Αφηρημένο

Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα συμβάλλουν στην χημειοαντίσταση όγκου και την επιμονή τους μεταβάλλει την κλινική έκβαση. προηγούμενη μελέτη μας έχει δείξει ότι ο καρκίνος των ωοθηκών μπορεί να ξεκινήσει από τον καρκίνο των ωοθηκών έναρξη κύτταρα (OCIC) χαρακτηρίζεται από το επιφανειακό αντιγόνο CD44 και c-KIT (CD117). Έχει πειραματικά αποδειχθεί ότι ένα microRNA, δηλαδή miR-193a, στοχεύει mRNA c-KIT για την υποβάθμιση και θα μπορούσε να διαδραματίσει καίριο ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου των ωοθηκών. Πώς miR-193a ρυθμίζεται είναι ελάχιστα κατανοητή και η αναδυόμενη εικόνα είναι σύνθετη. Να διαλευκάνουν αυτή την πολυπλοκότητα, προτείνουμε ένα μαθηματικό μοντέλο για να διερευνήσει πώς τα οιστρογόνα μεσολάβηση πάνω ρύθμιση ενός άλλου στόχου του miR-193a, δηλαδή E2F6, μπορεί να μετριάσει τη λειτουργία των miR-193a με δύο τρόπους, ένας από διαγωνισμό του E2F6 και γ -KIT μεταγραφές για miR-193a, και το δεύτερο με πρόσδεση του E2F6 πρωτεΐνης, σε συνδυασμό με ένα σύμπλοκο Polycomb, με τον προαγωγέα του miR-193a να μειορυθμίζουν την μεταγραφή του. Το μοντέλο μας προβλέπει ότι αυτό δικόρυφη ελέγχου αυξάνει την έκφραση του c-KIT και ότι ο δεύτερος τρόπος επιγενετική ρύθμιση απαιτείται για να δημιουργήσει μια συμπεριφορά μεταγωγής σε c-KIT και E2F6 εκφράσεις. Επιπρόσθετη ανάλυση του συνόλου δεδομένων TCGA καρκίνου των ωοθηκών καταδεικνύει ότι οι ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών με χαμηλή έκφραση του ΕΖΗ2, μιας οικογένειας πρωτεϊνών Polycomb-ομάδα, δείχνουν θετική συσχέτιση μεταξύ E2F6 και ο-ΚΙΤ. Εικάζεται ότι η ταυτόχρονη αναστολή ΕΖΗ2 και αντι-οιστρογόνα θεραπεία μπορεί να αποτελέσει μια αποτελεσματική συνδυασμένη θεραπευτική στρατηγική κατά του καρκίνου των ωοθηκών

Παράθεση:. Cheng FHC, Aguda BD, Tsai JC, Kochańczyk Μ, Lin JMJ, Chen GCW, et al. (2014) Ένα μαθηματικό μοντέλο του Bimodal Επιγενετική Έλεγχος του miR-193a σε καρκίνο των ωοθηκών βλαστικά κύτταρα. PLoS ONE 9 (12): e116050. doi: 10.1371 /journal.pone.0116050

Επιμέλεια: David Wai Chan, το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 22 του Σεπτεμβρίου, 2014? Αποδεκτές: 30 Νοεμβρίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 29 Δεκεμβρίου 2014

Copyright: © 2014 Cheng et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη αυτή υποστηρίζεται από τις ερευνητικές επιχορηγήσεις από το Υπουργείο Επιστήμης και Τεχνολογίας, Ταϊβάν (NSC102-2320-B-194-006, NSC102 -2115-M-194-007-MY2, MOST103-2911-Ι-194-504 και MOST103-2320-Β-194-002), Εθνικό Κέντρο Θεωρητικών Επιστημών (NCTS), και το Εθνικό Chung Cheng Πανεπιστήμιο (NCCU Διεπιστημονική Επιστήμη χορηγούν 103-03), την Ταϊβάν. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Συν-συγγραφέας Baltazar Δ Aguda απασχολείται από DiseasePathways LLC. DiseasePathways LLC παρέχεται υποστήριξη με τη μορφή του μισθού για συγγραφέα BDA, αλλά δεν είχε καμία πρόσθετη ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Ο ειδικός ρόλος του συγγραφέα είναι αρθρωτά στην ενότητα «συγγραφέας συνεισφορές»

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Συν-συγγραφέας Baltazar Δ Aguda απασχολείται από DiseasePathways LLC. Δεν υπάρχουν διπλώματα ευρεσιτεχνίας, τα προϊόντα για την ανάπτυξη ή την εμπορία προϊόντων που να δηλώνουν. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η πιο θανατηφόρα γυναικολογική κακοήθεια και η 5η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο μεταξύ των γυναικών [1]. Καθώς ο καρκίνος των ωοθηκών έχει λίγα συμπτώματα νωρίς στην πορεία της, η πλειοψηφία των ασθενών έχουν διαγνωσθεί με όψιμα στάδια (III και IV) της νόσου. Το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών είναι γενικά λιγότερο από 20% για τους ασθενείς με προχωρημένο στάδιο της νόσου, παρά θεραπευτικές προόδους, ενώ ποσοστό επιβίωσης για ασθενείς με σταδίου Ι ή II ασθένεια είναι μεγαλύτερη από 80% για την ίδια περίοδο [2]. Παρόλο που η τρέχουσα χημειοθεραπευτικά επιδείξουν πλήρη ρυθμό απόκρισης περισσότερο από το 90% σε όγκους πρώιμου σταδίου, μόνο ένα ποσοστό μερική ανταπόκριση 20-30% παρατηρείται σε προχωρημένο στάδιο όγκους καθώς και σε υποτροπή όγκων χημειο-ανθεκτικού [3]. Η καλύτερη κατανόηση των μοριακών αλλαγών των ωοθηκών καρκινογένεση μπορεί να οδηγήσει σε καλύτερες θεραπευτικές στρατηγικές για αυτήν την θανάσιμη ασθένεια.

