Αφηρημένο

Ιστορικό

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) πολλαπλότητα έχει κυρίως σχέση με πολυποδίαση και μη πολυποδίαση κληρονομικά σύνδρομα. Σε σποραδικές CRC, παρεκκλίνουσα μεθυλίωση του γονιδίου υποκινητή έχει αποδειχθεί ότι παίζει σημαντικό ρόλο στην καρκινογένεση, αν και λίγα είναι γνωστά για τη συμμετοχή της στην πολλαπλότητα. Για να εκτιμηθεί η επίδραση της μεθυλίωσης στην πολλαπλότητα των όγκων σε σποραδικές CRC, υπερμεθυλίωση των βασικών ογκοκατασταλτικών γονιδίων αξιολογήθηκε σε ασθενείς με τόσο πολλούς και μοναχικό όγκων, ως έννοια απόδειξη της μιας υποκείμενης επιγενετικής ελάττωμα.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Εμείς εξέτασε συνολικά 47 σύγχρονοι /metachronous πρωτογενή CRC από 41 ασθενείς και 41 το φύλο, την ηλικία (διαστήματα 5 ετών) και ασθενείς τοποθεσία σε συνδυασμό όγκου με μοναχικά όγκους. Τα κριτήρια αποκλεισμού ήταν σύνδρομα πολυποδίαση, σύνδρομο Lynch και φλεγμονώδη νόσο του εντέρου. Μεθυλίωσης του DNA στην περιοχή του υποκινητή του

MGMT

,

CDKN2A

, S

FRP1

,

ΤΜΕΡΡ2

,

HS3ST2 (3OST2)

,

RASSF1A

και

GATA4

γονίδια αξιολογήθηκε με ποσοτική μεθυλίωσης ειδική PCR τόσο του όγκου και την αντίστοιχη κανονική εμφάνιση του παχέος δείγματα βλεννογόνου. Συνολικά, οι ασθενείς με πολλαπλές βλάβες παρουσίασαν υψηλότερο βαθμό μεθυλίωσης σε δείγματα όγκων από εκείνους με μοναχικά όγκους που αφορούν όλους τους αξιολογήθηκαν γονίδια. Μετά από προσαρμογή για την ηλικία και το φύλο, διωνυμική λογιστικής ανάλυσης παλινδρόμησης προσδιορίζονται μεθυλίωσης του

MGMT2

(Ή, 1,48? 95% CI, 1,10 – 1,97? P = 0,008) και

RASSF1A

(Ή, 2,04 ? 95% CI, 01.01 έως 04.13? p = 0,047), όπως μεταβλητές ανεξάρτητα σχετίζονται με τον αριθμό των όγκων, είναι ο κίνδυνος που συνδέεται με μεθυλίωση του οποιοδήποτε από αυτά τα δύο γονίδια 4.57 (95% CI, 1,53 έως 13,61? p = 0,006). Επιπλέον, σε έξι ασθενείς στους οποίους οι δύο όγκους ήταν διαθέσιμα, βρήκαμε μια συσχέτιση με τα επίπεδα μεθυλίωσης του

MGMT2

(r = 0,64, p = 0,17),

SFRP1

(r = 0,83, 0.06),

HPP1

(r = 0,64, p = 0,17),

3OST2

(r = 0,83, p = 0,06) και

GATA4

(r = 0.6, p = 0,24). Μεθυλίωση σε κανονική εμφάνιση του παχέος βλεννογόνο από ασθενείς με πολλαπλές και μοναχικά CRC δεν έδειξε σημαντική διαφορά σε οποιαδήποτε αξιολόγηση γονίδιο.

Συμπεράσματα

Τα αποτελέσματα αυτά παρέχουν μια απόδειξη της ιδέας ότι η μεθυλίωση του γονιδίου υποκινητή συνδέεται με τον αριθμό των όγκων. Αυτή η υποκείμενη επιγενετικές ελάττωμα μπορεί να έχει αξιοσημείωτες επιπτώσεις στην πρόληψη των ασθενών με σποραδικό CRC

Παράθεση:. Gonzalo V, Lozano JJ, Muñoz J, Μπαλαγκέρ F, Pellisé Μ, de Miguel CR, et al. (2010) Η ανώμαλη γονίδιο υποκινητή της μεθυλίωσης των συνδεδεμένων με Σποραδικές Πολλαπλές τον καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 5 (1): e8777. doi: 10.1371 /journal.pone.0008777

Συντάκτης: Amanda Ewart Toland, Πολιτειακό Πανεπιστήμιο του Οχάιο Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 20 Σεπ, 2009? Αποδεκτές: 23, Δεκεμβρίου του 2009? Δημοσιεύθηκε: 19 Γενάρη, 2010

Copyright: © 2010 Gonzalo et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Ministerio Επιστημών e Innovación (SAF 07-64873), Fondo de Investigación Sanitaria (PI061384 και PI080024), Asociación Española Contra el καρκίνου (Fundación Científica και Junta de Barcelona), Fundación Investigación Médica Mutua Madrileña (PI040296) , Fundación Όλγα Τόρες (PI040212), και Acción en Καρκίνο (Instituto de Salud Carlos III). Victoria Gonzalo υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση από το Hospital Clinic, Cristina Rodriguez με επιχορήγηση από τον Όλυμπο Medical Systems-Ευρώπης, mireya Jimeno με επιχορήγηση από το Instituto de Salud Carlos III (PI016017), Francesc Balaguer με επιχορήγηση από το Fundación Alfonso Martín Escudero και Sergi Castellvi-Bel με σύμβαση από το Fondo de Investigación Sanitaria (CP 03-0070). Centro de Investigación Biomedica en Red en el Área temática de Enfermedades Hepáticas y Digestivas (CIBERehd) χρηματοδοτείται από το Instituto de Salud Carlos III. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Cristina Rodriguez ήταν ένα ερευνητικό νοσοκόμα που χρηματοδοτείται με επιχορήγηση από τον Όλυμπο Medical Systems-Ευρώπη. Ο χρηματοδότης, ωστόσο, δεν συμμετείχε στο σχεδιασμό της μελέτης? συλλογή, ανάλυση και ερμηνεία των δεδομένων? γραφής του χαρτιού? ούτε την απόφαση να υποβάλει προς δημοσίευση.

