Abstract

Η τελμισαρτάνη, η αγγειοτενσίνη II υποδοχέα τύπου 1 blocker, χρησιμοποιείται συχνά ως ένα φάρμακο αντιυπερτασικά, και έχει επίσης χαρακτηριστεί ως συνδέτη ενεργοποιείται από πολλαπλασιαστή περοξυσώματος υποδοχέα γάμμα (ΡΡΑΡγ). Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διαφωτίσει τα αποτελέσματα κατά των όγκων του telmisartan επί του ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα. Εμείς αγωγή τρεις ενδομητρίου καρκινικές κυτταρικές σειρές με διάφορες συγκεντρώσεις του telmisartan, και διερευνήσαμε τις επιπτώσεις της telmisartan στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την απόπτωση, και οι σχετικές μετρήσεις τους in vitro. Μπορούμε επίσης χορηγείται telmisartan σε γυμνούς ποντικούς με πειραματικούς όγκους για να προσδιοριστεί in vivo επιδράσεις και τοξικότητα του. Και οι τρεις ενδομητρίου καρκινικές κυτταρικές σειρές ήταν ευαίσθητα στην ανάπτυξη ανασταλτική δράση του telmisartan. Η επαγωγή της απόπτωσης επιβεβαιώθηκε σε συνεννόηση με την αλλαγμένη έκφραση των γονιδίων και των πρωτεϊνών που σχετίζονται με την απόπτωση. Παρατηρήσαμε επίσης ότι το DNA δίκλωνα σπασίματα (DSBs) προκλήθηκαν σε HHUA (ανθρώπινο καρκίνου του ενδομητρίου) κύτταρα με κατεργασία telmisartan. Επιπλέον, τα πειράματα σε γυμνούς ποντικούς έδειξε ότι η τελμισαρτάνη ανέστειλε σημαντικά ανθρώπινες ενδομήτριες την ανάπτυξη του όγκου, χωρίς τοξικές παρενέργειες. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η τελμισαρτάνη μπορεί να είναι μια νέα θεραπευτική επιλογή για τη θεραπεία της ενδομητρίου καρκίνων

Παράθεση:. Koyama Ν, Nishida Υ, Ishii Τ, Yoshida Τ, Furukawa Υ, Narahara Η (2014) Telmisartan διεγείρει ανάπτυξη Αναστολή , DNA δίκλωνα σπασίματα και απόπτωση σε ανθρώπινα κύτταρα του ενδομητρίου Cancer. PLoS ONE 9 (3): e93050. doi: 10.1371 /journal.pone.0093050

Συντάκτης: Eric Asselin, Πανεπιστήμιο του Κεμπέκ στο Trois-Rivieres, Καναδάς

Ελήφθη: 30 Ιούνη του 2013? Αποδεκτές: 28 Φεβ 2014? Δημοσιεύθηκε: 25 Μαρτίου 2014

Copyright: © 2014 Koyama et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από ένα Ταμείο Έρευνας κατά τη διακριτική ευχέρεια του Προέδρου, του Πανεπιστημίου Oita (ΗΝ). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ενδομητρίου καρκίνων είναι οι πιο κοινές κακοήθεις όγκους του γεννητικού συστήματος, και η συχνότητά τους έχει αυξηθεί τα τελευταία χρόνια [1], [2]. Ωστόσο, η έρευνα για παράγοντες αποτελεσματικούς στη θεραπεία του προχωρημένου και επαναλαμβανόμενες ενδομητρίου καρκίνων έχει απογοητευτική [2], [3]. Έτσι, οι καινοτόμες προσεγγίσεις χρειάζονται για τη θεραπεία του καρκίνου του ενδομητρίου

Ο πυρηνικός ορμόνη υπεροξεισωμάτων υποδοχέα που ενεργοποιείται από πολλαπλασιαστή υποδοχέας-γάμμα (ΡΡΑΡγ) και οι συνδέτες του να διεγείρει απόπτωση σε διάφορους τύπους καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του ενδομητρίου [4]. – [6]. Η τελμισαρτάνη είναι ένας τύπος των υποδοχέων της αγγειοτενσίνης II 1 (AT1R) αποκλειστή (ARB) που χρησιμοποιείται ευρέως ως ένα αντιυπερτασικό φάρμακο. Benson et al. ανέφερε μια δομική ομοιότητα μεταξύ τελμισαρτάνη και η πιογλιταζόνη, ένας συνδετήρας PPARγ [7]. Η τελμισαρτάνη λειτουργεί ως μερικός αγωνιστής συνδέτη PPARγ, ενεργοποιώντας τον υποδοχέα στο 25% -30% του μέγιστου επιπέδου επιτυγχάνεται με την πλήρεις αγωνιστές πιογλιταζόνη και resiglitazone, στην οποία η τελμισαρτάνη δρα ανεξάρτητα μέσω αλληλεπίδρασης AT1R [7]. Η τελμισαρτάνη έχει αναφερθεί ότι έχουν αντι-πολλαπλασιαστική δραστικότητα στον καρκίνο του προστάτη και το καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων [8] – [10]. Η δράση του telmisartan στη γυναικολογική καρκινικά κύτταρα δεν έχει ακόμη διερευνηθεί.

Η παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε για να αποκαλύψει, για πρώτη φορά, η βιολογική και θεραπευτική δράση του telmisartan για τον καρκίνο του ενδομητρίου. Εξετάσαμε κατά πόσο αυτή η ένωση θα μπορούσε να μεσολαβούν την αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και την επαγωγή της απόπτωσης σε καρκίνο του ενδομητρίου κυτταρικές σειρές. Ερευνήσαμε κατά πόσο οι DNA δίκλωνα σπασίματα (DSBs) που προκλήθηκε στο HHUA (ανθρώπινο καρκίνου του ενδομητρίου) κύτταρα με κατεργασία telmisartan. Ελέγξαμε επίσης την ικανότητα της τελμισαρτάνης να αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HHUA in vivo, χρησιμοποιώντας ένα γυμνό μοντέλο ποντικού.

