Αφηρημένο

Η Μέρκελ κυττάρων polyomavirus (MCV) προκαλεί την πλειοψηφία των ανθρώπινων Μέρκελ καρκινώματα (MCC) και κωδικοποιεί ένα μικρό T (sT) αντιγόνο που μετατρέπει αθανατοποιημένη ινοβλάστες τρωκτικών

in vitro

. Να αναπτύξει ένα μοντέλο ποντικού για MCV ST-επαγόμενη καρκινογένεση, δημιουργήσαμε διαγονιδιακά ποντίκια με Flox-stop-Flox σειρά MCV sT με ομόλογο ανασυνδυασμό στο

ROSA

τόπου (

ROSA

sT

), επιτρέποντας Cre μεσολάβηση, υπό όρους έκφραση MCV sT. Πρότυπο ταμοξιφαίνη (TMX) χορήγηση σε ενήλικες

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

ποντίκια, στα οποία

Cre

εκφράζεται παντού, είχε ως αποτέλεσμα την έκφραση MCV sT σε πολλαπλά όργανα, που ήταν ομοιόμορφα θανατηφόρο μέσα σε 5 ημέρες. Αντίθετα, οι περισσότεροι ενήλικες

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

ποντίκια επέζησαν χαμηλή δόση ταμοξιφένη διοίκηση, αλλά ανεπτυγμένες λοβό του αυτιού δερματική υπερκεράτωση και hypergranulosis. Η ταυτόχρονη έκφραση MCV ST και εξαρτάται από ομόζυγη διαγραφή p53 παράγεται πολυ-εστίασης, ελάχιστα διαφοροποιημένο, υψηλής αναπλαστικό όγκους στις σπλήνες και τα ήπατα των ποντικών μετά από 60 ημέρες θεραπείας TMX. Mouse εμβρυϊκούς ινοβλάστες από αυτά τα ποντίκια που επάγεται για να εκφράσει MCV sT παρουσίασαν ανεξάρτητη από προσκόλληση ανάπτυξη των κυττάρων. Να εξετάσει την παθολογία των κυττάρων Μέρκελ, η έκφραση MCV sT επίσης επάγεται κατά τα μέσα της εμβρυογένεσης στα κύτταρα Merkel του

Atoh1

CreERT2 /+

?

ROSA

sT

ποντίκια, τα οποία οδηγούν σε σημαντική αύξηση των αριθμών των κυττάρων Μέρκελ σε θόλους επαφή με τέλη εμβρυϊκή ηλικία που ομαλοποιήθηκε μετά τη γέννηση. Tamoxifen χορήγηση σε ενήλικες

Atoh1

CreERT2 /+

?

ROSA

sT

και

Atoh1

CreERT2 /+

?

ROSA

sT

?

p53f

LOX /Flox

ποντίκια είχαν καμία επίδραση στον αριθμό των κυττάρων Μέρκελ και δεν επάγουν το σχηματισμό όγκων. Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι η MCV sT διεγείρει τον πολλαπλασιασμό των προγονικών κυττάρων Μέρκελ σε εμβρυϊκά ποντίκια και είναι μια καλόπιστη ιογενή ογκοπρωτεΐνη που προκαλεί μετασχηματισμό πλήρη καρκινικών κυττάρων στο

p53

-null ρύθμιση.

Παράθεση : Shuda M, Guastafierro Α, Geng Χ, Υ Shuda, Ostrowski SM, Lukianov S, et al. (2015) της Μέρκελ κυττάρων polyomavirus Μικρές Τ Αντιγόνου Προκαλεί Καρκίνος και εμβρυϊκά Μέρκελ κυτταρικού πολλαπλασιασμού σε ένα μοντέλο διαγονιδιακό ποντίκι. PLoS ONE 10 (11): e0142329. doi: 10.1371 /journal.pone.0142329

Επιμέλεια: Suzie Chen, Πανεπιστήμιο Rutgers, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 24 του Ιουνίου του 2015? Αποδεκτές: 19 Οκτωβρίου του 2015? Δημοσιεύθηκε: 6 Νοεμβρίου του 2015

Copyright: © 2015 Shuda et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το NIH NCI R01CA136806, CA136363, CA170354 και καθηγητικών αμερικανική Αντικαρκινική Εταιρεία για την PSM και YC. MS υποστηρίχθηκε εν μέρει από το Πανεπιστήμιο του Πίτσμπουργκ ο καρκίνος του δέρματος SPORE CA12197305. SMM υποστηρίχθηκε από ΝΙΗ NIAMS R01AR05114, Richard βασιλιάς Mellon Ινστιτούτο Παιδιατρικής Έρευνας. ΠΕΑ υποστηρίχθηκε από το Ίδρυμα Δερματολογίας και ΝΙΗ NIAMS Τ32-AR007569. Το έργο αυτό χρησιμοποίησε τις βασικές εγκαταστάσεις του Πανεπιστημίου του Πίτσμπουργκ Cancer Institute, οι οποίες υποστηρίζονται εν μέρει από το βραβείο P30CA047904

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η Μέρκελ polyomavirus κυττάρων (MCV) είναι κλωνική ενσωματωθεί στο ~ 80% των καρκινωμάτων κυττάρων Μέρκελ (MCC) και είναι σήμερα η μόνη ανθρώπινη polyomavirus γνωστό ότι είναι ογκογόνο [1, 2]. Αυτός ο ιός ήταν το πρώτο ανθρώπινο παθογόνο που ανακαλύφθηκε από μια μέθοδο nondirected RNAseq ονομάζεται ψηφιακή μεταγραφικό αφαίρεσης [3], μια προσέγγιση που τώρα χρησιμοποιείται συνήθως για να ανακαλύψουν και να χαρακτηρίζουν την ανθρώπινη ιούς [4]. Ο τόπος αντιγόνο MCV Τ κωδικοποιεί δύο μεγάλες επικαλυπτόμενες μεταγραφές για το μεγάλο Τ (LT) και μικρές T (ST) ογκοπρωτεΐνες αντιγόνο [5, 6]. Όλες οι όγκοι MCV-MCC εξεταστεί μέχρι σήμερα, όχι μόνο φέρουν κλωνικά ολοκληρωμένη ιό, αλλά επίσης να διαθέτουν κλωνική όγκου-ειδικά μεταλλάξεις LT που περικόψει το Ο-άκρο και να διαταράξουν τις λειτουργίες ελικάσης της πρωτεΐνης LT [5, 7, 8]. p53 στόχευση μέσω μιας διμερούς τομέα αλληλεπίδραση του αντιγόνου LT του σχετίζεται στενά πιθήκου κενοτοπιοποιητικής 40 του ιού (SV40) είναι απαραίτητη για τη δραστηριότητα μετασχηματισμού SV40 LT του. Ωστόσο, δεν υπάρχει ανάλογο τομέα p53 στόχευση έχει εντοπιστεί είτε για MCV LT ή το St ογκοπρωτεΐνες [9-11].