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι ένα σχετικό πρόβλημα δημόσιας υγείας, δεδομένου ότι αντιπροσωπεύει τη δεύτερη πιο συχνή κακοήθης όγκος και η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις Δυτικές χώρες. Κληρονομικότητα αποτελεί την υποκείμενη αιτία μέχρι και στο ένα τρίτο όλων των περιπτώσεων CRC, με εξαιρετικά διεισδυτικό και σαφώς καθορισμένες κληρονομικές διαταραχές, δηλαδή αδενωματώδεις και hamartomatous πολυποδίαση και το σύνδρομο Lynch, που αντιπροσωπεύουν το 3-5% της συνολικής επιβάρυνσης CRC [1]. Σε αυτές τις συνθήκες, η παρουσία μιας μετάλλαξης βλαστικής σειράς στο γονίδιο αιτιολογικός (δηλαδή

APC

,

MYH

,

LKB1

,

Smad4

,

BMPR1A

,

PTEN

,

MLH1

,

MSH2

,

MSH6

και

PMS2

) [1], [ ,,,0],2], προδιαθέτει τα άτομα αυτά στην ανάπτυξη πολλαπλών παχέος νεοπλασμάτων. Πράγματι, ενώ οικογενή αδενωματώδη πολυποδίαση αντιπροσωπεύει το παράδειγμα της πολλαπλότητας των όγκων, παρουσία είτε σύγχρονη ή metachronous CRC είναι επίσης ένα από τα πιο κοινά κλινικά κριτήρια για να υποψιάζεται σύνδρομο Lynch [3].

Εκτός από τις προαναφερθείσες κληρονόμησε συνθήκες , πολλαπλότητα του όγκου είναι επίσης μια συχνή παρατήρηση σε ασθενείς με CRC που δεν φαίνεται να έχουν προδιάθεση αυτών των νεοπλασμάτων με βάση το γενετικό υπόβαθρο τους. Στην πραγματικότητα, είναι σύγχρονη και metachronous αδενώματα του παχέος εντέρου αναφερθεί σε ποσοστό έως 30% και 48% των ασθενών με σποραδικό CRC, αντίστοιχα, ενώ τα αντίστοιχα ποσοστά για το καρκίνωμα είναι 4% και 9%, αντίστοιχα [4], [5]. Σε αυτή τη ρύθμιση, εμφανές οικογενειακό συνάθροιση καρκίνο ή διακριτικό προσωπικά χαρακτηριστικά δεν είναι ανοιχτά διακρίνονται, και παρόλο που μια γενικευμένη κυτταρική ή μοριακό διαταραχή σε ολόκληρο παχέος βλεννογόνο μπορεί να υπάρχουν υποψίες, η υποκείμενη παθογόνος μηχανισμός παραμένει άπιαστο.

Ένα επίδρασης πεδίου υποκείμενη παχέος καρκινογένεση είναι μια καλά αναγνωρισμένη κατάσταση σε ασθενείς με φλεγμονώδη νόσο του εντέρου, μία προκαρκινικές κατάσταση με αυξημένο αθροιστική κίνδυνο για την ανάπτυξη CRC σχετίζονται με την πρόωρη ηλικία έναρξης, η διάρκεια της νόσου, και την έκταση και τη σοβαρότητα της φλεγμονής [6], [7]. Ο ακριβής μηχανισμός με τον οποίο η χρόνια φλεγμονή του βλεννογόνου του κόλου προκαλεί κακοήθεια σε αυτό το πλαίσιο δεν είναι καλά κατανοητή, αν και υποτίθεται ότι σχετίζεται με μια ανεπάρκεια σε ρυθμιστικούς μηχανισμούς κατά την κυτταρική διαίρεση. Η χρόνια φλεγμονή οδηγεί στην απελευθέρωση των ελεύθερων ριζών από λευκοκύτταρα και τα μακροφάγα, και αυτά τα αντιδραστικά είδη οξυγόνου μπορούν να οδηγήσουν την καρκινογένεση προκαλώντας βλάβη του DNA [8]. Δεδομένου ότι στις περισσότερες περιπτώσεις βλάβης του DNA οδηγεί σε απενεργοποίηση των ογκοκατασταλτικών γονιδίων, η έννοια της «επίδρασης πεδίου» θα μπορούσε να ορισθεί καλύτερα ως «ελάττωμα πεδίο». Υποθετικές εμπλοκή ενός τέτοιου ελαττώματος πεδίο σε σποραδικές CRC, ωστόσο, δεν έχει ικανοποιητικά καθοριστεί μέχρι τώρα.

Σποραδικές CRC προκύπτει ως συνέπεια της συσσώρευσης των γενετικών και επιγενετικών αλλαγών που μετατρέπουν τα επιθηλιακά κύτταρα του κόλου σε κύτταρα αδενοκαρκινώματος κόλου [9]. Η απώλεια της σταθερότητας και της γενωμικού προκύπτον γονίδιο μεταβολές αποτελούν βασικά μοριακά παθογόνα βήματα που εμφανίζονται νωρίς στην ογκογένεση: επιτρέπουν την απόκτηση ενός επαρκούς αριθμού αλλοιώσεων ογκοκατασταλτικά γονίδια και ογκογονιδίων που μετατρέπουν τα κύτταρα και την προώθηση της προόδου του όγκου. Ανάλογη με γενωμική αστάθεια, επιγενετικές αστάθεια ως αποτέλεσμα την παρεκκλίνουσα μεθυλίωση των ογκοκατασταλτικών γονιδίων [9]. Στην πραγματικότητα, επιγενετικές ογκοκατασταλτικό γονίδιο σίγηση έχει συχνά εμπλέκονται σε όλους τους τύπους ανθρώπινων όγκων, συμπεριλαμβανομένων CRC [10]. Παρεκκλίνουσα μεθυλίωση της κυτοσίνης διαδραματίζει εξέχοντα ρόλο στον μετασχηματισμό των κυττάρων όταν επηρεάζει τα γονίδια που προστατεύουν γονιδίωμα αστάθεια. Αυτή η επιγενετική αλλαγή μπορεί επίσης να ανιχνευθεί σε προκαρκινικές αλλοιώσεις και φαινομενικά φυσιολογικών ιστών peritumor [11], [12], [13], [14], [15], γεγονός που υποδηλώνει πιθανή εμπλοκή του στην αρχική καρκινογόνο διαδικασία. Αυτή η υποθετική ελάττωμα πεδίο που σχετίζεται με υπερμεθυλίωση υποκινητή γονιδίου σε φυσιολογικά εμφανίζονται παχέος βλεννογόνο έχει προταθεί σε σχέση με το

MGMT

γονίδιο [12], καθώς και

ΕΚα

,

myod

,

P16 (ΙΝΚ4 &)

,

MLH1

,

Timp3

και

DAPK

[13].