Υλικά και Μέθοδοι

Κυτταρικές Γραμμές

Το ανθρώπινο ενδομητρίου HHUA καρκινική κυτταρική γραμμή ελήφθη από την Riken (Ibaraki, Japan). Το ανθρώπινο καρκίνου του ενδομητρίου κυτταρική σειρά Ishikawa ευγενώς από τον Dr. Masato Nishida (Πανεπιστήμιο Tsukuba, Ibaraki, Japan) [11] – [13]. Η ανθρώπινη ενδομητρίου κυτταρική σειρά καρκίνου HEC-59 και κανονικό ενήλικα άνθρωπο δερματικής ινοβλάστης κυτταρική γραμμή ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). HHUA, Ishikawa, HEC-59 κύτταρα διατηρήθηκαν ως μονοστοιβάδες στους 37 ° C σε 5% CO

2 /αέρα σε τροποποιημένο μέσο Dulbecco Eagle (ϋΜΕΜ? Gibco, Rockville, MD). Φυσιολογικά ανθρώπινα κύτταρα ινοβλαστών ενήλικα δερματικά διατηρήθηκαν σαν μονοστιβάδες σε ελάχιστο βασικό μέσο (ΜΕΜ? Invitrogen, Carlsbad, CA) στην ίδια κατάσταση που περιγράφεται παραπάνω. Όλα τα κύτταρα συμπληρωμένο με 10% θερμο-απενεργοποιημένο βόειο εμβρυϊκό ορό. (FBS? Omega, Tarzana, CA)

Χημεία

Η τελμισαρτάνη, καντεσαρτάνη, η λοσαρτάνη και η βαλσαρτάνη ελήφθησαν από LKT Laboratories (St . Paul, ΜΝ, USA), και προετοιμάστηκαν ως 10 mg /mL διαλύματα παρακαταθήκης σε διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO). GW9662 και τρογλιταζόνη ελήφθησαν από την Cayman Chemical (Ann Arbor, MI, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής). GW9662 παρασκευάστηκε ως πυκνό διάλυμα 5 mg /mL σε διμεθυλοφορμαμίδιο. Τρογλιταζόνη παρασκευάστηκε ως πυκνό διάλυμα 10 mg /mL σε DMSO. Τα διαλύματα αποθέματος αποθηκεύθηκαν ως δείγματα στους -20 ° C.

Αξιολόγηση του Κυτταρικού Πολλαπλασιασμού και Βιωσιμότητας Κυττάρων

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων και η βιωσιμότητα προσδιορίστηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων με μια τροποποιημένη τετραζολίου μεθυλθειαζολ (ΜΤΤ ) δοκιμασία που χρησιμοποιεί WST-1 (Roche Diagnostics, Penzberg, Γερμανία) ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Εμείς εμβολιάζονται 5 × 10

3 κύτταρα σε DMEM συμπληρωμένο με 10% FBS σε κάθε φρεάτιο ενός 96 φρεατίων επίπεδου πυθμένα μικροπλάκας (Corning, Νέα Υόρκη, ΝΥ) και επωάζονται όλη τη νύκτα τους. Το μέσο στη συνέχεια απομακρύνθηκε, και τα κύτταρα επωάστηκαν για 48 ώρες με 100 μL πειραματικού μέσου που περιέχει διάφορες συγκεντρώσεις του telmisartan, candesartan, λοσαρτάνη και τη βαλσαρτάνη. Στη συνέχεια, 10 μL WST-1 βαφή προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο, και τα κύτταρα επωάστηκαν περαιτέρω για 2 ώρες. Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν με την παρουσία 10% FBS. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων εκτιμήθηκε με μέτρηση της απορρόφησης στα 450 nm. Το μήκος κύματος αναφοράς ήταν 620 nm. Τα δεδομένα υπολογίστηκαν ως ο λόγος των τιμών που λαμβάνονται για τα κύτταρα telmisartan επεξεργασμένα με αυτές για τους χωρίς θεραπεία ελέγχους.

αντικαρκινικές επιδράσεις του Telmisartan μέσω του ΡΡΑΚγ-εξαρτώμενη Pathway

Στη συνέχεια, εξετάσαμε την λειτουργία της αντικαρκινικής επιδράσεις του telmisartan μέσω ΡΡΑΚγ σε HHUA καρκίνο του ενδομητρίου κύτταρα in vitro, χρησιμοποιώντας δοκιμασία WST-1 με 2-ημέρες έκθεση σε τόσο τελμισαρτάνη σε 10 ή 50 μΜ και ενός ανταγωνιστή PPARγ, GW9662, στα 10 μΜ. GW9662 χρησιμοποιήθηκε όπως περιγράφεται προηγουμένως [14], [15]. Πριν από την έναρξη διέγερση, εμείς εμβολιάζονται 5 × 10

3 κύτταρα HHUA σε DMEM συμπληρωμένο με 10% FBS σε κάθε φρεάτιο ενός 96 φρεατίων επίπεδου πυθμένα μικροπλάκας (Corning, Νέα Υόρκη, ΝΥ) και επωάζονται όλη τη νύκτα τους. κύτταρα HHUA υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με GW9662 για 30 λεπτά πριν από τη διέγερση του telmisartan.

Μέτρηση της απόπτωσης (Flow-κυτταρομετρίας Ανάλυσης με την αννεξίνη V /προπιδίου Δοκιμασία ιωδιούχου)

Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν και αναπτύχθηκαν όλη τη νύκτα έως ότου έφθασαν 80% συρροή και στη συνέχεια κατεργάζεται με telmisartan. Μετά από 48 ώρες, ανεξάρτητο κυττάρων στο μέσο συλλέχθηκαν, και τα υπόλοιπα προσκολλητικά κύτταρα συλλέχθηκαν με τρυψινοποίηση. Τα κύτταρα (1 χ 10

5) πλύθηκαν με PBS και επαναιωρήθηκαν σε 500 μL ρυθμιστικού διαλύματος δέσμευσης (αννεξίνης ισοθειοκυανική V-φλουορεσκεΐνη [FITC] κιτ ανίχνευσης απόπτωσης από BioVision, Palo Alto, CA) που περιέχει 5 μΐ 50 μg /mL ιωδιούχου προπιδίου (ΡΙ) και 5 μL αννεξίνης V-FITC, το οποίο συνδέεται με φωσφατιδυλοσερίνη μετατοπίζεται προς το εξωτερικό της κυτταρικής μεμβράνης νωρίς στην απόπτωση, καθώς και κατά τη διάρκεια αργά στην απόπτωση. Μετά από επώαση για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου σε ένα ελαφρύ-προστατευόμενη περιοχή, τα δείγματα αναλύθηκαν σε κυτταρόμετρο ροής FACSCalibur (Becton Dickinson, Lincoln Park, NJ). FITC και ΡΙ εκπομπές ανιχνεύθηκαν στα κανάλια FL-1 και FL-2, αντίστοιχα. Για κάθε δείγμα, τα δεδομένα από 10.000 κύτταρα καταγράφηκαν στη λειτουργία λίστας σχετικά με λογαριθμική κλίμακα. Μεταγενέστερες ανάλυση διεξήχθη με το λογισμικό CellQuest (Becton Dickinson).