MCV ST είναι ένα επιπόλαιο αναστολέας λιγάση Ε3 [12, 13] και μόνο είναι αρκετή για να μετατρέψει τρωκτικών ινοβλαστών κυτταρικές γραμμές [14]. μετασχηματισμός τρωκτικό κύτταρο MCV sT δεν απαιτεί δραστική πρωτεϊνική φωσφατάση 2Α δραστηριότητα (ΡΡ2Α) -σύνδεση [14]. Αντ ‘αυτού, μια περιοχή που ονομάζεται το μεγάλο πεδίο σταθεροποίηση Τ (LSD) δεσμεύει και αναστέλλει διαφορετικές πρωτεΐνες αναγνώριση λιγάση Ε3 συμπεριλαμβανομένων Fbw7, CDC20 και Cdh1 [12, 13]. Οι δύο τελευταίες πρωτεΐνες είναι υπομονάδες αναγνώρισης για την ανάφαση προώθηση συγκρότημα /κυκλόσωμα (APC /C) και η έκφραση sT προωθεί μιτωτική προμεταφασικά σύλληψης [13]. Αυτό με τη σειρά του αυξάνει CDK1-σκηνοθεσία φωσφορυλίωση της 4Ε-BP1 και ενεργοποίηση της μίτωσης που σχετίζονται με καπάκι-εξαρτώμενη μετάφραση (MACT) [14]. Μεταλλάξεις στο MCV sT LSD εξάλειψη MCV ST-που προκαλείται από το μετασχηματισμό, και νοκ ντάουν είτε LT ή το St ξεκινά κυτταρικό θάνατο ή κυτταρική σύλληψη κύκλο της MCV-θετικών κυττάρων MCC [15, 16].

Πρόσφατα, Spurgeon et al έδειξαν ότι διαγονιδιακά, κεράτινη 14 κατευθυνόμενο από υποκινητή MCC προερχόμενο έκφραση αντιγόνου γενωμική Τ σε δέρμα ποντικού επάγει θηλωμάτωση [17]. Παρομοίως, Verhaegen κ.ά. απέδειξαν ότι η διαγονιδιακή έκφραση MCV sT σε ποντίκια χρησιμοποιώντας ένα κερατίνη 5 (Κ5) προαγωγός προκαλεί βλάβες υπερπολλαπλασιαστικών που μιμούνται ανθρώπινου καρκινώματος πλακωδών κυττάρων

in situ

[18]. Αυτό υπερπλασία εξαρτάται από ένα άθικτο περιοχή LSD MCV ST. Μέχρι σήμερα, όμως, δεν μοντέλα ποντικού κατέδειξαν ότι η διαγονιδιακή έκφραση του αντιγόνου MCV Τ επάγει πλήρη νεοπλασία.

δημιουργούνται διαγονιδιακά ποντίκια που εκφράζουν την υπό όρους MCV sT από το

Rosa 26

locus για τη μέτρηση της ογκογόνο δυναμικό αυτής της ιικής πρωτεΐνης. Επιβεβαιώνουμε ότι η έκφραση MCV sT επάγει μία υπερπλαστική απόκριση σε ιστούς του δέρματος, όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Έχουμε αποδείξει επιπλέον ότι μόνο η παρατεταμένη έκφραση MCV sT σε ένα πλαίσιο ρ53-null παράγει πολύ αναπλαστικό, κακώς διαφοροποιημένο κακοηθειών σε εσωτερικά όργανα. Αυτή η απαίτηση για πολλαπλά ογκογόνο συνεισφορές για την πλήρη μεταμόρφωση είναι παρόμοια με εκείνη που παρατηρείται για το c-myc, Wnt-1 και SV40 LT [19-21]. Βρήκαμε επίσης ότι η επαγωγή MCV sT στα κύτταρα Merkel των εμβρυϊκών ποντίκια οδήγησε σε παροδικές αυξήσεις στους αριθμούς των κυττάρων Μέρκελ, αλλά ήταν ανεπαρκής για να προκαλέσει πολλαπλασιασμό ή ογκογένεση σε πληθυσμούς Μέρκελ κυττάρων ενηλίκων ανεξάρτητα από την κατάσταση p53.

Αποτελέσματα

Δημιουργία MCV sT διαγονιδιακό ποντίκι

ένα διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού με επαγόμενη έκφραση MCV st,

ROSA

sT

, δημιουργήθηκε στην C57BL /6 γενετική φόντο. Να εκφράσουν όρους MCV sT πρωτεΐνη, βελτιστοποιημένων κωδικονίων MCV sT (sTco) cDNA ήταν φορέας κλωνοποιημένα κατάντη ενός

loxP-

πλαισιωμένη ακολουθία νεομυκίνη cDNA φωσφοτρανσφεράση με ένα 5 ‘αλληλουχία ομόλογη με το ποντίκι

Rosa 26

τόπος για να δημιουργήσει

Rosa 26-CAG-LNL-MCVsTco

(Σχήμα 1Α).

Rosa 26-CAG-LNL-MCVsTco

παραδόθηκε με ομόλογο ανασυνδυασμό εντός του τόπου Rosa 26 του ποντικού εμβρυϊκά βλαστικά κύτταρα (ES) (βλέπε λεπτομέρειες για τα υλικά και τις μεθόδους).