Μια αναδυόμενη υπόθεση δηλώνει ότι ο καρκίνος προέρχεται από ένα μικρό πληθυσμό της αυτο-ανανέωσης του καρκίνου έναρξη κύτταρα (CIC) [4 ]. Αυτές οι CICs πιστεύεται ότι έχουν ογκογόνο δυναμικό και βελτιωμένη αντοχή φαρμάκου εντός ενός όγκου, και είναι σε θέση να ανασυστήσουν αποικίες όγκου

in vivo

. Έχουμε απομονώσει προηγουμένως CICs ωοθηκών (OCICs) από ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών [5]. Αυτά OCICs εμφανίζουν αυξημένη αντίσταση φαρμάκου προς σισπλατίνη και ταξόλη, και χαρακτηρίζονται από την έκφραση αρκετών δεικτών κυτταρικής επιφάνειας, συμπεριλαμβανομένης της c-Kit (CD117, ή υποδοχέα του παράγοντα αρχέγονων κυττάρων). Ωστόσο, ο μηχανισμός για το πώς προκύπτουν OCICs και πώς αυτές οι δείκτες κυτταρικής επιφάνειας είναι μεταγραφικά ελέγχονται δεν είναι πλήρως κατανοητοί.

Οιστρογόνα είναι ένας σημαντικός ρυθμιστής της αύξησης και διαφοροποίησης σε φυσιολογικές ωοθήκες [6] και εμπλέκεται στην ανάπτυξη του καρκίνο των ωοθηκών [7]. Από την άποψη αυτή, μελέτες έχουν διερευνήσει τον κίνδυνο καρκίνου των ωοθηκών σε γυναίκες που χρησιμοποιούν θεραπεία ορμονικής υποκατάστασης (HRT) στην θεραπεία των συμπτωμάτων της εμμηνόπαυσης [8], [9], [10]. Για παράδειγμα, μια μελέτη που περιλαμβάνει ένα εκατομμύριο γυναίκες πρότεινε ότι οι γυναίκες που έλαβαν θεραπεία με HRT συσχετίστηκαν με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου των ωοθηκών [11]. Ωστόσο, ο ρόλος των οιστρογόνων στην ωοθηκική καρκινογένεση δεν είναι πλήρως κατανοητός.

Επιγενετική τροποποιήσεις στο γονιδίωμα διαδραματίζουν καίριο ρόλο στη μεταγραφική έλεγχο και την παρεκκλίνουσα επιγενετική τροποποίηση θεωρείται πλέον ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα του καρκίνου [12]. Επιγενετικές τροποποιήσεις είναι υπεύθυνες για τον έλεγχο των γονιδίων εκφράσεις που επιτρέπουν για συγκεκριμένες φαινοτύπους [13], [14]. Μεταξύ αυτών, μεθυλίωση του DNA είναι ένα από τα πιο χαρακτηρισμένο επιγενετικών τροποποίηση η οποία λαμβάνει χώρα σε θέση 5 ‘από κυτοσίνη σε δινουκλεοτίδια CpG με αποτέλεσμα τον σχηματισμό του 5-μεθυλκυτοσίνη. μεθυλίωσης του DNA η οποία εμφανίζεται στις συστάδες των CpG θέσεων (που ονομάζονται νησίδες CpG) στην περιοχή προαγωγού ενός ογκοκατασταλτικού γονιδίου καταλήγει σε μεταγραφική καταστολή και ογκογένεση, σε ορισμένες περιπτώσεις [15]. Επίσης θεωρείται ως κρίσιμο ρυθμιστές της γονιδιακής έκφρασης, οι Mirs αναφέρονται ως ογκοκατασταλτικό-Mirs αν ρυθμίζουν την έκφραση ενός ογκογονιδίου [14]. Μελέτες διαπίστωσαν ότι ογκοκατασταλτικό-Mirs είναι συχνά κάτω ρυθμισμένα με γενετικές ή επιγενετικών μηχανισμών που οδηγούν στην ανοδική ρύθμιση των ογκογονιδίων και επιτάχυνση της ογκογένεσης [16]. Για παράδειγμα, miR-34b /c (η οποία έγκειται στον υποκινητή CpG νησί ενός γονιδίου) βρέθηκε να σιγήσει επιγενετικώς με μεθυλίωση του DNA σε κύτταρα μεταστατικού καρκίνου [17]. Re-έκφραση του miR-34b /c καταστέλλεται καρκίνο εισβολή

in vitro

να

in vivo

. Μας ενδιαφέρει miR-193a το οποίο βρίσκεται στο χρωμόσωμα 17q11. 2 και ενσωματωμένα σε ένα νησί CpG. Μελέτες έχουν δείξει ότι το miR-193a ήταν επιγενετικώς σιγήσει υπερμεθυλίωση προαγωγού στην οξεία μυελογενή λευχαιμία (AML) και του καρκίνου του πνεύμονα [18], [19]. Είναι σημαντικό, miR-193a στοχεύει το δείκτη βλαστικών κυττάρων, c-KIT, για την καταστολή σε AML [18], [20]. Μια άλλη πειραματικά επιβεβαίωσε στόχο της miR-193a είναι E2F6 [21]. ρύθμιση Up-του E2F6 έχει παρατηρηθεί σε καρκινικά κύτταρα του μαστού μετά από θεραπεία με οιστρογόνα [22]. Εντός της E2F οικογένειας παραγόντων μεταγραφής που εμπλέκονται στον έλεγχο του κυτταρικού κύκλου, μέσω μεταγραφικής ενεργοποίησης ή καταστολής [23], E2F6 βρέθηκε να είναι ένας μεταγραφικός καταστολέας θέση να συνδέεται με την ιστόνη-λυσίνη Ν-μεθυλοτρανσφεράσης ΕΖΗ2, το οποίο είναι ένα σημαντικό συστατικό του η Polycomb συγκρότημα [24], [25], και με το DNA μεθυλο-τρανσφεράση DNMT3b, επιτρέποντας την πρόσληψη του προς την κατασταλτική συγκρότημα [26].