μιτοχονδριακού διαμεμβρανικό δυναμικό

Τα κύτταρα προετοιμάστηκαν για FACS όπως περιγράφεται παραπάνω και χρωματίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ ανίχνευσης απόπτωσης Mitocapture από BioVision με μια φθορίζουσα λιπόφιλο κατιονικό αντιδραστήριο που αξιολογεί τη διαπερατότητα της μιτοχονδριακής μεμβράνης, σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή.

κασπάση-3 και -7 Δραστηριότητες

κασπάση-3 και -7 αποτελούν μείζονες μέλη της κυστεΐνης ασπαρτικό οξύ-ειδική πρωτεάση ( κασπάσης) οικογένεια που παίζουν σημαντικό ρόλο τελεστή σε απόπτωση σε κύτταρα θηλαστικών. Οι δραστηριότητες αυτών των κασπασών μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα κασπάση-Glo 3/7 Δοκιμασία αγοράστηκε από την Promega (Madison, WI), σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή.

Enzyme-συνδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία

ενεργοποιήθηκε διασπάται πολυ-ΑϋΡ ριβόζης πολυμεράσης (PARP) έκφραση υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας ένα Pierce Colorimetric σε-Cell κιτ ELISA (Thermoscientific, Rockford, IL), σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή.

Ανάλυση Western Blot

Cells πλύθηκαν δύο φορές σε PBS και λύθηκαν χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο εκχύλισης πρωτεΐνης θηλαστικού M-PER (Thermoscientific) σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή. Οι πρωτεϊνικές συγκεντρώσεις ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο Pierce 660-nm ποσοτικού προσδιορισμού πρωτεΐνης (Thermoscientific) σύμφωνα με το προτεινόμενο πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Λύματα ολόκληρων κυττάρων (20 μα) διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα SDS-πολυακρυλαμιδίου 10% επί% πηκτώματα -15, και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου (Immobilon? Amersham, Arlington Heights, IL). Οι μεμβράνες μετά ανιχνεύθηκαν διαδοχικά με αντισώματα έναντι Bcl-2 (1:1,000? Epitomics, Burlingame, CA), Bcl-xL (1:1,000? Cell Signaling Technology), Βαχ (1:1,000? Cell Signaling Technology), που διασπάται caspase- 3 (1:1000? Cell Signaling Technology), και GAPDH (1:10,000? Abcam, Cambridge, UK). Οι κηλίδες αναπτύχθηκαν χρησιμοποιώντας ένα ενισχυμένο υπόστρωμα χημειοφωταύγειας (ECL Western Lightning Pro) κιτ (PerkinElmer, San Jose, CA).

Ανίχνευση DSBs με παλλόμενου πεδίου ηλεκτροφόρηση πηκτής (PFGE)

Υποσυρρέουσες καλλιέργειες κυττάρων HHUA υποβλήθηκαν σε αγωγή με 10 ή 100 μΜ telmisartan για 24 ώρες ή 48 ώρες. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν μετά από επεξεργασία με θρυψίνη, και βύσματα αγαρόζης που περιέχει 10

6 κύτταρα παρασκευάστηκαν με CHEF διαθέσιμο βύσμα καλουπιού (Bio-Rad, Hercules, CA). Επωάσαμε τα βύσματα σε ρυθμιστικό λύσης (100 mM EDTA, 1% (w /v) sarcosyne λαυρύλιο νατρίου, 0.2% (w /v) δεοξυχολικό νάτριο, 1 mg mL

-1 πρωτεϊνάσης Κ) στους 37 ° C για 24 h και στη συνέχεια να πλένονται με 10 mM Tris-HCL, ρΗ 8.0, 100 mM ETDA. Η ηλεκτροφόρηση πραγματοποιήθηκε επί 23 ώρες στους 13 ° C διαμέσου 0,9% αγαρόζη σε ρυθμιστικό διάλυμα Tris-βορικό-ΕϋΤΑ χρησιμοποιώντας μία συσκευή Biometra Rotaphor (Biometra, Goettingen, Germany) με τις ακόλουθες παραμέτρους: διάστημα, 30-5 s log? γωνία, 120 ° -110 ° γραμμική? 180-120 V log). Το DNA χρωματίσθηκε με βρωμιούχο αιθίδιο και κατέστησαν ορατά χρησιμοποιώντας ένα σαρωτή Typhoon FLA 7000 (GE Healthcare Life Sciences, Τόκιο, Ιαπωνία). Οι συνθήκες ηλεκτροφόρησης σχεδιάστηκαν ειδικά για να συμπιέσει DNA θραύσματα χαμηλότερου μοριακού βάρους (αρκετές ΜΒΡ να 500 kbp) σε ένα ενιαίο συγκρότημα, διατηρώντας υψηλού μοριακού βάρους γονιδιωματικό DNA στο φρεάτιο. Τα θραύσματα του DNA χαμηλότερου μοριακού βάρους είναι τα αποτελέσματα της DSBs στο χρωμοσωμικό DNA. Έτσι, η ανίχνευση επιτρέπει σπασμένο DNA που πρόκειται να ανιχνευθεί εύκολα. Ωστόσο, στο πλαίσιο της DSBs που προκύπτουν κατά τη διάρκεια της διακοπής ρεύματος, την αντιγραφή του DNA, η δοκιμασία έχει περιορισμένη ευαισθησία και δεν είναι ποσοτική. Όταν ένα DSB λαμβάνει χώρα σε μια διχάλα αντιγραφής του DNA, το σπασμένο DNA εξακολουθεί να συνδέεται με το χρωμόσωμα πρότυπο. Για την ανίχνευση DSBs στην δοκιμασία, δύο σχετικά στενά (αρκετές ΜΒΡ) σε απόσταση ανεξάρτητες DSBs πρέπει να συμβεί [16], [17].