Θεωρώντας ότι η υπερμεθυλίωση περιοχές προαγωγού σε ογκοκατασταλτικά γονίδια θα μπορούσε να παρατηρηθεί σε φυσιολογικά εμφανίζονται ορθοκολικό βλεννογόνου, υποθέσαμε ότι αυτό το φαινόμενο θα είναι ιδιαίτερα σημαντική σε ασθενείς που ανέπτυξαν πολλαπλές CRC. Ως εκ τούτου, ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογήσει προτύπων μεθυλίωσης των γονιδίων που εμπλέκονται σε ορθοκολικό καρκινογένεση μέσω αυτού του μηχανισμού τόσο ιστού όγκου και που φαίνονται φυσιολογικές παχέος δείγματα βλεννογόνου από ασθενείς με σκλήρυνση και μοναχικά CRC, ως έννοια απόδειξη της εικαζόμενης υποκείμενης επιγενετικές ελάττωμα που σχετίζεται με τον αριθμό των όγκων.

Υλικά και Μέθοδοι

ασθενείς

Εμείς εξέτασε συνολικά 47 σύγχρονοι /metachronous πρωτογενή CRC από 41 ασθενείς (36 σύγχρονη, 4 metachronous και ένα δύο) και 41 το φύλο, την ηλικία (διαστήματα 5 ετών) και του όγκου τοποθεσία σε συνδυασμό ασθενείς με μοναχικά όγκους. ασθενείς της ομάδας ελέγχου με μοναχικά όγκους προσλήφθηκαν στο έργο EPICOLON, μια προοπτική, πολυκεντρική, σε εθνικό επίπεδο, του πληθυσμού-με βάση κοόρτης (n = 1.222) [16] και τυχαία επιλεγμένων μεταξύ αυτών χωρίς προηγούμενη CRC και με ελάχιστη παρακολούθηση της 5 χρόνια μετά τη διάγνωση του καρκίνου στην οποία η ομαλή κολονοσκόπηση επιτήρησης δεν εντόπισε καμία πρόσθετη βλάβη. Όσον αφορά τους ασθενείς με πολλαπλές CRC, 31 είχαν επίσης προσληφθεί στο έργο EPICOLON και 10 επιπλέον ασθενείς στη Μονάδα Ενδοσκόπησης στην Κλινική της Βαρκελώνης, μεταξύ Ιουνίου 2007 και Μαΐου 2008. Δεν υπήρχαν διαφορές σε σχέση με τα κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά και των δύο συνόλων των ασθενών με πολλαπλές βλάβες (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τα κριτήρια αποκλεισμού για την παρούσα μελέτη ήταν παχέος σύνδρομα πολυποδίαση, σύνδρομο Lynch και προσωπικό ιστορικό της φλεγμονώδους νόσου του εντέρου. Δημογραφικά, κλινικά και όγκων που σχετίζονται με τα χαρακτηριστικά των ασθενών που συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Η μελέτη εγκρίθηκε από την θεσμική επιτροπή δεοντολογίας της κάθε συμμετέχουσας στο νοσοκομείο, και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς. Τα μέλη του προγράμματος EPICOLON που αναφέρονται στη σημείωση S1.

Η

Κατεψυγμένα όγκου και της αντίστοιχης κανονικής εμφανίζονται, peritumor παχέος ιστούς βλεννογόνου ελήφθησαν είτε σε χειρουργική επέμβαση ή ενδοσκόπηση από όλους τους ασθενείς, και να αποθηκεύονται αμέσως στους -80 ° C μέχρι τη χρήση. Σε ασθενείς με πολλαπλές βλάβες, δείγμα ιστού λήφθηκε από ένα τουλάχιστον του όγκου (το πιο προηγμένο μία ή η μεγαλύτερη όταν πολλαπλούς όγκους είχαν το ίδιο στάδιο όγκου).

Απομόνωση DNA και κατεργασία οξίνου θειώδους

τα κατεψυγμένα δείγματα αποψύχθηκαν και γενωμικό DNA απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το QIAamp DNA Mini Kit® (Qiagen, Valencia, CA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Κατεργασία όξινου θειώδους διεξήχθη σε γονιδιωματικό DNA χρησιμοποιώντας την EZ μεθυλίωσης του DNA-Gold Kit® (Zymo Research, Orange, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή με ελάσσονες τροποποιήσεις που περιγράφονται παρακάτω [17]. Αυτή η διαδικασία ενσωματώσει το μετουσίωση του DNA και διθειώδες μετατροπή σε ένα βήμα, με τη χρήση μετουσίωσης θερμοκρασία να αντικαταστήσει χημική μετουσίωση με υδροξείδιο του νατρίου, και βασίστηκε σε μία διαδικασία αντίδρασης τριών σταδίων μεταξύ κυτοσίνη και όξινο θειώδες νάτριο που μετατρέπει μη μεθυλιωμένα κυτοσίνες σε ουρακίλες. Μία ποσότητα 250 ng γονιδιωματικού DNA που απομονώθηκε από κάθε δείγμα όγκου ή κανονικός ιστός χρησιμοποιήθηκε ανά αντίδραση, και ένας όγκος 15 μΐ χρησιμοποιήθηκε για κάθε bisulfited DNA που πρόκειται να εκλούεται. Το προκύπτον DNA χρησιμοποιήθηκε για ενίσχυση PCR ή αποθηκεύονται στους -80 ° C.