Καθώς ο ρόλος του miR-193a στον καρκίνο των ωοθηκών είναι προς το παρόν άγνωστη , υποθέτουμε ότι E2F6 πρωτεΐνη μπορεί να καταστείλει την έκφραση του miR-193a, τόσο άμεσα ως δέσμευσης DNA μεταγραφικός καταστολέας και έμμεσα μέσω της προώθησης του Polycomb συγκρότημα συναρμολόγησης. Πράγματι, η ύπαρξη των θέσεων πρόσδεσης για την πρωτεΐνη E2F6 στον υποκινητή του miR-193a, όπως αποδεικνύεται από τα στοιχεία τσιπ Seq ΚΩΔΙΚΟΠΟΙΗΣΗ [27] φαίνεται να υποδηλώνουν ότι η μακροπρόθεσμη καταστολή των miR-193a από E2F6 μπορεί να οδηγήσει σε επιγενετική αποσιώπηση του miR -193a. Τα γεγονότα αυτά μπορεί να οδηγήσει στην αυξητική ρύθμιση της c-ΚΙΤ και πυροδοτούν την έναρξη της OCIC φαινοτύπου, προωθώντας έτσι ωοθηκών καρκινογένεση. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιούμε ένα μαθηματικό μοντέλο για να διερευνήσει τις περιπλοκές αυτής της επιγενετικής έλεγχο του miR-193a το οποίο θα μπορούσε να αποδειχθεί σημαντική, καθώς προβλέπει μια συμπεριφορά μεταγωγής σε c-KIT που θα μπορούσε να είναι κρίσιμη για την ωοθηκική καρκινογένεση.

Υλικά και Μέθοδοι

Κυτταροκαλλιέργεια

Α2780 γραμμή ωοθήκης καρκινικό κύτταρο πολλαπλασιάστηκε σε RPMI1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA) συμπληρωμένο με 10% FBS, και 50 μονάδες /ml πενικιλλίνης /στρεπτομυκίνης. Το κύτταρο επωάστηκε σε 37 ° Cwith 5% CO

2.

Κλωνοποίηση του miR-193a φορέα έκφρασης

Οι αλληλουχίες οι οποίες μεταγράφουν miR-193a προ-miRNA ενισχύθηκε με PCR χρησιμοποιώντας ειδικούς εκκινητές F: 5′-CGCGGATCCAGTTTCTCGGCGCATAACTC-3 ‘και R: 5′-CCCAAGCTTCGCTATTTCTCCAGCGAAGTG-3’, με τη χρήση γονιδιωματικού DNA των κυττάρων τα οποία εκφράζουν IOSE miR-193a. Τα προϊόντα PCR συνδέθηκαν εντός YT & amp? A Cloning Vector (Yeastern Biotech, Ταϊβάν) για επιβεβαίωση αλληλούχιση. miR-193a-YT & amp? Α υπέστη πέψη με BamH Ι και Hind III, και εισάγεται εντός πολλαπλή θέση κλωνοποίησης του p

Silencer

4,1-CMV φορέα έκφρασης puro siRNA, το οποίο predigested με BamHI και HindIII

.

εκχύλιση RNA και ποσοτική RT-PCR

εκχύλιση RNA πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen Carlsbad, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Για να αφαιρέσετε το δυναμικό DNA μολυσματικής από το συμπληρωματικό DNA, 1 μg ολικού RNA υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ϋΝάση Ι (Amplification Grade, Invitrogen) πριν από την αντίστροφη μεταγραφή. RNA ήταν τότε αντίστροφη μεταγραφή χρησιμοποιώντας τυχαία εναύσματα (για ο-ΚΙΤ ή έκφραση E2F6) ή κιτ ανάστροφη μεταγραφή TaqMan (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Ποσοτική πραγματικού χρόνου RT-PCR πραγματοποιήθηκε στη συνέχεια χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου σύστημα PCR ΑΒΙ StepOne (Applied Biosystems). Αστάρια είναι διαθέσιμα κατόπιν αιτήματος. Σχετική έκφραση του miR-193a, c-KIT και E2F6 υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τη συγκριτική μέθοδο Ct.

Αποτελέσματα

miR-193a στόχους c-KIT και E2F6

Για να διερευνήσουν η σχέση μεταξύ miR-193a και c-kit /E2F6 σε καρκίνο των ωοθηκών (Σχ. 1Α), μπορούμε υπερεκφράζεται miR-193a σε Α2780 καρκίνο των ωοθηκών κύτταρα τα οποία έχουν χαμηλά επίπεδα έκφρασης miR-193a. Η έκφραση του miR-193a ως αποτέλεσμα μια σημαντική ρύθμιση προς τα κάτω του mRNA c-ΚΙΤ και E2F6 mRNA, υποδηλώνοντας έτσι ότι το mRNA του c-ΚΙΤ και E2F6 mRNA είναι στόχοι του miR-193a σε ωοθηκών καρκινικά κύτταρα (Εικ. 1Β).

(Α) Σχηματικό διάγραμμα του c-KIT και E2F6 mRNA δείχνει θέση δέσμευσης προβλέψει miR-193a σε 3’UTR τους. Οι λεπτομερείς ακολουθίες δέσμευσης (MRes) από αυτές τις περιοχές έχουν επίσης δείξει μαζί με ευθυγραμμίσεις ακολουθία miRNA. (Β) ανάλυση qPCR του miR-193a, ο-ΚΙΤ και E2F6 σε Α2780 καρκίνο κυττάρων των ωοθηκών. Η υπερέκφραση του miR-193a στα κύτταρα Α2780 οδηγεί προς τα κάτω ρύθμιση της c-KIT και E2F6 mRNA.