χρώση ανοσοφθορισμού των κυττάρων γ-Η2ΑΧ

HHUA υποβλήθηκαν σε αγωγή με ή χωρίς telmisartan σταθερό σε 3,7% παραφορμαλδεΰδη για 15 λεπτά, και στη συνέχεια δεσμεύτηκαν με 0.5% BSA σε PBS. Τα κύτταρα επωάστηκαν με μονοκλωνικά αντι- κουνελιού γ-Η2ΑΧ αντίσωμα (1:500? Millipore, Billerica, ΜΑ) για 90 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, που ακολουθείται από Alexa488-συζευγμένο IgG αντι-κουνελιού (1:300? Molecular Probes, Carlsbad, CA) για 60 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. DAPI χρησιμοποιήθηκε για πυρήνας χρώση. Τα κύτταρα παρατηρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα BZ-9000 (Keyence, Osaka, Japan).

vivo

πρωτόκολλο Θεραπεία σε ζωικά

Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας των πειραμάτων σε ζώα του Πανεπιστημίου του Oita (Αριθμός άδειας: L029001). Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις πραγματοποιήθηκε υπό αναισθησία πεντοβαρβιτάλης νατρίου, και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία. Όλα τα πειράματα σε ζώα πραγματοποιήθηκαν σε συμμόρφωση με Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας κατευθυντήριων γραμμών.

Δεκαέξι 6-εβδομάδων ανοσοανεπάρκεια BALB /c-nu /nu θηλυκά ποντίκια αγοράστηκαν από Charles River Laboratories Ιαπωνία (Yokohama, Ιαπωνία) και διατηρήθηκε υπό συνθήκες ελεύθερες παθογόνων με ακτινοβολημένα chow. Σε ένα πείραμα, 5 × 10

6 κύτταρα HHUA σε 0.1 mL Matrigel (Collaborative Biomedical Products, Bedford, ΜΑ) σε διμερές και υποδόρια ένεση σε κορμούς των 16 ποντικών, που οδηγεί στο σχηματισμό δύο όγκων ανά ζώο. Η αγωγή άρχισε την ημέρα μετά την ένεση των κυττάρων αυτών ανθρώπινο ενδομήτριο καρκίνωμα και διεκόπη μετά από 7 εβδομάδες [18]. Ομάδες (οκτώ ποντικοί ανά ομάδα) έλαβαν είτε αραιωτικό μόνο (ομάδα ελέγχου) ή τελμισαρτάνη (100 μg ανά ημέρα) ενδοπεριτοναϊκά για 5 ημέρες την εβδομάδα. Οι όγκοι μετρήθηκαν κάθε εβδομάδα με παχύμετρο. Υπολογίσαμε τους όγκους όγκου χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: όγκος = μήκος Χ πλάτος Χ ύψος × 0,5236. Αριστερή κοιλία (LV) πίεση παρακολουθήθηκε χρησιμοποιώντας ένα μετατροπέα πίεσης (WS-681G: Nihon Kohden, Tokyo) να καταγράφει την κορυφή θετικές και αρνητικές πρώτα παράγωγα της πίεσης LV. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό LabChart (ADInstruments, Colorado Springs, CO). Τα ζώα θυσιάστηκαν με νατριούχο πεντοβαρβιτάλη αναισθησία, μετά την οποία έγινε προσεκτική εκτομή και μετρήθηκαν τα βάρη των όγκων. Οι όγκοι σταθεροποιήθηκαν και χρωματίστηκαν για ιστολογική ανάλυση.

Ανοσοϊστοχημεία

δειγμάτων όγκου σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη πριν ιστολογική τομή. Μελέτες ανοσοϊστοχημείας πραγματοποιήθηκαν σε τμήματα σταθεροποιημένα με φορμαλίνη δειγμάτων ιστού. Οι τομές προκατεργάστηκαν με θρυψίνη (10 mg ανά 50 mL σε ρυθμιστικό διάλυμα Tris, ρΗ 8.1) για 10 λεπτά στους 37 ° C, ακολουθούμενη από επώαση με αντι Ki-67-μονοκλωνικό αντίσωμα (1:1000 αραίωση σε PBS? Zymed Laboratories, San Francisco , CA) για 30 λεπτά. Τα πλακίδια πλύθηκαν έπειτα με PBS και επωάστηκαν διαδοχικά για 15 λεπτά με G συζευγμένο με υπεροξειδάση ανοσοσφαιρίνη χοίρου αντι-ποντικού (1:50 αραίωση? Dako, Κοπεγχάγη, Δανία). Η χρώση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση ενός Autostainer Dako. Localization των προϊόντων αντίδρασης διεξήχθη χρησιμοποιώντας την αντίδραση διαμινοβενζιδένιο.

Τερματικό δεοξυνουκλεοτιδυλτρανσφεράσης μεσολάβηση τριφωσφορική ουριδίνη End-επισήμανση Ανάλυση

διαλείμματα κλώνου DNA ταυτοποιήθηκαν μέσω ενός τερματικού δεοξυνουκλεοτιδυλτρανσφεράσης μεσολάβηση τριφωσφορική ουριδίνη τέλος σήμανσης ( TUNEL) ανάλυση, χρησιμοποιώντας μια επιτόπια κιτ ανίχνευσης κυτταρικού θανάτου (Roche) σε συμφωνία με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Στατιστική ανάλυση

Όλα τα πειράματα εκτελέστηκαν ανεξάρτητα τουλάχιστον τρεις φορές εις τριπλούν ανά πειραματικό σημείο . Όλα τα αριθμητικά δεδομένα εκφράζονται ως μέσοι ± SD. Σημαντικότητα καθορίστηκε με τη διεξαγωγή μια

t-test

με διόρθωση Bonferroni. Ένα

P

αξία των & lt? 0.05 έγινε δεκτή ως σημαντική

Αποτελέσματα

επιδράσεις του telmisartan στον πολλαπλασιασμό και την βιωσιμότητα του καρκίνου του ενδομητρίου Γραμμές κυττάρων

