Αφηρημένο

Ιστορικό

ID 2 είναι μέλος μιας υποκλάσης των ρυθμιστών της μεταγραφής που ανήκουν στο ευρύ bHLH (βασική έλικα-βρόχος-έλικα) της οικογένειας των μεταγραφικών παραγόντων. Σε φυσιολογικά κύτταρα, ID2 είναι υπεύθυνη για τη ρύθμιση της ισορροπίας μεταξύ πολλαπλασιασμού και διαφοροποίησης. Πιο πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι ID2 εμπλέκεται στην εξέλιξη του όγκου σε διάφορους τύπους καρκίνου όπως του προστάτη ή του μαστού.

Μεθοδολογία /Principal Εκτίμηση

Σε αυτή την εργασία, ερευνήσαμε, για πρώτη φορά, η σχέση μεταξύ της έκφρασης ID2 σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC), οι ασθενείς και οι κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά και την πρόγνωση αυτών των ασθενών. Ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε σε μικροσυστοιχίες ιστού, η οποία περιελάμβανε 62 όγκους NSCLC. Σε κακοήθεις ιστούς, η έκφραση ID2 έχει ανιχνευθεί τόσο στο πυρηνικό και κυτταροπλασματική διαμερίσματα, αλλά έχουμε αποδείξει ότι μόνο η πυρηνική έκφραση της ID2 συσχετίζεται αντίστροφα με το βαθμό διαφοροποίησης του όγκου (ρ = 0,007). Είναι ενδιαφέρον, μεταξύ των ασθενών με ελάχιστα διαφοροποιημένο όγκους, υψηλή πυρηνική έκφραση της ID2 ήταν μια ανεξάρτητη και δυσμενή προγνωστικό παράγοντα για την επιβίωση (p = 0,036).

Συμπεράσματα

Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ID2 θα μπορούσαν να συμμετέχουν στον όγκο διεργασιών αποδιαφοροποίηση των NSCLC, και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικός δείκτης για ασθενείς με χαμηλής διαφοροποίησης όγκους

Παράθεση:. Rollin J, Bléchet C, Régina S, Tenenhaus Α, Guyétant S, Gidrol X (2009) Η ενδοκυτταρικό εντοπισμό του ID2 έκφρασης έχει προγνωστική τιμή σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 4 (1): e4158. doi: 10.1371 /journal.pone.0004158

Επιμέλεια: Axel Imhof, Πανεπιστήμιο του Μονάχου και το Κέντρο Ολοκληρωμένων Επιστημών Πρωτεΐνη, Γερμανία

Ελήφθη: 8, Ιούλ, 2008? Αποδεκτές: 4 του Δεκεμβρίου 2008? Δημοσιεύθηκε: 8 Ιανουαρίου του 2009

Copyright: © 2009 Rollin et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ID2 (αναστολέας της δέσμευσης του DNA 2) ανήκει στην μια υποκατηγορία πρωτεϊνών, η οικογένεια ID, που βρίσκεται μέσα στο μεγάλο bHLH (βασική έλικα-βρόχος-έλικα) ομάδα των παραγόντων μεταγραφής. Είναι ενδιαφέρον, δεδομένου ότι δεν διαθέτουν την βασική περιοχή, πρωτεΐνες ID δεν δεσμεύονται άμεσα με το DNA και, αντ ‘αυτού, να ενεργεί ως κυρίαρχος αρνητικός ανταγωνιστές των παραγόντων μεταγραφής bHLH κατηγορίας Α. Μεταξύ των γνωστών στόχων πρωτεϊνών ταυτότητας είναι η πρωτεΐνη Ε και τα μέλη της οικογενείας Ets [1]. Οι πρωτεΐνες ID εμπλέκονται στην ανάπτυξη των ιστών [2], [3], και έχουν περιγραφεί ως αναστολείς της διαφοροποίησης πολλών τύπων κυττάρων συμπεριλαμβανομένων μυελοειδή κύτταρα [4], Β λεμφοκύτταρα [5], και μυϊκά κύτταρα [6]. έκφραση ID2 είναι γενικά χαμηλό σε φυσιολογικούς ιστούς, και ρυθμίζεται προς τα πάνω σε όγκους. Υψηλά επίπεδα έκφρασης παρατηρήθηκαν σε κακοήθειες όπως το νευροβλάστωμα [7], [8], ορθοκολικό αδενοκαρκίνωμα [9], σάρκωμα Ewing [10], του καρκίνου του προστάτη [11], και τον καρκίνο του παγκρέατος [12]. Συνολικά, αυτά τα αποτελέσματα προτείνουν ότι ID2 μπορεί να παίξει ένα σημαντικό ρόλο στην έναρξη και την εξέλιξη του όγκου.