Ποσοτική μεθυλίωσης ειδική PCR

Μετά την μετατροπή διθειώδους, αντίγραφα των 0,5 μΙ κάθε bisulfited DNA ενισχύθηκαν με την τεχνική MethyLight , μια που περιγράφηκε προηγουμένως με βάση φθορισμό ποσοτικής PCR πραγματικού χρόνου, πολύ ειδικά, ευαίσθητη και αναπαραγώγιμη δοκιμασία [18]. Locus ειδικούς εκκινητές PCR και ανιχνευτές για κατασταλτικά γονίδια επτά όγκων –

MGMT1

(ελάχιστο προωθητή),

MGMT2

(ενισχυτή περιοχή),

CDKN2A

,

SFRP1

,

ΤΜΕΡΡ2

,

HS3ST2 (3OST2)

,

RASSF1A

και

GATA4

– έχουν σχεδιαστεί ειδικά για bisulfited μετατρέπονται ακολουθίες DNA και που βρίσκονται σε κάθε περιοχή προαγωγέα γονιδίου. Αυτά τα γονίδια επιλέχθηκαν για τη συμμετοχή τους στην καρκινογένεση του παχέος εντέρου μέσω της μεθυλίωσης με γνώμονα την φίμωση και ένδειξη κάποιου βαθμού υπερμεθυλίωση σε κανονικές-εμφάνιση, peritumor παχέος ομόλογό του βλεννογόνου (Πίνακας 2). Υπό αυτή την έννοια, είναι σημαντικό να τονίσουμε ότι τα γονίδια που προτείνονται ως δείκτες του φαινοτύπου νησιού methylator CpG που, εξ ορισμού, είναι σχεδόν μεθυλιώνονται αποκλειστικά σε καρκινικό ιστό αποφεύχθηκαν. Αστάρι και ανιχνευτές που χρησιμοποιούνται για bisulfited αλληλουχίες DNA που παρατίθενται στον Πίνακα S1. Πλήρως μη μεθυλιωμένες και πλήρως

Sss

L-μεθυλιωμένου DNA χρησιμοποιήθηκαν αρχικά ως 0 και 100% μεθυλιωμένων αναφορές για τη δοκιμή αποτελέσματα ενίσχυσης, και μεθυλιωμένο ϋΝΑ περαιτέρω χρησιμοποιήθηκε ως βαθμονομητής για όλα τα δοκιμασμένα δείγματα.

ALUC4

γονίδιο χρησιμοποιήθηκε ως ενδογενής αναφορά για την κανονικοποίηση για την ποσότητα του DNA εισόδου [19]. Οι αντιδράσεις MethyLight εκτελέστηκαν σε 7300 Real Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA) με ένα τελικό όγκο 12,5 μΙ που περιέχει 900 ηΜ του κάθε εκκινητή και 250 ηΜ του αντίστοιχου ανιχνευτή. Οι συνθήκες PCR ήταν: 95 ° C για 10 λεπτά, ακολουθούμενη από 40 κύκλους στους 92 ° C για 15 δευτερόλεπτα και 58 ° C για 1 λεπτό, όπως προηγουμένως περιγράφηκε [18]

Η

Κάθε. μέτρηση σε ένα δεδομένο δείγμα έγινε εις διπλούν για αμφότερες τις δοκιμές και ενδογενή γονίδια, και ο κύκλος κατωφλίου (C

t) -το κλασματικός αριθμός κατά την οποία η ποσότητα του ενισχυμένου στόχου που επιτεύχθηκε ένα σταθερό threshold- προσδιορίστηκε. Η τυπική απόκλιση εις διπλούν δείγματος ήταν πάντα κάτω από 0,2. Σχετική ποσά και των δύο γονιδίων επίσης ρυθμίζεται σύμφωνα με τις εμπορικές 100% μεθυλιωμένο DNA (Zymo Έρευνας, Orange, CA) που ενεργεί ως βαθμονόμησης για να είναι δυνατή η σύγκριση σε όλους τους δειγμάτων που ελέγχθηκαν. Η συγκριτική C

t μέθοδο [20], επίσης γνωστή ως

-ΔΔCt μέθοδο 2, υπολογίστηκε fromwhere

ΔΟ

t, δείγμα το δοκιμαζόμενο γονιδίων C

t αξίας για κάθε δείγμα κανονικοποιούνται στο

ALUC4

, και

ΔΟ

t, βαθμονόμησης ήταν η δοκιμή των γονιδίων C

t αξία για τον βαθμονομητή και κανονικοποιημένο στο

ALUC4

. Το αποτέλεσμα που προέρχεται από το

ΔΔC

t × 100 αντιστοιχεί σε ποσοστό μετουσιωμένο αναφοράς (PMR), η οποία δείχνει το ποσοστό των πλήρως μεθυλιωμένων μορίων σε ένα συγκεκριμένο τόπο [21].

Οι ανακριτές που εκτελεί το μεθυλίωσης συγκεκριμένα πειράματα πραγματικού χρόνου PCR δεν γνώριζαν τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών (δηλ πολλαπλότητα όγκου).

Αξιολόγηση του όγκου επιδιόρθωσης αταίριαστων βάσεων ανεπάρκειας

ανεπάρκεια επιδιόρθωσης αταίριαστων βάσεων του όγκου αξιολογήθηκε τόσο από ανοσοχρώση και μικροδορυφόρου δοκιμή αστάθεια. Ανοσοϊστοχημική ανάλυση περιελάμβανε αξιολόγηση των MSH2 (αντι-MSH2, Oncogene Research Products, Boston, ΜΑ), MLH1 (αντι-MLH1, PharMingen, San Diego, CA) και MSH6 (αντι-MSH6, BD Transduction Laboratories, San Jose, CA), όπως περιγράφεται αλλού [16]. Καρκινικά κύτταρα κρίθηκαν ότι είναι αρνητικά για την έκφραση της πρωτεΐνης μόνο εάν έλειπε χρώση σε ένα δείγμα στο οποίο βάφτηκαν κανονική κολονοκύτταρα και τα κύτταρα στρώματος. Αν θα μπορούσε να αποδειχθεί καμία ανοσοχρώση του φυσιολογικού ιστού, τα αποτελέσματα θεωρήθηκαν αναξιόπιστες. Μικροδορυφορικού αστάθεια εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας τον πίνακα 5-δείκτη που προτείνονται από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου και /ή την Pentaplex των επαναλήψεων μονονουκλεοτιδίου, όπως περιγράφεται αλλού [22].