in vitro

εξέτασαν τις επιδράσεις κατά του όγκου του telmisartan, candesartan, λοσαρτάνη και τη βαλσαρτάνη σε τρεις ενδομητρίου καρκινικές κυτταρικές σειρές in vitro, χρησιμοποιώντας δοκιμασία WST-1 με ένα άνοιγμα 2-ημέρες σε αυτές τις ARBs. Τρεις ενδομητρίου καρκινικές κυτταρικές σειρές (Ishikawa, HEC-59, και HHUA) έδειξαν σημαντική ευαισθησία στην αγωγή τελμισαρτάνη σε 1-100 μΜ (Σχ. 1D). Κανένα από τα άλλα τρία ARBs (candesartan, η λοσαρτάνη και η βαλσαρτάνη) επηρέασε την βιωσιμότητα των ενδομήτριων καρκινικές κυτταρικές γραμμές (Σχ. 1Α-C). Επειδή βρήκαμε ότι η τελμισαρτάνη μπορεί να αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό αυτών των κυτταρικών σειρών, εξετάσαμε την λειτουργία των κατά του όγκου επιδράσεις του telmisartan μέσω ΡΡΑΚγ σε HHUA καρκίνο του ενδομητρίου κύτταρα in vitro, χρησιμοποιώντας δοκιμασία WST-1 με έκθεση 2-ημερών τόσο τελμισαρτάνη σε 10 ή 50 μΜ και έναν ανταγωνιστή PPARγ, GW9662, στα 10 μΜ. Βρήκαμε ότι η προσθήκη του GW9662 ανέστειλε τις αντικαρκινικές επιδράσεις του telmisartan σε 10 ή 50 μΜ (Σχ. 1Ε).

Αντικαρκινικές επιδράσεις του telmisartan μέσω του ΡΡΑΚγ-εξαρτώμενο μονοπάτι. (Α-Δ) Ishikawa, HEC-59, και HHUA κυτταρικές σειρές καρκίνου του ενδομητρίου έλαβαν θεραπεία με τελμισαρτάνη, καντεσαρτάνη, λοσαρτάνη ή βαλσαρτάνη σε διάφορες συγκεντρώσεις (1-100 μΜ) ή το όχημα (έλεγχος) επί 48 ώρες, και τον πολλαπλασιασμό (% του ελέγχου) μετρήθηκε σε μία δοκιμασία WST-1. Τα αποτελέσματα είναι μέσα ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων με εις τριπλούν πιάτα. *

P

& lt? 0,05 έναντι του ελέγχου, **

P

& lt? 0,01 έναντι του ελέγχου. (Ε) Επίδραση του GW9662 σε telmisartan αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων HHUA. κύτταρα HHUA επωάστηκαν με τελμισαρτάνη (10 ή 50 μΜ) για 48 ώρες που ακολουθείται από προεπώαση με GW9662 (10 μΜ) για 30 λεπτά. Βρήκαμε ότι η προσθήκη του GW9662 ανέστειλε τις αντικαρκινικές επιδράσεις του telmisartan σε 10 ή 50 μΜ. Τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν το μέσο ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων. Στήλες, μέσα? μπαρ, SDS. *

P

& lt? 0,05 έναντι του ελέγχου, **

P

& lt?. 0,01 έναντι του ελέγχου

Η

αποπτωτικά αλλαγές στα κύτταρα καρκίνου του ενδομητρίου που θεραπεύτηκαν με telmisartan

για να εκτιμηθεί η ικανότητα της τελμισαρτάνης να διεγείρει απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα και να βοηθήσει στη διάκριση των διαφόρων τύπων του κυτταρικού θανάτου, εμείς διπλό χρώση telmisartan-κατεργασμένα κύτταρα με αννεξίνη V και ΡΙ και αναλύθηκαν τα αποτελέσματα χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής. Δέσμευση αννεξίνης V σε συνδυασμό με την επισήμανση PI πραγματοποιήθηκε για τη διάκριση των πρώιμων αποπτωτικών (αννεξίνη V + /ΡΙ-) και αργά αποπτωτικών (αννεξίνη V + /ΡΙ +) κύτταρα [19]. Μετά την επεξεργασία του ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα με telmisartan στα 100 μΜ, ανιχνεύσαμε την ταυτόχρονη αύξηση τόσο του αννεξίνης V + /ΡΙ- κλάσμα (πρώιμη αποπτωτική) και υποπληθυσμοί αννεξίνης V + /ΡΙ + (αργά αποπτωτικών) (Πίνακας 1).

η απώλεια του μιτοχονδριακού διαμεμβρανικό δυναμικό στην ανταπόκριση στη θεραπεία με τελμισαρτάνη

η απώλεια της μιτοχονδριακής μεμβράνης δυναμικό (MTP) έχει αποδειχθεί να συμβεί πριν από την πυρηνική συμπύκνωση και την ενεργοποίηση της κασπάσης, και συνδέεται με την απελευθέρωση του κυτοχρώματος c σε πολλά, αλλά όχι όλα τα αποπτωτικά κύτταρα [20]. Θεραπεία του καρκίνου του ενδομητρίου κυττάρων με telmisartan οδήγησε σε μείωση της ΜΤΡ (Πίνακας 1).

επιδράσεις του telmisartan στην έκφραση της απόπτωσης που συνδέονται με Πρωτεΐνες

Εξετάσαμε τις επιδράσεις του telmisartan στην έκφραση της απόπτωσης που συνδέονται με τις πρωτεΐνες σε καρκίνο του ενδομητρίου κυτταρικές σειρές με ανάλυση στυπώματος Western (Εικ. 2). Η οικογένεια Bcl-2 από την απόπτωση που ρυθμίζουν τις λειτουργίες των πρωτεϊνών είτε προωθούν (Βαχ, Bad, και Bak) ή αναστέλλουν (Bcl-2, Bcl-xL, και Mcl-1) την αποπτωτική απόκριση σε μια ευρεία ποικιλία των ερεθισμάτων συμπεριλαμβανομένης χημειοθεραπείας και ακτινοθεραπεία [21]. Η τελμισαρτάνη σε 100 μΜ για 48 ώρες μείωσε την έκφραση του Bcl-2 και Bcl-xL, στην οποία διασπάται θραύσματα κασπάσης-3 ανιχνεύθηκαν (Εικ. 2).