(Α) Σχεδιασμός η

Rosa 26-CAG-LNL-MCVsTco

, ένα Rosa 26 νοκ-in κατασκεύασμα κωδικοποίησης βελτιστοποιημένων κωδικονίων MCV sT με συνοδευτικά (LNL) αλληλουχία ΙοχΡ ΙοχΡ-STOP-Neo, ανασυνδυαστεί με το γονιδιακού τόπου Rosa 26.

Rosa 26-CAG-LNL-MCVsTco

διασταυρώθηκαν με

Ubc

CreERT2

ή

Atoh1

CreERT2

ποντίκια επιτρέπει TMX επαγόμενη Cre ανασυνδυάση εκτομή της αλληλουχίας ΙοχΡ-STOP-Neo-ΙοχΡ που έχει ως αποτέλεσμα έκφραση MCV sT υπό τον προαγωγό CAG. έκφρασης (Β) MCV ST είναι θανατηφόρα σε ποσοστό

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

διαγονιδιακά ποντίκια. καμπύλη Kaplan-Meier του υψηλή δόση (0,2 mg /g) και χαμηλή δόση (0,02 mg /g) TMX ενεμένους ποντικούς. Υψηλή δόση ένεσης TMX απώλεια που προκαλείται ταχεία βάρους και ποντίκια έφτασε το κριτήριο της ευθανασίας (απώλεια 20% του σωματικού βάρους) εντός 5 ημερών από την ένεση (n = 4, στερεά πορτοκαλί). Η επιβίωση του ελέγχου

Ubc

CreERT2

ποντίκια (n = 7, διακεκομμένη πορτοκαλί) δεν επηρεάστηκε από την ένεση TMX.

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

ποντίκια ένεση με χαμηλότερη δόση TMX εμφάνισαν σημαντικά παρατεταμένη επιβίωση σε σύγκριση με υψηλή δόση TMX (n = 18, στερεά κόκκινο) και τα ποντίκια ελέγχου ήταν ανεπηρέαστες (n = 10, διακεκομμένες κόκκινες) (C) Multi-ιστό έκφραση της πρωτεΐνης MCV sT στο

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

ποντίκια που πέθαναν αμέσως μετά την υψηλή δόση ένεση TMX (& lt? 5 ημέρες). Κάτω δόση ένεση TMX επάγει λιγότερη πρωτεϊνική έκφραση MCV sT σε ένα ποντίκι που πέθαναν κατά την ημέρα 7 μετά την ένεση όπως ανιχνεύεται με ανοσοαποτύπωση χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα που εγείρεται κατά MCV St, CM8E6 [22]. διάνυσμα MCV sT ή κενό φορέα επιμολυσμένα ΗΕΚ293 κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν ως θετικός και αρνητικός έλεγχος, αντίστοιχα. Ίσες ποσότητες St-επιμολυσμένων λύματα κυττάρων ΗΕΚ293 φορτώθηκαν για την εξομάλυνση σε διάφορες κηλίδες. Hsp70 /Hsc70 ανιχνεύθηκε ως έλεγχος ποιότητας πρωτεΐνη. έκφραση της πρωτεΐνης (Δ) MCV sT διατηρήθηκε στους ιστούς του

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

ποντίκια που επέζησαν πάνω από 70 ημέρες μετά την ένεση χαμηλή δόση TMX. Τα ανοσοστυπώματα εκτελέσθηκαν όπως στο (C). λύματα ιστού από

ROSA

sT

χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικός μάρτυρας.

Η

Υψηλού Επιπέδου Έκφραση του MCV sT σε ιστούς είναι θανατηφόρος στα ποντίκια

για την πρόκληση όρους CRE-ΙοχΡ ανασυνδυασμού και έκφρασης sT σε πολλαπλά όργανα,

ROSA

sT

ποντίκια που συνδυάζεται με

Ubc

CreERT2

ποντίκια που κωδικοποιεί την ανθρώπινη ubiquitin C υποκινητή με γνώμονα την Cre ανασυνδυάση συγχωνεύεται σε ένα τριπλό μεταλλαγμένη μορφή της που ενεργοποιείται ανθρώπινου υποδοχέα οιστρογόνου με ταμοξιφαίνη (TMX). Εξετάσαμε έκφραση sT σε δύο διαφορετικά επίπεδα δοσολογίας TMX: υψηλή δόση ενεργοποίησης TMX για την προώθηση της μεγάλης εξάπλωσης έκφραση St, και ενεργοποίηση χαμηλή δόση TMX στην οποία ένα στοχαστικό κλάσμα των κυττάρων στους περισσότερους ιστούς θα υποστούν ανασυνδυασμό και την έκφραση sT

.

ενεργοποίηση CreERT2 υψηλής δόσης με μία μόνο ενδοπεριτοναϊκή (ΙΡ) ένεση TMX (0,2 mg ανά γραμμάριο σωματικού βάρους ποντικού) σε ενήλικες

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

ποντίκια που προκαλείται από ταχεία απώλεια βάρους σε όλα τα ποντίκια που εξετάστηκαν (n = 4). Αυτά τα ποντίκια έγιναν αφυδατωμένα, λιγότερο ενεργό κατά την 3η ημέρα μετά την ένεση και έφθασαν τις απώλεια βάρους τελικού σημείου ευθανασία 20% μέσα σε 5 ημέρες. Κανένα από τα ποντίκια ελέγχου αρνητικό για το

Ubc

CreERT2

διαγονιδίου έδειξε σημαντική απώλεια βάρους μετά την ένεση TMX (Σχήμα 1Β).

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

ποντίκια δεν παρουσίασαν απώλεια βάρους με την απουσία της ένεσης TMX, και η επιβίωση τους ήταν συγκρίσιμη με

Ubc

CreERT2

και

ROSA

sT

ποντίκια ελέγχου.

Χαμηλή δόση TMX, στο 10% της υψηλής δόσης (0,02 mg /g), αισθητά μειωμένη θνησιμότητα, με 72% (13/18) των ποντικών που επιβίωσαν 10 ή περισσότερες ημέρες (n = 18) (Σχήματα 1Β και 2Β) παρά τη σταθερή απώλεια βάρους κατά τη διάρκεια του πειράματος. Ένα τέτοιο ποντίκι επέζησαν 144 ημέρες μετά την ένεση TMX πριν φτάσει το κριτήριο της ευθανασίας απώλεια βάρους κατά 20% και αυτό ήταν τότε θεωρείται ότι το τελικό σημείο για την περίοδο της μελέτης.