Η

εξισώσεις Μοντέλο

Οι αλληλεπιδράσεις μεταξύ των συστατικών του miR-193a-E2F6- ο-ΚΙΤ ρυθμιστική μονάδα φαίνονται στο Σχ. 2Α. Σφιχτή σύζευξη των στοιχείων του δικτύου και των πιθανών μη γραμμική κινητική μπορεί να οδηγήσει σε σύνθετη δυναμική του συστήματος, η οποία μπορεί να γίνει κατανοητή με τη βοήθεια ενός μαθηματικού μοντέλου. Στο κινητικό μοντέλο μας (Εικ. 2Β) υπάρχουν έξι συνιστώσες, οι οποίες αντιπροσωπεύουν: miR-193a (

R

m), E2F6 mRNA (

R

ε), c-KIT mRNA (

R

γ), το συγκρότημα του miR-193a με E2F6 mRNA (

R

em), συγκρότημα του miR-193a με c-KIT mRNA (

R

MC), και την πρωτεΐνη E2F6 (

P

). Οι χημικές εξισώσεις μαζική δράση για την αντίστοιχη συγκέντρωση αυτών των μορίων ή συμπλεγμάτων,

R

m,

R

e,

R

γ,

R

em,

R

mc, και

P

, αναφέρονται τα εξής: (1) (2) (3) ( 4) (5) (6)

(Α) Ενεργοποίηση του υποδοχέα ER) σηματοδότηση (οιστρογόνα μπορεί να αυξήσουν την αύξηση η μεταγραφή του E2F6 η οποία μπορεί στη συνέχεια να αυξήσει την έκφραση του c-ΚΙΤ μέσω μεσολάβηση miR-193a μηχανισμός Cerna . Από την άλλη πλευρά, εκτός από την μεταγραφικός καταστολέας, E2F6 μπορεί να οδηγήσει σε επιγενετικές σίγηση του υποκινητή miR-193a με αποτέλεσμα την ρύθμιση προς τα πάνω του ο-ΚΙΤ. Η περιγραφή για κάθε αριθμό στην οδό παρατίθεται στον Πίνακα S1. (Β) Η βιοχημική αλληλεπίδραση για την προτεινόμενη κανονιστικού δικτύου miR-193a. Μοντέλο μεταβλητές ονόματα για μορίου είδη δίνεται επίσης.

Η

Εδώ, ο ρυθμός σύνδεσης των miR-193a E2F6-mRNA είναι

k

1 και του συνεταιρίζεσθαι ποσοστό των miR-193a mRNA -c-KIT είναι

k

2? ο ρυθμός διάσπασης των συμπλεγμάτων miR-193a E2F6-mRNA είναι

k

m1 και miR-193a-c-KIT mRNA είναι

k

m2? το ποσοστό μετάφραση του E2F6 πρωτεΐνης είναι

k

3? το ποσοστό μεταγραφής του miR-193a είναι

k

4, του E2F6 mRNA είναι

k

5 και του mRNA c-KIT είναι

k

6? ο ρυθμός υποβάθμισης του miR-193a είναι

δ

m, του E2F6 mRNA είναι

δ

e, c-KIT mRNA είναι

δ

γ, του miR-193a-E2F6 mRNA είναι

δ

em, και του miR-193a-c-KIT mRNA είναι

δ

mc και ο ρυθμός αποικοδόμησης του E2F6 πρωτεΐνης είναι

δ

p? και η ισχύς της αναστολής μεταγραφής miR-193a από E2F6 πρωτεΐνη συμβολίζεται ως

K

4.

Ο πρώτος όρος στην δεξιά πλευρά της εξίσωσης. (1) αντιστοιχεί προς το βέλος 9 στο Σχ. 2Α εκφράζοντας την αναστολή της μεταγραφής miR-193a από, κυρίως, E2F6 πρωτεΐνη, αλλά και από Polycomb δραστηριότητα σύνθετες πρωτεΐνες. Η τιμή της παραμέτρου

K

4 αποσκοπεί συνεπώς να ευθύνεται τόσο για την άμεση καταστολή της μεταγραφής από E2F6 και για τη μακροπρόθεσμη σίγηση γονιδίων που εκτελούνται από και εξαρτάται από τα επίπεδα των ΕΖΗ2 και DNMT3b. (Η συγκέντρωση του E2F6 είναι μια μεταβλητή της δυναμικής μοντέλο, ενώ τα επίπεδα των βασικών Polycomb πρωτεϊνών, οι οποίες δεν είναι ρητώς στο μοντέλο εξισώσεις, δεν είναι υποκείμενα σε ρύθμιση από τη μονάδα και τα επίπεδά τους θεωρείται σταθερή τουλάχιστον σε χρονική κλίμακα μονάδα εξισορρόπησης .) Η δεύτερη (αντίστοιχα, τρίτο) όρος στην δεξιά πλευρά της εξίσωσης. (1) είναι το ποσοστό απελευθέρωσης miR-193a από το συγκρότημα με E2F6 mRNA (αντίστοιχα, το συγκρότημα με ο-ΚΙΤ mRNA). Αλληλεπιδράσεις που αντιστοιχούν με τα βέλη 6 και 7 στο σχ. 2Α, που εκφράζουν τον σχηματισμό συμπλόκου υβριδίου mRNA, δίδονται, αντίστοιχα, από την τέταρτη και την πέμπτη όρος στη δεξιά πλευρά της Εξ. (1). Ο τελευταίος όρος στην εξίσωση. (1) είναι μια πρώτης τάξεως όρος υποβάθμιση miR-193a.

Το ποσοστό των συστατική μεταγραφή του γονιδίου E2F6 (βέλος 1 στο Σχ. 2Α) είναι

k

5 (Εξ. (2)). Το ποσοστό αυτό εξαρτάται από το επίπεδο των ορμονική διέγερση και, όπως το μοντέλο μας περιγράφει απλοποιηθεί η νομοθεσία στα κύτταρα των ωοθηκών, θα συνδέσει άμεσα

k

5 με το επίπεδο των οιστρογόνων. Ο δεύτερος όρος στην εξίσωση. (2) αντιπροσωπεύει την απελευθέρωση του E2F6 mRNA από το συγκρότημα με miR-193a, ενώ ο τρίτος όρος είναι το ποσοστό του αντίθετου αντίδρασης σύνδεσης. Ο τελευταίος όρος στην εξίσωση. (2) είναι ένα αποικοδόμηση του E2F6 mRNA. Οι όροι για τη δεξιά πλευρά της εξίσωσης. (3) είναι ανάλογες. Ο πρώτος όρος στην εξίσωση. (4) είναι το ποσοστό για τη σύνδεση του E2F6 mRNA και miR-193a. Ο δεύτερος όρος στην εξίσωση. (4) στέκεται για την αντίθετη αντίδραση, και ο τρίτος όρος αντιπροσωπεύει την αποικοδόμηση του

R

em. Οι όροι για τη δεξιά πλευρά της εξίσωσης. (5) είναι ανάλογες. Η τελευταία εξίσωση αντιπροσωπεύει μετάφραση E2F6 (βέλος 8 στο Σχ. 2Α) και την υποβάθμιση.