κύτταρα HHUA υποβλήθηκαν σε αγωγή με telmisartan σε 10 ή 100 μΜ, και προϊόντα λύσης κυττάρου συλλέχθηκαν μετά από 24 και 48 ώρες. Μια ανάλυση κηλίδος Western πραγματοποιήθηκε με μία σειρά αντισωμάτων (Bcl-2, Bcl-xL, Bax, διασπασμένη κασπάση 3 και GAPDH). κύτταρα ελέγχου υποβλήθηκαν σε θεραπεία με όχημα μόνο. ​​

Η

επιδράσεις του telmisartan στη Response βλάβες στο DNA και

κυτταρικού θανάτου

Οι εκφράσεις των διασπασμένη PARP εξετάστηκαν με ELISA μετά την επεξεργασία των κυττάρων HHUA με το telmisartan για 48 ώρες. Η τελμισαρτάνη (100 μΜ) σημαντικά αυξημένα τα επίπεδα της διασπασμένη PARP σε κύτταρα HHUA (Εικ. 3). Για να αποσαφηνιστεί η δραστικότητα των τελεστών σε telmisartan απόπτωση, χρησιμοποιήσαμε ένα κασπάση-Glo 3/7 Assay, το οποίο μετρά κασπάσης-3 και -7 δραστηριότητες. Μετά την κατεργασία των κυττάρων με HHUA telmisartan στα 100 μΜ για 48 ώρες, κασπάση-3 και -7 δραστηριότητες αυξητικά (Εικ. 4). Δοκιμάσαμε το telmisartan που προκαλείται από το σχηματισμό DSB σε κύτταρα HHUA. κύτταρα HHUA υποβλήθηκαν σε αγωγή με 10-100 μΜ telmisartan για 24 ή 48 ώρες, και DSBs ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση πηκτής παλλόμενου πεδίου (PFGE). Μετά τη θεραπεία telmisartan, σπασμένα DNA αυξήθηκε με έναν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο σε κύτταρα HHUA (Εικ. 5). Στη συνέχεια, εκτελέσαμε χρώση ανοσοφθορισμού της γ-Η2ΑΧ για την ανίχνευση DSBs. Οι telmisartan-κατεργασμένα κύτταρα HHUA είχαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα φθορισμού σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα κύτταρα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 6Α, Β, γ-Η2ΑΧ ρυθμίζεται αυξητικά στα κύτταρα HHUA μετά την επώαση με τελμισαρτάνη σε 10-100 μΜ για 24 ή 48 ώρες.

Η έκφραση της πρωτεΐνης του διασπασμένης ΡΑΚΡ μετρήθηκε με ELISAs. κύτταρα HHUA υποβλήθηκαν σε αγωγή με 100 μΜ telmisartan για 48 ώρες. Κύτταρα ελέγχου υποβλήθηκαν σε αγωγή μόνο με έκδοχο. Τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν το μέσο ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων. Στήλες, μέσα? μπαρ, SDS. **

P

& lt?. 0,01 έναντι του ελέγχου

Η

Οι δραστηριότητες της κασπάσης-3 και κασπάσης-7 αξιολογήθηκαν από κασπάσης-Glo 3/7 δοκιμασίες. κύτταρα HHUA υποβλήθηκαν σε αγωγή με 100 μΜ telmisartan για 48 ώρες. Κύτταρα ελέγχου υποβλήθηκαν σε αγωγή μόνο με έκδοχο. Τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν το μέσο ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων. Στήλες, μέσα? μπαρ, SDS. **

P

& lt? 0,01 έναντι του ελέγχου

Η

σχηματισμό DSB αναλύθηκαν με PFGE.. κύτταρα HHUA συλλέχθηκε σε βύσματα αγαρόζης και το DNA τους διαχωρίστηκε κατά μέγεθος σε πήκτωμα αγαρόζης. Κάτω από τις συνθήκες ηλεκτροφόρησης που χρησιμοποιούνται, υψηλού μοριακού βάρους γονιδιωματικό DNA παρέμεινε στο φρεάτιο, ενώ τα θραύσματα DNA κατώτερου μοριακού βάρους (αρκετές ΜΒΡ να 500 kbp) μετανάστευσαν στην πηκτή και συμπιέστηκαν σε μια ζώνη σήματος.

(Α) Ο χρόνος και δόση εξάρτηση της φωσφορυλίωσης της ιστόνης H2AX από το telmisartan. κύτταρα HHUA υποβλήθηκαν σε αγωγή με 10 ή 100 μΜ telmisartan για υποδεικνυόμενους χρόνους και ακολουθεί ανοσοχρώση με χρήση ενός αντισώματος αντι-γ-Η2ΑΧ. πυρήνες τους αποκαλύφθηκαν με χρώση DAPI. (Β) Ποσοστό γ-Η2ΑΧ θετικών κυττάρων. κύτταρα HHUA υποβλήθηκαν σε αγωγή με 10 ή 100 μΜ telmisartan για 24 ώρες ή 48 ώρες. Κύτταρα ελέγχου υποβλήθηκαν σε αγωγή μόνο με έκδοχο. Τα κύτταρα telmisartan ασθενείς είχαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα φθορισμού σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα κύτταρα. Αποτελέσματα = σημαίνει ± SD τριών ανεξαρτήτων πειραμάτων. Στήλες, μέσα? μπαρ, SDS. *

P

& lt? 0,05 έναντι του ελέγχου, **

P

& lt?. 0,01 έναντι του ελέγχου

Η

Αντικαρκινική Δραστηριότητα

in vivo

Ελέγξαμε την ικανότητα της τελμισαρτάνης να αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των ανθρώπινων όγκων ενδομητρίου HHUA σε ανοσοανεπαρκή ποντίκια κατά τη διάρκεια των 7 εβδομάδων της θεραπείας. Η ένεση των κυττάρων HHUA (5 × 10

6) οδήγησε στην ανάπτυξη ισχυρών όγκων in vivo. Όπως φαίνεται στην Εικόνα 7Α, η χορήγηση της τελμισαρτάνης κατέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη αυτών των όγκων. Όλες οι ομάδες θεραπείας είχαν σημαντικά μικρότερους όγκους σε σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου αραιωτικό (

P

& lt? 0,01). Μετρήσαμε τους όγκους των όγκων σε διάφορα χρονικά σημεία καθ ‘όλη τη θεραπεία, και στο τέλος της μελέτης, οι όγκοι αποκόπηκαν προσεκτικά και ζυγίζεται. Τα ευρήματα σε σχέση με το βάρος παραλληλιστεί τις μετρήσεις όγκου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τα βάρη των όγκων ήταν 77% χαμηλότερες στις ομάδες θεραπείας σε σχέση με την ομάδα ελέγχου (

P

& lt? 0,01).