Μέχρι σήμερα, υπάρχει μόνο μία μελέτη αξιολόγηση του ρόλου του ID2 στον καρκίνο του πνεύμονα, ειδικά στον καρκίνο του πνεύμονα μικρών κυττάρων (SCLC ) [13]. Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία των θανάτων από καρκίνο σε όλο τον κόσμο. Το πιο άφθονο ιστολογικού τύπου που επηρεάζει περίπου το 80% των ασθενών είναι μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC), σε αντίθεση με μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. Το συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5-ετών των ασθενών με NSCLC είναι περίπου 15% [14]. Μόλις έχει καθιερωθεί μια διάγνωση, οι θεραπευτικές επιλογές είναι συνήθως με βάση το στάδιο και ιστολογία [15], αν και το σύστημα αυτό η διαστρωμάτωση δεν αντικατοπτρίζει με συνέπεια τη βιολογία του όγκου. Ως αποτέλεσμα, πάνω από το 50% των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα σε πρώιμα στάδια τελικά θα πεθάνουν, ενώ άλλοι βρίσκονται σε πιο προχωρημένο στάδιο, θα επιβιώσουν [14], [16], στις οποίες βασίζεται η ανάγκη για επιπλέον προγνωστικούς δείκτες για να προβλέψει καλύτερα την έκβαση της νόσου [17].

σε αυτό το έγγραφο, έχουμε αξιολογήσει την έκφραση του ID2 με ανοσοϊστοχημεία σε μικροσυστοιχίες ιστού ΜΜΚΠ που περιέχει 62 όγκους. Στη συνέχεια διερευνήθηκε περαιτέρω τις σχέσεις μεταξύ της έκφρασης ID2 και κλινικοπαθολογική παραμέτρους, προκειμένου να αξιολογηθεί ο ρόλος της ως προγνωστικός δείκτης για NSCLC.

Αποτελέσματα

ID 2 Έκφραση σε φυσιολογικό πνεύμονα και σε NSCLC ιστοί

η ανοσοχρώση για ID2 εκτελέστηκε σε μία μικροσυστοιχία όγκου (TMA) που περιέχει 62 δείγματα NSCLC από ασθενείς ανθρώπους. Τα κλινικά και ιστολογικά χαρακτηριστικά των ασθενών που περιγράφονται στον Πίνακα 1. Σε μη καρκινικό ιστό των πνευμόνων, ασθενής έως μέτρια έκφραση ID2 ανιχνεύθηκε σε βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα, τόσο στο κυτταρόπλασμα και πυρήνες. Επιπλέον, η ασθενής χρώση ID2 παρατηρήθηκε στο κυτταρόπλασμα των ενδοθηλιακών κυττάρων (Σχήμα 1Α-D)

Α-Β:. ID2 χρώση των επιθηλιακών και ενδοθηλιακών κυττάρων σε μη καρκινικά πνεύμονα. C-F: Εκπρόσωπος έκφραση TMA με ισχυρή χρώση ID2 στον πυρήνα και με μέτρια (C, D) ή αδύναμη (E, F) κυτταροπλασματική χρώση. C, D είναι ελάχιστα διαφοροποιημένα αδενοκαρκινώματα και Ε, F είναι μια κακώς διαφοροποιημένο καρκίνωμα μεγάλου κυττάρου. G-Η: όγκου με απουσία πυρηνική χρώση με μέτρια (G, H) κυτταροπλασματική έκφραση της ID2. G, H είναι μετρίως διαφοροποιημένων ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα.

