χαλάρωση μεταξύ επεξεργασμένων και μη επεξεργασμένων ομάδων πριν από τη θεραπεία, και χωρίς θεραπεία, το Τ

1 ώρα χαλάρωση δεν άλλαξε παρά τη διεύρυνση όγκους. Με bevacizumab θεραπεία, η καρκινική ανάπτυξη αναστάλθηκε? και, σε αυτούς τους όγκους, το συντομότερο δύο ημέρες μετά την θεραπεία, Τ

ώρα 1 χαλάρωση αυξήθηκε. Σε δύο εβδομάδες, η ανάπτυξη εξακολουθεί να παρεμποδίζεται σε σύγκριση με την χωρίς ομάδα θεραπείας και Τ χρόνο

1 χαλάρωσης ήταν ακόμη αυξημένη. Μηχανιστικά, η αυξημένη Τ

1 φορά χαλάρωση αντιστοιχεί με μείωση του πολλαπλασιασμού και μειωμένη μέση πυκνότητα σκάφος όπως φαίνεται στο Σχήμα 5, γεγονός που υποδηλώνει ότι περισσότερο εξωκυττάριο εξω-αγγειακό χώρο έγινε διαθέσιμη για ρευστό. Ένας περιορισμός αυτής της εργασίας είναι ότι η εξω-κυτταρικά εξω-αγγειακό χώρο δεν ήταν άμεσα μετρηθεί, ωστόσο, πριν από τις εκθέσεις δείχνουν επίσης ότι η αύξηση της Τ

1 υποδεικνύει αυξημένο εξωκυττάριο όγκο [45]. Ένας πιθανός περιορισμός της παρούσας εργασίας είναι η χρήση των υποδόριων όγκων. Αν και οι ορθοτοπική μοντέλα που χρησιμοποιούνται συνήθως, έτσι είναι υποδόρια μοντέλα [46-49]. Ένα πρόβλημα για την ενδο-κοιλιακή απεικόνιση του ποντικιού του κ είναι ότι είναι επιρρεπής σε τεχνούργημα κίνηση λόγω της αναπνοής. Λόγω των σχετικά μεγάλους χρόνους απόκτησης απαιτούνται για Τ

1 χαρτογράφηση, θελήσαμε να περιορίσει τη δυνατότητα των αντικειμένων κίνησης παρεμβαίνει με Τ

1 υπολογισμό. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιήσαμε ένα υποδόριο μοντέλο όπου ο όγκος μπορεί να τοποθετηθεί κοντά στην σπονδυλική στήλη για τον μετριασμό κίνηση. Οι μέθοδοι για Τ

1 χαρτογράφηση σε κλινικά εφικτό φορές προσεγγίζεται [50].

Στο μέλλον, αυτό δίνει τη δυνατότητα για πολυπαραμετρική απεικόνισης συμπεριλαμβανομένης της δυναμικής απεικόνισης αντίθεση με την αξιολόγηση της αγγειακής διαπερατότητας, διάδοση σταθμισμένη απεικόνισης για την αξιολόγηση μοριακή κίνηση, και Τ

1 χαρτογράφησης για την αξιολόγηση Τ

1-χαλαρότητα για να προβλέψει απόκριση σε αντι-αγγειογενετική θεραπεία. Μέθοδοι για ταυτόχρονο ποσοτικό προσδιορισμό της σχετικής πυκνότητας πρωτονίων, Τ

1, και Τ

2 σε χρονικά πλαίσια προσιτοί για κλινική χρήση [50] προτείνουν τη δυνατότητα της διογκωμένης πολυπαραμετρική ποσοτικών MR, συμπεριλαμβανομένων των Τ

1 μετρήσεις του χρόνου χαλάρωσης, να εφαρμόζεται σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών.

Συμπέρασμα

Τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι η αυξημένη όγκου Τ

1 χρόνο χαλάρωσης συνδέεται με την απάντηση να bevacizumab θεραπεία στο μοντέλο του καρκίνου των ωοθηκών και θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως πρώιμη ένδειξη της ανταπόκρισης.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Εικ. Διαφορά στην τιμή Τ1-χάρτη 2η ημέρα ή την εβδομάδα 2 vs προ-θεραπεία για μεμονωμένους όγκους σε ομάδες θεραπείας από το Σχήμα 4.

doi: 10.1371 /journal.pone.0131095.s001

(ΔΕΘ)