κύτταρα (Α) HHUA (5 × 10

6) ήταν διμερώς υποδόρια ένεση σε κορμούς των γυμνών ποντικών, σχηματίζοντας δύο όγκοι ανά ποντικό. Οι ποντικοί χωρίστηκαν τυχαία σε ομάδες ελέγχου και πειραματικών ομάδων. Η τελμισαρτάνη (100 μg /ποντικό) ή αραιωτικό (έλεγχος) χορηγήθηκε ενδοπεριτοναϊκά για 5 ημέρες την εβδομάδα για 7 εβδομάδες. Μετά από 7 εβδομάδες θεραπείας, οι όγκοι αφαιρέθηκαν από κάθε ποντικό και ζυγίστηκε. Τα βάρη των όγκων στις δύο ομάδες ήταν σημαντικά διαφορετικές. Στήλες, μέσα? μπαρ, SDS. **

P

& lt? 0,01 έναντι του ελέγχου. (Β) Η δράση του telmisartan στη HHUA όγκων σε γυμνά ποντίκια. Τα ενδομήτρια κύτταρα καρκινώματος από ποντικούς που έλαβαν θεραπεία με τελμισαρτάνη εμφάνισαν σημαντικά ασθενέστερη χρώση για Ki-67 σε σύγκριση με τα κύτταρα του καρκινώματος του ενδομητρίου ελέγχου. (C) κύτταρα του ενδομητρίου καρκινώματος από τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με τελμισαρτάνη υπέστησαν απόπτωση (TUNEL θετικά). Ολες οι δοκιμασίες διεξήχθησαν τρεις φορές. Στήλες, μέσα? μπαρ, SDS. **

P

& lt?. 0,01 έναντι του ελέγχου

Η

Κατά τη διάρκεια της μελέτης, όλα τα ποντίκια ζυγίστηκαν και πιέσεις LV τους καταγράφηκαν μία φορά την εβδομάδα. Μέσος όρος βάρη σώματος στις ομάδες θεραπείας ήταν 91% -104% του μέσου σωματικού βάρους της ομάδας ελέγχου (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Κατά την έναρξη, οι τιμές της πίεσης LV δεν διέφεραν μεταξύ των ομάδων (ομάδα τελμισαρτάνη, 52,8 ± 10,8 mmHg? Ομάδα ελέγχου, 52,6 ± 11,0 mmHg) (μέση τιμή ± SD). Μία εβδομάδα μετά τη χορήγηση, η μέση πίεση LV της ομάδας telmisartan ήταν σημαντικά χαμηλότερη από εκείνη της ομάδας ελέγχου (50.4 ± 7.1 mmHg έναντι 68,8 ± 13,1 mmHg, αντίστοιχα?

P

& lt? 0,01). Στο τέλος της μελέτης, η πίεση LV της ομάδας ελέγχου ήταν 68,8 ± 6,3 mmHg και της ομάδας telmisartan ήταν 58,0 ± 3,9 mmHg (

P

& lt? 0,01)

. Γενικά, σε όλες τις ομάδες, όλα τα ποντίκια φάνηκε να είναι υγιείς. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στις μέσες βάρος βρέθηκαν μεταξύ των ποντικών που έλαβαν αραιωτικό και εκείνων που έλαβαν 7 εβδομάδες θεραπείας (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). HHUA όγκοι δείγματος για την έκφραση του Ki-67 από μια ανοσοϊστοχημική ανάλυση, και μια δοκιμασία TUNEL διεξήχθη σε σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, ενσωματωμένες σε παραφίνη τομές. Τα κύτταρα του ενδομητρίου καρκινώματος HHUA αγωγή με telmisartan εμφάνισαν αρνητικές ή εστιακή ασθενή χρώση για Ki-67 και φαίνεται να υφίστανται απόπτωση (δηλαδή, ήταν TUNEL θετικά). Τα κύτταρα του ενδομητρίου καρκινώματος ελέγχου HHUA από χωρίς θεραπεία ποντικούς έδειξαν ισχυρή πυρηνική χρώση για Ki-67 και ήταν αρνητικές για την απόπτωση (Σχ. 7Β, C).

Συζήτηση

Η παχυσαρκία, περίσσεια οιστρογόνων, τύπου II διαβήτης, η υπέρταση και είναι μερικοί από τους σημαντικούς παράγοντες κινδύνου καρκινώματος του ενδομητρίου [4], [22] – [24]. PPARγ ανήκει σε μια οικογένεια των πυρηνικών υποδοχέων ορμόνης που περιλαμβάνουν οιστρογόνα και υποδοχείς θυρεοειδούς ορμόνης [25], [26]

Τα παρόντα αποτελέσματα έδειξαν ότι μεταξύ των ARBs δοκιμάστηκαν.? μόνο telmisartan ήταν σε θέση να επάγει την αναστολή της κυτταρικής βιωσιμότητας του ενδομητρίου καρκινικών κυτταρικών γραμμών. Η ανασταλτική δράση του telmisartan μειώθηκε με την παρουσία ενός αναστολέα PPARγ, GW9662. Αναφέρθηκε ότι υπάρχει σημαντική αλληλοπαρεμβολές μεταξύ PPARγ και υποδοχέα οιστρογόνου [25], [27], [28]. Ota et al. ανέφεραν ότι ΡΡΑΚγ ανοσοαντιδραστικότητα ανιχνεύθηκε στο 65% του ενδομήτριου ιστού καρκινώματος που λαμβάνονται από ασθενείς με ανοσοϊστοχημεία. Βρήκαν επίσης ότι ένας συνδετήρας PPARγ, 15δ-PGJ

2, έχει ανασταλτική δράση στην ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα (Ishikawa, Σαβάνο, κύτταρα RL95-2) [4]. Benson et al. ανέφεραν ότι η τελμισαρτάνη λειτουργούσε ως εκλεκτικός ΡΡΑΚγ μερικός αγωνιστής, ενεργοποίηση του υποδοχέα στο 25% έως 30% του μέγιστου επιπέδου επιτυγχάνεται με την πλήρεις αγωνιστές πιογλιταζόνη και ροσιγλιταζόνη. Άλλες ARBs στερούνται δυναμικού telmisartan για αλληλεπίδραση υποδοχέα και έχουν σχετικά μικρή ή καμία επίδραση στην δραστικότητα ΡΡΑΚγ [7]. Ως εκ τούτου, θα ήταν ένας πιθανός μηχανισμός, ότι η τελμισαρτάνη έχει αντικαρκινικές επιδράσεις μέσω του ΡΡΑΚγ-εξαρτώμενο μονοπάτι.