Η

έκφραση ID2 σε καρκινικά κύτταρα από τους 62 ασθενείς με NSCLC ήταν πολύ διαφορετικά, τόσο από την άποψη της έντασης και εντοπισμού (Σχήμα 1). Από 62 ασθενείς με NSCLC, ένα μεγάλο ποσοστό (98%, 61/62) εξέφρασε ID2 πρωτεΐνη σχεδόν αποκλειστικά σε καρκινικά κύτταρα (διάμεση τιμή της συνολικής βαθμολογίας χρώση = 3? Εύρος 0-18). Πυρηνική ανοσοαντιδραστικότητα ήταν θετική σε 33 (53,3%) των δειγμάτων NSCLC (διάμεσος όρος πυρηνική χρώση = 1? Περιοχή από 0 έως 11), και κυτταροπλασματική ID2 ανιχνεύθηκε σε 57 (92%) από τους 62 όγκους (διάμεσος κυτταροπλασματική βαθμολογίας χρώσης = 2? εύρος 0 έως 8). Πολλά φτωχά διαφοροποιημένα καρκινώματα εμφάνισαν ισχυρή χρώση ID2 στους πυρήνες σε συνδυασμό με την αδύναμη ή μέτρια κυτταροπλασματική χρώση (Σχήμα 1Ε-J). Σε αντίθεση, ID2 δεν εκφράστηκε στους πυρήνες των εν μέρει ή πλήρως διαφοροποιημένα όγκους, ενώ αδύναμη έως μέτρια έκφραση παρατηρήθηκε στο κυτταρόπλασμα (Σχήμα 1Κ-P).

Σύλλογος ID2 έκφρασης με κλινικοπαθολογικών παραμέτρων

Η διάμεση τιμή της βαθμολογίας χρώση για είτε πυρηνικών, κυτταροπλασματικό ή παγκόσμια έκφραση ID2, όπως περιγράφηκε ανωτέρω, χρησιμοποιήθηκε ως μια περικοπή off να χαρακτηρίσει ασθενείς σε δύο ομάδες: «χαμηλό» (δηλαδή, χαμηλή έκφραση ID2) και «υψηλή» (δηλαδή, υψηλή έκφραση ID2). Η πολλαπλή ανάλυση συστατικό (MCA) διεξήχθη σε δεδομένα που συλλέγονται από τους 62 ασθενείς και η γραφική παράσταση παρουσιάζεται στο Σχήμα 2Α. Εν συντομία, μεταβλητή γειτονιές στο γράφημα που ενδεχομένως συνδέονται μεταξύ τους. MCA έδειξε ότι η χαμηλή πυρηνική έκφραση της ID2 συνδέθηκε με καλά διαφοροποιημένο όγκων και τη συμμετοχή των λεμφαδένων. Σε αντίθεση, η υψηλή έκφραση του ID2 στον πυρήνα, παρατηρήθηκε πιο συχνά σε όγκους που ήταν πτωχά διαφοροποιημένα και είχε προχωρημένη τοπική εισβολή (κατάσταση Τ3-Τ4). Σε συνεργασία με MCA, DEMOD ανάλυση διεξήχθη και έδειξε μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ πυρηνική έκφραση του ID2 και ιστολογική διαφοροποίηση του NSCLC (Σχήμα 2Β). Τα αποτελέσματά μας έδειξαν 15 από 17 (88%) καλά διαφοροποιημένοι όγκοι εμφάνισαν χαμηλά επίπεδα έκφρασης του ID2. Επιπλέον, ελάχιστα διαφοροποιούνται οι όγκοι είχαν ισχυρή πυρηνική έκφραση της ID2 (p = 0,007) σε 12 από τα 19 (63%) περιπτώσεις. Ωστόσο, καμία σημαντική σχέση βρέθηκε μεταξύ της έκφρασης ID2 και η συμμετοχή των λεμφαδένων ή το καθεστώς T, πιθανώς λόγω της άνισης κατανομής του καθεστώτος Τ μεταξύ των ομάδων (52 και 10 ασθενείς με Τ1-Τ2 και Τ3-Τ4, αντίστοιχα). Η κυτταροπλασματική έκφραση του ID2 δεν συσχετίστηκε με το βαθμό διαφοροποίησης του NSCLC, αλλά με έκπληξη συνδέεται με το ιστολογικό τύπο των όγκων. έκφραση του όγκου των ID2 ήταν υψηλή σε 22 από τα 33 (67%) περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος σε σύγκριση με 5 από τα 19 (26%) περιπτώσεις ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (p = 0,016) (Εικόνα 2Β).