Σταθερή Πολιτείες |

Σταθερή μέλη να δώσουν τη μακροπρόθεσμη συμπεριφορά του συστήματος. Οι σταθερές καταστάσεις του συστήματος (1) – (6) μπορεί να ληφθεί εξισώνοντας τις πλευρές δεξί χέρι των εξισώσεων στο μηδέν. Ας

S

= (

R

m,

R

e,

R

γ,

R

em,

R

mc,

P

), να είναι οποιαδήποτε σταθερή κατάσταση του συστήματος (1) – (6). Η σταθερή κατάσταση

S

πληροί τις ακόλουθες εξισώσεις (7) (8) (9) (10) (11) (12), όπου

και (13)

Σημειώνουμε ότι από τη στιγμή

R

m καθορίζεται από την εξίσωση. (12), τότε οι άλλες συνιστώσες της σταθερής κατάστασης

S

μπορεί να καθορίζεται από τις εξισώσεις. (7) – (11). Εξ ου και η προϋπόθεση για την ύπαρξη της σταθερής κατάστασης

S

είναι ότι

k

4 έγκειται στο

h

[0, ∞), το εύρος της συνάρτησης

h

. Μας ενδιαφέρει κατώφλι ή μεταγωγής συμπεριφορά του συστήματος (1) – (6), ιδιαίτερα σε μεταγωγή της έκφρασης του mRNA c-ΚΙΤ. Έτσι, οι όροι σχετικά με τις παραμέτρους για την ύπαρξη πολλαπλών σταθερών καταστάσεων είναι σχετικές. Εδώ δίνουμε ένα κριτήριο για την ύπαρξη τριών σταθερές καταστάσεις του μοντέλου ως εξής: (14) (15), όπου είναι η μέγιστη τιμή της στο διάστημα [0, ∞), και δίνεται από

η απόδειξη για το κριτήριο (14) -. (15) δίνεται στο S1 Κείμενο

η Σταθερή Κατάσταση Bifurcation διάγραμμα στις (

k

5,

R

γ) αεροπλάνο

Κατά την άποψη της Εξ. (7) – (8), οι σταθερές καταστάσεις του

R

e και

R

αύξηση γ ή μείωση στην ίδια κατεύθυνση. Αυτό το μοντέλο πρόβλεψης είναι συνεπής με την υπόθεση Cerna [28], [29] ότι η έκφραση του E2F6 συσχετίζεται θετικά με εκείνη του c-KIT.

Όπως αναφέρθηκε πριν,

k

5 είναι μία πειραματικά ελεγχόμενη παράμετρος που σχετίζεται με την προσθήκη ορμόνες (π.χ. οιστρογόνα), και

K

4 είναι ένα μέτρο της αποτελεσματικότητας αναστολής της, πρωτίστως, E2F6 πρωτεΐνης έναντι miR-193a. Όπως θα δούμε στη συζήτηση που ακολουθεί, η αλληλεπίδραση μεταξύ

k

5 και

K

4 μπορεί να δημιουργήσει ένα υπερ-έκφραση του mRNA c-KIT. Ως εκ τούτου, θα ήταν ενδιαφέρον να δούμε την εξάρτηση της σταθερής κατάστασης για την παράμετρο

k

5 για διαφορετικές τιμές του

K

4 – αυτό φαίνεται στο Σχ. 3. Το διάγραμμα αναφέρεται ως «διαγράμματα διακλάδωσης σταθερή κατάσταση», και

k

5 αναφέρεται ως παράμετρος διακλάδωσης. Για τη δημιουργία πειραματικές καμπύλες παρόμοιες με αυτές που φαίνονται στο Σχ. 3, μπορεί κανείς να σχεδιάσει ένα πείραμα στο οποίο κύτταρα καλλιεργούνται σε διαφορετικές συγκεντρώσεις των οιστρογόνων, και στη συνέχεια να μετρήσει τα επίπεδα των μακροπρόθεσμων mRNA.

Η εξάρτηση των σταθερών καταστάσεων της μεταβλητής

R

c (επίπεδο RNA του c-KIT) για την παράμετρο

k

5 (ποσοστό μεταγραφής του E2F6) για τιμές διαφορά της παραμέτρου

K

4 (απόδοση αναστολή του E2F6). Η αξία των παραμέτρων που αναφέρονται στην S2 Κείμενο.

Η

Με τις παραμέτρους που ικανοποιεί την εξίσωση. (14) – (15), το μοντέλο προβλέπει ότι υπάρχει μια σειρά από

k

5 για τις οποίες το σύστημα αναγνωρίζει τρεις συνυπάρχουν σταθερές καταστάσεις. Για παράδειγμα, για το

K

4 = 0,0001 (δηλαδή, μια χαμηλότερη απόδοση αναστολή? Εικ. 3, πράσινη γραμμή) και

k

5 είναι μεταξύ 0,0556 και 0,1585, το μοντέλο δίνει τρεις σταθερές καταστάσεις (εκ των οποίων η υψηλή

R

c και η χαμηλή

R

γ κράτη είναι σταθερή? δείτε την καμπύλη που σχετίζεται με το

K

4 = 0,0001 στο Σχ. 3). Η σημασία του δεξί γόνατο σε μια σταθερή κατάσταση διάγραμμα διακλάδωσης έγκειται στο εξής γεγονός: η παράμετρος ελέγχου

k

5 αυξάνεται από τη χαμηλή αξία μέσα από την κρίσιμη τιμή

k

5

R που συνδέονται με το δεξί γόνατο, το αντίστοιχο επίπεδο σταθερής κατάστασης του