(Α) Υπερπλαστικοί φαινότυπο στο δέρμα του αυτιού από

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

ποντίκια. Αυτί του δέρματος ιστών από

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

ποντίκια υποβλήθηκαν σε H & amp? Χρώση Ε. (Β) Υπερβλαστικών φαινότυπο στο αυτί του δέρματος του

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

ποντίκια. H & amp? Ε τομές δέρματος του αυτιού από χαμηλή δόση TMX ένεση

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

και

ROSA

sT

ποντίκια τυχαιοποιήθηκαν και αξιολογήθηκαν με τυφλό τρόπο από δύο παθολόγους για υπερκεράτωση /hypergranulosis στο επιδερμίδα και αυξημένη ανωμαλίες κυτταροβρίθεια /εξάρτημα. N /A: Δεν είναι διαθέσιμη από τους ιστούς του αυτιού ήταν φυσιολογικό και δεν συγκομίζονται. . ΝΤ: δεν έχουν δοκιμαστεί

Η

Ανεξαρτήτως της δόσης TMX, ιστό ανοσοαποτύπωση του

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

ποντικούς αποκάλυψε ευρεία έκφραση MCV sT στους μύες, σπλήνα, πνεύμονα, ήπατος, νεφρού, του εντέρου, καρδιάς και του εγκεφάλου ιστούς ποντικών που πέθαναν μέσα σε 10 ημέρες μετά την ένεση TMX λαμβάνοντας υπόψη ότι η χαμηλή δόση TMX που προκαλείται λιγότερο έκφραση της πρωτεΐνης ιστού sT (Σχήμα 1C και S1 Α σχήμα). Δεν έκφραση sT ανιχνεύθηκε σε

ROSA

sT

ποντίκια ελέγχου της ίδιας γέννας. Για ποντικούς που ενέθηκαν με χαμηλή δόση TMX και επιβιώνουν & gt? 10 ημέρες, ωστόσο, η έκφραση της πρωτεΐνης MCV sT σε διάφορους ιστούς ήταν μειωμένη σε σύγκριση με αυτά που επιζούν & lt? 10 ημέρες, με sT πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε μόνο σε αυτί, δέρμα, μυ και τον εγκέφαλο ιστούς με ανοσοστύπωση (σχήμα 1D). έκφραση MCV sT δεν ήταν ανιχνεύσιμη εκτός των μυών για

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

ποντίκια θανατώθηκαν την ημέρα 144 μετά την χαμηλή δόση ένεσης TMX. Αύξηση του αριθμού των TUNEL θετικά επιθηλιακά κύτταρα ανιχνεύθηκαν στο έντερο από το

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

ποντίκια που έλαβαν πολλαπλές υψηλές δόσεις TMX (μία φορά την ημέρα για 3 ημέρες), σε σύγκριση με το

ROSA

sT

ποντίκια ελέγχου (S1 Σχήμα). Άλλα όργανα συμπεριλαμβανομένων της σπλήνας, οι πνεύμονες και τα νεφρά έδειξαν παρόμοια αποτελέσματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Low Dose MCV sT Έκφραση Προκαλεί Δερματική και Επιδερμική υπερπλασία σε ιστούς αυτί

του

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

ποντίκια που επέζησαν πάνω από 42 ημέρες μετά την ένεση TMX (n = 12), το ακαθάριστο εξωτερικό εξέταση έδειξε εντυπωσιακή διμερείς και διάχυτη πάχυνση του αυτιά. MCV sT πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε με ανοσοκηλίδωση ιστών αυτιού σε 77,8% των ποντικών (7/9, τρεις ιστούς αυτί δεν συλλέχθηκαν) και επαγωγή sT συνδέθηκε με υπερπολλαπλασιασμό των χόριο και την επιδερμίδα με μικροσκοπία σε 61,1% (11/18) του

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

ποντίκια (Σχήμα 2Α). τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης MCV St, ωστόσο, δεν σχετίζονται με αυτό το φαινότυπο. Δύο ποντίκια επιβιώνουν για πάνω από 117 ημέρες (9F και 9Μ) παρουσίασαν υπερπλαστικών φαινότυπο αυτί παρά την έλλειψη ανιχνεύσιμης έκφρασης πρωτεΐνης sT στα αυτιά. Ούτε

ROSA

sT

ούτε

Ubc

CreERT2

ποντίκια ελέγχου κατέδειξε αυτή φαινότυπο αυτί. Αιματοξυλίνη & amp? ηωσίνη (Η &? Ε) χρώση του πυκνωμένου ιστού αυτιού έδειξε επιθηλιακά υπερκεράτωση (90,9%, 10/11) και hypergranulosis (81,8%, 9/11) (Σχήμα 2). Άλλα από τα ακαθάριστα και μικροσκοπικές ανωμαλίες του αυτιού, ανιχνεύσαμε καμία άλλη υπερπολλαπλασιαστική βλάβη σε αυτή την ομάδα του Αγίου εκφράζουν ποντίκια.

MCV sT Έκφραση Προκαλεί αυξημένη διάδοση των πυρηνικών όπλων στο ποντίκι εμβρυϊκούς ινοβλάστες

Για να διερευνηθεί η δερματική ινοβλαστικά διάδοσης και να προσδιοριστεί αν MCV sT επηρεάζει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε αυτό το μοντέλο ποντικού, απομονώσαμε τα εμβρυϊκά ινοβλάστες ποντικού (ΠΜΑ) από το

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

και

ROSA

sT

έμβρυα.