: Πυρηνική, κυτταροπλασματική, και την παγκόσμια έκφραση της ID2 στους όγκους NSCLC έχουν χρησιμοποιηθεί ως ενεργό μεταβλητές και αντιπροσωπεύονται από τολμηρές πλατείες και κύκλο. Κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά (δηλαδή, διαφοροποίησης, ιστολογικό τύπο, το είδος, το κάπνισμα, το στάδιο, και την ταξινόμηση ΤΝΜ) έχουν χρησιμοποιηθεί ως ενδεικτικά μεταβλητές και αντιπροσωπεύονται από ανοικτές παστίλια. Όλες οι μεταβλητές τοποθετήθηκαν σύμφωνα με το κέντρο βάρους του συνόλου των ασθενών που ανήκουν στην κατηγορία που αντιπροσωπεύεται. Κλινικές παραμέτρους που ενδεχομένως συνδέονται με την έκφραση ID2 είναι υπογραμμισμένες και με πλάγιους χαρακτήρες. Β: Ανάλυση DEMOD διεξήχθη για να προσδιορίσει τις στατιστικές συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης ID2 και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά. Μόνο οι παράμετροι που προσδιορίζονται με MCA έχουν παρουσιάζονται στον πίνακα (δηλαδή, ιστολογικό τύπο, Τ καθεστώς, καθεστώς συμμετοχής των λεμφαδένων, και διαφοροποίηση των όγκων).

Η

μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης

Για να προσδιορίσετε αν ανοσοχρώση της ID2 είχε προγνωστική αξία, εξετάσαμε τη συσχέτιση μεταξύ των παγκόσμιων, πυρηνικά, και κυτταροπλασματική έκφραση ID2 με τη συνολική επιβίωση των ασθενών. Κατ ‘αρχάς, αναλύσαμε τα συμβατικά κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους. Παρατηρήσαμε μια σημαντική επίδραση του σταδίου του όγκου (p = 0,0001) και το μέγεθος του όγκου (p = 0,014) σε ασθενείς συνολική επιβίωση (Εικόνες 3Α-C), ενώ κομβικό κατάσταση (N0 εναντίον Ν +) ήταν οριακά σημαντική (p = 0,06) . Η ιστολογική διαφοροποίηση δεν ήταν ένα προγνωστικό δείκτη σε ομάδα μας των ασθενών με NSCLC (ρ = 0,48? Δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Παρομοίως, δεν παρατηρήσαμε σημαντική διαφορά στη συνολική επιβίωση μεταξύ των ασθενών με υψηλά επίπεδα έκφρασης ID2 και εκείνοι που παρουσιάζουν χαμηλά επίπεδα έκφρασης του ID2 (Σχήμα 3D-E). Ωστόσο, μετά τη διαστρωμάτωση των δεδομένων σύμφωνα με την ιστολογική διαφοροποίηση (Σχήμα 3G-I), πενιχρά διαφοροποιημένο NSCLC ασθενείς με υψηλή πυρηνική έκφραση έδειξε μία μικρότερη συνολική επιβίωση συγκριτικά με τους ασθενείς με χαμηλά πυρηνική έκφραση ID2 (διάμεση επιβίωση = 24 έναντι 41 μήνες αντίστοιχα ? p = 0.036? Εικόνα 3G). Επιπλέον, πολυπαραγοντική ανάλυση με τη χρήση μοντέλου παλινδρόμησης Cox έδειξε ότι η έκφραση της πυρηνικής ID2 σε ασθενείς με χαμηλής διαφοροποίησης όγκους ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για τη συνολική επιβίωση (p = 0,034? RR = 13,7? IC 95% = 1,2 – 161? Πίνακας 2). Αριθ προγνωστική αξία της πυρηνικής έκφρασης ID2 παρατηρήθηκε σε μέτρια ή καλά διαφοροποιημένο όγκων (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα)

Α-Ρ:. Καμπύλες Kaplan-Meier καθορίστηκε για όλους NSCLC ασθενείς (n = 59) σύμφωνα με το στάδιο της νόσου (Α), κομβικών κατάσταση (Β), την κατάσταση Τ (C), πυρηνική (D), κυτταροπλασματική (Ε), και την παγκόσμια έκφραση του ID2 (F). G-I: Kaplan-Meier καμπύλες που λαμβάνονται για τους ασθενείς με ανεπαρκώς διαφοροποιημένο όγκους (n = 18) σύμφωνα με την πυρηνική (G), κυτταροπλασματική (H), και την παγκόσμια (Ι) έκφραση του ID2. Καμπύλες συγκρίθηκαν με δοκιμασία log-rank.