R

c θα αυξηθεί και, λόγω της αστάθειας (αντίστοιχα, σταθερότητα) των σταθερών καταστάσεων στο μεσαίο κλάδο (αντίστοιχα, η άνω υποκατάστημα) σε σταθερή κατάσταση διάγραμμα διακλάδωσης, το σύστημα θα μεταβεί στη σταθερή κατάσταση στο επάνω υποκατάστημα στην κρίσιμη τιμή

k

5

R , και στη συνέχεια να μείνετε στο ανώτερο κλάδο (βλ. Σχήμα 3). Υπάρχει μια έντονη διαφορά στα επίπεδα mRNA γ-KIT μεταξύ των σταθερές καταστάσεις του

R

C στο κάτω και άνω υποκαταστήματα στην σταθερή κατάσταση διάγραμμα διακλάδωσης, το οποίο θα πρότεινα τον καρκίνο φαινότυπο που προάγουν την υπερ- έκφραση του mRNA του c-KIT για

k

5 & gt?

k

5

R. Από την άλλη πλευρά, αν η μία είναι αρχικά στην σταθερή κατάσταση στο άνω διακλάδωση η οποία συνδέεται με την υπερέκφραση του mRNA c-kit, μπορεί κανείς να μειώσει το

k

5 τιμή για τη μείωση της σταθερής κρατικό επίπεδο του

R

c. Επιπλέον, αν κάποιος συνεχίζει να μειώνεται το

k

5 τιμή κάτω από την κρίσιμη τιμή

k

5

Lassociated με το αριστερό γόνατο, στη συνέχεια, το αντίστοιχο επίπεδο σταθερής κατάστασης του

R

c θα μειωθεί και, λόγω της αστάθειας (αντίστοιχα, σταθερότητα) των σταθερών καταστάσεων στο μεσαίο κλάδο (αντίστοιχα, το χαμηλότερο υποκατάστημα) σε σταθερή κατάσταση διάγραμμα διακλάδωσης, το σύστημα θα κατέβει στη σταθερή κατάσταση στο κάτω υποκατάστημα στην κρίσιμη τιμή

k

5

L (βλέπε Εικ. 3). Αυτό θα μπορούσε να ανακτήσει το κανονικό επίπεδο mRNA c-KIT.

Για να συνοψίσουμε, το μοντέλο προβλέπει ότι υπάρχει μία οριακή τιμή

k

5

R (αντίστοιχα,

k

5

L) στο μεταγραφικό ποσοστό

k

5 για τα κύτταρα για να ενεργοποιήσετε (αντίστοιχα, απενεργοποιήστε) την έκφραση της OCIC δείκτη c-KIT. Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό να ρυθμίσετε τη μεταγραφική ποσοστό

k

5 να επηρεάσει την έκφραση της OCIC δείκτη c-KIT.

Σημασία της παραμέτρου

K

4

Παρά το γεγονός ότι μειώνεται η τιμή του

k

5 (που συνδέεται με το χαμηλό επίπεδο των οιστρογόνων) μπορεί να μειώσει την έκφραση του OCIC δείκτη c-KIT, κάποια κλινικά στοιχεία δείχνουν ότι τα αντι -estrogen θεραπεία είναι μόνο εν μέρει αποτελεσματικά στη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών [30], [31]. Το μοντέλο προτείνει ότι αυτό μπορεί να οφείλεται στην αναστολή της έκφρασης miR-193a με E2F6 πρωτεΐνη όπως αντανακλάται στην τιμή της παραμέτρου

K

4 της πρώτης όρος στη δεξιά πλευρά της εξίσωσης . (1). Αυτός ο όρος δικαιολογείται από το γεγονός ότι η έκφραση του miR-193a εξαρτάται από την μεταγραφική κατασταλτική δράση του E2F6 πρωτεΐνης (που συνδέεται με το επίπεδο των ΕΖΗ2 και DNMTs). Ειδικότερα, αρκετά ισχυρή αναστολή (αρκετά μεγάλο

K

4) θα οδηγήσει σε μια πιο μακροπρόθεσμη αποσιώπηση της έκφρασης του miR-193a με μεθυλίωση του DNA (βλέπε Εξ. (1)), και έτσι θα συνεπάγεται την υπερ-έκφραση του mRNA του c-KIT? ενώ για την ακραία περίπτωση

K

4 = 0, το σύστημα (1) – (6) μπορεί να υποστηρίξει μόνο το πολύ μία σταθερή κατάσταση (βλ S1 κειμένου), η οποία συνεπάγεται την μη ύπαρξη του δεξιά και αριστερά τα γόνατα σε σταθερή κατάσταση διάγραμμα και την απώλεια του δισταθούς διακόπτη.

Ας

k

5

b υποδηλώνουν τη συνεχή βασικό ρυθμό μεταγραφής του E2F6 mRNA. Στη συνέχεια, ανάλογα με την αλληλεπίδραση μεταξύ του

k

5

β και

K

4, θα περιγράψουμε δύο σενάρια στα οποία η δεύτερη θα αντιστοιχεί με την κλινική παρατήρηση ότι τα αντι-οιστρογόνα θεραπεία είναι μόνο εν μέρει αποτελεσματικά στη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών [30], [31].

σε κύτταρα με χαμηλή αποδοτικότητα αναστολή της E2F6 (δηλαδή, ένα κάτω

K

4), όπως την παράμετρο

k

5 αυξάνεται από

k

5

b για να

k

5

2 (κόκκινη συνεχής γραμμή στο Σχ. 4Α), η σταθερή κατάσταση

R

c θα κινηθεί πρώτα από

L

0 έως

L

1 μέσω του κάτω κλάδου, και, λόγω της αστάθειας των σταθερές καταστάσεις στη μέση υποκατάστημα, μετάβαση από

L

1 έως

U

1 στο άνω κλάδου, και, τέλος, κινούνται κατά μήκος του άνω κλάδου να

U

2. Από την άλλη πλευρά, καθώς η παράμετρος

k

5 μειώνεται από το

k

5

2

k

5

β (μπλε συνεχής γραμμή στο Σχ. 4Α), η σταθερή κατάσταση

R

c θα κινηθεί πρώτα από

U

2

U

0 μέσω του άνω κλάδου, και, λόγω της αστάθειας των σταθερές καταστάσεις στη μέση υποκατάστημα, στη συνέχεια, μεταβείτε από το

U

0 έως

T

0 στο κατώτερο κλάδο, και τελικά να επιστρέψουν στο

L

0. Ως εκ τούτου, για την χαμηλή αποδοτικότητα αναστολή της E2F6 (δηλαδή, χαμηλή

K

4) και μικρή σταθερά βασικού ρυθμού (δηλαδή, μικρές

k

5

β), εκτός από των οιστρογόνων μπορεί να μετατραπεί σε υπερ-έκφραση του mRNA c-KIT, ενώ ανάκληση των οιστρογόνων μπορεί να απενεργοποιήσετε υπερ-έκφραση του mRNA c-KIT και να κάνει τα κύτταρα να ανακτήσει το κανονικό επίπεδο mRNA c-KIT.