Επίσης έχει αποδειχθεί ότι επάγεται telmisartan απόπτωση και DNA κατακερματισμό σε ανθρώπινο καρκίνο ουρολογικές [8], [9] , [29]. Εδώ βρήκαμε ότι η θεραπεία με τελμισαρτάνη αύξησε σημαντικά τον αριθμό των αποπτωτικών κυττάρων σε όλες τις ενδομητρίου κυτταρικές γραμμές καρκινώματος που μελετήθηκαν. Στον προσδιορισμό αννεξίνης V και αξιολόγηση ΜΤΡ, telmisartan απόπτωση που επάγεται για θεραπεία 48 ώρες σε 100 μΜ. Αυτό το αποτέλεσμα συσχετίστηκε με μείωση των επιπέδων των αντι-αποπτωτικών πρωτεϊνών Bcl-2 και Bcl-XL. Κασπάσης 3/7 δραστηριότητα αυξήθηκε επίσης σε απάντηση στο ερέθισμα της θεραπείας με telmisartan 48 ώρες σε 100 μΜ. Τα ευρήματά μας σχετικά με κασπάσης-3 διάσπασης και η διάσπαση PARP δείχνουν ότι αυτή η οδός αποπτωσώματος μπορεί να ενεργοποιηθεί μετά τη θεραπεία με telmisartan.

Μια σειρά από καταρράκτες των γεγονότων σηματοδότησης που ξεκίνησε ως απάντηση στην DSBs, να πραγματοποιήσει απόπτωση [30] , [31]. Χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση γέλης παλμικού πεδίου και ανοσοφθορισμού χρώση του γ-Η2ΑΧ, βρήκαμε ότι επάγεται telmisaratan DSBs. Η2ΑΧ είναι ένα μέλος της οικογένειας των Η2Α ιστονών, και η φωσφορυλίωση της Η2ΑΧ στη σερίνη 139, η οποία ονομάζεται «γ-Η2ΑΧ,» σχετίζεται με DSBs [32] – [35]. Μια πρωτεΐνη γ-Η2ΑΧ θεωρείται ότι είναι το πιο αναγνωρίσιμο πρωτεΐνη σε δοκιμασίες για να μετρηθεί η βλάβη του DNA [36]. Μια DSB είναι η πιο κρίσιμη βλάβη του DNA [37], [38]. Ένα DSB είναι επαρκής για να σκοτώσει ένα κύτταρο, όταν δεν επισκευαστεί [37] – [39]. Στην παρούσα μελέτη, DSBs συνέβη στα κύτταρα HHUA μετά από 24 ώρες θεραπείας με telmisartan 10 μΜ. Σε αντίθεση, κηλίδωση Western αποκάλυψε ότι κασπάσης 3 διάσπασης δεν ήταν σαφής στις 24 ώρες της θεραπείας telmisartan 10 μΜ σε κύτταρα HHUA. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι DSBs μπορούσε να προκληθεί πριν την απόπτωση με τη θεραπεία telmisartan.

in vivo δεδομένα μας έδειξαν ότι η απόπτωση που περιλαμβάνει την περιοχή του όγκου εμφανίστηκε στα γυμνά ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με τελμισαρτάνη, και αυτό κατά του όγκου δραστικότητα δεν συνοδεύτηκε από οποιαδήποτε σημαντική παρενέργειες, αυξάνοντας την πιθανότητα ότι η τελμισαρτάνη μπορεί να χρησιμεύσει ως μια χρήσιμη θεραπεία για την αγωγή καρκινώματος του ενδομητρίου. Επειδή ξεκινήσαμε telmisartan θεραπεία την ημέρα μετά τα κακοήθη κύτταρα εγχύθηκαν σε ποντίκια, δεν μπορούμε να συμπεράνουμε ότι η τελμισαρτάνη είναι αποτελεσματικό κατά ογκώδη όγκους, τα οποία παρατηρούνται συχνά στην κλινική? περαιτέρω μελέτες είναι απαραίτητες για να διευκρινιστεί αυτό το θέμα. Παρ ‘όλα αυτά, βρήκαμε ότι η τελμισαρτάνη έδειξε βαθιά δράση κατά των όγκων ίη νίνο, και επιβεβαιώσαμε ότι ένα μικρό φορτίο όγκου μπορεί να εξαλειφθεί με αυτή την ένωση σε ποντικούς. Το εύρημα αυτό υποδηλώνει ότι η τελμισαρτάνη θεραπεία μπορεί να είναι ιδιαίτερα αποτελεσματική για τα άτομα που έχουν ελάχιστη υπολειμματική νόσος μετά θεραπευτική χειρουργική επέμβαση, χημειοθεραπεία, και /ή ακτινοθεραπεία. Αν και η πίεση LV της ομάδας telmisartan μειώθηκε κατά τη διάρκεια αυτών των πειραμάτων εκείνη της ομάδας telmisartan δεν αλλοιώθηκε για επτά εβδομάδες και όλα τα ποντίκια φάνηκε να είναι υγιείς (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Ο μηχανισμός με τον οποίο telmisartan εξασκεί αντικαρκινική του δραστηριότητα παραμένει ασαφής. Σε ουρολογικές καρκινικά κύτταρα, η τελμισαρτάνη μπορεί να μεσολαβήσει ισχυρή αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα μέσω PPARγ [29]. Στον καρκίνο του προστάτη κύτταρα, η τελμισαρτάνη αλληλεπιδράσει με κάποια μονοπάτια σήμα? ένα για να εμποδίσει AT1R ως ARB, και ο άλλος ως παράγοντας μεταγραφής που ενεργεί ως συνδέτης PPARγ με εξαρτώμενα και ανεξάρτητα PPARγ αλληλεπιδράσεις [10]. Όπως και άλλες ARBs αναστέλλουν τη μεταγωγή σήματος μέσω του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGF) ή ιντερλευκίνη (IL) -6 σήματα, η τελμισαρτάνη αναστέλλει επίσης πρόσθετα σήματα από την ενεργοποίηση του ΡΡΑΚγ [10], [40].