Η

Συζήτηση

Ο ρόλος της ID2 έχει μελετηθεί σε διάφορους τύπους καρκίνου (π.χ., του προστάτη, του μαστού, του παχέος εντέρου, νευροβλάστωμα , και πολύ πρόσφατα μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα), αλλά μέχρι σήμερα, δεν γνωρίζουμε τίποτα για την έκφραση ID2 σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα, η οποία επηρεάζει το 80% των ασθενών με κακοήθειες του πνεύμονα. Εδώ, εστιάσαμε στην έκφραση των ID2 σε NSCLC και η σχέση της με τις κλινικοπαθολογικών παραμέτρων και την πρόγνωση της νόσου. Η έκφραση του ID2 αξιολογήθηκε σε 62 όγκους NSCLC με ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες ιστό. Ενώ η πλειοψηφία των ασθενών που αναλύθηκαν στην παρούσα μελέτη εξέφρασαν ID2, η ομάδα των ασθενών ήταν πολύ ετερογενείς όσον αφορά τόσο το επίπεδο έκφρασης και ενδοκυτταρικό εντοπισμό. Ωστόσο, έχουμε αποδείξει ότι η έκφραση υψηλού ID2 σε πυρήνες φαίνεται να συσχετίζεται με κακή διαφοροποίηση του όγκου. Αυτή η παρατήρηση είναι καλά σε συμφωνία με γνωστές ιδιότητες του ID2, δεδομένου ότι η πρωτεΐνη έχει χαρακτηριστεί ως ένας αναστολέας της διαφοροποίησης σε πολυάριθμους ιστούς, συμπεριλαμβανομένων της επιδερμίδας και των μυών [18], [19]. Έτσι, ID2 αναστέλλει μυϊκή διαφοροποίηση με άμεση αλληλεπίδραση με MyoD, έναν παράγοντα μεταγραφής bHLH απαιτείται για μυοβλαστικής διαφοροποίηση [20]. Επιπλέον, σε καρκίνωμα του προστάτη, ισχυρή έκφραση ID2 συνδέθηκε με πτωχά διαφοροποιημένο ποιότητες του όγκου, γεγονός που υποδηλώνει ότι ID2 θα μπορούσαν επίσης να εμπλέκονται στη ρύθμιση του όγκου αποδιαφοροποίηση [11], [21]. Τα δεδομένα μας έδειξαν ότι ένα υψηλό επίπεδο πυρηνικής έκφρασης ID2 ήταν μια ανεξάρτητη και αρνητικές προγνωστικός δείκτης επιβίωσης σε ασθενείς με φτωχά διαφοροποιημένα καρκινώματα του πνεύμονα. Έτσι, οι ασθενείς με όγκους που εμφανίζουν υψηλή πυρηνική έκφραση της ID2 έχουν 13,7 φορές υψηλότερο κίνδυνο θανάτου από τους ασθενείς με χαμηλή έκφραση του ID2. Η προγνωστική αξία της έκφρασης υψηλού ID2 έχει ήδη καταδειχθεί σε άλλους τύπους καρκίνου, όπως του νευροβλαστώματος και του προστάτη [7], [11], [21], [22], [23]. Ωστόσο, προηγούμενες μελέτες σχετικά με τον καρκίνο του μαστού και μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα έχουν αναφέρει ότι η υψηλή κυτταροπλασματική έκφραση του ID2 συσχετίστηκε με καλή πρόγνωση, ενώ δεν βρέθηκε συσχέτιση μεταξύ της πυρηνικής έκφρασης του ID2 και την επιβίωση των ασθενών [13], [22]. Kamalian

et al.

Πρότεινε ότι σε SCLC αυξημένη έκφραση ID2 σε κυτταρόπλασμα θα μπορούσε να οφείλεται στην εξαγωγή της από τους πυρήνες και μπορεί να μειώσουν την προ-όγκων του ID2. Τα αποτελέσματα αυτά ήταν σε παγκόσμιο επίπεδο σε συμφωνία με τη μελέτη μας, όπως αποδεικνύεται άμεση σχέση μεταξύ της πυρηνικής έκφρασης του ID2 και την επιβίωση των ασθενών. Ωστόσο, οι διαφορές όσον αφορά ID2 εντοπισμού μπορεί να προέρχονται εν μέρει από τις διαφορές μεταξύ των δύο παθολογίες, αλλά και από διαφορές στην εξειδίκευση των αντισωμάτων. Πράγματι, έχουμε χρησιμοποιήσει Zymed αντισώματα, όπως συνιστάται από Perk

et al.