Στατιστική Ανάλυση

Σύγκριση βαθμού μεθυλίωσης μεταξύ πολλών και μοναχικά CRC ασθενείς έγινε ποιοτικά όπου μεθυλίωση θετικότητα ορίστηκε ως PMR ≥4, όπως επικυρώθηκαν στο παρελθόν [23]. Δεδομένου ότι οι πληροφορίες σχετικά με μεθυλίωση στην κανονική εμφάνιση του παχέος βλεννογόνο ήταν περιορισμένη, η ανάλυση σε αυτό το σκηνικό έγινε σύμφωνα τόσο με ένα ≥4 PMR cut-off και ένα επιπλέον, αυθαίρετα επιλέξει ≥1 PMR αποκοπής προκειμένου να διαπιστωθεί τυχόν μικρή επίδραση. Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το ακριβές τεστ του Fisher. Συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων μεθυλίωσης των ζευγών όγκου αναλύθηκε με ανάλυση συσχέτισης Spearman.

σύγκριση μεταξύ των ασθενών με πολλαπλές και μοναχικά όγκων αναφορικά με τον βαθμό μεθυλίωσης σε αμφότερα όγκου και φυσιολογικών εμφανίζονται παχέος δείγματα βλεννογόνου πραγματοποιήθηκε επίσης χρησιμοποιώντας διωνυμική λογιστική παλινδρόμηση, αμφότερες αδιόρθωτη και προσαρμοσμένο για την ηλικία και το φύλο. Επιπλέον, εξετάσαμε την ανεξάρτητη επίδραση του γονιδίου μεθυλίωσης σχετικά με την πολλαπλότητα των όγκων με τη συμπερίληψη όλων των αξιολογούνται γονίδια στο διωνυμικό μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης, μαζί με την ηλικία και το φύλο. Αυτές οι μεταβλητές ήταν «κλαδεύονται» με χρήση ενός αυτοματοποιημένου σταδιακή διαδικασία για τη βελτιστοποίηση του κριτηρίου του Akaike [24]. Πολλαπλασιαστική αλληλεπιδράσεις ελέγχθηκαν για κάθε ζεύγος γονιδίων που σχετίζονται ανεξάρτητα με τον αριθμό των όγκων, περιλαμβάνοντας και τις δύο κύριες επιδράσεις και ένα όρος αλληλεπίδρασης (ένα προϊόν από δύο κύριες επιπτώσεις) στο μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης. Τέλος, εξετάσαμε τις σωρευτικές επιπτώσεις των μεθυλιωμένο γονίδια σχετικά με την πολλαπλότητα των όγκων μετρώντας τον αριθμό των επιλεγμένων γονιδίων ανεξάρτητα σχετίζονται με αυτό το φαινόμενο σε κάθε μάθημα. Η αναλογία πιθανοτήτων για την πολλαπλότητα των όγκων για ασθενείς που φέρουν οποιοδήποτε συνδυασμό των επιλεγμένων μεθυλιωμένο γονίδια εκτιμήθηκε με σύγκριση τους με τους ασθενείς κανένα από αυτά τα γονίδια που μεταφέρουν με τη χρήση της ανάλυσης λογιστικής παλινδρόμησης. Οι στατιστικές αναλύσεις διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας (R ομάδα Πυρήνα Development, https://www.R-project.org) «R».

Οι συνεχείς μεταβλητές εκφράσθηκαν ως μέση τιμή ± τυπική απόκλιση. Όλες οι τιμές p ήταν δύο όψεων. Μία τιμή ρ μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκε για να δείξει μια στατιστικά σημαντική διαφορά.

Αποτελέσματα

Σαράντα ένας ασθενείς είτε με σύγχρονη ή metachronous CRC, και 41 του φύλου, της ηλικίας και του όγκου τοποθεσία ζεύγη ασθενείς με μονήρεις όγκοι αποτέλεσε τη βάση αυτής της μελέτης. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, και οι δύο ομάδες ασθενών ήταν παρόμοιες αναφορικά με οποιεσδήποτε δημογραφικά, κλινικά και όγκων που σχετίζονται με τα χαρακτηριστικά, εκτός από την παρουσία του σύγχρονου ορθοκολικού αδενώματος.

γονίδιο υποκινητή της μεθυλίωσης σε δείγματα όγκων

σύγκριση μεθυλίωσης του γονιδίου υποκινητή σε δείγματα όγκων από ασθενείς με πολλαπλές και μοναχικά CRC απεικονίζεται στον πίνακα 3. Συνολικά, οι ασθενείς με πολλαπλές βλάβες παρουσίασαν υψηλότερο βαθμό μεθυλίωσης σε δείγματα όγκων από εκείνους με μοναχικά όγκους που αφορούν όλους τους αξιολογήθηκαν γονίδια. Το ποσοστό των όγκων που παρουσιάζουν υπερμεθυλίωσης υποκινητή του γονιδίου ήταν σημαντικά υψηλότερη στους ασθενείς με πολλαπλές βλάβες σε σχέση με εκείνους με μοναχικά CRC σε σχέση με το

MGMT2

(40,4%

vs

14,6%, αντίστοιχα?. P = . 0.009) και

RASSF1A

(17,0%

vs

0%, αντίστοιχα? p = 0,006) (Πίνακας 3)

η

η εκτίμηση του κινδύνου του όγκου. πολλαπλότητα συνδέονται με μεθυλίωση του γονιδίου υποκινητή σε δείγματα όγκου φαίνεται στον πίνακα 4. Μετά την προσαρμογή ως προς την ηλικία και το φύλο, διωνυμική ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης έδειξε ότι η μεθυλίωση του περιοχές προαγωγέα της θέσεως

MGMT1

(αναλογία πιθανοτήτων (OR), 1,57 ? 95% διάστημα εμπιστοσύνης (CI), 1,01 – 2,43? p = 0.04),