In vitro

θεραπεία με 500 nM 4-υδροξυ ταμοξιφένη (4-OHTMX) που προκαλείται από την έκφραση MCV sT στο

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

ΠΜΑ (n = 8 έμβρυα), αλλά όχι

ROSA

sT

ΠΜΑ (n = 2 έμβρυα) (Σχήμα 3Α). Μερικά Οι MEF έδειξε διαρροή έκφραση MCV sT ακόμη και εν απουσία του 4-OHTMX θεραπεία (Εικ S2A). έκφραση c-myc, το οποίο έχει δειχθεί να σταθεροποιηθεί με MCV sT [12], αυξήθηκε επίσης με έκφραση MCV sT (Σχήμα 3 και S2B Εικ). WST-1 δοκιμασία πολλαπλασιασμού των κυττάρων έδειξαν ότι επιταχυνόμενη ανάπτυξη εμφανίστηκαν σε

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

αλλά όχι

ROSA

sT

ΠΜΑ (Σχήμα 3 και S2B σχήμα).

(Α) Επαγωγή MCV sT σε κύτταρα ποντικού πολλαπλές εμβρυϊκών ινοβλαστών (MEF) από γέννας με 4-OHTMX. ΠΜΑ που προέρχονται από το

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

και

ROSA

sT

έμβρυα καλλιεργήθηκαν παρουσία ή απουσία 500 ηΜ 4-OHTMX για 7 ημέρες. πρωτεϊνική έκφραση MCV ST και c-Myc ανιχνεύθηκε με ανοσοστύπωμα. έκφραση πρωτείνης Hsp /Hsc70 ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. έκφρασης (Β) MCV sT επιταχύνει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων στο ΥΠΟΙΟ κύτταρα. Πολλαπλασιασμό του ΥΠΟΙΟ κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με ή χωρίς 4-OHTMX εκτιμήθηκε από δοκιμασίες Wst1.

Η

MCV sT Έκφραση σε p53 Null Ποντίκια Παράγει αναπλαστικό, ελάχιστα διαφοροποιημένο Νεοπλασία Εκφράζοντας Μικτή Μαρκαδόροι Lineage στη σπλήνα και το συκώτι

Για να παρακάμψουν τη θνησιμότητα που παράγεται από την έκφραση MCV sT όπως αντανακλάται από υψηλούς δείκτες TUNEL στους ιστούς και ταχύ θάνατο από την απώλεια βάρους των πειραματικών ποντικιών, περάσαμε

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

ποντίκια με

p53

Flox /Flox

ποντίκια για να δημιουργήσει

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

?

p53

Flox /Flox

ποντίκια. Σε αυτά τα ποντίκια, η χορήγηση TMX ταυτόχρονα επαγόμενη έκφραση MCV ST και

p53

γονίδιο διαγραφή. Παρ ‘όλα αυτά, όταν η υψηλή δόση (0.2 mg /g) TMX παραδόθηκε ip, έκφραση MCV sT ανιχνεύθηκε σε πολλαπλούς ιστούς και όλα τα ποντίκια πέθαναν μέσα σε 5 ημέρες (n = 9), γεγονός που υποδηλώνει ότι

p53

διαγραφή δεν διάσωση θνησιμότητα που προκαλείται από υψηλά επίπεδα έκφρασης sT (S3A Εικ). Όπως και με p53 ποντίκια άγριου τύπου, τα βραχυπρόθεσμα επιβίωσης για

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

?

p53

Flox /Flox

ποντίκια ήταν μεγαλύτερη για χαμηλή δόση σε σύγκριση με υψηλή δόση TMX ποντίκια που έλαβαν αγωγή (S3A σχήμα) και 42,3% (11/26) ποντίκια πέθαναν μέσα σε 10 ημέρες από χαμηλή δόση ένεσης TMX. Ευρεία έκφραση πρωτεΐνης MCV sT ανιχνεύθηκε επίσης σε πολλαπλούς ιστούς από αυτά τα ποντίκια που πέθαναν μέσα σε 10 ημέρες από χαμηλή δόση ένεσης TMX (S3b Εικ).

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

?

p53

Flox /Flox

ποντίκια εμφάνισαν επίσης την υπερκεράτωση /hypergranulosis φαινότυπο δέρμα του αυτιού φαίνεται στο ρ53 άγριου τύπου, St-εκφράζοντας ποντίκια (S4 σχήμα).

Περίπου το 19% των

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

?

p53

Flox /Flox

ποντίκια (5/26) επέζησαν 60 ή περισσότερες ημέρες μετά τη χαμηλή δόση θεραπείας TMX (Σχήμα 4Α). Τέσσερα από αυτά τα πέντε (80%) ποντίκια ανέπτυξαν όγκους υψηλής ποιότητας σε εσωτερικά όργανα ορατά κατά τη νεκροψία? τρία ποντίκια είχαν όγκους τόσο στο σπλήνα και το συκώτι, και ένας είχε χονδροειδώς ανιχνεύσιμο οζίδια όγκου στον σπλήνα μόνο (Σχήμα 4Β). Με οπτική μικροσκοπία, τα καρκινικά κύτταρα είχαν υψηλά πλειομορφικές πυρήνες που ποικίλουν δραματικά σε μέγεθος και σχήμα με πολλαπλές πυρηνίσκους και hyperchromatism. Μιτώσεις ήταν πολλές και τα κύτταρα είχαν δυσδιάκριτα κυτταροπλασματική όρια. Μια έρευνα ανοσοαποτύπωση των ιστών (Σχήμα 4C και S5 σχήμα) έδειξαν ότι η ST έντονα εκφράζεται σε αυτούς τους όγκους, ενώ η έκφραση sT δεν ήταν γενικά ανιχνεύσιμα σε σπλήνα και το συκώτι από μακρόβια

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

ποντίκια ή ο όγκος αρνητικών

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

?