, Ο οποίος προειδοποίησε κατά της χρήσης των κακώς ειδικών αντισωμάτων ID 2 [24]. Συνολικά, τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι τόσο η έκφραση ID2 και ενδοκυτταρικό εντοπισμό πρέπει να αξιολογούνται, προκειμένου να καθοριστεί η πρόγνωση για τους ασθενείς με καρκίνο, συμπεριλαμβανομένων εκείνων με καρκίνο του πνεύμονα. Η ενδοκυτταρική εντόπιση του ID2 μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στον έλεγχο της λειτουργίας ID2 και ρύθμιση του κυτταρικού μοίρα. Kurooka

et al.

Προσδιορίστηκε ότι η πυρηνο-κυτταροπλασματική παλινδρόμηση των ID2 αποτελεί ενεργό μηχανισμό που εξαρτάται από την πρωτεΐνη CRM-1, και συσχετίζεται αντίστροφα με μεταγραφικές καταστολή μέσω της αλληλουχίας E-box [25]. Επιπλέον, Lasorella και Iavarone απέδειξαν ότι η αλληλεπίδραση μεταξύ ID2 και ακτίνη συνδέεται ομόλογο πρωτεΐνης αίνιγμα (ENH) ελέγχει επίσης τον εντοπισμό του ID2 [26]. Πράγματι, προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης ENH αποτρέπει επανατοπικοποίηση της ID2 στο κυτταρόπλασμα σε διαφοροποιημένα κύτταρα νευροβλάστωμα. Αυτό το αποτέλεσμα μας επιτρέπει να προβούμε σε εικασίες σχετικά με την πιθανή εμπλοκή του ENH ή πρωτεΐνη CRM-1 στο μηχανισμό αποδιαφοροποίηση του NSCLC. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η πυρηνική ID2 είναι πιθανό να είναι ένας προγνωστικός παράγοντας σε NSCLC και ENH μεσολάβηση μετατόπιση του ID2 στο κυτταρόπλασμα μπορεί να εξηγήσει την έλλειψη προγνωστική αξία για κυτταροπλασματική ID2. Ωστόσο, ο ρόλος της ID2 στεγανοποίηση σε εξέλιξη όγκου πνεύμονα, αν και δυνητικά ενδιαφέρουσες, θα απαιτήσει περαιτέρω αξιολόγηση.

Ο μηχανισμός με τον οποίο ID2 προωθεί την εξέλιξη του πνεύμονα όγκου δεν είναι ακόμη σαφές. Ωστόσο, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται σε άλλα μοντέλα δείχνουν ότι η δράση του ID2 μπορούσε να εξαρτάται από την αναστολή της Rb ογκοκατασταλτικών μονοπάτι [3], [27]. Επιπλέον, έχει αποδειχθεί ότι ID2 ρυθμίζει επίσης την αγγειογένεση και την απόπτωση μέσω μεταγραφικής ρύθμισης του

VEGF

και

BCL2

γονίδια, αντίστοιχα [28], [29]. Ωστόσο, η δράση του ID2 μπορούσε επίσης να είναι ιστοειδική: σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού, υψηλή έκφραση ID2 μειωμένο δυναμικό ανάπτυξης και τη διεισδυτικότητα, ενώ πάνω ρύθμιση ID2 αυξημένο πολλαπλασιασμό και επεμβατικές δυναμικού σε κύτταρα όγκου προστάτη [11], [22], [23].

Τέλος, αν και τα αποτελέσματα μας είναι προκαταρκτικά, που δείχνουν ότι ID2 θα μπορούσαν να συμμετέχουν στις διαδικασίες αποδιαφοροποίηση του όγκου των NSCLC, και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως δείκτης πρόγνωση για τους ασθενείς με χαμηλή διαφοροποίηση όγκων. Είναι ενδιαφέρον ότι, σε NSCLC, φτωχά διαφοροποιημένα καρκινώματα είναι δύσκολο να ταξινομηθούν, και ως εκ τούτου, η ταυτοποίηση νέων προγνωστικών ιθύνοντες για τη συγκεκριμένη ομάδα μπορεί να συμβάλει στη βελτίωση της θεραπευτικής έκβασης των ασθενών.