η εξάρτηση των σταθερών καταστάσεων της μεταβλητής

R

c (επίπεδο RNA του c-KIT) για την παράμετρο

k

5 (ποσοστό μεταγραφής του E2F6) για διάφορες τιμές του

K

4: (Α)

K

4 = 0,1 (δηλαδή, χαμηλή απόδοση αναστολή της E2F6), (Β)

K

4 = 1 (δηλαδή, υψηλή απόδοση αναστολή της E2F6). Το κόκκινο και το μπλε γραμμή βέλος δείχνει απότομη μεταβολή της σταθερής κατάστασης του

R

c με σε διαφορετικά

k

5

αξίες που αναφέρονται παρακάτω. Η αξία των παραμέτρων που αναφέρονται στην S2 Κείμενο.

Η

Σε κύτταρα με υψηλή απόδοση αναστολή της E2F6 (δηλαδή, ένα υψηλότερο

K

4), όπως την παράμετρο

k

5 αυξάνεται από

k

5

b για να

k

5

2 (κόκκινη συνεχής γραμμή στο Σχ. 4Β), η σταθερή κατάσταση

R

c θα κινηθεί πρώτα από

L

0 έως

L

1 μέσω του κάτω κλάδου, και, λόγω της αστάθειας των σταθερές καταστάσεις στη μέση υποκατάστημα, μετάβαση από

L

1 έως

U

1 στο άνω κλάδου, και, τέλος, κινούνται κατά μήκος της άνω υποκατάστημα στο

U

2. Από την άλλη πλευρά, καθώς η παράμετρος

k

5 μειώνεται από το

k

5

2

k

5

β (μπλε συνεχής γραμμή στο Σχ. 4Β), η σταθερή κατάσταση

R

c θα κινηθεί πρώτα από

U

2

U

0 μέσω του άνω κλάδου, και, λόγω του γεγονότος ότι

k

5

b είναι το βασικό σταθερό ρυθμό μεταγραφής του mRNA και E2F6

k

5

b είναι μεγαλύτερο από το

k

5 στοιχείο του σημείου αριστερό γόνατο, τότε πρέπει να σταματήσει σε

U

0 που είναι η κατάσταση που σχετίζεται με υπερ-έκφραση του mRNA c-ΚΙΤ. Ως εκ τούτου, για υψηλή απόδοση αναστολή της E2F6 (δηλαδή, ένα υψηλότερο

K

4) και μεγάλες σταθερή βασικού ρυθμού (δηλαδή, μεγάλες

k

5

β), ανάκληση των οιστρογόνων δεν μπορεί να εξασθενούν την έκφραση του mRNA c-ΚΙΤ. Κάνουμε μια σημαντική παρατήρηση: για αρκετά μεγάλο

K

4, η

k

5 τιμή που σχετίζεται με το αριστερό γόνατο είναι πολύ κοντά στο μηδέν. Ως εκ τούτου, για αρκετά μεγάλο

K

4, θα ταιριάζει με το σενάριο που εξετάζονται στην παρούσα παράγραφο. Αυτό υποδηλώνει ότι για αρκετά μεγάλο

K

4, ανάκληση των οιστρογόνων δεν μπορεί να σβήσει υπερ-έκφραση του mRNA c-KIT, το οποίο είναι σύμφωνο με την προαναφερθείσα κλινική παρατήρηση.

Επικύρωση το μοντέλο σε TCGA καρκίνο των ωοθηκών σύνολο δεδομένων

υπό το φως των παραπάνω μοντέλο, εμείς αιτιολογημένη ότι σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών με χαμηλή ΕΖΗ2 (δηλαδή, χαμηλή

K

4), αύξηση του E2F6 mRNA (η οποία προκύπτει από την αύξηση του ρυθμού μεταγραφής του E2F6,

k

5) μπορεί να επάγει την έκφραση του mRNA c-ΚΙΤ (

R

γ), μέσω miR -193a μεσολάβηση μηχανισμό Cerna. Ωστόσο, τέτοια συσχέτιση δεν μπορεί να υπάρχουν σε ασθενείς με υψηλή ΕΖΗ2 (δηλαδή, υψηλή σταθερή αναστολή της E2F6 να miR-193a,

K

4) ως miR-193 είναι επιγενετικώς σιωπήσει. Να παρέχει μια ανεξάρτητη υποστήριξη για αυτήν την υπόθεση, αναλύσαμε τα δεδομένα μικροσυστοιχιών έκφρασης σε TCGA σύνολο δεδομένων με καρκίνο των ωοθηκών [32]. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών με χαμηλό επίπεδο ΕΖΗ2 δείχνουν μια θετική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης E2F6 και c-Kit (Σχ. 5Α). Ανάλυση άλλο σύνολο δεδομένων μικροσυστοιχιών σε καρκίνο των ωοθηκών (GDS2785) απέδειξαν επίσης ένα παρόμοιο φαινόμενο (S1 Εικ.). Ωστόσο, η σχέση αυτή δεν παρατηρείται σε ασθενείς με υψηλή ΕΖΗ2 (Εικ. 5Β και S1 Εικ.) Ή σε συσχέτιση μεταξύ E2F6 και έναν στόχο μη miR-193a (S2 Εικ.). Στο σύνολό τους, το φαινόμενο αυτό είναι σύμφωνο με την πρόβλεψη μας (Εικ. 3) ότι το mRNA του E2F6 και c-KIT δείχνει μια σχέση Cerna σε χαμηλές

K

4.