p53

Flox /Flox

ποντίκι (Εικ 1D και S5 σχήμα). έκφραση της πρωτεΐνης sT σε σπληνικά όγκους ήταν ανιχνεύσιμη σε 75% (3/4) των ποντικών που φέρουν όγκο (S5 Εικ). έκφραση sT ανιχνεύθηκε επίσης με ανοσοκηλίδωση ενός αντιπροσωπευτικού ήπατος οζίδιο που λαμβάνονται από προσβεβλημένο ποντίκι (p53.7F, Σχήμα 4C). Για ορισμένα από αυτά τα ποντίκια (2/5), MCV sT εκφράστηκε επίσης σε ιστούς νεφρών και ιστοπαθολογική εξέταση έδειξε σημειώνονται πολλαπλασιαστικές αλλαγές στο σωληνοειδές επιθήλιο που κυμαίνονται από

in situ

βλάβες σε πλήρως κακοήθεις αλλοιώσεις με εισβολή μέσω των βασικών μεμβρανών. Παρά μικροσκοπική αποδείξεις για νεφρική νεοπλασία, διακριτά νεφρών όγκοι δεν ήταν ανιχνεύσιμα από το ακαθάριστο εξέταση κατά τη νεκροψία. Ανοσοϊστοχημεία έδειξε ισχυρή έκφραση της MCV sT εντοπισμού με τις κακοήθεις αλλοιώσεις από το ήπαρ και τη σπλήνα, και υπερπολλαπλασιαστικών και κακοήθεις επιθηλιακές βλάβες του νεφρού (Σχήμα 4D). Τα αποτελέσματα αυτά αναπαράγονται σε 1/2 χαμηλή δόση TMX ένεση (0,01 mg /g). επιβίωση ποντίκι αντιστρόφως ανάλογη προς TMX δοσολογία σε 0,01, 0,02 και 0,2 mg /g (S3 Εικ). 87,5% (7/8) του

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

? p53

Flox /Flox

ποντίκια που επέζησαν πάνω από 60 ημέρες, με 0,01 mg /g TMX επίσης ανέπτυξαν όγκους υψηλού βαθμού στο σπλήνα ή /και στους ιστούς του ήπατος (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Εμείς δεν τήρησε ογκογένεση από μόνο του γονιδίου p53 διαγραφή στο

Ubc

CreERT2

? p53

Flox /Flox

ποντίκια μέχρι 140 ημέρες μετά από 0,02 mg /g TMX επεξεργασία (Σχήμα 4Α). Ενώ διαγραφή βλαστικής γραμμής του ρ53 σε αυτό το μοντέλο ποντικού προάγει σχηματισμό όγκων συντομότερο 50 ημέρες, έχει δειχθεί ότι μετά την γέννηση διαγραφή του γονιδίου ρ53 οδηγεί σε μία συχνότητα εμφάνισης όγκου από μόνο το 3%, ακόμη και 600 ημέρες μετά τη μεταγωγή Cre ανασυνδυάση, υποδεικνύοντας ότι η χρονική στιγμή της απώλεια p53 είναι ένας κρίσιμος καθοριστικός παράγοντας για την εμφάνιση όγκων [23, 24].

(α) p53 κατάλυσης δεν διασώσει ποντίκια από MCV sT-επαγόμενη θνησιμότητα. Καμπύλη Kaplan-Meier χαμηλή δόση (0,02 mg /g) TMX ένεση

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

? p53

Flox /Flox

ποντίκια (Solid μπλε γραμμή, n = 26) και

Ubc

CreERT2

? p53

Flox /Flox

ποντίκια (διακεκομμένη μπλε γραμμή, n = 10). Ροζ γραμμές δείχνουν την επιβίωση των

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

(συνεχής γραμμή)

και

Ubc

CreERT2

(διακεκομμένη γραμμή) ποντίκια με άγριου τύπου ρ53, όπως φαίνεται στο Σχήμα 1 Β για σύγκριση με φόντο ρ53 knockout (μπλε γραμμές). (Β) έκφραση MCV sT παράγει όγκους

in vivo

στο

p53

μηδενική ρύθμιση. 80% (4/5) των ποντικών που επιβίωσαν επί 60 ημέρες μετά την ένεση TMX αναπτύξουν χονδροειδώς ορατή όγκου στο σπλήνα και το ήπαρ. Αντιπροσωπευτικά σπλήνα και το ήπαρ ιστούς με οζίδια όγκων από p53.7F δείχνεται με τα αντίστοιχα φυσιολογικούς ιστούς από ένα ποντικό ελέγχου C57BL /6. (C) Ανοσοκηλίδωση έκφρασης πρωτεΐνης MCV sT σε ήπαρ και σπλήνα ιστών από ποντικό p53.7F) με μακροσκοπική όγκους. Σπλήνα, των μυών και των ιστών του αυτιού διατηρείται σταθερή έκφραση sT πάνω από 60 ημέρες μετά την ένεση TMX. έκφραση sT ήταν ανιχνεύσιμη σε ιστούς ήπατος με ανοσοκηλίδωση μόνο από ήπαρ με ορατό οζίδια (p53.7F ποντίκι). MCV sT πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας CM8E6 αντίσωμα, και η έκφραση HSP /Hsc70 χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. (Δ) Το άνω πάνελ δείχνει αναπλαστικό νεοπλασία στο σπλήνα και το ήπαρ. Μια σειρά από πολλαπλασιαστικές αλλαγές παρατηρήθηκε στο νεφρό, όπου πλήττονται περισσότερο άπω σωληνοειδούς επιθήλια, αλλά σπειράματα (μαύρο βέλος), εγγύς σωληνοειδές επιθήλιο (*), και διάμεση ιστοί σχετικά είναι ανεπηρέαστοι πολλαπλασιαστικών αλλαγές. Το μεσαίο πάνελ δείχνει ένα αντιπροσωπευτικό ανοσοϊστοχημική χρώση της έκφρασης της πρωτεΐνης sT στο ήπαρ του όγκου, του όγκου του σπλήνα και τα νεφρά από το

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

? p53

Flox /Flox

ποντίκια. Τα δείγματα ιστού ανοσοχρώση με MCV sT (CM5E1) αντίσωμα. (Ε) Η κορυφή του πίνακα δείχνει μια ST-επαγόμενη ήπατος όγκου με ανοσολογική αντίδραση σε α-λείων μυών ακτίνης (ASMA) και στο κάτω μέρος του πίνακα δείχνει Κ14 θετικότητα σε διάσπαρτα καρκινικά κύτταρα.