Υλικά και Μέθοδοι

δείγματα όγκων

Έχουμε αναλύσει δείγματα ιστών που συλλέγονται σε μια προοπτική ομάδα 62 ασθενών με ΜΜΚΠ, οι οποίοι είχαν υποβληθεί σε πλήρη χειρουργική εκτομή του όγκου των πνευμόνων ως αρχική θεραπεία (δηλαδή, χωρίς προηγούμενη ακτινοθεραπεία ή χημειοθεραπεία) μεταξύ Ιανουαρίου 2002 και Αυγούστου 2004 το Τμήμα Χειρουργικής θώρακος του Είδη Νοσοκομείο (Tours, Γαλλία). Χειρουργικά δείγματα μονιμοποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη και εμβαπτίστηκαν σε παραφίνη για ιστολογική εξέταση ρουτίνας και ανοσοϊστοχημείας. Ιστολογικών τύπων, διαφοροποίηση, ταξινόμηση ΤΝΜ, και το στάδιο ομαδοποίησης (που συνοψίζονται στον Πίνακα Ι) προσδιορίστηκαν σύμφωνα με τα κριτήρια του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας (ΠΟΥ) για όγκους του πνεύμονα [30]. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς που συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη αυτή, όπως συνιστάται από τη γαλλική νομοθεσία.

Ιστός μικροσυστοιχιών Παραγωγής και ανοσοϊστοχημεία

Για μικροσυστοιχίες ιστού (TMA) κατασκευή, αντιπροσωπευτικές περιοχές των δειγμάτων NSCLC προσδιορίστηκαν από μια χειρουργική παθολόγο για αιματοξυλίνη-ηωσίνη (ΗΕ) χρωματισμένο διαφάνειες. Για κάθε όγκο, τρία πυρήνας βιοψίες 1 mm σε διάμετρο ελήφθησαν στη συνέχεια από επιλεγμένες περιοχές του μπλοκ δότη και παρατάσσονται σε ένα μπλοκ δέκτη παραφίνης χρησιμοποιώντας ένα χειροκίνητο arrayer ιστού (μέσα Beecher, Sun Prairie, USA). Τμήματα (πάχους 4 μm) των μπλοκ TMA κόπηκαν και ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας ένα ειδικό αντίσωμα κουνελιού πολυκλωνικό που εγείρεται έναντι ID2 (ZMD.325, Invitrogen, Cergy Pontoise, France). Εν συντομία, το τμήμα TMA ήταν αποπαραφινοποιήθηκαν, επανυδατώθηκαν, και υποβάλλονται σε θερμική ανάκτηση αντιγόνου σε ένα ρυθμιστικό διάλυμα αιθυλενοδιαμινο τετρα οξικό οξύ (MS-Unmasker, ρΗ 7,8, Diapath) για 20 λεπτά. ID2 αντίσωμα εφαρμόστηκε σε αραίωση 1/50. Η ανοσοχρώση πραγματοποιήθηκε με το Εργαστήριο Vision Autostainer (Lab Vision, Fremont, USA) χρησιμοποιώντας ένα σύστημα ανίχνευσης βιοτίνης-στρεπταβιδίνης-υπεροξειδάσης με διαμινοβενζιδίνη ως χρωμογόνο (κιτ ανίχνευσης ChemMate ™, DakoCytomation). Διαφάνειες ήταν αιματοξυλίνη αντιχρώσθηκαν. Η TMA περιείχε δείγματα πυρήνα της κανονικής βρογχιολιδικού βλεννογόνο και πνευμονικό ιστό. Ιδιαιτερότητα της ID2 αντισώματος ήταν ελέγχου, χρησιμοποιώντας καθαρισμένη πρωτεΐνη ID2 ως αρνητικός έλεγχος για να εμποδίσει τη δέσμευση της ID2 αντισωμάτων στα κύτταρα του όγκου (Σχήμα S1).