MGMT2

τόπου (Ή, 1,50? 95% CI, 1,14 – 1,96? p = 0,003), και

RASSF1A

γονίδιο (Ή, 2,02? 95% CI, 1,03 – 3,93? p = 0.03) έχουν συσχετιστεί με αυξημένο κίνδυνο ανάπτυξης πολλαπλής CRC (Πίνακας 4)

Η

Το προσαρμοσμένο πολυπαραγοντική ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης. προσδιορίζονται μεθυλίωση του

MGMT2

τόπου (Ή, 1,48? 95% CI, 1,10 – 1,97? p = 0,008) και

RASSF1A

γονιδίου (OR, 2,04? 95% CI, 01.01 – 04.13? p = 0,047), όπως μεταβλητές ανεξάρτητα σχετίζονται με τον αριθμό των όγκων. Επιπλέον, όταν το γινόμενο αυτών των δύο μεταβλητών προστέθηκε στο μοντέλο παλινδρόμησης, ο όρος αλληλεπίδραση δεν έχει επιλεγεί (OR, 0,88? 95% CI, 0,67 έως 1,16? P = 0.37). Τέλος, όταν αξιολογήθηκε τα σωρευτικά αποτελέσματα των μεθυλιωμένων γονιδίων, ο κίνδυνος της πολλαπλότητας των όγκων που σχετίζονται με μεθυλίωση της οποιαδήποτε από αυτές τις δύο επιλεγμένων γονιδίων ήταν 4,57 (95% CI, 1,53 να 13,61? P = 0,006), χωρίς σημαντική αύξηση όταν αμφότερα τα γονίδια ταυτοχρόνως μεθυλιωμένα (OR, 2,31? 95% CI, 0,00 έως απροσδιόριστο? p = 0.99).

Τέλος, αναλύσαμε την συσχέτιση των επιπέδων μεθυλίωσης στο υποσύνολο των έξι ασθενείς με πολλαπλούς όγκους, στους οποίους οι δύο όγκοι ήταν διαθέσιμα για ανάλυση (Σχήμα 1). Αυτή η ανάλυση έδειξε μια μη σημαντική συσχέτιση με τα επίπεδα μεθυλίωσης του

MGMT2

(r = 64, p = 0.17),

SFRP1

(r = 0,83, 0,06),

HPP1

(r = 0,64, p = 0,17),

3OST2

(r = 0,83, p = 0,06), και

GATA4

(r = 0.6, p = 0.24).

MGMT1

και

CDKN2A

δεν παρουσιάζουν ενδείξεις αντιστοιχίας μεταξύ όγκων στον ίδιο ασθενή (r = -0.05, ρ = 0,91? R = -0.09, ρ = 0,91, αντίστοιχα), και

RASSF1A

σπάνια μεθυλιώνονται σε αυτούς τους όγκους, η οποία απέκλειε μια σωστή ανάλυση συσχέτισης.

είναι

τα αποτελέσματα εκφράζονται ως ποσοστό της μεθυλίωσης με βάση PMR.

η

Gene Ανάδοχος μεθυλίωση στην κανονική εμφάνιση δείγματα παχέος βλεννογόνου

Η μεθυλίωση σε κανονική εμφάνιση του παχέος βλεννογόνο από ασθενείς με πολλαπλές και μοναχικά CRC δεν έδειξε σημαντική διαφορά σε οποιαδήποτε αξιολόγηση γονίδιο (Πίνακας 5). Προκειμένου να διαπιστωθεί τυχόν δευτερεύουσες επιπτώσεις, η ανάλυση επαναλήφθηκε χρησιμοποιώντας ένα ≥1 PMR cut-off (Πίνακας 5). Σε αυτή τη δεύτερη ανάλυση, δεν είναι συνεπές μοτίβο μεθυλίωσης παρατηρήθηκε, με κάποια γονίδια που δείχνουν υπερμεθυλίωση (δηλαδή

MGMT1

,

MGMT2

και

RASSF1A

) και άλλοι υπομεθυλίωσης (π.χ.

SFRP1

,

ΤΜΕΡΡ2

και

GATA4

) σε ασθενείς με πολλαπλές βλάβες. Καμία από αυτές τις διαφορές ήταν στατιστικά σημαντικές (Πίνακας 5).

Η

Συζήτηση

Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης δείχνουν ότι οι όγκοι από ασθενείς με σύγχρονη και metachronous CRC παρουσιάζουν υψηλότερο βαθμό μεθυλίωσης από εκείνες από ασθενείς με μονήρεις βλάβες. Όγκου υπερμεθυλίωση του

MGMT

περιοχή ενισχυτή του γονιδίου και το

RASSF1A

περιοχή του γονιδίου υποκινητή ταυτοποιήθηκαν ως μεταβλητές ανεξάρτητα συνδέεται με μια πενταπλάσια αύξηση του κινδύνου ανάπτυξης πολλαπλές βλάβες. Επιπλέον, βρήκαμε παρόμοια πρότυπα μεθυλίωσης σε ζεύγη του όγκου από τον ίδιο ασθενή. Συνολικά, οι παρατηρήσεις αυτές παρέχουν μια απόδειξη της έννοιας της επιγενετικής βλάβης που προκαλείται από υπερμεθυλίωσης υποκινητή του γονιδίου που ευνοούν τον πολλαπλασιασμό των όγκων σε σποραδικές CRC.

Πλεονεκτήματα της μελέτης αυτής να επικαλεστεί το γεγονός ότι διεξήχθη σχετικά με ένα γενικό πληθυσμού μέσω μια προοπτική, πολυκεντρική, μελέτη σε εθνικό επίπεδο στο οποίο μη επιλεγμένο και συνεχόμενους ασθενείς με CRC συμπεριλήφθηκαν ανεξάρτητα από την προσωπική και οικογενειακή τους χαρακτηριστικά? προηγούμενο γενετικός χαρακτηρισμός πραγματοποιείται στο πλαίσιο του έργου EPICOLON επέτρεψε επαρκή αναγνώριση και την επακόλουθη αποκλεισμό των ασθενών με κληρονομικές διαταραχές (δηλαδή ορθοκολικό πολυποδίαση, σύνδρομο Lynch και MYH σχετιζόμενη CRC) [16], [22], [25], [26 ], [27], [28], στο οποίο ένα συγκεκριμένο και σαφώς καθορισμένο μοριακό μηχανισμό δικαιολογεί τον πολλαπλασιασμό των όγκων? αντιπροσωπεύει τη μεγαλύτερη σειρά ασθενών με πολλαπλές βλάβες αξιολογήθηκαν μέχρι σήμερα για μεθυλίωση του όγκου, καθώς και την πρώτη μελέτη στην οποία μια ομάδα ελέγχου ασθενών με ένα μοναχικό βλάβη περιλήφθηκε με επαρκή διαστρωμάτωση ως προς το φύλο, την ηλικία και την τοποθεσία του όγκου? και, τέλος, ποσοτική μεθυλίωσης ειδική PCR πραγματοποιήθηκε σε δύο δείγμα όγκου και σε συνδυασμό κανονική εμφάνιση του παχέος βλεννογόνο, και ανέλυσε τα δεδομένα σε έναν τυφλό τρόπο.