Η

Για τον προσδιορισμό της ιστογένεση του Αγίου επαγόμενη νεοπλασία, όγκοι από

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

?

p53

Flox /Flox

ποντίκια ανοσοχρώση με δείκτες για διάφορες καταγωγές: CD45 (παν-λεμφοκυττάρων), CD68 (μακροφάγων), α-ακτίνη των λείων μυών (ASMA-λείων μυών ), κυτοκερατίνης 14 (επιθηλιακό), κυτοκερατίνη 8 (επιθηλιακά), νευρικό μόριο προσκόλλησης (NCAM). Τα καρκινικά κύτταρα ήταν ομοιόμορφα ASMA θετικές. Διάσπαρτα καρκινικά κύτταρα έδειξαν θετικότητα σε CK14 και NCAM (Σχήμα 4Ε). Είδαμε καμία χρώση με άλλους δείκτες, συμπεριλαμβανομένων CD68 και CD45 (S6 σχήμα).

p53 Κατάλυση απαιτείται για την πλήρη υλοποίηση των ΠΜΑ από MCV sT

Δεδομένου ότι MCV ST είναι μια μετατροπή ογκοπρωτεΐνη στην p53-null ποντίκια, πραγματοποιήσαμε αναλύσεις μετασχηματισμού χρησιμοποιώντας απομονωμένες ΠΜΑ από το

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

,

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

?

p53

Flox /Flox

,

Ubc

CreERT2

?

p53

Flox /Flox

και

ROSA

sT

ποντίκια. Κατά την επεξεργασία 4-OHTMX, οι κλώνοι των ΠΜΑ που απομονώθηκαν από δύο ανεξάρτητες

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

?

p53

Flox /Flox

σχηματίζεται ποντίκια αποικίες 4 εβδομάδες μετά την ενιαία κυττάρων σποράς σε μαλακό άγαρ πολιτισμό (Εικ 5A-5C). Ούτε η έκφραση MCV sT μόνο (

Ubc

CreERT2

?

ROSA

sT

) ούτε p53 νοκ-άουτ μόνο (

UBC

CreERT2

?

p53

Flox /Flox

) σχηματισμός αποικίας που προκαλείται (Σχήμα 6Β). Αυτά τα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με το

in vivo

αποτελέσματα ογκογένεση μας.

(Α) MCV sT επάγει μαλακό άγαρ σχηματισμό αποικιών σε απουσία ρ53 σε MEF κύτταρα. ΥΠΟΙΟ κύτταρα που απομονώνονται μορφή

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

,

ROSA

sT

,

Ubc

CreERT2

? p53

Flox /Flox

και δύο

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

? p53

Flox /Flox

έμβρυα από νεογνά υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 500ηΜ 4OHTMX πάνω από 7 ημέρες, και τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε δοκιμασία σε μαλακό άγαρ σχηματισμού αποικίας. Οι αστερίσκοι (*) δηλώνουν στατιστική σημαντικότητα

p & lt?. 0

05

. (Β) Μαλακή αποικίες άγαρ που προκαλείται από ρ53 κατάλυσης. p53 εκτομή μόνη δεν οδηγούν σε σχηματισμό αποικιών. (Γ) έκφραση της MCV sT στην ΠΜΑ από το

Ubc

CreERT2

? ROSA

sT

? p53

Flox /Flox

.

Η

Wholemount, Κ8-ανοσοχρωματίστηκε δέρμα δείχνει θόλους αφής από γέννας ελέγχου (A, C, F, H, K),

Atoh1

CreERT2 /+

?

ROSA

sT

(Β, D, G, I) και

Atoh1

CreERT2 /+

?

ROSA

sT

?

p53

Flox /Flox

(L) ποντίκια στα οποία δόθηκε TMX σε Ρ28 (Α-Δ) ή Ε14.5 (F-I, K, L). Ηλικία κατά την συγκομιδή του ιστού δείχνεται για κάθε ζεύγος πλαισίων. (E, J, M) γραφικές παραστάσεις που δείχνουν τον αριθμό των κυττάρων Μέρκελ ανά αφής θόλο για συνοδευτικά πάνελ. * P & lt? 0.05, *** p & lt? 0.001. μπαρ κλίμακα:. 10μm

Η

MCV sT Έκφραση Αυξάνει εμβρυϊκά Μέρκελ κυττάρων Προδρόμου διάδοσης, αλλά δεν επηρεάζουν τους αριθμούς κυττάρων ενηλίκων Μέρκελ ή να προκαλέσει Ογκογένεση

MCC εκφράζει φαινοτυπικών δεικτών πιο παρόμοιες με αυτές που εκφράζονται από κανονικό, κάτοικος του δέρματος κύτταρα Merkel. Να εξετάσει την επίδραση του Αγίου στο συγκεκριμένο τύπο κυττάρων, που στοχεύουν sT στα κύτταρα Merkel από την αναπαραγωγή

ROSA

sT

ποντίκια στο

Atoh1

CreERT2 /+

ποντίκια [25]. Atoh1 είναι βασικός παράγοντας μεταγραφής έλικας-βρόχου-έλικα μιας ατονική ομάδα προνευρικών με αντι-ογκογόνο λειτουργία [26] που παίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην ανάπτυξη των κυττάρων Merkel [27]. Η

Atoh1

CreERT2 /+

?

ROSA

sT

ποντίκια και ελέγχου

ROSA

sT

αδερφάκια δόθηκε μια μοναδική δόση της ταμοξιφαίνης (0,25 mg /g ) μέσω του στόματος καθετηριασμό σε μεταγεννητική ημέρα 28 (Ρ28) για την ενεργοποίηση της έκφρασης sT ειδικώς σε κύτταρα Merkel [28]. Επιστροφή δέρματος συλλέχθηκε 7 ημέρες ή 12 μήνες αργότερα και ανοσοβαφή για την Μέρκελ κερατίνη δείκτη κυττάρων 8 (Κ8). Και στα δύο χρονικά σημεία, ο αριθμός των κυττάρων Merkel ανά αφής θόλο ήταν χαμηλότερη σε

Atoh1

CreERT2 /+

?

ROSA

sT

ποντίκια σε σύγκριση με το

Atoh1

+ /+

?