δύο ανεξάρτητους παρατηρητές (JR, CB) αξιολογούνται τόσο τον εντοπισμό και την ένταση του η χρώση ID2. Η αξιολόγηση αυτή τύφλωσε με τα κλινικά δεδομένα. Αμφότερες οι βαθμολογίες πυρηνικά και κυτταροπλασματική χρώση των κυττάρων όγκου καθορίστηκαν με τον πολλαπλασιασμό του ένταση χρώσης κλίμακα από 0 έως 3 (null = 0, ασθενές = 1, μέτρια = 2, και ισχυρή = 3) από το ποσοστό των θετικών κυττάρων (0 = & lt? 10%? 1 = 10-25%? 2 = 26-50%? 3 = 51-75%? 4 = & gt? 75%). Παγκόσμια έκφραση ID2 στα καρκινικά κύτταρα ελήφθη με την προσθήκη των βαθμολογιών των πυρηνικών και κυτταροπλασματική χρώση.

Στατιστική Ανάλυση

Η πολλαπλή ανάλυση συστατικό (MCA) διεξήχθη σε στοιχεία που συλλέχθηκαν από 62 ασθενείς που χρησιμοποιούν SPAD λογισμικού . Αυτή η μέθοδος είναι μια περιγραφική ανάλυση πολλαπλών μεταβλητών που επιτρέπει την ταχεία ταυτοποίηση των στατιστικών σχέσεων μεταξύ των μεταβλητών. Εν συντομία, οι διαφορετικές κατηγορίες, δηλαδή, ID2 έκφρασης και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά, τοποθετήθηκαν σε πολυδιάστατο χώρο. Προκειμένου να τηρούν τις αποστάσεις μεταξύ των σημείων, που προβάλλονταν σε ένα αεροπλάνο από δύο ορθογώνια στοιχεία,

F

1 και

F

2. Αυτά τα «πρώτη» παράγοντες επιλέχθηκαν να είναι το πιο αντιπροσωπευτικό της παγκόσμιας διακύμανσης των δεδομένων. Επειδή η θέση των κατηγοριών των ενεργών μεταβλητών (πυρηνικά, κυτταροπλασματική, και την παγκόσμια έκφραση του ID2) και τη θέση των παρατηρήσεων (στάδιο, την κατάσταση των λεμφαδένων, την κατάσταση του όγκου, ιστολογικών τύπων, βαθμός διαφοροποίησης, το είδος και το κάπνισμα) υπολογίζονται σε με τον ίδιο τρόπο, μπορούν να τοποθετηθούν στο ίδιο γράφημα (παρατηρήσεις αντικαθίστανται από τα κέντρα της βαρύτητας). DEMOD μέθοδο (λογισμικού SPAD), παρόμοιο με το chi-square test, χρησιμοποιήθηκε επίσης για να συμπληρώσουν τη ΝΕΠ για την ανάλυση της σύνδεσης μεταξύ των ενεργών μεταβλητών (πυρηνικά, κυτταροπλασματική, και την παγκόσμια έκφραση της ID2) και τις ενδεικτικές μεταβλητές (κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά).

η συνολική επιβίωση ήταν υπολογίζονται από τη στιγμή της ιστολογίας τη διάγνωση μέχρι την ημερομηνία του θανάτου από οποιαδήποτε αιτία. Το συνολικό ποσοστό επιβίωσης αναλύθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο Kaplan-Meier, και οι διαφορές στα ποσοστά επιβίωσης εκτιμήθηκαν με τη δοκιμασία log-rank (MedCalc έκδοση λογισμικού 7.3.0.1). Η πολυπαραγοντική ανάλυση των προγνωστικών παραγόντων πραγματοποιήθηκε με τη χρήση μοντέλου Cox αναλογικών κινδύνων (MedCalc).

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση εγκλεισμένοι σε παραφίνη ανθρώπινο NSCLC χρησιμοποιώντας πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού έναντι ID2. IHC πραγματοποιήθηκε με αντίσωμα μόνο (Α και C) ή μετά από εξουδετέρωση του αντισώματος με προεπώαση με 2 μg /mL καθαρισμένης πρωτεΐνης ID2 (ID2 ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη P01, Abnova, Ταϊβάν), όλη τη νύκτα στους 4 ° C, (Β και D).

doi: 10.1371 /journal.pone.0004158.s001

(9.11 MB ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

Είμαστε ευγνώμονες για την ντε Muret (Département d’Anatomie pathologique, CHRU de Tours, Γαλλία) και ο καθηγητής Ρ Dumont (Département de Chirurgie thoracique, CHRU de Tours, Γαλλία) για την παροχή των δειγμάτων των πνευμόνων.