Γνωρίζουμε, ωστόσο, ορισμένων περιορισμών της μελέτης αυτής. Κατ ‘αρχάς, τα δείγματα RNA δεν ήταν πρόθυμο να εκτελεί παράλληλη έκφραση αναλύει και να ελέγχει την βιολογική σημασία της μεθυλίωσης του γονιδίου υποκινητή. Παρ ‘όλα αυτά, υπάρχει ένα μεγάλο σώμα των στοιχείων που MethyLight δοκιμασίες παρέχουν μια εξαιρετική συσχέτιση μεταξύ μεθυλίωση προαγωγού και γονιδιακή σίγηση σε παρόμοιες ρυθμίσεις του όγκου [11], [29]. υπάρχει μεγαλύτερη αβεβαιότητα, ωστόσο, σε σχέση με την αξία των αποτελεσμάτων αυτών σε μη νεοπλασματικά ιστούς. Αν και έχει προταθεί ότι η επιγενετική υπογραφή των καρκίνων μπορεί να έχει πρώιμο στάδιο, τα αντίστοιχα κανονικού ιστού που εμπλέκονται δυνητικά στην έναρξη της καρκινογόνο διαδικασία [14], δεν είναι ακόμα σαφές αν το ίδιο cut-off μεθυλίωσης που χρησιμοποιείται για δείγματα όγκου ( δηλαδή PMR ≥4) μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε μη νεοπλασματικά ιστούς. Για να ξεπεραστεί αυτός ο περιορισμός, αποτελέσματα που λαμβάνονται σε κανονική εμφανίζονται παχέος βλεννογόνο αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας δύο διαφορετικά επίπεδα αποκοπής. Δεύτερον, η μελέτη αυτή αποτελεί ένα υποψήφιο γονίδιο, η υπόθεση με γνώμονα την έρευνα στην οποία επελέγησαν μειωμένο αριθμό γονιδίων με βάση τις προηγούμενες πληροφορίες που αποδεικνύουν τη συμμετοχή τους στη παχέος καρκινογένεση μέσω μεθυλίωσης με τη μεσολάβηση των γονιδίων, και τα αποδεικτικά στοιχεία μιας μείωσης βαθμού υπερμεθυλίωση μεταξύ του όγκου, peritumor κανονική εμφάνιση του παχέος βλεννογόνο, και η κανονική του παχέος βλεννογόνου από άτομα μη-όγκου. Ο κύριος σκοπός αυτής της προσέγγισης ήταν να δοθεί μια απόδειξη της έννοιας της πιθανής συμμετοχής της υπερμεθυλίωσης υποκινητή του γονιδίου στην πολλαπλότητα των όγκων και όχι τον προσδιορισμό της επιγενετικής υπογραφή υποκείμενη αυτή τη διαδικασία. Για να επιτευχθεί αυτός ο τελευταίος στόχος, οι τεχνικές υψηλής απόδοσης με δυνατότητα ευρείας γονιδιώματος απαιτείται, μια προσέγγιση επί του παρόντος σε εξέλιξη στο εργαστήριο μας. Τρίτον, η αξιολόγηση των κανονικών εμφανίζονται ορθοκολικού βλεννογόνος περιορίζεται στην περιοχή peritumor στη συντριπτική πλειοψηφία των περιπτώσεων, δεδομένου ότι τα περισσότερα δείγματα ελήφθησαν από χειρουργικά δείγματα. Η πτυχή αυτή αποκλείει τη γενίκευση των αποτελεσμάτων που επιτυγχάνονται στο φαινομενικά φυσιολογικό βλεννογόνο σε ολόκληρο το παχύ έντερο. Πράγματι, εντυπωσιακή παχέος εντέρου τμήμα-συγκεκριμένες διαφορές στον επιπολασμό της μεθυλίωσης μερικών γονιδίων (δηλαδή

MLH1

και

MGMT

) έχουν παρατηρηθεί [14]. Πώς αυτό το μοτίβο διασποράς θα επηρεάσει την πιθανή χρήση της ανάλυσης μεθυλίωσης σε αξιολόγηση του κινδύνου CRC και, κατά συνέπεια, θεωρούμενη στρατηγικές ελέγχου και εποπτείας της μεθυλίωσης με γνώμονα, αυτή τη στιγμή στο στάδιο της αξιολόγησης.

Ένα ελάττωμα πεδίο που προκαλείται από

MGMT

μεθυλίωση του γονιδίου υποκινητή έχει προηγουμένως προταθεί [12]. Σε αυτή την μελέτη σπερματικού, υπερμεθυλίωση του

MGMT

γονίδιο παρατηρήθηκε στο 46% των όγκων, καθώς και σε 50% της κανονικής εμφανίζονται παχέος δείγματα βλεννογόνου από ασθενείς στους οποίους

MGMT

μεθυλίωση προαγωγού βρέθηκε στο αντίστοιχο όγκο. Σε μια άλλη μελέτη, η συμμετοχή της μεθυλίωσης του DNA σε πέντε CIMP-ειδικούς προαγωγούς γονιδίου, συμπεριλαμβανομένων των