ROSA

sT

ποντίκια ελέγχου, σύμφωνα με προηγουμένως αναφερθεί επιδράσεις της ετεροζυγωτίας στο

Atoh1

τόπο [28] (Σχήμα 6Α-6Ε). Σε καμία στιγμή δεν βρίσκουμε αφής θόλους με εξαιρετικά υψηλούς αριθμούς κυττάρων Μέρκελ, έκτοπη κύτταρα Merkel ή ένδειξη σχηματισμού όγκων. Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι η ST έκφραση μόνη της σε κύτταρα Merkel ενηλίκων δεν επάγει κυτταρική διαίρεση ή καρκινογένεση.

Μιτωτικά

Atoh1

+ προγονικά κύτταρα παράγουν ώριμα κύτταρα Merkel κατά τη διάρκεια της εμβρυογένεσης τέλη [28]. Για τη μελέτη των επιπτώσεων της έκφρασης sT σε αυτό τον πληθυσμό, θα χορηγείται ταμοξιφαίνη σε εγκύους φράγματα σε Ε14.5 και συλλέγονται τα έμβρυα σε E18.5 ή σε 5 μήνες της ηλικίας. Βρήκαμε ότι E18.5

Atoh1

CreERT2 /+

?

ROSA

sT

ποντίκια είχαν ~ 50% περισσότερα κύτταρα Merkel από τους ελέγχους της ίδιας γέννας, ενώ το 5 μηνών

Atoh1

CreERT2 /+

?

ROSA

sT

ποντίκια είχαν ~ 30% λιγότερα κύτταρα Merkel από τους ελέγχους της ίδιας γέννας τους (Σχήμα 6F-6J). Δεν όγκοι βρέθηκαν σε οποιαδήποτε ηλικία. Αυτά τα δεδομένα είναι συνεπή με την έκφραση sT προώθηση της μίτωσης σε ενεργά διαιρούμενα πληθυσμούς κυττάρων, και αποδεικνύουν ότι τρούλο αφής οι αριθμοί Μέρκελ κυττάρων ρυθμίζεται ακόμη και στο πρόσωπο αυτής της αυξημένης διαίρεσης. Όπως και σε ενήλικα ζώα, η έκφραση MCV sT δεν μετατρέπουν αυτά τα κύτταρα.

Για να προσδιορίσετε αν συνδυαστεί έκφραση ST και η απώλεια της p53 θα προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων Μέρκελ, χορηγήσαμε TMX να Ε14.5

Atoh1

CreERT2 /+

?

ROSA

sT

?

p53

Flox /Flox

ποντίκια και η συγκομιδή του δέρματος στο Ρ28. Εμείς δεν βρήκε αυξήσεις στους αριθμούς των κυττάρων Μέρκελ και κανένα στοιχείο της ογκογένεσης (Εικ 6K-6M). Σε αντίθεση με St-που προκαλείται από το συκώτι και τη σπλήνα νεοπλασία, τα στοιχεία αυτά δείχνουν ότι η έκφραση sT σε συνδυασμό με το

p53

διαγραφή είναι ανεπαρκής για την προώθηση διαρκούς διαίρεσης Μέρκελ κυττάρων ή ογκογένεση.

Συζήτηση

MCV sT μεταμορφώνει αθανατοποιημένων ινοβλαστών τρωκτικών όπως RAT 1 και ΝΙΗ3Τ3 [14] και ιϊκής έκφρασης sT απαιτείται για την ανάπτυξη του MCV-θετικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές MCC [15, 16]. τρέχοντα δεδομένα μας δείχνουν ότι η έκφραση MCV στο πλαίσιο της απώλειας ρ53 προωθεί πλήρως νεοπλασματικές αλλοιώσεις σε ποντίκια. Θεωρούμε ότι MCV sT επάγει τον πολλαπλασιασμό των εμβρυονικών κυττάρων Μέρκελ, αλλά δεν επαρκεί για να ανακεφαλαιώσω πλήρως καρκίνωμα Μέρκελ ανεξάρτητα από το καθεστώς p53.

Πρόσφατα, Verhaegen et al έδειξαν ότι το επιθήλιο-ειδική έκφραση sT χρησιμοποιώντας έναν προαγωγό Κ5 σε C57BL /6 επαγόμενη από ποντίκια αλλοιώσεις που μοιάζουν με υπερπλαστική πλακώδες καρκίνωμα

in situ

[18]. Αυτή η πολλαπλασιαστική επίδραση που προκαλείται μέσω του τομέα MCV sT LSD, η οποία έχει βρεθεί να στοχεύουν πολλαπλές πρωτεΐνες καταστολής όγκου Ε3 λιγάση [12, 13]. Αντίθετα, βρήκαμε ότι πανταχού μεταγεννητική επαγωγή της έκφρασης MCV sT ήταν ομοιόμορφα θανατηφόρο σε ποντικούς μετά ένεση με υψηλή δόση TMX. διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού μας απασχολεί βελτιστοποιημένων κωδικονίων MCV sT cDNA, το οποίο οδηγεί σε υψηλότερη έκφραση της πρωτεΐνης από τη φυσική αλληλουχία sT cDNA (τα δεδομένα δεν φαίνονται), και κυτταροτοξικά αποτελέσματα από αυξημένα επίπεδα έκφρασης MCV sT μπορεί να ευθύνεται για αυτή τη διαφορά. Αυτί, δέρμα, μυ και τον εγκέφαλο ιστούς διατηρείται έκφραση sT καιρό μετά χαμηλής δόσης ένεση TMX, υποδεικνύοντας ότι οι ποντικοί μπορεί να ανεχθεί χιμαιρικά έκφραση του MCV ST.

Spurgeon et al. Επίσης, ανέφερε ότι όταν προέρχονται από όγκους γονιδιωματική Τ αντιγόνο (τόσο ST και MCC-προερχόμενα κολοβωμένη LT) εκφράζεται κάτω από ένα ιδιοσυστατικό υποκινητή Κ14 σε FVB ποντικούς φόντο /N (

K14-MCPyV168

), τα δύο τρίτα των ποντικών είναι βιώσιμα, ενώ το υπόλοιπο των ποντικών πέθαναν ή υποβλήθηκαν σε ευθανασία σε νεαρή ηλικία, λόγω υποσιτισμού [17].