δεδομένα μικροσυστοιχιών Έκφραση από 568 ασθενείς ο καρκίνος των ωοθηκών ταξινομούνται ανάλογα με το επίπεδο έκφρασης του ΕΖΗ2. Το διάγραμμα διασποράς δείχνει τη συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου έκφρασης του E2F6 και ο-ΚΙΤ σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών με (Α) χαμηλή ΕΖΗ2 (κάτω 12,5%) και (Β) υψηλής ΕΖΗ2 (άνω 12,5%). Το R και Ρ-τιμή της συσχέτισης Pearson φαίνονται. Είναι ενδιαφέρον, όπως προβλέπεται από το μοντέλο μας, οι ασθενείς με χαμηλή ΕΖΗ2 δείχνει μια θετική συσχέτιση του E2F6 και c-KIT (Α, R = 0,322, P & lt? 0.005). Μια τέτοια συσχέτιση δεν παρατηρείται σε ασθενείς με υψηλή ΕΖΗ2 (Β, R = 0,2148 P & gt?. 0.05). Ωστόσο, οι ασθενείς με υψηλά ΕΖΗ2 μπορεί να διαχωριστεί περαιτέρω σε 2 υπο-ομάδες με βάση την μέση τιμή του c-ΚΙΤ (υψηλή, κόκκινο χρώμα? Χαμηλή, μπλε χρώμα). Καμία από αυτές τις υπο-ομάδες δείχνει μια θετική συσχέτιση μεταξύ E2F6 και c-KIT.

Η

Συζήτηση

μαθηματικό μοντέλο μας αξιώνει την ύπαρξη ενός δικόρυφη επιγενετικών έλεγχο του miR-193a σε ωοθηκών καρκινογένεση. Σε κύτταρα με χαμηλή απόδοση αναστολή της E2F6, υπάρχει μια σχέση μεταξύ ~linear μεταγραφή του E2F6 και του mRNA c-kit, υποδεικνύοντας έτσι μια σχέση μεταξύ αυτών των Cerna 2 γονιδίων. Σε αυτή την υπόθεση Cerna [28], [29], οι 3’UTRs αρκετών mRNAs περιέχουν το στοιχείο miR-δέσμευσης (ες) (MRE) και συνεπώς ανταγωνίζονται για δέσμευση με το miR. Θεωρητικά, ένα miR μπορεί να ελεγχθεί επιγενετικώς τόσο υπερμεθυλίωση προαγωγού και Cerna της σε μια δικόρυφη μόδας.

Αξιοσημείωτο είναι επίσης να επισημάνω ότι αυτή η σχέση Cerna είναι μια αναστρέψιμη εκδήλωση, έτσι ώστε ανάκληση των οιστρογόνων που οδηγεί σε χαμηλότερη έκφραση του E2F6, μπορεί να μειώσει την έκφραση του c-Kit (Σχ. 6, άνω πίνακας). Ένα τέτοιο φαινόμενο μπορεί να παρατηρηθεί σε φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα των ωοθηκών ή ωοθηκικών καρκινικών κυττάρων στα οποία η αποδοτικότητα αναστολής E2F6 είναι χαμηλή. Πράγματι, τα συστατικά του μεταγραφικοί καταστολείς όπως ΕΖΗ2 η οποία απαιτείται για μεταγραφική καταστολή του E2F6 έχει βρεθεί να είναι χαμηλή σε φυσιολογικό ωοθηκών κύτταρα και ένα υποσύνολο του καρκίνου των ωοθηκών [33], [34]. Είναι σημαντικό, αυτό είναι επίσης συνεπής με την κλινική απόδειξη ότι η έκφραση του E2F6 και c-KIT συσχετίζονται σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών με χαμηλή έκφραση του ΕΖΗ2 αλλά όχι σε περιπτώσεις υψηλής έκφρασης ΕΖΗ2.

Υπό την προϋπόθεση της χαμηλής ΕΖΗ2 και έκφραση DNMT3b (άνω πίνακα, όπως υποδεικνύεται από το φως μπλε και κόκκινο χρώμα), E2F6 οδηγεί μόνο σε ένα ελάχιστο καταστολή του miR-193a (δηλαδή, χαμηλή

K

4) και η σχέση μεταξύ E2F6 και c-KIT παρουσιάζει μια σχέση Cerna. Ως αποτέλεσμα, η ποσότητα του c-kit εις τα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών εξαρτάται από την ποσότητα του οιστρογόνου (η πληροφορία αυτή προκαλείται από το επίπεδο του E2F6). Αντίθετα, υπό την προϋπόθεση της υψηλού επιπέδου έκφρασης της ΕΖΗ2 και DNMT3b (κάτω πίνακα, όπως υποδεικνύεται από σκούρο μπλε και κόκκινο χρώμα), E2F6 ασκεί μια υψηλή απόδοση αναστολή (δηλαδή, υψηλή

K

4 ). Ελαφρά αύξηση του E2F6 αποτέλεσμα την επιγενετική αποσιώπηση του miR-193a και στη συνέχεια μια υπερ-έκφραση του c-ΚΙΤ. Χωρίς miR-193a, τα κύτταρα μπορούν να «κλειδωθεί» σε κατάσταση υψηλού ο-ΚΙΤ με αποτέλεσμα ωοθηκών καρκινογένεση.

Η

Ωστόσο, σε κύτταρα με υψηλή απόδοση αναστολή της E2F6, το μοντέλο μας προβλέπει μια ιδιαίτερα μη γραμμικές σχέσεις μεταξύ της έκφρασης του E2F6 και ο-ΚΙΤ. Υπό την προϋπόθεση της χαμηλού επιπέδου έκφρασης του E2F6, ακολουθεί μια σχέση Cerna μεταξύ E2F6 και c-KIT. Ωστόσο, σε υψηλές έκφραση E2F6 μαζί με την υψηλή έκφραση του μεταγραφικού καταστολέα όπως ΕΖΗ2, E2F6 μπορεί να οδηγήσει σε επιγενετικές αποσιώπηση της έκφρασης του miR-193a μέσω τριμεθυλιωμένη H3K27 και μεθυλίωσης του DNA (Εικ. 6, κάτω τμήμα).