MGMT

, εκτιμήθηκε επίσης σε έξι ζεύγη σύγχρονη καρκίνωμα [30]. Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήθηκε ότι ενώ κάποιοι ζεύγη όγκου έδειξε ασύμφωνα μοτίβα μεθυλίωσης, άλλοι έδειξαν παρόμοια, αλλά δεν είναι ακριβώς ίδια, τα προφίλ της μεθυλίωσης υποκινητή, γεγονός που υποδηλώνει ότι επιγενετικές μεταβολές στη σύγχρονη CRC πιθανό να έχουν και τα δύο τυχαία και μη τυχαία συστατικά [30]. . Πρόσφατα, Konishi

et al

βρέθηκαν σημαντικές διαφορές στη μεθυλίωση μεταξύ πολλαπλούς όγκους σε σύγκριση με το μοναχικό βλαβών για

MGMT

(. 26,5%

vs

17,3%? P & lt? 0,05) και

p14

(16,1%

vs

9,3%?. p & lt? 0.05) [31]. Είναι ενδιαφέρον, οι συγγραφείς αυτοί βρήκαν μια σημαντική συσχέτιση για μεθυλίωση των διαφορετικών γονιδίων, συμπεριλαμβανομένων των

MGMT

, μεταξύ των ζευγών των όγκων του στον ίδιο χώρο (εγγύς

vs.

Άπω). Δυστυχώς, αυτό το ενδιαφέρον θέμα θα μπορούσε να αντιμετωπιστεί μόνο εν μέρει σε έρευνα μας, δεδομένου ότι, λόγω του σχεδιασμού του έργου EPICOLON, μόνο ένα δείγμα όγκου συλλέχθηκε από τους περισσότερους ασθενείς με σύγχρονη CRC, περιορίζοντας έτσι αυτή κατά ζεύγη σύγκριση προς 6 ασθενείς. Παρά το γεγονός ότι οι θετικές συσχετίσεις για

MGMT2

δεν ήταν στατιστικά σημαντική (ίσως λόγω του μικρού αριθμού ζεύγη όγκων διαθέσιμα), τα αποτελέσματά μας είναι συνεπή με τα δεδομένα που λαμβάνονται από Konishi

et al.

[31 ], υποστηρίζοντας την υπόθεση ότι οι ασθενείς με πολλαπλούς όγκους δείχνουν συγκλίνουσες μεθυλίωση σε ιστούς όγκων τους. Πολύ πρόσφατα, σε μία πρωτοποριακή έκδοση, LINE 1-επίπεδα μεθυλίωσης συσχετίζονταν σημαντικά σε 10 σύγχρονους ζεύγη CRC, ενισχύοντας έτσι την υπόθεση της επίδρασης πεδίου [32].

Η μεθυλίωση σχετίζεται με την απενεργοποίηση του

RASSF1A

έχει συχνά παρατηρηθεί σε πολλές ανθρώπινες κακοήθειες συμπεριλαμβανομένων των σποραδικών CRC [33], [34], [35], [36], [37]. Πράγματι, υπερμεθυλίωση υποστηρικτής του όγκου των

RASSF1A

εμφανίζεται σε περίπου 20% των CRC, και φαίνεται να υπάρχει μια αμοιβαία αποκλειστική σχέση με την παρουσία της

KRAS

μεταλλάξεις [34], [35]. Είναι ενδιαφέρον ότι, σε όγκους με αναντιστοιχία ανεπάρκεια επισκευής, δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στη συχνότητα του

RASSF1A

μεθυλίωσης μεταξύ ασταθής σποραδικά CRC και όγκων που σχετίζονται με το σύνδρομο Lynch [37]. Τα παραπάνω αποτελέσματα [32], μαζί με την απόδειξη της

RASSF1A

μεθυλίωσης σε δείγματα όγκων από ασθενείς με πολλαπλές βλάβες, και η έλλειψη των διαφορών σε άλλους παράγοντες που προδιαθέτουν για την πολλαπλότητα των όγκων (π.χ. οικογενειακό ιστορικό) δεν ευνοεί την υπόθεση ενός υποκείμενου επιγενετικής ελάττωμα. Ωστόσο, αν αυτή η μεθυλίωση με γνώμονα μηχανισμός γονιδιακή σίγηση αντιπροσωπεύει δυνητική επίδραση πεδίο λόγω αγνώστων μοριακή μεταβολή στην κανονική βλεννογόνο ή την έκφραση των προϋπαρχόντων πολλαπλές υπερπλαστικούς πολύποδες από τον οποίο CRC προκύπτει μέσω της οδοντωτή οδού [38], όπως έχει πρότεινε πρόσφατα [32], παραμένει άγνωστη.

Όπως αναφέρθηκε, παρεκκλίνουσα μεθυλίωση κάποιων νησιών CpG έχει δει σε κανονική εμφάνιση του παχέος βλεννογόνο. Σε μια μελέτη [13], το φαινόμενο αυτό αποδείχθηκε για την

ΕΚα

και

MyoD

γονίδια, όπως επίσης και για την

P16 (ΙΝΚ4 &)

,

MLH1

,

Timp3

και

DAPK

γονίδια σε χαμηλότερο επίπεδο. Είναι ενδιαφέρον ότι ορισμένες πολυμορφισμοί γονιδίων συνδέθηκαν με χαμηλότερη μεθυλίωση των CpG νησίδες που εξετάστηκαν, υποδηλώνοντας έτσι ότι οι γενετικοί παράγοντες μπορούν να επηρεάσουν αυτή την επιγενετικό μεταβολή της κανονικής παχέος βλεννογόνο [13]. Οι φυσιολογικές καταστάσεις που σχετίζονται με παρεκκλίνουσα μεθυλίωση προαγωγού σε φαινομενικά κανονική του παχέος βλεννογόνου έχουν επίσης πρόσφατα αξιολογηθεί σε σχέση με τα δύο γονίδια επιδιόρθωσης DNA,

MLH1

και

MGMT

[14]. Σε αυτή την μελέτη, τα δείγματα από τα αρσενικά δεν έδειξε συνεπείς πρότυπα για είτε υποκινητή, αλλά ο επιπολασμός του

MLH1

και

MGMT

μεθυλίωση αυξήθηκε σημαντικά με την ηλικία, ιδιαίτερα στο δεξιό κόλον, και ήταν σύμφωνα με τρέχουσα επιγενετική προφίλ του CRC υποσύνολα.